乙醇包亲水油－亲水油包油-油包固体微球制备的方法
专利名称：乙醇包亲水油－亲水油包油-油包固体微球制备的方法
技术领域：
本发明涉及的是一种制药技术领域的制备方法，尤其是一种乙醇包亲水油-亲水
油包油油包固体(S/0/h0/E)微球制备的方法。 制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中有一部分药
物需要长期给药才能治愈；还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的，原料药必须
要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释剂型； 对于一些肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病照，例如靶向于肿瘤血管的栓塞微球制剂等；
基因重组技术用于治疗蛋白的表达和生产的20多年以来，到目前为止，已有30多个蛋白药 物产品投入临床使用，近200个在审批和研发过程中，涌现出一批诸如安进(Amgen)、基因 技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的快速发展，其 剂型技术进展缓慢。 一方面，蛋白大分子药物口服不吸收、体内半衰期短，需要注射给药；另 一方面，许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白药物治疗周期长，长期而频繁地注射成为必须，也 影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白药物的剂型的研发，由于在制备微粒过程导致活性 的损失诸如W/0/W法、包封率不高的S/0/W法和S/0/0法制备的微球易突释等缺点。发展 制备具有活性保护的蛋白微球又可以提高包封率和突释的方法势在必行。到目前还未见利 用乙醇包亲水油-亲水油包油油包固体(S/0/h0/E)方法制备微球的报道。
经对现有技术文献的检索发现，[Lee E. S. ， Kwon M. J. ， Lee H. ， and Kim
J. J. ， Stabilization of protein encapsulated in poly (lactide_co_glycolide)
microspheres by novel viscous S/W/0/W method, International Journal ofPharmaceutics 331 (2007)27—37]， (Lee E. S. ， Kwon M.J. ， Lee H. ， and Kim J.J.，矛艮
道了利用新粘度S/W/0/W方法把蛋白稳定的包封在PLGA微球里，国际药学杂志，2007 ， 331:27-37)。 Lee E. S.等人在该文献报道了利用S/W/0/W方法制备了微球。该文献利 用蛋白环糊精冻干然后磨碎，把磨碎的蛋白环糊精加到高粘度的多糖溶液及PLGA的二氯 甲烷溶液乳化，最后到水相中硬化微球且只是针对蛋白类药物，没有见报道其他药物。但 是蛋白质环糊精的颗粒与多糖水溶液接触难免蛋白质不溶解，溶解后的的蛋白水溶液很 容易与PLGA的二氯甲烷接触，存在油水界面而导致聚集。同样致使包封率也不高，存在 不完全释放。[Morita T. ， Sakamura Y. ， Horikiri Y. ， Suzuki T. ， Yoshino H. ， Protein
encapsulation intobiodegradable microspheres by a novel S/0/W emulsion method using poly (ethyleneglycol)as a protein micronization adjuvant, Journal of
Controlled Release 69 (2000) 435-444] ， (Morita T.等人在该文献报道了利用新S/0/W乳 化法制备载蛋白微球。只是改变了表面活性剂以前报道较多的是用PVA，在这篇文献改用 PEG。但是仍然不能克服包封率低，存在突释和不完全释放的缺点。
背景技术：
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种乙醇包亲水油-亲水油包 油-油包固体微球制备的方法。使其制备的微粒表面光滑圆整，均匀度好，颗粒规整无粘 连；包封率高，突释小，载药量高。 本发明是通过以下技术方案实现的，本发明将药物颗粒分散在具有缓释或控释材 料的有机溶液中，并搅拌、漩涡或超声等使之分散均匀形成混悬液；然后将混悬液加到外油 相，再搅拌或漩涡形成微球，最后把它转移到大水相中固化1-4小时；然后离心收集微球，
冻干保存。 本发明包括以下步骤 ①将药物颗粒加入到缓释或控释材料的有机溶液即油相(0)中搅拌或漩涡等使 之均匀分散形成混悬液； 所述的药物颗粒、缓释或控释材料，它们的重量百分比为0_50%、缓释或控释材料 为50-100%。 ②将混悬液加入另一亲水有机溶液中即亲水油相(h0)，该油相不溶缓释或控释材 料的有机溶剂，搅拌0. 5-5min形成1-500 y m的球。 ③将完成步骤②的含有微球混悬液转移到乙醇中(E)固化1-4小时。
④将完成步骤③的样品冻干得干燥的微球。 所述的药物颗粒，指的是水溶性的药物颗粒，或药物载入到辅料中制备的颗粒，或 油溶性的通过制剂的方法制备成不溶于有机溶剂的颗粒；
所述的药物包括小分子药物和大分子药物； 所述的小分子药物指的是化学药物，大分子药物主要是指生物大分子药物，尤其 指蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物。 所述的蛋白大分子药物为促红细胞生成素(EPO)、重组人粒细胞集落剌激因 子(G-CSFh粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(INF)、生长激素 (GH)、胰岛素(Insulin)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因 子(TGF-P)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子 (PDGF)、内皮生长因子(ECGF)、神经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋 白(BMP)、组织多肽抗原(TPA)、抗体(antibody)、凝血因子VIII (VIII)、或凝血因子IX遗 传因子； 所述的核酸为反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)或基因(DNA);
所述的辅料指的主要是可以注射用级别，尤其是小糖类(蔗糖、海藻糖、葡萄糖、 麦芽糖、或乳糖)、及多羟基类化合物(甘露醇、山梨醇、甘油、l，2-丙二醇、赤鲜糖醇、聚乙 二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、或聚吡咯烷酮；)、多糖类化合物(葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、 淀粉、纤维素、PEI、聚精氨或环糊精物质)、氨基酸化合物(甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸 或组氨酸；)、或无机盐类物质(锌盐、钙盐、铜盐、镁盐、或钼盐)的一种或任意组合；
所述的药物颗粒，其药物颗粒的粒径大小在0. 2-10 ii mm，以粒径为1_5 y mm为佳。
所述的药物颗粒，占微球总重量百分比0-50% ; 所述的缓释或控释的材料为聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)、PLA 和PLGA的任意组合、硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、 聚磷酸酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG)、聚乙二醇-聚羟基乙酸 (PLGA-PEG)、聚羟基乙酸-聚乙二醇-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)、聚乳酸-聚乙二醇-聚 乳酸(PLA-PEG-PLA)、聚乙交酯、聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)、聚己内酯聚-乙二醇-聚 己内酯(PCL-PEG-PCL)、或聚己内酯(PCL); 所述的缓释或控释的材料，占微球总重量百分比为50-100% ;
所述的油相(0)为缓释或控释的材料的有机溶液； 所述的缓释或控释的材料的有机溶液为聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚羟基乙酸 (PLGA)、聚羟基乙酸(PGA)、聚乳酸(PLA)和聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)的任意组合、透 明质酸、明胶、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、聚磷酸酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、聚乳 酸_聚乙二醇(PLA-PEG)、聚乳酸-聚羟基乙酸_聚乙二醇(PLGA-PEG)、聚乳酸-聚羟基 乙酸-聚乙二醇-聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸 (PLA-PEG-PLA)、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇(PEG-PLA-PEG)、聚乙二醇_聚乳酸_聚羟 基乙酸-聚乙二醇(PEG-PLGA-PEG)、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚乙二 醇-聚己内酯(PEG-PCL)、聚己内酯聚-聚乙二醇-聚己内酯(PCL-PEG-PCL)、聚己内酯、 硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸 酯、或卡波母的二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液，以二氯甲烷、乙酸 乙酯、乙腈或它们的任意组合的有机溶液为佳； 所述的缓释或控释的材料的有机溶液重量百分比浓度为2-30% ; 所述的亲水油相(h0)为表面活性剂、甘油、乙醇、丙二醇、乙二醇溶液、液体聚乙
二醇或它们的组合物； 所述的它们的组合物为甘油与乙醇加表面活性剂的水溶液、乙醇加表面活性剂 的水溶液、甘油与丙二醇加表面活性剂的水溶液、丙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与乙 二醇加表面活性剂的水溶液、乙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与液体聚乙二醇加表面 活性剂的水溶液、或液体聚乙二醇加表面活性剂； 所述的表面活性剂的水溶为聚乙烯醇(PVA)和氯化钠等盐的混和水溶液，它们 的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚乙二醇(PEG)和氯化钠等盐的混和水溶液， 它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%;聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和氯化钠等盐的混 和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%;泊洛沙姆(poloxmer)和氯化钠 等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚三梨醇和氯化钠等 盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%;或乙基纤维素(EC)和氯
化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ; 所述的合适比例为甘油的重量百分比0-50%，表面活性剂水溶液的重量百分比 0-30%，乙醇、丙二醇、乙二醇、或液体聚乙二醇的重量百分比50-100% ;以的重量百分比 20-30 %的甘油，70-80 %的乙醇、丙二醇、乙二醇、或液体聚乙二醇50-100 %为佳，表面活性 剂水溶液的重量百分比5-15%为佳； 所述乙醇相(E)为能溶解油相和亲水油相地乙醇、丙二醇或它们的任意混合溶 液； 所述微球的粒径为1-500 ii m，以10-100 ii m为佳；
本发明选择了合适的油相(0)、亲水油相(hO)和乙醇相(E)及合适控释或缓释的
材料，使水溶性的药物颗粒或油溶性的药物通过制剂的方法制备成有机溶剂不溶的颗粒， 避免用常规的W/0、W/0/W、S/0/W的包封率不高，和S/0/0的突释严重，及造成的环境污染的 缺点；采用该方法制备微球，其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制，不污染环境；可 以避免对药物的治疗的作用影响，尤其是那些物理化学性质不稳定的，对油水界面敏感的 药物，如生物大分子药物如蛋白质大分子药物、DNA、RNA或siRNA药物。微粒的表面光滑圆 整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1 P m到500 m，其冻干粉剂为白色细 腻、疏松，不会塌陷、不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释微球的制备及疫苗的 佐剂制备。
图1制备微球的扫描电镜图
具体实施例方式以下对本发明的实施例作详细说明以下实施例在以本发明技术方案为前提下进
行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
以下实施例的实施条件 —、空白微球制备 1.制备油相(0)和亲水油相(hO) 油相(0)的制备把控释或缓释材料溶于有机溶剂制备成重量百分比浓度为 1-50%，形成油相(0)。 亲水油相(hO)的制备配方1 :用表面活性剂和氯化钠等盐混和水溶液，它们重量 百分比浓度分别为1_10%和0-10%，占亲水油相的重量百分比为0-40% ;乙醇、乙二醇、丙 二醇或常温液态的聚乙二醇为60-100% ;或配方2 :用表面活性剂和氯化钠等盐混和水溶
液，它们重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%，占亲水油相的重量百分比为0-40% ;用 重量百分比为0-50%的甘油与50-100%的乙醇、乙二醇、丙二醇或常温液态的聚乙二醇溶 液占亲水油相的百分比为60-100% ; 乙醇相(E)的制备100-1000mL的乙醇、乙二醇、丙二醇或它们的任意混合物；
2.空白微球制备 油相(0)滴加入亲水油相(h0)并搅拌、超声或漩涡0. 5-5分钟形成0/h0，然后转 入乙醇相为100-1000mL并搅拌l-4小时，离心收集微球并冻干或挥发除去有机溶剂得到干 燥的微球。 二、制备载药物的微球 1.制备药物颗粒，对与小分子药物可以是常规的碾磨法、沉淀法、粉碎法或造粒
法；对于生物大分子药物可以是水相-水相乳液法、喷雾干燥法、相分离法、超临界法或金
属离子与生物大分子形成的复合物的方法； 2.制备油相(0)和亲水油相(h0) 均按照空白油相(0)和亲水油相(h0)制备方法。 3.把药物颗粒与油相(0)混匀形成混悬液；
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4.把步骤3的混悬液滴加入亲水油相(h0)，并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟，形成 复乳； 5.把步骤4的复乳，滴加到100-lOOOmL乙醇相(E)，并搅拌1-4小时，离心收集微 球并洗涤3-5次，然后冻干得微球。 以下实施例克服了水溶性好的药物包封率不高、突释严重的缺点；对于生物大分 子药物来说，克服了油水界面、高剪切力、界面、和交联剂等，在温和的条件下把生物大分子 药物，如蛋白质、多肽、疫苗、DNA、 RNA、 SiRNA、病毒或脂质体载入微球中，能够长期保持活 性。大大的减少保存的费用和提高疗效。同时制备的多糖玻璃体的粒径小，活性高，因此在 制备成其它剂型如缓释微球，可以减少突释和不完全释放。
实施例一 载有小分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照小分子药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或0mg (其粒径大小分别为
0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或
30% plga的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、
漩涡或超声O. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗 粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、 90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0%、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1A，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例二 载有生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为
0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或
