一种小蓟有效部位提取物及其制备方法和用途的制作方法
专利名称：一种小蓟有效部位提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体的说涉及以植物药小蓟为原料提取含有总黄酮和总咖啡酸酯的活性提取物。本发明还涉及该活性提取物的制备方法和用途。
背景技术：
出血为许多外科和内科疾病的重要临床症状，并多系临床危、急、重症。出血过多时可导致休克，引发生命危险，同时，出血还伴有疼痛、炎症等。如果出血不能及时止血，则会在体内淤积，引发其它疾病。因此，止血是处理临床出血性危急重症的重要手段，此外，从军事医学角度考虑，止血药是战备战略性药物的重要内容之一，因此，止血药物具有广泛的用途。目前止血药物从获取的途径上区分有中药、合成药和生物工程药物三大类。合成药与生物工程药物多为单一化合物或酶制剂，作用于单一靶点，或为血管收缩剂或为促凝血药物，由于其作用靶点单一，所以对于不同原因及不同机制的出血性疾病难以获得广泛而满意的疗效，并且易产生毒副作用，如血压急剧上升、血栓形成、诱发心脑血管疾病等。中药止血药具有多靶点、多组分、协同作用的特点，可作用于血管、血液的各个环节，尤其是含有多种凝血因子激活物，凝血过程呈“链锁式”及“瀑布式”反应，增大了凝血活性，降低了毒副作用，大大增强了临床用药的安全有效性。小蓟为菊科植物剌儿菜Cirsium setosum(ffilld. )MB.的干燥地上部分。其味甘、 苦，性凉；归心、肝经。具有凉血止血，祛瘀消肿的功效。用于衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外伤出血，痈肿疮毒。有关小蓟的临床应有在历代文献中均有记载，《食疗本草》“取菜煮食之，除风热。根，主崩中，又女子月候伤过，捣汁半升服之；金疮血不止，叶封之；夏月热，烦闷不止，捣叶取汁半升服之。”《本草拾遗》“破宿血，止新血，暴下血，血痢，金疮出血， 呕吐等，绞汁温服。”《本草图经》“生捣根绞汁服，以止吐血，呕血，下血。”现有制剂血立止片、血立止胶囊和血立止颗粒均是由中药小蓟制备得到，在临床上被广泛应用，具有活血止痛，化瘀止血的功效。但这几种制剂均是由小蓟药材采用药材全粉制备得到，均存在活性成分不明确，服用量大的缺点。限制了该药的临床应用和市场规模。
发明内容
本发明的目的是克服现有小蓟制剂的活性成分不明确，服用量大的缺点，开发利用小蓟有效部位制成疗效确切，服用量少的现代中药新药。本发明在对小蓟止血有效部位进行研究的基础上，发现该植物中所包含的黄酮类和咖啡酸酯类成分具有明显的止血作用。本发明提供了小蓟提取物在制备预防和/或治疗出血性疾病的药物中的用途，出血性疾病包括吐血，尿血，便血，衄血，崩漏下血，外伤出血等。具体来说，上述小蓟包含一种或多种选自黄酮类和咖啡酸酯类的化合物。优选地，一种或多种选自黄酮和咖啡酸酯类化合物之和的重量占小蓟提取物重量的50%以上。黄酮类化合物主要包括蒙花苷、芦丁、刺槐素和槲皮素等。咖啡酸酯类化合物主要包括3-0-咖啡酰基奎宁酸、5-0-咖啡酰基奎宁酸、咖啡酸禾口 1-(3' ,4' -dihydroxycinnamoyl)-cyclopenta-2,3-diol 等。小蓟提取物中各种成分的含量测定方法如下(1)总黄酮的测定(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取干燥恒重的蒙花苷对照品适量，用甲醇溶解制成每 Iml含15 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取本品粉末50mg，置IOml量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇勻，滤过。沉淀连滤纸置于IOOml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，精密称定重量，超声处理30min，再次称重，加甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过。取续滤液Iml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。标准曲线的绘制精密量取蒙花苷对照品溶液(0. 13mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、 5. 0、6. 0ml，分别置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，以甲醇为空白，在326mn波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标，浓度C^yg·!!^1)为横坐标，绘制标准曲线。测定法取供试品溶液，以甲醇为空白，按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在326nm波长处测定吸收度。