一种复方丹参冻干粉针剂及其制备方法
专利名称：一种复方丹参冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
冠心病、心绞痛在临床上是常见病、多发病，近年来，随着人们生活水平的提高，冠心病发病年龄有所提前，加上人口结构的老龄化，其发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗心脑血管疾病的药物渐成研究的热点。越来越多的临床报道显示，中药在治疗冠心病、心绞痛方面具有良好的应用前景，特别是中药的副作用少，日益受到人们的喜爱。复方丹参制剂主要由丹参、三七和冰片组成，临床上主要用于心血管疾病方面的治疗，具有较好的效果，如复方丹参滴丸在市场上销量一直很好。近年来，以丹参为主的制剂在临床上应用日益广泛，研究也不断深入。丹参能扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，减慢心率；对抗血小板活化因子引起的血小板集聚和血栓形成；促进损伤心肌恢复，增加心肌收缩力，保护心肌细胞。三七的药理作用非常广泛，对机体多个系统都有影响，其主要作用为止血、活血化瘀、消肿止痛，近年来研究又发现，三七具有抗心绞痛、治疗脑血管后遗症、抗肝炎等作用，特别是三七中所含的总皂苷类成分，在心血管方面具有较好的生理活性。冰片则有开窍醒神，清热止痛的功效。虽然，由三七和丹参单味药制成的注射液已在临床上大量应用，并且由三药组成的复方丹参制剂在临床上也有多种剂型，但由三药组成的制剂都只限于口服制剂，专利CN02158104.5公开了一种治疗心血管疾病的复方丹参固体制剂及其制备方法，市场未见有由以上三味药组方的注射液特别是冻干粉针剂的报道，虽然文献中有有关复方丹参注射液的报道，如中国专利CN98103032、CN02133724、CN02144600，但其报道的复方丹参由皆由丹参和降香两味药组成，而非由丹参、三七、冰片三味药组成，两者组方不同。中药复方的配伍应用，可充分发挥中药多组分、多靶点多作用途径的特点，使之在临床上具有更好的疗效。注射用冻干粉针剂具有起效迅速，又稳定便于运输贮存等优点，因此，进一步开发复方丹参制剂特别是其冻干粉针剂型，将会具有广阔的市场前景。
由三七和丹参单味药有效部位制成的注射制剂有较多报道。专利CN99106223公开了由三七有效成分三七总皂甙制成的注射剂。丹参治疗心血管的主要有效成分为水溶性酚酸类成分，专利CN01142288和专利CN02117923分别公开了丹参总丹酚酸的制备方法，均采用大孔吸树脂法对总丹酚酸进行富集和纯化。
对于复方丹参制剂的专利，对其固体剂型报道的较多，专利CN01136155.7和专利CN02158104.5分别公开了该复方制剂的固体剂型及其制备方法，专利CN01133333.2则公开了该复方制剂的缓释和控释剂型和制备方法。专利CN02157383、CN02157377、CN02157379、CN02157380、CN02157382则公开了基本上包括复方丹参的整个固体剂型，但目前仍没有关于复方丹参制剂冻干粉针剂的报道。
冰片为脂溶性成分，在注射液中溶解度较小，这也是复方丹参制剂目前尚无冻干粉针剂的原因之一。
超滤技术是指常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，高分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、纯化、浓缩的发展最快的新型膜分离技术，能够分离分子量为1000～1000000道尔顿的物质。使用不同的超滤膜如醋酸纤维、磺化聚砜、聚砜、聚砜酰胺、聚丙烯睛，能够对0.5、1、3、7万不同分子量物质进行选择性截留。与传统分离方法相比，具有分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和不破坏成分、操作方便、流程短的特点，能够部分取代传统的过滤、吸附和萃取等分离技术，已开始广泛应用于生物工程及中药制剂工艺中。可以用超滤法制备注射用水、输液及中药注射液，以5～7万分子量超滤膜制备口服液和固体制剂等等。另外，根据超滤膜的特点，还可以利用它来去除注射液中的鞣质、蛋白质和大分子的糖类等杂质，改善注射液的澄明度等。利用超滤技术制备注射液，还能够用来有效去除细菌和热原，因为热原的平均分子量为10万左右，采用截留分子量为3000的超滤膜超滤，即可有效除去热原。所以，本发明在制剂工艺中采用超滤技术后，注射液的质量得到了明显的改善与提高。
发明内容
本发明是对复方丹参片(见《药典》2000年版一部，国家药典委员会编)的剂型改进，目的在于提供一种起效迅速、剂型先进、制剂稳定的注射用复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。本发明采用水煎煮法、醇提取法、树脂吸附法以及超滤法对复方丹参片制剂中的丹参、三七进行提取和纯化，得到其水溶性提取物，利用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)对处方中的冰片进行包合，解决了其在注射液水溶液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。
本发明分别采用离子交换树脂法和大孔吸附树脂法对丹参和三七中的水溶性成分进行了富集纯化，并采用超滤法超滤，保证了注射液的澄明度和热原合格，同时除去了丹参药材中的鞣质，使注射剂的质量和疗效得到显著提高。
另外，丹参中的水溶性有效成分多为醛类和酸类成分，在水溶液中易氧化变质(提高复方丹参注射液稳定性的方法[J].中国药师，1998(3)143)，本发明将其制成冻干粉针剂，很好的解决了上述问题，使制剂的稳定性得到明显提高。
本发明通过以下技术方案实现1、提取与制备(1)取丹参药材饮片，加水煎煮三次，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，先用水洗去杂质再用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调pH值至4-5，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹参提取物。