30% PLGA的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、
漩涡或超声O. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗 粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、 90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
8聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、8%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40%的乙醇或1000mL的重量百分 比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1B，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例三 载有促红细胞生成素(EPO)生物大分子药物颗粒聚乳酸(PLA)微球的制备
(1)按照促红细胞生成素(EPO)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0% ;PLA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1C，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例四 载有重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙 酸(PLGA)微球的制备 (1)按照重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、 1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或0 ii m)和重量 百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10%的乙二醇和90X的乙醇或400mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1D，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例五 载有细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)物颗粒聚羟基乙酸(PGA)微球的制 备 (1)按照粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)药物颗粒和PGA的乙腈溶液 0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分另U为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或 Oiim)和重量百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30X的PGA的二氯甲烷溶液重量比为
i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混
悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、 40%、25%、10%或0% ;PGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用
聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80 %的乙二醇、80 %的的乙二醇、75 %的乙二醇、60 %的丙二醇或50 %的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、800mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PGA的乙腈溶液制备微球的扫描电镜图1E，粒径约 50-150 iim。其它按照2%、10%、20%或30% PGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图 1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 ii m、60-150 y m、70-180 y m或200-500 y m。
实施例六 载有干扰素(INF)生物大分子药物颗粒聚乳酸(PLA)微球的制备
(1)按照干扰素(INF)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径 大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、 15%、20%或30% PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或l : 4 等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对 应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA为50X、 60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方2 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%的乙二醇和90%的乙醇或1000mL的重量百分 比30%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照15X的重量百分比浓度PLA的二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1F， 粒径约50-120 iim。其它按照2X、10X、20X或30X的PLA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例七 载有血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA)微 球的制备 (1)按照血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、 10%或0% ;PLGA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10 %的乙二醇和90 %的乙醇或400mL的重量百分比
1130%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电 镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、40-100iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例八 载有生长激素(GH)生物大分子药物颗粒聚己内酯(PCL)微球的制备
(1)按照生长激素(GH)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒 径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 y m、2-10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2% 、 10% 、 15%、20%或30%聚己内酯(PCL)的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;聚己内 酯(PCL)为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% (w/w);和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90% 的乙醇、80 %的乙二醇、80 %的的乙二醇、75 %的乙二醇、60 %的丙二醇或50%的丙二醇配 制的亲水油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复 乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%聚己内酯(PCL)制备微球的形貌类似于上述扫 描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、40-120 y m、60-150 y m、70-180 y m或 200-500iim。
实施例九 载有血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚乙二醇 (PLA-PEG)微球的制备 (1)按照血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比 浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电镜 图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例十 载有凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒聚乳_酸聚羟基乙酸(PLA-PEG) 微球的制备 (1)按照凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例i^一 载有骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙醇 (PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其 粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、 1 : 30、 1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0. l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液 (制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% );
(2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十二 载有神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙二醇 (PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 % 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十三 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚乙二醇_聚乳酸 (PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓 度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方1 : 用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别 为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、 5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超 声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十四 载有转化生长因子(TGF-e)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸 (PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照转化生长因子(TGF-P )生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 : 用泊洛沙姆(poloxmer)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为 1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、 10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声 0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或1000mL的重量百分比 60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十五 载有疫苗生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚乳酸_聚羟基 乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备
(1)按照疫苗生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别 为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20% 或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4 等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对 应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0% ;PLGA-PEG-PLGA 为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :
用聚三梨醇表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、 8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或 40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成 复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim 或200-500 iim。
实施例十六 载有抗体(antibody)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚 乳酸-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备 (1)按照抗体(antibody)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其 粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG-PLGA为50% 、60% 、75% 、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、500mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或700mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述扫 描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或 200—500iim。
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实施例十七 载有表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇 (PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 % 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十八 载有成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二 醇(PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓 度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
17
按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60_160 y m、70_180 y m或
200-500iim。 实施例十九 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二 醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg (其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% );
