作为tace抑制剂的炔邻－亚磺酰氨基和次膦酸酰胺基双环杂芳基异羟肟酸的制作方法
专利名称：作为tace抑制剂的炔邻－亚磺酰氨基和次膦酸酰胺基双环杂芳基异羟肟酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及作为TNF-α转化酶(TACE)的抑制剂的炔芳基或杂芳基氨磺酰和次膦酸酰胺异羟肟酸。本发明的化合物可用于治疗TNF-α介导的疾病，如类风湿性关节炎、骨性关节炎、败血症、AIDS、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、局限性回肠炎和退化性软骨丧失。
背景技术：
TNF-α转化酶(TACE)催化膜结合TNF-α前体蛋白形成TNF-α。TNF-α是一种促炎症细胞因子，据信在以下疾病中起作用类风湿性关节炎(Shire，M.G.；Muller，G.W.Exp.Opin.Ther.Patents 1998，8(5)，531；Grossman，J.M.；Brahn，E.J.Women’s Health 1997，6(6)，627；Isomaki，P.；Punnonen，J.Ann.Med.1997，29，499；Camussi，G.；Lupia，E.Drugs，1998，55(5)，613)、脓毒性休克(Mathison，等人，J.Clin.Invest.1988，81，1925；Miethke，等人，J.Exp.Med.1992，175，91)、移植排斥(Piguet，P.F.；Grau，G.E.；等人，J.Exp.Med.1987，166，1280.)，恶质病(Beutler，B.；Cerami，A.Ann.Rev.Biochem.1988，57，505)、厌食、炎症(Ksontini，R，；MacKay，S.L.D.；Moldawer，L.L.Arch.Surg.1998，133，558.)、充血性心力衰竭(Packer，M.Circulation，1995，92(6)，1973；Ferrari，R.；Bachetti，T.等人.Circulation，1995，92(6)，1479)、局部缺血后重复灌注(ischaemic)的损伤、中枢神经系统炎性疾病、肠炎、胰岛素抗性(Hotamisligil，G.S.；Shargill，N.S.；Spiegelman，B.M.；等人.Science，1993，259，87.)和HIV感染(Peterson，P.K.；Gekker，G.；等人，J.Clin.Invest.1992，89，574；Pallares-Trujillo，J.；Lopez-Soriano，F.J.Argiles，J.M.Med.Res.Reviews，1995，15(6)，553)，及其熟知的抗肿瘤特性(Old，L.Science，1985，230，630)。例如，用抗TNF-α抗体和转基因动物作的研究表明阻断TNF-α的形成抑制了关节炎的发展(Rankin，E.C.；Choy，E.H.；Kassimos，D.；Kingsley，G.H.；Sopwith，A.M.；Isenberg，D.A.；Panayi，G.S.Br.J.Rheumatol.1995，34，334；Pharmaprojects，1996，Therapeutic Updates 17(10月)au197-M2Z)。最近这个观察已扩展到人，如“人类疾病中的TNF-α”，CurrentPharmaceutical Design，1996，2，662所述。
预计TACE的小分子抑制剂具有治疗各种疾病症状的潜力。虽然已知有许多TACE抑制剂，但这些分子中的许多是肽类或类肽，存在生物可利用性和药物动力学问题。另外，这些分子中许多是非选择性的基质金属蛋白酶(尤其是MMP-1)的强抑制剂。已假设对MMP-1(胶原酶1)的抑制会造成MMP抑制剂临床实验中的关节疼痛(Scrip，1998，2349，20)。因此长效、选择性、口服生物可利用性的非肽类TACE抑制剂对治疗上述疾病是非常理想的。
WIPO国际出版物WO9816503、WO9816506、WO9816514和WO9816520和美国专利No.5,776,961公开了呈下式的异羟肟酸氨磺酰MMP/TACE抑制剂的例子，其中2碳链将异羟肟酸和氨磺酰氮分开。 美国专利N0.5,455,258、5,506,242、5,552,419、5,770,624、5,804,593和5,817,822以及欧洲专利EP606,046A1和WIPO国际出版物WO9600214和WO9722587公开了基质金属蛋白酶和/或TACE的非肽类抑制剂，即以下所示的异羟肟酸芳基氨磺酰，其中1碳将异羟肟酸和氨磺酰氮分开。其他出版物公开的氨磺酰为基础的MMP抑制剂，是以下所示的氨磺酰-异羟肟酸的变体或氨磺酰-异羟肟酸的类似物，公开于欧洲专利EP-757037-A1和EP-757984-A1和WIPO国际出版物WO9535275、WO9535276、WO9627583、WO9719068、WO9727174、WO9745402、WO9807697和WO9831664、WO9833768、WO9839313、WO9839329、WO9842659和WO9843963。MacPherson，等人在J.Med.Chem，(1997)，40,2525和Tamura等人在J.Med.Chem.(1998)，41，640中进一步详细公开了这种类型的MMP抑制剂。 公开MMP和/或TACE的β-氨磺酰-异羟肟酸抑制剂(其中异羟肟酸的α碳与氨磺酰的氮呈环状连接，如下所示)的出版物包括美国专利No.5,753,653、WIPO国际出版物WO9633172、WO9720824、WO9827069、WO9808815、WO9808822、WO9808823、WO9808825、WO9834918、WO9808827、Levin等人，Bioorg.&Med.Chem.Letters 1998，8，2657和Pikul等人，J.Med.Chem.1998，41，3568。 专利申请DE19,542,189-A1、WO9718194和EP803505公开了MMP和/或TACE抑制剂的其他环状氨磺酰例子。其中含氨磺酰的环稠合于芳环或杂芳环。 氨磺酰的类似物是次膦酸酰胺异羟肟酸MMP/TACE抑制剂，如以下结构所示，公开于WIPO国际出版物WO9808853。 WIPO国际申请9803166中公开了如下所示的氨磺酰MMP/TACE抑制剂，其中硫醇是锌螯合基团。 本发明的目的是公开芳基或杂芳基氨磺酰和次膦酸酰胺异羟肟酸MMP/TACE抑制剂，其中L基团被取代的丁炔基或炔丙醚、炔丙胺或炔丙硫醚所对取代。这些化合物在体外和细胞试验中提供对TACE活性水平增强的抑制和/或优于MMP-1的选择性。所以这些化合物可用于治疗TNF所介导的疾病。
发明详述本发明提供具有下式的TACE和MMP抑制剂 其中 是选自以下的环 (即B选自以下 或 在该式中P和Q是 或 条件是当P是 Q是 时，且反之亦然；W和X各分别是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R10；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各分别是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN或-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；或5-10元杂环烷基，所述的杂环烷基的1或2个杂原子选自N、NR9、O或S；R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基；或其药学上可接受的盐；和R10是苯基、萘基、1-6个碳原子的烷基、3-6个碳原子的环烷基、杂芳基、或5-7元杂环烷基环；或其药学上可接受的盐。
本发明所提供的优选化合物中B是 或其药学上可接受的盐。更优选的化合物其中B是 W和X是碳；Y是氮；或其药学上可接受的盐。
更优选的化合物中
B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中
B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中，B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；Z是氧；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中，
B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；Z是氧；R6和R7是氢；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中，B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；Z是氧；R6和R7是氢；R8是-CH2OH或甲基；或其药学上可接受的盐。
本发明最优选的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑(pyrazolo)-[3，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺；4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺；4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸羟基酰胺；4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺；和8-溴-4-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺。
本文所用的杂芳基是5-10元单或双环芳族环，其中1-3个杂原子选自N、NR9、S和O。杂芳基较佳地是 或 其中K是NR9、O或S，R9是氢、苯基、萘基、1-6个碳原子的烷基、或3-6个碳原子的环烷基。优选的杂芳环包括吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三唑、吡唑、咪唑、异噻唑、噻唑、异噁唑、噁唑、吲哚、异吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、异喹啉、喹噁啉、喹唑啉、苯并三唑、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并异噁唑和苯并噁唑。
对A的定义而言，更优选地A是选自以下的杂芳基 或 本发明中的杂芳基可以是任选地单或双取代的。
本文所用的杂环烷基是5-10元饱和的或不饱和单或双环，其中1或2个杂原子选自N、NR9、S和O。本发明杂环烷基环较佳地选自 或 其中K是NR9、O或S，R9是氢、苯基、萘基、1-6个碳原子的烷基、或3-6个碳原子的环烷基。优选的杂环烷基环包括哌啶、哌嗪、吗啉、四氢吡喃、四氢呋喃或吡咯烷。本发明的杂环烷基可任选地为单或双取代。
本文所用的芳基指苯基或萘基，可任选地单、双或三取代。
烷基、链烯基、炔基和全氟烷基包括直链和支链部分。烷基、链烯基、炔基和环烷基可以是未取代的(连接氢的碳原子、或链或环中的其他碳原子)或单个或多个取代的。
卤素指溴、氯、氟和碘。
芳基、杂芳基、烷基、链烯基、炔基、环烷基适合的取代基包括(但不限于)卤素、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、3-6个碳原子的环烷基、-OR2、-CN、-COR2、1-4个碳原子的全氟烷基、1-4个碳原子的-O-全氟烷基、-CONR2R3、-S(O)nR2、-OPO(OR2)OR3、-PO(OR2)R3、-OC(O)NR2R3、-C(O)NR2OR3、-COOR2、-SO3H、-NR2R3、-N[(CH2)2]2NR2、-NR2COR3、-NR2COOR3、-SO2NR2R3、-NO2、-N(R2)SO2R3、-NR2CONR2R3、-NR2C(＝NR3)NR2R3、NR2C(＝NR3)N(SO2R2)R3、NR2C(＝NR3)N(C＝OR2)R3、-SO2NHCOR4、-CONHSO2R4、-四唑-5-基、-SO2NHCN、-SO2NHCONR2R3、苯基、萘基、杂芳基或杂环烷基；其中-NR2R3可形成吡咯烷、哌啶、吗啉、硫代吗啉、噁唑烷、噻唑烷、吡唑烷、哌嗪或氮杂环丁烷环；R2和R3各分别是氢、1-6个碳原子的烷基、3-6个碳原子的环烷基、苯基、萘基、杂芳基或杂环烷基；n是0-2；和R4是1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、3-6个碳原子的环烷基、1-4个碳原子的全氟烷基、苯基、萘基、杂芳基或在环烷基。
本发明杂环烷基的合适的取代基包括(但不限于)1-6个碳原子的烷基、3-6个碳原子的环烷基、苯基、萘基、杂芳基和杂环烷基。
当某部分含有相同名称的一个以上的取代基时，这些取代基各自可以是相同的和不同的。
当本发明的化合物含有碱性部分时，可从以下无机和有机酸形成药学上可接受的盐，如醋酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、丁二酸、反式丁烯二酸、顺式丁烯二酸、丙二酸、扁桃酸、羟基丁二酸、苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸和类似已知的可接受的酸。当本发明的化合物含有酸性部分时，也可从无机和有机碱形成盐，较佳地为碱金属盐如钠盐、锂盐或钾盐。
本发明的化合物可含有不对称碳原子，本发明的一些化合物可含有一个或多个不对称中心，且因此可能产生旋光异构体和非对映异构体。不考虑立体化学而言，本发明包括这种旋光异构体和非对映异构体；以及消旋和拆解的、对映体纯化的R和S立体异构体；以及R和S立体异构体的其他混合物和它们药学上可接受的盐。据信一种旋光异构体包括非对映异构体和对映体或立体异构体具有比其他有利的特性。所以当公开和说明本发明权利时，当公开一种消旋混合物时，显然考虑了公开和要求了这两种光学异构体的权利包括非对映异构体和对映异构体，或基本无其他物质的立体异构体。
本发明的化合物表现出能抑制酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-α转化酶(TACE)，并因此可用于治疗关节炎、肿瘤转移、组织溃烂、异常伤口的愈合、牙周病、移植排斥、胰岛素抗性、骨骼疾病和HIV感染。具体说，本发明的化合物在体外和细胞试验中提供增强的抑制TACE活性的水平和/或提高优于MMP-1的选择性，因此这些化合物可特别用于治疗TNF所介导的疾病。
本发明还提供制备如以下定义的式1化合物的方法，所述的方法包括如下步骤之一a)将式V的化合物或其活性衍生物与羟胺反应，产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，Q是COOH或其活性衍生物；b)将式VI的化合物去保护产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，R30是合适的保护基团如叔丁基、苄基或三烷基甲硅烷基；c)拆解式B化合物的旋光活性异构体的混合物(如外消旋物)，从而分离出基本无其他对映异构体或非对映异构体的一种对映异构体或非对映异构体；或d)用药学上可接受的酸来酸化式I的碱性化合物，得到药学上可接受的盐。
对步骤a)而言，反应可用本领域已知的方法进行，如与酰基氯反应形成活性衍生物(即酰基氯)，然后再与羟胺反应。
如步骤b)所示除去保护基团也可用本领域已知的方法进行，得到异羟肟酸。
对步骤c)而言，可用标准分离方法分离特定的对映体或非对映异构体形式。例如，通过与‘拆解试剂’的单对映体(如非对映异构体盐形式或共价键形式)反应，可将消旋混合物转化成旋光性非对映异构体的混合物。可用标准方法(如结晶或层析)分离如此得到的旋光性非对映异构体的混合物，然后处理各旋光性非对映异构体以除去‘拆解试剂’，从而释放出本发明化合物的单对映异构体。也可用手性层析(用手性载体、洗脱液或离子配对剂)直接分离对映异构体混合物。
可以药学上可接受的盐的形式分离式I的化合物，如用上述酸处理的有机或无机酸。
本发明还涉及制备结构B化合物的方法，包括如下的一个或多个反应1)将式I的化合物或其盐或溶剂合物烷基化， 成式II的化合物 2)将上述式II的化合物或其盐或溶剂合物，与氯化剂(如亚硫酰氯、氯磺酸、草酰氯、五氯化磷)或其他卤化剂(如氟磺酸或亚硫酰溴)反应，形成式III的化合物 其中J是氟、溴、氯。
通过将该化合物与1，2，4-三唑、咪唑或苯并三唑反应，分别可进一步将得到的磺酰氯、磺酰氟或磺酰溴转化成酰三唑(triazolide)、酰咪唑(imidazolide)或酰苯并噻唑(benzothiazolide)衍生物，其中J为1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基，R6、R7和R8的定义如上。
本发明还涉及制备结构B化合物的方法，包括如下一个或多个反应1)将苯酚或其盐或溶剂合物烷基化成式IV的化合物 2)将上述式IV的化合物或其盐或溶剂合物与氯磺酸反应，制备上述式II的化合物。
特别优选的中间体是式II和III的化合物，条件是R6不是氢。
可按以下流程，从可购得的起始原料或用文献方法制备的起始原料，制备本发明的化合物。通常已知的起始原料是如下所示的(V-XXV)。以下显示制备本发明典型化合物的这些流程。
化合物Va)Springer，RH；Scholten，MB；O’Brien，DE，Novinson，T；Miller，JP；Robins，RKJ.Med.Chem.1982，25(3)，235-42。
b)Elworthy，T.R.；Ford，A.P.D.；等人J.Med.Chem.1997，40(17)，2674-2687。
化合物VIMuasui，T；TAkura，T；JP 46043792；JP 690307；CAN 7659604化合物VIICamparini，A；Ponticelli，F；Tedeschi，P J.Chem.Soc.，Perkin Trans，1 1982，10，2391-4。
化合物VIIIAbdalla，GM；Sowell.JW J.Heterocycl.Chem.1990.27(5)，1201-7。
化合物IXa)Denzel，T；Hoehn，H J.Heterocyclic Chem.1977，14，813-817b)Al-Shaar，AHM；Chambers，RK；Gilmour，DW；Lythgoe，DJ；McClenaghan，I；Ramsden，CA J.Chem.Soc.；Perkin Trans I 1992，21，2789-2821。
c)Elworthy，T.R.；Ford，A.P.D.；等人，J.Med.Chem.1997，40(17)，2674-2687 。
化合物Xa)Forbes，IT；Johnson，CN；Jones，GE；Loudon，J；Nicholass，JM J.Med. Chem1990，2640-2645。
b)Kan，MA；Guarconi，AE J.Heterocyclic Chem 1977，14，807-812。
化合物XIa)Forbes，IT；Johnson，CN；Jones，GE；Loudon，J；Nicholass，JM J.Med.Chem1990，2640-2645。
b)Kan，MA；Guarconi，AE J.Heterocyclic Chem 1977，14，807-812。
化合物XIIa)Richardson，TO；Neale，N；Carwell，J J.Heterocyclic.Chem.1995，32，359-361。
b)Baker，JM；Huddleston，PR；Keenan，GJ J.Chem Research Miniprint，1982，6，1726-1746。
化合物XIIIa)Forbes，IT；Johnson，CN；Jones，GE；Loudon，J；Nicholass，JM J.Med.Chem1990，2640-2645。
b)Kan.MA；Guarconi，AE J.Heterocyclic Chem 1977，14，807-812。
化合物XIV、XV和XVIElworthy，T.R.，；Ford，A.P.D.；等人，J.Med.Chem.1997，40(17)，2674-2687。
化合物XVIIHeterocycles 1997，45，980。
化合物XVIIIYokoyama，Naokata.欧洲专利申请61pp.CODENEPXXDW。欧洲专利115469A1840808。
化合物XIXMendes，Etienne；Vernieres，Jean Claude；Simiand，Jacques Edouard；Keane，PeterEugene。欧洲专利申请12pp.CODENEPXXDW.欧洲专利346207 A1891213。
化合物XXMendes，Etienne；Vernieres，Jean Claude；Simiand，Jacques Edouard；Keane，PeterEugene。欧洲专利申请12pp.CODENEPXXDW.欧洲专利346207 A1891213。
化合物XXIMorita，Yoshiharu；Wagatsum，Kazuo.Japan.Kokai，4pp.CODENJKXXAF.日本专利50058094750520Showa。
化合物XXII和XXIIIArmitage，Bernard John；Leslie，Bruce William；Miller，Thomas Kerr；Morley，Christopher。PCT国际申请110pp.CODENPIXXD2.WO9500511 A1950105。
化合物XXIVMinami，S.；Matsumoto，J.；Kawaguchi，K，；Mishio，S.；Shimizu，M.；Takase，Y.；Nakamura，S.(Dainippon Pharmaceutical Co.，Ltd.Japan)Japan.Kokai，3pp.CODENJKXXAF.日本专利50014697750215Showa。
化合物XXVKihara，N.；Tan，H.，Takei，M.，Ishihara，T.(Mitsui PechochemicalIndustries，Ltd.，Japan；Suntory，Ltd)Jpn.Kokai Tokyo Koho，11pp.CODENJKXXAF.JP62221686 A2870929Showa。
可用有机合成领域技术人员已知的常规方法制备本发明的化合物。以下流程(流程1-11)说明了所用的反应顺序。在以下的流程中，部分A定义为B的双环杂芳基部分，如下所示A是 或 本领域技术人员将会认识到当分子上其他潜在的反应官能团受到屏蔽或保护，因而避免不利的副反应和/或增加反应的产量时，可最佳地进行某些反应。为此，本领域技术人员可以使用保护基团。这些保护基团的例子可见于T.W.Greene，P.G.M.Wuts“有机合成中的保护基团”，第二版，1991，Wiley&Sons，New York。较佳地，将氨基酸起始原料上反应性侧链的官能团保护起来。对特定反应保护基团的需要和选择是本领域技术人员已知的，这取决于被保护的官能团(羟基、氨基、羧基等)的性质、含该取代基的分子的结构和稳定性及反应条件。
当制备或加工本发明的含芳基、杂芳基或杂环化合物时，本领域技术人员知道可在构建该环的同时、之前或之后制备该环上的取代基。为清晰起见，以下从该流程中删去了这些环上的取代。本领域技术人员会明白为了最佳制备本发明化合物，合成步骤的性质和顺序可作改变。
按流程1制备本发明的异羟肟酸化合物，其中如上所述X＝G，通过将羧酸2转化成相应的酰基氯或酸酐，或通过将它与适当的肽偶联剂(如1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺(EDC)和1-羟基-苯并三唑水合物(HOBT))反应，然后与羟胺反应形成1，或与被保护的羟胺衍生物反应，得到3。然后可用已知的方法去保护化合物3，得到异羟肟酸1，其中R30是叔丁基、苯基、三烷基甲硅烷基或其他合适的屏蔽基团。
流程1 可按流程2所示制备羧酸2。将氯-酯4其中R40是氢或合适的羧酸保护基团，与氨磺酰5反应生成邻-亚磺酰氨基-酯6。用酸、碱水解或其他方法(包括选择保护基团R40)进行该酯的水解生成羧酸2。另外，首先将氯-酯4与伯胺反应生成7，然后用8将其磺酰基化或磷酸化，其中J是合适的离去基团包括(但不限于)氯，生成酯6。
流程2
由流程3显示了制备磺酰剂8和氨磺酰5的方法。如此，可用乙炔10(其中J是合适的离去基团如卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲烷磺酸酯(triflate))将磺酸盐9(其中ZR50是羟基、硫醇或取代的氨基部分)烷基化，得到11。乙炔10是可购得的或是已知的化合物，或它们可用本领域技术人员已知的方法合成。可通过已知的方法如与草酰氯或其他与取代基R6、R7和R8和乙炔相容的试剂反应，将磺酸盐11转化成相应的磺酰氯或其他磺酰剂8。另外，通过与化合物10反应可将二硫化物12转化成二炔13，然后还原二硫键得到类似的硫醇，可用已知的方法将其转化成8。用10将酚、硫酚、苯胺或被保护的苯胺14烷基化得15，然后与氯磺酸反应得到磺酸16，可用草酰氯或类似的试剂不难将其转化成8。通过保护硫醇、ZH的烷基环(Z是O、N或S)和硫的去保护及随后磺酸16的氧化，苯硫酚17也是8的前体。将8与伯胺R5NH2反应制备氨磺酰5。可用标准方法用15来制备磷酸化剂8，其中X是P(O)R4。
流程3
如流程4所示，在4用氯置换或7官能化后还可再加上乙炔侧链。所以，可将氯-酯4与化合物20反应(其中ZR50是羟基或被保护的羟基、硫醇或胺)生成21。除去R50屏蔽基团得到23，随后用10烷基化得到的苯酚、硫醇或胺，得到6。在此情况中XR50为OH，无需去保护步骤得到23。也可从氨基-酯7和22形成化合物21。
