一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法
专利名称：一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及药品的质量检测方法，特别是一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方 法，确切的说是金马肝泰片或胶囊的质量检测方法，属于药品的技术领域。
背景技术：
金马肝泰片和金马肝泰胶囊，其主要成分为马蹄金、铁包金、马鞭草、防己、败酱 草、淫羊藿、黄芪、赤芍和丹参等共九味中药材，作为民族药具有清热解毒，健脾利湿，活血 化瘀的功效，主要用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢性肝炎等。现有剂型为颗粒剂，已被 列入国家中成药标准汇编内科肝胆分册，其质量标准相对较为简单，仅对处方中的防己进 行质量控制，因而不能很好地确保其临床用药的有效性及安全性，需要进一步研究，提高其 质量控制标准。根据我国药品管理法的相关规定，改变剂型或工艺作为新药研究管理，金马 肝泰片和金马肝泰胶囊作为一种新药，目前还没有有效的质量控制方法。发明人对金马肝 泰片和金马肝泰胶囊进行了研究，以期探索如何有效控制金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质 量，从而确保其临床疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法， 所制定的质量检测方法能全面有效地控制金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量，从而确保了 金马肝泰片和金马肝泰胶囊的临床疗效。为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案治疗肝炎的药物制剂的质 量检测方法。这种治疗肝炎的药物制剂这样制备马蹄金288. 2g、铁包金153. 3g、马鞭草 115g、防已191. 6g、败酱草115g、淫羊藿153. 3g、黄芪153. 3g、赤芍153. 3g、丹参230g,以上 九味药材，加水煎煮两次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90 95°C时测相对 密度为1. 14 1. 16的清膏，冷至室温，加2倍量乙醇，搅拌均勻，放置48小时，滤过，滤液 回收乙醇，药液浓缩至50 60°C时相对密度为1. 34 1. 40的稠膏；稠膏加入适当辅料制 成1000份片剂或胶囊剂，所述的质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别 是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定 制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱 和防己诺林碱的含量。上述的药物制剂的质量检测方法中，所述的鉴别包括
(1)丹参鉴别取本品0. lg 10g，加甲醇1ml 150ml，加热回流0. lh 2h，滤过， 滤液蒸干，残渣加水1ml 50ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1 5次，每次1ml 50ml， 合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对 照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录 VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0. 5 1 y 1、供试品溶液2 5 y 1，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积比为1. 9 2. 9 1.5 2. 5 0. 5 1. 5 0.4 0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1 1的1%三氯化 铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的斑点；
(2)赤芍鉴别取本品0.lg 10g，加甲醇1ml 150ml，加热回流5min 60min，放 冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水1ml 50ml使溶解，用乙醚振摇提取1 4次，每次1ml 50ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取1 5次，每次1ml 30ml，合并正丁醇液， 正丁醇液用氨试液3ml 50ml洗涤，弃去氨试液，再用3ml 50ml水洗涤，弃去水液，取正 丁醇液蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲 醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色 谱法试验，吸取上述两种溶液各2 5 y 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6 10 0.8 1.2 2 6 0.8 1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为3% 10%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)黄芪鉴别取本品5g 50g，加甲醇5ml 200ml，加热回流0.5h 2h，滤过，滤液 浓缩至约1ml 5ml，加于中性氧化铝柱上，用浓度为30% 50%的甲醇50ml 200ml洗 脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水5ml 50ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1 5次， 每次5ml 50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1 4次，每次5ml 50ml，再用正丁醇饱 和的水洗涤1 4次，每次5ml 50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶 解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶 液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 iU， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50 80 25 45 5 15的三氯甲烷-甲 醇_水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为5% 25%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色 清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述鉴别(2)赤芍鉴别中，显色时 加热的温度为100°C 120°C ；鉴别(3)黄芪鉴别中，所用的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水 10°C以下放置后的下层溶液；显色时加热的温度为100°C 120°C。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的含量测定是通过高效液相 色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以体积比乙腈水=15 45:55 85为流动相进行含量测定。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，具体的讲，所述淫羊藿苷的含量 测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil(R)C18 色谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min,检测波 长255 285nm ；进样量10 yl，理论塔板数不低于1500 ；
(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并 稀释至刻度，摇勻，制得浓度为彡lmg/ml的溶液，即得对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入适量稀乙 醇，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取上清 液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 iU，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，准确的说，所述淫羊藿苷的含量 测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil(R)C18 色谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min,检测波 长255 285nm ；进样量10 yl，理论塔板数不低于1500 ；
(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇 溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即 得浓度为0. 0964mg/ml对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙 醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取 上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的含量测定还可以是通过高 效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量；以粉防己 碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈甲醇 水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相进行含量测定；每100ml流动 相中含十二烷基磺酸钠0. 2g 1. 0g。上述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，具体的说，所述粉防己碱和防己 诺林碱的含量测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 u L ；理论塔板数不低于 4000 ；
(2)对照品溶液的制备分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品适量，精密称定，分置 于容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取适量置于同一容量瓶 中，稀释至刻度，摇勻即得；
(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，精密加入0.5 5%盐酸甲醇溶液适量， 称定重量，加热回流15 45min，放冷，再称定重量，用0. 5 5%盐酸甲醇溶液补足减失的 重量，滤过；精密量取续滤液适量，置容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5iU，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，准确的说，所述粉防己碱和防己 诺林碱的含量测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 u L ；理论塔板数不低于4000 ；