(2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二十 载有凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚羟基乙 酸-聚乙二醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度 为2%、10%、 15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、 1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二i^一 载有蛋白生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照蛋白生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别 为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20%
或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的 药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;透明质酸为50%、 60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十二 载有核酸生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照核酸生物大分子药物PEI或聚精氨颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或0mg(其 粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、15%、20%或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为5 0 % 、 4 0 % 、 2 5 % 、 10 %或0 % ;透明质 酸为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描 电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或 200_500 ii m
实施例二十三 载有小分子药物海藻酸钠颗粒明胶微球的制备 (1)按照小分子药物海藻酸钠颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分 别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的 药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、 75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 乙基纤维素表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1 % 、2% 、5% 、 8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或 40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成 复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40%的乙醇或1000mL的重量百分 比60%的1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-125iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十四 载有葡聚糖生物大分子药物颗粒明胶微球的制备 (1)按照葡聚糖生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小 分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的 药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、 75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分
20钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干得干燥的微球。 按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电镜
图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十五 载有核酸药物颗粒聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照核酸药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为 0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或 30XPLGA的乙腈溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡 或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微 球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、90%或 100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 % PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜 图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。 (1)按照促红细胞生成素(EPO)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、 10%或0% ;PLA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1C，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例四 载有重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙 酸(PLGA)微球的制备 (1)按照重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、 1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或0 ii m)和重量 百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10%的乙二醇和90X的乙醇或400mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1D，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例五 载有细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)物颗粒聚羟基乙酸(PGA)微球的制 备 (1)按照粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)药物颗粒和PGA的乙腈溶液 0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分另U为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或 Oiim)和重量百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30X的PGA的二氯甲烷溶液重量比为
i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混
悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、
2240%、25%、10%或0% ;PGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、800mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PGA的乙腈溶液制备微球的扫描电镜图1E，粒径约 50-150 iim。其它按照2%、10%、20%或30% PGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图 1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 ii m、60-150 y m、70-180 y m或200-500 y m。
实施例六 载有干扰素(INF)生物大分子药物颗粒聚乳酸(PLA)微球的制备
(1)按照干扰素(INF)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径 大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、 15%、20%或30% PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或l : 4 等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对 应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA为50X、 60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%的乙二醇和90%的乙醇或1000mL的重量百分 比30%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照15X的重量百分比浓度PLA的二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1F， 粒径约50-120 iim。其它按照2X、10X、20X或30X的PLA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例七 载有血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球 的制备
(1)按照血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、 10%或0% ;PLGA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10%的乙二醇和90X的乙醇或400mL的重量百分比 30%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电 镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、40-100iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例八 载有生长激素(GH)生物大分子药物颗粒聚己内酯(PCL)微球的制备
(1)按照生长激素(GH)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒 径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 y m、2-10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2% 、 10% 、 15%、20%或30%聚己内酯(PCL)的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;聚己内 酯(PCL)为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% (w/w);和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90% 的乙醇、80 %的乙二醇、80 %的的乙二醇、75 %的乙二醇、60 %的丙二醇或50%的丙二醇配 制的亲水油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复 乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%聚己内酯(PCL)制备微球的形貌类似于上述扫
24描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、40-120 y m、60_150 y m、70_180 y m或
200-500iim。 实施例九 载有血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚乙二醇 (PLA-PEG)微球的制备 (1)按照血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比 浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电镜 图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例十 载有凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLA-PEG) 微球的制备 (1)按照凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比
2560%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例i^一 载有骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙醇(PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、 1 : 30、 1 : 45或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0. l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十二 载有神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 %1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十三 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚乙二醇_聚乳酸(PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳 (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十四 载有转化生长因子(TGF-e)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照转化生长因子(TGF-P )生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用泊洛沙姆(poloxmer)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或1000mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十五 载有疫苗生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备 (1)按照疫苗生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0% ;PLGA-PEG-PLGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :
用聚三梨醇表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或200-500 iim。
实施例十六 载有抗体(antibody)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备 (1)按照抗体(antibody)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA-PEG-PLGA为50% 、60% 、75% 、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、500mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或700mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十七 载有表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇(PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 %1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十八 载有成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇(PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg
29或0mg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓 度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十九 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇_聚乳酸_聚乙二 醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg (其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二十
