一种药物组合物及其制备方法

专利名称：：一种药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法，特别涉及一种预防或治疗肝纤维化或早期肝硬化的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。
背景技术：
：肝纤维化是在慢性肝损害基础上导致细胞外基质异常增生所致，它是发展成肝硬化的必经阶段，阻断肝纤维化则有可能控制肝硬化的发生。而导致慢性肝损伤并有可能形成肝纤维化者，以慢性乙型肝炎最为常见。慢性乙型肝炎是常见的传染性疾病，全球携带乙肝表面抗原(HBsAg)的人数超过2.8亿。我国是乙型肝炎的高流行地区，有40%-60%的人群受过HBV感染，9.97%的人群(约一亿二千万人口)为HBsAg携带者。成人受到乙型肝炎病毒感染后，演变为慢性肝炎者约占10%-20%,从慢性肝炎可经肝纤维化发展为肝硬化，一般只经2-6年的时间。因此，探索防治肝纤维化的有效方法和药物是临床研究的重要任务。肝纤维化是慢性乙型肝炎的重要病理变化之一，是发展成肝硬化的必经阶段。因此，阻止和改善肝纤维化是攻克慢性肝炎、早期肝硬化的突破口，是当今医学有待攻克的难题。己故世界著名专家HansPopper曾经指出谁能阻止或减缓肝纤维化的发生，谁就将治愈大多数慢性肝病。现代医学有从不同角度治疗肝纤维化的报导，但临床疗效不甚理想，临床研究也无实质性进展。
发明内容本发明目的在于提供一种药物组合物；本发明另一个目的在于提供该组合物的制备方法；本发明第三个目的在于提供该制剂的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现本发明药物组合物的原料药组成为黄贫400600重量份丹参150300重量份莪术150300重量份白术150300重量份郁金100200重量份茵陈100200重量份柴胡100200重量份桃仁100200重量份北豆根50150重量份甘草50150重量份。本发明药物组合物的原料药优选组成为黄芪510重量份丹参200重量份莪术200重量份白术200重量份8郁金150重量份150重量份柴胡150重量份桃仁150重量份北豆根100重量份甘草100重量份。本发明药物组合物的原料药优选组成为黄芪450重量份丹参200重量份莪术200重量份白术200重量份郁金120重量份茵陈120重量份柴胡120重量份桃仁120重量份北豆根80重量份甘草80重量份。本发明药物组合物的原料药优选组成为黄芪550重量份丹参250重量份莪术250重量份白术250重量份郁金180重量份茵陈180重量份柴胡180重量份桃仁180重量份北豆根120重量份甘草120重量份。本发明药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。本发明药物组合物还可以由如下方法制备取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入48倍量6090%乙醇提取24次，每次13小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏，于408(TC烘干，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取24次，时间为每次13小时，用水量为每次810倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每体积份相当于O.20.8重量份药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮24次，用水量为每次810倍，时间为每次13小时，合并煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水溶液A合并，浓縮至在6CTC时测得相对密度为1.01.5，加乙醇使含醇量达60%，静置，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并，于408(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成60100目细粉并与挥发油e-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。本发明药物组合物的制备方法优选为9取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入6倍量80%乙醇提取3次，每次1小时，合并3次提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，于60'C烘干，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取3次，时间分别为2、1、l小时，用水量分别为IO、8、8倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每体积份相当于O.5重量份药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮3次，用水量分别为IO、8、8倍，时间分别为2、1、l小时，合并3次煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水溶液A合并，浓縮至在60'C时测得相对密度为1.13，加乙醇使含醇量达60%，静置过夜，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至稠膏稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并于6(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成80目细粉并与挥发油e-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。本发明药物组合物制剂的质量控制方法包括如下含量测定和/或如下一种或几种鉴别含量测定取本发明药物组合物制剂38重量份，精密称定，置索氏提取器中，加4060体积份13%氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取48小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加1030体积份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分别为3040体积份，合并氯仿下丁醇=13:0.5l的萃取液，用13%磷酸二氢钾水溶液5080体积份洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入13体积份甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成1体积份含0.0010.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.0010.003体积份，对照品溶液0.0010.003体积份与0.0020.005体积份，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷515%浓硫酸乙醇溶液，再80120。C下加热38分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长入s:530nm,入R=650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得，本发明药物组合物制剂按日服用剂量计含黄芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg;鉴别A、按照含量测定项下制备供试品溶液，取对照品黄芪甲甙加甲醇制成l体积份含0.0010.003重量份的溶液为对照品溶液；另取黄芪药材13重量份，置沙氏提取器中，力[]13%氢氧化钾甲醇溶液提取610小时后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水1030体积份，再以氯仿正丁醇=13:0.51.5比例混合液萃取三次分别为40、30、30体积份，合并萃取液，加13%的磷酸二氢钾溶液60体积份洗涤，弃去水相，再以60体积份水洗涤一次，有机相回收至干，加13体积份甲醇溶解，制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.0010.002体积份，分别点于同一块15cmX10cm硅胶G铝板，常温下将氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷515%浓硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取本发明药物组合物制剂810重量份置于圆底烧瓶中，加水200300体积份加热至沸腾提取挥发油，约13小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作为供试品；另取白术对照药材13重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.0010.002体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷13%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取本发明药物组合物制剂48重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050体积份振荡，静置12小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加13体积份乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材1重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用称取丹参酮Ha对照品0.0010.003重量份，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每体积份含0.00080.0012重量份丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.0030.008体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯=910:0.5l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取本发明药物组合物制剂810重量份，置锥形瓶中，加入90100%甲醇4060体积份，用功率150W，频率20kHz的超声波振荡2050分钟后，过滤，取续滤液2040体积份，减压回收溶剂置干，残渣加蒸馏水1030体积份微热溶解，用水饱和正丁醇萃取三次，体积分别为1020体积份，合并正丁醇萃取液，再用13%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次，体积分别为1020体积份，弃去碱液，正丁醇萃取液用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，减压回收正丁醇萃取液干，残渣加90100%乙醇1~3体积份溶解，作为供试品溶液；另取柴胡药材1重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.0040.008体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇水=58:25:13的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷515%硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E、取本发明药物组合物制剂38重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050体积份振荡，静置12小时后，过滤，弃去醚层，加入甲醇2040体积份，加热回流12小时，过滤，回收甲醇溶液至干，残渣加水3050体积份使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次1030体积份，合并正丁醇溶液，用水洗涤3次，每次1030体积份，将正丁醇层蒸干，残渣加甲醇13体积份溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材13重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.0030.008体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇甲酸=28:13:0.10.3的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷3080%硫酸甲醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本发明药物组合物制剂的质量控制方法优选为如下含量测定和/或鉴别含量测定取本发明药物组合物制剂5重量份，精密称定，置索氏提取器中，加50体积份2%氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取6小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加15体积份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分别为40、30、30体积份，合并氯仿下丁醇=2:1的萃取液，用1%磷酸二氢钾水溶液60体积份洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入1体积份甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成1体积份含0.001重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.001体积份，对照品溶液0.002体积份与0.004体积份，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷10%浓硫酸乙醇溶液，再10(TC下加热5分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长入s-530nm，入R=650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得，本发明药物组合物制剂按日服用剂量计含黄芪甲式C44H6804，不得低于2.700mg;鉴别A、按照含量测定项下制备供试品溶液，取对照品黄芪甲甙加甲醇制成l体积份含O.OOl重量份的溶液为对照品溶液；另取黄芪药材1.5重量份，置沙氏提取器中，加2%氢氧化钾甲醇溶液提取8小时后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水15体积份，再以氯仿正丁醇=2:1比例混合液萃取三次分别为40、30、30体积份，合并萃取液，加1%的磷酸二氢钾溶液60体积份洗涤，弃去水相，再以60体积份水洗涤一次，有机相回收至干，加l体积份甲醇溶解，制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.002体积份，分别点于同一块15cmX10cm硅胶G铝板，常温下将氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷10%浓硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取本发明药物组合物制剂9重量份置于圆底烧瓶中，加水250体积份加热至沸腾提取挥发油，约12小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作为供试品；另取白术对照药材2重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.002体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:O.l为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取本发明药物组合物制剂6重量份，置三角瓶中，加入乙醚40体积份振荡，静置1小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加2体积份乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材1重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用；称取丹参酮IIa对照品0.002重量份，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每体积份含O.001重量份丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.005体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯=9.5:0.5的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取本发明药物组合物制剂9重量份，置锥形瓶中，加入95%甲醇50体积份，用功率150W，频率20kHz的超声波振荡40分钟后，过滤，取续滤液30体积份，减压回收溶剂置千，残渣加蒸馏水15体积份微热溶解，用水饱和正丁醇萃取三次，体积分别为20、20、IO体积份，合并正丁醇萃取液，再用1%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次，体积分别为20、20体积份，弃去碱液，正丁醇萃取液用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，减压回收正丁醇萃取液干，残渣加95%乙醇1体积份溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.006体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇水=7:3:1的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E、取本发明药物组合物制剂5重量份，置三角瓶中，加入乙醚40体积份振荡，静置1小时后，过滤，弃去醚层，加入甲醇30体积份，加热回流l小时，过滤，回收甲醇溶液至干，残渣加水40体积份使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20体积份，合并正丁醇溶液，用水洗涤3次，每次20体积份，将正丁醇层蒸干，残渣加甲醇l体积份溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.005体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇甲酸=5:1:0.1的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷50%硫酸甲醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。原料药中茵陈为菊科植物滨蒿或茵陈蒿的干燥地上部分，应符合2000年版一部中华人民共和国药典第192页茵陈项下有关规定。原料药中北豆根为防己科植物蝙蝠葛的干燥根茎，应符合2000版一部中国药典第74页北豆根项下的有关规定。原料药中甘草为豆科植物甘草胀果甘草或光果甘草，符合2000年版一部中华人民共和国药典第65页甘草项下有关规定。原料药中黄芪药材按中国药典黄芪项下含量测定法测定三批药材黄芪甲甙含量为0.114%、0.113%、0.043%。应用人血白蛋白复制大鼠肝纤维化模型，观察本发明颗粒对该模型的治疗作用，疗程为3个月和6个月。疗程结束时取肝免疫组化染色观察肝组织I、III、IV型胶原的变化。秋水仙碱和本发明颗粒均可使I、III、IV型胶原降解，但以后者更明显。本发明颗粒能促使i、m型胶原降解，尤对I型胶原的降解更加明显，1个月疗程和3个月疗程结束时，与模型组比较均有显著性差异；本发明颗粒亦能促进IV型胶原的降解，减少IV型胶原的含量，具有重要的临床意义。经大鼠试验表明，分别于第l个月、第3个月疗程结束时，股动脉取血3-5ml检测d-II聚体、at-m及红细胞变形能力。结果与模型组及对照组相比，本发明颗粒能明显改善高凝状态，不同疗程均能提高红细胞变形能力，并使d-n聚体、at-ni降低，且有量效和时效相关性。说明该药有较好的活血化瘀作用，尤其是改善红细胞变形能力的作用，对肝纤维化时肝内瘀血状态能起到通畅血脉的功效。14用强的松建立小鼠免疫功能低下模型及在小鼠正常免疫状态下观察本发明颗粒对小鼠免疫功能的影响，结果本发明颗粒对正常小鼠及应用强的松导致小鼠免疫功能低下时，均可在一定程度上提高小鼠的NK细胞活性及淋巴细胞转化率，但对吞噬细胞的吞噬作用影响不大。在正常小鼠，本发明颗粒降低TNF-a、IL-2活性，而对免疫功能低下状态的TNF-a、IL-2活性无明显影响。下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。实验例l黄芪的提取条件考察A.提取溶媒的选择取黄芪饮片20g，分别以50%乙醇提取、70%乙醇提取、水提取和水提取50%醇沉淀除杂质四种方法进行提取，提取液采用薄层扫描法(中国药典1995年版，一部，第272页)测定四种方法提取液中黄芪甲甙的含量。结果结果分析，水及50%乙醇提取的样品中黄芪甲甙含量高，而且数据很接近。而采用水提50%乙醇沉淀和70%乙醇提取的样品黄芪甲甙含量均较低，故宜采用水或50%乙醇提取。因以水提取除能使黄芪甲甙充分提出外，还能最大限度地保留黄芪多糖，故决定采用水提取的方法。B.黄芪煎煮条件的考察取黄芪饮片10g，共9份，按因素水平和试验条件安排实验，分别加水浸泡1小时后，补加水至所需量，加热提取，提取液合并，滤过，水浴浓缩至50ml以下，放置至室温，转移至50ml容量瓶中，以水稀释至刻度。按薄层扫描法测定黄芪甲甙的含量。并对结果进行方差分析。可知，A因素(提取时间)对结果无显著性影响，A3为最佳条件；C因素(提取次数)对结果有显著影响，"为最佳条件；D因素(加水量)对结果无显著性影响，D3为最佳条件。(由于D因素的离差平方和与空白项相近，故与空白项合并作为误差处理)其最佳工艺为A3C3D3,也即加水26倍(10，8，8)加热提取3次，第一次2小时，第2、3次各1小时。实验例2丹参的最佳提取条件丹参的化学成分包括脂溶性成分和水溶性成分两部分。脂溶性成分如丹参酮类、丹参素类、异丹参酮类等，水溶性成分如原儿茶醛类、原儿茶酸等。药理实验证明，丹参酮IlA等脂溶性成分具有明显的抑制凝血功能，说明是活血化瘀的活性成分。故采用不同浓度的乙醇分别提取丹参，以丹参酮IlA为指标，选择提取丹参脂溶性成分的最适合的醇浓度。再采用正交设计方案，选择丹参脂溶性成分的最佳提取条件。