多胺组合物的制作方法
专利名称：多胺组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含多胺(polyamines)的局部化妆品或药妆品(cosmeceutical)组合物，其在化妆或药妆处理的方法中的应用，以及多胺在其制造中的应用。
背景技术：
皮肤是高度代谢的组织，其在身体中具有最大的表面积，并起着内部器官的保护层的作用。皮肤提供了物理和生化保护，并具有大量的防御机制。皮肤富含脂类、蛋白质和DNA，所有这些成分都是可降解的。
笼统而言，皮肤由包埋在细胞外基质中的细胞组成，这些细胞外基质由诸如胶原蛋白和弹性蛋白的纤维成分，以及诸如糖胺多糖的非纤维胶成分(与肤色和水合有关)组成。细胞外基质是在一种位于基质中的称为成纤维细胞的特定类型的细胞中合成的。胶原蛋白和弹性蛋白形成了构成真皮的建筑基础的三维网络，其分布在其它物质和细胞中。纤维胶原蛋白是结缔组织中含量最丰富的大分子。其主要的功能是确保组织的机械性质和结构完整性。弹性蛋白的特征是其高度的物理和化学强度，并特别地涉及皮肤的柔软性和可塑性。弹性蛋白可对衰老特别敏感弹性蛋白网络的微纤维支架由原纤维蛋白组成，所述原纤维蛋白是一种具有多域结构的大的糖蛋白。当弹性蛋白伸展时，其直接趋势是以弹性行为回到初始位置。这种弹性由于各种原因随时间降低。皮肤的自然衰老是一个原因，但是存在着加速或改变自然过程的一些因素，诸如日晒(“外源性衰老”)。
最明显的皮肤衰老迹象是弹性的丧失和细胞外基质的丧失。在分子水平，衰老伴随着胶原蛋白和弹性蛋白中的不断增加的分子间交联的形成。这些交联在年青时是有益的，它们提供了最佳的功能。然而，随着时间的流逝，受控的交联过程由不受控制的事件占据，导致丧失收缩性、弹性、肤色和皮肤坚固度。其结果是皮肤变皱和皮肤表面变粗糙。
衰老在年纪轻的时候开始，但是潜在的结构变化在中年之前只能用组织学方法检测到。在大约35至45岁之间，临床可见的变化变得明显可见，并在以后越来越显著。
老年斑随着年龄的增长在神经系统、肌肉和皮肤中积累，它代表了衰老的动物中最显著的亚细胞变化之一。还没有任何具体的损害与它们的存在相联系，也没有任何关于其存在的正面属性的报道。老年斑，也称为脂褐质、蜡样色素、衰竭色素、脂色素等，可由其特征性荧光识别。它们以黄褐色的、富含膜的异质物质存在于细胞内部，并具有1-5微米的特征尺寸。
这种与年龄相关的皮肤色素沉着，通常称为老年斑，是衰老的最令人沮丧的方面之一，因而尤其需要对其进行预防或治疗处理。
对于防止衰老的努力，尤其是防止皮肤衰老的努力，很可能与人类自身一样古老。在几千年来，人们提出了无数的疗法，其中有些甚至有些怪异。
许多人受到皮肤中可察觉的衰老迹象的困扰，或者希望避免衰老迹象的发生，因而对于能战胜，即防止、延缓、减轻、减少或消除皮肤衰老作用的局部皮肤处理产品，具有非常强烈的需求。作为一个简单的实例，含阿尔法羟基酸的乳膏在最近数十年中已经可以获得，该乳膏能刺激皮肤并因此导致丰满效果和降低皮肤的皱纹度。
多胺，即多氮杂烷烃(polyazaalkanes)，长期以来被认为具有抗氧化作用，且已经有人提出用作局部皮肤处理产品的成分。这种多胺的一个实例是精胺(1，5，10，14-四氮杂四癸烷)，一种在哺乳动物精液中自然产生的化合物(参见欧洲专利文献EP-A-209509)。这种多胺在皮肤处理产品中的应用可从例如欧洲专利文献EP-A-884046中获知，EP-A-884046提出了一种含小量精胺的光保护性皮肤处理组合物(例如防晒霜)。
然而仍然存在着能战胜与皮肤衰老相关的其它作用的另外的皮肤处理组合物的需要。现今我们已经知道，精胺和其它多胺可以用作实现相当令人意外的护肤效果。
特别地，局部应用精胺可实现诸如下述效果减少、延缓或防止与年龄相关的皮肤色素沉着的产生(例如产生脂褐质，因而产生“老年斑”)；减少、延缓或防止糖胺多糖降解因而保持或提高皮肤光滑度；改善表皮毛细血流(并因而改善皮肤颜色)；以及减少、延缓或防止皮肤弹性的降低。
特别是1.多胺防止皮肤弹性纤维的损伤，从而保护了皮肤的弹性；2.多胺延缓老年斑的形成；3.多胺保护透明质酸免于降解，并保持表皮的水分结合能力；以及4.多胺刺激表皮外毛细血管的血流，提高皮肤红润度，同时刺激表皮的新陈代谢过程。
发明内容
从而，依据本发明的一个方面，提供了无支链的脂肪族多胺在制备局部皮肤处理组合物中的应用，所述局部皮肤处理组合物用于皮肤的局部处理，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。
依据本发明的另一个方面，提供了一种化妆处理受试者的方法，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度，所述方法包括对所述受试者的皮肤局部应用有效量的无支链的脂肪族多胺。
依据本发明使用的多胺显然不是以自然产生的体液，例如精液的形式使用，而通常将是一种分离的纯物质，配制在具有适当的化妆或制药学载体或赋形剂的无菌的组合物中。
依据本发明处理的受试者可以是任何哺乳动物，但人类被认为是通常的受试者，尤其是成年人，更特别是年龄为35岁或以上的成年人。
在一个尤其优选的实施方案中，本发明方法是一种处理受试者以防止与年龄相关的皮肤色素沉着的方法，所述方法包括对所述受试者，例如具有可见的与年龄相关的皮肤色素沉着的受试者的皮肤局部应用有效量的无支链的脂肪族多胺。
依据本发明的另一个方面，提供了一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括无支链的脂肪族多胺和至少一种生理可耐受的载体或赋形剂，以及用于其局部应用的用法说明，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。这种用法说明通常可在外包装上提供，作为外包装中的插页或在组合物的容器自身上。
