一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊的制作方法
专利名称：一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，特别是一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊。
背景技术：
糖尿病是一个在全球范围内发病率快速增长的疾病，根据世界卫生组织的统计， 1998年全世界糖尿病人数为1. 35亿，2000年达到1. 6亿，2004年达2. 4亿。预计到2030 年将达到3. 7亿。全世界糖尿病患病人数最多的前三个国家是印度、中国和美国。目前我 国糖尿病的患病率在3%以上，糖尿病的患病人数估计已达5000万左右。糖尿病在全国各 地各阶层的发病率都很高，已成为威胁人类健康的第四大杀手。糖尿病的可怕并不在于糖尿病本身，而在于其并发症。糖尿病的并发症对患者的 长期健康有害，影响生活质量及预期寿命，是糖尿病人致残和死亡的主要原因。糖尿病肾病 (DiabeticNephropathy,DN)是指糖尿病(Diabetes mellitus，DM)微血管病变所引起的肾 脏结构和功能的改变，是DM常见和严重的远期并发症之一。随着人民生活水平的提高、人 口老龄化及生活方式的改变，世界范围内，DM发病率日益增多，DN也随之急剧增加。在西 方国家DN已成为终末期肾脏病(End stage renal disease,ESRD)的主要原因，约40%的 ESRD患者是由DN所致，每年新增ESRD患者中50%以上是由DN引发。在我国DM患病率也 不断增高，据估计我国DM患者已超过4000万。我国因DN而发生慢性肾衰竭的人数也逐年 上升。DM病人一旦发生肾损害表现，持续性尿蛋白难以逆转，最终进展到终末期肾功能衰 竭。因此如何早期防止DM向DN发展，或采用有效的措施阻止DN向终末期进展，是国内外 学者研究的热点之一。目前现代医学对于糖尿病并发症特别是糖尿病肾病尚缺乏行之有效的治疗药物， 现代医学对糖尿病的认识要晚于中医，借助了解剖学及生化、病理学的研究方法，比较清楚 地认识到糖尿病的内在病理变化及临床类型，随着胰岛素的人工合成与化学合成降糖药在 临床上的广泛使用，糖尿病的血糖控制在大多数情况下能够实现。但是，单纯降糖作用对 并发症多无明确的疗效，且易产生耐药性。很多服用降糖药及注射胰岛素治疗的病人随着 时间的延长，药量会逐渐增加，投入的药物种类也常由单一逐渐变为联合，长期应用剌激胰 岛，使胰腺长期处于紧张的工作状态，最终导致胰岛功能障碍，同时出现血糖反复反弹，血 液流变学改变，形成血黏稠度增加，血微循环发生障碍，最后致心、脑、肾并发症及体重增 加，水肿，肝药酶升高等不良反应。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明的目的就在于提供一种治疗糖尿 病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，可有效解决糖尿病及早期糖尿病肾病治疗的问题，本发 明由姜黄提取物105 130g、黄芪提取物(主要是黄芪总皂苷)65 85g、淀粉、滑石粉制 成，姜黄提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均勻，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒， 装入胶囊，即得；
淀粉、滑石粉加入量<姜黄提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10%，淀 粉、滑石粉重量比约为1 1。所说的姜黄提取物是，称取粉碎后的姜黄药材，放入微波提取罐内，乙醇用量为姜 黄药材重量的20倍，即姜黄与乙醇的重量比为1 20，提取温度50°C，提取时间30min，提 取功率200W，得姜黄粗提液备用；S-8大孔吸附树脂纯化S_8大孔吸附树脂先用乙醇浸泡24小时，用蒸馏水洗涤至 无醇后备用；将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将姜黄粗提液以lmL/min流速通过层析 柱进行吸附，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用8倍树脂体积的无水乙醇洗脱，收集无 水乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得姜黄提取物，得率约3. 5%，本品为黄色的粉末， 味苦，分光光度法测定，本品含总姜黄素以姜黄素计不少于58. 0% ；HPLC法测定，本品每Ig 含姜黄以姜黄素(C21H200 6)计，不得少于15.0%。总姜黄素照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V )测定，本品含总姜黄 素以姜黄素计不少于58.0%。姜黄素照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件 与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0. 5%醋酸水溶 液(45 55)，流速1.01^.1^11-1，检测波长43011111，柱温301，理论塔板数按姜黄素峰计，不 低于4000。所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用70%的乙醇回流提取2次，第一次加 入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1. 5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙 醇提取lh，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水适量，静置，滤过，得黄芪样 品提取液。取黄芪乙醇提取液(150mg/ml)，回收乙醇至无醇味，过大孔吸附树脂柱，先用4 倍树脂体积的水洗脱，继用8倍树脂体积的30%乙醇洗去杂质，再用8倍树脂体积的70% 乙醇洗脱，收集70 %乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率约3 %，本 品为淡黄色的粉末，味微苦；分光光度法测定，本品含总皂苷以黄芪甲苷计不少于75.0% ； HPLC法测定，本品每Ig含黄芪以黄芪甲苷(C41H68014)计，不得少于7.2%。黄芪总皂苷将黄芪提取物用分光光度法(中国药典2005年版一部附录V )测 定，本品含黄芪总皂苷以黄芪甲苷计不少于75. 0%。黄芪甲苷照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条 件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(35 65)； 蒸发光散射检测器。理论塔板数按黄芪甲苷色谱峰计，不低于4000。本发明为胶囊剂，内容物为淡黄色至黄棕色颗粒，气微，味微苦，破瘀行气，补益脾 肺。用于糖尿病及早期糖尿病肾病的治疗，治疗时，口服本发明，一次2粒，一日3次。本发明制备方法简单，配伍得当，疗效好，无毒副作用，在治疗糖尿病及早期糖尿 病肾病方面有显著效果，是治疗糖尿病及早期糖尿病肾病上的创新，具有巨大的经济和社 会效益。
具体实施例方式以下结合实际情况对本发明的具体实施方式
作详细的说明。实施例1