流程4 如流程5所示，炔衍生物6还可通过氟化合物26不难从4和/或7与氟芳基24反应制得。在极性质子惰性溶剂如DMF中，在碱如氢化钠存在时用屏蔽的羟基、硫醇或氨基(HZR70，其中R70是合适的保护基团)置换26的氟，随后去保护得到23，随后可用10将其烷基化得到6。可用Na2S、K2S、NaSH或KS(C＝S)OEt，将26转化成23，其中Z是硫。还可在极性质子惰性溶剂中，在碱如氢化钠存在时，用炔丙基衍生物27(其中Z是O、S或NH)置换26的氟，直接得到6。
流程5 如流程6所示，可从29得到化合物6(其中Z是亚甲基)。在氯化烃溶剂中用N-琥珀酰亚胺溴将29苄基溴化，得到溴化物31。随后用合适的铜酸丙炔替代溴得到氨磺酰6。
流程6 如流程7所示，可从4和/或7起始，合成6的炔丙胺类似物。用碳上的氢和钯、氯化锡或其他已知的方法还原34的硝基部分，得到苯胺35，随后用10烷基化得到6。在用10烷基化之前可衍生苯胺35形成36，并在烷基化步骤后去保护。
流程7 本发明的化合物还可通过以下方法制备在形成酯6后的任何一个阶段，修饰乙炔侧链上的取代基。可用标准方法操作官能团如卤素、羟基、氨基、醛、酯、酮等，形成化合物1的R1、R2、R3和R4所定义的部分。有机合成领域的技术人员知道这些方法的成功使用取决于分子其他部分上取代基的相容性。本文所述的保护基团和/或反应步骤顺序的变化可根据需要而定。
流程8显示了衍生结构为37的化合物(相当于化合物6，其中R8是氢)的一些方法。将终产物炔37进行金属取代，然后以醛或烷基卤、磺酸盐或三氟甲烷磺酸酯加成，产生衍生物38和39。37与甲醛和胺反应产生Mannich加成产物40。溴化氰加成于40产生炔丙基溴化物41，它可用各种亲核试剂置换，生成如醚、硫醚和胺(其中Z的定义如上)。37的钯催化的偶联反应产生芳基或杂芳基炔43。有机合成领域技术人员知道这些方法的成功使用取决于分子其他部分上取代基的相容性。本文所述的保护基团和/或反应步骤顺序的变化可能根据需要而定，R35、R45、R55、R65和R75是烷基如甲基。
流程8 仅出于说明的目的，流程9-11显示了制备流程2和4-7中用作起始原料的双环杂芳基氯-酯4的方法，其中A是喹啉、吡唑啉吡啶、异噁唑吡啶、异噻唑吡啶和吡唑啉[1，5-b]嘧啶。流程9显示了从相应的苯胺和烷氧基亚甲基丙二酸酯(如乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯)为起始物，制备喹啉。通过与三氯氧化磷反应可将得到的羟基-酯转化成所需的氯酯4。
流程9 流程10显示了本发明吡唑吡啶、异噁唑吡啶和异噻唑吡啶的合成。所以，将氨基吡唑、氨基异噁唑或氨基噻唑与烷氧基亚甲基丙二酸酯缩合，生成中间体氨基亚甲基丙二酸酯。通过在二苯醚中240℃加热，将此化合物环化成吡唑吡啶、异噁唑吡啶或异噻唑吡啶。然后通过与三氯氧化磷反应，将得到的双环杂芳基羟基-酯转化成氯-酯。
流程10 按流程11，用流程10所述的反应，制备吡唑啉[1，5-b]嘧啶。
流程11 流程12显示了双环杂芳基环A的官能化，出于说明的目的，A是喹啉环。通过钯催化的Heck偶联，碘代喹啉与三丁基乙烯锡反应。通过Heck反应可将不饱和酯和酰胺可偶联于卤代喹啉交联。其他三烷基锡试剂是易购得的，且可以类似地使用。也可通过Suzuki反应，将可购得的或易制备的硼酸偶联于碘代喹啉。按流程4、2和1，用三溴化硼或其他适合的去保护剂来切割甲酯，可将化合物如44转化成本发明的化合物。
流程12 如流程13所示的喹啉环，通过钯催化的炔的偶联，可将卤代杂芳基官能化。氢化炔也可生成烯烃和链烷烃。按流程4、2和1，用三溴硼或其他合适的去保护剂切割甲酯，将化合物45和46转化成本发明的化合物。
流程13 流程14描述了将氨基引入结合于本发明化合物的氨磺酰氮原子的取代基的方法。如此在流程14中，用炔丙基溴烷基化NH-氨磺酰，生成炔丙基氨磺酰。存在伯胺或仲胺和氯化亚铜时，将此炔与多聚甲醛反应生成炔丙胺47，再按流程1和2将其转化成本发明的化合物。
流程14 以下优选实施例说明了本发明代表性化合物的制备。起始原料、中间体和试剂是商品购得的或不难用有机合成领域技术人员已知的文献标准方法制备。
实施例14-丁-2-炔氧基-苯磺酸钠盐在1L异丙醇和225ml 1.0N氢氧化钠溶液配制的52.35g(0.225mol)4-羟基苯磺酸钠溶液中加入59.96g(0.45mol)1-溴-2-丁炔。将得到的混合物加热至70℃15小时，然后真空蒸发除去异丙醇。过滤收集得到的白色沉淀，用异丙醇和乙醚洗涤，真空干燥得到56.0g(100％)呈白色固体的丁炔醚。
实施例24-丁-2-炔氧基-苯磺酰氯在29ml二氯甲烷配制的43.8ml(0.087mol)2M草酰氯/二氯甲烷的0°溶液中逐滴加入6.77ml(0.087mol)DMF，随后加入7.24g(0.029mol)实施例1的产物。0°搅拌此反应混合物10分钟，然后让其升温至室温，搅拌天。然后将反应物倾倒入冰中，用150ml己烷提取。用水和盐水洗涤有机物，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到6.23g(88％)呈黄色固体的磺酰氯；m.p.63-65℃。电喷雾质谱为243.9(M+)。
实施例3丁-2-炔氧基-苯在溶解于100ml苯和40ml THF的6.14g(0.023mol)三苯基膦溶液中加入1.75ml(0.023mol)2-丁炔-1-醇。5分钟后，向反应物中加入溶解于10ml THF的2.00(0.023mol)苯酚，然后再加入3.69ml(0.023mol)偶氮二羧酸二乙酯。室温搅拌得到的反应混合物18小时，然后真空浓缩。以乙酸乙酯/己烷(1∶10)洗脱，在硅胶上层析残留物得到2.18g(70％)呈清澈液体的丁炔醚。电喷雾质谱为146.0MH+实施例44-丁-炔氧基-苯磺酰氯在丙酮/冰浴中N2下，逐滴将0.3ml二氯甲烷配制的0.073ml(1.1mmol)氯磺酸加到0.3ml二氯甲烷配制的0.146g(1.0mmol0实施例3产物的溶液中。加完后，移去冰浴，室温搅拌反应物2小时。然后在反应物中逐滴加入0.113ml(1.3mmol)草酰氯，随后加入0.015ml DMF。加热反应物回流2小时，然后用己烷稀释，倾倒入冰水中。用盐水洗涤有机层，硫酸钠干燥，真空浓缩得到0.130mg(53％)呈浅褐色固体的所需产物。
实施例54-丁-2-炔氧基-N-甲基-苯磺酰胺在冷却至0℃的、二氯甲烷配制的22.5ml(0.045mmol)2M甲铵溶液中，加入以45ml二氯甲烷配制的3.67g(0.015mol)4-丁-2-炔氧基-苯磺酰氯溶液。让反应物升温至室温，搅拌48小时。将得到的溶液倾倒入水中，用二氯甲烷提取。用2N柠檬酸溶液、水和盐水洗涤混合的有机物，Na2SO4干燥，Magnesol过滤，真空浓缩，得到3.23g(92％)呈白色固体的N-甲基氨磺酰；m.p.78-80℃。
分析C11H13NO3S计算值C，55.21；H，5.88；N，5.85实测值C，55.49；H，5.65；N，5.80实施例64-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑啉[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在40ml 1-甲基-2-吡啶酮配制的1.196g(5.00ml)实施例5产物的溶液中加入3.45g(0.025mol)碳酸钾、1.268g(5.00mol)乙基-4-氯-5，7-二甲基吡唑啉[3，4-b]吡啶-3-羧酸和0.075g 18-冠-6，将得到的混合物加热至100℃12小时。然后真空浓缩此反应混合物，用乙酸乙酯和水稀释。用水、2N柠檬酸溶液和盐水洗涤有机物，Na2SO4干燥，Magnesol过滤，真空浓缩。以乙酸乙酯/己烷(1∶2)洗脱，在硅胶上层析残留物，得到0.89g(39％)呈固体的产物；m.p.50-52℃。
分析C22H24NO5S计算值C，57.88；H，5.30；N，12.27实测值C，57.25；H，5.34；N，12.07实施例74-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑啉[3，4-b]吡啶-5-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑啉[3，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺在10ml THF和5ml甲醇配制的0.82g(1.798mmol)实施例6产物的溶液中加入2.15ml 1N氢氧化钠溶液，加热得到的混合物回流3小时，然后真空浓缩。用乙醚研磨残留物，过滤收集固体，真空干燥得到0.77g(95％)呈白色固体的羧酸盐。
在8.0ml二氯甲烷稀释的1.67ml(3.34mmol)2.0M草酰氯二氯甲烷的0°溶液中加入0.258ml(3.34mmol)DMF，0°搅拌此反应物15分钟。在反应物中加入悬浮于5ml DMF的0.75g(1.67mmol)羧酸盐的溶液，室温搅拌得到的混合物1小时，然后倾倒入1.395ml三乙胺、3ml THF和0.408ml 50％羟胺水溶液的0°混合物中。让反应物升温至室温过夜，然后真空浓缩有机物。用二氯甲烷和水稀释残留物，用2N柠檬酸溶液酸化，用水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。以乙酸乙酯/甲醇(4∶1)洗脱，在硅胶上层析残留物，得到0.28g(83％)呈白色固体的异羟肟酸；m.p.189-192℃。
分析C20H21N5O5S计算值C，54.17；H，4.77；N，15.79实测值C，54.14；H，4.77；N，15.43
实施例84-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在8ml 1-甲基-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)配制的0.105g(0.63mmol)60％氢化钠悬浮液中加入0.628g(2.63mmol0实施例5的产物，室温搅拌得到的混合物30分钟。加入7ml 1-甲基-2-吡咯烷酮配制的0.601g(2.50mmol)乙基-4-氯-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸溶液，将反应混合物加热至80-90℃48小时。然后真空浓缩反应混合物，用二氯甲烷稀释残留物。用水、2N柠檬酸溶液和盐水洗涤有机物，Na2SO4干燥，Magnesol过滤，真空浓缩。用乙酸乙酯/己烷研磨残留物，过滤所得固体，真空干燥，得到1.0g(90％)呈固体的产物；m.p.85-90℃。电喷雾质谱为444(M+H)+实施例94-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑[5，4-b]-吡啶-5-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑[5，4-b]-吡啶-5-羧酸羟基酰胺按实施例7的流程，将实施例8的乙酯产物转化成羧酸(白色固体，m.p.187-190℃)，然后再转化成异羟肟酸(白色固体，m.p.201-202℃)。
实施例104-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸乙酯按实施例6的流程，将8-甲氧基-4-氯-喹啉-3-羧酸乙酯与4-丁-2-炔氧基-N-甲基-苯磺酰胺反应，生成呈白色固体的亚磺酰氨基-喹啉，m.p.131-132℃。电喷雾质谱为468.9(M+H)+实施例114-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸羟基酰胺按实施例7的流程，将实施例10的乙酯产物转化成羧酸(白色固体，m.p.238℃，dec.；电喷雾质谱为440.9(M+H)+)，然后再转化成异羟肟酸(白色固体，m.p.179-181℃)；电喷雾质谱为455.9(M+H)+。
实施例124-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑-[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯按实施例6的流程，将4-氯-3-甲基-异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯与4-丁-2-炔氧基-N-甲基-苯磺酰胺反应，生成呈白色固体的亚磺酰氨基-喹啉，m.p.55-57℃。电喷雾质谱为460(M+H)+实施例134-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺按实施例7的流程，将实施例12的乙酯产物转化成羧酸(白色固体，m.p.230-232℃；电喷雾质谱为431.8(M+H)+)，然后再转化成异羟肟酸(白色固体，m.p.183-184℃)；电喷雾质谱为447(M+H)+。
实施例144-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯在15ml DMF配制的1.85g(6.67mmol)N-苄基4-甲氧基苯基-氨磺酰溶液中-次性加入0.267g(6.67mmol)60％氢化钠，室温氮气下搅拌得到的混合物15分钟。然后在该溶液中一次性加入乙基-4-氯-7-三氟甲基-3-喹啉羧酸酯(2.02g，6.67mmol)，85℃加热得到的混合物24小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒入水(300ml)和HCl(1N，水溶液，100ml)中，用乙酸乙酯(2×100ml)提取。硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并真空浓缩。以15％-50％乙酸乙酯/己烷洗脱，在硅胶上层析残留物，得到3.11g(88％)所需产物。电喷雾质谱为545.1(M+H)+。
实施例154-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用1.012g(3.34mmol)4-氯-8-三氟甲基-3-喹啉羧酸乙酯生成1.509g(83％)呈白色固体的所需喹啉酯。电喷雾质谱为545.1(M+H)+。
实施例164-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-溴-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用0.848g(2.70mmol)6-溴-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯生成1.418g(95％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为557.1(M+H)+。
实施例174-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-溴-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用0.777g(2.47mmol)7-溴-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯生成1.169g(85％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为557.1(M+H)+。
实施例184-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用1.216g(4.02mmol)4-氯-6-三氟甲基-3-喹啉羧酸乙酯生成2.171g(99％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为545.0(M+H)+。
实施例194-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸在4ml甲醇/THF(1∶1)配制的1.065g(2.00mol)实施例14产物的溶液中加入2ml1N氢氧化钠溶液，25℃搅拌得到的混合物18小时。然后用1N HCl酸化反应物，用乙酸乙酯(200ml)提取。用水和盐水洗涤有机层，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。以乙酸乙酯/己烷(1∶9)研磨残留物，过滤得到828mg(82％)呈白色固体的所需羧酸。电喷雾质谱为517.1(M+H)+。
实施例204-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-三氟甲基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用1.255g(2.64mmol)实施例15的产物生成0.988g(83％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为517.1(M+H)+。
实施例214-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-溴-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用1.198g(2.16mmol)实施例16的产物生成0.921g(81％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为529.0(M+H)+。
实施例224-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-溴-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用0.969g(1.74mmol)实施例17的产物生成0.804g(87％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为529.0(M+H)+。
实施例234-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-三氟甲基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用2.043g(3.75mmol)实施例18的产物生成1.82g(88％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为515.0(M-H)+。
实施例244-[乙基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-碘-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法并用N-乙基-4-甲氧基苯磺酰胺代替N-苄基-4-甲氧基苯磺酰胺，用1.076g(5.00mmol)8-碘-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯生成2.438g(4.51mmol，90％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为541.0(M+H)+。
实施例254-[乙基-4(4-甲基-苯磺酰基)-氨基]-8-乙烯基-喹啉-3-羧酸乙酯在150ml DMF配制的实施例24产物(2.438g，4.51mmol)的溶液中加入三丁基乙烯锡(1.43g，4.51mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(520mg，10％)、碘化亚铜(171mg，20％)和5ml三乙胺。N2下搅拌混合物，85℃加热18小时。将其倾倒入400ml饱和重碳酸钠和饱和氯化铵溶液(1∶1)的混合液中，用乙酸乙酯(2×200ml)提取。硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并在旋转蒸发仪中浓缩。用己烷/乙酸乙酯(100-0％)梯度洗脱，在300ml硅胶上层析残留物。得到1.706g(3.88mmol，86％)所需的喹啉酯。电喷雾质谱为441.1(M+H)+。
实施例264-[甲基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-苯基乙烯基-喹啉-3-羧酸乙酯联用实施例14和25的方法，用苯基乙炔替换二乙烯，用N-乙基-4-甲氧基氨磺酰替换N-苄基-4-甲氧基氨磺酰，从4-氯-3-喹啉羧酸乙酯获得中间产物4-[乙基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-苯基乙炔基-喹啉-3-羧酸乙酯。电喷雾质谱为515.3(M+H)+。
实施例274-[乙基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-乙烯基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用1.593g(3.62mmol)实施例25的产物生成1.333g(89％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为411.1(M-H)+。
实施例284-[甲基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-苯基乙炔基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用实施例26的产物合成了标题化合物。电喷雾质谱为485.3(M-H)+。
实施例294-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-硝基-喹啉-3-羧酸以实施例14和19所述的相同方法，用5.613g(20.0mmol)4-氯-6-硝基-3-喹啉羧酸乙酯生成2.676g(27％，分两步)呈白色固体的标题化合物。电喷雾质谱为492.3(M-H)+。
实施例304-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-硝基-喹啉-3-羧酸联用实施例14和19的方法，并用N-甲基-4-甲氧基苯磺酰胺代替N-苄基-4-甲氧基苯磺酰胺，得到中间体8-溴-4-[甲基-(甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-喹啉-3-羧酸。电喷雾质谱为449.2(M-H)+。
实施例31{[(1-苯基-5-吡唑基)氨基]亚甲基}丙二酸二乙酯用油浴在115-120℃加热15.9g(0.10mmol)1-苯基-5-氨基吡唑和21.6g(0.10mol)乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯的混合物2小时。冷却后，从含有1％乙醇的热己烷中重结晶晶体块。冷却至室温并过滤得到24.8g(75％)灰白色晶体，m.p.96-97℃ 。
实施例324-羟基-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯240-250℃加热18.1g(0.055mol){[(1-苯基-5-吡唑基)氨基]亚甲基}丙二酸二乙酯和150ml邻苯二甲酸二乙酯的混合物1小时。冷却混合物，用己烷稀释。冷却过滤得到晶体，用己烷和己烷-乙醇(1∶1)洗涤，得到11g(70％)灰白色晶体，m.p.149-150℃。由类似的小规模操作，由110ml乙醇重结晶1.75g得到1.58g灰白色晶体，m.p.149-150℃。
实施例334-氯-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯回流5.76g(20.33mmol)4-羟基-1-苯基-1H-吡唑-[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和15.58g三氯氧化磷的混合物1.5小时，冷却缓慢倾倒入碎冰中。过滤混合物，用冰水洗涤固体，干燥得到6.0g固体，m.p.89-91℃。
实施例344-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯按实施例31、32和33的流程，以1，3-二甲基-5-氨基吡唑为起始物，制备得到氯-酯，m.p.89-90℃。
实施例354-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在6ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮配制的1.16g(4.2mmol)苄基-(4-甲氧基苯-磺酰基)-胺溶液中加入0.168g(4.2mmol)氢化钠(用油配制的60％)，室温搅拌此混合物直到气体放出停止。将上述混合物加到用2ml 1-甲基-2-吡咯烷酮配制的1.01g(4mmol)4-氯-1，3-二甲基吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯的混合物中。
用油浴在50℃加热此混合物过夜，然后用油浴在100℃加热1.5天。将混合物倾倒入800ml水中，用乙酸乙酯提取。提取物用水、2N柠檬酸、水、盐水洗涤，并干燥(Na2SO4)。除去溶剂，以己烷-乙酸乙酯(2∶1)为洗脱液，在硅胶上层析残留物得到0.64g呈固体的产物，m.p.170-172℃。对大规模操作而言，90℃加热30ml1-甲基-2-吡啶酮配制的5.07g(0.02mmol)4-氯-1，3-二甲基吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和8.0g(0.0289mmol)苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)胺3天，得到3.65g产物。