依据本发明的另一个方面，提供了一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括至少一种生理可耐受的载体或赋形剂，第一种无支链的脂肪族多胺，以及选自由下述物质组成的组中的另外的活性剂不同于所述第一种无支链的脂肪族多胺的多氮杂烷烃、二甲基亚砜、角质层分离剂、不饱和脂肪酸(例如欧米加-3、欧米加-6和欧米加-9不饱和脂肪酸，尤其是欧米加-3酸，例如EPA、DHA和ALA)以及其衍生物(尤其是酯)、HMG-CoA还原酶抑制剂、胡椒酸、8-十六烯-1，16-二羧酸、天然三萜(烯)类、辅酶Q10(泛醌)、维生素B3、芦荟油、乙酰葡糖胺酯、ACE抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、丁子香基糖苷、野桐提取物(Mallotus japonicus extract)、羟基酸(例如诸如乙醇酸的α-羟基酸)、β-(1，3)-葡聚糖、蛙提取物(frog extract)、糙米提取物、尿素、松籽油、海产胶原蛋白、植物细胞提取物、乌索酸盐和丁子香酚衍生物、神经酰胺、胆固醇、谷胱甘肽、肉毒碱、氧清除剂、植物鞘氨醇、钙通道抑制剂、蔗糖亚麻酸酯、咖啡因、过氧化氢酶、玫瑰果油(Rosa mosqueta oil)、甘氨酸、牛油树脂(Sheabutter)、全氟聚醚、半胱氨酸衍生物，以及乙酰化透明质酸和α-氨基酸，以及这些物质中任一种的盐。
除了多氮杂烷烃之外的尤其优选的活性成分包括辅酶Q10、维生素B3、α-羟基酸、不饱和脂肪酸(例如欧米加-3、欧米加-6和欧米加-9不饱和脂肪酸，尤其是欧米加-3酸，例如EPA、DHA和ALA)以及其衍生物(尤其是酯)、过氧化氢酶，和玫瑰果油。
特别地，本发明提供了一种局部组合物，所述局部组合物含两种或更多种的无支链的脂肪族多胺；或无支链的脂肪族多胺和过氧化氢酶；或无支链的脂肪族多胺和维生素B3；或无支链的脂肪族多胺和玫瑰果油；或无支链的脂肪族多胺和辅酶Q10；或无支链的脂肪族多胺和不饱和脂肪酸(例如欧米加-3、欧米加-6和欧米加-9不饱和脂肪酸，尤其是欧米加-3酸，例如EPA、DHA和ALA)或其衍生物(尤其是酯)；或无支链的脂肪族多胺和α-羟基酸。
依据本发明使用的多胺优选为氨基基团末端的线性结构。适宜地，其为天然产生的无支链的脂肪族化合物。所述多胺优选具有与氮连接的(CH2)n基团，其中n为2至6，尤其是3或4，特别是含2至6个氮，尤其是2、3或4个氮的多胺。这些多胺可以从天然来源中获得，例如哺乳动物的精液或发酵产物(例如从大豆或凤尾鱼)，或可由常规技术制备，例如生产固态多肽，随后进行酰胺化和还原反应。尤其优选使用天然生产的多胺，例如腐胺(H2N(CH2)4NH2)、尸胺(H2N(CH2)5NH2)、亚精胺(H2N(CH2)3NH(CH2)4NH2)，和精胺(H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NH2)，更尤其是腐胺、亚精胺或精胺，特别是精胺。尤其优选使用两种此类多胺的组合(例如亚精胺和精胺)，例如摩尔比为1∶99至99∶1，尤其是10∶90至90∶10，同样尤其优选使用三种或更多种此类多胺的组合，例如相对于含量最丰富的多胺，每一种具有1至100摩尔％，尤其是10至100摩尔％，特另是30至100摩尔％。
可以考虑使用二丁烯三胺、三丁烯四胺、1，6，10，15-四氮杂五癸烷、1，5，9，13-四氮杂三癸烷以及6-氨基丁基-1，6，11-三氮杂十一烷。
依据本发明使用的多胺的平均碳链长度，即杂原子之间的碳链，可以低至1或2；然而，当此平均数低于3.0时，多胺优选为组合物的次要成分，例如不多于5重量％，优选不多于1重量％。
通常，在本发明的多胺中，平均碳链长度优选至少2.5，更优选至少3.0，尤其是至少3.25，例如3.25至6.0。
适宜地，依据本发明使用的多胺的分子量在88至202Da的范围内。
依据本发明使用的多胺可方便地为具有生理可耐受的补偿离子的盐的形式，例如有机酸，尤其优选α-羟基酸或脂肪酸。这种盐可以通过例如在溶液中以大约等摩尔量的多胺与酸的反应制备。这些盐是新的，并与含有它们以及载体或赋形剂的局部组合物一样，构成本发明的另一方面。
在依据本发明的组合物或使用的组合物中，总多胺含量优选为0.0005至5重量％，更优选0.001至1重量％，尤其是0.005至0.5重量％，特别是0.01至0.08重量％，更特别是0.02至0.06重量％，尤其为0.03至0.05重量％，例如0.04重量％(即400ppm)。
本发明的组合物优选不含浓度为相对于多胺高10摩尔％以上，尤其是1摩尔％的另外的不稳形多价金属(例如过渡金属)离子。
依据本发明的组合物或使用的组合物可以是任何适用于局部应用的形式，例如乳膏、胶体、溶液、乳化液、分散体系、悬浮液等，并在需要时可包括载体基质，例如编织或非编织网。组合物可含常规的局部组合物成分，诸如溶剂、油(例如植物油)、香味剂、着色剂、pH调节剂、粘度调节剂、粘合剂、稀释剂、润肤剂、抗氧化剂、皮肤刺激剂、增稠剂、维生素、防腐剂、稳定剂、增湿剂、皮肤渗透增强剂、囊泡膜形成剂等。适用的配方实例包括身体乳(body milks)、身体洗液(body lotions)、手乳膏、防晒露，以及油。
在一种优选的形式中，依据本发明使用的组合物是一种眼线膏或其它眼部化妆品，所述眼线膏或其它眼部化妆品含无机着色剂，例如金属氧化物，例如过渡金属氧化物，诸如铁或铬氧化物。多胺可以与这些物质结合，从而以缓释形式存在。
本发明组合物的成分将通常以皮肤处理组合物的常规浓度存在。活性成分，即具有简单地润湿或润滑之外的皮肤保护性作用的那些物质，存在的浓度将通常是0.001至20重量％，尤其是0.01至10重量％，特别是0.05至5重量％。
在本发明的另一方面中，还提供了一种含水局部皮肤处理乳膏，所述乳膏含无支链的脂肪族多胺(例如精胺)和辅酶Q10。
依据本发明的组合物或使用的组合物优选应用于(a)手部(尤其是用于防止与年龄相关的色素沉着)；(b)胸部；(c)眼底的薄皮肤；(d)上臂(尤其是与躯干相邻的表面)；(e)下颚的下表面；以及(f)低领区(即由开领衬衣暴露的区域)。特定用于这些区域的组合物和方法构成了本发明的其它方面。
依据本发明的组合物或使用的组合物尤其优选是乳膏、乳化液、胶体、囊泡分散体系，或形成囊泡的组合物。对于囊泡，尤其关注的是脂质体，因为其有助于多胺的皮肤渗透。脂质体配方可以常规制成，例如使用商业可获得的前体。同样，尤其关注角质层分离剂和皮肤渗透增强剂，例如DMSO，同样尤其关注包含维生素，诸如维生素A、维生素C、维生素B6和维生素E及其衍生物。
由于多胺可带电荷，例如通过包含季胺官能团或通过质子化胺基氮，组合物可以在电场的作用下透皮地释放多胺，例如通过离子电渗疗法。因而组合物可以方便地在具有电极和电池的药膏贴中以胶体形式存在。当皮肤处理需要局部进行时，例如在处理局部皮肤瑕疵时，这种形式尤其重要。
