巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法
专利名称：巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法。
背景技术：
近年来，中药现代化逐步加强，尤其是对纳米天然药材的研究与开发已倍受重视。 徐辉碧(纳米技术在中药研究中的应用.中国药科大学学报，2001.)等率先将纳米技术引进中药研发，发现将中药牛黄加工到纳米级的水平，不仅能提高药效和生物利用度，甚至可能产生新的药理效果，具有极强的靶向作用，并据此提出了“纳米中药”的科学概念。此后， 又有人对100多种中药进行了研究，已经获得平均粒径仅有17nm的血竭，23nm的蜂胶等的纳米颗粒。壳聚糖是一种天然聚阳离子碱性多糖，近年来，研究特别侧重于生物医学及药物制剂等领域，证实壳聚糖具有生物黏附性和多种生物活性，它能与活体组织相容，不会引起过敏反应和排斥现象，其被体内的溶菌酶、胃蛋白酶降解后，降解产物能完全地被人体吸收，无毒、无副作用，较适于作为缓控释辅料。壳聚糖包封药物后，可使其释放减慢、疗效延长，毒副作用降低。利用壳聚糖制备缓释、控释制剂已成为近年来新剂型研究的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法。本发明以巯基乙酸作为巯基供体，对壳聚糖进行化学修饰，并以人参纳米颗粒作为模型药物进行包裹，应用巯基敏感的荧光试剂进行荧光标记，制备了荧光标记的巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒。本发明在乙酸和乙醇的混合溶剂中，以巯基乙酸为羧基供体，壳聚糖表面的羟基为受体，合成了巯基化壳聚糖；再利用三聚磷酸钠为交联剂，包裹人参纳米颗粒。—种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法，其特征在于该方法步骤为A、将巯基化壳聚糖溶于由乙酸和无水乙醇组成的混合溶剂中，加入人参纳米颗粒，以三聚磷酸钠水溶液为交联剂进行包裹，得到巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球；B、将巯基敏感荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺，加入磷酸盐缓冲液，在常压以及 250C _36°C条件下，使巯基敏感荧光试剂与巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球充分反应后，装入透析袋，进行透析，得到产物。在透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测，完成巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记。在A步骤中，无水乙醇与乙酸的体积比为1 1-5。在A步骤中，三聚磷酸钠水溶液的浓度为l_2mg/ml。在A步骤中，人参纳米颗粒的制备方法来源于中国专利(液相超声制备纳米天然药材颗粒方法200910117753. X)。
在B步骤中，巯基敏感荧光试剂与磷酸盐缓冲液的体积比为1 6000-10000。在B步骤中，Img巯基敏感荧光试剂溶于N，N-二甲基甲酰胺100-300 μ 1中。在B步骤中，磷酸盐缓冲液的ρΗ值为7. 1-7.4。本发明制备出了能够带有荧光基团的人参纳米颗粒，这些颗粒既保持有纳米级尺度，又具有荧光特征。本发明的优点是能够以巯基乙酸作为巯基供体，对壳聚糖进行化学修饰，并以人参纳米颗粒作为模型药物进行包裹，应用巯基敏感的荧光试剂进行荧光标记，制备了荧光标记的巯基化的壳聚糖包裹人参纳米颗粒。对其进行了相关的性质的表征和检测。通过扫描电镜和荧光电镜分析，结果显示巯基化壳聚糖人参纳米颗粒形状规则， 具有核-壳结构，湿态下平均粒径约为300-350nm ；同时在生理ρΗ下它还具有很强的荧光活性。本发明的用途壳聚糖具有生物黏附性和多种生物活性，它能与活体组织相容，不会引起过敏反应和排斥现象，其被体内的溶菌酶、胃蛋白酶降解后，降解产物能完全地被人体吸收，无毒、无副作用，较适于作为缓控释辅料。壳聚糖包封药物后，可使其释放减慢、疗效延长，毒副作用降低。利用巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒，可使其带有荧光特性，在动物体内显示出纳米人参颗粒的代谢途径。