(2)总咖啡酸酯的测定(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，用30% (体积)甲醇水溶液溶解制成每Iml含10 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取本品粉末50mg，置IOml量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇勻，滤过。精密吸取续滤液lml，置50ml量瓶中，加30% (体积)甲醇水溶液至刻度， 摇勻，即得供试品溶液。标准曲线的绘制精密量取绿原酸对照品溶液(0. 21mg/ml)0. 2,0. 5、1. 0、1. 5、 2. 0、2. 5ml，分别置25ml量瓶中，加30% (体积)甲醇水溶液至刻度，摇勻，以30%甲醇(体积)水溶液为空白，在324nm波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标，浓度C( μ g ^Γ1) 为横坐标，绘制标准曲线。测定法取供试品溶液，以30% (体积)甲醇水溶液为空白，按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在324nm波长处测定吸收度。在上述用途中，小蓟提取物可以由本领域技术人员根据本领域公知的任何方法来制备，包括但不局限于下述制备方法。一种小蓟提取物的制备方法包括以下步骤(1)取小蓟药材经溶剂提取；(2)将小蓟提取溶液浓缩至适当体积后，静置，离心，分离沉淀和上清液，备用；(3)将上述(2)中上清液通过大孔吸附树脂，用水、低浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液；(4)用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并干燥，即得总咖啡酸酯提取物；(5)将上述(2)中沉淀用有机溶剂提取，除去低极性杂质，即得总黄酮提取物；
(6)把总黄酮提取物和总咖啡酸酯提取物合并，即得小蓟止血有效部位。其中，步骤(1)中的溶剂可以选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种，提取方法可以为温浸、热回流和/或渗漉；步骤O)中的低浓度甲醇或乙醇水溶液优选为5% 20% (体积)的甲醇或乙醇水溶液；步骤(3)中的高浓度甲醇或乙醇水溶液优选为30% 95% (体积)甲醇或乙醇水溶液。该制备方法简单易行、提取效果好、易于工业推广应用。上述药物可以为包含小蓟提取物的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。可以采用常规方法将小蓟提取物与任何一种或一种以上药用辅料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述剂型。对本发明的药物的药效学部分进行了初步研究，结果发现本发明的药物能明显缩短正常小鼠出血时间和凝血时间，能显著缩短热盛胃出血小鼠模型的出血时间，减少小鼠胃出血点个数。在上述药理活性试验的基础上，小蓟提取物在临床可用于吐血，尿血，便血， 衄血，崩漏下血，外伤出血等出血性疾病的预防和治疗。本发明的药物原料来源易得，易于产业化，可以根据需要制成各种剂型，为临床提供了使用更加方便、疗效更加有效、质量更加可控的现代中药，为患者带来更多的益处，从而产生了巨大的社会效益。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。实施例1取小蓟药材10kg，用10倍量80% (体积)乙醇提取三次，每次1小时。收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至适当体积，放置至室温，离心，沉淀经石油醚脱脂，干燥备用(A)；上清液加盐酸调pH至2-3，通过HPD-300型大孔吸附树脂，先用水洗脱至无色， 除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用4BVBV:Bed Volume缩写，树脂床体积50% (体积) 的乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量为42. 7% (重量)，总咖啡酸酯含量为 12. 1% (重量)。实施例2取小蓟药材10kg，用70% (体积)乙醇渗漉提取，收集渗漉液25倍体积，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至适当体积，放置至室温。离心，沉淀经石油醚脱脂，干燥备用(A)； 上清液过HPD-100型大孔吸附树脂，依次用水和10% (体积)乙醇洗脱至无色，除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用3BV 70% (体积)的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量 ^ 43. 