(2)对照品溶液的制备称取粉防己碱对照品12mg，防己诺林碱对照品9mg，精密称定， 分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一 10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻即得；
(3)供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重 量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量 取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5u 1，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的性状和检查包括，对于片 剂(1)性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦；(2)检查符 合中国药典2005年版一部附录ID中片剂项下的各项规定；
对于胶囊剂(1)性状本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味 苦；(2)检查符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定。为了确保本发明的含量测定方法科学、合理、可行，申请人对其进行了一系列的试 验研究和考察，具体如下
(一)单独测定淫羊藿苷。1、药品与试剂淫羊藿苷对照品110737-200415 (中国药品生物制品检定所)，甲醇 、乙腈为色谱醇，水为重蒸馏水。2、仪器分析条件仪器AngilentllOO高效液相色谱仪；7725i型手动进样器； 1100VWD型紫外检测器；HT-230A柱温箱；HP化学工作站；电子天平(BP211D) ；CX-250型超
声波清洗器。3、色谱条件色谱柱Diamonsil(R)C18 色谱柱(250_X4. 6mm，5iim)；乙腈-水 (30:70)为流动相；柱温:25°C ；检测波长:270歷。4、溶液制备
4. 1对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿苷对照品9. 64mg,置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作为 储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得浓度为0. 0964mg/ ml对照品溶液。4. 2供试品溶液的制备
取本品约0. 5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超 声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取上清液，滤过，取续虑 液，即得供试品溶液。5、系统适用性实验
采用 Diamonsil(R)C18 色谱柱(250mmX4. 6mm, 5 u m),乙腈-水(30 70)为流动相， 检测波长270nm，柱温25°C。取供试样品、淫羊藿阴性样品各0. 5g，精密称定，以供试品溶 液制备方法制得供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取上述两种溶液和对照品溶液各 10 yl注入液相色谱仪，记录色谱图，从色谱图中可以看出，供试样品在淫羊藿苷出峰处有 对应峰，阴性样品则在淫羊藿苷出峰处无对应峰，说明阴性样品无假阳性峰。供试样品中淫羊藿苷的理论塔板数为3818，故暂定淫羊藿苷理论塔板数不低于1500，分离度应符合要
求。测定结果见表1。 表1淫羊藿苷系统适用性试验
6、线性关系试验
分别精密量取对照品溶液2、4、6、8、10、12iU，依次进样。在上述色谱条件下测定淫羊 藿苷对照品峰面积，以峰面积(Y)对测定量(X，yg)线性回归，得回归方程Y = 2260. 3X-50. 727(r = 0.9999)。结果见表2，结果表明，淫羊藿苷在0. 5784 1. 928 y g范围内线性 关系良好。 表2淫羊藿苷线性关系考察
7、精密度试验
精密量取淫羊藿苷对照品溶液(9. 640 y g/ml)，在上述色谱条件下，重复进样5次，记 录色谱，结果见表3，淫羊藿苷RSD为0. 88%，说明有良好的精密度。
表3淫羊藿苷精密度试验
8、稳定性试验
取金马肝泰胶囊约0. 5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法进行制备，分别在0、2、 4、6、8h按上述色谱条件测定，记录色谱，结果见表4，淫羊藿苷RSD为0. 88%，说明有稳定性 良好。 表4淫羊藿苷稳定性试验
9、重复性试验
取同一批金马肝泰胶囊按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样，记录 色谱图，计算，结果见表5，淫羊藿苷RSD为1. 06%，说明有良好的重复性。
表5淫羊藿苷重复性试验
10、回收率试验
称取5份金马肝泰胶囊(其中淫羊藿苷含量0. 6811%)0. 2g，精密称定，分别精密加入对 照品储备液1ml，按照供试品溶液制备方法制备，按上述测定方法测定，记录色谱图，计算， 结果见表6。 表6淫羊藿苷回收率试验
11、样品含量测定
取3个批号的金马肝泰胶囊0. 5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法进行制备，即得 样品溶液。精密量取10ul注入液相色谱仪进行测定，另取淫羊藿苷对照品(0. 0964mg/ml), 同法测定，按外标法以峰面积计算，结果见表7。
表7金马肝泰胶囊含量测定结果
(二)同时测定粉防己碱和防己诺林碱的含量
1、药品与试剂粉防己碱对照品110711-200406 (中国药品生物制品检定所)，防己诺 林碱对照品110793-200605 (供含量测定用，中国药品生物制品检定所)，甲醇、乙腈为色谱 醇，盐酸、冰乙酸为分析纯，重蒸水。2、仪器分析条件岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪，CL-10Avp系统控制器， LC-10Atvp输液泵，SPD-10Avp紫外检测器，7725i型手动进样器，Class-VP5. 0工作站数据 处理系统，CT0-10Asvp恒温柱箱；BP211D电子天平(德国)，CX-250型超声波清洗器。3、色谱条件色谱柱迪马 DiamonsilC18(4. 6mmX 250mm，5 ii m);乙腈一甲醇一水一 冰乙酸为流动相；检测波长280nm ；柱温25°C ；
4、溶液制备
4. 1对照品溶液的制备
称取粉防己碱和防己诺林碱对照品各12mg和9mg，精密称定，分置于25ml容量瓶中超 声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一 10ml容量瓶中，稀释至 刻度，摇勻即得。4. 2供试品溶液的制备
取本品约lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30min，放 冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液5ml，置10ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得。5、系统适用性实验
采用迪马DiamonsilC18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)色谱柱，乙腈一甲醇一水一冰乙酸(40 50 30 1)(每100ml含十二烷基磺酸钠0. 41g)为流动相，检测波长280nm，柱温25°C。取 供试样品、防己阴性样品，以供试品溶液制备方法制得供试品溶液和阴性样品溶液，分别精 密吸取上述两种溶液和对照品溶液各5 yl注入液相色谱仪，记录色谱图，从色谱图中可以 看出，供试样品在粉防己碱和防己诺林碱出峰处有对应峰，阴性样品则在粉防己碱和防己 诺林碱出峰处无对应峰，说明阴性样品无假阳性峰。供试样品中粉防己碱和防己诺林碱的 理论塔板数分别为6546和5939，二者的分离度为2. 53，故暂定粉防己碱和防己诺林碱苷理 论塔板数均不低于4000，分离度应符合要求。测定结果见表8。表8粉防己碱和防己诺林碱系统适用性试验
结果可知，阴性对照样品与供试品及对照品溶液相比较，在粉防己碱和防己诺林碱的 相应保留时间内无吸收峰，故阴性样品中的成分不会影响供试品中粉防己碱和防己诺林碱 的测定结果。6、线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液(其中粉防己碱0. 0961mg/ml，防己诺林碱0. 0719mg/ml) 2、 4、6、8、10iU进样，测定，记录色谱图。分别以粉防己碱和防己诺林碱峰面积为纵坐标， 以进样量(？ g)为横坐标，经线性回归得粉防己碱和防己诺林碱回归方程分别为(n=5): Y=640399X + 7980. 5 (r = 0. 9997)，Y=635343X + 7435. 1 (r = 0. 9984)。结果表明粉防 己碱在0. 1922 0. 961 u g范围内线性关系良好，防己诺林碱在0. 1438 0. 7190 y g范围 内线性关系良好。表9粉防己碱和防己诺林碱线性关系考察
7、精密度试验
取同一份供试品溶液(20080101)重复进样5次，记录色谱，结果见表10，粉防己碱和防 己诺林碱RSD分别为1. 33%和3. 01%,说明有良好的精密度。
表10粉防己碱和防己诺林碱精密度试验
8、重复性试验
取同一样品(20050308)按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样，记录 色谱，计算，结果见表11和表12，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为0. 84%和1. 26%，说明 有良好的重复性。 表11粉防己碱重复性试验
表12防己诺林碱重复性实验
9、稳定性试验
精密称取供试品(20080101 )lg，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液。将供试品溶 液于室温下放置0、4、8、12、24h后，按上述色谱条件依次精密吸取各时间段该溶液5 yl，进 样，记录色谱图，计算，结果见表13，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为1. 12%和1. 13%，说 明有良好的稳定性。 表13粉防己碱和防己诺林碱稳定性试验
10、回收率试验
称取5份金马肝泰片样品(其中粉防己碱和防己诺林碱含量分别为0. 5724%和 0. 3185%) 0. 2g，精密称定，分置于5个25ml容量瓶中，分别精密加入对照品储备液各2ml， 按照供试品溶液制备方法制备，按上述测定方法测定，记录色谱图，计算，结果见表14和表 15。
表14粉防己碱回收率试验
表15防己诺林碱回收率试验
11、样品含量测定按供试品溶液制备方法及色谱条件，测定三批样品中粉防己碱和防 己诺林碱的含量，测定结果见表16、表17。表16三批样品同时测定粉防己碱和防己诺林碱含量中粉防己碱的测定结果
表17三批样品同时测定粉防己碱和防己诺林碱含量中防己诺林碱的测定结果