A.乙醇浓度的选择取一定量的丹参，分别以60%、70%、80%和95%乙醇提取，以丹参酮IlA为指标，选15择提取的最佳浓度可见，以80%乙醇提取者，丹参嗣IIa含量最高，提取率也超过了60%，故采用80%乙醇提取。B.丹参80%乙醇提取正交试验称取丹参饮片4份，每份5.0g，用80%乙醇提取，提取液滤过，放至室温，定容至100ml容量瓶中，测定各样品中丹参酮IIa的含量，结果可知，A因素(乙醇用量)和C因素(提取次数)是影响丹参酮nA提取量的主要因素，本组样品中，2号样品的丹参酮Ha提取量最高(A^C2)，故选用条件为以80%乙醇6倍量提取3次，每次1小时。实验例3莪术、郁金、白术有效成分的提取莪术、郁金、白术三味药含挥发油。莪术为活血化瘀药，现代研究表明莪术注射液具有抗癌作用，其主要有效成分为挥发油。郁金为理气活血药，具有行气化瘀，利胆退黄等功效，其主要有效成分为挥发油。白术具有健脾益气燥湿利水等作用。现代研究表明白术煎剂具有保肝，利胆作用。所以，上述三味药，先提取挥发油，再收集其水煎液与群药一起处理，以保证疗效。莪术、郁金、白术挥发油提取条件的考察取莪术、郁金、白术饮片各30g，4目颗粒各30g和8目颗粒各30g，分别加6倍水，分别浸泡0.5、1、1.5小时后，提取挥发油，记录不同提取时间的挥发油得量。结果.-药材的浸泡时间，对挥发油提取量影响不大，最后一组实验中还出现浸泡时间长(1.5小时)挥发油提取缓慢的现象。而药材的粉碎度对挥发油提取的速度和提取的量影响较大。随着提取时间的延长，粉碎较细的8目粉，不仅提取快，而且提取的量多，提取4小时就已经提得5.5ml，而饮片和4目粉在相同条件下均比8目粉提取的速度慢且提得量少。所以，三味药提取挥发油的条件定为采用8目粉，倍量水浸泡30分钟提取6小时为宜。实验例4处方中药煎煮方法的考察除前述几种药物外，处方中还有柴胡、茵陈、桃仁、北豆根和甘草。柴胡为舒肝理气药，其主要成分为皂甙，挥发油、有机酸、柴胡醇等。现代研究表明，柴胡皂甙具有明显的解热镇痛和抗炎作用。采用水煎法皂甙可以煎出，故与群药合煎提取。茵陈为清利肝胆的要药，具有清湿热退黄疸的功效。茵陈的主要成分为香豆素，黄酮类，香豆酸等，含少量的挥发油。由于柴胡茵陈含挥发性成分量少体轻，故未单独提取挥发油，同时茵陈的有效成分并不是非常明确所以与柴胡一起采用传统的水煎法提取。北豆根为方中佐药，为清热解毒药，其主要有效成分为生物碱，也采用水煮的传统提取方法处理。桃仁为活血化瘀药，其主要成分为脂肪油、黄酮、苦杏仁甙等，药理实验表明，桃仁能明显增加动物脑血流量改善微循环，特别对肝表面微循环有改善作用，并能促进胆汁分16泌等，因无明确的有效成分而水煎液药理作用明显，故采用与群药水煎的方法提取。甘草为方中使药，其主要有效成分为甘草皂甙，现代研究表明具有保肝，抗癌等作用，也与群药同煎煮后，采用适当浓度的乙醇沉淀，除去部分杂质。采用正交设计安排群药提取条件考察实验按处方取群药适量，，采用上述正交设计的条件分9组进行实验，并分别于水浴上浓縮至100ml以内后，放至室温，转移至100ml容量瓶中，并以水稀释至刻度，摇匀备用。将上述样品充分摇匀，分别精密吸取药液20ml，均以水饱和的正丁醇萃取3次(20ml、10ral、10ml)，至萃取液基本无色后，回收正丁醇，残留物恒重，结果可见，A因素(提取时间)对结果无显著性影响，夂为最佳条件；B因素(提取次数)对结果有极显著影响，以B3为最佳；C因素(加水量)对结果无明显影响，确定D3为最佳。故最佳条件为A3B3C3，也即加水提取3次，提取时间分别为2、1、l小时，用水倍数分别为12、10、8倍。实验例5煎煮液醇沉条件的选择取柴胡、茵陈、北豆根、桃仁、甘草五味药共21克(一付药量)，按最佳实验条件煎煮，煎液分别于水浴上浓縮至每ml相当于原生药l克(21ml)，分别加95%乙醇，使含醇量为50%、60%、70%、80%冷藏，静置过夜，过滤后分别回收乙醇，并浓縮至稠膏状，于8(TC条件下干燥后，按95版药典的规定于105'C干燥3小时，于干燥器中放至室温后称重，实验结果出膏率最高者为50%醇沉者，其次是60%乙醇沉淀样品，从生产效率角度考虑，以50%乙醇沉淀过滤很慢，而以60%乙醇沉淀，过滤速度快得多，同时根据前面分析，群药的有效成分以50%及60%乙醇都能溶出，而除杂质则是60%乙醇效果更好些，所以选用60%乙醇沉淀为宜。实验例6本发明药物组合物门的20例肝纤维化患者进行了如下观察(l)测定血清IgG、IgA、IgM、补体C3，并与健康志愿者IO人进行对比。结果患者组IgG、IgA、IgM、补体C3含量(g/L)的平均值分别为16.38、1.85、2.92、0.43:健康组IgG、IgA、IgM、补体C3含量(g/L)的平均值分别为8.91、0.89、1.67、1.31。两组比较P<0.01,说明患者组免疫功能水平较低。患者组经服用本发明颗粒剂，治疗3个月后，复查血清IgG、IgA、IgM、补体C3含量(g/L)的平均值分别为:12.61、1.22、2.03、0.78.与疗前比较P〈0.05，有显著性差异。说明本发明颗粒剂有提高机体免疫力的功能。(2)S0D测定情况健康组血清总SOD(Nu/ml)均值为19.4土4.3;患者总SOD(Nu/ml)均值疗前为14.78±7.13，疗后为22.64±3.39(服药3月)，治疗前后比较P<0.05，差异显著。说明肝纤维化患者经本药治疗后机体代谢状态得以改善,清除体内有毒代谢产物自由基的能力提高。实验例7采用分层随机双盲方法观察本发明颗粒治疗乙肝肝纤维化的临床效果通过对209例乙型肝炎肝纤维化为期3个月、6个月的治疗观察，并与西药秋水仙碱及中成药复方鳖甲软肝片对照，结果如下临床症状改善根据对主要症状评分统计，结果治疗组临床症状改善3个月总有效率为76.47%，6个月总有效率为92.65%,较对照组的53.03%和63.64%为优(P〈0.01)。对主要症状如腹胀、纳呆、乏力、善太息、大便异常的改善效果比西药对照组优，其中对善太息、腹胀、纳呆、大便异常的效果还优于对比的中成药。在改善患者舌象方面，本发明颗粒有明显的优势，尤其是对舌质红、黄腻苔的消除要优于两种对照药。说明本发明颗粒有较好的消除和缓解乙肝肝纤维化患者临床症状的作用。改善肝功能通过对治疗前后肝功能相关指标的分析，本发明颗粒改善乙肝肝纤维化患者肝功能的效果较好，尤其是对ALT的影响明显，优于对照的西药组(P〈0.01)，但对AST、ALB、GLB、A/G的影响不大。对乙肝病毒的影响经半年治疗，本发明颗粒组HBV-DNA阴转率为47.22%,HBeAg的阴转率为35.13%,HBsAg的阴转率为25.00%。西药组HBV-DNA阴转率为18.18%，HBeAg的阴转率为12.50%，HBsAg的阴转率为12.50%。对比的中成药的抗乙肝病毒作用也不明显。说明本发明颗粒有一定的抗乙肝病毒作用。逆转肝纤维化治疗前后对比观察，本发明颗粒可明显减轻肝纤维化的程度，对早期的肝纤维化如S。S2期，有的可达到完全逆转。对于已进入早期肝硬化的S4期，亦可使纤维间隔縮小。从肝穿病理组织学比较，炎症活动度积分治疗组疗前7.53土2.21，疗后为4.56±3.47,炎症减轻明显，与对照组比较P〈0.01;肝纤维化程度积分疗前为6.54±2.78，疗后为4.12±2.86,肝纤维化减轻，与对照组比较P<0.01。其抗肝纤维化作用优于对照药物组。实验例8本发明颗粒对大鼠四氯化碳肝纤维化模型的预防作用大鼠购回后适应性喂养l周，然后按性别随机分成6组，分组及预防用药如下。A:模型组(20只)，各鼠灌服等容积蒸馏水；B:秋水仙碱预防对照组(10只)，每日灌服秋水仙碱1次，用量为250ug/kg;C:本发明颗粒预防大剂量组(10只)，每日灌服本发明颗粒1次，用量为6g/kg(相当临床用药量的20倍)；D:本发明颗粒预防中剂量组(IO只)，每日灌服本发明颗粒l次，用量为3g/kg(相当临床用药量的10倍)；E:本发明颗粒预防小剂量组(IO只)，每日灌服本发明颗粒1次，用量为1.5g/kg(相当临床用药量的5倍)；F:正常对照组(9只)，同等条件下喂养,不造模,不给预防药。(一)对实验过程中动物表现及死亡情况的观察方法:造模前测体重，此后，每次注射CCl4前均测体重，以了解造模期间大鼠体重的变化。实验期间仔细观察大鼠的活动度、毛色、饮食等情况，以了解大鼠的健康状况。18结果模型组大鼠在CCl4攻击l周后变得毛枯无泽，饮食减少，多数伴见腹泻，体重增加减少，有的出现负增长。秋水仙碱预防组及本发明颗粒预防组均较模型组轻，尤以本发明颗粒大剂量组最轻。实验期间，各组大鼠死亡情况见表l。表l各组大鼠死亡情况分组开始实验动物数死亡数死亡率(％)模型组(A)20840.00秋水仙碱组(B)10330.00大剂量组(c)10110.00中剂量组(D)10220.00小剂量组(E)10220.00正常组(F)900(二)肝脏大体形态观察方法剖取肝脏后，观察新鲜肝脏的外形、颜色等变化，并准确称其重量，然后计算肝与体重的比值。结果正常大鼠肝脏表面光滑，质软，颜色暗红。模型组有5只肝脏颜色变成灰色，其中2只颜色呈土黄色，l只肝表面见白色小囊肿，部分肝与隔肌粘连。秋水仙碱预防组有2只大鼠肝呈灰黄色，2只鼠肝表面可见结节。本发明颗粒预防大剂量组有1只鼠肝呈灰色，l只肝表面见白色囊肿；中剂量组有3只大鼠肝呈灰色，并见白色囊肿；小剂量组有3只大鼠肝呈灰色，其中2只肝表面见结节再生。各组肝重量及其与体重之比见表3-2。预防各组大鼠的肝重及肝重与体重之比均大于正常大鼠(均P<0.05)，但预防各组间变化无规律性(P〉0.05)表2各组肝重及肝重与体重之比比较(X土s^组别动物数肝重量(g)肝占体重之比(%)模型组1113.94±1.745.99±0.58秋水仙碱组715.24±3.356.54±1.07大剂组912.95±1.895.74±0.57中剂组815.29±2.706.25±0.79小剂组814.23±1.515.87±0.56正常组99.68±1.053.78±0.32表示均数士标准差，其显著性检验均用t检验，下同。(三)肝组织HE染色光镜观察方法各鼠均在肝右叶取材，10%福尔马林固定，石腊包埋，连续切片，切片厚m，HE染色，光镜下观察肝损伤及纤维化程度。结果l.正常大鼠肝细胞以中央静脉为中心向周围呈放射状排列，肝细胞呈多面体形，胞质内各种细胞器丰富而发达，肝细胞核大而园，位于细胞中央，汇管区无扩张，无病理性胶原生成。2.模型组大鼠各鼠均见肝细胞明显浊肿、坏死、严重脂肪变性，汇管区扩大，伴明显的纤维增生，并向周围延伸，有的包绕整个肝小叶，达肝纤维化III级者3只。说明模型的复制是成功的。3.秋水仙碱预防组各鼠均见肝细胞浊肿、脂肪变性，与模型组比较无明显差别，其中6只还可见肝点状、片状坏死。汇管区扩大，纤维增生明显，并向周围延伸，其中达肝纤维化III级者2只。4.本发明颗粒预防各组各鼠均见不同程度的肝细胞浊肿、脂肪变性，大剂量组仅l只，中剂量组3只，小剂量组5只大鼠可见肝坏死，但程度均较模型组轻。各鼠均有不同程度地肝纤维化，但多为1-2级，达III级者小剂量组2只。各组肝损伤程度及肝纤维化情况见表3。从表中可知，本发明颗粒大剂量组肝损伤指数明显低于模型组(P〈0.01)。表3本发明颗粒对大鼠肝损伤及肝纤维化的影响组别动物肝损伤指数肝纤维形成肝纤维化程度(只)数(X土SD)率(%)o级l级2级3级模型组116.91±0.941000263秋水仙碱组76.14±1.071000232大剂组95.00±2.45*100020中剂组86.88±1.251000440小剂组86.93±1,131000332正常组9/09000与模型组(A)比较*P<0.01(四)肝组织Masson染色观察及图像分析方法新鲜肝标本经10%福尔马林固定，石腊包埋，连续切片，切片厚4um，按Masson法染色，用MPEAS-500型图像分析仪测量肝胶原含量，并通过计算机算出胶原占肝之百分比。在200倍光镜下选择纤维化相对多的地方测量，每张片测5个视野，其平均值为该样本的百分比。结果在Masson染色下，背景呈红色。肝胶原染成蓝色，正常大鼠肝内仅在汇管区或中央静脉周围可见少许蓝色纤维染色，色淡而细为其特点。