5% (重量)，总咖啡酸酯含量为10.9% (重量)。实施例3取小蓟药材10kg，用10倍量80% (体积)乙醇提取三次，每次2小时，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至适当体积，放置至室温。离心，沉淀经甲醇超声处理，抽滤，弃去甲醇液，沉淀干燥备用(A)；上清液通过D-101型大孔吸附树脂，先用水洗脱至无色，除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用4BV 30% (体积)的乙醇洗脱，收集30% (体积) 乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量为45. 9% (重量)，总咖啡酸酯含量为17.2% (重量)。实施例4取小蓟药材10kg，用10倍量80% (体积)甲醇提取三次，每次1小时，收集提取液，减压回收甲醇，并浓缩至适当体积，放置至室温。离心，沉淀经甲醇索氏提取，弃去甲醇液，沉淀干燥备用㈧；上清液过AB-8型大孔吸附树脂，依次用水和10%甲醇洗脱至无色， 除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用:3BV 70% (体积)的甲醇洗脱，收集70% (体积)甲醇洗脱液，将回收甲醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量为41. 2% (重量)，总咖啡酸酯含量为11.2% (重量)。实施例5取小蓟提取物100g，微粉硅胶适量，混合均勻，采用胶囊制备工艺制备，即得小蓟提取物胶囊。实施例6取小蓟提取物100g，加到200g熔融的聚乙二醇6000中，采用滴丸制备工艺制备， 即得小蓟提取物滴丸。实施例7取小蓟提取物100g，糊精200g，混合均勻，制粒，过蹄，干燥，即得小蓟提取物的颗粒剂；或将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即得小蓟提取物的片剂。实施例8 取小蓟提取物100g，羟丙基甲基纤维素100g，羧甲基纤维素钠60g，乳糖40g，混合均勻，制粒，干燥，压片，即得小蓟提取物的缓释片剂。实施例9取小蓟提取物100g，微晶纤维素120g，羧甲基纤维素钠30g，微粉硅胶lg，混合均勻，压片，即得小蓟提取物的分散片。实施例10取小蓟提取物100g，植物油250g，混勻，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊，即得小蓟提取物的软胶囊。实施例11取小蓟提取物100g，溶于500ml注射用水中，采用现有注射用无菌粉末制备工艺制备，即得小蓟提取物注射用无菌粉末剂型。实施例12取小蓟提取物100g，溶于1000ml注射用水中，采用注射剂制备工艺，即得小蓟提取物注射液(含输液)。试验例1本发明药物的疗效由以下药效学试验证明1、试验材料1. 1药物及试剂
小蓟提取物棕色粉末，46. 9g生药/g。由天津药物研究院中药现代研究室提供， 用生理盐水配成合适浓度的溶液供试验用。止血宝胶囊0. 3g/粒含原药材3g，批号090910，西安高科技陕西金方药业公司
女口
广 PFt ο断血流每片含断血流干浸膏0. 3g，含4. 5g生药/片，批号091017，安庆乘冈制药有限公司产品。1. 2 动物小鼠昆明种，雌雄兼用，体重18_22g，购自北京华埠康生物科技股份有限公司， 许可证编号SCXK京2009-0004。1. 3试验仪器恒温水浴TDA_8002型，天津市中环实验电炉有限公司产品。血小板聚集仪 PNA-3型，江苏丹阳无线电厂产品。凝血因子分析仪=LG-PABER型，北京世帝科学仪器公司
权利要求
1.一种小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述小蓟提取物包含一种或多种选自黄酮类和咖啡酸酯类的化合物。
2.根据权利要求1所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述一种或多种选自黄酮类和咖啡酸酯类化合物的重量之和占小蓟提取物重量的50%以上。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述小蓟提取物的制备方法包括以下步骤(1)取小蓟药材经溶剂提取；(2)将提取液减压浓缩至适当体积，放至室温，离心，得沉淀和上清液，备用；(3)将O)中上清液通过大孔吸附树脂，用水、低浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液；(4)用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并干燥，得到提取物A；(5)将O)中沉淀用有机溶剂提取脱脂后，弃去有机层，沉淀干燥后得提取物B。(6)将⑷中提取物A与(5)中提取物B合并，即得小蓟提取物。