本发明的有益效果与现有技术相比，本发明建立了治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝 泰胶囊的质量检测方法，该方法采用薄层色谱法分别对黄芪、赤芍和丹参进行定性定量鉴 另IJ，达到多成分同时控制，另外，在原有含量测定项目的基础上增加了对淫羊藿苷、粉防己 碱和防己诺林碱项目的测定，利用高效液相色谱测定淫羊藿苷或同时测定粉防己碱和防己 诺林碱的含量，能够进一步有效控制金马肝泰片和胶囊的质量，从而最大限度的确保产品 质量。本发明所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制和 确保治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量稳定、可控、高效和安全，确保该制剂的 临床疗效，更好的满足医疗的需要。下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的说明。
具体实施例方式实施1。治疗肝炎的金马肝泰胶囊的质量控制方法如下
性状本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦； 鉴别(1)丹参鉴别取金马肝泰胶囊内容物3g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过， 滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸 干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸 取对照品溶液0. 5 1 μ 1、供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲 烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(2.4 2 1 0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三 氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液(1 1)(临用新配)。供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)赤芍鉴别取金马肝泰胶囊内容物4g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷， 滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层 用水饱和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液30ml洗涤，弃去 氨试液，再用30ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品 溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 5 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液(8 1 4 1)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)黄芪鉴别取金马肝泰胶囊内容物20g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，加于中性氧化铝柱(200 300目，5g，内径10 15mm)上，用40%甲醇IOOml洗 脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并 正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，合并正丁醇 液，蒸干，残渔加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述 两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65 35 10) 10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至 斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定。含量测定以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈 水=15 45:55 85为流动相进行含量测定。(1)色谱条件与系统适用性试验仪器=Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil (R) C18色谱柱(250mmX 4. 6讓，5 μ m)，以乙腈-水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C， 流速1. OmL/min，检测波长255 285nm ；进样量10 μ 1，理论塔板数不低于1500。(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品9. 64mg，置IOml容量瓶中，加入 甲醇溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液Iml置IOml容量瓶中，稀释至刻度，摇 勻，即得浓度为0. 0964mg/ml对照品溶液。(3)供试品溶液的制备取本品0. 5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入 稀乙醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇 勻，取上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。功能主治清热解毒，健脾利湿，活血化瘀。用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢 性肝炎。用法用量口服。一次2粒，一日3次。规格每片重0. 5g。贮藏密封。实施2。治疗肝炎的金马肝泰片的质量控制方法如下
性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦； 鉴别(1)丹参鉴别取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约3g，加甲醇25ml，加热回流 1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并 乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇 制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录 VI B)试验，吸取对照品溶液0. 5 1 μ 1、供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(2. 4 2 1 0.6)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以1%三氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液(1 1)(临用新配)。供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)赤芍鉴别取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约4g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃 去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液 30ml洗涤，弃去氨试液，再用30ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使 溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品 溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各2 5 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液(8 1 4 1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)黄芪鉴别取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约20g，加甲醇25ml，加热回流 1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，置中性氧化铝柱(200 300目，5g，内径10 15mm)上， 用40%甲醇IOOml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇 提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗 涤2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄 芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药 典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65 35 10) 10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查符合中国药典2005年版一部附录ID中片剂项下的各项规定。含量测定以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相 进行含量测定；每IOOml流动相中含十二烷基磺酸钠0. 2g 1. 0g。(1)色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-IOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱 为DiamonsilC18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量 5 μ L ；理论塔板数不低于4000 ；
(2)对照品溶液的制备分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品各12mg和9mg，精密称 定，分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于 同一 IOml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻即得。(3)供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称 定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精 密量取续滤液5ml，置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪， 按照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。功能主治清热解毒，健脾利湿，活血化瘀。用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢 性肝炎。用法用量口服。一次2片，一日3次。规格每片重0. 55g。贮藏密封。
权利要求
一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量。