通常，组合物应预防性地应用到皮肤上，即为了抑制诸如色素沉着或类似的皮肤瑕疵的产生而应用到皮肤上，或者在皮肤瑕疵已经存在时应用到受试者的染病皮肤上。在皮肤色素沉着的情况下，患者将通常为至少50岁，更典型地为至少55岁，尤其是至少60岁，特别是至少65岁。
多胺的通常的给药计量为约0.01至50g/m2，优选0.1至10g/m2，尤其是1至5g/m2。任何其它的活性成分将通常以其通常计量的10％至200％，优选50至110％，更优选80至105％使用。
依据本发明的组合物或使用的组合物可通过标准的化妆或制药组合物生产技术生产，例如简单的混合，任选随后进行灭菌。组合物适宜地以单个剂量单元包装，或以适用于达100次应用，例如2至10次应用的单元包装。尤其优选小袋、喷雾分散器、抽吸分散器，以及擦布(wipes)。
因而本发明有利地提供了药妆组合物，以及用于改善皮肤健康以及防止和处理皱纹、老年斑和其它皮肤紊乱的方法。本发明提供了一种延缓皮肤衰老和保持皮肤弹性、柔软度和肤色的药妆组合物。本发明还公开了一种复原受损皮肤的配方。本发明提供了一种用于局部处理皮肤的化妆配方，以在衰老变化开始变得临床明显之前，在年轻时缓和和延迟衰老变化。这种处理基于生物活性的多胺(尤其是精胺)防止皮肤弹性材料的老化，从而保持年轻面貌的观测结果。然而，这些作用对于保持健康和有效的身体机能(诸如保持血管的弹性)也非常重要，因为多胺还延迟皮肤细胞的衰老和老年斑(脂褐质)的形成，并保护糖胺多糖(诸如透明质酸)免于降解。通过后者作用，皮肤将保持其对水的结合能力并维持其自然的光滑度。药妆组合物增加了表皮毛细血管的血流，改善了皮肤的红润度，同时刺激表皮的新陈代谢过程。这些作用的总和是皮肤外观和功能的总体提高。多胺由角化细胞积极地吸收，因而与大多数其它的化妆成分不同，多胺渗透进皮肤中。从而，本发明实现了两个目标，第一，防止损伤随时间的进展和恶化的预防作用；第二，医治和修正各种异常，直至皮肤的结构和功能获得更年轻的皮肤特征的程度。
因此，本发明组合物可适宜地含具有对皮肤进一步的有益效果的皮肤刺激剂，例如α-羟基酸。此外，本发明方法可包括在应用含皮肤刺激剂的组合物的同时或之前或之后应用多胺。
具体实施例方式
本发明将参照下述非限制性的实施例进行进一步描述实施例1
局部乳膏成分 重量份水61-66丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯 6-8硬脂酸乙基己酯3-4杏桃核仁油(Prunus Armeniaca) 0.5-1.5荷荷芭油(Simmondsia Chinensis)0.4-0.6C12-20酸PEG-8酯 8-12欧拉斯(Olus) 3-4丙二醇2.5-3.5硬脂酸甘油酯 1.5-2.5十六烷基磷酸钾0.8-1.2甘油 0.4-0.6PCA钠盐(吡咯烷酮羧酸钠) 0.1-0.2二甲硅油 1.5-2.5精胺 0.03抗坏血酸棕榈酸酯 0.005-0.015泛醌 0.08-0.12PEG-7甘油椰油酸酯 0.05-0.1变性酒精(Alcohol denat.) 0.05-0.1生育酚乙酸酯 0.05-0.1泛酰醇0.05-0.1维生素A棕榈酸酯 0.05-0.1向日葵(Helianthus Annuus) 0.05-0.1
生育酚0.05-0.1乳酸 0.5-1.5葡萄糖酸钠0.05-0.15苯氧乙醇 0.4-0.6苯甲酸钠 0.2-0.3将上文例举的成分混合并乳化。
实施例2局部乳膏成分 重量份水80-85变性酒精 5-10丙二醇2-4山梨醇1-3聚季铵盐-10 1-3碳酸二辛酯0.5-1.5透明质酸钠0.5-1.0生育酚0.05-0.1生育酚乙酸酯 0.05-0.1精胺 0.02-0.04泛醌 0.008-0.012维生素A棕榈酸酯 0.05-0.1PEG/PPG-14/4二甲硅油 0.3-0.7葡萄糖酸钠0.5-1.5
乳酸薄荷酯 0.05-0.15苯氧乙醇 0.3-0.7乳酸 0.5-1.5丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯0.008-0.012杏桃核仁油 0.008-0.012泛酰醇 0.05-0.1向日葵 0.05-0.1PEG-7甘油椰油酸酯 0.05-0.1将上文例举的成分混合并乳化。
其它乳膏利用这些成分的重量含量中点而类似地制备，并进一步含重量份的下述物质(A)0.03亚精胺；(B)0.07维生素B3；(C)0.07过氧化氢酶；(D)0.07玫瑰果油；(E)0.03亚精胺，0.07维生素B3；0.07过氧化氢酶和0.07玫瑰果油。
本实施例中的六种组合物可不受限制地应用于待处理的皮肤区域，例如手部、上臂、颈部和下颚，以及眼底(under-eye)，每天一次，优选每天两次。
实施例3体内研究精胺的功效的体内评估在含400ppm精胺的化妆配方中进行，首先通过测量其对皮肤的机械性质(弹性)的效果，然后通过进行成像分析，所述成像分析技术用于观察在处理之前和之后其对皮肤表面，尤其是对皱纹的效果。
皮肤的皮肤弹性的分析通过测量其在用SEM474皮肤弹性仪(Cutometer)(Courage & Khazaka)施加吸力后的恢复进行。在此研究中，使用了恒定的抽吸压力350mbar，测量结果记录三次，以得到显示参数R0、R1和R9的弹性曲线。RO是当抽吸压力施加时的曲线高度，RI是该相同曲线的宽度，表示皮肤在受到压力后返回其初始状态的能力。R9是皮肤弹性，一个从RO和R1获得的实验值。
测试在一组年龄在45岁和55岁之间(平均50岁)的六位女性的眼周围区域上进行。将上述的化妆配方每天应用两次，持续期间为45天。
成像分析是用于研究皮肤微貌的关键工具。其基本原理包括测量由入射光在硅印迹(silicona prints)表面上产生的阴影。皮肤表面的几何形状的印模通过在皮肤表面涂覆一薄层硅获得。将橡胶印模从皮肤上提起，并放在水平表面上且使含皮肤印模的侧面朝下。将皮肤复制品放在与个人电脑相连的并受到侧向光照(26°)的电影摄影机下方。在这样的实验条件下，可以记录和分析相应于皱纹阴影的不同的灰度水平。通过利用基于286灰度的具有光密度测量程序的图像处理器，相应的表面的高低程度根据线的平均数和线的平均深度量化。