载有凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙二醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1.5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2% 、 10% 、 15% 、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二i^一 载有蛋白生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照蛋白生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20%
或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;透明质酸为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或200-500iim。 实施例二十二 载有核酸生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照核酸生物大分子药物PEI或聚精氨颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0 % ;透明质酸为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十三 载有小分子药物海藻酸钠颗粒明胶微球的制备 (1)按照小分子药物海藻酸钠颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用乙基纤维素表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1 % 、2% 、5% 、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40%的乙醇或1000mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电
32镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-125iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十四 载有葡聚糖生物大分子药物颗粒明胶微球的制备 (1)按照葡聚糖生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干得干燥的微球。 按照2 % 、 10 % 、 15 % 、 20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电镜
图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十五 载有核酸药物颗粒聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照核酸药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30XPLGA的乙腈溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
33
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜
图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十六 载有疫苗药物颗粒聚乙二醇_聚己内酯(PEG-PCL)微球的制备
(1)按照疫苗药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30%聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)的二氯甲烷溶液重量比为l : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PEG-PCL为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %聚乙二醇-聚己内酯制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70_180 ii m或200_500 ii m。
实施例二十七 载有蛋白药物颗粒的聚乳酸和聚乳酸_聚羟基乙酸(PLA和PLGA)的混合物的微球的制备 (1)按照蛋白药物(以EPO为模型蛋白药物)颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30%聚乳酸和聚乳酸-聚羟基乙酸(聚乳酸聚乳酸-聚羟基乙
酸按照重量比为i : i、2 : i、4 : 1、4 : 1、或2 : i的混合)的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(s/o)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA禾PPLA为50%、60%、75%、90%或100% );
(2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%聚乳酸和聚乳酸_聚羟基乙酸(PLA和PLGA)的混合物的制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为1-25 ii m、50-155 ii m、60-160 ii m、70-180 ii m或200—500 ii m。
权利要求
一种乙醇包亲水油-亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特征在于，包括以下步骤①将药物颗粒加入到缓释或控释材料的有机溶液即油相中搅拌、漩涡或超声，使之均匀分散形成混悬液；所述的药物颗粒、缓释或控释材料，它们的重量百分比为0-50％、缓释或控释微材料为50-100％；②将混悬液加入另一亲水有机溶液中即亲水油相，该油相不溶缓释或控释材料的有机溶剂，搅拌0.5-5分钟形成1-500μm的球；③将完成步骤②的含有微球混悬液转移到乙醇中固化1-4小时；④将完成步骤③的样品冻干得干燥的微球。
2. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的药物，包括小分子药物或大分子药物；其药物颗粒的粒径大小在O. 2-10 ym。
3. 根据权利要求2所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的小分子药物指化学药物，大分子药物是蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂 质体药物的生物大分子药物；所述的核酸为反义核苷酸、小分子RNA或基因。
4. 根据权利要求3所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其 特征是，所述的蛋白大分子药物为促红细胞生成素、重组人粒细胞集落剌激因子、粒细 胞_巨噬细胞集落剌激因子、疫苗、干扰素、生长激素、胰岛素、表皮生长因子、成纤维细胞 生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内 皮生长因子、神经生长因子、骨衍生性生长因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因 子VIII或IX遗传因子。
5. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的油相为缓释或控释的材料的有机溶液。
6. 根据权利要求5所述的乙醇包亲水油_亲水油包油_油包固体微球制备的方法，其特征是，所述的缓释或控释的材料的有机溶液为聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乳酸聚羟基乙酸、聚乳酸和聚乳酸-聚羟基乙酸的任意组合、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、聚磷酸 酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、透明质酸、明胶、聚乙二醇聚乳酸、聚羟基乙酸聚乙二醇、聚乙二 醇聚乳酸聚羟基乙酸、聚乙二醇聚乳酸聚羟基乙酸聚乙二醇、聚乳酸聚羟基乙酸聚乙二醇 聚乳酸聚羟基乙酸、聚乳酸聚乙二醇聚乳酸、聚乙二醇聚乳酸聚乙二醇、聚乙交酯、聚乙二 醇-聚己内酯、聚己内酯聚-聚乙二醇-聚己内酯、聚己内酯、硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙 烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、或卡波母的二氯甲烷、乙酸乙酯、或乙腈的有机溶液；所述的缓释或控释的材料的有机溶液的重量百分比浓度为2_30%。
7. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油-亲水油包油-油包固体微球制备的方法，其特征是，所述的亲水油相为表面活性剂、甘油、乙醇、丙二醇、乙二醇或液体聚乙二醇或它 们的组合；所述的它们的组合为甘油与乙醇加表面活性剂的水溶液、乙醇加表面活性剂的水溶 液、甘油与丙二醇加表面活性剂的水溶液、丙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与乙二醇加 表面活性剂的水溶液、乙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与液体聚乙二醇加表面活性剂的水溶液、液体聚乙二醇加表面活性剂。
8. 根据权利要求7所述的乙醇包亲水油_亲水油包油_油包固体微球制备的方法，其 特征是，所述的它们的组合，其重量比例为表面活性剂水溶液0-30%，甘油0-50%，乙醇、 丙二醇、乙二醇或液体聚乙二醇50-100%。
9. 根据权利要求7所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的表面活性剂水溶液为聚乙烯醇和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚乙二醇和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比 浓度分别为1_10%和0-10% ;聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百 分比浓度分别为1_10%和0-10% ;泊洛沙姆和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分 比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚三梨醇和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比 浓度分别为1_10%和0-10% ;或乙基纤维素和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1-10 %和0-10%。
10. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油-亲水油包油-油包固体微球制备的方法，其 特征是，所述的微球，其粒径为1-500 ii m。
全文摘要
一种制药技术领域的乙醇包亲水油-亲水油包油油包固体微球制备的方法。包括步骤①将药物颗粒加入到缓释或控释材料的有机溶液即油相中搅拌或漩涡；②将混悬液加入另一亲水有机溶液中即亲水油相，搅拌0.1-5min形成1-500μm的球；③将完成步骤②的含有微球混悬液转移到乙醇中固化1-4小时；④将完成步骤③的样品冻干得干燥的微球。本发明制备的微球，其粒径的大小可控制，不污染环境；微粒的表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻，疏松，不会塌陷，不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释或控释微球的制备及疫苗的佐剂。
文档编号A61K47/10GK101721377SQ20101030039
公开日2010年6月9日 申请日期2010年1月18日 优先权日2010年1月18日
发明者任甜甜, 吴飞, 胡振华, 袁伟恩, 金拓 申请人:上海交通大学
技术领域：
本发明涉及的是一种制药技术领域的制备方法，尤其是一种乙醇包亲水油-亲水
油包油油包固体(S/0/h0/E)微球制备的方法。 制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中有一部分药
物需要长期给药才能治愈；还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的，原料药必须
要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释剂型； 对于一些肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病照，例如靶向于肿瘤血管的栓塞微球制剂等；
基因重组技术用于治疗蛋白的表达和生产的20多年以来，到目前为止，已有30多个蛋白药 物产品投入临床使用，近200个在审批和研发过程中，涌现出一批诸如安进(Amgen)、基因 技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的快速发展，其 剂型技术进展缓慢。 一方面，蛋白大分子药物口服不吸收、体内半衰期短，需要注射给药；另 一方面，许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白药物治疗周期长，长期而频繁地注射成为必须，也 影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白药物的剂型的研发，由于在制备微粒过程导致活性 的损失诸如W/0/W法、包封率不高的S/0/W法和S/0/0法制备的微球易突释等缺点。发展 制备具有活性保护的蛋白微球又可以提高包封率和突释的方法势在必行。到目前还未见利 用乙醇包亲水油-亲水油包油油包固体(S/0/h0/E)方法制备微球的报道。
经对现有技术文献的检索发现，[Lee E. S. ， Kwon M. J. ， Lee H. ， and Kim
J. J. ， Stabilization of protein encapsulated in poly (lactide_co_glycolide)
microspheres by novel viscous S/W/0/W method, International Journal ofPharmaceutics 331 (2007)27—37]， (Lee E. S. ， Kwon M.J. ， Lee H. ， and Kim J.J.，矛艮
道了利用新粘度S/W/0/W方法把蛋白稳定的包封在PLGA微球里，国际药学杂志，2007 ， 331:27-37)。 Lee E. S.等人在该文献报道了利用S/W/0/W方法制备了微球。该文献利 用蛋白环糊精冻干然后磨碎，把磨碎的蛋白环糊精加到高粘度的多糖溶液及PLGA的二氯 甲烷溶液乳化，最后到水相中硬化微球且只是针对蛋白类药物，没有见报道其他药物。但 是蛋白质环糊精的颗粒与多糖水溶液接触难免蛋白质不溶解，溶解后的的蛋白水溶液很 容易与PLGA的二氯甲烷接触，存在油水界面而导致聚集。同样致使包封率也不高，存在 不完全释放。[Morita T. ， Sakamura Y. ， Horikiri Y. ， Suzuki T. ， Yoshino H. ， Protein
encapsulation intobiodegradable microspheres by a novel S/0/W emulsion method using poly (ethyleneglycol)as a protein micronization adjuvant, Journal of
Controlled Release 69 (2000) 435-444] ， (Morita T.等人在该文献报道了利用新S/0/W乳 化法制备载蛋白微球。只是改变了表面活性剂以前报道较多的是用PVA，在这篇文献改用 PEG。但是仍然不能克服包封率低，存在突释和不完全释放的缺点。
背景技术：
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种乙醇包亲水油-亲水油包 油-油包固体微球制备的方法。使其制备的微粒表面光滑圆整，均匀度好，颗粒规整无粘 连；包封率高，突释小，载药量高。 本发明是通过以下技术方案实现的，本发明将药物颗粒分散在具有缓释或控释材 料的有机溶液中，并搅拌、漩涡或超声等使之分散均匀形成混悬液；然后将混悬液加到外油 相，再搅拌或漩涡形成微球，最后把它转移到大水相中固化1-4小时；然后离心收集微球，
冻干保存。 本发明包括以下步骤 ①将药物颗粒加入到缓释或控释材料的有机溶液即油相(0)中搅拌或漩涡等使 之均匀分散形成混悬液； 所述的药物颗粒、缓释或控释材料，它们的重量百分比为0_50%、缓释或控释材料 为50-100%。 ②将混悬液加入另一亲水有机溶液中即亲水油相(h0)，该油相不溶缓释或控释材 料的有机溶剂，搅拌0. 5-5min形成1-500 y m的球。 ③将完成步骤②的含有微球混悬液转移到乙醇中(E)固化1-4小时。