(2)三七粉碎成最粗粉，分别用50-80％的乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释(提取液∶药材＝1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用1倍树脂柱体积的水洗去杂质，再用50-80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
(3)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，冰片乙醇液加完后，持续搅拌数小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(4)取上述丹参、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入冻干赋型剂，调PH值为5.0-6.5，用0.2％的活性炭80℃保温15分钟，滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至8.0，滤过，灌装，冻冷干燥，即得。
本发明所用大孔吸附树脂可以是非极性或弱极性的大孔树脂，包括D101和AB-8型大孔树脂。
本发明所用冻干赋形剂可以是甘露醇和乳糖中一种或二种的混合物。
试验例一注射用复方冻干粉针剂的初步稳定性试验1、试验仪器与材料DL 302型调温调湿箱(上海吴凇五金厂)；HP 1100液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)。甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯，水为超纯水；原儿茶醛对照品由中国药品生物制品检定所提供。
注射用复方丹参冻干粉针剂与复方丹参注射液(广东天之骄药物开发有限公司提供)2方法采用加速试验法测定注射用复方丹参冻干粉针剂与复方丹参注射液的稳定性，将二者置于DL 302型调温调湿箱中，39±1℃、相对湿度在75％的条件下分别于0、1、2、3月测定二者中原儿醛的含量。
3含量测定3.1色谱条件及系统适用性 十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇-0.5％醋酸(20∶80)为流动相；检测波长280nm。
3.2检测波长的选择 取原儿茶醛对照品溶液适量，在200～400nm波长范围记录光谱曲线，原儿茶醛在280.0nm波长处有最大吸收，因此选择280nm作为检测波长。
3.3样品制备 取本发明的注射用复方丹参冻干粉针剂加水溶解，与复方丹参注射液直接进样以外标法进行测定。
4 结果表1初步稳定性试验结果表原儿茶醛含量 时间(月)(Mg/ml) 0月 1月2月3月注射用复方丹参冻0.653 0.644 0.650 0.646干粉针剂复方丹参注射液 0.650 0.623 0.610 0.593试验结果表明，普通复方丹参注射液在加速试验条件下，含量下降了近期10％，而本发明的注射用复方丹参冻干粉针剂原儿茶醛含量基本保持不变，具有较好的稳定性。
试验例二注射用复方丹参冻干粉针剂对大鼠急性心肌缺血的影响1、实验仪器与材料动物Wistar大白鼠；垂体后叶素注射液，北京生化制药厂生产。
2、方法与结果2.1复方丹参注射制剂对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响取体重250～300g Wistar大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，连续ip给药7d，剂量见表1。各组动物于末次给药30min后，腹腔注射25％乌拉坦0.4ml/100g麻醉，仰卧固定，标准电压1mv＝15mm，走纸速度50mm/s，记录II导联心电图。舌下静脉注射垂体后叶素0.75u/kg于5s内注射完。每30s记录一次心电图。大鼠静脉注射垂体后叶素1min内，大多数表现为心率减慢，T波高耸，ST段抬高等变化。分别观察用药前后30s、1min及50min上T波增殖的变化。
表2本发明的复方丹参注射制剂与丹参注射液对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响。
T波增值(mV)组别 动物数剂量30s 1min5min生理盐水组 100.6ml 0.35±0.12 0.25±0.16 0.18±0.022丹参注射液组 100.6ml/kg0.26±0.06* 0.15±0.041*0.098±0.015*本发明的复方100.6ml/kg0.19±0.05**0.10±0.034** 0.052±0.011**丹参注射液组维拉帕米 105mg/kg 0.16±0.020** 0.08±0.032** 0.030±0.018**与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01从以上结果可看出，本发明的复方丹参注射制剂能显著降低30s、1min及5min时的T波增殖，比普通丹参注射液效果更明显。
具体实施例实施例一处方 丹参1657.4g 三七324.2g 冰片18.4g取丹参饮片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二、三次分别加6倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，水洗除杂后用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调PH值为4-5，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，浸膏在搅拌的情况下加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹参提取物。