具体实施例方式实施例1巯基化壳聚糖载药纳米颗粒的制备采用溶剂挥发法称取0. Ig巯基化壳聚糖溶于乙酸与无水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=1 1)中，加热搅拌超声至完全溶解后加入人参纳米颗粒，磁力搅拌，至完全分散，继续磁力搅拌且同时逐滴缓慢加入三聚磷酸钠水溶液(lmg/ml)，得到巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的微球。取微球溶液进行扫描电镜检测。巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记将荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺(Img 100 μ 1)，加入磷酸盐缓冲液(ρΗ = 7. 1)。保温在25°C条件下反应。荧光试剂与巯基化壳聚糖载药纳米颗粒充分反应后，装入透析袋，进行透析。透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测。巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的扫描电镜表征实验扫描电镜结果显示人参纳米中药颗粒能够被壳聚糖较好的包裹，巯基化壳聚糖载人参纳米颗粒微球分散较均勻， 形成较典型的核-壳结构，人参纳米药物部分在内部，充当核结构，巯基化壳聚糖分子在外部充当壳结构，形状较规则，其平均直径在310nm左右。包裹效果较好。荧光电镜检测实验荧光电镜结果显示在讨如！!!波长的荧光激发下，呈现出少量红色荧光图像。，颜色较暗。说明巯基化壳聚糖在体外的荧光标记有效果。实施例2巯基化壳聚糖载药纳米颗粒的制备采用溶剂挥发法称取0. Ig巯基化壳聚糖溶于乙酸与无水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=3 1)中，加热搅拌超声至完全溶解后加入人参纳米颗粒，磁力搅拌，至完全分散，继续磁力搅拌且同时逐滴缓慢加入三聚磷酸钠水溶液(1.5mg/ml)。即得到巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的微球。
取微球溶液进行扫描电镜检测。巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记将荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺(Img 200 μ 1)，加入磷酸盐缓冲液(ρΗ=7.2)。保温在30°C条件下反应。荧光试剂与巯基化壳聚糖载药纳米颗粒充分反应后，装入透析袋，进行透析。透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测。巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的扫描电镜表征实验扫描电镜结果显示人参纳米中药颗粒能够被壳聚糖较好的包裹，巯基化壳聚糖载人参纳米颗粒微球分散均勻，形成典型的核-壳结构，人参纳米药物在内部，充当核结构，巯基化壳聚糖分子在外部充当壳结构，形状规则，近似圆形，表面光滑，其平均直径在300nm左右。包裹效果良好。荧光电镜检测实验荧光电镜结果显示在讨如！!!波长的荧光激发下，呈现出红色荧光图像。荧光聚集在一起，颜色明显。说明巯基化壳聚糖在体外的荧光标记成功，完全能够识别。实施例3巯基化壳聚糖载药纳米颗粒的制备采用溶剂挥发法称取0. Ig巯基化壳聚糖溶于乙酸与无水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=4 1)中，加热搅拌超声至完全溶解后加入人参纳米颗粒，磁力搅拌，至完全分散，继续磁力搅拌且同时逐滴缓慢加入三聚磷酸钠水溶液Qmg/ml)。即得到巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的微球。取微球溶液进行扫描电镜检测。巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记将荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺(Img 300 μ 1)，加入磷酸盐缓冲液(ρΗ= 7.4)。保温在36°C条件下反应。荧光试剂与巯基化壳聚糖载药纳米颗粒充分反应后，装入透析袋，进行透析。透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测。巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的扫描电镜表征实验扫描电镜结果显示人参纳米中药颗粒基本能被壳聚糖包裹，巯基化壳聚糖载人参纳米颗粒微球聚集，形成典型的核-壳结构，表面粗糙，其平均直径在350nm左右。包裹效果一般。荧光电镜检测实验荧光电镜结果显示在讨如！!!波长的荧光激发下，呈现出暗红色荧光图像。荧光聚集在一起，颜色不明显。说明巯基化壳聚糖在体外的荧光标记效果一般，能够识别。
权利要求