4.根据权利要求3所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(1)中的溶剂选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种。
5.根据权利要求3或4所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(1)中的提取方法为温浸、热回流和/或渗漉。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤 (3)中的大孔吸附树脂包括HPD100、HPD300、AB-8和DlOl。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(3)中的低浓度甲醇或乙醇水溶液为5% 20%(体积)的甲醇或乙醇水溶液。
8.根据权利要求3至7中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(4)中的高浓度甲醇或乙醇水溶液为30% 95%(体积)甲醇或乙醇水溶液。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述药物为包含小蓟有效部位提取物的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的小蓟有效部位提取物，在制备预防和/或治疗出血性疾病的药物中的用途。
全文摘要
本发明提供了一种小蓟有效部位提取物和它的制备方法及其在制备药物中的应用。本发明提供的小蓟有效部位中有效物质纯度较高，黄酮类和咖啡酸酯类化合物的重量之和占小蓟有效部位提取物重量的50％以上，同时本发明制备预防和治疗吐血、尿血、便血、衄血、崩漏下血、外伤出血等出血性疾病的药物。本发明质量可控，制备工艺易于产业化，可以根据需要制成各种剂型，为临床提供了使用更加方便、疗效更加有效、质量稳定的现代中药。
文档编号A61K36/28GK102232982SQ201010161890
公开日2011年11月9日 申请日期2010年5月4日 优先权日2010年5月4日
发明者侯坤, 岳南, 张铁军, 许浚 申请人:天津药物研究院
技术领域：
本发明属于医药领域，具体的说涉及以植物药小蓟为原料提取含有总黄酮和总咖啡酸酯的活性提取物。本发明还涉及该活性提取物的制备方法和用途。
背景技术：
出血为许多外科和内科疾病的重要临床症状，并多系临床危、急、重症。出血过多时可导致休克，引发生命危险，同时，出血还伴有疼痛、炎症等。如果出血不能及时止血，则会在体内淤积，引发其它疾病。因此，止血是处理临床出血性危急重症的重要手段，此外，从军事医学角度考虑，止血药是战备战略性药物的重要内容之一，因此，止血药物具有广泛的用途。目前止血药物从获取的途径上区分有中药、合成药和生物工程药物三大类。合成药与生物工程药物多为单一化合物或酶制剂，作用于单一靶点，或为血管收缩剂或为促凝血药物，由于其作用靶点单一，所以对于不同原因及不同机制的出血性疾病难以获得广泛而满意的疗效，并且易产生毒副作用，如血压急剧上升、血栓形成、诱发心脑血管疾病等。中药止血药具有多靶点、多组分、协同作用的特点，可作用于血管、血液的各个环节，尤其是含有多种凝血因子激活物，凝血过程呈“链锁式”及“瀑布式”反应，增大了凝血活性，降低了毒副作用，大大增强了临床用药的安全有效性。小蓟为菊科植物剌儿菜Cirsium setosum(ffilld. )MB.的干燥地上部分。其味甘、 苦，性凉；归心、肝经。具有凉血止血，祛瘀消肿的功效。用于衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外伤出血，痈肿疮毒。有关小蓟的临床应有在历代文献中均有记载，《食疗本草》“取菜煮食之，除风热。根，主崩中，又女子月候伤过，捣汁半升服之；金疮血不止，叶封之；夏月热，烦闷不止，捣叶取汁半升服之。”《本草拾遗》“破宿血，止新血，暴下血，血痢，金疮出血， 呕吐等，绞汁温服。”《本草图经》“生捣根绞汁服，以止吐血，呕血，下血。”现有制剂血立止片、血立止胶囊和血立止颗粒均是由中药小蓟制备得到，在临床上被广泛应用，具有活血止痛，化瘀止血的功效。但这几种制剂均是由小蓟药材采用药材全粉制备得到，均存在活性成分不明确，服用量大的缺点。限制了该药的临床应用和市场规模。
发明内容