实施例364-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸用油浴在70℃加热用4ml四氢呋喃-甲醇(1∶1)配制的0.48g(0.97mmol)4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和0.29ml 10NNaOH的混合物2小时，真空除去溶剂。将残留物溶解在20mlH2O中，用10ml乙酸乙酯提取溶液。将2N柠檬酸(pH4-5)加到水层中，过滤沉淀的固体，用H2O洗涤，得到的白色固体真空干燥过夜后生成晶体，mp165-167℃。
实施例374-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸钾盐将用15ml甲醇-水(1∶1)配制的3.60g(7.28mmol)4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和0.44g(7.84mmol)氢氧化钾(颗粒)的混合物回流过夜。再加入40mg氢氧化钾，将混合物回流4小时(所有固体都溶解)。真空除去溶剂，加入甲苯，并真空除去。用乙酸乙酯研磨残留物，过滤，用乙酸乙酯洗涤固体得到3.8g呈白色固体的产物。
实施例384-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在4ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮配制的1.39g(5mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)(3-吡啶基-甲基)胺的溶液中加入0.2g(5mmol)氢化钠(60％，以油配制)，室温搅拌此混合物直至气体放出停止。在此混合物中加入1.15g(4.54mmol)4-氯-1，3-二甲基吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和2ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮。用油浴在90℃氮气中的密封管内搅拌此混合物3天。冷却此混合物，倾倒入水中，用乙酸乙酯提取。用水、盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥。用无水硅酸镁薄板过滤此溶液，用乙酸乙酯洗涤此滤板。真空浓缩滤液至干燥得到1.3g固体。以乙酸乙酯作溶剂，在硅胶上层析得到0.35g呈固体的产物，mp152-154℃。
实施例394-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸将7.8ml乙醇和4.83ml水配制的1.34g(2.7mmol)4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和2.97ml 1N氢氧化钾的混合物回流20小时。再加入0.54ml 1N氢氧化钾，回流此混合物4小时。真空除去溶剂，加入甲苯，并在真空下除去。将残留物溶解于20ml水中，用乙酸乙酯提取。用2N柠檬酸酸化水层，过滤得到沉淀下的固体，用水洗涤。真空干燥此固体得到0.98g固体，mp256-258℃。
实施例404-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸钾盐将用4ml甲醇-水(1∶1)配制的0.34g(0.68mmol)4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和0.748ml 1N氢氧化钾的混合物回流24小时。真空除去溶剂，在残留物中加入甲苯。真空除去溶剂以除去水，用乙酸乙酯研磨残留物，得到呈固体的产物，mp160-167℃。
实施例41
4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例35的流程，将实施例33的产物与苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)胺和氢化钠反应生成4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.124-126℃。
按实施例36的流程，将上述酯水解成4-[苯基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.108-110。
实施例424-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例38的流程，将实施例33的产物与(4-甲氧基苯磺酰基)(3-吡啶甲基)胺和氢化钠反应生成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.89-91℃。
按实施例39的流程，将上述酯水解成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.136-138℃。
实施例434-氯-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯按实施例31的流程，以1-苯基-3-甲基-5-氨基吡唑为起始物，得到{[(1-苯基-3-甲基-5-吡唑)氨基]亚甲基}丙二酸二乙酯，m.p.70-72℃。
按实施例32的流程，将亚甲基丙二酸转化成4-羟基-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.132-134℃。
按实施例33的流程，将上述混合物转化成本实施例的产物，m.p.108-110℃。
实施例444-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例35的流程，将实施例43的产物与苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)胺和氢化钠反应生成4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.164-166℃。
按实施例36的流程，将上述酯水解成4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.246-248℃。
实施例454-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例38的流程，将实施例43的产物与(4-甲氧基苯磺酰基)(3-吡啶甲基)胺和氢化钠反应生成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.148-150℃。
按实施例39的流程，将上述酯水解成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.235-236℃。
实施例464-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸在10ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮配制的0.366g(8.4mmol)氢化钠(60％，以油配制的)搅拌的混合物中加入(分批加入)2.34g(8.4mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基-胺甲酯。室温搅拌此混合物直至气体放出停止，加入1.80g(7.0mmol)4-氯-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。在80-90℃加热此混合物44小时，真空除去溶剂，用水稀释残留物。用乙酸乙酯提取混合物，用2N柠檬酸、水、1N NaHCO3、盐水洗涤提取物，并干燥(Na2SO4)。用-无水硅酸镁薄板过滤溶液，滤板用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液至干得到2.39g呈黄色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯，m.p.142-144℃。
分析C23H22N4O5S2计算值C，55.4；H，4.5；N，11.2实测值C，55.5；H，4.3；N，11.1按实施例39的流程，用KOH水解2.25g上述酯的样品，得到呈白色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸，m.p.234-236℃。
分析C21H18N4O5S2计算值C，53.6；H，3.9；N，11.9
实测值C，53.5；H，3.8；N，11.8实施例474-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例46的流程，将1.7g(7mmol)4-氯-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯与2.92g(0.0105mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基-胺反应，生成1.01g呈白色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯，m.p.128-130℃。
分析C23H22N4O6S计算值C，57.3；H，4.6；N，11.6实测值C，57.3；H，4.7；N，11.5室温搅拌10ml四氢呋喃和2.93ml 1N NaOH配制的1.01g(2.1mmol)上述化合物的混合物过夜，除去溶剂。用水稀释残留物，用2N柠檬酸(pH4)酸化。过滤得到固体，用水洗涤得到0.88g呈白色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸，m.p.244-246℃。
分析C21H18N4O6S计算值C，55.5；H，4.0；N，12.3实测值C，55.2；H，4.0；N，12.2实施例487-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸按实施例46的流程，将1.8g(7.5mmol)7-氯-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸乙酯与2.92g(10.5mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基-胺反应，生成1.64g呈黄色固体的7-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸乙酯，m.p.108-110℃。
分析C23H23N5O5S计算值C，57.4；H，4.8；N，14.5实测值C，54.5；H，4.7；N，14.4室温搅拌15ml四氢呋喃和4.15ml 1N NaOH配制的1.54g(3.20mmol)上述化合物的混合物过夜，真空除去溶剂。用水稀释残留物，用二乙醚和乙酸乙酯提取。用2N柠檬酸(pH5)酸化水层，过滤得到固体，用水洗涤。76℃真空炉中干燥这些固体得到1.03g呈灰白色固体的7-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸，m.p.249-251℃。
分析C21H19N5O5S计算值C，55.6；H，4.2；N，15.4实测值C，55.2；H，4.2；N，15.6实施例494-氯-1，6-二甲基-1H-吡唑[3，4，b]吡啶-5-羧酸乙酯在150ml对-二甲苯配制的l0.0g(59.1mmol)5-氨基-1-甲基吡唑-4-羧酸乙酯的溶液中加入30ml对-二甲苯配制的10.25g(65.01mmol)反式-3-乙氧基丁烯酸乙酯。将此混合物回流过夜。在冰浴中冷却此溶液，逐滴加入24.3ml(65.01mmol)乙醇钠(用乙醇配制的重量百分比为21％)。回流混合物3.5小时，真空浓缩此混合物，将350ml乙酸乙酯加到残留物中。用2N柠檬酸、水、盐水各150ml洗涤此溶液，并干燥(Na2SO4)。用无水硅酸镁板过滤此溶液，除去溶剂得到灰白色固体。用乙酸乙酯研磨，然后冷却此混合物，过滤得到7.8g呈白色晶体的4-羟基-1，6-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯，mp103-105℃。
在8ml POCl3中回流上述化合物(3.0g)2.5小时。将此混合物冷却，缓慢倾倒入碎冰中。过滤得到固体，用水洗涤，50℃真空干燥得到2.3g灰白色晶体，mp64-66℃。
实施例507-氯-2，3-二甲基咪唑[4，5-b]吡啶-6-羧酸乙酯按J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2789(1992)所述的常规流程，将135ml二噁烷配制的1，2-二甲基-5-硝基咪唑(8.46g；0.06M)、乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯(13.08g；0.06M)和2.11g 5％碳上的Pd的混合物，在Parr氢化器内35-40psi氢气中还原29小时。用硅藻土过滤此混合物，除去溶剂后得到一种褐色油。将此油溶解在100ml 2N HCl中，用10N NaOH将pH调节到pH5。用100ml乙酸乙酯提取此混合物2次(废弃提取物)。将pH调节至pH7，用150乙酸乙酯提取，然后将pH加到pH9，再用150ml乙酸乙酯提取二次。将pH7和pH9的提取物混合，用盐水洗涤，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁薄板过滤此溶液，将滤液浓缩至干得到7.61g呈褐色油性的5-[2，2-二(乙氧基羰基)-1-乙烯基氨基]-1，2-二甲基咪唑(二乙基[(1，2-二甲基-咪唑-5-基)氨基亚甲基]丙二酸。
在氮气下，将上述化合物(7.9g)和35mlPOCl3的混合物回流7小时，然后真空浓缩。将黑色的残留物倾倒入碎冰中(并搅拌)用5N NaOH将混合物调节到pH5。用150ml乙酸乙酯、200ml二乙醚和200mlCH2Cl2提取混合物。每次提取物都用1NNaHCO3、盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。将溶液混合，通过无水硅酸镁薄板过滤。将滤液真空浓缩至干得到4.1g呈褐色固体的7-氯-2，3-二甲基咪唑[4，5-b]吡啶-6-羧酸乙酯，m.p.85-90℃。从二乙醚结晶的样品生成晶体，m.p.117-119℃。
分析C11H12ClN3O2·1/2H2O计算值C，48.8；H，4.6；N，15.9实测值C，50.3；H，5.6；N，16.0实施例514-氯-2-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯将50ml对二甲苯配制的10.0g(63.6mmol)3-氨基噻吩-4-羧酸甲酯、10.1g(63.6mmol)(反式)-3-乙氧基丁烯酸乙酯和40mg对甲苯磺酸-水合物的混合物回流过夜，真空除去溶剂。在残留物中加入乙醇配制的20ml对二甲苯和23.7ml乙醇钠(21％重量)(63.6mmol)，将此混合物再回流3小时。除去溶剂，用水小时残留物，用1N HCl将pH调节至pH4。过滤得到沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤得到4.95g呈褐色固体的4-羟基-2-甲基-噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸。
将上述混合物(1.4g)溶解于10ml无水甲醇中，将HCl气通入此溶液10分钟。室温搅拌此溶液过夜，真空除去溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯中，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，并干燥(Na2SO4)。除去溶剂后得到的固体用乙酸乙酯研磨，冷却混合物过滤得到0.765g呈黄色固体的4-氯-2-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯。
实施例527-氯-5-甲基-噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸甲酯和乙酯按J.Med.Chem.33，2640(1990)所述的流程，在80ml二甲苯中回流10g(63.6mmol)3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯(10.1g)、(反式)-3-乙氧基丁烯酸乙酯(63.6mol)和40mg对甲苯磺酸单水合物的混合物过夜。真空除去溶剂，将残留物溶解于乙酸乙酯中。用水、2N柠檬酸、1N NaHCO3、盐水洗涤此溶液，并干燥(Na2SO4)。用己烷-乙酸乙酯(5∶1)为洗脱液，在硅胶上层析16g此固体，得到6.65g呈黄色油性的3-[(2-甲氧基羰基-3-噻吩基)氨基]丁烯酸乙酯。在3.5ml二甲苯配制的0.269g(1mmol)上述化合物的样品中加入44mg(1.1mmol)NaH(用油配制成60％)。将此混合物回流3小时，除去溶剂。用水稀释残留物，用乙酸乙酯提取。将水层酸化(1N HCl)至pH4，用乙酸乙酯提取混合物。用盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥，除去溶剂后得到190mg(1∶1)混合的呈固体的7-羟基-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸甲酯和7-羟基-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯。如下制备所述的乙酯。
在50ml对二甲苯中回流5.0g(31.8mmol)3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯、5.03g(31.8mmol)(反式)-3-乙氧基丁烯酸乙酯和20mg对甲苯磺酸单水合物的混合物1小时，在室温中维持2天。真空浓缩此混合物，然后冷却(冰浴)。在此溶液中加入12.4ml乙醇配制的乙醇钠(21重量％)。将此混合物再回流2小时，除去溶剂。残留物在水和二乙醚中分层，将水层分开，用1N HCl酸化至pH4。用乙酸乙酯提取混合物，用盐水洗涤提取物并干燥(Na2SO4)。除去溶剂后得到2.2g褐色固体。用乙酸乙酯研磨固体，冷却过滤得到1.0g呈浅褐色固体的7-羟基-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯(质谱(ES)238(M+H))。
将上述化合物(0.985g)和4ml POCl3的混合物回流2小时，将此混合物倾倒入碎冰中。用乙酸乙酯提取此混合物，浓缩提取物至干燥。将残留物溶解于CH2Cl2中，用水洗涤溶液，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁薄板过滤此溶液，浓缩此滤液至干燥得到0.62g呈黄色油性的7-氯-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯；以乙酸乙酯-己烷(1∶1)为洗脱液在硅胶上薄层层析；Rf＝0.9。
实施例531，3-二甲基-4-甲基氨基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯室温搅拌四氢呋喃(2.0mol溶液)配制的1.268g(5mmol)4-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和7.5ml(15mmol)甲胺的混合物过夜，然后回流2小时。除去溶剂得到白色固体。将此固体溶解于乙酸乙酯中，用水、1MNaHCO3、盐水洗涤溶液，干燥(Na2SO4)。除去溶剂后得到白色固体。从乙酸乙酯中结晶得到0.715g白色固体；质谱(ES)249.2(M+H)。
按上述流程，使甲胺与合适的氯杂环吡啶反应得到如下衍生物。
实施例541，6-二甲基-4-甲基氨基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例654-甲基氨基噻吩并[3，2-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例664-甲基氨基噻吩并[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例67N-甲基-4-氟苯氨磺酰用冰浴将四氢呋喃配制的125ml甲胺(0.25mol)和13.9ml(0.10mol)三乙胺的混合物冷却。在此冷却的溶液中逐滴加入150ml CH2Cl2配制的19.4g(0.10mol)4-氟苯氨磺酰氯，回流此混合物2小时，然后室温搅拌过夜。用水、2N柠檬酸、盐水洗涤此含CH2Cl2的混合物，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁薄板过滤此溶液，真空浓缩此滤液至干燥得到18.0g白色固体，mp67-70℃。
按上实施例所述的流程，制备如下4-氟苯磺酰基类似物。
实施例68N-乙基-4-氟苯氨磺酰实施例69N-丁基-4-氟苯氨磺酰实施例70N-苄基-4-氟苯氨磺酰实施例71N-(3-吡啶基甲基)-4-氟苯氨磺酰实施例724-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯搅拌2.53g(0.01mol)4-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯、1.89g(0.01mol)N-甲基-4-氟苯氨磺酰、6.91g(0.05mol)无水K2CO3、0.143g18-冠-6和70ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮的混合物，在100℃加热17小时。真空除去溶剂，在残留物中加入水。用CH2Cl2提取混合物，用水、盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁板过滤此溶液，真空浓缩滤液至干燥，得到4.98g油。以乙酸乙酯-己烷(2∶3)为洗脱液，在硅胶柱上层析此油，得到3.15g固体，mp107-109℃。
按上述流程制备如下衍生物。
实施例734-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例744-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例754-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例764-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1-甲基-3-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例774-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例784-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例794-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-甲基-3-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例804-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-苯基甲基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例814-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-乙基-3-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例824-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-3-甲基异噻唑[4，5-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例837-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-2，3-二甲基咪唑[4，5-b]吡啶-6-羧酸乙酯实施例844-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-2-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯实施例857-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸甲酯实施例864-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例877-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯实施例884-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例894-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-5-氯噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例904-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-7-氯噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例917-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-3-氯噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯实施例924-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-3-氯噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例934-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-2-氯噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例944-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-7-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例954-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸在5ml四氢呋喃配制的0.284g(0.7mmol)4-[(4-氟苯-磺酰基)甲基氨基]-3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯的溶液中加入0.490ml(2.45mmol)5N NaOH。室温搅拌此混合物过夜，加入2ml乙醇。回流此溶液2.5小时，真空除去溶剂，在残留物中加入2N柠檬酸(pH4-5)。过滤掉分离的白色固体，用水洗涤，真空干燥得到0.24g晶体，mp275-276℃。