侧向照明该复制品并用电影摄影机摄像。将其图像传送给处理器，所述处理器能根据阴影产生的颜色差异和强度识别皱纹(与复制品上的负片相关)和测量其深度。利用这些图像，有可能研究某一区域的皮肤表面高低程度，并观察其在特定处理下的发展。在此研究中，检查了处理前后的皱纹深度，并持续比较化妆配方和对照样品的效果。
实施例4细胞修复和弹性蛋白合成为了研究成纤维细胞中精胺刺激的细胞修复和弹性蛋白合成，我们利用了Frei等的皮肤替代物(dermal equivalent)(DE)模型(参见Int.J.Cosmetic Science20159-173(1998))，方法如下在成纤维细胞培养基(FCM)中，传代培养来自人包皮外植体的成纤维细胞。成纤维细胞培养基由添加10％的新生小牛血清、25mg/L的庆大霉素、100000UI/l的青霉素、1mg/L的两性霉素B、50mg/L的抗坏血酸钠和4mM的L-谷氨酰胺的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)(Sigma，美国圣路易斯)组成。将第4至第10代的成纤维细胞(200000)接种到先前用FCM复水的每一皮肤基质上，并放在24孔板中。每孔加入2mL的FCM。然后在37℃、CO2/空气(5％/95％，v/v)气氛中孵育DE 3周，培养基每周更换两次。在此时期结束前，细胞得到增殖、转移并合成其自身的填充皮肤基质的空隙的细胞外基质。
测试精胺在DE模型中刺激成纤维细胞修复的能力。在添加2％的小牛血清和1.25％(v/v)的多肽的DMEM培养基中培养DE 2周(n＝6)。在相同条件下测试无多肽的对照DE(n＝6)。
在用多肽培养1周和2周后，用MTT比色法评估细胞存活率。活细胞将无色的四唑盐MTT转化为蓝色的甲臜(formazan)，所述蓝色的甲臜用二甲基亚砜(DMSO)萃取后可以在570nm下用分光光度计测量。测量显示，光密度与活细胞数成比例。
精胺对细胞外成分(弹性蛋白)的形成的刺激作用的研究在20天内制备的DE上进行。此时，成纤维细胞在皮肤基质上形成汇合状态，并处于静止状态。在第21天时，在DE培养基中添加400ppm的精胺8天，培养基中小牛血清的浓度降至5％(v/v)。无精胺的对照DE在相同条件下进行测试。在实验终止时，处理的和对照的DE的细胞密度用MTT法评估。此测试的进行是为了确认精胺对生长期后的细胞修复没有进一步的影响。
利用Winkelman和Spicer描述的特定的比色法(参见Stain Technol.37303-305(1962))，在第29天(即在多肽已经存在8天后)分析取样的培养基中弹性蛋白的可溶部分。在沉淀培养基(六个对照的和处理的DE的集合)中存在的可溶性弹性蛋白原后，将沉淀物与合成的紫质(porphrine)混合。弹性蛋白-染料复合物被离心分离，溶解，并在513nm下测量光密度(n＝5)(Fastin，Realef，法国)。
权利要求
1.无支链的脂肪族多胺在制备局部皮肤处理组合物中的应用，所述局部皮肤处理组合物用于皮肤的局部处理，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色和提高皮肤光滑度。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多胺选自腐胺、亚精胺和精胺。
3.根据权利要求1或2所述的应用，用于制备在皮肤局部处理中使用的组合物，所述皮肤局部处理用于防止与年龄相关的皮肤色素沉着。
4.一种处理受试者的方法，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色和提高皮肤光滑度，所述方法包括对所述受试者的皮肤局部应用有效量的无支链的脂肪族多胺。
5.一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括无支链的多胺和至少一种生理可耐受的载体或赋形剂，以及用于其局部应用的用法说明，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述组合物含选自腐胺、亚精胺和精胺的多胺。
7.根据权利要求5或6所述的组合物，进一步含选自由下述物质组成的组中的另外的活性剂不同于所述第一种无支链的脂肪族多胺的多氮杂烷烃、二甲基亚砜、角质层分离剂、不饱和脂肪酸以及其衍生物、HMG-CoA还原酶抑制剂、胡椒酸、8-十六烯-1，16-二羧酸、天然三萜类、辅酶Q10(泛醌)、维生素B3、芦荟油、乙酰葡糖胺酯、ACE抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、丁子香基糖苷、野桐提取物、羟基酸、蛙提取物、糙米提取物、尿素、松籽油、海产胶原蛋白、植物细胞提取物、乌索酸盐和丁子香酚衍生物、神经酰胺、胆固醇、谷胱甘肽、肉毒碱、氧清除剂、植物鞘氨醇、钙通道抑制剂、蔗糖亚麻酸酯、咖啡因、过氧化氢酶、玫瑰果油、甘氨酸、牛油树脂、全氟聚醚、半胱氨酸衍生物，以及乙酰化透明质酸和α-氨基酸，以及这些物质中任一种的盐。
8.一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括至少一种生理可耐受的载体或赋形剂、第一种无支链的脂肪族多胺，以及选自由下述物质组成的组中的另外的活性剂辅酶Q10、维生素B3、α-羟基酸、不饱和脂肪酸以及其衍生物、过氧化氢酶，以及玫瑰果油。
9.根据权利要求5至8之任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物含两种或更多种的无支链的脂肪族多胺；或无支链的脂肪族多胺和过氧化氢酶；或无支链的脂肪族多胺和维生素B3；或无支链的脂肪族多胺和玫瑰果油；或无支链的脂肪族多胺和辅酶Q10；或无支链的脂肪族多胺和不饱和脂肪酸或其衍生物；或无支链的脂肪族多胺和α-羟基酸。
10.一种含水局部皮肤处理乳膏，所述乳膏含有无支链的脂肪族多胺和辅酶Q10。
全文摘要
本发明提供了无支链的脂肪族多胺在制备局部皮肤处理组合物中的应用，所述局部皮肤处理组合物用于皮肤的局部处理，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。
文档编号A61K8/30GK101068601SQ200580036759
公开日2007年11月7日 申请日期2005年11月7日 优先权日2004年11月5日