2.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的 鉴别包括丹参鉴别取本品0. Ig 10g，加甲醇Iml 150ml，加热回流0. Ih 2h，滤过，滤液蒸 干，残渣加水Iml 50ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1 5次，每次Iml 50ml，合并乙 酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品， 加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层 色谱法试验，吸取对照品溶液0. 5 1 μ 1、供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以体积比为1.9 2. 9 1.5 2. 5 0. 5 1. 5 0. 4 0. 8的三氯甲烷-乙酸乙 酯-甲苯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1 1的1%三氯化铁水溶液-1% 铁氰化钾水溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；赤芍鉴别取本品0. Ig 10g，加甲醇Iml 150ml，加热回流5min 60min，放冷，滤 过，滤液蒸干，残渣加水Iml 50ml使溶解，用乙醚振摇提取1 4次，每次Iml 50ml，弃 去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取1 5次，每次Iml 30ml， 合并正丁醇液，正丁醇 液用氨试液3ml 50ml洗涤，弃去氨试液，再用3ml 50ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液 蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各2 5μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6 10 0.8 1.2 2 6 0.8 1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以浓度为3% 10%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；黄芪鉴别取本品5g 50g，加甲醇5ml 200ml，加热回流0. 5h 2h，滤过，滤液浓 缩至约Iml 5ml，加于中性氧化铝柱上，用浓度为30% 50%的甲醇50ml 200ml洗脱， 收集洗脱液，蒸干，残渣加水5ml 50ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1 5次，每 次5ml 50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1 4次，每次5ml 50ml，再用正丁醇饱和 的水洗涤1 4次，每次5ml 50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶 解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶 液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50 80 25 45 5 15的三氯甲烷-甲 醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为5% 25%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色 清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求2所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述鉴 另|J(2)赤芍鉴别中，显色时加热的温度为100°C 120°C ；鉴别(3)黄芪鉴别中，所用的展 开剂为三氯甲烷-甲醇_水10°C以下放置后的下层溶液；显色时加热的温度为100°C 120°C。
4 根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的含量测定是通过高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷为对照，十八烷 基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈水=15 45:55 85为流动相进行含量测定。
5.根据权利要求4所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述淫 羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil (R) C18色 谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min，检测波长 255 285nm ；进样量10 u 1，理论塔板数不低于1500 ；(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并 稀释至刻度，摇勻，制得浓度为彡lmg/ml的溶液，即得对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入适量稀乙 醇，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取上清 液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10y I，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
6.根据权利要求5所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述淫 羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil (R) C18色 谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min,检测波长 255 285nm ；进样量10 yl，理论塔板数不低于1500 ；对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品9. 64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶 解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得 浓度为0. 0964mg/ml对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙 醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取 上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10y I，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
7.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的 含量测定是通过高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林 碱的含量；以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以 体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相进行含量 测定；每100ml流动相中含十二烷基磺酸钠0. 2g 1. 0g。
8.根据权利要求7所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述粉 防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 u L ；理论塔板数不低于 4000 ；(2)对照品溶液的制备分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品适量，精密称定，分置于容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取适量置于同一容量瓶 中，稀释至刻度，摇勻即得；(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，精密加入0.5 5%盐酸甲醇溶液适量， 称定重量，加热回流15 45min，放冷，再称定重量，用0. 5 5%盐酸甲醇溶液补足减失的 重量，滤过；精密量取续滤液适量，置容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ I，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
9.根据权利要求8所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述粉 防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-IOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 μ L ；理论塔板数不低于 4000 ；(2)对照品溶液的制备称取粉防己碱对照品12mg，防己诺林碱对照品9mg，精密称定， 分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一 IOml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻即得；(3)供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重 量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量 取续滤液5ml，置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ I，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
10.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的 性状和检查包括，对于片剂(1)性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦； (2)检查符合中国药典2005年版一部附录ID中片剂项下的各项规定；对于胶囊剂(1)性状本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦；(2)检查符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定
全文摘要
本发明公开了一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，该质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量。本发明所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制和确保治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量稳定、可控、高效和安全，确保该制剂的临床疗效，更好的满足医疗需要。
文档编号A61P1/16GK101837072SQ20101016086
公开日2010年9月22日 申请日期2010年4月29日 优先权日2010年4月29日
发明者张秋生, 高翔 申请人:贵州益康制药有限公司
技术领域：