分析C16H15FN4O4S计算值C，50.8；H，4.0；N，14.8实测值C，51.6；H，4.2；N，14.7
实施例964-[(4-丁-2-炔氧基苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸(A)在冰浴冷却的3ml干N，N-二甲基甲酰胺配制的3.5mmolNaH溶液中逐滴加入3.5mmol 2-丁炔-1-醇。在此混合物中加入mmol4-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5羧酸，搅拌此混合物2小时。将此混合物倾倒入水中，用乙酸乙酯提取。用乙酸乙酯酸化此水层，用乙酸乙酯提取，浓缩提取物得到固体。
(B)在冰浴冷却的0.14g(3.5mmol)NaH混合物中逐滴加入0.267ml(3.5mmol)2-丁炔-1-醇。10分钟后，加入0.406g(1mmol)4-[4-氟苯磺酰基]甲基氨基-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4]吡啶-5-羧酸乙酯，室温搅拌此混合物3小时。将此混合物倾倒入水中，用乙酸乙酯提取。用2N柠檬酸酸化水层，用乙酸乙酯提取。用水、盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥，除去溶剂得到0.17不纯的固体。质谱(电喷射)显示产品的峰值为427(M-H)。
实施例978-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸乙酯在40ml二甲基甲酰胺配制的1.97g(6.27mmol)实施例5产物的室温溶液中加入0.276g 60％氢化钠(6.9mmol)。1小时后，加入8-溴-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯，将此混合物加热至80℃。18小时后，将反应混合物冷却至室温，加入乙酸乙酯和水。用水(5X)洗涤有机相，无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩得到-种油(3.44g)，经硅胶(己烷/乙酸乙酯)层析后得到呈泡沫状的(2.79g)8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸乙酯。电喷雾质谱为517和519(M+H)+实施例988-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸在1∶1的甲醇∶水(6ml)中，将实施例97的产物8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸乙酯(0.52g，1.0mmol)与1N无水氢氧化钠(1.1ml)反应，生成0.390g呈灰白色粉末的8-溴-4[{[4(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸。电喷雾质谱为489和490.9(M+H)+实施例99
8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺0℃在二氯甲烷(1ml)配制的草酰氯(0.613ml，以二氯甲烷配制的2M溶液)中加入二甲基甲酰胺(0.095ml)。15分钟后，加入以二甲基甲酰胺配制的实施例98产物即8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸(0.30g，0.613mmol)溶液，室温搅拌得到的反应混合物1小时。
在分液瓶中，将1.28ml三乙胺加到0℃的13ml四氢呋喃和3.2ml水配制的0.43g盐酸羟胺混合物中。0℃搅拌此混合物15分钟后，一次性加入酰基氯溶液，让得到的溶液升温至室温，再搅拌18小时。然后将乙酸乙酯和含水重碳酸钠加到此分液瓶中。用含水重碳酸钠(3X)洗涤有机相，无水碳酸钾干燥。真空浓缩并用乙酸乙酯研磨后，得到呈黄色粉末的8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺(200mg)。电喷雾质谱为503.9和506(M+H)+药理学将本发明的代表性化合物作为酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-α转化酶(TACE)的抑制剂进行评估。以下示出了建立此生物学特性的所用的标准药理测试流程及得到的结果。
测定MMP-1、MMP-9和MMP-13抑制的测试程序这些标准药理测试程序是基于基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-13(胶原酶)或MMP-9(明胶酶)切割硫肽(thiopeptide)底物如Ac-Pro-Leu-Gly(2-巯基-4-甲基-戊醇基)-Leu-Gly-OEt，导致释放出能与DTNB(5，5＇-二硫二(2-硝基-苯甲酸)产生颜色反应的底物产物。用颜色增加的速率衡量酶的活性。用溶于100％DMSO的20mM硫肽底物的新配制原液，将DTNB溶解在100％DMSO中作为100mM原液，室温储存在暗处。使用前用底物缓冲液(50mM HEPES pH7.5，5mMCaCl2)将底物和DTNB一起稀释至1mM。用缓冲液(50mM HEPES，pH7.5，5mMCaCl2，0.02％Brij)将酶原液稀释至所需的最终浓度。按缓冲液、酶、运载体或抑制剂、和DTNB/底物的顺序将这些物质加到96孔板中(终反应体积为200μl)，在405nm用分光光度议平板读数仪上监测颜色的增加5分钟，绘制随时间颜色增加的线性图。
另外，使用荧光肽底物。在该测试程序中，肽底物含有荧光基团和淬灭基团。一旦MMP切割底物，在荧光平板读数仪上定量测定产生的荧光。在HCBC试验缓冲液(50mM HEPES，pH7.0，5mM Ca+2，0.02％Brij，0.5％半胱氨酸)中用人重组MMP-1、MMP-9或MMP-13进行该试验。将底物溶解在甲醇中，以1mM等份冰冻储存。该试验中，用HCBC缓冲液将底物和酶稀释至所需的浓度。将化合物加到含酶的96孔板中，加入底物开始反应。读取(340nm激发，444nm发射)应10分钟，绘制随时间荧光增加的线性图。
对硫肽或荧光肽测试程序而言，计算直线的斜率，其代表反应速率。证实反应速率的线性(r2＞0.85)。计算对照速率的平均值(x±sem)，并用Dunnett多重比较检验与药物处理速率比较有统计学显著性(p＜0.05)。用多种剂量的药物可得到剂量—反应关系，用线性回归估计95％CI的IC50值。
测定TACE抑制的试验程序用96孔黑色微量滴定板，各孔加入由10μl TACE(终浓度为1μg/ml)、70μl Tris缓冲液、pH7.4含有10％甘油(终浓度为10mM)、和10μl以DMSO配制的测试化合物(终浓度为1μM，DMSO浓度＜1％)组成的溶液，室温培育10分钟。各孔中加入荧光肽底物(终浓度为100μM)以引发反应，然后在摇床上振荡5秒。
读取反应10分钟(340nm激发，420nm发射)，绘制随时间荧光增加的线性图。计算该线的斜率，其代表反应速率。
证实反应速率的线性(r2＞0.85)。计算对照速率的平均值(x±sem)，并用Dunnett多重比较检验与药物处理速率比较有统计学显著性(p＜0.05)。用多种剂量的药物可得到剂量—反应关系，用线性回归估计95％CI的IC50值。
可溶性蛋白质的人单核THP-1细胞分化试验(THP可溶性蛋白质试验)有丝分裂刺激THP-1细胞致使分裂成巨噬细胞样细胞，伴有除其他蛋白质外同时分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和TNF受体(TNF-R，p75/80和TNF-Rp55/60)以及白细胞介素-8(IL-8)。另外，在该时间以后未受刺激的THP-1细胞分泌出p75/80和p55/60受体。称为TNF-a转化酶或TACE的酶介导了膜结合TNF-α的释放和可能的TNF-R p75/80和TNF-R p55/60的释放但无IL-8释放。可用该试验来证明抑制性或刺激性化合物对此TACE酶的作用和该化合物的细胞毒性结果。
THP-1细胞(由ATCC获得)是一种人单核细胞系，获自一个一岁的患急性单核细胞白血病男童的外周血液。它们可以在培养基中生长，且受促细胞分裂剂刺激后能分裂成巨噬细胞样细胞。
在该试验中，由上述生长的和以5×106ml/瓶冷冻保藏的ATCC原液中采集THP-1细胞。将一管接种到T25瓶中，其中含有16ml补充有Glutamax(Gibco)的RPMI-1640培养基(含10％胎牛血清、100单位/ml青霉素、100μg/ml链霉素和5×10-5M 2-巯基-乙醇(THP-1培养基))。在用于试验前，将各管细胞培养约2星期，然后再使用4-6周来筛选化合物。在星期一和星期四传代细胞至浓度1×105/ml。
为了进行试验，37℃在5％CO2中，将THP-1细胞以1.091×106个细胞/ml(1.1ml/孔)在24孔平板中，与每孔含有50ml 24mg/ml的脂多糖(LPS)(CalbiochemLot#B13189)原液共培养24小时。同时将50ml/孔的药物、运载体或THP-1培养液置于适当的孔中，终体积为1.2ml/孔。将标准化合物和测试化合物溶解在浓度为36mM的DMSO中，并从此浓度用THP-1培养基稀释至适当的浓度，在培养开始时加到诸孔中，使终浓度为100mM、30mM、10mM、3mM、1mM、300nM和100nM。将与DMSO接触的细胞限制在0.1％终浓度。试验中包括阳性对照孔，其中有促细胞分裂剂但无药物。还包括运载体对照孔，除加入终浓度为0.083％的DMSO外都与阳性对照相同。试验中还包括阴性对照孔，细胞中加入了运载体但不加促细胞分裂剂或药物。可通过用50ml/孔的THP-1培养基代替LPS评估化合物对受体基础性(无刺激)分泌的作用。将平板置于设置为5％CO2和37℃的培养箱中。培养4小时后，取出300ml/孔组织培养物上清液(TCS)用于TNF-a ELISA。培养24小时后，取出700ml/孔TCS，用于TNF-R p75/80、TNF-R p55/60和IL-8 ELISA分析。
另外在24小时时，将细胞重悬浮于500μl/孔的THP-1培养液中收集各处理组的细胞，并转移到FACS管中。加入2ml/管0.5mg/ml二碘化丙锭原液(PI)(Boerhinger Mannheim cat.#1348639)。将这些样品在Becton Dickinson FaxCaliberFLOW细胞记数仪上跑样，以红外线波长(FL3)测定各细胞摄取的染料量。只有膜受损的细胞(死或濒死)才吸收PI。通过计数未被PI染色的细胞除以样品中细胞的总量来计算活细胞百分比。将药物处理组的活力计算值与运载体处理的促细胞分裂剂刺激组(“载体阳性对照”)的活力计算值相比较，确定“相当于对照的变化百分比”。这个“相当于对照的变化百分比”是表明药物细胞毒性的一种指标。
采用从R&D Systems购得的ELISAs测得THP-1细胞培养物的TCS中可溶性TNF-a、TNF-R p75/80和TNF-R p55/60和IL-8的量，通过用试剂盒标准品所产生的标准曲线外推。用FLOW细胞记数仪测定了摄取或排斥PI的细胞数量，并用可购得的Cytologic软件绘制直方图直观化各处理组(包括所有对照)的数据。
THP-1细胞培养物的反应强度的生物学变化要求根据每种药物的“载体阳性对照”的变化百分比为基础对这些试验进行比较。按以下公式计算各化合物浓度的各可溶性蛋白质相当于“载体阳性对照”的变化百分比 对于刺激条件下可溶性蛋白质(TNF-a、p75/80、p55/60、IL-8)的研究，测定了重复孔的平均值pg/ml，结果以相当于“载体阳性对照”的变化百分比表示。对于非刺激条件下可溶性蛋白质(p75/80和p55/60受体)的研究，测定了重复孔的平均值pg/ml，结果用以下公式表示成相当于“载体阳性对照”的变化百分比 用定制的软件(使用JUMP统计软件包)，由非线性的回归分析计算出各化合物的IC50值。
对于细胞活力研究，测定了合并的重复孔的活力(PI排斥)，以相当于“载体阳性对照”的变化百分比表示结果。将计算出的化合物处理组的活力值与计算出的“载体阳性对照”的活力值相比较，以确定以下的“相对于对照的变化百分比”。该“相对于对照的变化百分比”的值是药物细胞毒性的一种指标。 参考文献Bjornberg，F.，Lantz，M.，Olsson，I.，和Gullberg，U.“将p55和p75肿瘤坏死因子(TNF)受体加工成可溶性受体形式有关的机制”，Lymphokine Cytokine Res.13203-211，1994 。
Gatanaga，T.，Hwang.C.，Gatanaga，M.，Cappuccini，F.，Yamamoto，R.，和Granger，G.“体外PMA-和LPS刺激的人单核THP-1细胞对TNF mRNA合成、膜表达和释放的调节”，Cellular Immun.1381-10，1991。
Tsuchiya，S.，Yamabe，M.，Yamagughi，Y.，Kobayashi，Y.，Konno，T.，和Tada，K.“人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)的建立和特性分析”，Int.J.Cancer.261711-176，1980。
下表I列出了上述体外基质金属蛋白酶抑制、TACE抑制和THP标准药理测试流程的结果。
aIC50(nM)b在3μM时的抑制根据由上述标准药理测试流程得到的结果，本发明的化合物显示出为酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-a转化酶(TACE)的抑制剂，并因此可用于治疗诸如关节炎、肿瘤转移、组织溃疡、异常伤口愈合、牙周病、移植排斥、胰岛素抗性、骨骼病和HIV感染等疾病。
本发明的化合物还可用于治疗或抑制基质金属蛋白酶介导的病理变化如动脉粥样硬化、动脉粥样硬化斑形成、动脉粥样硬化斑破溃所致的冠脉血栓形成的复原、再狭窄、MMP-介导的骨质疏松、中枢神经系统的炎性疾病、肌肤老化、新血管生成、肿瘤转移、肿瘤生长、骨关节炎、类风湿性关节炎、脓毒性关节炎、角膜溃疡、蛋白尿、动脉瘤病、创伤性关节损伤后的退化性软骨丢失、神经系统的脱髓鞘病、肝硬化、肾小球疾病、胎膜早破、肠炎病、年龄相关的黄斑变性、糖尿病视网膜病、增生性玻璃体视网膜变态、视网膜未熟病、眼部炎症、圆锥形角膜、斯耶格伦综合症、近视、眼部肿瘤、眼部血管生成/血管再生和角膜移植排斥。
本发明的化合物可单独给予或与药用载体一起给予需要其的患者。药用载体可以是固体或液体。
可采用的固体载体包括一种或多种物质，这些载体也可作为增香剂、润滑剂、稳定剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、助压剂、粘合剂或药片崩解剂或封装材料。在粉状制剂中，载体是分散得很细的固体，可与分散得很细的活性组分相混合。在片剂中，活性组分与适当比例的具有必需的助压特性的载体相混合，被压制成所需的性状和尺寸。粉末制剂和片剂较佳地含有多至99％活性组分。合适的固体载体包括如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠盐、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。
液态载体可用于制备溶液、悬浮液、乳剂、糖浆和酏剂。可将本发明的活性组分溶解于或悬浮于药学上可接受的液态载体如水、有机溶剂、这两者的混合物或药学上可接受的油或脂肪中。液态载体可含有其他合适的药用添加剂如稳定剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、增香剂、悬浮剂、增稠剂、色素、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。合适的用于口服和肠胃外给药的液态载体的例子包括水(尤其含有上述添加剂如纤维素衍生物，较佳地是羧甲基纤维素钠盐的溶液)、醇(包括一元醇和多元醇如甘油)和它们的衍生物，和油(如分级椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体也可以是油酯，如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液态载体可用于肠胃外给药的无菌液体形式的组合物中。
可将无菌溶液或悬浮液的液体药物组合物用于例如肌内、腹腔内或皮下注射。也可静脉内注射给予无菌溶液。口服给药可以是液体或固体组合物形式。
可以常规栓剂的形式直肠给予本发明的化合物。对于鼻内或支气管内吸入或吹入给药，可将本发明的化合物配制成水溶液或部分水溶液，然后以气雾剂形式使用。本发明的化合物还可以透皮给予，采用含有活性化合物和对该活性化合物为惰性、对皮肤无毒的载体的透皮贴片，通过皮肤让该药剂全身吸收送递入血流。运载体可以采取多种形式如乳剂、软膏、糊剂、凝胶和包藏装置。乳剂和软膏可以是粘性液体或水包油或油包水类型的半固体乳剂。由分散在含该活性组分的石油或亲水性石油中的吸收性粉末构成的糊膏。可用各种包藏装置将该活性组分释放到血流中，如覆盖含有该活性组分的有或无载体的储器、或含有该活性组分的基质的半透膜。其他包藏装置是本领域已知的。
必须由主治医生主观确定用于治疗患MMP或TACE依赖性病症的具体患者的剂量。所涉及的各种变化包括功能紊乱的严重程度、和患者的体形、年龄和反应模式。通常从低于该化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。随后逐渐增加剂量直到在此情况下达到最佳效果。可由给药的医生依据治疗个体的经验和标准的用药原则，确定口服、肠胃外、鼻内或支气管内给药的精确剂量。
较佳地，此药用组合物以单位剂量形式如片剂或胶囊。在该形式中，将此组合物再分成含有适当量该活性组分的单位剂量；单位剂量形式可以是包装的组合物如包装的粉末、小瓶、安瓿、预先充满的针筒或含有液体的小袋。单位剂量形式可以是例如胶囊或片剂本身，或者也可是适当数量的包装形式的这些组合物。
权利要求
1.具有下式的化合物或其药学上可接受的盐 其中 是选自以下的环 (即，B选自以下 其特征在于，该式中P和Q是 或 条件是当P是 ，Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢，1-6个碳原子的烷基，-CN，-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；和R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，B是 或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，其中W和X是碳，Y是氮，或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求1-3任一所述的化合物，其特征在于，P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑，或其药学上可接受的盐。
5.如权利要求1-4任一所述的化合物，其特征在于，其中L是在1-和4-位被G和Z分别取代的苯环。
6.如权利要求1-5任一所述的化合物，其特征在于，所述的G是SO2。
7.如权利要求1-6任一所述的化合物，其特征在于，所述的Z是氧。
8.如权利要求1-7任一所述的化合物，其特征在于，所述的R6和R7是氢。
9.如权利要求1-8任一所述的化合物，其特征在于，所述的R8是CH2OH或甲基。
10.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑-[3，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺。
11.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺。
12.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸羟基酰胺。
13.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺。
14.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是8-溴-4-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺。
15.一种制备如权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤a)将式V的化合物或其活性衍生物与羟胺反应，产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，Q是COOH或其活性衍生物；b)将式VI的化合物去保护产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，R30是保护基团；c)拆解权利要求1的式B化合物的旋光活性异构体的混合物(如外消旋物)，从而分离出基本无其他对映异构体或非对映异构体的一种对映异构体或非对映异构体；或d)用药学上可接受的酸来酸化式I的碱性化合物，得到药学上可接受的盐。
16.一种如下式的化合物 其特征在于，R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是1-6个碳原子的烷基，2-6个碳原子的链烯基，2-6个碳原子的炔基，3-6个碳原子的环烷基，苯基，萘基，5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S，或5-9元杂环烷基，所述的杂环烷基的1或2个杂原子选自N、NR9、O或S。
17.一种如下式的化合物 其特征在于，R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；或5-9元杂环烷基，所述的杂环烷基的1或2个杂原子选自N、NR9、O或S；和J是氟、溴、氯、1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基。
18.一种在需要抑制的哺乳动物中抑制TNF-α转化酶(TACE)介导的病理变化的方法，其特征在于，所述的方法包括给予所述的哺乳动物治疗有效剂量的式B的化合物或其药学上可接受的盐其中B是 ，或 P和Q是 或 ，条件是当P是 ，Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；和R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述的疾病是类风湿性关节炎、移植排斥、恶病质、炎症、发烧、胰岛素抗性、脓毒性休克、充血性心力衰竭、中枢神经系统炎性疾病、肠炎病或HIV感染。
20.一种治疗需要接受治疗的患者以下疾病的方法类风湿性关节炎、移植排斥、恶病质、炎症、发烧、胰岛素抗性、脓毒性休克、充血性心力衰竭、中枢神经系统炎性疾病、肠炎病或HIV感染，其特征在于，所述的方法包括给予所述的哺乳动物治疗有效剂量的式B的化合物或其药学上可接受的盐其中B是 或 P和Q是 或 条件是当P是 ，Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基。
21.一种药物组合物，其特征在于，所述的组合物包含式B的化合物或其药学上可接受的盐，其中B是 或 P和Q是 或 条件是当P是 Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基；和药学上可接受的载体。
全文摘要
本文公开了式(a)、(b)、(c)或(d)的化合物,其中P和Q是(e)或(f),条件是当P是(e)时,Q是(f)且反之亦然;这些化合物可用于治疗TNF－α所介导的疾病,如类风湿性关节炎、骨关节炎、败血症、AIDS、溃疡性结肠炎、多发性硬化、局限性回肠炎和退化性软骨丧失。