本发明由姜黄提取物105g、黄芪提取物65g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉 碎过100目筛，混合均勻，加入淀粉、滑石粉各9g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。实施例2本发明也可由姜黄提取物117g、黄芪提取物75g制成，取姜黄提取物和黄芪提取 物，粉碎过100目筛，混合均勻，加入淀粉、滑石粉各Ilg混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒 0. 3g。实施例3本发明还可由姜黄提取物130g、黄芪提取物85g制成，取姜黄提取物和黄芪提取 物，粉碎过100目筛，混合均勻，加入淀粉、滑石粉各8g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒 0. 3g。中医通过调整失衡的阴阳，提高自身对血糖的利用和转化能力，从而降低血糖，而 不通过刺激B细胞分泌胰岛素来降低血糖，使用中药治疗从客观意义上说具有保护、修复 胰岛B细胞的作用。虽然在控制血糖方面中医药力度欠佳，但在缓解临床症状方面疗效却 很显著，中药迅速缓解患者临床症状，会给患者带来治病的信心，标本兼治。西药针对并发 症特别是糖尿病肾病无特殊有效的治疗方法和药物，而应用中药治疗糖尿病并发症疗效确 切。中药乃全天然药材，与西药对比，只要辨证正确，毒副作用极小，对胰岛B细胞没有刺激 作用，不会发生低血糖事件；只要配伍得当，不存在5年失效的问题。它对人体起到调节、强 壮的作用。本发明有效用于糖尿病及早期糖尿病肾病的治疗，并经实验得到充分证明，其实 验资料如下实验一本发明姜芪胶囊对病因性糖尿病模型小鼠的影响1实验材料1. 1药物本发明姜芪胶囊，药物分析学科制备；盐酸二甲双胍片，0. 25g/片，48 片/盒，批号08102。1.2试剂链脲佐菌素，sigma公司；葡萄糖，广东汕头市西陇化工厂，批号 081210;柠檬酸(分析纯)，湖北省医药公司化玻站，批号080523;柠檬酸钠(分析纯)，天 津市化学试剂批发部，批号080502;生理盐水，郑州化学药业有限公司，规格500ml/瓶，批 号080809 ；葡萄糖测定试剂盒浙江东殴生物有限公司，批号081001。1. 3仪器 752分光光度计，上海第三分析仪器厂；UV-2000分光光度计，尤尼柯 (上海)仪器有限公司；FA (N)/JA (N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；TGL-16G 高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；DZKW-4型电子恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪 器厂；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；OLYMPUS光学显微镜。1. 4动物小鼠，昆明种，SPF级，雄性，体重17 20g ；由河南医学动物实验中心 提供，许可证号:410115。1.5试液配制 pH = 4. 2枸橼酸缓冲液的配制0. lmol/L的枸橼酸123ml， 0. lmol/L枸橼酸钠77ml，临用前配制。10%福尔马林固定液的配制36%甲醛溶液10ml， 用蒸馏水配成100ml。2实验方法与结果取雄性小鼠72只，随机均勻分为6组，正常饲养3天，禁食12h后，空白对照组尾静脉注射同体积缓冲液，其余5组尾静脉注射链脲佐菌素30mg/kg(0. 02ml/10g, c :15mg/ ml)，并于第1次注射后第14天加注同等量的STZ。除空白对照组外每天上午灌服高浓度蔗 糖30g/kg，同时饮用5%蔗糖水，下午分别灌服大、中、小剂量本发明姜芪胶囊(600mg/kg、 300mg/kg、150mg/kg，配成浓度为 30mg/ml、15mg/ml、7. 5mg/ml，灌胃体积为 0. 2ml/10g)，二 甲双胍(0. 5g/kg，配成浓度为25mg/ml，灌胃体积为0. 2ml/10g)及同体积生理盐水。每天 给药1次，于给药第10、20天尾静脉取血测血糖值。第30天在禁食后12h末次给药后lh， 尾部采血测空腹血糖后，灌服葡萄糖(5g/kg，0.4ml/10g)，并分别于灌糖后30min、60min、 120min尾部采血，测不同时间血糖水平。处死小鼠后取胰腺、肾脏，10%福尔马林液固定，作 组织病理。结果见表1、表2、表3。数据分析用SPSS 12.0 for windows统计软件，计量资 料组间比较采用单因素方差分析，等级资料采用Ridit分析。表1本发明姜芪胶囊对小剂量链脲佐菌素加蔗糖致病因性糖尿病模型小鼠血糖的影响 土s) 与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从表1可以看出与空白组比，模型组各阶段血糖值显著升高，说明造模成功。 与模型组比，二甲双胍可明显降低造模小鼠给药后第10天血糖值(P<0. 05)，可显著降 低第20、30天血糖值(P <0.01)；大剂量本发明姜芪胶囊可明显降低第20天血糖值(P <0.05)，可显著降低第30天血糖值(P <0.01)；中剂量本发明姜芪胶囊可显著降低第30 天血糖值(P < 0. 01)，有降低第20天血糖值的趋势；小剂量本发明姜芪胶囊能显著降低小 鼠第30天血糖值(P<0.01)，对第10、20天的血糖值无明显影响。说明本发明姜芪胶囊和 二甲双胍均可不同程度地对抗模型小鼠的血糖升高。表2本发明姜芪胶囊对小剂量链脲佐菌素加蔗糖致病因性糖尿病模型小鼠糖耐量的影响 ±s) 与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出与空白组比，模型组在灌糖水后60min、120min血糖水平均显 著增高，说明造模小鼠糖耐量降低。与模型组比，二甲双胍可明显降低造模小鼠灌糖水后 30min血糖值(P < 0. 05)，可显著降低灌糖水60min、120min血糖值(P < 0. 01)；大剂量本 发明姜芪胶囊可明显降低30min、60min、120min血糖值(P < 0. 05)；中剂量本发明姜芪胶 囊可明显降低30min、60min、120min血糖值(P < 0. 05)；小剂量本发明姜芪胶囊明显降低 60min血糖值(P < 0. 05)。说明二甲双胍、大、中剂量本发明姜芪胶囊可改善糖尿病模型小 鼠的糖耐量降低。表3本发明姜芪胶囊对糖尿病模型小鼠肾脏和胰腺组织的影响 “_”为肾小管上皮细胞和肾小球及间质均正常；“ + ”肾小管上皮细胞有轻度水肿； “++”肾小管上皮细胞广泛水肿，间质伴有炎细胞浸润；“+++”肾小管上皮细胞广泛水肿和 间质大量炎细胞浸润及肾小球细胞增生，肾小囊腔变窄。“_”为胰岛细胞主要β细胞胞浆均丰富饱满；“ + ”为胰岛细胞主要β细胞出现 2 4个细胞萎缩，细胞胞浆明显减少；“++”为胰岛细胞主要β细胞出现5 9个细胞萎 缩，细胞胞浆明显减少；“+++”为胰岛细胞β细胞出现10个以上的细胞萎缩，胞浆明显减 少。从表3可以看出空白组肾小球、肾小管上皮细胞及间质基本正常。模型组肾脏 大部分肾小管上皮细胞水肿和间质的不同程度的炎细胞浸润，经Ridit检验P < 0.01，说 明造模小鼠出现肾脏损伤。与模型组比，二甲双胍组中一部分肾小球、肾小管上皮细胞及间 质正常，大部分肾小管上皮细胞水肿和间质的不同程度的炎细胞浸润(P >0.05)；大、中剂 量本发明姜芪胶囊组肾小球、肾小管上皮细胞及间质基本正常(P <0.01)；小剂量本发明 姜芪胶囊组肾小管上皮细胞出现不同程度的水肿，肾小球出现细胞增生，肾小囊变窄(P > 0. 05)。结果提示中剂量本发明姜芪胶囊对小剂量链脲佐菌素加蔗糖致病因性糖尿病模型 小鼠的肾脏的病变有保护作用，作用强于二甲双胍。从表3也可以看出空白组动物各胰岛细胞中的β细胞胞浆丰富饱满，模型组动 物胰岛细胞中β细胞明显萎缩，胞浆明显减少，经Ridit检验P <0.01，说明造模小鼠出现 胰腺损伤。与模型组比，二甲双胍可明显抵抗胰岛细胞中部分β细胞的萎缩，使部分胞浆 得到改善(P <0.05)；大剂量本发明姜芪胶囊可对抗部分β细胞萎缩，使大部分胞浆较丰 富(P <0.05)；中剂量本发明姜芪胶囊可对抗大部分β细胞的萎缩，使大部分胞浆得到明 显改善(P <0.05)；小剂量本发明姜芪胶囊对造模引起的β细胞萎缩和胞浆减少无显著影响(P >0.05)。结果提示大、中剂量本发明姜芪胶囊组和二甲双胍组对链脲佐菌素所 致的胰岛损伤有保护作用。实验二、本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠的影响1实验材料1. 1药物本发明姜芪胶囊，药物分析学科制备；盐酸二甲双胍片，0. 25g/片，48 片/盒，批号08102。1.2试剂链脲佐菌素，sigma公司；葡萄糖，广东汕头市西陇化工厂，批号 081210 ；柠檬酸(分析纯)，湖北省医药公司化玻站，批号080523 ；柠檬酸钠(分析纯)，天津 市化学试剂批发部，批号080502;生理盐水，郑州化学药业有限公司，规格500ml/瓶，批号 080809 ；葡萄糖测定试剂盒浙江东殴生物有限公司，批号081001 ；MAU检测试剂盒，南京建 成生物工程研究所，批号081120 ；Scr检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号081114 ； BUN检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号081108 ；NO检测试剂盒，南京建成生物工 程研究所，批号081110 ；NOS检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号0811161. 