④将完成步骤③的样品冻干得干燥的微球。 所述的药物颗粒，指的是水溶性的药物颗粒，或药物载入到辅料中制备的颗粒，或 油溶性的通过制剂的方法制备成不溶于有机溶剂的颗粒；
所述的药物包括小分子药物和大分子药物； 所述的小分子药物指的是化学药物，大分子药物主要是指生物大分子药物，尤其 指蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物。 所述的蛋白大分子药物为促红细胞生成素(EPO)、重组人粒细胞集落剌激因 子(G-CSFh粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(INF)、生长激素 (GH)、胰岛素(Insulin)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因 子(TGF-P)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子 (PDGF)、内皮生长因子(ECGF)、神经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋 白(BMP)、组织多肽抗原(TPA)、抗体(antibody)、凝血因子VIII (VIII)、或凝血因子IX遗 传因子； 所述的核酸为反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)或基因(DNA);
所述的辅料指的主要是可以注射用级别，尤其是小糖类(蔗糖、海藻糖、葡萄糖、 麦芽糖、或乳糖)、及多羟基类化合物(甘露醇、山梨醇、甘油、l，2-丙二醇、赤鲜糖醇、聚乙 二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、或聚吡咯烷酮；)、多糖类化合物(葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、 淀粉、纤维素、PEI、聚精氨或环糊精物质)、氨基酸化合物(甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸 或组氨酸；)、或无机盐类物质(锌盐、钙盐、铜盐、镁盐、或钼盐)的一种或任意组合；
所述的药物颗粒，其药物颗粒的粒径大小在0. 2-10 ii mm，以粒径为1_5 y mm为佳。
所述的药物颗粒，占微球总重量百分比0-50% ; 所述的缓释或控释的材料为聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)、PLA 和PLGA的任意组合、硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、 聚磷酸酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG)、聚乙二醇-聚羟基乙酸 (PLGA-PEG)、聚羟基乙酸-聚乙二醇-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)、聚乳酸-聚乙二醇-聚 乳酸(PLA-PEG-PLA)、聚乙交酯、聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)、聚己内酯聚-乙二醇-聚 己内酯(PCL-PEG-PCL)、或聚己内酯(PCL); 所述的缓释或控释的材料，占微球总重量百分比为50-100% ;
所述的油相(0)为缓释或控释的材料的有机溶液； 所述的缓释或控释的材料的有机溶液为聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚羟基乙酸 (PLGA)、聚羟基乙酸(PGA)、聚乳酸(PLA)和聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)的任意组合、透 明质酸、明胶、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、聚磷酸酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、聚乳 酸_聚乙二醇(PLA-PEG)、聚乳酸-聚羟基乙酸_聚乙二醇(PLGA-PEG)、聚乳酸-聚羟基 乙酸-聚乙二醇-聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸 (PLA-PEG-PLA)、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇(PEG-PLA-PEG)、聚乙二醇_聚乳酸_聚羟 基乙酸-聚乙二醇(PEG-PLGA-PEG)、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚乙二 醇-聚己内酯(PEG-PCL)、聚己内酯聚-聚乙二醇-聚己内酯(PCL-PEG-PCL)、聚己内酯、 硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸 酯、或卡波母的二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液，以二氯甲烷、乙酸 乙酯、乙腈或它们的任意组合的有机溶液为佳； 所述的缓释或控释的材料的有机溶液重量百分比浓度为2-30% ; 所述的亲水油相(h0)为表面活性剂、甘油、乙醇、丙二醇、乙二醇溶液、液体聚乙
二醇或它们的组合物； 所述的它们的组合物为甘油与乙醇加表面活性剂的水溶液、乙醇加表面活性剂 的水溶液、甘油与丙二醇加表面活性剂的水溶液、丙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与乙 二醇加表面活性剂的水溶液、乙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与液体聚乙二醇加表面 活性剂的水溶液、或液体聚乙二醇加表面活性剂； 所述的表面活性剂的水溶为聚乙烯醇(PVA)和氯化钠等盐的混和水溶液，它们 的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚乙二醇(PEG)和氯化钠等盐的混和水溶液， 它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%;聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和氯化钠等盐的混 和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%;泊洛沙姆(poloxmer)和氯化钠 等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚三梨醇和氯化钠等 盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%;或乙基纤维素(EC)和氯
化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ; 所述的合适比例为甘油的重量百分比0-50%，表面活性剂水溶液的重量百分比 0-30%，乙醇、丙二醇、乙二醇、或液体聚乙二醇的重量百分比50-100% ;以的重量百分比 20-30 %的甘油，70-80 %的乙醇、丙二醇、乙二醇、或液体聚乙二醇50-100 %为佳，表面活性 剂水溶液的重量百分比5-15%为佳； 所述乙醇相(E)为能溶解油相和亲水油相地乙醇、丙二醇或它们的任意混合溶 液； 所述微球的粒径为1-500 ii m，以10-100 ii m为佳；
本发明选择了合适的油相(0)、亲水油相(hO)和乙醇相(E)及合适控释或缓释的
材料，使水溶性的药物颗粒或油溶性的药物通过制剂的方法制备成有机溶剂不溶的颗粒， 避免用常规的W/0、W/0/W、S/0/W的包封率不高，和S/0/0的突释严重，及造成的环境污染的 缺点；采用该方法制备微球，其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制，不污染环境；可 以避免对药物的治疗的作用影响，尤其是那些物理化学性质不稳定的，对油水界面敏感的 药物，如生物大分子药物如蛋白质大分子药物、DNA、RNA或siRNA药物。微粒的表面光滑圆 整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1 P m到500 m，其冻干粉剂为白色细 腻、疏松，不会塌陷、不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释微球的制备及疫苗的 佐剂制备。
图1制备微球的扫描电镜图
具体实施例方式以下对本发明的实施例作详细说明以下实施例在以本发明技术方案为前提下进
行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
以下实施例的实施条件 —、空白微球制备 1.制备油相(0)和亲水油相(hO) 油相(0)的制备把控释或缓释材料溶于有机溶剂制备成重量百分比浓度为 1-50%，形成油相(0)。 亲水油相(hO)的制备配方1 :用表面活性剂和氯化钠等盐混和水溶液，它们重量 百分比浓度分别为1_10%和0-10%，占亲水油相的重量百分比为0-40% ;乙醇、乙二醇、丙 二醇或常温液态的聚乙二醇为60-100% ;或配方2 :用表面活性剂和氯化钠等盐混和水溶
液，它们重量百分比浓度分别为1_10%和0-10%，占亲水油相的重量百分比为0-40% ;用 重量百分比为0-50%的甘油与50-100%的乙醇、乙二醇、丙二醇或常温液态的聚乙二醇溶 液占亲水油相的百分比为60-100% ; 乙醇相(E)的制备100-1000mL的乙醇、乙二醇、丙二醇或它们的任意混合物；
2.空白微球制备 油相(0)滴加入亲水油相(h0)并搅拌、超声或漩涡0. 5-5分钟形成0/h0，然后转 入乙醇相为100-1000mL并搅拌l-4小时，离心收集微球并冻干或挥发除去有机溶剂得到干 燥的微球。 二、制备载药物的微球 1.制备药物颗粒，对与小分子药物可以是常规的碾磨法、沉淀法、粉碎法或造粒
法；对于生物大分子药物可以是水相-水相乳液法、喷雾干燥法、相分离法、超临界法或金
属离子与生物大分子形成的复合物的方法； 2.制备油相(0)和亲水油相(h0) 均按照空白油相(0)和亲水油相(h0)制备方法。 3.把药物颗粒与油相(0)混匀形成混悬液；
7
4.把步骤3的混悬液滴加入亲水油相(h0)，并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟，形成 复乳； 5.把步骤4的复乳，滴加到100-lOOOmL乙醇相(E)，并搅拌1-4小时，离心收集微 球并洗涤3-5次，然后冻干得微球。 以下实施例克服了水溶性好的药物包封率不高、突释严重的缺点；对于生物大分 子药物来说，克服了油水界面、高剪切力、界面、和交联剂等，在温和的条件下把生物大分子 药物，如蛋白质、多肽、疫苗、DNA、 RNA、 SiRNA、病毒或脂质体载入微球中，能够长期保持活 性。大大的减少保存的费用和提高疗效。同时制备的多糖玻璃体的粒径小，活性高，因此在 制备成其它剂型如缓释微球，可以减少突释和不完全释放。
实施例一 载有小分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照小分子药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或0mg (其粒径大小分别为
0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或
30% plga的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、
漩涡或超声O. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗 粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、 90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0%、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1A，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例二 载有生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为
0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或
30% PLGA的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、
漩涡或超声O. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗 粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、 90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
8聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、8%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40%的乙醇或1000mL的重量百分 比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1B，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例三 载有促红细胞生成素(EPO)生物大分子药物颗粒聚乳酸(PLA)微球的制备
(1)按照促红细胞生成素(EPO)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0% ;PLA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1C，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例四 载有重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙 酸(PLGA)微球的制备 (1)按照重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、 1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或0 ii m)和重量 百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10%的乙二醇和90X的乙醇或400mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1D，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例五 载有细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)物颗粒聚羟基乙酸(PGA)微球的制 备 (1)按照粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)药物颗粒和PGA的乙腈溶液 0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分另U为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或 Oiim)和重量百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30X的PGA的二氯甲烷溶液重量比为
i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混
悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、 40%、25%、10%或0% ;PGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用
聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80 %的乙二醇、80 %的的乙二醇、75 %的乙二醇、60 %的丙二醇或50 %的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、800mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PGA的乙腈溶液制备微球的扫描电镜图1E，粒径约 50-150 iim。其它按照2%、10%、20%或30% PGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图 1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 ii m、60-150 y m、70-180 y m或200-500 y m。
实施例六 载有干扰素(INF)生物大分子药物颗粒聚乳酸(PLA)微球的制备