发明者埃里克·洛瓦斯 申请人:拜尔福斯克宁科学院
技术领域：
本发明涉及含多胺(polyamines)的局部化妆品或药妆品(cosmeceutical)组合物，其在化妆或药妆处理的方法中的应用，以及多胺在其制造中的应用。
背景技术：
皮肤是高度代谢的组织，其在身体中具有最大的表面积，并起着内部器官的保护层的作用。皮肤提供了物理和生化保护，并具有大量的防御机制。皮肤富含脂类、蛋白质和DNA，所有这些成分都是可降解的。
笼统而言，皮肤由包埋在细胞外基质中的细胞组成，这些细胞外基质由诸如胶原蛋白和弹性蛋白的纤维成分，以及诸如糖胺多糖的非纤维胶成分(与肤色和水合有关)组成。细胞外基质是在一种位于基质中的称为成纤维细胞的特定类型的细胞中合成的。胶原蛋白和弹性蛋白形成了构成真皮的建筑基础的三维网络，其分布在其它物质和细胞中。纤维胶原蛋白是结缔组织中含量最丰富的大分子。其主要的功能是确保组织的机械性质和结构完整性。弹性蛋白的特征是其高度的物理和化学强度，并特别地涉及皮肤的柔软性和可塑性。弹性蛋白可对衰老特别敏感弹性蛋白网络的微纤维支架由原纤维蛋白组成，所述原纤维蛋白是一种具有多域结构的大的糖蛋白。当弹性蛋白伸展时，其直接趋势是以弹性行为回到初始位置。这种弹性由于各种原因随时间降低。皮肤的自然衰老是一个原因，但是存在着加速或改变自然过程的一些因素，诸如日晒(“外源性衰老”)。
最明显的皮肤衰老迹象是弹性的丧失和细胞外基质的丧失。在分子水平，衰老伴随着胶原蛋白和弹性蛋白中的不断增加的分子间交联的形成。这些交联在年青时是有益的，它们提供了最佳的功能。然而，随着时间的流逝，受控的交联过程由不受控制的事件占据，导致丧失收缩性、弹性、肤色和皮肤坚固度。其结果是皮肤变皱和皮肤表面变粗糙。
衰老在年纪轻的时候开始，但是潜在的结构变化在中年之前只能用组织学方法检测到。在大约35至45岁之间，临床可见的变化变得明显可见，并在以后越来越显著。
老年斑随着年龄的增长在神经系统、肌肉和皮肤中积累，它代表了衰老的动物中最显著的亚细胞变化之一。还没有任何具体的损害与它们的存在相联系，也没有任何关于其存在的正面属性的报道。老年斑，也称为脂褐质、蜡样色素、衰竭色素、脂色素等，可由其特征性荧光识别。它们以黄褐色的、富含膜的异质物质存在于细胞内部，并具有1-5微米的特征尺寸。
这种与年龄相关的皮肤色素沉着，通常称为老年斑，是衰老的最令人沮丧的方面之一，因而尤其需要对其进行预防或治疗处理。
对于防止衰老的努力，尤其是防止皮肤衰老的努力，很可能与人类自身一样古老。在几千年来，人们提出了无数的疗法，其中有些甚至有些怪异。
许多人受到皮肤中可察觉的衰老迹象的困扰，或者希望避免衰老迹象的发生，因而对于能战胜，即防止、延缓、减轻、减少或消除皮肤衰老作用的局部皮肤处理产品，具有非常强烈的需求。作为一个简单的实例，含阿尔法羟基酸的乳膏在最近数十年中已经可以获得，该乳膏能刺激皮肤并因此导致丰满效果和降低皮肤的皱纹度。
多胺，即多氮杂烷烃(polyazaalkanes)，长期以来被认为具有抗氧化作用，且已经有人提出用作局部皮肤处理产品的成分。这种多胺的一个实例是精胺(1，5，10，14-四氮杂四癸烷)，一种在哺乳动物精液中自然产生的化合物(参见欧洲专利文献EP-A-209509)。这种多胺在皮肤处理产品中的应用可从例如欧洲专利文献EP-A-884046中获知，EP-A-884046提出了一种含小量精胺的光保护性皮肤处理组合物(例如防晒霜)。
然而仍然存在着能战胜与皮肤衰老相关的其它作用的另外的皮肤处理组合物的需要。现今我们已经知道，精胺和其它多胺可以用作实现相当令人意外的护肤效果。
特别地，局部应用精胺可实现诸如下述效果减少、延缓或防止与年龄相关的皮肤色素沉着的产生(例如产生脂褐质，因而产生“老年斑”)；减少、延缓或防止糖胺多糖降解因而保持或提高皮肤光滑度；改善表皮毛细血流(并因而改善皮肤颜色)；以及减少、延缓或防止皮肤弹性的降低。
特别是1.多胺防止皮肤弹性纤维的损伤，从而保护了皮肤的弹性；2.多胺延缓老年斑的形成；3.多胺保护透明质酸免于降解，并保持表皮的水分结合能力；以及4.多胺刺激表皮外毛细血管的血流，提高皮肤红润度，同时刺激表皮的新陈代谢过程。
发明内容
从而，依据本发明的一个方面，提供了无支链的脂肪族多胺在制备局部皮肤处理组合物中的应用，所述局部皮肤处理组合物用于皮肤的局部处理，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。
依据本发明的另一个方面，提供了一种化妆处理受试者的方法，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度，所述方法包括对所述受试者的皮肤局部应用有效量的无支链的脂肪族多胺。
依据本发明使用的多胺显然不是以自然产生的体液，例如精液的形式使用，而通常将是一种分离的纯物质，配制在具有适当的化妆或制药学载体或赋形剂的无菌的组合物中。
依据本发明处理的受试者可以是任何哺乳动物，但人类被认为是通常的受试者，尤其是成年人，更特别是年龄为35岁或以上的成年人。
在一个尤其优选的实施方案中，本发明方法是一种处理受试者以防止与年龄相关的皮肤色素沉着的方法，所述方法包括对所述受试者，例如具有可见的与年龄相关的皮肤色素沉着的受试者的皮肤局部应用有效量的无支链的脂肪族多胺。
依据本发明的另一个方面，提供了一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括无支链的脂肪族多胺和至少一种生理可耐受的载体或赋形剂，以及用于其局部应用的用法说明，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。这种用法说明通常可在外包装上提供，作为外包装中的插页或在组合物的容器自身上。