三七粉碎成最粗粉，分别加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小时，第二、三次为1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释(提取液∶药材＝1∶1)，高速离心，上清液过处理好的D101大孔树脂吸附，1倍树脂量的水洗树脂去杂质，再用80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，搅拌速度每分钟4000转，冰片乙醇液加完后，持续搅拌5小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，备用。
取丹参、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分钟，冷藏，滤过，续滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋型剂，调整体积至1000ml，调PH值为8.0，除菌滤过，分装，冻干，即得。
实施例二处方 丹参1657.4g 三七324.2g 冰片18.4g取丹参饮片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二、三次分别加6倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，水洗除杂后用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调PH值为4-5，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，浸膏在搅拌的情况下加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹参提取物。
三七粉碎成最粗粉，分别加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小时，第二、三次为1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释(提取液∶药材＝1∶1)，高速离心，上清液过处理好的AB-8型大孔树脂吸附，先用1倍树脂量的水洗去杂质，再用70％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，搅拌速度每分钟4000转，冰片乙醇液加完后，持续搅拌5小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，备用。
取丹参、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分钟，冷藏，滤过，续滤液用截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋型剂，调整体积至1000ml，调PH值为8.0，除菌滤过，分装，冻干，即得。
权利要求
1.一种注射用复方丹参冻干粉针剂，其原料为丹参、三七和冰片，其特征在于它是由丹参、三七的水溶性提取物和冰片羟丙基β-环糊精包合物及水溶性药用辅料组成，即通过以下制备方法制成(1)取丹参药材饮片，加水煎煮三次，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，先用水洗去杂质后再用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调pH值为4-5，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.25-1.35的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得丹参提取物；(2)三七粉碎成最粗粉，用50-80％的乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用1倍树脂柱体积的水洗去杂质，再用50-80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得三七提取物；(3)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，冰片乙醇液加完后，持续搅拌数小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物；(4)取上述丹参、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋形剂，调pH值为5.0-6.5，用0.2％的活性炭80℃保温15分钟，滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至8.0，滤过，灌装，冻冷干燥，即得。
2.权利要求1所述的复方丹参冻干粉针剂的制备方法，其特征在于它包括以下制备步骤取丹参饮片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二、三次分别加6倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，水洗除杂后用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调PH值为4-5，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，浸膏在搅拌的情况下加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.25-1.35的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得丹参提取物；将三七粉碎成最粗粉，分别加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小时，第二、三次为1.5小时，合并提取液，提取液∶药材＝1∶1，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释，高速离心，上清液过处理好的D101大孔树脂吸附，1倍树脂量的水洗树脂去杂质，再用80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得三七提取物；将冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，搅拌速度每分钟4000转，冰片乙醇液加完后，持续搅拌5小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，备用；取丹参、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分钟，冷藏，滤过，续滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋形剂，调整体积至1000ml，调PH值为8.0，除菌滤过，分装，冻干。