1.一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法，其特征在于该方法步骤为A、将巯基化壳聚糖溶于由乙酸和无水乙醇组成的混合溶剂中，加入人参纳米颗粒，以三聚磷酸钠水溶液为交联剂进行包裹，得到巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球；B、将巯基敏感荧光试剂溶于N，N-二甲基甲酰胺，加入磷酸盐缓冲液，在常压以及 250C _36°C条件下，使巯基敏感荧光试剂与巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球充分反应后，装入透析袋，进行透析，得到产物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于在A步骤中，无水乙醇与乙酸的体积比为 1 1-5。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于在A步骤中，三聚磷酸钠水溶液的浓度为 l-2mg/ml0
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于在B步骤中，巯基敏感荧光试剂与磷酸盐缓冲液的体积比为1 6000-10000。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于在B步骤中，Img巯基敏感荧光试剂溶于N， N-二甲基甲酰胺100-300 μ 1中。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于在B步骤中，磷酸盐缓冲液的ρΗ值为 7. 1-7. 4。
全文摘要
本发明公开了一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法。本发明在乙酸和乙醇的混合溶剂中，以巯基乙酸为羧基供体，壳聚糖表面的羟基为受体，合成了巯基化壳聚糖；再利用三聚磷酸钠为交联剂，包裹人参纳米颗粒。本发明的优点在于加入对巯基敏感的荧光探针，得到了被荧光标记的巯基化壳聚糖人参纳米颗粒。利用荧光显微镜对其荧光活性进行检测。结果显示巯基化壳聚糖人参纳米颗粒形状规则，具有核-壳结构，湿态下平均粒径约为300nm；同时在生理pH下它还具有很强的荧光活性。
文档编号A61K47/36GK102210733SQ20101016283
公开日2011年10月12日 申请日期2010年4月8日 优先权日2010年4月8日
发明者刘勇, 周纲, 张龙, 杨建设 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所
技术领域：
本发明涉及一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法。
背景技术：
近年来，中药现代化逐步加强，尤其是对纳米天然药材的研究与开发已倍受重视。 徐辉碧(纳米技术在中药研究中的应用.中国药科大学学报，2001.)等率先将纳米技术引进中药研发，发现将中药牛黄加工到纳米级的水平，不仅能提高药效和生物利用度，甚至可能产生新的药理效果，具有极强的靶向作用，并据此提出了“纳米中药”的科学概念。此后， 又有人对100多种中药进行了研究，已经获得平均粒径仅有17nm的血竭，23nm的蜂胶等的纳米颗粒。壳聚糖是一种天然聚阳离子碱性多糖，近年来，研究特别侧重于生物医学及药物制剂等领域，证实壳聚糖具有生物黏附性和多种生物活性，它能与活体组织相容，不会引起过敏反应和排斥现象，其被体内的溶菌酶、胃蛋白酶降解后，降解产物能完全地被人体吸收，无毒、无副作用，较适于作为缓控释辅料。壳聚糖包封药物后，可使其释放减慢、疗效延长，毒副作用降低。利用壳聚糖制备缓释、控释制剂已成为近年来新剂型研究的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法。本发明以巯基乙酸作为巯基供体，对壳聚糖进行化学修饰，并以人参纳米颗粒作为模型药物进行包裹，应用巯基敏感的荧光试剂进行荧光标记，制备了荧光标记的巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒。本发明在乙酸和乙醇的混合溶剂中，以巯基乙酸为羧基供体，壳聚糖表面的羟基为受体，合成了巯基化壳聚糖；再利用三聚磷酸钠为交联剂，包裹人参纳米颗粒。—种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法，其特征在于该方法步骤为A、将巯基化壳聚糖溶于由乙酸和无水乙醇组成的混合溶剂中，加入人参纳米颗粒，以三聚磷酸钠水溶液为交联剂进行包裹，得到巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球；B、将巯基敏感荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺，加入磷酸盐缓冲液，在常压以及 250C _36°C条件下，使巯基敏感荧光试剂与巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球充分反应后，装入透析袋，进行透析，得到产物。在透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测，完成巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记。在A步骤中，无水乙醇与乙酸的体积比为1 1-5。在A步骤中，三聚磷酸钠水溶液的浓度为l_2mg/ml。在A步骤中，人参纳米颗粒的制备方法来源于中国专利(液相超声制备纳米天然药材颗粒方法200910117753. X)。