本发明涉及药品的质量检测方法，特别是一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方 法，确切的说是金马肝泰片或胶囊的质量检测方法，属于药品的技术领域。
背景技术：
金马肝泰片和金马肝泰胶囊，其主要成分为马蹄金、铁包金、马鞭草、防己、败酱 草、淫羊藿、黄芪、赤芍和丹参等共九味中药材，作为民族药具有清热解毒，健脾利湿，活血 化瘀的功效，主要用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢性肝炎等。现有剂型为颗粒剂，已被 列入国家中成药标准汇编内科肝胆分册，其质量标准相对较为简单，仅对处方中的防己进 行质量控制，因而不能很好地确保其临床用药的有效性及安全性，需要进一步研究，提高其 质量控制标准。根据我国药品管理法的相关规定，改变剂型或工艺作为新药研究管理，金马 肝泰片和金马肝泰胶囊作为一种新药，目前还没有有效的质量控制方法。发明人对金马肝 泰片和金马肝泰胶囊进行了研究，以期探索如何有效控制金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质 量，从而确保其临床疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法， 所制定的质量检测方法能全面有效地控制金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量，从而确保了 金马肝泰片和金马肝泰胶囊的临床疗效。为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案治疗肝炎的药物制剂的质 量检测方法。这种治疗肝炎的药物制剂这样制备马蹄金288. 2g、铁包金153. 3g、马鞭草 115g、防已191. 6g、败酱草115g、淫羊藿153. 3g、黄芪153. 3g、赤芍153. 3g、丹参230g,以上 九味药材，加水煎煮两次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90 95°C时测相对 密度为1. 14 1. 16的清膏，冷至室温，加2倍量乙醇，搅拌均勻，放置48小时，滤过，滤液 回收乙醇，药液浓缩至50 60°C时相对密度为1. 34 1. 40的稠膏；稠膏加入适当辅料制 成1000份片剂或胶囊剂，所述的质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别 是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定 制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱 和防己诺林碱的含量。上述的药物制剂的质量检测方法中，所述的鉴别包括
(1)丹参鉴别取本品0. lg 10g，加甲醇1ml 150ml，加热回流0. lh 2h，滤过， 滤液蒸干，残渣加水1ml 50ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1 5次，每次1ml 50ml， 合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对 照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录 VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0. 5 1 y 1、供试品溶液2 5 y 1，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积比为1. 9 2. 9 1.5 2. 5 0. 5 1. 5 0.4 0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1 1的1%三氯化 铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的斑点；
(2)赤芍鉴别取本品0.lg 10g，加甲醇1ml 150ml，加热回流5min 60min，放 冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水1ml 50ml使溶解，用乙醚振摇提取1 4次，每次1ml 50ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取1 5次，每次1ml 30ml，合并正丁醇液， 正丁醇液用氨试液3ml 50ml洗涤，弃去氨试液，再用3ml 50ml水洗涤，弃去水液，取正 丁醇液蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲 醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色 谱法试验，吸取上述两种溶液各2 5 y 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6 10 0.8 1.2 2 6 0.8 1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为3% 10%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)黄芪鉴别取本品5g 50g，加甲醇5ml 200ml，加热回流0.5h 2h，滤过，滤液 浓缩至约1ml 5ml，加于中性氧化铝柱上，用浓度为30% 50%的甲醇50ml 200ml洗 脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水5ml 50ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1 5次， 每次5ml 50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1 4次，每次5ml 50ml，再用正丁醇饱 和的水洗涤1 4次，每次5ml 50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶 解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶 液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 iU， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50 80 25 45 5 15的三氯甲烷-甲 醇_水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为5% 25%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色 清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述鉴别(2)赤芍鉴别中，显色时 加热的温度为100°C 120°C ；鉴别(3)黄芪鉴别中，所用的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水 10°C以下放置后的下层溶液；显色时加热的温度为100°C 120°C。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的含量测定是通过高效液相 色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以体积比乙腈水=15 45:55 85为流动相进行含量测定。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，具体的讲，所述淫羊藿苷的含量 测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil(R)C18 色谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min,检测波 长255 285nm ；进样量10 yl，理论塔板数不低于1500 ；
(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并 稀释至刻度，摇勻，制得浓度为彡lmg/ml的溶液，即得对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入适量稀乙 醇，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取上清 液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 iU，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，准确的说，所述淫羊藿苷的含量 测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil(R)C18 色谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min,检测波 长255 285nm ；进样量10 yl，理论塔板数不低于1500 ；
(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇 溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即 得浓度为0. 0964mg/ml对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙 醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取 上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的含量测定还可以是通过高 效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量；以粉防己 碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈甲醇 水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相进行含量测定；每100ml流动 相中含十二烷基磺酸钠0. 2g 1. 0g。上述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，具体的说，所述粉防己碱和防己 诺林碱的含量测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 u L ；理论塔板数不低于 4000 ；
(2)对照品溶液的制备分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品适量，精密称定，分置 于容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取适量置于同一容量瓶 中，稀释至刻度，摇勻即得；
(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，精密加入0.5 5%盐酸甲醇溶液适量， 称定重量，加热回流15 45min，放冷，再称定重量，用0. 5 5%盐酸甲醇溶液补足减失的 重量，滤过；精密量取续滤液适量，置容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5iU，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，准确的说，所述粉防己碱和防己 诺林碱的含量测定方法包括以下步骤
(1)色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 u L ；理论塔板数不低于4000 ；