3仪器 752分光光度计，上海第三分析仪器厂；UV-2000分光光度计，尤尼柯 (上海)仪器有限公司；FA (N)/JA (N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；TGL-16G 高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；DZKW-4型电子恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪 器厂；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；OLYMPUS光学显微镜；日立H-7500透射 电子显微镜。1.4动物大鼠，SPF级，Wistar，雄性，体重165 185g，均由河南医学动物实验 中心提供，许可证号:410117。1.5试液配制 pH = 4. 2枸橼酸缓冲液的配制0. lmol/L的枸橼酸123ml， 0. lmol/L枸橼酸钠77ml，临用前配制。10%福尔马林固定液的配制36%甲醛溶液10ml，用 蒸馏水配成100ml。4%的戊二醛固定液的配制磷酸氢二钠35. 61g，用双蒸水配成IOOOml ； 磷酸二氢钠27. 60g，用双蒸水配成1000ml。取磷酸氢二钠溶液40. 5ml和磷酸二氢钠溶液 9. 5ml混勻后加入25%戊二醛16. 0ml，再加双蒸水至100ml。2实验方法与结果取大鼠100只，禁食12h后尾静脉注射链脲佐菌素60mg/kg (用pH为4. 2的枸橼酸 缓冲液配制)，另选10只设为完全空白对照组，尾静脉注射等体积的枸橼酸缓冲液。第10 天尾部取血测血糖值，选取血糖值> 11. lmmol/L并具有明显多饮、多食、多尿症状的大鼠 50只，按血糖值随机均分为5组，分别灌大中、小、剂量本发明姜芪胶囊(300mg/kg、150mg/ kg、75mg/kg，配成浓度为 30mg/ml、15mg/ml、7. 5mg/ml，灌胃体积均为 lml/100g)，二 甲双胍 片250mg/kg(25mg/ml，lml/100g)，模型组与空白对照组给予同体积生理盐水，每天给药1 次，连续给药40天，分别于给药的第10、20、30天测空腹血糖值，每次测血糖前观察尿量，于 最后一次测血糖前一天禁食，代谢笼收集12小时夜尿，离心(3000rpm/min) 10分钟，冷藏代 用；灌药2h后，取血，分离血清。处死大鼠后取胰脏、肾脏作常规病理，取肾脏作透射电镜观 察。数据分析用SPSS 10.0 for windows统计软件，计量资料组间比较采用单因素方差分 析，等级资料采用Ri dit分析。胸腺皮质厚度及淋巴细胞数的测定方法用测微尺测得胸 腺皮质最宽处和最窄处，求均值为皮质厚度；将测微尺基线压在胸腺皮质上的淋巴细胞计 数，求均值为淋巴细胞数。结果见表4、表5、表6、表7、表8。
表4本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠血糖的影响(I 士s) 与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出与空白组比，模型组血糖水平显著高于空白组(P <0.01)，说明 链脲佐菌素造糖尿病肾病模型成功。与模型组比，二甲双胍可显著降低给药后第20、30、40 天血糖值(P < 0. 01)，对第10天血糖值无明显影响；大剂量本发明姜芪胶囊可明显降低第 20天血糖值(P <0.05)，可显著降低第30、40天血糖值(P < 0. 01)；中剂量本发明姜芪胶 囊可显著降低第20、30、40天血糖值，有降低第10天血糖值趋势；小剂量本发明姜芪胶囊可 明显降低第30天血糖值(P < 0. 05)、显著降低第40天血糖值(P < 0. 05)。表5 玉米须总皂苷对糖尿病肾病模型大鼠血肌酐、尿肌酐、肾指数的影响
(X 士S)
与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出模型组大鼠血肌酐、尿肌酐、肾指数显著升高(P < 0. 01)。与模 型组比，大、中、小剂量玉米须总皂苷可显著降低血肌酐、尿肌酐、肾指数值(P < 0.01)。表6本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠血BUN、MAU、Ccr的影响 土s) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出，与空白组比，模型组BUN、MAU、Ccr显著升高。与模型组比，二甲 双胍可显著降低BUN、MAU值(P < 0. 01)；大、中剂量本发明姜芪胶囊可显著降低BUN、MAU 值(P < 0.01)；小剂量本发明姜芪胶囊可明显降低BUN(P < 0.05)、显著降低MAU值(P < 0. 01)，中、小剂量本发明姜芪胶囊可明显降低Ccr (P < 0. 05)。表7姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠N0、N0S水平的影响 土s) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05 ；从上表可以看出与空白组比，模型组N0、N0S均显著升高(P < 0. 01)。与模型组 比，二甲双胍可显著降低N0、N0S水平(P<0.01)；大、中、小剂量本发明姜芪胶囊可显著降 低 NO、NOS 水平(P < 0.01)。表8本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠肾脏和胰腺组织的影响 “_”为肾小管上皮细胞和肾小球及间质均正常；“ + ’ “++”肾小管上皮细胞广泛水肿，间质伴有炎细胞浸润；“+++ 间质大量炎细胞浸润及肾小球细胞增生，肾小囊腔变窄。
肾小管上皮细胞有轻度水肿； ’肾小管上皮细胞广泛水肿和
“_”为胰岛细胞主要β细胞胞浆均丰富饱满；“ + ”为胰岛细胞主要β细胞出现 2 4个细胞萎缩，细胞胞浆明显减少；“++”为胰岛细胞主要β细胞出现5 9个细胞萎 缩，细胞胞浆明显减少；“+++”为胰岛细胞β细胞出现10个以上的细胞萎缩，胞浆明显减 少。从上表可以看出空白组大鼠的肾小球、肾小管上皮细胞及间质基本正常。模型 组大鼠肾脏广泛的肾小管上皮细胞水肿和间质不同程度的炎细胞浸润，经Ridit检验P <0.01，说明造模大鼠的肾脏发生损伤。与模型组比，大剂量及中剂量本发明姜芪胶囊可保 护肾小球、肾小管上皮细胞，使其得到显著改善(P < 0. 01)，二甲双胍组和小剂量本发明姜 芪胶囊可部分改善肾小管上皮细胞的广泛水肿和间质炎细胞的浸润(P < 0. 05)。结果提 示本发明姜芪胶囊组对链脲佐菌素所致模型大鼠的肾脏损伤有较好的保护作用。从上表也可以看出空白组大鼠各胰岛细胞中的β细胞胞浆丰富饱满，模型组大 鼠胰岛细胞中β细胞明显萎缩，胞浆明显减少，经Ridit检验P <0.01，说明造模大鼠胰 腺发生损伤。与模型组比，二甲双胍可部分抵抗β细胞萎缩，使部分细胞胞浆得到恢复(P >0.05)；大、中剂量本发明姜芪胶囊可对抗大部分β细胞萎缩，使大部分胞浆得到显著改 善(P <0.01)；小剂量本发明姜芪胶囊可对抗部分β细胞萎缩，使部分胞浆有所改善(Ρ> 0. 05)。结果提示大、中剂量本发明姜芪胶囊对链脲佐菌素所致的胰岛损伤有保护作用，作 用明显强于二甲双胍组。表9本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠胸腺皮质厚度、淋巴细胞数的影响 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表及光镜下对糖尿病大鼠胸腺组织的观察可以看出模型组大鼠的胸腺皮质 出现不同程度的皮质厚度变薄、细胞稀疏等病理改变。与模型组比，大、中、小剂量本发明姜 芪胶囊组大鼠胸腺皮质厚度有显著改善(P < 0.01)，淋巴细胞数有显著增加(P < 0. 01)。表10本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠肾小管上皮细胞线粒体体密度(Vv)、比表面(δ )、比膜面(δ m)的影响(单位μ m3，μ m2) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05