依据本发明的另一个方面，提供了一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括至少一种生理可耐受的载体或赋形剂，第一种无支链的脂肪族多胺，以及选自由下述物质组成的组中的另外的活性剂不同于所述第一种无支链的脂肪族多胺的多氮杂烷烃、二甲基亚砜、角质层分离剂、不饱和脂肪酸(例如欧米加-3、欧米加-6和欧米加-9不饱和脂肪酸，尤其是欧米加-3酸，例如EPA、DHA和ALA)以及其衍生物(尤其是酯)、HMG-CoA还原酶抑制剂、胡椒酸、8-十六烯-1，16-二羧酸、天然三萜(烯)类、辅酶Q10(泛醌)、维生素B3、芦荟油、乙酰葡糖胺酯、ACE抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、丁子香基糖苷、野桐提取物(Mallotus japonicus extract)、羟基酸(例如诸如乙醇酸的α-羟基酸)、β-(1，3)-葡聚糖、蛙提取物(frog extract)、糙米提取物、尿素、松籽油、海产胶原蛋白、植物细胞提取物、乌索酸盐和丁子香酚衍生物、神经酰胺、胆固醇、谷胱甘肽、肉毒碱、氧清除剂、植物鞘氨醇、钙通道抑制剂、蔗糖亚麻酸酯、咖啡因、过氧化氢酶、玫瑰果油(Rosa mosqueta oil)、甘氨酸、牛油树脂(Sheabutter)、全氟聚醚、半胱氨酸衍生物，以及乙酰化透明质酸和α-氨基酸，以及这些物质中任一种的盐。
除了多氮杂烷烃之外的尤其优选的活性成分包括辅酶Q10、维生素B3、α-羟基酸、不饱和脂肪酸(例如欧米加-3、欧米加-6和欧米加-9不饱和脂肪酸，尤其是欧米加-3酸，例如EPA、DHA和ALA)以及其衍生物(尤其是酯)、过氧化氢酶，和玫瑰果油。
特别地，本发明提供了一种局部组合物，所述局部组合物含两种或更多种的无支链的脂肪族多胺；或无支链的脂肪族多胺和过氧化氢酶；或无支链的脂肪族多胺和维生素B3；或无支链的脂肪族多胺和玫瑰果油；或无支链的脂肪族多胺和辅酶Q10；或无支链的脂肪族多胺和不饱和脂肪酸(例如欧米加-3、欧米加-6和欧米加-9不饱和脂肪酸，尤其是欧米加-3酸，例如EPA、DHA和ALA)或其衍生物(尤其是酯)；或无支链的脂肪族多胺和α-羟基酸。
依据本发明使用的多胺优选为氨基基团末端的线性结构。适宜地，其为天然产生的无支链的脂肪族化合物。所述多胺优选具有与氮连接的(CH2)n基团，其中n为2至6，尤其是3或4，特别是含2至6个氮，尤其是2、3或4个氮的多胺。这些多胺可以从天然来源中获得，例如哺乳动物的精液或发酵产物(例如从大豆或凤尾鱼)，或可由常规技术制备，例如生产固态多肽，随后进行酰胺化和还原反应。尤其优选使用天然生产的多胺，例如腐胺(H2N(CH2)4NH2)、尸胺(H2N(CH2)5NH2)、亚精胺(H2N(CH2)3NH(CH2)4NH2)，和精胺(H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NH2)，更尤其是腐胺、亚精胺或精胺，特别是精胺。尤其优选使用两种此类多胺的组合(例如亚精胺和精胺)，例如摩尔比为1∶99至99∶1，尤其是10∶90至90∶10，同样尤其优选使用三种或更多种此类多胺的组合，例如相对于含量最丰富的多胺，每一种具有1至100摩尔％，尤其是10至100摩尔％，特另是30至100摩尔％。
可以考虑使用二丁烯三胺、三丁烯四胺、1，6，10，15-四氮杂五癸烷、1，5，9，13-四氮杂三癸烷以及6-氨基丁基-1，6，11-三氮杂十一烷。
依据本发明使用的多胺的平均碳链长度，即杂原子之间的碳链，可以低至1或2；然而，当此平均数低于3.0时，多胺优选为组合物的次要成分，例如不多于5重量％，优选不多于1重量％。
通常，在本发明的多胺中，平均碳链长度优选至少2.5，更优选至少3.0，尤其是至少3.25，例如3.25至6.0。
适宜地，依据本发明使用的多胺的分子量在88至202Da的范围内。
依据本发明使用的多胺可方便地为具有生理可耐受的补偿离子的盐的形式，例如有机酸，尤其优选α-羟基酸或脂肪酸。这种盐可以通过例如在溶液中以大约等摩尔量的多胺与酸的反应制备。这些盐是新的，并与含有它们以及载体或赋形剂的局部组合物一样，构成本发明的另一方面。
在依据本发明的组合物或使用的组合物中，总多胺含量优选为0.0005至5重量％，更优选0.001至1重量％，尤其是0.005至0.5重量％，特别是0.01至0.08重量％，更特别是0.02至0.06重量％，尤其为0.03至0.05重量％，例如0.04重量％(即400ppm)。
本发明的组合物优选不含浓度为相对于多胺高10摩尔％以上，尤其是1摩尔％的另外的不稳形多价金属(例如过渡金属)离子。
依据本发明的组合物或使用的组合物可以是任何适用于局部应用的形式，例如乳膏、胶体、溶液、乳化液、分散体系、悬浮液等，并在需要时可包括载体基质，例如编织或非编织网。组合物可含常规的局部组合物成分，诸如溶剂、油(例如植物油)、香味剂、着色剂、pH调节剂、粘度调节剂、粘合剂、稀释剂、润肤剂、抗氧化剂、皮肤刺激剂、增稠剂、维生素、防腐剂、稳定剂、增湿剂、皮肤渗透增强剂、囊泡膜形成剂等。适用的配方实例包括身体乳(body milks)、身体洗液(body lotions)、手乳膏、防晒露，以及油。
在一种优选的形式中，依据本发明使用的组合物是一种眼线膏或其它眼部化妆品，所述眼线膏或其它眼部化妆品含无机着色剂，例如金属氧化物，例如过渡金属氧化物，诸如铁或铬氧化物。多胺可以与这些物质结合，从而以缓释形式存在。
本发明组合物的成分将通常以皮肤处理组合物的常规浓度存在。活性成分，即具有简单地润湿或润滑之外的皮肤保护性作用的那些物质，存在的浓度将通常是0.001至20重量％，尤其是0.01至10重量％，特别是0.05至5重量％。
在本发明的另一方面中，还提供了一种含水局部皮肤处理乳膏，所述乳膏含无支链的脂肪族多胺(例如精胺)和辅酶Q10。
依据本发明的组合物或使用的组合物优选应用于(a)手部(尤其是用于防止与年龄相关的色素沉着)；(b)胸部；(c)眼底的薄皮肤；(d)上臂(尤其是与躯干相邻的表面)；(e)下颚的下表面；以及(f)低领区(即由开领衬衣暴露的区域)。特定用于这些区域的组合物和方法构成了本发明的其它方面。
依据本发明的组合物或使用的组合物尤其优选是乳膏、乳化液、胶体、囊泡分散体系，或形成囊泡的组合物。对于囊泡，尤其关注的是脂质体，因为其有助于多胺的皮肤渗透。脂质体配方可以常规制成，例如使用商业可获得的前体。同样，尤其关注角质层分离剂和皮肤渗透增强剂，例如DMSO，同样尤其关注包含维生素，诸如维生素A、维生素C、维生素B6和维生素E及其衍生物。
由于多胺可带电荷，例如通过包含季胺官能团或通过质子化胺基氮，组合物可以在电场的作用下透皮地释放多胺，例如通过离子电渗疗法。因而组合物可以方便地在具有电极和电池的药膏贴中以胶体形式存在。当皮肤处理需要局部进行时，例如在处理局部皮肤瑕疵时，这种形式尤其重要。