本发明的目的是克服现有小蓟制剂的活性成分不明确，服用量大的缺点，开发利用小蓟有效部位制成疗效确切，服用量少的现代中药新药。本发明在对小蓟止血有效部位进行研究的基础上，发现该植物中所包含的黄酮类和咖啡酸酯类成分具有明显的止血作用。本发明提供了小蓟提取物在制备预防和/或治疗出血性疾病的药物中的用途，出血性疾病包括吐血，尿血，便血，衄血，崩漏下血，外伤出血等。具体来说，上述小蓟包含一种或多种选自黄酮类和咖啡酸酯类的化合物。优选地，一种或多种选自黄酮和咖啡酸酯类化合物之和的重量占小蓟提取物重量的50%以上。黄酮类化合物主要包括蒙花苷、芦丁、刺槐素和槲皮素等。咖啡酸酯类化合物主要包括3-0-咖啡酰基奎宁酸、5-0-咖啡酰基奎宁酸、咖啡酸禾口 1-(3' ,4' -dihydroxycinnamoyl)-cyclopenta-2,3-diol 等。小蓟提取物中各种成分的含量测定方法如下(1)总黄酮的测定(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取干燥恒重的蒙花苷对照品适量，用甲醇溶解制成每 Iml含15 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取本品粉末50mg，置IOml量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇勻，滤过。沉淀连滤纸置于IOOml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，精密称定重量，超声处理30min，再次称重，加甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过。取续滤液Iml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。标准曲线的绘制精密量取蒙花苷对照品溶液(0. 13mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、 5. 0、6. 0ml，分别置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，以甲醇为空白，在326mn波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标，浓度C^yg·!!^1)为横坐标，绘制标准曲线。测定法取供试品溶液，以甲醇为空白，按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在326nm波长处测定吸收度。(2)总咖啡酸酯的测定(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，用30% (体积)甲醇水溶液溶解制成每Iml含10 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取本品粉末50mg，置IOml量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇勻，滤过。精密吸取续滤液lml，置50ml量瓶中，加30% (体积)甲醇水溶液至刻度， 摇勻，即得供试品溶液。标准曲线的绘制精密量取绿原酸对照品溶液(0. 21mg/ml)0. 2,0. 5、1. 0、1. 5、 2. 0、2. 5ml，分别置25ml量瓶中，加30% (体积)甲醇水溶液至刻度，摇勻，以30%甲醇(体积)水溶液为空白，在324nm波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标，浓度C( μ g ^Γ1) 为横坐标，绘制标准曲线。测定法取供试品溶液，以30% (体积)甲醇水溶液为空白，按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在324nm波长处测定吸收度。在上述用途中，小蓟提取物可以由本领域技术人员根据本领域公知的任何方法来制备，包括但不局限于下述制备方法。一种小蓟提取物的制备方法包括以下步骤(1)取小蓟药材经溶剂提取；(2)将小蓟提取溶液浓缩至适当体积后，静置，离心，分离沉淀和上清液，备用；(3)将上述(2)中上清液通过大孔吸附树脂，用水、低浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液；(4)用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并干燥，即得总咖啡酸酯提取物；(5)将上述(2)中沉淀用有机溶剂提取，除去低极性杂质，即得总黄酮提取物；