表11本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠肾小管上皮细胞核比表面(δ )、异、常染色质的体密度(Vv)的影响(单位μ m3，μ m2) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出空白组近曲小管上皮细胞有排列整齐而密集的微绒毛，胞浆内 有丰富的线粒体存在，大部分线粒体嵴排列密集，嵴间隙少部分增宽，远曲小管上皮细胞无 微绒毛，胞浆内含有丰富的线粒体，部分线粒体嵴排列密集，部分线粒体嵴排列紊乱，嵴间 腔有所增宽，核周出许多空胞，呈现水肿状态；模型组近曲小管上皮细胞有排列整齐而密集 的微绒毛呈横切面，细胞核呈不规则皱缩，染色质呈现异染色质增多而常染色质减少，胞浆 内线粒体大多数呈水肿状态，嵴呈现不规则，嵴间腔大小不等，部分线粒体嵴溶解或消失。 远曲小管上皮细胞呈现水肿状态，胞浆内特别是核周围出现大小不一的空泡，基质溶解，线 粒体明显减少，嵴部分溶解消失，嵴间腔增大，少部分线粒体嵴排列整齐密集，核膜部分出 现皱折，染色质降解。与模型组比，各剂量本发明姜芪胶囊可不同程度地改善上述肾脏超微 结构的改变。成组资料t检验表明，造模后肾小管上皮细胞线粒体体密度(线粒体Vv)、比 膜面(δ m)、常染色质体密度(常染色质Vv)均显著降低(P < 0. 01)，比表面(δ )、核比表 面(核S)、异染色质体密度(异染色质Vv)均显著升高(P <0.01)。大、中、小本发明姜芪 胶囊均可显著升高肾小管上皮细胞线粒体Vv、δ m、常染色质Vv (P < 0. 01)，均可显著降低 S、核3、异染色质*( <0.01)。大、中、小剂量本发明姜芪胶囊均可显著升高肾小管上 皮近曲小管常染色质Vv (P <0.01),可显著降高近曲小管核(δ )、异染色质Vv (P <0.01)； 大、中、小剂量本发明姜芪胶囊均可显著降低肾小管上皮远曲小管核(S)、常染色质Vv(P <0.01),可显著升高远曲小管异染色质Vv (P < 0. 01)。结论本发明姜芪胶囊能明显降低和改善小剂量链脲佐菌素加高糖饮食所致高血 糖小鼠模型血糖水平及糖耐量降低，可明显对抗小鼠胰岛细胞中β细胞萎缩，使胞浆得到 明显恢复，可一定程度上改善造模小鼠胰腺组织病理变化，对糖尿病模型小鼠的肾脏有保 护作用，作用与二甲双胍相当；不同剂量本发明姜芪胶囊可不同程度降低链脲佐菌素所致 糖尿病模型大鼠血清中血糖、肌酐、尿素氮、N0、N0S，尿液中尿微量白蛋白、肌酐和内生肌酐 清除率等指标的水平，通过光镜观察分析表明本发明姜芪胶囊可以保护造模大鼠的胰岛 细胞，对抗造模药物对胰岛细胞的损伤；对造模大鼠的肾脏有保护作用，可减轻远曲小管上 皮细胞水肿状态；电镜观察分析表明本发明姜芪胶囊可增加大鼠肾小管上皮细胞线粒体 数量，减少线粒体异染色质数量，减轻线粒体嵴的溶解和消失；通过对组织微观结构的改善 一定程度上有利于延缓糖尿病大鼠肾脏的病变过程。通过实验结果的分析，本发明姜芪胶囊延缓和改善糖尿病大鼠所致肾脏病变的作
用可能与其降低血糖、降低尿微量白蛋白、肌酐、尿素氮、内生肌酐清除率水平、降低血清中NO、NOS水平，改善造模动物的组织病理改变等因素有关，从而延缓糖尿病肾病的发生和发展。
权利要求
一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由姜黄提取物105～130g、黄芪提取物65～85g、淀粉、滑石粉制成，姜黄提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；淀粉、滑石粉加入量≤姜黄提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；所说的姜黄提取物是，称取粉碎后的姜黄药材，放入微波提取罐内，乙醇用量为姜黄药材重量的20倍，即姜黄与乙醇的重量比为1∶20，提取温度50℃，提取时间30min，提取功率200W，得姜黄粗提液备用；S 8大孔吸附树脂纯化S 8大孔吸附树脂先用乙醇浸泡24小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用；将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将姜黄粗提液以1mL/min流速通过层析柱进行吸附，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用8倍树脂体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得姜黄提取物；分光光度法测定，本品含总姜黄素以姜黄素计不少于58.0％；HPLC法测定，本品每1g含姜黄以姜黄素(C21H20O6)计，不得少于15.0％。所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用70％的乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水适量，静置，滤过，得黄芪样品提取液。取黄芪乙醇提取液，150mg/ml，回收乙醇至无醇味，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，继用8倍树脂体积的30％乙醇洗去杂质，再用8倍树脂体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得黄芪提取物；分光光度法测定，本品含总皂苷以黄芪甲苷计不少于75.0％；HPLC法测定，本品每1g含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于7.2％。
2.根据权利要求1所述的治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由 姜黄提取物105g、黄芪提取物65g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉碎过100目筛，混合 均勻，加入淀粉、滑石粉各9g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。
3.根据权利要求1所述的治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由 姜黄提取物117g、黄芪提取物75g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉碎过100目筛，混合 均勻，加入淀粉、滑石粉各Ilg混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。
4.根据权利要求1所述的治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由 姜黄提取物130g、黄芪提取物85g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉碎过100目筛，混合 均勻，加入淀粉、滑石粉各8g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。
全文摘要
本发明涉及一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，可有效解决糖尿病及早期糖尿病肾病治疗的问题，本发明由姜黄提取物105～130g、黄芪提取物(主要是黄芪总皂苷)65～85g、淀粉、滑石粉制成，姜黄提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；淀粉、滑石粉加入量≤姜黄提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比约为1∶1。本发明制备方法简单，配伍得当，疗效好，无毒副作用，在治疗糖尿病及早期糖尿病肾病方面有显著效果，是治疗糖尿病及早期糖尿病肾病上的创新，具有巨大的经济和社会效益。