文档编号A61P37/00GK1337962SQ00803029
公开日2002年2月27日 申请日期2000年1月27日 优先权日1999年1月27日
发明者J·I·莱文, J·M·陈, 杜学梅, J·D·阿尔布赖特, A·萨斯科 申请人:美国氰胺公司
技术领域：
本发明涉及作为TNF-α转化酶(TACE)的抑制剂的炔芳基或杂芳基氨磺酰和次膦酸酰胺异羟肟酸。本发明的化合物可用于治疗TNF-α介导的疾病，如类风湿性关节炎、骨性关节炎、败血症、AIDS、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、局限性回肠炎和退化性软骨丧失。
背景技术：
TNF-α转化酶(TACE)催化膜结合TNF-α前体蛋白形成TNF-α。TNF-α是一种促炎症细胞因子，据信在以下疾病中起作用类风湿性关节炎(Shire，M.G.；Muller，G.W.Exp.Opin.Ther.Patents 1998，8(5)，531；Grossman，J.M.；Brahn，E.J.Women’s Health 1997，6(6)，627；Isomaki，P.；Punnonen，J.Ann.Med.1997，29，499；Camussi，G.；Lupia，E.Drugs，1998，55(5)，613)、脓毒性休克(Mathison，等人，J.Clin.Invest.1988，81，1925；Miethke，等人，J.Exp.Med.1992，175，91)、移植排斥(Piguet，P.F.；Grau，G.E.；等人，J.Exp.Med.1987，166，1280.)，恶质病(Beutler，B.；Cerami，A.Ann.Rev.Biochem.1988，57，505)、厌食、炎症(Ksontini，R，；MacKay，S.L.D.；Moldawer，L.L.Arch.Surg.1998，133，558.)、充血性心力衰竭(Packer，M.Circulation，1995，92(6)，1973；Ferrari，R.；Bachetti，T.等人.Circulation，1995，92(6)，1479)、局部缺血后重复灌注(ischaemic)的损伤、中枢神经系统炎性疾病、肠炎、胰岛素抗性(Hotamisligil，G.S.；Shargill，N.S.；Spiegelman，B.M.；等人.Science，1993，259，87.)和HIV感染(Peterson，P.K.；Gekker，G.；等人，J.Clin.Invest.1992，89，574；Pallares-Trujillo，J.；Lopez-Soriano，F.J.Argiles，J.M.Med.Res.Reviews，1995，15(6)，553)，及其熟知的抗肿瘤特性(Old，L.Science，1985，230，630)。例如，用抗TNF-α抗体和转基因动物作的研究表明阻断TNF-α的形成抑制了关节炎的发展(Rankin，E.C.；Choy，E.H.；Kassimos，D.；Kingsley，G.H.；Sopwith，A.M.；Isenberg，D.A.；Panayi，G.S.Br.J.Rheumatol.1995，34，334；Pharmaprojects，1996，Therapeutic Updates 17(10月)au197-M2Z)。最近这个观察已扩展到人，如“人类疾病中的TNF-α”，CurrentPharmaceutical Design，1996，2，662所述。
预计TACE的小分子抑制剂具有治疗各种疾病症状的潜力。虽然已知有许多TACE抑制剂，但这些分子中的许多是肽类或类肽，存在生物可利用性和药物动力学问题。另外，这些分子中许多是非选择性的基质金属蛋白酶(尤其是MMP-1)的强抑制剂。已假设对MMP-1(胶原酶1)的抑制会造成MMP抑制剂临床实验中的关节疼痛(Scrip，1998，2349，20)。因此长效、选择性、口服生物可利用性的非肽类TACE抑制剂对治疗上述疾病是非常理想的。
WIPO国际出版物WO9816503、WO9816506、WO9816514和WO9816520和美国专利No.5,776,961公开了呈下式的异羟肟酸氨磺酰MMP/TACE抑制剂的例子，其中2碳链将异羟肟酸和氨磺酰氮分开。 美国专利N0.5,455,258、5,506,242、5,552,419、5,770,624、5,804,593和5,817,822以及欧洲专利EP606,046A1和WIPO国际出版物WO9600214和WO9722587公开了基质金属蛋白酶和/或TACE的非肽类抑制剂，即以下所示的异羟肟酸芳基氨磺酰，其中1碳将异羟肟酸和氨磺酰氮分开。其他出版物公开的氨磺酰为基础的MMP抑制剂，是以下所示的氨磺酰-异羟肟酸的变体或氨磺酰-异羟肟酸的类似物，公开于欧洲专利EP-757037-A1和EP-757984-A1和WIPO国际出版物WO9535275、WO9535276、WO9627583、WO9719068、WO9727174、WO9745402、WO9807697和WO9831664、WO9833768、WO9839313、WO9839329、WO9842659和WO9843963。MacPherson，等人在J.Med.Chem，(1997)，40,2525和Tamura等人在J.Med.Chem.(1998)，41，640中进一步详细公开了这种类型的MMP抑制剂。 公开MMP和/或TACE的β-氨磺酰-异羟肟酸抑制剂(其中异羟肟酸的α碳与氨磺酰的氮呈环状连接，如下所示)的出版物包括美国专利No.5,753,653、WIPO国际出版物WO9633172、WO9720824、WO9827069、WO9808815、WO9808822、WO9808823、WO9808825、WO9834918、WO9808827、Levin等人，Bioorg.&Med.Chem.Letters 1998，8，2657和Pikul等人，J.Med.Chem.1998，41，3568。 专利申请DE19,542,189-A1、WO9718194和EP803505公开了MMP和/或TACE抑制剂的其他环状氨磺酰例子。其中含氨磺酰的环稠合于芳环或杂芳环。 氨磺酰的类似物是次膦酸酰胺异羟肟酸MMP/TACE抑制剂，如以下结构所示，公开于WIPO国际出版物WO9808853。 WIPO国际申请9803166中公开了如下所示的氨磺酰MMP/TACE抑制剂，其中硫醇是锌螯合基团。 本发明的目的是公开芳基或杂芳基氨磺酰和次膦酸酰胺异羟肟酸MMP/TACE抑制剂，其中L基团被取代的丁炔基或炔丙醚、炔丙胺或炔丙硫醚所对取代。这些化合物在体外和细胞试验中提供对TACE活性水平增强的抑制和/或优于MMP-1的选择性。所以这些化合物可用于治疗TNF所介导的疾病。
发明详述本发明提供具有下式的TACE和MMP抑制剂 其中 是选自以下的环 (即B选自以下 或 在该式中P和Q是 或 条件是当P是 Q是 时，且反之亦然；W和X各分别是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R10；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各分别是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN或-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；或5-10元杂环烷基，所述的杂环烷基的1或2个杂原子选自N、NR9、O或S；R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基；或其药学上可接受的盐；和R10是苯基、萘基、1-6个碳原子的烷基、3-6个碳原子的环烷基、杂芳基、或5-7元杂环烷基环；或其药学上可接受的盐。
本发明所提供的优选化合物中B是 或其药学上可接受的盐。更优选的化合物其中B是 W和X是碳；Y是氮；或其药学上可接受的盐。
更优选的化合物中
B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中
B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中，B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；Z是氧；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中，
B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；Z是氧；R6和R7是氢；或其药学上可接受的盐。
在本发明更优选的实施例中，B是 W和X是碳；Y是氮；P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑；其中L是在1-和4-位分别被G和Z取代的苯环；G是SO2；Z是氧；R6和R7是氢；R8是-CH2OH或甲基；或其药学上可接受的盐。
本发明最优选的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑(pyrazolo)-[3，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺；4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺；4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸羟基酰胺；4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺；和8-溴-4-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺。
本文所用的杂芳基是5-10元单或双环芳族环，其中1-3个杂原子选自N、NR9、S和O。杂芳基较佳地是 或 其中K是NR9、O或S，R9是氢、苯基、萘基、1-6个碳原子的烷基、或3-6个碳原子的环烷基。优选的杂芳环包括吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三唑、吡唑、咪唑、异噻唑、噻唑、异噁唑、噁唑、吲哚、异吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、异喹啉、喹噁啉、喹唑啉、苯并三唑、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并异噁唑和苯并噁唑。
对A的定义而言，更优选地A是选自以下的杂芳基 或 本发明中的杂芳基可以是任选地单或双取代的。
本文所用的杂环烷基是5-10元饱和的或不饱和单或双环，其中1或2个杂原子选自N、NR9、S和O。本发明杂环烷基环较佳地选自 或 其中K是NR9、O或S，R9是氢、苯基、萘基、1-6个碳原子的烷基、或3-6个碳原子的环烷基。优选的杂环烷基环包括哌啶、哌嗪、吗啉、四氢吡喃、四氢呋喃或吡咯烷。本发明的杂环烷基可任选地为单或双取代。
本文所用的芳基指苯基或萘基，可任选地单、双或三取代。
烷基、链烯基、炔基和全氟烷基包括直链和支链部分。烷基、链烯基、炔基和环烷基可以是未取代的(连接氢的碳原子、或链或环中的其他碳原子)或单个或多个取代的。
卤素指溴、氯、氟和碘。
芳基、杂芳基、烷基、链烯基、炔基、环烷基适合的取代基包括(但不限于)卤素、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、3-6个碳原子的环烷基、-OR2、-CN、-COR2、1-4个碳原子的全氟烷基、1-4个碳原子的-O-全氟烷基、-CONR2R3、-S(O)nR2、-OPO(OR2)OR3、-PO(OR2)R3、-OC(O)NR2R3、-C(O)NR2OR3、-COOR2、-SO3H、-NR2R3、-N[(CH2)2]2NR2、-NR2COR3、-NR2COOR3、-SO2NR2R3、-NO2、-N(R2)SO2R3、-NR2CONR2R3、-NR2C(＝NR3)NR2R3、NR2C(＝NR3)N(SO2R2)R3、NR2C(＝NR3)N(C＝OR2)R3、-SO2NHCOR4、-CONHSO2R4、-四唑-5-基、-SO2NHCN、-SO2NHCONR2R3、苯基、萘基、杂芳基或杂环烷基；其中-NR2R3可形成吡咯烷、哌啶、吗啉、硫代吗啉、噁唑烷、噻唑烷、吡唑烷、哌嗪或氮杂环丁烷环；R2和R3各分别是氢、1-6个碳原子的烷基、3-6个碳原子的环烷基、苯基、萘基、杂芳基或杂环烷基；n是0-2；和R4是1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、3-6个碳原子的环烷基、1-4个碳原子的全氟烷基、苯基、萘基、杂芳基或在环烷基。
本发明杂环烷基的合适的取代基包括(但不限于)1-6个碳原子的烷基、3-6个碳原子的环烷基、苯基、萘基、杂芳基和杂环烷基。
当某部分含有相同名称的一个以上的取代基时，这些取代基各自可以是相同的和不同的。
当本发明的化合物含有碱性部分时，可从以下无机和有机酸形成药学上可接受的盐，如醋酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、丁二酸、反式丁烯二酸、顺式丁烯二酸、丙二酸、扁桃酸、羟基丁二酸、苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸和类似已知的可接受的酸。当本发明的化合物含有酸性部分时，也可从无机和有机碱形成盐，较佳地为碱金属盐如钠盐、锂盐或钾盐。
本发明的化合物可含有不对称碳原子，本发明的一些化合物可含有一个或多个不对称中心，且因此可能产生旋光异构体和非对映异构体。不考虑立体化学而言，本发明包括这种旋光异构体和非对映异构体；以及消旋和拆解的、对映体纯化的R和S立体异构体；以及R和S立体异构体的其他混合物和它们药学上可接受的盐。据信一种旋光异构体包括非对映异构体和对映体或立体异构体具有比其他有利的特性。所以当公开和说明本发明权利时，当公开一种消旋混合物时，显然考虑了公开和要求了这两种光学异构体的权利包括非对映异构体和对映异构体，或基本无其他物质的立体异构体。
本发明的化合物表现出能抑制酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-α转化酶(TACE)，并因此可用于治疗关节炎、肿瘤转移、组织溃烂、异常伤口的愈合、牙周病、移植排斥、胰岛素抗性、骨骼疾病和HIV感染。具体说，本发明的化合物在体外和细胞试验中提供增强的抑制TACE活性的水平和/或提高优于MMP-1的选择性，因此这些化合物可特别用于治疗TNF所介导的疾病。
本发明还提供制备如以下定义的式1化合物的方法，所述的方法包括如下步骤之一a)将式V的化合物或其活性衍生物与羟胺反应，产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，Q是COOH或其活性衍生物；b)将式VI的化合物去保护产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，R30是合适的保护基团如叔丁基、苄基或三烷基甲硅烷基；c)拆解式B化合物的旋光活性异构体的混合物(如外消旋物)，从而分离出基本无其他对映异构体或非对映异构体的一种对映异构体或非对映异构体；或d)用药学上可接受的酸来酸化式I的碱性化合物，得到药学上可接受的盐。
对步骤a)而言，反应可用本领域已知的方法进行，如与酰基氯反应形成活性衍生物(即酰基氯)，然后再与羟胺反应。
如步骤b)所示除去保护基团也可用本领域已知的方法进行，得到异羟肟酸。
对步骤c)而言，可用标准分离方法分离特定的对映体或非对映异构体形式。例如，通过与‘拆解试剂’的单对映体(如非对映异构体盐形式或共价键形式)反应，可将消旋混合物转化成旋光性非对映异构体的混合物。可用标准方法(如结晶或层析)分离如此得到的旋光性非对映异构体的混合物，然后处理各旋光性非对映异构体以除去‘拆解试剂’，从而释放出本发明化合物的单对映异构体。也可用手性层析(用手性载体、洗脱液或离子配对剂)直接分离对映异构体混合物。
可以药学上可接受的盐的形式分离式I的化合物，如用上述酸处理的有机或无机酸。
本发明还涉及制备结构B化合物的方法，包括如下的一个或多个反应1)将式I的化合物或其盐或溶剂合物烷基化， 成式II的化合物 2)将上述式II的化合物或其盐或溶剂合物，与氯化剂(如亚硫酰氯、氯磺酸、草酰氯、五氯化磷)或其他卤化剂(如氟磺酸或亚硫酰溴)反应，形成式III的化合物 其中J是氟、溴、氯。
通过将该化合物与1，2，4-三唑、咪唑或苯并三唑反应，分别可进一步将得到的磺酰氯、磺酰氟或磺酰溴转化成酰三唑(triazolide)、酰咪唑(imidazolide)或酰苯并噻唑(benzothiazolide)衍生物，其中J为1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基，R6、R7和R8的定义如上。
本发明还涉及制备结构B化合物的方法，包括如下一个或多个反应1)将苯酚或其盐或溶剂合物烷基化成式IV的化合物 2)将上述式IV的化合物或其盐或溶剂合物与氯磺酸反应，制备上述式II的化合物。
特别优选的中间体是式II和III的化合物，条件是R6不是氢。
可按以下流程，从可购得的起始原料或用文献方法制备的起始原料，制备本发明的化合物。通常已知的起始原料是如下所示的(V-XXV)。以下显示制备本发明典型化合物的这些流程。
化合物Va)Springer，RH；Scholten，MB；O’Brien，DE，Novinson，T；Miller，JP；Robins，RKJ.Med.Chem.1982，25(3)，235-42。
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b)Kan，MA；Guarconi，AE J.Heterocyclic Chem 1977，14，807-812。
化合物XIa)Forbes，IT；Johnson，CN；Jones，GE；Loudon，J；Nicholass，JM J.Med.Chem1990，2640-2645。
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化合物XIIa)Richardson，TO；Neale，N；Carwell，J J.Heterocyclic.Chem.1995，32，359-361。
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化合物XIIIa)Forbes，IT；Johnson，CN；Jones，GE；Loudon，J；Nicholass，JM J.Med.Chem1990，2640-2645。
b)Kan.MA；Guarconi，AE J.Heterocyclic Chem 1977，14，807-812。
化合物XIV、XV和XVIElworthy，T.R.，；Ford，A.P.D.；等人，J.Med.Chem.1997，40(17)，2674-2687。
化合物XVIIHeterocycles 1997，45，980。
化合物XVIIIYokoyama，Naokata.欧洲专利申请61pp.CODENEPXXDW。欧洲专利115469A1840808。
化合物XIXMendes，Etienne；Vernieres，Jean Claude；Simiand，Jacques Edouard；Keane，PeterEugene。欧洲专利申请12pp.CODENEPXXDW.欧洲专利346207 A1891213。
化合物XXMendes，Etienne；Vernieres，Jean Claude；Simiand，Jacques Edouard；Keane，PeterEugene。欧洲专利申请12pp.CODENEPXXDW.欧洲专利346207 A1891213。
化合物XXIMorita，Yoshiharu；Wagatsum，Kazuo.Japan.Kokai，4pp.CODENJKXXAF.日本专利50058094750520Showa。
化合物XXII和XXIIIArmitage，Bernard John；Leslie，Bruce William；Miller，Thomas Kerr；Morley，Christopher。PCT国际申请110pp.CODENPIXXD2.WO9500511 A1950105。
化合物XXIVMinami，S.；Matsumoto，J.；Kawaguchi，K，；Mishio，S.；Shimizu，M.；Takase，Y.；Nakamura，S.(Dainippon Pharmaceutical Co.，Ltd.Japan)Japan.Kokai，3pp.CODENJKXXAF.日本专利50014697750215Showa。
化合物XXVKihara，N.；Tan，H.，Takei，M.，Ishihara，T.(Mitsui PechochemicalIndustries，Ltd.，Japan；Suntory，Ltd)Jpn.Kokai Tokyo Koho，11pp.CODENJKXXAF.JP62221686 A2870929Showa。
可用有机合成领域技术人员已知的常规方法制备本发明的化合物。以下流程(流程1-11)说明了所用的反应顺序。在以下的流程中，部分A定义为B的双环杂芳基部分，如下所示A是 或 本领域技术人员将会认识到当分子上其他潜在的反应官能团受到屏蔽或保护，因而避免不利的副反应和/或增加反应的产量时，可最佳地进行某些反应。为此，本领域技术人员可以使用保护基团。这些保护基团的例子可见于T.W.Greene，P.G.M.Wuts“有机合成中的保护基团”，第二版，1991，Wiley&Sons，New York。较佳地，将氨基酸起始原料上反应性侧链的官能团保护起来。对特定反应保护基团的需要和选择是本领域技术人员已知的，这取决于被保护的官能团(羟基、氨基、羧基等)的性质、含该取代基的分子的结构和稳定性及反应条件。
当制备或加工本发明的含芳基、杂芳基或杂环化合物时，本领域技术人员知道可在构建该环的同时、之前或之后制备该环上的取代基。为清晰起见，以下从该流程中删去了这些环上的取代。本领域技术人员会明白为了最佳制备本发明化合物，合成步骤的性质和顺序可作改变。
按流程1制备本发明的异羟肟酸化合物，其中如上所述X＝G，通过将羧酸2转化成相应的酰基氯或酸酐，或通过将它与适当的肽偶联剂(如1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺(EDC)和1-羟基-苯并三唑水合物(HOBT))反应，然后与羟胺反应形成1，或与被保护的羟胺衍生物反应，得到3。然后可用已知的方法去保护化合物3，得到异羟肟酸1，其中R30是叔丁基、苯基、三烷基甲硅烷基或其他合适的屏蔽基团。
流程1 可按流程2所示制备羧酸2。将氯-酯4其中R40是氢或合适的羧酸保护基团，与氨磺酰5反应生成邻-亚磺酰氨基-酯6。用酸、碱水解或其他方法(包括选择保护基团R40)进行该酯的水解生成羧酸2。另外，首先将氯-酯4与伯胺反应生成7，然后用8将其磺酰基化或磷酸化，其中J是合适的离去基团包括(但不限于)氯，生成酯6。
流程2
由流程3显示了制备磺酰剂8和氨磺酰5的方法。如此，可用乙炔10(其中J是合适的离去基团如卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲烷磺酸酯(triflate))将磺酸盐9(其中ZR50是羟基、硫醇或取代的氨基部分)烷基化，得到11。乙炔10是可购得的或是已知的化合物，或它们可用本领域技术人员已知的方法合成。可通过已知的方法如与草酰氯或其他与取代基R6、R7和R8和乙炔相容的试剂反应，将磺酸盐11转化成相应的磺酰氯或其他磺酰剂8。另外，通过与化合物10反应可将二硫化物12转化成二炔13，然后还原二硫键得到类似的硫醇，可用已知的方法将其转化成8。用10将酚、硫酚、苯胺或被保护的苯胺14烷基化得15，然后与氯磺酸反应得到磺酸16，可用草酰氯或类似的试剂不难将其转化成8。通过保护硫醇、ZH的烷基环(Z是O、N或S)和硫的去保护及随后磺酸16的氧化，苯硫酚17也是8的前体。将8与伯胺R5NH2反应制备氨磺酰5。可用标准方法用15来制备磷酸化剂8，其中X是P(O)R4。
流程3
如流程4所示，在4用氯置换或7官能化后还可再加上乙炔侧链。所以，可将氯-酯4与化合物20反应(其中ZR50是羟基或被保护的羟基、硫醇或胺)生成21。除去R50屏蔽基团得到23，随后用10烷基化得到的苯酚、硫醇或胺，得到6。在此情况中XR50为OH，无需去保护步骤得到23。也可从氨基-酯7和22形成化合物21。
流程4 如流程5所示，炔衍生物6还可通过氟化合物26不难从4和/或7与氟芳基24反应制得。在极性质子惰性溶剂如DMF中，在碱如氢化钠存在时用屏蔽的羟基、硫醇或氨基(HZR70，其中R70是合适的保护基团)置换26的氟，随后去保护得到23，随后可用10将其烷基化得到6。可用Na2S、K2S、NaSH或KS(C＝S)OEt，将26转化成23，其中Z是硫。还可在极性质子惰性溶剂中，在碱如氢化钠存在时，用炔丙基衍生物27(其中Z是O、S或NH)置换26的氟，直接得到6。
流程5 如流程6所示，可从29得到化合物6(其中Z是亚甲基)。在氯化烃溶剂中用N-琥珀酰亚胺溴将29苄基溴化，得到溴化物31。随后用合适的铜酸丙炔替代溴得到氨磺酰6。
流程6 如流程7所示，可从4和/或7起始，合成6的炔丙胺类似物。用碳上的氢和钯、氯化锡或其他已知的方法还原34的硝基部分，得到苯胺35，随后用10烷基化得到6。在用10烷基化之前可衍生苯胺35形成36，并在烷基化步骤后去保护。