(1)按照干扰素(INF)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径 大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、 15%、20%或30% PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或l : 4 等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对 应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA为50X、 60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方2 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%的乙二醇和90%的乙醇或1000mL的重量百分 比30%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照15X的重量百分比浓度PLA的二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1F， 粒径约50-120 iim。其它按照2X、10X、20X或30X的PLA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例七 载有血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA)微 球的制备 (1)按照血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、 10%或0% ;PLGA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10 %的乙二醇和90 %的乙醇或400mL的重量百分比
1130%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电 镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、40-100iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例八 载有生长激素(GH)生物大分子药物颗粒聚己内酯(PCL)微球的制备
(1)按照生长激素(GH)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒 径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 y m、2-10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2% 、 10% 、 15%、20%或30%聚己内酯(PCL)的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;聚己内 酯(PCL)为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% (w/w);和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90% 的乙醇、80 %的乙二醇、80 %的的乙二醇、75 %的乙二醇、60 %的丙二醇或50%的丙二醇配 制的亲水油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复 乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%聚己内酯(PCL)制备微球的形貌类似于上述扫 描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、40-120 y m、60-150 y m、70-180 y m或 200-500iim。
实施例九 载有血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚乙二醇 (PLA-PEG)微球的制备 (1)按照血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比 浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电镜 图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例十 载有凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒聚乳_酸聚羟基乙酸(PLA-PEG) 微球的制备 (1)按照凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例i^一 载有骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙醇 (PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其 粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、 1 : 30、 1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0. l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液 (制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% );
(2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十二 载有神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙二醇 (PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用
聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 % 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十三 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚乙二醇_聚乳酸 (PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓 度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方1 : 用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别 为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、 5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超 声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十四 载有转化生长因子(TGF-e)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸 (PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照转化生长因子(TGF-P )生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 : 用泊洛沙姆(poloxmer)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为 1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、 10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声 0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或1000mL的重量百分比 60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十五 载有疫苗生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚乳酸_聚羟基 乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备
(1)按照疫苗生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别 为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20% 或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4 等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对 应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0% ;PLGA-PEG-PLGA 为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :
用聚三梨醇表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、 8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或 40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成 复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim 或200-500 iim。
实施例十六 载有抗体(antibody)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚 乳酸-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备 (1)按照抗体(antibody)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其 粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG-PLGA为50% 、60% 、75% 、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、500mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或700mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述扫 描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或 200—500iim。
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实施例十七 载有表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇 (PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 % 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十八 载有成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二 醇(PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓 度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
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按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60_160 y m、70_180 y m或
200-500iim。 实施例十九 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二 醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg (其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% );
(2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(hO):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二十 载有凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚羟基乙 酸-聚乙二醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度 为2%、10%、 15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、 1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二i^一 载有蛋白生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照蛋白生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别 为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20%
或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的 药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;透明质酸为50%、 60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十二 载有核酸生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照核酸生物大分子药物PEI或聚精氨颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或0mg(其 粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、15%、20%或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为5 0 % 、 4 0 % 、 2 5 % 、 10 %或0 % ;透明质 酸为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描 电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或 200_500 ii m
实施例二十三 载有小分子药物海藻酸钠颗粒明胶微球的制备 (1)按照小分子药物海藻酸钠颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分 别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的 药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、 75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 乙基纤维素表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1 % 、2% 、5% 、 8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或 40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成 复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40%的乙醇或1000mL的重量百分 比60%的1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-125iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十四 载有葡聚糖生物大分子药物颗粒明胶微球的制备 (1)按照葡聚糖生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小 分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的 药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、 75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分
20钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干得干燥的微球。 按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电镜