文档编号A61P13/12GK101912565SQ20101018176
公开日2010年12月15日 申请日期2010年5月25日 优先权日2010年5月25日
发明者苗明三 申请人:河南中医学院
技术领域：
本发明涉及中药领域，特别是一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊。
背景技术：
糖尿病是一个在全球范围内发病率快速增长的疾病，根据世界卫生组织的统计， 1998年全世界糖尿病人数为1. 35亿，2000年达到1. 6亿，2004年达2. 4亿。预计到2030 年将达到3. 7亿。全世界糖尿病患病人数最多的前三个国家是印度、中国和美国。目前我 国糖尿病的患病率在3%以上，糖尿病的患病人数估计已达5000万左右。糖尿病在全国各 地各阶层的发病率都很高，已成为威胁人类健康的第四大杀手。糖尿病的可怕并不在于糖尿病本身，而在于其并发症。糖尿病的并发症对患者的 长期健康有害，影响生活质量及预期寿命，是糖尿病人致残和死亡的主要原因。糖尿病肾病 (DiabeticNephropathy,DN)是指糖尿病(Diabetes mellitus，DM)微血管病变所引起的肾 脏结构和功能的改变，是DM常见和严重的远期并发症之一。随着人民生活水平的提高、人 口老龄化及生活方式的改变，世界范围内，DM发病率日益增多，DN也随之急剧增加。在西 方国家DN已成为终末期肾脏病(End stage renal disease,ESRD)的主要原因，约40%的 ESRD患者是由DN所致，每年新增ESRD患者中50%以上是由DN引发。在我国DM患病率也 不断增高，据估计我国DM患者已超过4000万。我国因DN而发生慢性肾衰竭的人数也逐年 上升。DM病人一旦发生肾损害表现，持续性尿蛋白难以逆转，最终进展到终末期肾功能衰 竭。因此如何早期防止DM向DN发展，或采用有效的措施阻止DN向终末期进展，是国内外 学者研究的热点之一。目前现代医学对于糖尿病并发症特别是糖尿病肾病尚缺乏行之有效的治疗药物， 现代医学对糖尿病的认识要晚于中医，借助了解剖学及生化、病理学的研究方法，比较清楚 地认识到糖尿病的内在病理变化及临床类型，随着胰岛素的人工合成与化学合成降糖药在 临床上的广泛使用，糖尿病的血糖控制在大多数情况下能够实现。但是，单纯降糖作用对 并发症多无明确的疗效，且易产生耐药性。很多服用降糖药及注射胰岛素治疗的病人随着 时间的延长，药量会逐渐增加，投入的药物种类也常由单一逐渐变为联合，长期应用剌激胰 岛，使胰腺长期处于紧张的工作状态，最终导致胰岛功能障碍，同时出现血糖反复反弹，血 液流变学改变，形成血黏稠度增加，血微循环发生障碍，最后致心、脑、肾并发症及体重增 加，水肿，肝药酶升高等不良反应。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明的目的就在于提供一种治疗糖尿 病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，可有效解决糖尿病及早期糖尿病肾病治疗的问题，本发 明由姜黄提取物105 130g、黄芪提取物(主要是黄芪总皂苷)65 85g、淀粉、滑石粉制 成，姜黄提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均勻，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒， 装入胶囊，即得；
淀粉、滑石粉加入量<姜黄提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10%，淀 粉、滑石粉重量比约为1 1。所说的姜黄提取物是，称取粉碎后的姜黄药材，放入微波提取罐内，乙醇用量为姜 黄药材重量的20倍，即姜黄与乙醇的重量比为1 20，提取温度50°C，提取时间30min，提 取功率200W，得姜黄粗提液备用；S-8大孔吸附树脂纯化S_8大孔吸附树脂先用乙醇浸泡24小时，用蒸馏水洗涤至 无醇后备用；将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将姜黄粗提液以lmL/min流速通过层析 柱进行吸附，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用8倍树脂体积的无水乙醇洗脱，收集无 水乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得姜黄提取物，得率约3. 5%，本品为黄色的粉末， 味苦，分光光度法测定，本品含总姜黄素以姜黄素计不少于58. 0% ；HPLC法测定，本品每Ig 含姜黄以姜黄素(C21H200 6)计，不得少于15.0%。总姜黄素照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V )测定，本品含总姜黄 素以姜黄素计不少于58.0%。姜黄素照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件 与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0. 5%醋酸水溶 液(45 55)，流速1.01^.1^11-1，检测波长43011111，柱温301，理论塔板数按姜黄素峰计，不 低于4000。所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用70%的乙醇回流提取2次，第一次加 入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1. 5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙 醇提取lh，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水适量，静置，滤过，得黄芪样 品提取液。取黄芪乙醇提取液(150mg/ml)，回收乙醇至无醇味，过大孔吸附树脂柱，先用4 倍树脂体积的水洗脱，继用8倍树脂体积的30%乙醇洗去杂质，再用8倍树脂体积的70% 乙醇洗脱，收集70 %乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率约3 %，本 品为淡黄色的粉末，味微苦；分光光度法测定，本品含总皂苷以黄芪甲苷计不少于75.0% ； HPLC法测定，本品每Ig含黄芪以黄芪甲苷(C41H68014)计，不得少于7.2%。黄芪总皂苷将黄芪提取物用分光光度法(中国药典2005年版一部附录V )测 定，本品含黄芪总皂苷以黄芪甲苷计不少于75. 0%。黄芪甲苷照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条 件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(35 65)； 蒸发光散射检测器。理论塔板数按黄芪甲苷色谱峰计，不低于4000。本发明为胶囊剂，内容物为淡黄色至黄棕色颗粒，气微，味微苦，破瘀行气，补益脾 肺。用于糖尿病及早期糖尿病肾病的治疗，治疗时，口服本发明，一次2粒，一日3次。本发明制备方法简单，配伍得当，疗效好，无毒副作用，在治疗糖尿病及早期糖尿 病肾病方面有显著效果，是治疗糖尿病及早期糖尿病肾病上的创新，具有巨大的经济和社 会效益。
具体实施例方式以下结合实际情况对本发明的具体实施方式
作详细的说明。实施例1