流程7 本发明的化合物还可通过以下方法制备在形成酯6后的任何一个阶段，修饰乙炔侧链上的取代基。可用标准方法操作官能团如卤素、羟基、氨基、醛、酯、酮等，形成化合物1的R1、R2、R3和R4所定义的部分。有机合成领域的技术人员知道这些方法的成功使用取决于分子其他部分上取代基的相容性。本文所述的保护基团和/或反应步骤顺序的变化可根据需要而定。
流程8显示了衍生结构为37的化合物(相当于化合物6，其中R8是氢)的一些方法。将终产物炔37进行金属取代，然后以醛或烷基卤、磺酸盐或三氟甲烷磺酸酯加成，产生衍生物38和39。37与甲醛和胺反应产生Mannich加成产物40。溴化氰加成于40产生炔丙基溴化物41，它可用各种亲核试剂置换，生成如醚、硫醚和胺(其中Z的定义如上)。37的钯催化的偶联反应产生芳基或杂芳基炔43。有机合成领域技术人员知道这些方法的成功使用取决于分子其他部分上取代基的相容性。本文所述的保护基团和/或反应步骤顺序的变化可能根据需要而定，R35、R45、R55、R65和R75是烷基如甲基。
流程8 仅出于说明的目的，流程9-11显示了制备流程2和4-7中用作起始原料的双环杂芳基氯-酯4的方法，其中A是喹啉、吡唑啉吡啶、异噁唑吡啶、异噻唑吡啶和吡唑啉[1，5-b]嘧啶。流程9显示了从相应的苯胺和烷氧基亚甲基丙二酸酯(如乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯)为起始物，制备喹啉。通过与三氯氧化磷反应可将得到的羟基-酯转化成所需的氯酯4。
流程9 流程10显示了本发明吡唑吡啶、异噁唑吡啶和异噻唑吡啶的合成。所以，将氨基吡唑、氨基异噁唑或氨基噻唑与烷氧基亚甲基丙二酸酯缩合，生成中间体氨基亚甲基丙二酸酯。通过在二苯醚中240℃加热，将此化合物环化成吡唑吡啶、异噁唑吡啶或异噻唑吡啶。然后通过与三氯氧化磷反应，将得到的双环杂芳基羟基-酯转化成氯-酯。
流程10 按流程11，用流程10所述的反应，制备吡唑啉[1，5-b]嘧啶。
流程11 流程12显示了双环杂芳基环A的官能化，出于说明的目的，A是喹啉环。通过钯催化的Heck偶联，碘代喹啉与三丁基乙烯锡反应。通过Heck反应可将不饱和酯和酰胺可偶联于卤代喹啉交联。其他三烷基锡试剂是易购得的，且可以类似地使用。也可通过Suzuki反应，将可购得的或易制备的硼酸偶联于碘代喹啉。按流程4、2和1，用三溴化硼或其他适合的去保护剂来切割甲酯，可将化合物如44转化成本发明的化合物。
流程12 如流程13所示的喹啉环，通过钯催化的炔的偶联，可将卤代杂芳基官能化。氢化炔也可生成烯烃和链烷烃。按流程4、2和1，用三溴硼或其他合适的去保护剂切割甲酯，将化合物45和46转化成本发明的化合物。
流程13 流程14描述了将氨基引入结合于本发明化合物的氨磺酰氮原子的取代基的方法。如此在流程14中，用炔丙基溴烷基化NH-氨磺酰，生成炔丙基氨磺酰。存在伯胺或仲胺和氯化亚铜时，将此炔与多聚甲醛反应生成炔丙胺47，再按流程1和2将其转化成本发明的化合物。
流程14 以下优选实施例说明了本发明代表性化合物的制备。起始原料、中间体和试剂是商品购得的或不难用有机合成领域技术人员已知的文献标准方法制备。
实施例14-丁-2-炔氧基-苯磺酸钠盐在1L异丙醇和225ml 1.0N氢氧化钠溶液配制的52.35g(0.225mol)4-羟基苯磺酸钠溶液中加入59.96g(0.45mol)1-溴-2-丁炔。将得到的混合物加热至70℃15小时，然后真空蒸发除去异丙醇。过滤收集得到的白色沉淀，用异丙醇和乙醚洗涤，真空干燥得到56.0g(100％)呈白色固体的丁炔醚。
实施例24-丁-2-炔氧基-苯磺酰氯在29ml二氯甲烷配制的43.8ml(0.087mol)2M草酰氯/二氯甲烷的0°溶液中逐滴加入6.77ml(0.087mol)DMF，随后加入7.24g(0.029mol)实施例1的产物。0°搅拌此反应混合物10分钟，然后让其升温至室温，搅拌天。然后将反应物倾倒入冰中，用150ml己烷提取。用水和盐水洗涤有机物，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到6.23g(88％)呈黄色固体的磺酰氯；m.p.63-65℃。电喷雾质谱为243.9(M+)。
实施例3丁-2-炔氧基-苯在溶解于100ml苯和40ml THF的6.14g(0.023mol)三苯基膦溶液中加入1.75ml(0.023mol)2-丁炔-1-醇。5分钟后，向反应物中加入溶解于10ml THF的2.00(0.023mol)苯酚，然后再加入3.69ml(0.023mol)偶氮二羧酸二乙酯。室温搅拌得到的反应混合物18小时，然后真空浓缩。以乙酸乙酯/己烷(1∶10)洗脱，在硅胶上层析残留物得到2.18g(70％)呈清澈液体的丁炔醚。电喷雾质谱为146.0MH+实施例44-丁-炔氧基-苯磺酰氯在丙酮/冰浴中N2下，逐滴将0.3ml二氯甲烷配制的0.073ml(1.1mmol)氯磺酸加到0.3ml二氯甲烷配制的0.146g(1.0mmol0实施例3产物的溶液中。加完后，移去冰浴，室温搅拌反应物2小时。然后在反应物中逐滴加入0.113ml(1.3mmol)草酰氯，随后加入0.015ml DMF。加热反应物回流2小时，然后用己烷稀释，倾倒入冰水中。用盐水洗涤有机层，硫酸钠干燥，真空浓缩得到0.130mg(53％)呈浅褐色固体的所需产物。
实施例54-丁-2-炔氧基-N-甲基-苯磺酰胺在冷却至0℃的、二氯甲烷配制的22.5ml(0.045mmol)2M甲铵溶液中，加入以45ml二氯甲烷配制的3.67g(0.015mol)4-丁-2-炔氧基-苯磺酰氯溶液。让反应物升温至室温，搅拌48小时。将得到的溶液倾倒入水中，用二氯甲烷提取。用2N柠檬酸溶液、水和盐水洗涤混合的有机物，Na2SO4干燥，Magnesol过滤，真空浓缩，得到3.23g(92％)呈白色固体的N-甲基氨磺酰；m.p.78-80℃。
分析C11H13NO3S计算值C，55.21；H，5.88；N，5.85实测值C，55.49；H，5.65；N，5.80实施例64-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑啉[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在40ml 1-甲基-2-吡啶酮配制的1.196g(5.00ml)实施例5产物的溶液中加入3.45g(0.025mol)碳酸钾、1.268g(5.00mol)乙基-4-氯-5，7-二甲基吡唑啉[3，4-b]吡啶-3-羧酸和0.075g 18-冠-6，将得到的混合物加热至100℃12小时。然后真空浓缩此反应混合物，用乙酸乙酯和水稀释。用水、2N柠檬酸溶液和盐水洗涤有机物，Na2SO4干燥，Magnesol过滤，真空浓缩。以乙酸乙酯/己烷(1∶2)洗脱，在硅胶上层析残留物，得到0.89g(39％)呈固体的产物；m.p.50-52℃。
分析C22H24NO5S计算值C，57.88；H，5.30；N，12.27实测值C，57.25；H，5.34；N，12.07实施例74-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑啉[3，4-b]吡啶-5-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑啉[3，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺在10ml THF和5ml甲醇配制的0.82g(1.798mmol)实施例6产物的溶液中加入2.15ml 1N氢氧化钠溶液，加热得到的混合物回流3小时，然后真空浓缩。用乙醚研磨残留物，过滤收集固体，真空干燥得到0.77g(95％)呈白色固体的羧酸盐。
在8.0ml二氯甲烷稀释的1.67ml(3.34mmol)2.0M草酰氯二氯甲烷的0°溶液中加入0.258ml(3.34mmol)DMF，0°搅拌此反应物15分钟。在反应物中加入悬浮于5ml DMF的0.75g(1.67mmol)羧酸盐的溶液，室温搅拌得到的混合物1小时，然后倾倒入1.395ml三乙胺、3ml THF和0.408ml 50％羟胺水溶液的0°混合物中。让反应物升温至室温过夜，然后真空浓缩有机物。用二氯甲烷和水稀释残留物，用2N柠檬酸溶液酸化，用水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。以乙酸乙酯/甲醇(4∶1)洗脱，在硅胶上层析残留物，得到0.28g(83％)呈白色固体的异羟肟酸；m.p.189-192℃。
分析C20H21N5O5S计算值C，54.17；H，4.77；N，15.79实测值C，54.14；H，4.77；N，15.43
实施例84-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在8ml 1-甲基-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)配制的0.105g(0.63mmol)60％氢化钠悬浮液中加入0.628g(2.63mmol0实施例5的产物，室温搅拌得到的混合物30分钟。加入7ml 1-甲基-2-吡咯烷酮配制的0.601g(2.50mmol)乙基-4-氯-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸溶液，将反应混合物加热至80-90℃48小时。然后真空浓缩反应混合物，用二氯甲烷稀释残留物。用水、2N柠檬酸溶液和盐水洗涤有机物，Na2SO4干燥，Magnesol过滤，真空浓缩。用乙酸乙酯/己烷研磨残留物，过滤所得固体，真空干燥，得到1.0g(90％)呈固体的产物；m.p.85-90℃。电喷雾质谱为444(M+H)+实施例94-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑[5，4-b]-吡啶-5-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑[5，4-b]-吡啶-5-羧酸羟基酰胺按实施例7的流程，将实施例8的乙酯产物转化成羧酸(白色固体，m.p.187-190℃)，然后再转化成异羟肟酸(白色固体，m.p.201-202℃)。
实施例104-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸乙酯按实施例6的流程，将8-甲氧基-4-氯-喹啉-3-羧酸乙酯与4-丁-2-炔氧基-N-甲基-苯磺酰胺反应，生成呈白色固体的亚磺酰氨基-喹啉，m.p.131-132℃。电喷雾质谱为468.9(M+H)+实施例114-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸羟基酰胺按实施例7的流程，将实施例10的乙酯产物转化成羧酸(白色固体，m.p.238℃，dec.；电喷雾质谱为440.9(M+H)+)，然后再转化成异羟肟酸(白色固体，m.p.179-181℃)；电喷雾质谱为455.9(M+H)+。
实施例124-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑-[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯按实施例6的流程，将4-氯-3-甲基-异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯与4-丁-2-炔氧基-N-甲基-苯磺酰胺反应，生成呈白色固体的亚磺酰氨基-喹啉，m.p.55-57℃。电喷雾质谱为460(M+H)+实施例134-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸和4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺按实施例7的流程，将实施例12的乙酯产物转化成羧酸(白色固体，m.p.230-232℃；电喷雾质谱为431.8(M+H)+)，然后再转化成异羟肟酸(白色固体，m.p.183-184℃)；电喷雾质谱为447(M+H)+。
实施例144-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯在15ml DMF配制的1.85g(6.67mmol)N-苄基4-甲氧基苯基-氨磺酰溶液中-次性加入0.267g(6.67mmol)60％氢化钠，室温氮气下搅拌得到的混合物15分钟。然后在该溶液中一次性加入乙基-4-氯-7-三氟甲基-3-喹啉羧酸酯(2.02g，6.67mmol)，85℃加热得到的混合物24小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒入水(300ml)和HCl(1N，水溶液，100ml)中，用乙酸乙酯(2×100ml)提取。硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并真空浓缩。以15％-50％乙酸乙酯/己烷洗脱，在硅胶上层析残留物，得到3.11g(88％)所需产物。电喷雾质谱为545.1(M+H)+。
实施例154-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用1.012g(3.34mmol)4-氯-8-三氟甲基-3-喹啉羧酸乙酯生成1.509g(83％)呈白色固体的所需喹啉酯。电喷雾质谱为545.1(M+H)+。
实施例164-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-溴-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用0.848g(2.70mmol)6-溴-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯生成1.418g(95％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为557.1(M+H)+。
实施例174-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-溴-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用0.777g(2.47mmol)7-溴-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯生成1.169g(85％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为557.1(M+H)+。
实施例184-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法，用1.216g(4.02mmol)4-氯-6-三氟甲基-3-喹啉羧酸乙酯生成2.171g(99％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为545.0(M+H)+。
实施例194-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸在4ml甲醇/THF(1∶1)配制的1.065g(2.00mol)实施例14产物的溶液中加入2ml1N氢氧化钠溶液，25℃搅拌得到的混合物18小时。然后用1N HCl酸化反应物，用乙酸乙酯(200ml)提取。用水和盐水洗涤有机层，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。以乙酸乙酯/己烷(1∶9)研磨残留物，过滤得到828mg(82％)呈白色固体的所需羧酸。电喷雾质谱为517.1(M+H)+。
实施例204-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-三氟甲基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用1.255g(2.64mmol)实施例15的产物生成0.988g(83％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为517.1(M+H)+。
实施例214-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-溴-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用1.198g(2.16mmol)实施例16的产物生成0.921g(81％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为529.0(M+H)+。
实施例224-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-7-溴-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用0.969g(1.74mmol)实施例17的产物生成0.804g(87％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为529.0(M+H)+。
实施例234-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-三氟甲基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用2.043g(3.75mmol)实施例18的产物生成1.82g(88％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为515.0(M-H)+。
实施例244-[乙基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-碘-喹啉-3-羧酸乙酯以实施例14所述的相同方法并用N-乙基-4-甲氧基苯磺酰胺代替N-苄基-4-甲氧基苯磺酰胺，用1.076g(5.00mmol)8-碘-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯生成2.438g(4.51mmol，90％)呈白色固体的所需的喹啉酯。电喷雾质谱为541.0(M+H)+。
实施例254-[乙基-4(4-甲基-苯磺酰基)-氨基]-8-乙烯基-喹啉-3-羧酸乙酯在150ml DMF配制的实施例24产物(2.438g，4.51mmol)的溶液中加入三丁基乙烯锡(1.43g，4.51mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(520mg，10％)、碘化亚铜(171mg，20％)和5ml三乙胺。N2下搅拌混合物，85℃加热18小时。将其倾倒入400ml饱和重碳酸钠和饱和氯化铵溶液(1∶1)的混合液中，用乙酸乙酯(2×200ml)提取。硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并在旋转蒸发仪中浓缩。用己烷/乙酸乙酯(100-0％)梯度洗脱，在300ml硅胶上层析残留物。得到1.706g(3.88mmol，86％)所需的喹啉酯。电喷雾质谱为441.1(M+H)+。
实施例264-[甲基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-苯基乙烯基-喹啉-3-羧酸乙酯联用实施例14和25的方法，用苯基乙炔替换二乙烯，用N-乙基-4-甲氧基氨磺酰替换N-苄基-4-甲氧基氨磺酰，从4-氯-3-喹啉羧酸乙酯获得中间产物4-[乙基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-苯基乙炔基-喹啉-3-羧酸乙酯。电喷雾质谱为515.3(M+H)+。
实施例274-[乙基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-8-乙烯基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用1.593g(3.62mmol)实施例25的产物生成1.333g(89％)呈白色固体的所需的喹啉酸。电喷雾质谱为411.1(M-H)+。
实施例284-[甲基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-苯基乙炔基-喹啉-3-羧酸以实施例19所述的相同方法，用实施例26的产物合成了标题化合物。电喷雾质谱为485.3(M-H)+。
实施例294-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-硝基-喹啉-3-羧酸以实施例14和19所述的相同方法，用5.613g(20.0mmol)4-氯-6-硝基-3-喹啉羧酸乙酯生成2.676g(27％，分两步)呈白色固体的标题化合物。电喷雾质谱为492.3(M-H)+。
实施例304-[苄基-(4-甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-6-硝基-喹啉-3-羧酸联用实施例14和19的方法，并用N-甲基-4-甲氧基苯磺酰胺代替N-苄基-4-甲氧基苯磺酰胺，得到中间体8-溴-4-[甲基-(甲氧基-苯磺酰基)-氨基]-喹啉-3-羧酸。电喷雾质谱为449.2(M-H)+。
实施例31{[(1-苯基-5-吡唑基)氨基]亚甲基}丙二酸二乙酯用油浴在115-120℃加热15.9g(0.10mmol)1-苯基-5-氨基吡唑和21.6g(0.10mol)乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯的混合物2小时。冷却后，从含有1％乙醇的热己烷中重结晶晶体块。冷却至室温并过滤得到24.8g(75％)灰白色晶体，m.p.96-97℃ 。
实施例324-羟基-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯240-250℃加热18.1g(0.055mol){[(1-苯基-5-吡唑基)氨基]亚甲基}丙二酸二乙酯和150ml邻苯二甲酸二乙酯的混合物1小时。冷却混合物，用己烷稀释。冷却过滤得到晶体，用己烷和己烷-乙醇(1∶1)洗涤，得到11g(70％)灰白色晶体，m.p.149-150℃。由类似的小规模操作，由110ml乙醇重结晶1.75g得到1.58g灰白色晶体，m.p.149-150℃。
实施例334-氯-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯回流5.76g(20.33mmol)4-羟基-1-苯基-1H-吡唑-[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和15.58g三氯氧化磷的混合物1.5小时，冷却缓慢倾倒入碎冰中。过滤混合物，用冰水洗涤固体，干燥得到6.0g固体，m.p.89-91℃。
实施例344-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯按实施例31、32和33的流程，以1，3-二甲基-5-氨基吡唑为起始物，制备得到氯-酯，m.p.89-90℃。
实施例354-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在6ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮配制的1.16g(4.2mmol)苄基-(4-甲氧基苯-磺酰基)-胺溶液中加入0.168g(4.2mmol)氢化钠(用油配制的60％)，室温搅拌此混合物直到气体放出停止。将上述混合物加到用2ml 1-甲基-2-吡咯烷酮配制的1.01g(4mmol)4-氯-1，3-二甲基吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯的混合物中。
用油浴在50℃加热此混合物过夜，然后用油浴在100℃加热1.5天。将混合物倾倒入800ml水中，用乙酸乙酯提取。提取物用水、2N柠檬酸、水、盐水洗涤，并干燥(Na2SO4)。除去溶剂，以己烷-乙酸乙酯(2∶1)为洗脱液，在硅胶上层析残留物得到0.64g呈固体的产物，m.p.170-172℃。对大规模操作而言，90℃加热30ml1-甲基-2-吡啶酮配制的5.07g(0.02mmol)4-氯-1，3-二甲基吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和8.0g(0.0289mmol)苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)胺3天，得到3.65g产物。
实施例364-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸用油浴在70℃加热用4ml四氢呋喃-甲醇(1∶1)配制的0.48g(0.97mmol)4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和0.29ml 10NNaOH的混合物2小时，真空除去溶剂。将残留物溶解在20mlH2O中，用10ml乙酸乙酯提取溶液。将2N柠檬酸(pH4-5)加到水层中，过滤沉淀的固体，用H2O洗涤，得到的白色固体真空干燥过夜后生成晶体，mp165-167℃。
实施例374-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸钾盐将用15ml甲醇-水(1∶1)配制的3.60g(7.28mmol)4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和0.44g(7.84mmol)氢氧化钾(颗粒)的混合物回流过夜。再加入40mg氢氧化钾，将混合物回流4小时(所有固体都溶解)。真空除去溶剂，加入甲苯，并真空除去。用乙酸乙酯研磨残留物，过滤，用乙酸乙酯洗涤固体得到3.8g呈白色固体的产物。