模型组可见汇管区扩张，纤维由汇管区向周围延伸，甚至包绕整个肝小叶形成假小叶，纤维粗大且染色深。秋水仙碱预防组肝纤维化与模型组比较无明显差别。本发明颗粒预防组肝纤维化较模型组稍轻，尤以大剂量组肝纤维化程度最轻。各组肝纤维占肝之百分比见表4。秋水仙碱组与模型组比较，胶原含量减少(P〈0.05)，本发明颗粒预防各组均明显低于模型组(P〈0.01-P〈0.001)。表4各组胶原相对含量图像分析结果(X土s)组别动物数胶原相对含量(％)模型组118.78±5.58秋水仙碱组76.52±2.18*1大剂组92.19±1.63**中剂组82.95±0.97**小剂组84.33±2.72*正常组91.19±0.64与模型组比较*P〈0.01**P〈0.001ttP〈0.05(五)对肝功能的影响方法各动物处死前经股动脉取血3-4ml，离心后取血清酶法检测丙氨酸转氨酶(ALT)、r一谷氨酰转肽酶(r-GT)，双缩脲法检测总蛋白(TP)、溴甲酚绿法检测白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、并计算白蛋白/球蛋白比值(A/G比值)。结果本发明颗粒大剂量组能明显降低ALT及r-GT，与模型组比较P<0.01，但对蛋白的影响与其它各组比较差别无显著性(均P〉0.05)。表5本发明颗粒对CCL4肝纤维化模型大鼠肝功能的影响(又士s)组另廿_动物数_ALT(IU/L)_r-GT(感)模型组11153.91±87.4858.62±17.33秋水仙碱组7142.00±103.0152.78±20.26大剂组963.00土52.43**40.73±16.83*中剂组8106.75±67.3749.84±22.17小剂组8143.25±79.9253.61±18.47正常组_^_44.44±13.99_36.08±16.56与模型组比较*P〈0.05**P<0.01表6本发明颗粒对CCL4肝纤维化模型大鼠蛋白的影响(5±s)组别_动物数T-P(g/dl)ALB(g/dl)GLB(g/dl)A/G模型组117.93±0.423.37±0.234.55±0.380.75±0.10秋水仙碱组77.66±0.483.23±0.254.43±0.370.73±0.10大剂组98.20±0.273.40±0.524.60±0.490.70±0.13中剂组88.IO土O.453.30±0.524.80±0.320.70±0.09小剂组87.90±0.823.31±0,244.79±0.480.70±0.11正常组98.20±0.563.79±0.124.63±0.520.83±0.11(六)血清肝纤维化相关指标的检测21方法各动物处死前经股动脉取血3-4ml，离心后取血清检测m型胶原前肽(PIIIP)、IV型胶原(IV-C)和层粘连蛋白(LN)的含量。三种试剂盒均由荷兰Monosan公司生产，上海森雄实业有限公司分装，均按药盒说明书方法操作。结果见表7。表7本发明颗粒对实验大鼠血清PIIIP、IV-C和LN含量的影响(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>四氯化碳是一种选择性肝脏毒物，导致肝细胞急性损伤，甚而坏死。肝细胞长期反复损伤以后，肝内网状支架塌陷、聚扰、粘连，同时成纤维细胞生长因子生成过多，促使病理性胶原增生，胶原纤维的大量增生并沉积于肝脏即形成肝纤维化模型。本实验模型大鼠的肝病理检査提示纤维组织明显增生，并向肝小叶内伸展，部分还形成假小叶，同时肝细胞伴不同程度的点状、灶状坏死，脂肪变性，说明肝纤维化模型复制是成功的。大鼠造模的同时给予本发明颗粒预防，结果三个剂量组均能降低实验大鼠的死亡率，保护肝功能，减轻肝脏的损伤程度及肝纤维化程度，其中以大剂量组的作用更明显，与模型组比较具有显著性统计学差异(P<0.05)，说明本发明颗粒预防ccl4肝纤维化模型是有效的，这就为临床应用该药治疗肝纤维化提供了实验依据。从本实验中可以看出，秋水仙碱亦有一定的抗肝纤维化作用，但其作用较弱。实验例8本发明颗粒对大鼠白蛋白肝纤维化模型的预防作用将白蛋白抗体阳性大鼠随机分成5组①模型组(18只)，各鼠灌服等容积蒸馏水；②秋水仙碱预防对照组(10只)，每日灌服秋水仙碱l次，用量为250ug/kg;③本发明颗粒预防大、中、小剂量组(每组均10只)，每日灌服本发明颗粒1次，用量分别为6g/kg、3g/kg和1.5g/kg(各相当于临床用药量的20倍、10倍和5倍)，另以5只正常大鼠(不经致敏阶段)同等条件下喂养作为对照。(一)对实验过程中动物表现及死亡情况的观察结果每次尾静脉注射后，大鼠均呈过敏性休克样反应，表现为呼吸急促俯伏不起,侧倒或仰卧，多数在30分钟内恢复正常，各组大鼠恢复时间似无差别，但也有少数动物因此而死亡，动物死亡多在第1、2周，尤其是第1周的死亡率最高，各组死亡率见表3-8。整个实验期间，模型组及本发明颗粒小剂量组大鼠略显毛枯无泽，活动度减少，各组及正常组体重增长无明显差别。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>(二)肝脏大体形态观察结果正常大鼠肝脏表面光滑、质软、颜色暗红。模型组及各预防组大鼠肝均表面光滑、无结节，多数颜色暗红，其中模型组4只，秋水仙碱组2只，本发明颗粒大剂量组2只，中剂量组2只，小剂量组4只大鼠肝颜色略显灰色。各组肝重量及其与体重之比见表9。经统计学分析，各组间无显著性差异(P〉0.05)。表9各组肝重及肝重与体重之比比较(X±s)*组别动物数肝重量(g)肝占体重之比(％)模型组911.61±0.942.82±0.32秋水仙碱组712.43±1.182.96±0.38大剂组712.27±0.832.95±0.27中剂组710.46±0.862.67±0.14小剂组811.96±1.2872.90±0.26正常组511.04±0.542.73±0.27*表示均数士标准差，其显著性检验均用t检验，下同。(三)肝组织病理观察结果1.正常大鼠肝细胞以中央静脉为中心向周围呈放射状排列，无明显浊肿，脂肪变性，偶可见局部炎细胞浸润，未见坏死。汇管区无扩张，可见少量纤维组织，无病理性胶原生成。2.模型组各鼠均见不同程度的浊肿、脂肪变性及炎细胞浸润，但程度不重。未见明显肝细胞坏死。纤维组织增生明显，从汇管区向周围延伸，包绕整过肝小叶，有的肝小叶结构破坏，出现假小叶。3.预防各组与模型组相比，亦见肝细胞浊肿、脂肪变性及炎细胞浸润，但程度上无明显差别，均未见肝细胞坏死。秋水仙碱预防组，本发明颗粒大、中剂量组的肝纤维化均较模型组轻，但三组间无明显差别，本发明颗粒小剂量组肝纤维化与模型组相近且较重。各组肝纤维化情况见表10，表11。表io本发明颗粒对大鼠肝纤维化程度分级的影响组别动物肝纤维化程度(只)数o级l级2级3级4级模型组902133秋水仙碱组740012大剂组741020中剂组740111小剂组812113正常组550000表ll本发明颗粒对大鼠肝纤维形成率及胶原含量比的影响组别动物数肝纤维化形成率(％)胶原相对含量(％)&±s)模型组9跳007.90±3.72秋水仙碱组742.864.97±3.23*大剂组742.864.27±2.66*中剂组742.864.36±3.03*小剂组888.895.27±2.56正常组502.82±0.87与模型组比较*P〈0.05表12本发明颗粒对白蛋白肝纤维化大鼠血清PIIIP、IV-C和LN含量的影响(j土s)iiS动物数PlIIP(ng/ml)IV-C(ng/ml)LN(ng/ml)~与模型组比较*P<0.05**p<0.01***P<0.001在肝纤维化及肝硬化形成和发展过程中，免疫因素起着重要的作用，而白蛋白持续多次注入后引起血流中循环免疫复合物反复增多，可导致循环免疫复合物沉积于肝小叶间微血管末梢，使肝小叶周围出现广泛的进行性的慢性炎症病变导致肝细胞变性坏死，成纤维细胞增殖和胶原纤维病理性增生，且自汇管区向肝小叶周围伸展，形成肝纤维化及肝硬化。该模型稳定可靠，且与人类慢性乙肝后肝纤维化发病机理相类似，故广泛应用于抗肝纤维化药物的筛选。PIIIP是III型胶原经氨基端内切酶作用水解下来的多肽，是反映早期肝纤维化程度48.96±10.3737.26±8.64**30.42±6.78***38.14±7.78**46.36±9.1425.67±5.57246.33±53.26206.57±28.90*196.98±60.72**216.33±50.42257.87±90.56132.47±49.5198.54±40.7886.73±52.6488.84±50.2689.42±38.6490.63±70.5677.57±30.62且模且自水秋自自紹绍剂剂剂常大中小正2420和活动度的良好指标，血清IV-C含量的增加亦与肝纤维化呈正相关，而从血清中检测这些指标可反映肝纤维化的程度。从本实验结果来看，模型组大鼠PIIIP、iv-c的含量均高于正常大鼠，与文献结论一致。结合肝组织病理分析证实，经本发明颗粒预防后，大、中剂量组能明显降低肝纤维化形成率，保护肝脏及减轻肝纤维化程度，显示了该药对人血白蛋白肝纤维化模型的良好预防作用。实验例9本发明颗粒对乙型肝炎病毒的抑制作用(一)本发明颗粒在2.2.15细胞培养中的细胞毒性为观察本发明颗粒对乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞的毒性，在接种2.2.15细胞后24小时，加2倍稀释药液。实验自16mg/ml开始8;4;2;1;0.5;0.25mg/ml，同时设正常细胞对照。4天换一次药液，维持8天，用显微镜观察细胞病变，按公式计算半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TCo)，见表1。TC50二批实验分别为2mg/ml，2mg/ml，平均半数有毒浓度(TC50)为2mg/ml，最大无毒浓度(TC())为lmg/ml。见表4-13.(二)本发明颗粒在2.2.15细胞培养中对HBeAg和HBsAg表达的作用本发明颗粒lmg/ral;0.5mg/ml;0.25mg/ml，加入2.2.15细胞中培养，第8天对HBsAg和HBeAg的抑制效果见表4-14、表4-15、4-16。l.对HBsAg的抑制率本发明颗粒三批实验对HBsAg的平均抑制率分别为lmg/ml抑制23.63±9.25%(P<0.05-.001);0.5mg/ml抑制5.27±3.14%(P>0.05)。三批实验IC50均〉2.0mg/ml。2.对朋eAg的抑制率:三批实验本发明颗粒各浓度组对朋eAg的平均抑制率分别为；lmg/ml抑制37.60±8.31%(P<0.01)、0.5mg/ml抑制23.33±5.75%、0.25mg/ml抑制17.90±1.66%(P>0.05)。三批实验平均IC50为3.23±2.64mg/ml。3.选择指数[SI]:本发明颗粒对HBeAg抑制率的SI为0.62，对HBsAg抑制率的SI无法计算。表13本发明颗粒在2.2.15细胞培养内的毒性实验实验不同药物浓度批次方法1684mg/ml/细胞病变210.50.250TC50(mg/ml)TCo1CPE44420000214442000044420000破坏％1001001005000002CPE44420000214442000044420000破坏％100100100500000二批平均2125<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表16本发明颗粒在2.2.15细胞培养内对HBsAg和HBeAg的抑制效果分析实验毒性HBeAgHBsAg批次TC50IC50IC50mg/mlmg/mlmg/ml12>22.0022〉26.263〉21.44平均5±SD2>23.23±2.64表17本发明颗粒在2.2.15细胞培养内对HBeAg和HBsAg的抑制作用总结表细胞毒性(mg/ml)HBeAgHBsAgTC50TCOIC50(mg/ml)SIIC50(mg/ml)213.23±2.640.62>2结果本发明颗粒对2.2.15细胞培养的毒性本发明颗粒加入2.2.15细胞中培养8天，以细胞病变为指标，二批实验平均半数中毒浓度TC50为2mg/ml，最大无毒浓度TCo为lmg/ml。