本发明由姜黄提取物105g、黄芪提取物65g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉 碎过100目筛，混合均勻，加入淀粉、滑石粉各9g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。实施例2本发明也可由姜黄提取物117g、黄芪提取物75g制成，取姜黄提取物和黄芪提取 物，粉碎过100目筛，混合均勻，加入淀粉、滑石粉各Ilg混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒 0. 3g。实施例3本发明还可由姜黄提取物130g、黄芪提取物85g制成，取姜黄提取物和黄芪提取 物，粉碎过100目筛，混合均勻，加入淀粉、滑石粉各8g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒 0. 3g。中医通过调整失衡的阴阳，提高自身对血糖的利用和转化能力，从而降低血糖，而 不通过刺激B细胞分泌胰岛素来降低血糖，使用中药治疗从客观意义上说具有保护、修复 胰岛B细胞的作用。虽然在控制血糖方面中医药力度欠佳，但在缓解临床症状方面疗效却 很显著，中药迅速缓解患者临床症状，会给患者带来治病的信心，标本兼治。西药针对并发 症特别是糖尿病肾病无特殊有效的治疗方法和药物，而应用中药治疗糖尿病并发症疗效确 切。中药乃全天然药材，与西药对比，只要辨证正确，毒副作用极小，对胰岛B细胞没有刺激 作用，不会发生低血糖事件；只要配伍得当，不存在5年失效的问题。它对人体起到调节、强 壮的作用。本发明有效用于糖尿病及早期糖尿病肾病的治疗，并经实验得到充分证明，其实 验资料如下实验一本发明姜芪胶囊对病因性糖尿病模型小鼠的影响1实验材料1. 1药物本发明姜芪胶囊，药物分析学科制备；盐酸二甲双胍片，0. 25g/片，48 片/盒，批号08102。1.2试剂链脲佐菌素，sigma公司；葡萄糖，广东汕头市西陇化工厂，批号 081210;柠檬酸(分析纯)，湖北省医药公司化玻站，批号080523;柠檬酸钠(分析纯)，天 津市化学试剂批发部，批号080502;生理盐水，郑州化学药业有限公司，规格500ml/瓶，批 号080809 ；葡萄糖测定试剂盒浙江东殴生物有限公司，批号081001。1. 3仪器 752分光光度计，上海第三分析仪器厂；UV-2000分光光度计，尤尼柯 (上海)仪器有限公司；FA (N)/JA (N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；TGL-16G 高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；DZKW-4型电子恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪 器厂；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；OLYMPUS光学显微镜。1. 4动物小鼠，昆明种，SPF级，雄性，体重17 20g ；由河南医学动物实验中心 提供，许可证号:410115。1.5试液配制 pH = 4. 2枸橼酸缓冲液的配制0. lmol/L的枸橼酸123ml， 0. lmol/L枸橼酸钠77ml，临用前配制。10%福尔马林固定液的配制36%甲醛溶液10ml， 用蒸馏水配成100ml。2实验方法与结果取雄性小鼠72只，随机均勻分为6组，正常饲养3天，禁食12h后，空白对照组尾静脉注射同体积缓冲液，其余5组尾静脉注射链脲佐菌素30mg/kg(0. 02ml/10g, c :15mg/ ml)，并于第1次注射后第14天加注同等量的STZ。除空白对照组外每天上午灌服高浓度蔗 糖30g/kg，同时饮用5%蔗糖水，下午分别灌服大、中、小剂量本发明姜芪胶囊(600mg/kg、 300mg/kg、150mg/kg，配成浓度为 30mg/ml、15mg/ml、7. 5mg/ml，灌胃体积为 0. 2ml/10g)，二 甲双胍(0. 5g/kg，配成浓度为25mg/ml，灌胃体积为0. 2ml/10g)及同体积生理盐水。每天 给药1次，于给药第10、20天尾静脉取血测血糖值。第30天在禁食后12h末次给药后lh， 尾部采血测空腹血糖后，灌服葡萄糖(5g/kg，0.4ml/10g)，并分别于灌糖后30min、60min、 120min尾部采血，测不同时间血糖水平。处死小鼠后取胰腺、肾脏，10%福尔马林液固定，作 组织病理。结果见表1、表2、表3。数据分析用SPSS 12.0 for windows统计软件，计量资 料组间比较采用单因素方差分析，等级资料采用Ridit分析。表1本发明姜芪胶囊对小剂量链脲佐菌素加蔗糖致病因性糖尿病模型小鼠血糖的影响 土s) 与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从表1可以看出与空白组比，模型组各阶段血糖值显著升高，说明造模成功。 与模型组比，二甲双胍可明显降低造模小鼠给药后第10天血糖值(P<0. 05)，可显著降 低第20、30天血糖值(P <0.01)；大剂量本发明姜芪胶囊可明显降低第20天血糖值(P <0.05)，可显著降低第30天血糖值(P <0.01)；中剂量本发明姜芪胶囊可显著降低第30 天血糖值(P < 0. 01)，有降低第20天血糖值的趋势；小剂量本发明姜芪胶囊能显著降低小 鼠第30天血糖值(P<0.01)，对第10、20天的血糖值无明显影响。说明本发明姜芪胶囊和 二甲双胍均可不同程度地对抗模型小鼠的血糖升高。表2本发明姜芪胶囊对小剂量链脲佐菌素加蔗糖致病因性糖尿病模型小鼠糖耐量的影响 ±s) 与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出与空白组比，模型组在灌糖水后60min、120min血糖水平均显 著增高，说明造模小鼠糖耐量降低。与模型组比，二甲双胍可明显降低造模小鼠灌糖水后 30min血糖值(P < 0. 05)，可显著降低灌糖水60min、120min血糖值(P < 0. 01)；大剂量本 发明姜芪胶囊可明显降低30min、60min、120min血糖值(P < 0. 05)；中剂量本发明姜芪胶 囊可明显降低30min、60min、120min血糖值(P < 0. 05)；小剂量本发明姜芪胶囊明显降低 60min血糖值(P < 0. 05)。说明二甲双胍、大、中剂量本发明姜芪胶囊可改善糖尿病模型小 鼠的糖耐量降低。表3本发明姜芪胶囊对糖尿病模型小鼠肾脏和胰腺组织的影响 “_”为肾小管上皮细胞和肾小球及间质均正常；“ + ”肾小管上皮细胞有轻度水肿； “++”肾小管上皮细胞广泛水肿，间质伴有炎细胞浸润；“+++”肾小管上皮细胞广泛水肿和 间质大量炎细胞浸润及肾小球细胞增生，肾小囊腔变窄。“_”为胰岛细胞主要β细胞胞浆均丰富饱满；“ + ”为胰岛细胞主要β细胞出现 2 4个细胞萎缩，细胞胞浆明显减少；“++”为胰岛细胞主要β细胞出现5 9个细胞萎 缩，细胞胞浆明显减少；“+++”为胰岛细胞β细胞出现10个以上的细胞萎缩，胞浆明显减 少。从表3可以看出空白组肾小球、肾小管上皮细胞及间质基本正常。模型组肾脏 大部分肾小管上皮细胞水肿和间质的不同程度的炎细胞浸润，经Ridit检验P < 0.01，说 明造模小鼠出现肾脏损伤。与模型组比，二甲双胍组中一部分肾小球、肾小管上皮细胞及间 质正常，大部分肾小管上皮细胞水肿和间质的不同程度的炎细胞浸润(P >0.05)；大、中剂 量本发明姜芪胶囊组肾小球、肾小管上皮细胞及间质基本正常(P <0.01)；小剂量本发明 姜芪胶囊组肾小管上皮细胞出现不同程度的水肿，肾小球出现细胞增生，肾小囊变窄(P > 0. 05)。结果提示中剂量本发明姜芪胶囊对小剂量链脲佐菌素加蔗糖致病因性糖尿病模型 小鼠的肾脏的病变有保护作用，作用强于二甲双胍。从表3也可以看出空白组动物各胰岛细胞中的β细胞胞浆丰富饱满，模型组动 物胰岛细胞中β细胞明显萎缩，胞浆明显减少，经Ridit检验P <0.01，说明造模小鼠出现 胰腺损伤。与模型组比，二甲双胍可明显抵抗胰岛细胞中部分β细胞的萎缩，使部分胞浆 得到改善(P <0.05)；大剂量本发明姜芪胶囊可对抗部分β细胞萎缩，使大部分胞浆较丰 富(P <0.05)；中剂量本发明姜芪胶囊可对抗大部分β细胞的萎缩，使大部分胞浆得到明 显改善(P <0.05)；小剂量本发明姜芪胶囊对造模引起的β细胞萎缩和胞浆减少无显著影响(P >0.05)。结果提示大、中剂量本发明姜芪胶囊组和二甲双胍组对链脲佐菌素所 致的胰岛损伤有保护作用。实验二、本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠的影响1实验材料1. 1药物本发明姜芪胶囊，药物分析学科制备；盐酸二甲双胍片，0. 25g/片，48 片/盒，批号08102。1.2试剂链脲佐菌素，sigma公司；葡萄糖，广东汕头市西陇化工厂，批号 081210 ；柠檬酸(分析纯)，湖北省医药公司化玻站，批号080523 ；柠檬酸钠(分析纯)，天津 市化学试剂批发部，批号080502;生理盐水，郑州化学药业有限公司，规格500ml/瓶，批号 080809 ；葡萄糖测定试剂盒浙江东殴生物有限公司，批号081001 ；MAU检测试剂盒，南京建 成生物工程研究所，批号081120 ；Scr检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号081114 ； BUN检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号081108 ；NO检测试剂盒，南京建成生物工 程研究所，批号081110 ；NOS检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号0811161. 