通常，组合物应预防性地应用到皮肤上，即为了抑制诸如色素沉着或类似的皮肤瑕疵的产生而应用到皮肤上，或者在皮肤瑕疵已经存在时应用到受试者的染病皮肤上。在皮肤色素沉着的情况下，患者将通常为至少50岁，更典型地为至少55岁，尤其是至少60岁，特别是至少65岁。
多胺的通常的给药计量为约0.01至50g/m2，优选0.1至10g/m2，尤其是1至5g/m2。任何其它的活性成分将通常以其通常计量的10％至200％，优选50至110％，更优选80至105％使用。
依据本发明的组合物或使用的组合物可通过标准的化妆或制药组合物生产技术生产，例如简单的混合，任选随后进行灭菌。组合物适宜地以单个剂量单元包装，或以适用于达100次应用，例如2至10次应用的单元包装。尤其优选小袋、喷雾分散器、抽吸分散器，以及擦布(wipes)。
因而本发明有利地提供了药妆组合物，以及用于改善皮肤健康以及防止和处理皱纹、老年斑和其它皮肤紊乱的方法。本发明提供了一种延缓皮肤衰老和保持皮肤弹性、柔软度和肤色的药妆组合物。本发明还公开了一种复原受损皮肤的配方。本发明提供了一种用于局部处理皮肤的化妆配方，以在衰老变化开始变得临床明显之前，在年轻时缓和和延迟衰老变化。这种处理基于生物活性的多胺(尤其是精胺)防止皮肤弹性材料的老化，从而保持年轻面貌的观测结果。然而，这些作用对于保持健康和有效的身体机能(诸如保持血管的弹性)也非常重要，因为多胺还延迟皮肤细胞的衰老和老年斑(脂褐质)的形成，并保护糖胺多糖(诸如透明质酸)免于降解。通过后者作用，皮肤将保持其对水的结合能力并维持其自然的光滑度。药妆组合物增加了表皮毛细血管的血流，改善了皮肤的红润度，同时刺激表皮的新陈代谢过程。这些作用的总和是皮肤外观和功能的总体提高。多胺由角化细胞积极地吸收，因而与大多数其它的化妆成分不同，多胺渗透进皮肤中。从而，本发明实现了两个目标，第一，防止损伤随时间的进展和恶化的预防作用；第二，医治和修正各种异常，直至皮肤的结构和功能获得更年轻的皮肤特征的程度。
因此，本发明组合物可适宜地含具有对皮肤进一步的有益效果的皮肤刺激剂，例如α-羟基酸。此外，本发明方法可包括在应用含皮肤刺激剂的组合物的同时或之前或之后应用多胺。
具体实施例方式
本发明将参照下述非限制性的实施例进行进一步描述实施例1
局部乳膏成分 重量份水61-66丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯 6-8硬脂酸乙基己酯3-4杏桃核仁油(Prunus Armeniaca) 0.5-1.5荷荷芭油(Simmondsia Chinensis)0.4-0.6C12-20酸PEG-8酯 8-12欧拉斯(Olus) 3-4丙二醇2.5-3.5硬脂酸甘油酯 1.5-2.5十六烷基磷酸钾0.8-1.2甘油 0.4-0.6PCA钠盐(吡咯烷酮羧酸钠) 0.1-0.2二甲硅油 1.5-2.5精胺 0.03抗坏血酸棕榈酸酯 0.005-0.015泛醌 0.08-0.12PEG-7甘油椰油酸酯 0.05-0.1变性酒精(Alcohol denat.) 0.05-0.1生育酚乙酸酯 0.05-0.1泛酰醇0.05-0.1维生素A棕榈酸酯 0.05-0.1向日葵(Helianthus Annuus) 0.05-0.1
生育酚0.05-0.1乳酸 0.5-1.5葡萄糖酸钠0.05-0.15苯氧乙醇 0.4-0.6苯甲酸钠 0.2-0.3将上文例举的成分混合并乳化。
实施例2局部乳膏成分 重量份水80-85变性酒精 5-10丙二醇2-4山梨醇1-3聚季铵盐-10 1-3碳酸二辛酯0.5-1.5透明质酸钠0.5-1.0生育酚0.05-0.1生育酚乙酸酯 0.05-0.1精胺 0.02-0.04泛醌 0.008-0.012维生素A棕榈酸酯 0.05-0.1PEG/PPG-14/4二甲硅油 0.3-0.7葡萄糖酸钠0.5-1.5
乳酸薄荷酯 0.05-0.15苯氧乙醇 0.3-0.7乳酸 0.5-1.5丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯0.008-0.012杏桃核仁油 0.008-0.012泛酰醇 0.05-0.1向日葵 0.05-0.1PEG-7甘油椰油酸酯 0.05-0.1将上文例举的成分混合并乳化。
其它乳膏利用这些成分的重量含量中点而类似地制备，并进一步含重量份的下述物质(A)0.03亚精胺；(B)0.07维生素B3；(C)0.07过氧化氢酶；(D)0.07玫瑰果油；(E)0.03亚精胺，0.07维生素B3；0.07过氧化氢酶和0.07玫瑰果油。
本实施例中的六种组合物可不受限制地应用于待处理的皮肤区域，例如手部、上臂、颈部和下颚，以及眼底(under-eye)，每天一次，优选每天两次。
实施例3体内研究精胺的功效的体内评估在含400ppm精胺的化妆配方中进行，首先通过测量其对皮肤的机械性质(弹性)的效果，然后通过进行成像分析，所述成像分析技术用于观察在处理之前和之后其对皮肤表面，尤其是对皱纹的效果。
皮肤的皮肤弹性的分析通过测量其在用SEM474皮肤弹性仪(Cutometer)(Courage & Khazaka)施加吸力后的恢复进行。在此研究中，使用了恒定的抽吸压力350mbar，测量结果记录三次，以得到显示参数R0、R1和R9的弹性曲线。RO是当抽吸压力施加时的曲线高度，RI是该相同曲线的宽度，表示皮肤在受到压力后返回其初始状态的能力。R9是皮肤弹性，一个从RO和R1获得的实验值。
测试在一组年龄在45岁和55岁之间(平均50岁)的六位女性的眼周围区域上进行。将上述的化妆配方每天应用两次，持续期间为45天。
成像分析是用于研究皮肤微貌的关键工具。其基本原理包括测量由入射光在硅印迹(silicona prints)表面上产生的阴影。皮肤表面的几何形状的印模通过在皮肤表面涂覆一薄层硅获得。将橡胶印模从皮肤上提起，并放在水平表面上且使含皮肤印模的侧面朝下。将皮肤复制品放在与个人电脑相连的并受到侧向光照(26°)的电影摄影机下方。在这样的实验条件下，可以记录和分析相应于皱纹阴影的不同的灰度水平。通过利用基于286灰度的具有光密度测量程序的图像处理器，相应的表面的高低程度根据线的平均数和线的平均深度量化。