实施例384-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯在4ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮配制的1.39g(5mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)(3-吡啶基-甲基)胺的溶液中加入0.2g(5mmol)氢化钠(60％，以油配制)，室温搅拌此混合物直至气体放出停止。在此混合物中加入1.15g(4.54mmol)4-氯-1，3-二甲基吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和2ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮。用油浴在90℃氮气中的密封管内搅拌此混合物3天。冷却此混合物，倾倒入水中，用乙酸乙酯提取。用水、盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥。用无水硅酸镁薄板过滤此溶液，用乙酸乙酯洗涤此滤板。真空浓缩滤液至干燥得到1.3g固体。以乙酸乙酯作溶剂，在硅胶上层析得到0.35g呈固体的产物，mp152-154℃。
实施例394-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸将7.8ml乙醇和4.83ml水配制的1.34g(2.7mmol)4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和2.97ml 1N氢氧化钾的混合物回流20小时。再加入0.54ml 1N氢氧化钾，回流此混合物4小时。真空除去溶剂，加入甲苯，并在真空下除去。将残留物溶解于20ml水中，用乙酸乙酯提取。用2N柠檬酸酸化水层，过滤得到沉淀下的固体，用水洗涤。真空干燥此固体得到0.98g固体，mp256-258℃。
实施例404-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸钾盐将用4ml甲醇-水(1∶1)配制的0.34g(0.68mmol)4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和0.748ml 1N氢氧化钾的混合物回流24小时。真空除去溶剂，在残留物中加入甲苯。真空除去溶剂以除去水，用乙酸乙酯研磨残留物，得到呈固体的产物，mp160-167℃。
实施例41
4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例35的流程，将实施例33的产物与苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)胺和氢化钠反应生成4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.124-126℃。
按实施例36的流程，将上述酯水解成4-[苯基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.108-110。
实施例424-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例38的流程，将实施例33的产物与(4-甲氧基苯磺酰基)(3-吡啶甲基)胺和氢化钠反应生成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.89-91℃。
按实施例39的流程，将上述酯水解成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.136-138℃。
实施例434-氯-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯按实施例31的流程，以1-苯基-3-甲基-5-氨基吡唑为起始物，得到{[(1-苯基-3-甲基-5-吡唑)氨基]亚甲基}丙二酸二乙酯，m.p.70-72℃。
按实施例32的流程，将亚甲基丙二酸转化成4-羟基-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.132-134℃。
按实施例33的流程，将上述混合物转化成本实施例的产物，m.p.108-110℃。
实施例444-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例35的流程，将实施例43的产物与苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)胺和氢化钠反应生成4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.164-166℃。
按实施例36的流程，将上述酯水解成4-[苄基-(4-甲氧基苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.246-248℃。
实施例454-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例38的流程，将实施例43的产物与(4-甲氧基苯磺酰基)(3-吡啶甲基)胺和氢化钠反应生成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。m.p.148-150℃。
按实施例39的流程，将上述酯水解成4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸。m.p.235-236℃。
实施例464-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸在10ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮配制的0.366g(8.4mmol)氢化钠(60％，以油配制的)搅拌的混合物中加入(分批加入)2.34g(8.4mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基-胺甲酯。室温搅拌此混合物直至气体放出停止，加入1.80g(7.0mmol)4-氯-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯。在80-90℃加热此混合物44小时，真空除去溶剂，用水稀释残留物。用乙酸乙酯提取混合物，用2N柠檬酸、水、1N NaHCO3、盐水洗涤提取物，并干燥(Na2SO4)。用-无水硅酸镁薄板过滤溶液，滤板用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液至干得到2.39g呈黄色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯，m.p.142-144℃。
分析C23H22N4O5S2计算值C，55.4；H，4.5；N，11.2实测值C，55.5；H，4.3；N，11.1按实施例39的流程，用KOH水解2.25g上述酯的样品，得到呈白色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸，m.p.234-236℃。
分析C21H18N4O5S2计算值C，53.6；H，3.9；N，11.9
实测值C，53.5；H，3.8；N，11.8实施例474-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸按实施例46的流程，将1.7g(7mmol)4-氯-3-甲基异噻唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯与2.92g(0.0105mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基-胺反应，生成1.01g呈白色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯，m.p.128-130℃。
分析C23H22N4O6S计算值C，57.3；H，4.6；N，11.6实测值C，57.3；H，4.7；N，11.5室温搅拌10ml四氢呋喃和2.93ml 1N NaOH配制的1.01g(2.1mmol)上述化合物的混合物过夜，除去溶剂。用水稀释残留物，用2N柠檬酸(pH4)酸化。过滤得到固体，用水洗涤得到0.88g呈白色固体的4-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-3-甲基异噁唑[5，4-b]吡啶-5-羧酸，m.p.244-246℃。
分析C21H18N4O6S计算值C，55.5；H，4.0；N，12.3实测值C，55.2；H，4.0；N，12.2实施例487-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸按实施例46的流程，将1.8g(7.5mmol)7-氯-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸乙酯与2.92g(10.5mmol)(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基-胺反应，生成1.64g呈黄色固体的7-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸乙酯，m.p.108-110℃。
分析C23H23N5O5S计算值C，57.4；H，4.8；N，14.5实测值C，54.5；H，4.7；N，14.4室温搅拌15ml四氢呋喃和4.15ml 1N NaOH配制的1.54g(3.20mmol)上述化合物的混合物过夜，真空除去溶剂。用水稀释残留物，用二乙醚和乙酸乙酯提取。用2N柠檬酸(pH5)酸化水层，过滤得到固体，用水洗涤。76℃真空炉中干燥这些固体得到1.03g呈灰白色固体的7-[(4-甲氧基苯磺酰基)吡啶-3-基甲基氨基]-2-甲基吡唑[1，5-a]吡啶-6-羧酸，m.p.249-251℃。
分析C21H19N5O5S计算值C，55.6；H，4.2；N，15.4实测值C，55.2；H，4.2；N，15.6实施例494-氯-1，6-二甲基-1H-吡唑[3，4，b]吡啶-5-羧酸乙酯在150ml对-二甲苯配制的l0.0g(59.1mmol)5-氨基-1-甲基吡唑-4-羧酸乙酯的溶液中加入30ml对-二甲苯配制的10.25g(65.01mmol)反式-3-乙氧基丁烯酸乙酯。将此混合物回流过夜。在冰浴中冷却此溶液，逐滴加入24.3ml(65.01mmol)乙醇钠(用乙醇配制的重量百分比为21％)。回流混合物3.5小时，真空浓缩此混合物，将350ml乙酸乙酯加到残留物中。用2N柠檬酸、水、盐水各150ml洗涤此溶液，并干燥(Na2SO4)。用无水硅酸镁板过滤此溶液，除去溶剂得到灰白色固体。用乙酸乙酯研磨，然后冷却此混合物，过滤得到7.8g呈白色晶体的4-羟基-1，6-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯，mp103-105℃。
在8ml POCl3中回流上述化合物(3.0g)2.5小时。将此混合物冷却，缓慢倾倒入碎冰中。过滤得到固体，用水洗涤，50℃真空干燥得到2.3g灰白色晶体，mp64-66℃。
实施例507-氯-2，3-二甲基咪唑[4，5-b]吡啶-6-羧酸乙酯按J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2789(1992)所述的常规流程，将135ml二噁烷配制的1，2-二甲基-5-硝基咪唑(8.46g；0.06M)、乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯(13.08g；0.06M)和2.11g 5％碳上的Pd的混合物，在Parr氢化器内35-40psi氢气中还原29小时。用硅藻土过滤此混合物，除去溶剂后得到一种褐色油。将此油溶解在100ml 2N HCl中，用10N NaOH将pH调节到pH5。用100ml乙酸乙酯提取此混合物2次(废弃提取物)。将pH调节至pH7，用150乙酸乙酯提取，然后将pH加到pH9，再用150ml乙酸乙酯提取二次。将pH7和pH9的提取物混合，用盐水洗涤，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁薄板过滤此溶液，将滤液浓缩至干得到7.61g呈褐色油性的5-[2，2-二(乙氧基羰基)-1-乙烯基氨基]-1，2-二甲基咪唑(二乙基[(1，2-二甲基-咪唑-5-基)氨基亚甲基]丙二酸。
在氮气下，将上述化合物(7.9g)和35mlPOCl3的混合物回流7小时，然后真空浓缩。将黑色的残留物倾倒入碎冰中(并搅拌)用5N NaOH将混合物调节到pH5。用150ml乙酸乙酯、200ml二乙醚和200mlCH2Cl2提取混合物。每次提取物都用1NNaHCO3、盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。将溶液混合，通过无水硅酸镁薄板过滤。将滤液真空浓缩至干得到4.1g呈褐色固体的7-氯-2，3-二甲基咪唑[4，5-b]吡啶-6-羧酸乙酯，m.p.85-90℃。从二乙醚结晶的样品生成晶体，m.p.117-119℃。
分析C11H12ClN3O2·1/2H2O计算值C，48.8；H，4.6；N，15.9实测值C，50.3；H，5.6；N，16.0实施例514-氯-2-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯将50ml对二甲苯配制的10.0g(63.6mmol)3-氨基噻吩-4-羧酸甲酯、10.1g(63.6mmol)(反式)-3-乙氧基丁烯酸乙酯和40mg对甲苯磺酸-水合物的混合物回流过夜，真空除去溶剂。在残留物中加入乙醇配制的20ml对二甲苯和23.7ml乙醇钠(21％重量)(63.6mmol)，将此混合物再回流3小时。除去溶剂，用水小时残留物，用1N HCl将pH调节至pH4。过滤得到沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤得到4.95g呈褐色固体的4-羟基-2-甲基-噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸。
将上述混合物(1.4g)溶解于10ml无水甲醇中，将HCl气通入此溶液10分钟。室温搅拌此溶液过夜，真空除去溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯中，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，并干燥(Na2SO4)。除去溶剂后得到的固体用乙酸乙酯研磨，冷却混合物过滤得到0.765g呈黄色固体的4-氯-2-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯。
实施例527-氯-5-甲基-噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸甲酯和乙酯按J.Med.Chem.33，2640(1990)所述的流程，在80ml二甲苯中回流10g(63.6mmol)3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯(10.1g)、(反式)-3-乙氧基丁烯酸乙酯(63.6mol)和40mg对甲苯磺酸单水合物的混合物过夜。真空除去溶剂，将残留物溶解于乙酸乙酯中。用水、2N柠檬酸、1N NaHCO3、盐水洗涤此溶液，并干燥(Na2SO4)。用己烷-乙酸乙酯(5∶1)为洗脱液，在硅胶上层析16g此固体，得到6.65g呈黄色油性的3-[(2-甲氧基羰基-3-噻吩基)氨基]丁烯酸乙酯。在3.5ml二甲苯配制的0.269g(1mmol)上述化合物的样品中加入44mg(1.1mmol)NaH(用油配制成60％)。将此混合物回流3小时，除去溶剂。用水稀释残留物，用乙酸乙酯提取。将水层酸化(1N HCl)至pH4，用乙酸乙酯提取混合物。用盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥，除去溶剂后得到190mg(1∶1)混合的呈固体的7-羟基-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸甲酯和7-羟基-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯。如下制备所述的乙酯。
在50ml对二甲苯中回流5.0g(31.8mmol)3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯、5.03g(31.8mmol)(反式)-3-乙氧基丁烯酸乙酯和20mg对甲苯磺酸单水合物的混合物1小时，在室温中维持2天。真空浓缩此混合物，然后冷却(冰浴)。在此溶液中加入12.4ml乙醇配制的乙醇钠(21重量％)。将此混合物再回流2小时，除去溶剂。残留物在水和二乙醚中分层，将水层分开，用1N HCl酸化至pH4。用乙酸乙酯提取混合物，用盐水洗涤提取物并干燥(Na2SO4)。除去溶剂后得到2.2g褐色固体。用乙酸乙酯研磨固体，冷却过滤得到1.0g呈浅褐色固体的7-羟基-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯(质谱(ES)238(M+H))。
将上述化合物(0.985g)和4ml POCl3的混合物回流2小时，将此混合物倾倒入碎冰中。用乙酸乙酯提取此混合物，浓缩提取物至干燥。将残留物溶解于CH2Cl2中，用水洗涤溶液，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁薄板过滤此溶液，浓缩此滤液至干燥得到0.62g呈黄色油性的7-氯-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯；以乙酸乙酯-己烷(1∶1)为洗脱液在硅胶上薄层层析；Rf＝0.9。
实施例531，3-二甲基-4-甲基氨基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯室温搅拌四氢呋喃(2.0mol溶液)配制的1.268g(5mmol)4-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯和7.5ml(15mmol)甲胺的混合物过夜，然后回流2小时。除去溶剂得到白色固体。将此固体溶解于乙酸乙酯中，用水、1MNaHCO3、盐水洗涤溶液，干燥(Na2SO4)。除去溶剂后得到白色固体。从乙酸乙酯中结晶得到0.715g白色固体；质谱(ES)249.2(M+H)。
按上述流程，使甲胺与合适的氯杂环吡啶反应得到如下衍生物。
实施例541，6-二甲基-4-甲基氨基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例654-甲基氨基噻吩并[3，2-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例664-甲基氨基噻吩并[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例67N-甲基-4-氟苯氨磺酰用冰浴将四氢呋喃配制的125ml甲胺(0.25mol)和13.9ml(0.10mol)三乙胺的混合物冷却。在此冷却的溶液中逐滴加入150ml CH2Cl2配制的19.4g(0.10mol)4-氟苯氨磺酰氯，回流此混合物2小时，然后室温搅拌过夜。用水、2N柠檬酸、盐水洗涤此含CH2Cl2的混合物，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁薄板过滤此溶液，真空浓缩此滤液至干燥得到18.0g白色固体，mp67-70℃。
按上实施例所述的流程，制备如下4-氟苯磺酰基类似物。
实施例68N-乙基-4-氟苯氨磺酰实施例69N-丁基-4-氟苯氨磺酰实施例70N-苄基-4-氟苯氨磺酰实施例71N-(3-吡啶基甲基)-4-氟苯氨磺酰实施例724-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯搅拌2.53g(0.01mol)4-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯、1.89g(0.01mol)N-甲基-4-氟苯氨磺酰、6.91g(0.05mol)无水K2CO3、0.143g18-冠-6和70ml无水1-甲基-2-吡咯烷酮的混合物，在100℃加热17小时。真空除去溶剂，在残留物中加入水。用CH2Cl2提取混合物，用水、盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥。通过无水硅酸镁板过滤此溶液，真空浓缩滤液至干燥，得到4.98g油。以乙酸乙酯-己烷(2∶3)为洗脱液，在硅胶柱上层析此油，得到3.15g固体，mp107-109℃。
按上述流程制备如下衍生物。
实施例734-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例744-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例754-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例764-[苄基-(4-氟苯磺酰基)氨基]-1-甲基-3-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例774-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例784-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-苯基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例794-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-甲基-3-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例804-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-苯基甲基-3-甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例814-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1-乙基-3-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例824-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-3-甲基异噻唑[4，5-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例837-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-2，3-二甲基咪唑[4，5-b]吡啶-6-羧酸乙酯实施例844-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-2-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸甲酯实施例857-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-5-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸甲酯实施例864-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例877-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯实施例884-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例894-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-5-氯噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例904-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-7-氯噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例917-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-3-氯噻吩并[3，2-b]吡啶-6-羧酸乙酯实施例924-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-3-氯噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例934-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-2-氯噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯实施例944-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-7-甲基噻吩并[3，4-b]吡啶-3-羧酸乙酯实施例954-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸在5ml四氢呋喃配制的0.284g(0.7mmol)4-[(4-氟苯-磺酰基)甲基氨基]-3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸乙酯的溶液中加入0.490ml(2.45mmol)5N NaOH。室温搅拌此混合物过夜，加入2ml乙醇。回流此溶液2.5小时，真空除去溶剂，在残留物中加入2N柠檬酸(pH4-5)。过滤掉分离的白色固体，用水洗涤，真空干燥得到0.24g晶体，mp275-276℃。