本发明颗粒在2.2.15细胞培养内对HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用本发明颗粒在2.2.15细胞中培养8天，对HBeAg的IC50三批实验平均为3.23±2.64mg/ml，SI为0.62。对HBsAg最大无毒浓度lmg/ml的抑制率平均为23.63±9.25%(P〈0.05-0.01)。目前临床用于治疗乙型肝炎病毒的阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)、无环鸟苷(ACV)、磷甲酸(PFA)等在2.2.15细胞中虽能抑制HBV-DNA，但对HBeAg表达抑制低于50%,不能计算IC50。本实验未用阳性对照药。下述实施例均能实现上述实验例的效果具体实施例方式实施例l:颗粒剂的制备黄芪510kg丹参200kg莪术200kg白术200kg郁金150kg茵陈150kg柴胡150kg桃仁150kg北豆根100kg甘草100kg取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入6倍量80%乙醇提取3次，每次1小时，合并3次提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，于6(TC烘干，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取3次，时间分别为2、1、l小时，用水量分别为IO、8、8倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每毫升相当于O.5克药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其27余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，，加水煎煮3次，用水量分别为IO、8、8倍，时间分别为2、1、l小时，合并3次煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水提液A合并，浓縮至在60'C时测得相对密度为1.13，加乙醇使含醇量达60%，静置过夜，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至稠膏稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并于6(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成80目细粉并与挥发油e-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂，装袋，每袋9g，一次1袋，一日3次。实施例2:胶囊剂的制备黄芪450kg丹参200kg莪术200kg白术200kg郁金120kg茵陈120kg柴胡120kg桃仁120kg北豆根80kg甘草80kg取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入5倍量85%乙醇提取2次，每次3小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，于40'C烘干，得干膏粉A,药渣B备用；将黄芪加水提取4次，时间为每次1小时，用水量为每次10倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每毫升相当于O.2克药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓缩至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮4次，用水量为每次8倍，时间为每次3小时，合并煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水提液A合并，浓縮至在60'C时测得相对密度为1.0，加乙醇使含醇量达60%，静置过夜，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至稠膏稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并于8(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，碎成60目细粉并与挥发油e-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，加入常规辅料，装入胶囊，即得。实施例3:片剂的制备黄芪550kg丹参250kg莪术250kg白术250kg郁金180kg茵陈180kg柴胡180kg桃仁180kg北豆根120kg甘草120kg取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹28参加入7倍量65%乙醇提取4次，每次1小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，于80'C烘千，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取2次，时间为每次3小时，用水量为每次8倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每毫升相当于0.8克药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮2次，用水量为每次10倍，时间为每次l小时，合并煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水溶液A合并，浓缩至在60。C时测得相对密度为1.5，加乙醇使含醇量达60%，静置过夜，过滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至稠膏稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并于4o。c烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成100目细粉并与挥发油P-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。实施例4:滴丸的制备黄芪510kg丹参200kg莪术200kg白术200kg郁金150kg茵陈150kg柴胡150kg桃仁150kg北豆根100kg甘草100kg取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入4倍量90%乙醇提取2次，每次3小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，于5(TC烘干，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取4次，时间为每次2小时，用水量为每次10倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每毫升相当于O.3克药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮4次，用水量为每次8倍，时间为每次3小时，合并煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水溶液A合并，浓縮至在60'C时测得相对密度为1.0，加乙醇使含醇量达60%，静置过夜，过滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至稠膏稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并于7(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成70目细粉并与挥发油e-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成滴丸。实施例5:膏剂的制备黄芪450kg丹参200kg莪术200kg白术200kg郁金120kg茵陈120kg柴胡120kg桃仁120kg北豆根80kg29莪术250kg茵陈180kg北豆根120kg莪术200kg柴胡150kg白术200kg桃仁150kg甘草80kg取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成膏剂。实施例6:口服液的制备黄芪550kg丹参250kg白术250kg郁金180kg柴胡180kg桃仁180kg甘草120kg取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。实施例7:注射液的制备黄芪510kg丹参200kg郁金150kg茵陈150kg北豆根100kg甘草100kg取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射液实施例8:缓释剂的制备黄芪450kg丹参200kg白术200kg郁金120kg柴胡120kg桃仁120kg甘草80kg取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成缓释剂实施例9:蜜丸的制备黄芪550kg丹参250kg白术250kg郁金180kg柴胡180kg桃仁180kg甘草120kg取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成蜜丸实施例10:散剂的制备黄芪450kg丹参250kg白术250kg郁金150kg柴胡150kg桃仁150kg甘草80kg。取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成散剂莪术200kg茵陈120kg北豆根80kg莪术250kg茵陈180kg北豆根120kg莪术250kg茵陈150kg北豆根80kg实施例ll:软胶囊剂的制备黄芪500kg丹参200kg莪术200kg白术200kg郁金120kg茵陈120kg柴胡120kg桃仁120kg北豆根100kg甘草lOOkg。取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成散剂。实施例12:本发明药物组合物制剂的含量测定方法和鉴别方法含量测定方法:取实施例l颗粒制剂5g，精密称定，置索氏提取器中，加50ml2X氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取6小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加15ml水溶解，用氯仿正丁醇=2:1的混合溶液，萃取三次，分别为40、30、30ml，合并氯仿下丁醇=2:l的萃取液，用lX磷酸二氢钾水溶液60ml洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入lml甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成lml含0.OOlg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.OOlml，对照品溶液0.002ml与0.004ml，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷10%浓硫酸乙醇溶液，再IOO'C下加热5分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长入5=530咖，入p650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得，本药物组合物制剂按日服用剂量计含黄芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg。鉴别方法:A、按照含量测定项下制备供试品溶液，取对照品黄芪甲甙加适量甲醇制成lml含0.001g的溶液为对照品溶液；另取黄芪药材1.5g，置沙氏提取器中，加2%氢氧化钾甲醇溶液提取8小时后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水15ml，再以氯仿正丁醇=2:1比例混合液萃取三次分别为40、30、30ml，合并萃取液，加1%的磷酸二氢钾溶液60ml洗涤，弃去水相，再以60ml水洗涤一次，有机相回收至干，加lml甲醇溶解，制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.002ml，分别点于同一块15cmX10cm硅胶G铝板，常温下将氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷10%浓硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取实施例l颗粒9g置于50ml圆底烧瓶中，加水250ml加热至沸腾提取挥发油，约12小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作31为供试品；另取白术对照药材2g，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.002ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取实施例1颗粒6g，置50ml三角瓶中，加入乙醚40ml振荡，静置1小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加2ml乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材lg，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用；称取丹参酮Ha对照品0.002g，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每ml含lmg丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各O.005ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯二9.5:0.5的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取实施例l颗粒9g，置50ml锥形瓶中，加入95X甲醇50ml，用功率150W，频率20kHz的超声波振荡40分钟后，过滤，取续滤液30ml，减压回收溶剂置干，残渣加蒸馏水15ml微热溶解，用水饱和正丁醇萃取三次，体积分别为20、20、10ml,合并正丁醇萃取液，再用1%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次，体积分别为20、20ml，弃去碱液，正丁醇萃取液用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，减压回收正丁醇萃取液干，残渣加95X乙醇lml溶解，作为供试品溶液；另取柴胡药材lg，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.006ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇水=7:3:1的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E、取实施例l颗粒5g，置50ml三角瓶中，加入乙醚40ml振荡，静置1小时后，过滤，弃去醚层，加入甲醇30ml，加热回流l小时，过滤，回收甲醇溶液至干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇溶液，用水洗涤3次，每次20ml，将正丁醇层蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.005ml,分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇甲酸=5:1:O.l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷50%硫酸甲醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；实施例13:本组合物制成散剂的鉴别方法A、按照实施例12含量测定项下方法取散剂制备供试品溶液，取对照品黄芪甲甙加适量甲醇制成lml含0.002g的溶液为对照品溶液；另取黄芪药材3g，置沙氏提取器中，加1%氢氧化钾甲醇溶液提取IO小时后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水10ml，再以氯仿正丁醇=3:1.5比例混合液萃取三次分别为40、30、30ml，合并萃取液，加1X的磷酸二氢钾溶液60ml洗涤，弃去水相，再以60ml水洗涤一次，有机相回收至干，加3ml甲醇溶解，制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.OOlml，分别点于同一块15cmX10cm硅胶G铝板，常温下将氯仿甲醇水二80:30:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷5%浓硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取本发明药物组合物散剂10g置于50ml圆底烧瓶中，加水200ml加热至沸腾提取挥发油，约3小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作为供试品；另取白术对照药材lg，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.002ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取本发明药物组合物散剂8g，置50ml三角瓶中，加入乙醚30ml振荡，静置2小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加lral乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材lg，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用；称取丹参酮IIa对照品0.003g，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每ml含0.8mg丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.008ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯=10:l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取本发明药物组合物散剂10g，置50ml锥形瓶中，加入90X甲醇60ml，用功率150W，频率20kHz的超声波振荡30分钟后，过滤，取续滤液40ml，减压回收溶剂置干，残渣加蒸馏水10ml微热溶解，用水饱和正丁醇萃取三次，体积分别为20ml，合并正丁醇萃取液，再用1%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次，体积分别为20ml，弃去碱液，正丁醇萃取液用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，减压回收正丁醇萃取液干，残渣加90X乙醇3ml溶解，作为供试品溶液；另取柴胡药材lg，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.004ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇水=5:2:l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷15%硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E、取本发明药物组合物制剂4g，置50ml三角瓶中，加入乙醚50ml振荡，静置1小时后，过滤，弃去醚层，加入甲醇40ml，加热回流l小时，过滤，回收甲醇溶液至干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次10ml，合并正丁醇溶液，用水洗涤3次，每次30ml，将正丁醇层蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.003ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇甲酸=8:3:0.3的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷30%硫酸甲醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实施例14:本组合物制成胶囊剂的含量测定方法取本发明药物组合物胶囊制剂4g，精密称定，置索氏提取器中，加60mll^氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取8小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加10ml水溶解，用氯仿正丁醇=2:1的混合溶液，萃取三次，分别为40ml，合并氯仿下丁醇=1:0.5的萃取液，用lX磷酸二氢钾水溶液70ml洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入lml甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成lml含0.002g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.001ml，对照品溶液0.003ml与0.002ml，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=80:20:10比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷6%浓硫酸乙醇溶液，再120'C下加热4分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长X^530nm，XR=650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得，本药物组合物胶囊制剂按日服用剂量计含黄芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg。实施例15:本组合物制成片剂的含量测定方法和鉴别方法含量测定方法取本发明药物组合物片剂5g,精密称定，置索氏提取器中，加45ml2%氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取6小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加15ml水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分别为35ml，合并氯仿34下丁醇=2:1的萃取液，用1.5^磷酸二氢钾水溶液60ml洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入1.5ml甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成lml含0.002g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.002ml，对照品溶液0.002ml与0.002ml，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=70:15:8比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷8%浓硫酸乙醇溶液，再9(TC下加热6分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长入s-530nm，入^650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得，本药物组合物片剂按日服用剂量计含黄芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg;鉴别方法取本发明药物组合物片剂6g，置50rol三角瓶中，加入乙醚35ml振荡，静置1.5小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加1.5ml乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材lg，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用；称取丹参酮Ha对照品0.002g，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每ml含lmg丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.004ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯=10:l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实施例16:本组合物制成滴丸的鉴别方法取本发明药物组合物滴丸制剂9g置于50ml圆底烧瓶中，加水200ml加热至沸腾提取挥发油，约3小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作为供试品；另取白术对照药材lg，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.002ml，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷2%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3权利要求1、一种药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄芪400～600重量份丹参150～300重量份莪术150～300重量份白术150～300重量份郁金100～200重量份茵陈100～200重量份柴胡100～200重量份桃仁100～200重量份北豆根50～150重量份甘草50～150重量份。2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄疾510重量份莪术200重量份郁金150重量份柴胡150重量份北豆根100重量份丹参200重量份白术200重量份茵陈150重量份桃仁150重量份甘草100重量份。3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为:黄芪450重量份莪术200重量份郁金120重量份柴胡120重量份北豆根80重量份丹参200重量份白术200重量份茵陈120重量份桃仁120重量份甘草80重量份。4、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为:黄芪550重量份莪术250重量份郁金180重量份柴胡180重量份北豆根120重量份丹参250重量份白术250重量份茵陈180重量份桃仁180重量份甘草120重量份。5、如权利要求l-4任一所述的药物组合物，其特征在于取该药物组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。6、如权利要求l-4任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入48倍量6090%乙醇提取24次，每次13小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏，于4080'C烘干，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取24次，时间为每次13小时，用水量为每次810倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每体积份相当于0.20.8重量份药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮24次，用水量为每次810倍，时间为每次13小时，合并煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水溶液A合并，浓縮至在6(TC时测得相对密度为1.01.5，加乙醇使含醇量达60%，静置，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并，于408(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成60100目细粉并与挥发油P-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。7、如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为取莪术、白术、郁金提取挥发油，蒸馏后的水溶液A另器保存，药渣A备用；将丹参加入6倍量80%乙醇提取3次，每次l小时，合并3次提取液，滤过，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，于6(TC烘干，得干膏粉A，药渣B备用；将黄芪加水提取3次，时间分别为2、1、l小时，用水量分别为IO、8、8倍，合并煎液，滤过，滤液浓縮至每体积份相当于0.5重量份药材，以3000转/分离心，除去部分杂质，上清液浓縮至稠膏A备用；其余柴胡、桃仁、茵陈、北豆根、甘草五味药与丹参药渣B及莪术、白术、郁金三味药的药渣A合并，加水煎煮3次，用水量分别为IO、8、8倍，时间分别为2、1、l小时，合并3次煎液，过滤，滤液与莪术、白术、郁金三味的水溶液A合并，浓縮至在6(TC时测得相对密度为1.13，加乙醇使含醇量达60%，静置过夜，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至稠膏稠膏B，稠膏B与黄芪水提取物稠膏A合并于6(TC烘干，得干膏粉B备用；莪术、白术、郁金挥发油制成e-CD包合物，将上述干膏粉A与干膏粉B混合，粉碎成so目细粉并与挥发油e-CD包合物混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。8、如权利要求l-4任一所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下含量测定和/或如下一种或几种鉴别含量测定取本药物组合物38重量份，精密称定，置索氏提取器中，加4060体积份13%氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取48小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加1030体积份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分别为3040体积份，合并氯仿下丁醇=13:0.5l的萃取液，用13%磷酸二氢钾水溶液5080体积份洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入13体积份甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄萬甲甙对照品，加甲醇制成1体积份含0.0010.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.0010.003体积份，对照品溶液0.0010.003体积份与0.0020.005体积份，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷515%浓硫酸乙醇溶液，再80120'C下加热38分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长入sz530nm，AR=650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得；本药物组合物制剂按日服用剂量计含黄芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg;A、按照含量测定项下方法制备供试品溶液，取对照品黄疾甲甙加甲醇制成l体积份含0.0010.003重量份的溶液为对照品溶液；另取黄芪药材13重量份，置沙氏提取器中，力n13%氢氧化钾甲醇溶液提取610小时后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水1030体积份，再以氯仿正丁醇=13:0.51.5比例混合液萃取三次分别为40、30、30体积份，合并萃取液，加13%的磷酸二氢钾溶液60体积份洗涤，弃去水相，再以60体积份水洗涤一次，有机相回收至干，加13体积份甲醇溶解，制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.0010.002体积份，分别点于同一块15cmX10cm硅胶G铝板，常温下将氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷515%浓硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取本药物组合物810重量份置于圆底烧瓶中，加水200300体积份加热至沸腾提取挥发油，约13小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作为供试品；另取白术对照药材13重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液;照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.0010.002体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