侧向照明该复制品并用电影摄影机摄像。将其图像传送给处理器，所述处理器能根据阴影产生的颜色差异和强度识别皱纹(与复制品上的负片相关)和测量其深度。利用这些图像，有可能研究某一区域的皮肤表面高低程度，并观察其在特定处理下的发展。在此研究中，检查了处理前后的皱纹深度，并持续比较化妆配方和对照样品的效果。
实施例4细胞修复和弹性蛋白合成为了研究成纤维细胞中精胺刺激的细胞修复和弹性蛋白合成，我们利用了Frei等的皮肤替代物(dermal equivalent)(DE)模型(参见Int.J.Cosmetic Science20159-173(1998))，方法如下在成纤维细胞培养基(FCM)中，传代培养来自人包皮外植体的成纤维细胞。成纤维细胞培养基由添加10％的新生小牛血清、25mg/L的庆大霉素、100000UI/l的青霉素、1mg/L的两性霉素B、50mg/L的抗坏血酸钠和4mM的L-谷氨酰胺的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)(Sigma，美国圣路易斯)组成。将第4至第10代的成纤维细胞(200000)接种到先前用FCM复水的每一皮肤基质上，并放在24孔板中。每孔加入2mL的FCM。然后在37℃、CO2/空气(5％/95％，v/v)气氛中孵育DE 3周，培养基每周更换两次。在此时期结束前，细胞得到增殖、转移并合成其自身的填充皮肤基质的空隙的细胞外基质。
测试精胺在DE模型中刺激成纤维细胞修复的能力。在添加2％的小牛血清和1.25％(v/v)的多肽的DMEM培养基中培养DE 2周(n＝6)。在相同条件下测试无多肽的对照DE(n＝6)。
在用多肽培养1周和2周后，用MTT比色法评估细胞存活率。活细胞将无色的四唑盐MTT转化为蓝色的甲臜(formazan)，所述蓝色的甲臜用二甲基亚砜(DMSO)萃取后可以在570nm下用分光光度计测量。测量显示，光密度与活细胞数成比例。
精胺对细胞外成分(弹性蛋白)的形成的刺激作用的研究在20天内制备的DE上进行。此时，成纤维细胞在皮肤基质上形成汇合状态，并处于静止状态。在第21天时，在DE培养基中添加400ppm的精胺8天，培养基中小牛血清的浓度降至5％(v/v)。无精胺的对照DE在相同条件下进行测试。在实验终止时，处理的和对照的DE的细胞密度用MTT法评估。此测试的进行是为了确认精胺对生长期后的细胞修复没有进一步的影响。
利用Winkelman和Spicer描述的特定的比色法(参见Stain Technol.37303-305(1962))，在第29天(即在多肽已经存在8天后)分析取样的培养基中弹性蛋白的可溶部分。在沉淀培养基(六个对照的和处理的DE的集合)中存在的可溶性弹性蛋白原后，将沉淀物与合成的紫质(porphrine)混合。弹性蛋白-染料复合物被离心分离，溶解，并在513nm下测量光密度(n＝5)(Fastin，Realef，法国)。
权利要求
1.无支链的脂肪族多胺在制备局部皮肤处理组合物中的应用，所述局部皮肤处理组合物用于皮肤的局部处理，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色和提高皮肤光滑度。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多胺选自腐胺、亚精胺和精胺。
3.根据权利要求1或2所述的应用，用于制备在皮肤局部处理中使用的组合物，所述皮肤局部处理用于防止与年龄相关的皮肤色素沉着。
4.一种处理受试者的方法，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色和提高皮肤光滑度，所述方法包括对所述受试者的皮肤局部应用有效量的无支链的脂肪族多胺。
5.一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括无支链的多胺和至少一种生理可耐受的载体或赋形剂，以及用于其局部应用的用法说明，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述组合物含选自腐胺、亚精胺和精胺的多胺。
7.根据权利要求5或6所述的组合物，进一步含选自由下述物质组成的组中的另外的活性剂不同于所述第一种无支链的脂肪族多胺的多氮杂烷烃、二甲基亚砜、角质层分离剂、不饱和脂肪酸以及其衍生物、HMG-CoA还原酶抑制剂、胡椒酸、8-十六烯-1，16-二羧酸、天然三萜类、辅酶Q10(泛醌)、维生素B3、芦荟油、乙酰葡糖胺酯、ACE抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、丁子香基糖苷、野桐提取物、羟基酸、蛙提取物、糙米提取物、尿素、松籽油、海产胶原蛋白、植物细胞提取物、乌索酸盐和丁子香酚衍生物、神经酰胺、胆固醇、谷胱甘肽、肉毒碱、氧清除剂、植物鞘氨醇、钙通道抑制剂、蔗糖亚麻酸酯、咖啡因、过氧化氢酶、玫瑰果油、甘氨酸、牛油树脂、全氟聚醚、半胱氨酸衍生物，以及乙酰化透明质酸和α-氨基酸，以及这些物质中任一种的盐。
8.一种局部皮肤处理组合物，所述局部皮肤处理组合物包括至少一种生理可耐受的载体或赋形剂、第一种无支链的脂肪族多胺，以及选自由下述物质组成的组中的另外的活性剂辅酶Q10、维生素B3、α-羟基酸、不饱和脂肪酸以及其衍生物、过氧化氢酶，以及玫瑰果油。
9.根据权利要求5至8之任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物含两种或更多种的无支链的脂肪族多胺；或无支链的脂肪族多胺和过氧化氢酶；或无支链的脂肪族多胺和维生素B3；或无支链的脂肪族多胺和玫瑰果油；或无支链的脂肪族多胺和辅酶Q10；或无支链的脂肪族多胺和不饱和脂肪酸或其衍生物；或无支链的脂肪族多胺和α-羟基酸。
10.一种含水局部皮肤处理乳膏，所述乳膏含有无支链的脂肪族多胺和辅酶Q10。
全文摘要
本发明提供了无支链的脂肪族多胺在制备局部皮肤处理组合物中的应用，所述局部皮肤处理组合物用于皮肤的局部处理，以实现下述效果中的至少一个防止与年龄相关的皮肤色素沉着、增加皮肤弹性、提高皮肤颜色，以及提高皮肤光滑度。
文档编号A61K8/30GK101068601SQ200580036759
公开日2007年11月7日 申请日期2005年11月7日 优先权日2004年11月5日
发明者埃里克·洛瓦斯 申请人:拜尔福斯克宁科学院
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