(2)对照品溶液的制备称取粉防己碱对照品12mg，防己诺林碱对照品9mg，精密称定， 分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一 10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻即得；
(3)供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重 量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量 取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5u 1，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的性状和检查包括，对于片 剂(1)性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦；(2)检查符 合中国药典2005年版一部附录ID中片剂项下的各项规定；
对于胶囊剂(1)性状本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味 苦；(2)检查符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定。为了确保本发明的含量测定方法科学、合理、可行，申请人对其进行了一系列的试 验研究和考察，具体如下
(一)单独测定淫羊藿苷。1、药品与试剂淫羊藿苷对照品110737-200415 (中国药品生物制品检定所)，甲醇 、乙腈为色谱醇，水为重蒸馏水。2、仪器分析条件仪器AngilentllOO高效液相色谱仪；7725i型手动进样器； 1100VWD型紫外检测器；HT-230A柱温箱；HP化学工作站；电子天平(BP211D) ；CX-250型超
声波清洗器。3、色谱条件色谱柱Diamonsil(R)C18 色谱柱(250_X4. 6mm，5iim)；乙腈-水 (30:70)为流动相；柱温:25°C ；检测波长:270歷。4、溶液制备
4. 1对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿苷对照品9. 64mg,置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作为 储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得浓度为0. 0964mg/ ml对照品溶液。4. 2供试品溶液的制备
取本品约0. 5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超 声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取上清液，滤过，取续虑 液，即得供试品溶液。5、系统适用性实验
采用 Diamonsil(R)C18 色谱柱(250mmX4. 6mm, 5 u m),乙腈-水(30 70)为流动相， 检测波长270nm，柱温25°C。取供试样品、淫羊藿阴性样品各0. 5g，精密称定，以供试品溶 液制备方法制得供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取上述两种溶液和对照品溶液各 10 yl注入液相色谱仪，记录色谱图，从色谱图中可以看出，供试样品在淫羊藿苷出峰处有 对应峰，阴性样品则在淫羊藿苷出峰处无对应峰，说明阴性样品无假阳性峰。供试样品中淫羊藿苷的理论塔板数为3818，故暂定淫羊藿苷理论塔板数不低于1500，分离度应符合要
求。测定结果见表1。 表1淫羊藿苷系统适用性试验
6、线性关系试验
分别精密量取对照品溶液2、4、6、8、10、12iU，依次进样。在上述色谱条件下测定淫羊 藿苷对照品峰面积，以峰面积(Y)对测定量(X，yg)线性回归，得回归方程Y = 2260. 3X-50. 727(r = 0.9999)。结果见表2，结果表明，淫羊藿苷在0. 5784 1. 928 y g范围内线性 关系良好。 表2淫羊藿苷线性关系考察
7、精密度试验
精密量取淫羊藿苷对照品溶液(9. 640 y g/ml)，在上述色谱条件下，重复进样5次，记 录色谱，结果见表3，淫羊藿苷RSD为0. 88%，说明有良好的精密度。
表3淫羊藿苷精密度试验
8、稳定性试验
取金马肝泰胶囊约0. 5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法进行制备，分别在0、2、 4、6、8h按上述色谱条件测定，记录色谱，结果见表4，淫羊藿苷RSD为0. 88%，说明有稳定性 良好。 表4淫羊藿苷稳定性试验
9、重复性试验
取同一批金马肝泰胶囊按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样，记录 色谱图，计算，结果见表5，淫羊藿苷RSD为1. 06%，说明有良好的重复性。
表5淫羊藿苷重复性试验
10、回收率试验
称取5份金马肝泰胶囊(其中淫羊藿苷含量0. 6811%)0. 2g，精密称定，分别精密加入对 照品储备液1ml，按照供试品溶液制备方法制备，按上述测定方法测定，记录色谱图，计算， 结果见表6。 表6淫羊藿苷回收率试验
11、样品含量测定
取3个批号的金马肝泰胶囊0. 5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法进行制备，即得 样品溶液。精密量取10ul注入液相色谱仪进行测定，另取淫羊藿苷对照品(0. 0964mg/ml), 同法测定，按外标法以峰面积计算，结果见表7。
表7金马肝泰胶囊含量测定结果
(二)同时测定粉防己碱和防己诺林碱的含量
1、药品与试剂粉防己碱对照品110711-200406 (中国药品生物制品检定所)，防己诺 林碱对照品110793-200605 (供含量测定用，中国药品生物制品检定所)，甲醇、乙腈为色谱 醇，盐酸、冰乙酸为分析纯，重蒸水。2、仪器分析条件岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪，CL-10Avp系统控制器， LC-10Atvp输液泵，SPD-10Avp紫外检测器，7725i型手动进样器，Class-VP5. 0工作站数据 处理系统，CT0-10Asvp恒温柱箱；BP211D电子天平(德国)，CX-250型超声波清洗器。3、色谱条件色谱柱迪马 DiamonsilC18(4. 6mmX 250mm，5 ii m);乙腈一甲醇一水一 冰乙酸为流动相；检测波长280nm ；柱温25°C ；
4、溶液制备
4. 1对照品溶液的制备
称取粉防己碱和防己诺林碱对照品各12mg和9mg，精密称定，分置于25ml容量瓶中超 声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一 10ml容量瓶中，稀释至 刻度，摇勻即得。4. 2供试品溶液的制备
取本品约lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30min，放 冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液5ml，置10ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得。5、系统适用性实验
采用迪马DiamonsilC18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)色谱柱，乙腈一甲醇一水一冰乙酸(40 50 30 1)(每100ml含十二烷基磺酸钠0. 41g)为流动相，检测波长280nm，柱温25°C。取 供试样品、防己阴性样品，以供试品溶液制备方法制得供试品溶液和阴性样品溶液，分别精 密吸取上述两种溶液和对照品溶液各5 yl注入液相色谱仪，记录色谱图，从色谱图中可以 看出，供试样品在粉防己碱和防己诺林碱出峰处有对应峰，阴性样品则在粉防己碱和防己 诺林碱出峰处无对应峰，说明阴性样品无假阳性峰。供试样品中粉防己碱和防己诺林碱的 理论塔板数分别为6546和5939，二者的分离度为2. 53，故暂定粉防己碱和防己诺林碱苷理 论塔板数均不低于4000，分离度应符合要求。测定结果见表8。表8粉防己碱和防己诺林碱系统适用性试验
结果可知，阴性对照样品与供试品及对照品溶液相比较，在粉防己碱和防己诺林碱的 相应保留时间内无吸收峰，故阴性样品中的成分不会影响供试品中粉防己碱和防己诺林碱 的测定结果。6、线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液(其中粉防己碱0. 0961mg/ml，防己诺林碱0. 0719mg/ml) 2、 4、6、8、10iU进样，测定，记录色谱图。分别以粉防己碱和防己诺林碱峰面积为纵坐标， 以进样量(？ g)为横坐标，经线性回归得粉防己碱和防己诺林碱回归方程分别为(n=5): Y=640399X + 7980. 5 (r = 0. 9997)，Y=635343X + 7435. 1 (r = 0. 9984)。结果表明粉防 己碱在0. 1922 0. 961 u g范围内线性关系良好，防己诺林碱在0. 1438 0. 7190 y g范围 内线性关系良好。表9粉防己碱和防己诺林碱线性关系考察
7、精密度试验
取同一份供试品溶液(20080101)重复进样5次，记录色谱，结果见表10，粉防己碱和防 己诺林碱RSD分别为1. 33%和3. 01%,说明有良好的精密度。
表10粉防己碱和防己诺林碱精密度试验
8、重复性试验
取同一样品(20050308)按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样，记录 色谱，计算，结果见表11和表12，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为0. 84%和1. 26%，说明 有良好的重复性。 表11粉防己碱重复性试验
表12防己诺林碱重复性实验
9、稳定性试验
精密称取供试品(20080101 )lg，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液。将供试品溶 液于室温下放置0、4、8、12、24h后，按上述色谱条件依次精密吸取各时间段该溶液5 yl，进 样，记录色谱图，计算，结果见表13，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为1. 12%和1. 13%，说 明有良好的稳定性。 表13粉防己碱和防己诺林碱稳定性试验
10、回收率试验
称取5份金马肝泰片样品(其中粉防己碱和防己诺林碱含量分别为0. 5724%和 0. 3185%) 0. 2g，精密称定，分置于5个25ml容量瓶中，分别精密加入对照品储备液各2ml， 按照供试品溶液制备方法制备，按上述测定方法测定，记录色谱图，计算，结果见表14和表 15。
表14粉防己碱回收率试验
表15防己诺林碱回收率试验
11、样品含量测定按供试品溶液制备方法及色谱条件，测定三批样品中粉防己碱和防 己诺林碱的含量，测定结果见表16、表17。表16三批样品同时测定粉防己碱和防己诺林碱含量中粉防己碱的测定结果
表17三批样品同时测定粉防己碱和防己诺林碱含量中防己诺林碱的测定结果
本发明的有益效果与现有技术相比，本发明建立了治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝 泰胶囊的质量检测方法，该方法采用薄层色谱法分别对黄芪、赤芍和丹参进行定性定量鉴 另IJ，达到多成分同时控制，另外，在原有含量测定项目的基础上增加了对淫羊藿苷、粉防己 碱和防己诺林碱项目的测定，利用高效液相色谱测定淫羊藿苷或同时测定粉防己碱和防己 诺林碱的含量，能够进一步有效控制金马肝泰片和胶囊的质量，从而最大限度的确保产品 质量。本发明所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制和 确保治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量稳定、可控、高效和安全，确保该制剂的 临床疗效，更好的满足医疗的需要。下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的说明。