图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十五 载有核酸药物颗粒聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照核酸药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为 0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或 30XPLGA的乙腈溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡 或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微 球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、90%或 100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 % PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜 图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。 (1)按照促红细胞生成素(EPO)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、 10%或0% ;PLA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1C，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例四 载有重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙 酸(PLGA)微球的制备 (1)按照重组人粒细胞集落剌激因子(G-CSF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、 1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或0 ii m)和重量 百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10%的乙二醇和90X的乙醇或400mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PLGA二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1D，粒 径约50-15011111。其它按照2%、10%、20%或30%的PLGA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例五 载有细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)物颗粒聚羟基乙酸(PGA)微球的制 备 (1)按照粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)药物颗粒和PGA的乙腈溶液 0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分另U为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 ii m、2-10 ii m或 Oiim)和重量百分比浓度为2X、10X、15X、20X或30X的PGA的二氯甲烷溶液重量比为
i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混
悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、
2240%、25%、10%或0% ;PGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、800mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照15X的重量百分比浓度PGA的乙腈溶液制备微球的扫描电镜图1E，粒径约 50-150 iim。其它按照2%、10%、20%或30% PGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图 1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 ii m、60-150 y m、70-180 y m或200-500 y m。
实施例六 载有干扰素(INF)生物大分子药物颗粒聚乳酸(PLA)微球的制备
(1)按照干扰素(INF)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径 大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、 15%、20%或30% PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或l : 4 等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对 应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA为50X、 60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% ;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%的乙二醇和90%的乙醇或1000mL的重量百分 比30%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照15X的重量百分比浓度PLA的二氯甲烷溶液制备微球的扫描电镜图1F， 粒径约50-120 iim。其它按照2X、10X、20X或30X的PLA制备微球的形貌类似于上述 扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为20-100 iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例七 载有血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球 的制备
(1)按照血小板生长因子(PDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2X、10X、15X、20X或30XPLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、 10%或0% ;PLGA为 50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙二醇(PEG)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40%;和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90%的乙醇、 80%的乙二醇、80%的的乙二醇、75%的乙二醇、60%的丙二醇或50%的丙二醇配制的亲水 油相，按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比10%的乙二醇和90X的乙醇或400mL的重量百分比 30%的1，2丙二醇和70%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电 镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、40-100iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例八 载有生长激素(GH)生物大分子药物颗粒聚己内酯(PCL)微球的制备
(1)按照生长激素(GH)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒 径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 ii m、2-6 y m、2-10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2% 、 10% 、 15%、20%或30%聚己内酯(PCL)的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45 或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制 备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;聚己内 酯(PCL)为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方2 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比分别为1%、5%、 10%、20%或40% (w/w);和用重量百分比为10%、20%、25%、40%或50%的甘油与90% 的乙醇、80 %的乙二醇、80 %的的乙二醇、75 %的乙二醇、60 %的丙二醇或50%的丙二醇配 制的亲水油相按照99%、95%、90%、80%、60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复 乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比10%乙二醇和90%乙醇或1000mL的重量百分比 30% 1，2丙二醇和70%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%聚己内酯(PCL)制备微球的形貌类似于上述扫
24描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、40-120 y m、60_150 y m、70_180 y m或
200-500iim。 实施例九 载有血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚乙二醇 (PLA-PEG)微球的制备 (1)按照血管内皮细胞生长因子(VEGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比 浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电镜 图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或 200-500iim。
实施例十 载有凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸(PLA-PEG) 微球的制备 (1)按照凝血因子IX遗传因子生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或 Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为 2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、 1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳 液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ; PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比
2560%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例i^一 载有骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙醇(PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨形成蛋白(BMP)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的乙酸乙酯溶液重量比为1 : 20、1 : 30、 1 : 30、 1 : 45或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0. l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描电
镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十二 载有神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照神经生长因子(NGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 %1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-120iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十三 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚乙二醇_聚乳酸(PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳 (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十四 载有转化生长因子(TGF-e)生物大分子药物颗粒聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG-PLA)微球的制备 (1)按照转化生长因子(TGF-P )生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLA-PEG-PLA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用泊洛沙姆(poloxmer)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或1000mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLA-PEG-PLA制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例十五 载有疫苗生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚乳酸_聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备 (1)按照疫苗生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0% ;PLGA-PEG-PLGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :
用聚三梨醇表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或200-500 iim。
实施例十六 载有抗体(antibody)生物大分子药物颗粒聚乳酸_聚羟基乙酸_聚乙二醇_聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)微球的制备 (1)按照抗体(antibody)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA-PEG-PLGA为50% 、60% 、75% 、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(hO)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、500mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或700mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA-PEG-PLGA制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十七 载有表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇(PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照表皮生长因子(EGF)生物大分子药物颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60 %乙二醇和40 %乙醇或800mL的重量百分比60 %1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十八 载有成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇(PEG-PLA-PEG)微球的制备 (1)按照成纤维细胞生长因子(FGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg
29或0mg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓 度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60% 1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2X、10X、15X、20X或30X的PEG-PLA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例十九 载有骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒聚乙二醇_聚乳酸_聚乙二 醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照骨衍生性生长因子(BDGF)生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg 或Omg (其粒径大小分别为0. 2-1 ii m、 1-5 y m、2_6 y m、2_10 y m或0 y m)和重量百分比浓度 为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10% 或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用 聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、 5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、 25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分 钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL 乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或800mL的重量百分比 60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二十
载有凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒聚乙二醇-聚乳酸-聚羟基乙酸-聚乙二醇(PEG-PLGA-PEG)微球的制备 (1)按照凝血因子VIII (VIII)生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1.5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30% PEG-PLGA-PEG的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、
i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体
(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PEG-PLGA-PEG为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2% 、 10% 、 15% 、20%或30%的PEG-PLGA-PEG制备微球的形貌类似于上述扫
描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为1-20 ii m、50-130 y m、60-160 y m、70-180 y m或
200-500iim。 实施例二i^一 载有蛋白生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照蛋白生物大分子药物颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或0mg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、 10%、 15%、20%
或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;透明质酸为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或200-500iim。 实施例二十二 载有核酸生物大分子药物颗粒透明质酸微球的制备 (1)按照核酸生物大分子药物PEI或聚精氨颗粒O. 4mg、2mg、1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30%透明质酸的二氯甲烷溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或l : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50% 、40% 、25% 、 10%或0 % ;透明质酸为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。 按照2%、10%、15%、20%或30%的透明质酸制备微球的形貌类似于上述扫描
电镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-130iim、60-160iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十三 载有小分子药物海藻酸钠颗粒明胶微球的制备 (1)按照小分子药物海藻酸钠颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用乙基纤维素表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1 % 、2% 、5% 、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5_5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、600mL的重量百分比60%的乙二醇和40%的乙醇或1000mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
按照按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电
32镜图1在图上没有显示，其尺寸分别为l-20iim、50-125iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十四 载有葡聚糖生物大分子药物颗粒明胶微球的制备 (1)按照葡聚糖生物大分子药物颗粒0. 4mg、2mg、1. 5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、
20%或30%明胶的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比
例搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;明胶为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%的乙二醇和40X的乙醇或400mL的重量百分比60%的1，2丙二醇和40%的乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干得干燥的微球。 按照2 % 、 10 % 、 15 % 、 20 %或30 %明胶制备微球的形貌类似于上述扫描电镜
图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十五 载有核酸药物颗粒聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备 (1)按照核酸药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30XPLGA的乙腈溶液重量比为1 : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40% ;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
33
按照2%、10%、15%、20%或30% PLGA制备微球的形貌类似于上述扫描电镜
图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70-180iim或
200-500iim。 实施例二十六 载有疫苗药物颗粒聚乙二醇_聚己内酯(PEG-PCL)微球的制备
(1)按照疫苗药物颗粒0. 4mg、 2mg、 1. 5mg、 lmg或Omg (其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30%聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)的二氯甲烷溶液重量比为l : 20、1 : 30、1 : 30、1 : 45或1 : 4等比例搅拌、漩涡或超声0.5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(S/0)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PEG-PCL为50%、60%、75%、90%或100% ); (2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2 % 、 10 % 、 15 % 、20 %或30 %聚乙二醇-聚己内酯制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为l-20iim、50-150iim、60-150iim、70_180 ii m或200_500 ii m。
实施例二十七 载有蛋白药物颗粒的聚乳酸和聚乳酸_聚羟基乙酸(PLA和PLGA)的混合物的微球的制备 (1)按照蛋白药物(以EPO为模型蛋白药物)颗粒0.4mg、2mg、1.5mg、lmg或Omg(其粒径大小分别为0. 2-liim、l-5iim、2-6iim、2-10iim或0iim)和重量百分比浓度为2%、10%、15%、20%或30%聚乳酸和聚乳酸-聚羟基乙酸(聚乳酸聚乳酸-聚羟基乙
酸按照重量比为i : i、2 : i、4 : 1、4 : 1、或2 : i的混合)的二氯甲烷溶液重量比为i : 20、i : 30、i : 30、i : 45或i : 4等比例搅拌、漩涡或超声o. 5-5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(s/o)乳液(制备相对应的药物颗粒占微球的组分的百分比分别为50%、40%、25%、10%或0% ;PLGA禾PPLA为50%、60%、75%、90%或100% );
(2)把步骤(1)得乳液滴加到亲水油相(h0):[亲水油相(h0)的制备配方1 :用聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和氯化钠盐混和水溶液，它们重量百分比浓度分别为1%、2%、5%、8%或10%和0%、1%、5%、7%、或10%，占亲水油相的重量百分比为0、5%、10%、25%或40%;乙二醇分别为100%、95%、90%、75%或60% ]并搅拌、漩涡或超声0. 5-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳滴加到乙醇相(E)[乙醇相(E)的制备:100ml乙醇、200mL乙醇、400mL乙醇、200mL的重量百分比60%乙二醇和40%乙醇或400mL的重量百分比60%1，2丙二醇和40%乙醇]，中并搅拌1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得干燥的微球。
按照2%、10%、15%、20%或30%聚乳酸和聚乳酸_聚羟基乙酸(PLA和PLGA)的混合物的制备微球的形貌类似于上述扫描电镜图1在图上没有显示，不过其尺寸分别为1-25 ii m、50-155 ii m、60-160 ii m、70-180 ii m或200—500 ii m。
权利要求
一种乙醇包亲水油-亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特征在于，包括以下步骤①将药物颗粒加入到缓释或控释材料的有机溶液即油相中搅拌、漩涡或超声，使之均匀分散形成混悬液；所述的药物颗粒、缓释或控释材料，它们的重量百分比为0-50％、缓释或控释微材料为50-100％；②将混悬液加入另一亲水有机溶液中即亲水油相，该油相不溶缓释或控释材料的有机溶剂，搅拌0.5-5分钟形成1-500μm的球；③将完成步骤②的含有微球混悬液转移到乙醇中固化1-4小时；④将完成步骤③的样品冻干得干燥的微球。
2. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的药物，包括小分子药物或大分子药物；其药物颗粒的粒径大小在O. 2-10 ym。
3. 根据权利要求2所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的小分子药物指化学药物，大分子药物是蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂 质体药物的生物大分子药物；所述的核酸为反义核苷酸、小分子RNA或基因。
4. 根据权利要求3所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其 特征是，所述的蛋白大分子药物为促红细胞生成素、重组人粒细胞集落剌激因子、粒细 胞_巨噬细胞集落剌激因子、疫苗、干扰素、生长激素、胰岛素、表皮生长因子、成纤维细胞 生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内 皮生长因子、神经生长因子、骨衍生性生长因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因 子VIII或IX遗传因子。
5. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的油相为缓释或控释的材料的有机溶液。
6. 根据权利要求5所述的乙醇包亲水油_亲水油包油_油包固体微球制备的方法，其特征是，所述的缓释或控释的材料的有机溶液为聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乳酸聚羟基乙酸、聚乳酸和聚乳酸-聚羟基乙酸的任意组合、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、聚磷酸 酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、透明质酸、明胶、聚乙二醇聚乳酸、聚羟基乙酸聚乙二醇、聚乙二 醇聚乳酸聚羟基乙酸、聚乙二醇聚乳酸聚羟基乙酸聚乙二醇、聚乳酸聚羟基乙酸聚乙二醇 聚乳酸聚羟基乙酸、聚乳酸聚乙二醇聚乳酸、聚乙二醇聚乳酸聚乙二醇、聚乙交酯、聚乙二 醇-聚己内酯、聚己内酯聚-聚乙二醇-聚己内酯、聚己内酯、硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙 烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、或卡波母的二氯甲烷、乙酸乙酯、或乙腈的有机溶液；所述的缓释或控释的材料的有机溶液的重量百分比浓度为2_30%。
7. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油-亲水油包油-油包固体微球制备的方法，其特征是，所述的亲水油相为表面活性剂、甘油、乙醇、丙二醇、乙二醇或液体聚乙二醇或它 们的组合；所述的它们的组合为甘油与乙醇加表面活性剂的水溶液、乙醇加表面活性剂的水溶 液、甘油与丙二醇加表面活性剂的水溶液、丙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与乙二醇加 表面活性剂的水溶液、乙二醇加表面活性剂的水溶液、甘油与液体聚乙二醇加表面活性剂的水溶液、液体聚乙二醇加表面活性剂。
8. 根据权利要求7所述的乙醇包亲水油_亲水油包油_油包固体微球制备的方法，其 特征是，所述的它们的组合，其重量比例为表面活性剂水溶液0-30%，甘油0-50%，乙醇、 丙二醇、乙二醇或液体聚乙二醇50-100%。
9. 根据权利要求7所述的乙醇包亲水油_亲水油包油油包固体微球制备的方法，其特 征是，所述的表面活性剂水溶液为聚乙烯醇和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚乙二醇和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比 浓度分别为1_10%和0-10% ;聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百 分比浓度分别为1_10%和0-10% ;泊洛沙姆和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分 比浓度分别为1_10%和0-10% ;聚三梨醇和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比 浓度分别为1_10%和0-10% ;或乙基纤维素和氯化钠等盐的混和水溶液，它们的重量百分比浓度分别为1-10 %和0-10%。
10. 根据权利要求1所述的乙醇包亲水油-亲水油包油-油包固体微球制备的方法，其 特征是，所述的微球，其粒径为1-500 ii m。
全文摘要
一种制药技术领域的乙醇包亲水油-亲水油包油油包固体微球制备的方法。包括步骤①将药物颗粒加入到缓释或控释材料的有机溶液即油相中搅拌或漩涡；②将混悬液加入另一亲水有机溶液中即亲水油相，搅拌0.1-5min形成1-500μm的球；③将完成步骤②的含有微球混悬液转移到乙醇中固化1-4小时；④将完成步骤③的样品冻干得干燥的微球。本发明制备的微球，其粒径的大小可控制，不污染环境；微粒的表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻，疏松，不会塌陷，不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释或控释微球的制备及疫苗的佐剂。
文档编号A61K47/10GK101721377SQ20101030039
公开日2010年6月9日 申请日期2010年1月18日 优先权日2010年1月18日
发明者任甜甜, 吴飞, 胡振华, 袁伟恩, 金拓 申请人:上海交通大学
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