.l为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷13%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取本药物组合物48重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050体积份振荡，静置1~2小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加13体积份乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材1重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用；称取丹参酮IIa对照品0.0010.003重量份，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每体积份含0.00080.0012重量份丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.0030.008体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯=910:0.5l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取本药物组合物810重量份，置锥形瓶中，加入90100%甲醇4060体积份，用功率150W，频率20kHz的超声波振荡2050分钟后，过滤，取续滤液2040体积份，减压回收溶剂置干，残渣加蒸馏水1030体积份微热溶解，用水饱和正丁醇萃取三次，体积分别为1020体积份，合并正丁醇萃取液，再用13%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次，体积分别为1020体积份，弃去碱液，正丁醇萃取液用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，减压回收正丁醇萃取液干，残渣加90100%乙醇13体积份溶解，作为供试品溶液；另取柴胡药材1重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.0040.008体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇水=58:25:13的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷515%硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E、取本药物组合物38重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050体积份振荡，静置12小时后，过滤，弃去醚层，加入甲醇2040体积份，加热回流12小时，过滤，回收甲醇溶液至干，残渣加水3050体积份使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次1030体积份，合并正丁醇溶液，用水洗涤3次，每次1030体积份，将正丁醇层蒸干，残渣加甲醇13体积份溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材13重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.0030.008体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇甲酸=28:13:0.10.3的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷3080%硫酸甲醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。9、如权利要求8所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下含量测定和鉴别中的一种或几种含量测定取本药物组合物5重量份，精密称定，置索氏提取器中，加50体积份2%氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取6小时，再冷浸过夜，提取液减压回收至干，残渣加15体积份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分别为40、30、30体积份，合并氯仿下丁醇=2:l的萃取液，用1%磷酸二氢钾水溶液60体积份洗涤，弃去水相，有机相减压蒸干，加入1体积份甲醇溶液定溶，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成1体积份含0.001重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液0.001体积份，对照品溶液0.002体积份与0.004体积份，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，常温下将氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷10%浓硫酸乙醇溶液，再10(TC下加热5分钟，取出，再薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶纸固定，照薄层色谱法进行扫描，波长入3=530咖，XR=650nm，测量供试品吸收度积分值和对照品吸收度积分值，计算，即得；本药物组合物制剂按日服用剂量计含黄芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg。A、按照含量测定项下方法制备供试品溶液，取对照品黄芪甲甙加甲醇制成l体积份含0.001重量份的溶液为对照品溶液；另取黄芪药材1.5重量份，置沙氏提取器中，加2%氢氧化钾甲醇溶液提取8小时后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水15体积份，再以氯仿正丁醇=2:1比例混合液萃取三次分别为40、30、30体积份，合并萃取液，加1%的磷酸二氢钾溶液60体积份洗涤，弃去水相，再以60体积份水洗涤一次，有机相回收至干，加l体积份甲醇溶解，制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.002体积份，分别点于同一块15cmX10cm硅胶G铝板，常温下将氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小时后，取下层为展开剂，展开一次，取出，晾干，喷10%浓硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取本药物组合物9重量份置于圆底烧瓶中，加水250体积份加热至沸腾提取挥发油，约12小时后，收集挥发油，用石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，作为供试品；另取白术对照药材2重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材供试品溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.002体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.l为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取本药物组合物6重量份，置三角瓶中，加入乙醚40体积份振荡，静置l小时后，过滤，回收乙醚提取溶液至干，残渣加2体积份乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用；另取丹参对照药材1重量份，粉碎，过40目筛，同法制成对照药材溶液，做对照药材供试液备用；称取丹参酮IIa对照品0.002重量份，加乙酸乙酯溶液制成浓度为每体积份含0.001重量份丹参酮IIa的对照品溶液备用；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各0.005体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以苯乙酸乙酯=9.5:0.5的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取本药物组合物9重量份，置锥形瓶中，加入95%甲醇50体积份，用功率150W，频率20kHz的超声波振荡40分钟后，过滤，取续滤液30体积份，减压回收溶剂置干，残渣加蒸馏水15体积份微热溶解，用水饱和正丁醇萃取三次，体积分别为20、20、10体积份，合并正丁醇萃取液，再用1%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次，体积分别为20、20体积份，弃去碱液，正丁醇萃取液用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，减压回收正丁醇萃取液干，残渣加95%乙醇1体积份溶解，作为供试品溶液；另取柴胡药材l重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.006体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇水=7:3:l的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E、取本药物组合物5重量份，置三角瓶中，加入乙醚40体积份振荡，静置l小时后，过滤，弃去醚层，加入甲醇30体积份，加热回流l小时，过滤，回收甲醇溶液至干，残渣加水40体积份使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20体积份，合并正丁醇溶液，用水洗涤3次，每次20体积份，将正丁醇层蒸干，残渣加甲醇l体积份溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1重量份，同法制成对照药材溶液；照中华人民共和国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各0.005体积份，分别点于同一块硅胶G铝板，以氯仿甲醇甲酸=5:1:0.1的溶液为展开剂，在常温下展开，取出，晾干，喷50%硫酸甲醇溶液，加热置斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。10、如权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备预防或治疗肝纤维化或早期肝硬化的药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种预防或治疗肝纤维化或早期肝硬化的药物组合物及其制备方法和质量控制方法，该组合物由黄芪、丹参、莪术、白术、郁金、茵陈、柴胡、桃仁、北豆根、甘草十味中药组成；该药物组合物制备过程中对不同组分采用提取、煎煮、过滤、浓缩等方法，使有效药物充分发挥；同时本发明还提供了对该组合物进行成分鉴别、含量测定的质量控制方法；大量试验证明本品预防或治疗肝纤维化或早期肝硬化疗效确切，临床使用安全有效。文档编号A61K36/9066GK101468183SQ20071030387公开日2009年7月1日申请日期2007年12月26日优先权日2007年12月26日发明者侯凤祥申请人:侯凤祥