具体实施例方式实施1。治疗肝炎的金马肝泰胶囊的质量控制方法如下
性状本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦； 鉴别(1)丹参鉴别取金马肝泰胶囊内容物3g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过， 滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸 干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸 取对照品溶液0. 5 1 μ 1、供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲 烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(2.4 2 1 0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三 氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液(1 1)(临用新配)。供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)赤芍鉴别取金马肝泰胶囊内容物4g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷， 滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层 用水饱和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液30ml洗涤，弃去 氨试液，再用30ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品 溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 5 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液(8 1 4 1)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)黄芪鉴别取金马肝泰胶囊内容物20g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，加于中性氧化铝柱(200 300目，5g，内径10 15mm)上，用40%甲醇IOOml洗 脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并 正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，合并正丁醇 液，蒸干，残渔加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述 两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65 35 10) 10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至 斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定。含量测定以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈 水=15 45:55 85为流动相进行含量测定。(1)色谱条件与系统适用性试验仪器=Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil (R) C18色谱柱(250mmX 4. 6讓，5 μ m)，以乙腈-水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C， 流速1. OmL/min，检测波长255 285nm ；进样量10 μ 1，理论塔板数不低于1500。(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品9. 64mg，置IOml容量瓶中，加入 甲醇溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液Iml置IOml容量瓶中，稀释至刻度，摇 勻，即得浓度为0. 0964mg/ml对照品溶液。(3)供试品溶液的制备取本品0. 5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入 稀乙醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇 勻，取上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。功能主治清热解毒，健脾利湿，活血化瘀。用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢 性肝炎。用法用量口服。一次2粒，一日3次。规格每片重0. 5g。贮藏密封。实施2。治疗肝炎的金马肝泰片的质量控制方法如下
性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦； 鉴别(1)丹参鉴别取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约3g，加甲醇25ml，加热回流 1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并 乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇 制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录 VI B)试验，吸取对照品溶液0. 5 1 μ 1、供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(2. 4 2 1 0.6)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以1%三氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液(1 1)(临用新配)。供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)赤芍鉴别取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约4g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃 去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液 30ml洗涤，弃去氨试液，再用30ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使 溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品 溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各2 5 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液(8 1 4 1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)黄芪鉴别取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约20g，加甲醇25ml，加热回流 1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，置中性氧化铝柱(200 300目，5g，内径10 15mm)上， 用40%甲醇IOOml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇 提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗 涤2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄 芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药 典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65 35 10) 10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查符合中国药典2005年版一部附录ID中片剂项下的各项规定。含量测定以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相 进行含量测定；每IOOml流动相中含十二烷基磺酸钠0. 2g 1. 0g。(1)色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-IOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱 为DiamonsilC18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量 5 μ L ；理论塔板数不低于4000 ；
(2)对照品溶液的制备分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品各12mg和9mg，精密称 定，分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于 同一 IOml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻即得。(3)供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称 定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精 密量取续滤液5ml，置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪， 按照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。功能主治清热解毒，健脾利湿，活血化瘀。用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢 性肝炎。用法用量口服。一次2片，一日3次。规格每片重0. 55g。贮藏密封。
权利要求
一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量。