(6)把总黄酮提取物和总咖啡酸酯提取物合并，即得小蓟止血有效部位。其中，步骤(1)中的溶剂可以选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种，提取方法可以为温浸、热回流和/或渗漉；步骤O)中的低浓度甲醇或乙醇水溶液优选为5% 20% (体积)的甲醇或乙醇水溶液；步骤(3)中的高浓度甲醇或乙醇水溶液优选为30% 95% (体积)甲醇或乙醇水溶液。该制备方法简单易行、提取效果好、易于工业推广应用。上述药物可以为包含小蓟提取物的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。可以采用常规方法将小蓟提取物与任何一种或一种以上药用辅料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述剂型。对本发明的药物的药效学部分进行了初步研究，结果发现本发明的药物能明显缩短正常小鼠出血时间和凝血时间，能显著缩短热盛胃出血小鼠模型的出血时间，减少小鼠胃出血点个数。在上述药理活性试验的基础上，小蓟提取物在临床可用于吐血，尿血，便血， 衄血，崩漏下血，外伤出血等出血性疾病的预防和治疗。本发明的药物原料来源易得，易于产业化，可以根据需要制成各种剂型，为临床提供了使用更加方便、疗效更加有效、质量更加可控的现代中药，为患者带来更多的益处，从而产生了巨大的社会效益。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。实施例1取小蓟药材10kg，用10倍量80% (体积)乙醇提取三次，每次1小时。收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至适当体积，放置至室温，离心，沉淀经石油醚脱脂，干燥备用(A)；上清液加盐酸调pH至2-3，通过HPD-300型大孔吸附树脂，先用水洗脱至无色， 除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用4BVBV:Bed Volume缩写，树脂床体积50% (体积) 的乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量为42. 7% (重量)，总咖啡酸酯含量为 12. 1% (重量)。实施例2取小蓟药材10kg，用70% (体积)乙醇渗漉提取，收集渗漉液25倍体积，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至适当体积，放置至室温。离心，沉淀经石油醚脱脂，干燥备用(A)； 上清液过HPD-100型大孔吸附树脂，依次用水和10% (体积)乙醇洗脱至无色，除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用3BV 70% (体积)的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量 ^ 43. 5% (重量)，总咖啡酸酯含量为10.9% (重量)。实施例3取小蓟药材10kg，用10倍量80% (体积)乙醇提取三次，每次2小时，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至适当体积，放置至室温。离心，沉淀经甲醇超声处理，抽滤，弃去甲醇液，沉淀干燥备用(A)；上清液通过D-101型大孔吸附树脂，先用水洗脱至无色，除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用4BV 30% (体积)的乙醇洗脱，收集30% (体积) 乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量为45. 9% (重量)，总咖啡酸酯含量为17.2% (重量)。实施例4取小蓟药材10kg，用10倍量80% (体积)甲醇提取三次，每次1小时，收集提取液，减压回收甲醇，并浓缩至适当体积，放置至室温。离心，沉淀经甲醇索氏提取，弃去甲醇液，沉淀干燥备用㈧；上清液过AB-8型大孔吸附树脂，依次用水和10%甲醇洗脱至无色， 除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用:3BV 70% (体积)的甲醇洗脱，收集70% (体积)甲醇洗脱液，将回收甲醇后的洗脱液减压干燥(B) ；A与B合并，即得小蓟提取物。按小蓟提取物的总重量计，总黄酮含量为41. 2% (重量)，总咖啡酸酯含量为11.2% (重量)。实施例5取小蓟提取物100g，微粉硅胶适量，混合均勻，采用胶囊制备工艺制备，即得小蓟提取物胶囊。实施例6取小蓟提取物100g，加到200g熔融的聚乙二醇6000中，采用滴丸制备工艺制备， 即得小蓟提取物滴丸。实施例7取小蓟提取物100g，糊精200g，混合均勻，制粒，过蹄，干燥，即得小蓟提取物的颗粒剂；或将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即得小蓟提取物的片剂。实施例8 取小蓟提取物100g，羟丙基甲基纤维素100g，羧甲基纤维素钠60g，乳糖40g，混合均勻，制粒，干燥，压片，即得小蓟提取物的缓释片剂。实施例9取小蓟提取物100g，微晶纤维素120g，羧甲基纤维素钠30g，微粉硅胶lg，混合均勻，压片，即得小蓟提取物的分散片。实施例10取小蓟提取物100g，植物油250g，混勻，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊，即得小蓟提取物的软胶囊。实施例11取小蓟提取物100g，溶于500ml注射用水中，采用现有注射用无菌粉末制备工艺制备，即得小蓟提取物注射用无菌粉末剂型。实施例12取小蓟提取物100g，溶于1000ml注射用水中，采用注射剂制备工艺，即得小蓟提取物注射液(含输液)。试验例1本发明药物的疗效由以下药效学试验证明1、试验材料1. 1药物及试剂