在B步骤中，巯基敏感荧光试剂与磷酸盐缓冲液的体积比为1 6000-10000。在B步骤中，Img巯基敏感荧光试剂溶于N，N-二甲基甲酰胺100-300 μ 1中。在B步骤中，磷酸盐缓冲液的ρΗ值为7. 1-7.4。本发明制备出了能够带有荧光基团的人参纳米颗粒，这些颗粒既保持有纳米级尺度，又具有荧光特征。本发明的优点是能够以巯基乙酸作为巯基供体，对壳聚糖进行化学修饰，并以人参纳米颗粒作为模型药物进行包裹，应用巯基敏感的荧光试剂进行荧光标记，制备了荧光标记的巯基化的壳聚糖包裹人参纳米颗粒。对其进行了相关的性质的表征和检测。通过扫描电镜和荧光电镜分析，结果显示巯基化壳聚糖人参纳米颗粒形状规则， 具有核-壳结构，湿态下平均粒径约为300-350nm ；同时在生理ρΗ下它还具有很强的荧光活性。本发明的用途壳聚糖具有生物黏附性和多种生物活性，它能与活体组织相容，不会引起过敏反应和排斥现象，其被体内的溶菌酶、胃蛋白酶降解后，降解产物能完全地被人体吸收，无毒、无副作用，较适于作为缓控释辅料。壳聚糖包封药物后，可使其释放减慢、疗效延长，毒副作用降低。利用巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒，可使其带有荧光特性，在动物体内显示出纳米人参颗粒的代谢途径。
具体实施例方式实施例1巯基化壳聚糖载药纳米颗粒的制备采用溶剂挥发法称取0. Ig巯基化壳聚糖溶于乙酸与无水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=1 1)中，加热搅拌超声至完全溶解后加入人参纳米颗粒，磁力搅拌，至完全分散，继续磁力搅拌且同时逐滴缓慢加入三聚磷酸钠水溶液(lmg/ml)，得到巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的微球。取微球溶液进行扫描电镜检测。巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记将荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺(Img 100 μ 1)，加入磷酸盐缓冲液(ρΗ = 7. 1)。保温在25°C条件下反应。荧光试剂与巯基化壳聚糖载药纳米颗粒充分反应后，装入透析袋，进行透析。透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测。巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的扫描电镜表征实验扫描电镜结果显示人参纳米中药颗粒能够被壳聚糖较好的包裹，巯基化壳聚糖载人参纳米颗粒微球分散较均勻， 形成较典型的核-壳结构，人参纳米药物部分在内部，充当核结构，巯基化壳聚糖分子在外部充当壳结构，形状较规则，其平均直径在310nm左右。包裹效果较好。荧光电镜检测实验荧光电镜结果显示在讨如！!!波长的荧光激发下，呈现出少量红色荧光图像。，颜色较暗。说明巯基化壳聚糖在体外的荧光标记有效果。实施例2巯基化壳聚糖载药纳米颗粒的制备采用溶剂挥发法称取0. Ig巯基化壳聚糖溶于乙酸与无水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=3 1)中，加热搅拌超声至完全溶解后加入人参纳米颗粒，磁力搅拌，至完全分散，继续磁力搅拌且同时逐滴缓慢加入三聚磷酸钠水溶液(1.5mg/ml)。即得到巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的微球。