分析C16H15FN4O4S计算值C，50.8；H，4.0；N，14.8实测值C，51.6；H，4.2；N，14.7
实施例964-[(4-丁-2-炔氧基苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-羧酸(A)在冰浴冷却的3ml干N，N-二甲基甲酰胺配制的3.5mmolNaH溶液中逐滴加入3.5mmol 2-丁炔-1-醇。在此混合物中加入mmol4-[(4-氟苯磺酰基)甲基氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5羧酸，搅拌此混合物2小时。将此混合物倾倒入水中，用乙酸乙酯提取。用乙酸乙酯酸化此水层，用乙酸乙酯提取，浓缩提取物得到固体。
(B)在冰浴冷却的0.14g(3.5mmol)NaH混合物中逐滴加入0.267ml(3.5mmol)2-丁炔-1-醇。10分钟后，加入0.406g(1mmol)4-[4-氟苯磺酰基]甲基氨基-1，3-二甲基-1H-吡唑[3，4]吡啶-5-羧酸乙酯，室温搅拌此混合物3小时。将此混合物倾倒入水中，用乙酸乙酯提取。用2N柠檬酸酸化水层，用乙酸乙酯提取。用水、盐水洗涤提取物，Na2SO4干燥，除去溶剂得到0.17不纯的固体。质谱(电喷射)显示产品的峰值为427(M-H)。
实施例978-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸乙酯在40ml二甲基甲酰胺配制的1.97g(6.27mmol)实施例5产物的室温溶液中加入0.276g 60％氢化钠(6.9mmol)。1小时后，加入8-溴-4-氯-3-喹啉羧酸乙酯，将此混合物加热至80℃。18小时后，将反应混合物冷却至室温，加入乙酸乙酯和水。用水(5X)洗涤有机相，无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩得到-种油(3.44g)，经硅胶(己烷/乙酸乙酯)层析后得到呈泡沫状的(2.79g)8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸乙酯。电喷雾质谱为517和519(M+H)+实施例988-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸在1∶1的甲醇∶水(6ml)中，将实施例97的产物8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸乙酯(0.52g，1.0mmol)与1N无水氢氧化钠(1.1ml)反应，生成0.390g呈灰白色粉末的8-溴-4[{[4(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸。电喷雾质谱为489和490.9(M+H)+实施例99
8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺0℃在二氯甲烷(1ml)配制的草酰氯(0.613ml，以二氯甲烷配制的2M溶液)中加入二甲基甲酰胺(0.095ml)。15分钟后，加入以二甲基甲酰胺配制的实施例98产物即8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-3-喹啉羧酸(0.30g，0.613mmol)溶液，室温搅拌得到的反应混合物1小时。
在分液瓶中，将1.28ml三乙胺加到0℃的13ml四氢呋喃和3.2ml水配制的0.43g盐酸羟胺混合物中。0℃搅拌此混合物15分钟后，一次性加入酰基氯溶液，让得到的溶液升温至室温，再搅拌18小时。然后将乙酸乙酯和含水重碳酸钠加到此分液瓶中。用含水重碳酸钠(3X)洗涤有机相，无水碳酸钾干燥。真空浓缩并用乙酸乙酯研磨后，得到呈黄色粉末的8-溴-4[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺(200mg)。电喷雾质谱为503.9和506(M+H)+药理学将本发明的代表性化合物作为酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-α转化酶(TACE)的抑制剂进行评估。以下示出了建立此生物学特性的所用的标准药理测试流程及得到的结果。
测定MMP-1、MMP-9和MMP-13抑制的测试程序这些标准药理测试程序是基于基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-13(胶原酶)或MMP-9(明胶酶)切割硫肽(thiopeptide)底物如Ac-Pro-Leu-Gly(2-巯基-4-甲基-戊醇基)-Leu-Gly-OEt，导致释放出能与DTNB(5，5＇-二硫二(2-硝基-苯甲酸)产生颜色反应的底物产物。用颜色增加的速率衡量酶的活性。用溶于100％DMSO的20mM硫肽底物的新配制原液，将DTNB溶解在100％DMSO中作为100mM原液，室温储存在暗处。使用前用底物缓冲液(50mM HEPES pH7.5，5mMCaCl2)将底物和DTNB一起稀释至1mM。用缓冲液(50mM HEPES，pH7.5，5mMCaCl2，0.02％Brij)将酶原液稀释至所需的最终浓度。按缓冲液、酶、运载体或抑制剂、和DTNB/底物的顺序将这些物质加到96孔板中(终反应体积为200μl)，在405nm用分光光度议平板读数仪上监测颜色的增加5分钟，绘制随时间颜色增加的线性图。
另外，使用荧光肽底物。在该测试程序中，肽底物含有荧光基团和淬灭基团。一旦MMP切割底物，在荧光平板读数仪上定量测定产生的荧光。在HCBC试验缓冲液(50mM HEPES，pH7.0，5mM Ca+2，0.02％Brij，0.5％半胱氨酸)中用人重组MMP-1、MMP-9或MMP-13进行该试验。将底物溶解在甲醇中，以1mM等份冰冻储存。该试验中，用HCBC缓冲液将底物和酶稀释至所需的浓度。将化合物加到含酶的96孔板中，加入底物开始反应。读取(340nm激发，444nm发射)应10分钟，绘制随时间荧光增加的线性图。
对硫肽或荧光肽测试程序而言，计算直线的斜率，其代表反应速率。证实反应速率的线性(r2＞0.85)。计算对照速率的平均值(x±sem)，并用Dunnett多重比较检验与药物处理速率比较有统计学显著性(p＜0.05)。用多种剂量的药物可得到剂量—反应关系，用线性回归估计95％CI的IC50值。
测定TACE抑制的试验程序用96孔黑色微量滴定板，各孔加入由10μl TACE(终浓度为1μg/ml)、70μl Tris缓冲液、pH7.4含有10％甘油(终浓度为10mM)、和10μl以DMSO配制的测试化合物(终浓度为1μM，DMSO浓度＜1％)组成的溶液，室温培育10分钟。各孔中加入荧光肽底物(终浓度为100μM)以引发反应，然后在摇床上振荡5秒。
读取反应10分钟(340nm激发，420nm发射)，绘制随时间荧光增加的线性图。计算该线的斜率，其代表反应速率。
证实反应速率的线性(r2＞0.85)。计算对照速率的平均值(x±sem)，并用Dunnett多重比较检验与药物处理速率比较有统计学显著性(p＜0.05)。用多种剂量的药物可得到剂量—反应关系，用线性回归估计95％CI的IC50值。
可溶性蛋白质的人单核THP-1细胞分化试验(THP可溶性蛋白质试验)有丝分裂刺激THP-1细胞致使分裂成巨噬细胞样细胞，伴有除其他蛋白质外同时分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和TNF受体(TNF-R，p75/80和TNF-Rp55/60)以及白细胞介素-8(IL-8)。另外，在该时间以后未受刺激的THP-1细胞分泌出p75/80和p55/60受体。称为TNF-a转化酶或TACE的酶介导了膜结合TNF-α的释放和可能的TNF-R p75/80和TNF-R p55/60的释放但无IL-8释放。可用该试验来证明抑制性或刺激性化合物对此TACE酶的作用和该化合物的细胞毒性结果。
THP-1细胞(由ATCC获得)是一种人单核细胞系，获自一个一岁的患急性单核细胞白血病男童的外周血液。它们可以在培养基中生长，且受促细胞分裂剂刺激后能分裂成巨噬细胞样细胞。
在该试验中，由上述生长的和以5×106ml/瓶冷冻保藏的ATCC原液中采集THP-1细胞。将一管接种到T25瓶中，其中含有16ml补充有Glutamax(Gibco)的RPMI-1640培养基(含10％胎牛血清、100单位/ml青霉素、100μg/ml链霉素和5×10-5M 2-巯基-乙醇(THP-1培养基))。在用于试验前，将各管细胞培养约2星期，然后再使用4-6周来筛选化合物。在星期一和星期四传代细胞至浓度1×105/ml。
为了进行试验，37℃在5％CO2中，将THP-1细胞以1.091×106个细胞/ml(1.1ml/孔)在24孔平板中，与每孔含有50ml 24mg/ml的脂多糖(LPS)(CalbiochemLot#B13189)原液共培养24小时。同时将50ml/孔的药物、运载体或THP-1培养液置于适当的孔中，终体积为1.2ml/孔。将标准化合物和测试化合物溶解在浓度为36mM的DMSO中，并从此浓度用THP-1培养基稀释至适当的浓度，在培养开始时加到诸孔中，使终浓度为100mM、30mM、10mM、3mM、1mM、300nM和100nM。将与DMSO接触的细胞限制在0.1％终浓度。试验中包括阳性对照孔，其中有促细胞分裂剂但无药物。还包括运载体对照孔，除加入终浓度为0.083％的DMSO外都与阳性对照相同。试验中还包括阴性对照孔，细胞中加入了运载体但不加促细胞分裂剂或药物。可通过用50ml/孔的THP-1培养基代替LPS评估化合物对受体基础性(无刺激)分泌的作用。将平板置于设置为5％CO2和37℃的培养箱中。培养4小时后，取出300ml/孔组织培养物上清液(TCS)用于TNF-a ELISA。培养24小时后，取出700ml/孔TCS，用于TNF-R p75/80、TNF-R p55/60和IL-8 ELISA分析。
另外在24小时时，将细胞重悬浮于500μl/孔的THP-1培养液中收集各处理组的细胞，并转移到FACS管中。加入2ml/管0.5mg/ml二碘化丙锭原液(PI)(Boerhinger Mannheim cat.#1348639)。将这些样品在Becton Dickinson FaxCaliberFLOW细胞记数仪上跑样，以红外线波长(FL3)测定各细胞摄取的染料量。只有膜受损的细胞(死或濒死)才吸收PI。通过计数未被PI染色的细胞除以样品中细胞的总量来计算活细胞百分比。将药物处理组的活力计算值与运载体处理的促细胞分裂剂刺激组(“载体阳性对照”)的活力计算值相比较，确定“相当于对照的变化百分比”。这个“相当于对照的变化百分比”是表明药物细胞毒性的一种指标。
采用从R&D Systems购得的ELISAs测得THP-1细胞培养物的TCS中可溶性TNF-a、TNF-R p75/80和TNF-R p55/60和IL-8的量，通过用试剂盒标准品所产生的标准曲线外推。用FLOW细胞记数仪测定了摄取或排斥PI的细胞数量，并用可购得的Cytologic软件绘制直方图直观化各处理组(包括所有对照)的数据。
THP-1细胞培养物的反应强度的生物学变化要求根据每种药物的“载体阳性对照”的变化百分比为基础对这些试验进行比较。按以下公式计算各化合物浓度的各可溶性蛋白质相当于“载体阳性对照”的变化百分比 对于刺激条件下可溶性蛋白质(TNF-a、p75/80、p55/60、IL-8)的研究，测定了重复孔的平均值pg/ml，结果以相当于“载体阳性对照”的变化百分比表示。对于非刺激条件下可溶性蛋白质(p75/80和p55/60受体)的研究，测定了重复孔的平均值pg/ml，结果用以下公式表示成相当于“载体阳性对照”的变化百分比 用定制的软件(使用JUMP统计软件包)，由非线性的回归分析计算出各化合物的IC50值。
对于细胞活力研究，测定了合并的重复孔的活力(PI排斥)，以相当于“载体阳性对照”的变化百分比表示结果。将计算出的化合物处理组的活力值与计算出的“载体阳性对照”的活力值相比较，以确定以下的“相对于对照的变化百分比”。该“相对于对照的变化百分比”的值是药物细胞毒性的一种指标。 参考文献Bjornberg，F.，Lantz，M.，Olsson，I.，和Gullberg，U.“将p55和p75肿瘤坏死因子(TNF)受体加工成可溶性受体形式有关的机制”，Lymphokine Cytokine Res.13203-211，1994 。
Gatanaga，T.，Hwang.C.，Gatanaga，M.，Cappuccini，F.，Yamamoto，R.，和Granger，G.“体外PMA-和LPS刺激的人单核THP-1细胞对TNF mRNA合成、膜表达和释放的调节”，Cellular Immun.1381-10，1991。
Tsuchiya，S.，Yamabe，M.，Yamagughi，Y.，Kobayashi，Y.，Konno，T.，和Tada，K.“人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)的建立和特性分析”，Int.J.Cancer.261711-176，1980。
下表I列出了上述体外基质金属蛋白酶抑制、TACE抑制和THP标准药理测试流程的结果。
aIC50(nM)b在3μM时的抑制根据由上述标准药理测试流程得到的结果，本发明的化合物显示出为酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-a转化酶(TACE)的抑制剂，并因此可用于治疗诸如关节炎、肿瘤转移、组织溃疡、异常伤口愈合、牙周病、移植排斥、胰岛素抗性、骨骼病和HIV感染等疾病。
本发明的化合物还可用于治疗或抑制基质金属蛋白酶介导的病理变化如动脉粥样硬化、动脉粥样硬化斑形成、动脉粥样硬化斑破溃所致的冠脉血栓形成的复原、再狭窄、MMP-介导的骨质疏松、中枢神经系统的炎性疾病、肌肤老化、新血管生成、肿瘤转移、肿瘤生长、骨关节炎、类风湿性关节炎、脓毒性关节炎、角膜溃疡、蛋白尿、动脉瘤病、创伤性关节损伤后的退化性软骨丢失、神经系统的脱髓鞘病、肝硬化、肾小球疾病、胎膜早破、肠炎病、年龄相关的黄斑变性、糖尿病视网膜病、增生性玻璃体视网膜变态、视网膜未熟病、眼部炎症、圆锥形角膜、斯耶格伦综合症、近视、眼部肿瘤、眼部血管生成/血管再生和角膜移植排斥。
本发明的化合物可单独给予或与药用载体一起给予需要其的患者。药用载体可以是固体或液体。
可采用的固体载体包括一种或多种物质，这些载体也可作为增香剂、润滑剂、稳定剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、助压剂、粘合剂或药片崩解剂或封装材料。在粉状制剂中，载体是分散得很细的固体，可与分散得很细的活性组分相混合。在片剂中，活性组分与适当比例的具有必需的助压特性的载体相混合，被压制成所需的性状和尺寸。粉末制剂和片剂较佳地含有多至99％活性组分。合适的固体载体包括如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠盐、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。
液态载体可用于制备溶液、悬浮液、乳剂、糖浆和酏剂。可将本发明的活性组分溶解于或悬浮于药学上可接受的液态载体如水、有机溶剂、这两者的混合物或药学上可接受的油或脂肪中。液态载体可含有其他合适的药用添加剂如稳定剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、增香剂、悬浮剂、增稠剂、色素、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。合适的用于口服和肠胃外给药的液态载体的例子包括水(尤其含有上述添加剂如纤维素衍生物，较佳地是羧甲基纤维素钠盐的溶液)、醇(包括一元醇和多元醇如甘油)和它们的衍生物，和油(如分级椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体也可以是油酯，如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液态载体可用于肠胃外给药的无菌液体形式的组合物中。
可将无菌溶液或悬浮液的液体药物组合物用于例如肌内、腹腔内或皮下注射。也可静脉内注射给予无菌溶液。口服给药可以是液体或固体组合物形式。
可以常规栓剂的形式直肠给予本发明的化合物。对于鼻内或支气管内吸入或吹入给药，可将本发明的化合物配制成水溶液或部分水溶液，然后以气雾剂形式使用。本发明的化合物还可以透皮给予，采用含有活性化合物和对该活性化合物为惰性、对皮肤无毒的载体的透皮贴片，通过皮肤让该药剂全身吸收送递入血流。运载体可以采取多种形式如乳剂、软膏、糊剂、凝胶和包藏装置。乳剂和软膏可以是粘性液体或水包油或油包水类型的半固体乳剂。由分散在含该活性组分的石油或亲水性石油中的吸收性粉末构成的糊膏。可用各种包藏装置将该活性组分释放到血流中，如覆盖含有该活性组分的有或无载体的储器、或含有该活性组分的基质的半透膜。其他包藏装置是本领域已知的。
必须由主治医生主观确定用于治疗患MMP或TACE依赖性病症的具体患者的剂量。所涉及的各种变化包括功能紊乱的严重程度、和患者的体形、年龄和反应模式。通常从低于该化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。随后逐渐增加剂量直到在此情况下达到最佳效果。可由给药的医生依据治疗个体的经验和标准的用药原则，确定口服、肠胃外、鼻内或支气管内给药的精确剂量。
较佳地，此药用组合物以单位剂量形式如片剂或胶囊。在该形式中，将此组合物再分成含有适当量该活性组分的单位剂量；单位剂量形式可以是包装的组合物如包装的粉末、小瓶、安瓿、预先充满的针筒或含有液体的小袋。单位剂量形式可以是例如胶囊或片剂本身，或者也可是适当数量的包装形式的这些组合物。
权利要求
1.具有下式的化合物或其药学上可接受的盐 其中 是选自以下的环 (即，B选自以下 其特征在于，该式中P和Q是 或 条件是当P是 ，Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢，1-6个碳原子的烷基，-CN，-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；和R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，B是 或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，其中W和X是碳，Y是氮，或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求1-3任一所述的化合物，其特征在于，P是 和Q是 是苯基、吡唑、异噁唑或异噻唑，或其药学上可接受的盐。
5.如权利要求1-4任一所述的化合物，其特征在于，其中L是在1-和4-位被G和Z分别取代的苯环。
6.如权利要求1-5任一所述的化合物，其特征在于，所述的G是SO2。
7.如权利要求1-6任一所述的化合物，其特征在于，所述的Z是氧。
8.如权利要求1-7任一所述的化合物，其特征在于，所述的R6和R7是氢。
9.如权利要求1-8任一所述的化合物，其特征在于，所述的R8是CH2OH或甲基。
10.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-1，3-二甲基-1H-吡唑-[3，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺。
11.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噁唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺。
12.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-8-甲氧基-喹啉-3-羧酸羟基酰胺。
13.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是4-[(4-丁-2-炔氧基-苯磺酰基)-甲基-氨基]-3-甲基-异噻唑基-[5，4-b]吡啶-5-羧酸羟基酰胺。
14.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物是8-溴-4-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羟基-3-喹啉酰胺。
15.一种制备如权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤a)将式V的化合物或其活性衍生物与羟胺反应，产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，Q是COOH或其活性衍生物；b)将式VI的化合物去保护产生相应的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、A、G、L和Z的定义如上，R30是保护基团；c)拆解权利要求1的式B化合物的旋光活性异构体的混合物(如外消旋物)，从而分离出基本无其他对映异构体或非对映异构体的一种对映异构体或非对映异构体；或d)用药学上可接受的酸来酸化式I的碱性化合物，得到药学上可接受的盐。
16.一种如下式的化合物 其特征在于，R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是1-6个碳原子的烷基，2-6个碳原子的链烯基，2-6个碳原子的炔基，3-6个碳原子的环烷基，苯基，萘基，5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S，或5-9元杂环烷基，所述的杂环烷基的1或2个杂原子选自N、NR9、O或S。
17.一种如下式的化合物 其特征在于，R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；或5-9元杂环烷基，所述的杂环烷基的1或2个杂原子选自N、NR9、O或S；和J是氟、溴、氯、1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基。
18.一种在需要抑制的哺乳动物中抑制TNF-α转化酶(TACE)介导的病理变化的方法，其特征在于，所述的方法包括给予所述的哺乳动物治疗有效剂量的式B的化合物或其药学上可接受的盐其中B是 ，或 P和Q是 或 ，条件是当P是 ，Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；和R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述的疾病是类风湿性关节炎、移植排斥、恶病质、炎症、发烧、胰岛素抗性、脓毒性休克、充血性心力衰竭、中枢神经系统炎性疾病、肠炎病或HIV感染。
20.一种治疗需要接受治疗的患者以下疾病的方法类风湿性关节炎、移植排斥、恶病质、炎症、发烧、胰岛素抗性、脓毒性休克、充血性心力衰竭、中枢神经系统炎性疾病、肠炎病或HIV感染，其特征在于，所述的方法包括给予所述的哺乳动物治疗有效剂量的式B的化合物或其药学上可接受的盐其中B是 或 P和Q是 或 条件是当P是 ，Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基。
21.一种药物组合物，其特征在于，所述的组合物包含式B的化合物或其药学上可接受的盐，其中B是 或 P和Q是 或 条件是当P是 Q是 ，时，且反之亦然；W和X各是碳或氮；Y是碳、氮、氧或硫，条件是W、X和Y至少一个不是碳；G是SO2或-P(O)R4；L是苯基、萘基或杂芳基，条件是G和Z可能不连接于L的相邻原子，Z是O、NH、S或CH2； 是苯环或选自以下的杂芳环 或 其中K是O、NR9或S；R5是氢或1-6个碳原子的烷基；R6和R7各是氢、1-6个碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是氢；1-6个碳原子的烷基；2-6个碳原子的链烯基；2-6个碳原子的炔基；3-6个碳原子的环烷基；苯基；萘基；或5-10元杂芳基，所述的杂芳基的1-3个杂原子选自N、NR9、O或S；R9是氢，1-6个碳原子的烷基，或3-6个碳原子的环烷基，或苯基；和药学上可接受的载体。
全文摘要
本文公开了式(a)、(b)、(c)或(d)的化合物,其中P和Q是(e)或(f),条件是当P是(e)时,Q是(f)且反之亦然;这些化合物可用于治疗TNF－α所介导的疾病,如类风湿性关节炎、骨关节炎、败血症、AIDS、溃疡性结肠炎、多发性硬化、局限性回肠炎和退化性软骨丧失。
文档编号A61P37/00GK1337962SQ00803029
公开日2002年2月27日 申请日期2000年1月27日 优先权日1999年1月27日
发明者J·I·莱文, J·M·陈, 杜学梅, J·D·阿尔布赖特, A·萨斯科 申请人:美国氰胺公司
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