3仪器 752分光光度计，上海第三分析仪器厂；UV-2000分光光度计，尤尼柯 (上海)仪器有限公司；FA (N)/JA (N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；TGL-16G 高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；DZKW-4型电子恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪 器厂；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；OLYMPUS光学显微镜；日立H-7500透射 电子显微镜。1.4动物大鼠，SPF级，Wistar，雄性，体重165 185g，均由河南医学动物实验 中心提供，许可证号:410117。1.5试液配制 pH = 4. 2枸橼酸缓冲液的配制0. lmol/L的枸橼酸123ml， 0. lmol/L枸橼酸钠77ml，临用前配制。10%福尔马林固定液的配制36%甲醛溶液10ml，用 蒸馏水配成100ml。4%的戊二醛固定液的配制磷酸氢二钠35. 61g，用双蒸水配成IOOOml ； 磷酸二氢钠27. 60g，用双蒸水配成1000ml。取磷酸氢二钠溶液40. 5ml和磷酸二氢钠溶液 9. 5ml混勻后加入25%戊二醛16. 0ml，再加双蒸水至100ml。2实验方法与结果取大鼠100只，禁食12h后尾静脉注射链脲佐菌素60mg/kg (用pH为4. 2的枸橼酸 缓冲液配制)，另选10只设为完全空白对照组，尾静脉注射等体积的枸橼酸缓冲液。第10 天尾部取血测血糖值，选取血糖值> 11. lmmol/L并具有明显多饮、多食、多尿症状的大鼠 50只，按血糖值随机均分为5组，分别灌大中、小、剂量本发明姜芪胶囊(300mg/kg、150mg/ kg、75mg/kg，配成浓度为 30mg/ml、15mg/ml、7. 5mg/ml，灌胃体积均为 lml/100g)，二 甲双胍 片250mg/kg(25mg/ml，lml/100g)，模型组与空白对照组给予同体积生理盐水，每天给药1 次，连续给药40天，分别于给药的第10、20、30天测空腹血糖值，每次测血糖前观察尿量，于 最后一次测血糖前一天禁食，代谢笼收集12小时夜尿，离心(3000rpm/min) 10分钟，冷藏代 用；灌药2h后，取血，分离血清。处死大鼠后取胰脏、肾脏作常规病理，取肾脏作透射电镜观 察。数据分析用SPSS 10.0 for windows统计软件，计量资料组间比较采用单因素方差分 析，等级资料采用Ri dit分析。胸腺皮质厚度及淋巴细胞数的测定方法用测微尺测得胸 腺皮质最宽处和最窄处，求均值为皮质厚度；将测微尺基线压在胸腺皮质上的淋巴细胞计 数，求均值为淋巴细胞数。结果见表4、表5、表6、表7、表8。
表4本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠血糖的影响(I 士s) 与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出与空白组比，模型组血糖水平显著高于空白组(P <0.01)，说明 链脲佐菌素造糖尿病肾病模型成功。与模型组比，二甲双胍可显著降低给药后第20、30、40 天血糖值(P < 0. 01)，对第10天血糖值无明显影响；大剂量本发明姜芪胶囊可明显降低第 20天血糖值(P <0.05)，可显著降低第30、40天血糖值(P < 0. 01)；中剂量本发明姜芪胶 囊可显著降低第20、30、40天血糖值，有降低第10天血糖值趋势；小剂量本发明姜芪胶囊可 明显降低第30天血糖值(P < 0. 05)、显著降低第40天血糖值(P < 0. 05)。表5 玉米须总皂苷对糖尿病肾病模型大鼠血肌酐、尿肌酐、肾指数的影响
(X 士S)
与模型组比，**表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出模型组大鼠血肌酐、尿肌酐、肾指数显著升高(P < 0. 01)。与模 型组比，大、中、小剂量玉米须总皂苷可显著降低血肌酐、尿肌酐、肾指数值(P < 0.01)。表6本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠血BUN、MAU、Ccr的影响 土s) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出，与空白组比，模型组BUN、MAU、Ccr显著升高。与模型组比，二甲 双胍可显著降低BUN、MAU值(P < 0. 01)；大、中剂量本发明姜芪胶囊可显著降低BUN、MAU 值(P < 0.01)；小剂量本发明姜芪胶囊可明显降低BUN(P < 0.05)、显著降低MAU值(P < 0. 01)，中、小剂量本发明姜芪胶囊可明显降低Ccr (P < 0. 05)。表7姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠N0、N0S水平的影响 土s) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05 ；从上表可以看出与空白组比，模型组N0、N0S均显著升高(P < 0. 01)。与模型组 比，二甲双胍可显著降低N0、N0S水平(P<0.01)；大、中、小剂量本发明姜芪胶囊可显著降 低 NO、NOS 水平(P < 0.01)。表8本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠肾脏和胰腺组织的影响 “_”为肾小管上皮细胞和肾小球及间质均正常；“ + ’ “++”肾小管上皮细胞广泛水肿，间质伴有炎细胞浸润；“+++ 间质大量炎细胞浸润及肾小球细胞增生，肾小囊腔变窄。
肾小管上皮细胞有轻度水肿； ’肾小管上皮细胞广泛水肿和
“_”为胰岛细胞主要β细胞胞浆均丰富饱满；“ + ”为胰岛细胞主要β细胞出现 2 4个细胞萎缩，细胞胞浆明显减少；“++”为胰岛细胞主要β细胞出现5 9个细胞萎 缩，细胞胞浆明显减少；“+++”为胰岛细胞β细胞出现10个以上的细胞萎缩，胞浆明显减 少。从上表可以看出空白组大鼠的肾小球、肾小管上皮细胞及间质基本正常。模型 组大鼠肾脏广泛的肾小管上皮细胞水肿和间质不同程度的炎细胞浸润，经Ridit检验P <0.01，说明造模大鼠的肾脏发生损伤。与模型组比，大剂量及中剂量本发明姜芪胶囊可保 护肾小球、肾小管上皮细胞，使其得到显著改善(P < 0. 01)，二甲双胍组和小剂量本发明姜 芪胶囊可部分改善肾小管上皮细胞的广泛水肿和间质炎细胞的浸润(P < 0. 05)。结果提 示本发明姜芪胶囊组对链脲佐菌素所致模型大鼠的肾脏损伤有较好的保护作用。从上表也可以看出空白组大鼠各胰岛细胞中的β细胞胞浆丰富饱满，模型组大 鼠胰岛细胞中β细胞明显萎缩，胞浆明显减少，经Ridit检验P <0.01，说明造模大鼠胰 腺发生损伤。与模型组比，二甲双胍可部分抵抗β细胞萎缩，使部分细胞胞浆得到恢复(P >0.05)；大、中剂量本发明姜芪胶囊可对抗大部分β细胞萎缩，使大部分胞浆得到显著改 善(P <0.01)；小剂量本发明姜芪胶囊可对抗部分β细胞萎缩，使部分胞浆有所改善(Ρ> 0. 05)。结果提示大、中剂量本发明姜芪胶囊对链脲佐菌素所致的胰岛损伤有保护作用，作 用明显强于二甲双胍组。表9本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠胸腺皮质厚度、淋巴细胞数的影响 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表及光镜下对糖尿病大鼠胸腺组织的观察可以看出模型组大鼠的胸腺皮质 出现不同程度的皮质厚度变薄、细胞稀疏等病理改变。与模型组比，大、中、小剂量本发明姜 芪胶囊组大鼠胸腺皮质厚度有显著改善(P < 0.01)，淋巴细胞数有显著增加(P < 0. 01)。表10本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠肾小管上皮细胞线粒体体密度(Vv)、比表面(δ )、比膜面(δ m)的影响(单位μ m3，μ m2) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05