取微球溶液进行扫描电镜检测。巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记将荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺(Img 200 μ 1)，加入磷酸盐缓冲液(ρΗ=7.2)。保温在30°C条件下反应。荧光试剂与巯基化壳聚糖载药纳米颗粒充分反应后，装入透析袋，进行透析。透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测。巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的扫描电镜表征实验扫描电镜结果显示人参纳米中药颗粒能够被壳聚糖较好的包裹，巯基化壳聚糖载人参纳米颗粒微球分散均勻，形成典型的核-壳结构，人参纳米药物在内部，充当核结构，巯基化壳聚糖分子在外部充当壳结构，形状规则，近似圆形，表面光滑，其平均直径在300nm左右。包裹效果良好。荧光电镜检测实验荧光电镜结果显示在讨如！!!波长的荧光激发下，呈现出红色荧光图像。荧光聚集在一起，颜色明显。说明巯基化壳聚糖在体外的荧光标记成功，完全能够识别。实施例3巯基化壳聚糖载药纳米颗粒的制备采用溶剂挥发法称取0. Ig巯基化壳聚糖溶于乙酸与无水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=4 1)中，加热搅拌超声至完全溶解后加入人参纳米颗粒，磁力搅拌，至完全分散，继续磁力搅拌且同时逐滴缓慢加入三聚磷酸钠水溶液Qmg/ml)。即得到巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的微球。取微球溶液进行扫描电镜检测。巯基化壳聚糖载药纳米颗粒微球的荧光标记将荧光试剂溶于N，N- 二甲基甲酰胺(Img 300 μ 1)，加入磷酸盐缓冲液(ρΗ= 7.4)。保温在36°C条件下反应。荧光试剂与巯基化壳聚糖载药纳米颗粒充分反应后，装入透析袋，进行透析。透析完成后，从透析袋中取少量的溶液，进行荧光电镜的检测。巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的扫描电镜表征实验扫描电镜结果显示人参纳米中药颗粒基本能被壳聚糖包裹，巯基化壳聚糖载人参纳米颗粒微球聚集，形成典型的核-壳结构，表面粗糙，其平均直径在350nm左右。包裹效果一般。荧光电镜检测实验荧光电镜结果显示在讨如！!!波长的荧光激发下，呈现出暗红色荧光图像。荧光聚集在一起，颜色不明显。说明巯基化壳聚糖在体外的荧光标记效果一般，能够识别。
权利要求
1.一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法，其特征在于该方法步骤为A、将巯基化壳聚糖溶于由乙酸和无水乙醇组成的混合溶剂中，加入人参纳米颗粒，以三聚磷酸钠水溶液为交联剂进行包裹，得到巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球；B、将巯基敏感荧光试剂溶于N，N-二甲基甲酰胺，加入磷酸盐缓冲液，在常压以及 250C _36°C条件下，使巯基敏感荧光试剂与巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒微球充分反应后，装入透析袋，进行透析，得到产物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于在A步骤中，无水乙醇与乙酸的体积比为 1 1-5。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于在A步骤中，三聚磷酸钠水溶液的浓度为 l-2mg/ml0
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于在B步骤中，巯基敏感荧光试剂与磷酸盐缓冲液的体积比为1 6000-10000。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于在B步骤中，Img巯基敏感荧光试剂溶于N， N-二甲基甲酰胺100-300 μ 1中。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于在B步骤中，磷酸盐缓冲液的ρΗ值为 7. 1-7. 4。
全文摘要
本发明公开了一种巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备方法。本发明在乙酸和乙醇的混合溶剂中，以巯基乙酸为羧基供体，壳聚糖表面的羟基为受体，合成了巯基化壳聚糖；再利用三聚磷酸钠为交联剂，包裹人参纳米颗粒。本发明的优点在于加入对巯基敏感的荧光探针，得到了被荧光标记的巯基化壳聚糖人参纳米颗粒。利用荧光显微镜对其荧光活性进行检测。结果显示巯基化壳聚糖人参纳米颗粒形状规则，具有核-壳结构，湿态下平均粒径约为300nm；同时在生理pH下它还具有很强的荧光活性。
文档编号A61K47/36GK102210733SQ20101016283
公开日2011年10月12日 申请日期2010年4月8日 优先权日2010年4月8日
发明者刘勇, 周纲, 张龙, 杨建设 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所
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