2.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的 鉴别包括丹参鉴别取本品0. Ig 10g，加甲醇Iml 150ml，加热回流0. Ih 2h，滤过，滤液蒸 干，残渣加水Iml 50ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1 5次，每次Iml 50ml，合并乙 酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品， 加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层 色谱法试验，吸取对照品溶液0. 5 1 μ 1、供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以体积比为1.9 2. 9 1.5 2. 5 0. 5 1. 5 0. 4 0. 8的三氯甲烷-乙酸乙 酯-甲苯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1 1的1%三氯化铁水溶液-1% 铁氰化钾水溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；赤芍鉴别取本品0. Ig 10g，加甲醇Iml 150ml，加热回流5min 60min，放冷，滤 过，滤液蒸干，残渣加水Iml 50ml使溶解，用乙醚振摇提取1 4次，每次Iml 50ml，弃 去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取1 5次，每次Iml 30ml， 合并正丁醇液，正丁醇 液用氨试液3ml 50ml洗涤，弃去氨试液，再用3ml 50ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液 蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各2 5μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6 10 0.8 1.2 2 6 0.8 1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以浓度为3% 10%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；黄芪鉴别取本品5g 50g，加甲醇5ml 200ml，加热回流0. 5h 2h，滤过，滤液浓 缩至约Iml 5ml，加于中性氧化铝柱上，用浓度为30% 50%的甲醇50ml 200ml洗脱， 收集洗脱液，蒸干，残渣加水5ml 50ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1 5次，每 次5ml 50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1 4次，每次5ml 50ml，再用正丁醇饱和 的水洗涤1 4次，每次5ml 50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶 解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶 液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50 80 25 45 5 15的三氯甲烷-甲 醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为5% 25%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色 清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求2所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述鉴 另|J(2)赤芍鉴别中，显色时加热的温度为100°C 120°C ；鉴别(3)黄芪鉴别中，所用的展 开剂为三氯甲烷-甲醇_水10°C以下放置后的下层溶液；显色时加热的温度为100°C 120°C。
4 根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的含量测定是通过高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷为对照，十八烷 基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈水=15 45:55 85为流动相进行含量测定。
5.根据权利要求4所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述淫 羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil (R) C18色 谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min，检测波长 255 285nm ；进样量10 u 1，理论塔板数不低于1500 ；(2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并 稀释至刻度，摇勻，制得浓度为彡lmg/ml的溶液，即得对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入适量稀乙 醇，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取上清 液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10y I，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
6.根据权利要求5所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述淫 羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil (R) C18色 谱柱，以乙腈_水=15 45 55 85为流动相，柱温20 30°C，流速1. OmL/min,检测波长 255 285nm ；进样量10 yl，理论塔板数不低于1500 ；对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品9. 64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶 解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得 浓度为0. 0964mg/ml对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙 醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，取 上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10y I，注入液相色谱仪，按 照步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
7.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的 含量测定是通过高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林 碱的含量；以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以 体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5为流动相进行含量 测定；每100ml流动相中含十二烷基磺酸钠0. 2g 1. 0g。
8.根据权利要求7所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述粉 防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-lOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 u L ；理论塔板数不低于 4000 ；(2)对照品溶液的制备分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品适量，精密称定，分置于容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取适量置于同一容量瓶 中，稀释至刻度，摇勻即得；(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，精密加入0.5 5%盐酸甲醇溶液适量， 称定重量，加热回流15 45min，放冷，再称定重量，用0. 5 5%盐酸甲醇溶液补足减失的 重量，滤过；精密量取续滤液适量，置容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ I，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
9.根据权利要求8所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述粉 防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适用性试验仪器岛津LC-IOAtvp高效液相色谱仪；色谱柱为 DiamonsilC18 ；以体积比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 为流动相，柱温为10°C 40°C ；检测波长230nm 350nm ；进样量5 μ L ；理论塔板数不低于 4000 ；(2)对照品溶液的制备称取粉防己碱对照品12mg，防己诺林碱对照品9mg，精密称定， 分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一 IOml容量瓶中，稀释至刻度，摇勻即得；(3)供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重 量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量 取续滤液5ml，置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，即得；(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ I，注入液相色谱仪，按照 步骤(1)所述色谱条件测定，即得。
10.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于所述的 性状和检查包括，对于片剂(1)性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦； (2)检查符合中国药典2005年版一部附录ID中片剂项下的各项规定；对于胶囊剂(1)性状本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦；(2)检查符合中国药典2005年版一部附录IL中胶囊剂项下的各项规定
全文摘要
本发明公开了一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，该质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量。本发明所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制和确保治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量稳定、可控、高效和安全，确保该制剂的临床疗效，更好的满足医疗需要。
文档编号A61P1/16GK101837072SQ20101016086
公开日2010年9月22日 申请日期2010年4月29日 优先权日2010年4月29日
发明者张秋生, 高翔 申请人:贵州益康制药有限公司
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