小蓟提取物棕色粉末，46. 9g生药/g。由天津药物研究院中药现代研究室提供， 用生理盐水配成合适浓度的溶液供试验用。止血宝胶囊0. 3g/粒含原药材3g，批号090910，西安高科技陕西金方药业公司
女口
广 PFt ο断血流每片含断血流干浸膏0. 3g，含4. 5g生药/片，批号091017，安庆乘冈制药有限公司产品。1. 2 动物小鼠昆明种，雌雄兼用，体重18_22g，购自北京华埠康生物科技股份有限公司， 许可证编号SCXK京2009-0004。1. 3试验仪器恒温水浴TDA_8002型，天津市中环实验电炉有限公司产品。血小板聚集仪 PNA-3型，江苏丹阳无线电厂产品。凝血因子分析仪=LG-PABER型，北京世帝科学仪器公司
权利要求
1.一种小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述小蓟提取物包含一种或多种选自黄酮类和咖啡酸酯类的化合物。
2.根据权利要求1所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述一种或多种选自黄酮类和咖啡酸酯类化合物的重量之和占小蓟提取物重量的50%以上。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述小蓟提取物的制备方法包括以下步骤(1)取小蓟药材经溶剂提取；(2)将提取液减压浓缩至适当体积，放至室温，离心，得沉淀和上清液，备用；(3)将O)中上清液通过大孔吸附树脂，用水、低浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液；(4)用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并干燥，得到提取物A；(5)将O)中沉淀用有机溶剂提取脱脂后，弃去有机层，沉淀干燥后得提取物B。(6)将⑷中提取物A与(5)中提取物B合并，即得小蓟提取物。
4.根据权利要求3所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(1)中的溶剂选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种。
5.根据权利要求3或4所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(1)中的提取方法为温浸、热回流和/或渗漉。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤 (3)中的大孔吸附树脂包括HPD100、HPD300、AB-8和DlOl。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(3)中的低浓度甲醇或乙醇水溶液为5% 20%(体积)的甲醇或乙醇水溶液。
8.根据权利要求3至7中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述步骤(4)中的高浓度甲醇或乙醇水溶液为30% 95%(体积)甲醇或乙醇水溶液。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的小蓟有效部位提取物，其特征在于，所述药物为包含小蓟有效部位提取物的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的小蓟有效部位提取物，在制备预防和/或治疗出血性疾病的药物中的用途。
全文摘要
本发明提供了一种小蓟有效部位提取物和它的制备方法及其在制备药物中的应用。本发明提供的小蓟有效部位中有效物质纯度较高，黄酮类和咖啡酸酯类化合物的重量之和占小蓟有效部位提取物重量的50％以上，同时本发明制备预防和治疗吐血、尿血、便血、衄血、崩漏下血、外伤出血等出血性疾病的药物。本发明质量可控，制备工艺易于产业化，可以根据需要制成各种剂型，为临床提供了使用更加方便、疗效更加有效、质量稳定的现代中药。
文档编号A61K36/28GK102232982SQ201010161890
公开日2011年11月9日 申请日期2010年5月4日 优先权日2010年5月4日
发明者侯坤, 岳南, 张铁军, 许浚 申请人:天津药物研究院
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