表11本发明姜芪胶囊对糖尿病肾病模型大鼠肾小管上皮细胞核比表面(δ )、异、常染色质的体密度(Vv)的影响(单位μ m3，μ m2) 与模型组相比，#表示P < 0. 01，*表示P < 0. 05从上表可以看出空白组近曲小管上皮细胞有排列整齐而密集的微绒毛，胞浆内 有丰富的线粒体存在，大部分线粒体嵴排列密集，嵴间隙少部分增宽，远曲小管上皮细胞无 微绒毛，胞浆内含有丰富的线粒体，部分线粒体嵴排列密集，部分线粒体嵴排列紊乱，嵴间 腔有所增宽，核周出许多空胞，呈现水肿状态；模型组近曲小管上皮细胞有排列整齐而密集 的微绒毛呈横切面，细胞核呈不规则皱缩，染色质呈现异染色质增多而常染色质减少，胞浆 内线粒体大多数呈水肿状态，嵴呈现不规则，嵴间腔大小不等，部分线粒体嵴溶解或消失。 远曲小管上皮细胞呈现水肿状态，胞浆内特别是核周围出现大小不一的空泡，基质溶解，线 粒体明显减少，嵴部分溶解消失，嵴间腔增大，少部分线粒体嵴排列整齐密集，核膜部分出 现皱折，染色质降解。与模型组比，各剂量本发明姜芪胶囊可不同程度地改善上述肾脏超微 结构的改变。成组资料t检验表明，造模后肾小管上皮细胞线粒体体密度(线粒体Vv)、比 膜面(δ m)、常染色质体密度(常染色质Vv)均显著降低(P < 0. 01)，比表面(δ )、核比表 面(核S)、异染色质体密度(异染色质Vv)均显著升高(P <0.01)。大、中、小本发明姜芪 胶囊均可显著升高肾小管上皮细胞线粒体Vv、δ m、常染色质Vv (P < 0. 01)，均可显著降低 S、核3、异染色质*( <0.01)。大、中、小剂量本发明姜芪胶囊均可显著升高肾小管上 皮近曲小管常染色质Vv (P <0.01),可显著降高近曲小管核(δ )、异染色质Vv (P <0.01)； 大、中、小剂量本发明姜芪胶囊均可显著降低肾小管上皮远曲小管核(S)、常染色质Vv(P <0.01),可显著升高远曲小管异染色质Vv (P < 0. 01)。结论本发明姜芪胶囊能明显降低和改善小剂量链脲佐菌素加高糖饮食所致高血 糖小鼠模型血糖水平及糖耐量降低，可明显对抗小鼠胰岛细胞中β细胞萎缩，使胞浆得到 明显恢复，可一定程度上改善造模小鼠胰腺组织病理变化，对糖尿病模型小鼠的肾脏有保 护作用，作用与二甲双胍相当；不同剂量本发明姜芪胶囊可不同程度降低链脲佐菌素所致 糖尿病模型大鼠血清中血糖、肌酐、尿素氮、N0、N0S，尿液中尿微量白蛋白、肌酐和内生肌酐 清除率等指标的水平，通过光镜观察分析表明本发明姜芪胶囊可以保护造模大鼠的胰岛 细胞，对抗造模药物对胰岛细胞的损伤；对造模大鼠的肾脏有保护作用，可减轻远曲小管上 皮细胞水肿状态；电镜观察分析表明本发明姜芪胶囊可增加大鼠肾小管上皮细胞线粒体 数量，减少线粒体异染色质数量，减轻线粒体嵴的溶解和消失；通过对组织微观结构的改善 一定程度上有利于延缓糖尿病大鼠肾脏的病变过程。通过实验结果的分析，本发明姜芪胶囊延缓和改善糖尿病大鼠所致肾脏病变的作
用可能与其降低血糖、降低尿微量白蛋白、肌酐、尿素氮、内生肌酐清除率水平、降低血清中NO、NOS水平，改善造模动物的组织病理改变等因素有关，从而延缓糖尿病肾病的发生和发展。
权利要求
一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由姜黄提取物105～130g、黄芪提取物65～85g、淀粉、滑石粉制成，姜黄提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；淀粉、滑石粉加入量≤姜黄提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；所说的姜黄提取物是，称取粉碎后的姜黄药材，放入微波提取罐内，乙醇用量为姜黄药材重量的20倍，即姜黄与乙醇的重量比为1∶20，提取温度50℃，提取时间30min，提取功率200W，得姜黄粗提液备用；S 8大孔吸附树脂纯化S 8大孔吸附树脂先用乙醇浸泡24小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用；将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将姜黄粗提液以1mL/min流速通过层析柱进行吸附，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用8倍树脂体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得姜黄提取物；分光光度法测定，本品含总姜黄素以姜黄素计不少于58.0％；HPLC法测定，本品每1g含姜黄以姜黄素(C21H20O6)计，不得少于15.0％。所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用70％的乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水适量，静置，滤过，得黄芪样品提取液。取黄芪乙醇提取液，150mg/ml，回收乙醇至无醇味，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，继用8倍树脂体积的30％乙醇洗去杂质，再用8倍树脂体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩乙醇，干燥粉碎，得黄芪提取物；分光光度法测定，本品含总皂苷以黄芪甲苷计不少于75.0％；HPLC法测定，本品每1g含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于7.2％。
2.根据权利要求1所述的治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由 姜黄提取物105g、黄芪提取物65g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉碎过100目筛，混合 均勻，加入淀粉、滑石粉各9g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。
3.根据权利要求1所述的治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由 姜黄提取物117g、黄芪提取物75g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉碎过100目筛，混合 均勻，加入淀粉、滑石粉各Ilg混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。
4.根据权利要求1所述的治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，其特征在于，由 姜黄提取物130g、黄芪提取物85g制成，取姜黄提取物和黄芪提取物，粉碎过100目筛，混合 均勻，加入淀粉、滑石粉各8g混勻，制粒，装入胶囊，即得，每粒0. 3g。
全文摘要
本发明涉及一种治疗糖尿病及早期糖尿病肾病的姜芪胶囊，可有效解决糖尿病及早期糖尿病肾病治疗的问题，本发明由姜黄提取物105～130g、黄芪提取物(主要是黄芪总皂苷)65～85g、淀粉、滑石粉制成，姜黄提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；淀粉、滑石粉加入量≤姜黄提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比约为1∶1。本发明制备方法简单，配伍得当，疗效好，无毒副作用，在治疗糖尿病及早期糖尿病肾病方面有显著效果，是治疗糖尿病及早期糖尿病肾病上的创新，具有巨大的经济和社会效益。
文档编号A61P13/12GK101912565SQ20101018176
公开日2010年12月15日 申请日期2010年5月25日 优先权日2010年5月25日
发明者苗明三 申请人:河南中医学院
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