3.根据权利要求1所述的复方丹参冻干粉针剂，其特征在于其中的吸附树脂可以是非极性或弱极性的大孔树脂。
4.根据权利要求3所述的复方丹参冻干粉针剂，其特征在于其中的吸附树脂为D101和AB-8型大孔树脂。
5.根据权利要求1所述的复方丹参冻干粉针剂，其特征在于其中的冻干赋形剂是甘露醇和乳糖中的一种或二种的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种复方丹参冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于它主要由丹参、三七水溶性有效部位和冰片羟丙基β－环糊精包合物组成。本发明对丹参、三七中的有效成分采用提取后过树脂柱富集以及超滤法纯化，对冰片采用羟丙基β－环糊精(HP－β－CD)包合，解决其在注射液中的溶解度小的问题，使复方丹参注射剂在澄明度、有效成分的含量、制剂的稳定性等质量和临床疗效方面得到显著提高。本发明的注射用复方丹参冻干粉针剂，具有有效成分含量高，稳定性好，疗效显著的特点。
文档编号A61P9/10GK1583131SQ20041004612
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月1日 优先权日2004年6月1日
发明者张正生 申请人:北京神农坛医药科技有限公司
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
冠心病、心绞痛在临床上是常见病、多发病，近年来，随着人们生活水平的提高，冠心病发病年龄有所提前，加上人口结构的老龄化，其发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗心脑血管疾病的药物渐成研究的热点。越来越多的临床报道显示，中药在治疗冠心病、心绞痛方面具有良好的应用前景，特别是中药的副作用少，日益受到人们的喜爱。复方丹参制剂主要由丹参、三七和冰片组成，临床上主要用于心血管疾病方面的治疗，具有较好的效果，如复方丹参滴丸在市场上销量一直很好。近年来，以丹参为主的制剂在临床上应用日益广泛，研究也不断深入。丹参能扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，减慢心率；对抗血小板活化因子引起的血小板集聚和血栓形成；促进损伤心肌恢复，增加心肌收缩力，保护心肌细胞。三七的药理作用非常广泛，对机体多个系统都有影响，其主要作用为止血、活血化瘀、消肿止痛，近年来研究又发现，三七具有抗心绞痛、治疗脑血管后遗症、抗肝炎等作用，特别是三七中所含的总皂苷类成分，在心血管方面具有较好的生理活性。冰片则有开窍醒神，清热止痛的功效。虽然，由三七和丹参单味药制成的注射液已在临床上大量应用，并且由三药组成的复方丹参制剂在临床上也有多种剂型，但由三药组成的制剂都只限于口服制剂，专利CN02158104.5公开了一种治疗心血管疾病的复方丹参固体制剂及其制备方法，市场未见有由以上三味药组方的注射液特别是冻干粉针剂的报道，虽然文献中有有关复方丹参注射液的报道，如中国专利CN98103032、CN02133724、CN02144600，但其报道的复方丹参由皆由丹参和降香两味药组成，而非由丹参、三七、冰片三味药组成，两者组方不同。中药复方的配伍应用，可充分发挥中药多组分、多靶点多作用途径的特点，使之在临床上具有更好的疗效。注射用冻干粉针剂具有起效迅速，又稳定便于运输贮存等优点，因此，进一步开发复方丹参制剂特别是其冻干粉针剂型，将会具有广阔的市场前景。
由三七和丹参单味药有效部位制成的注射制剂有较多报道。专利CN99106223公开了由三七有效成分三七总皂甙制成的注射剂。丹参治疗心血管的主要有效成分为水溶性酚酸类成分，专利CN01142288和专利CN02117923分别公开了丹参总丹酚酸的制备方法，均采用大孔吸树脂法对总丹酚酸进行富集和纯化。
对于复方丹参制剂的专利，对其固体剂型报道的较多，专利CN01136155.7和专利CN02158104.5分别公开了该复方制剂的固体剂型及其制备方法，专利CN01133333.2则公开了该复方制剂的缓释和控释剂型和制备方法。专利CN02157383、CN02157377、CN02157379、CN02157380、CN02157382则公开了基本上包括复方丹参的整个固体剂型，但目前仍没有关于复方丹参制剂冻干粉针剂的报道。
冰片为脂溶性成分，在注射液中溶解度较小，这也是复方丹参制剂目前尚无冻干粉针剂的原因之一。
超滤技术是指常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，高分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、纯化、浓缩的发展最快的新型膜分离技术，能够分离分子量为1000～1000000道尔顿的物质。使用不同的超滤膜如醋酸纤维、磺化聚砜、聚砜、聚砜酰胺、聚丙烯睛，能够对0.5、1、3、7万不同分子量物质进行选择性截留。与传统分离方法相比，具有分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和不破坏成分、操作方便、流程短的特点，能够部分取代传统的过滤、吸附和萃取等分离技术，已开始广泛应用于生物工程及中药制剂工艺中。可以用超滤法制备注射用水、输液及中药注射液，以5～7万分子量超滤膜制备口服液和固体制剂等等。另外，根据超滤膜的特点，还可以利用它来去除注射液中的鞣质、蛋白质和大分子的糖类等杂质，改善注射液的澄明度等。利用超滤技术制备注射液，还能够用来有效去除细菌和热原，因为热原的平均分子量为10万左右，采用截留分子量为3000的超滤膜超滤，即可有效除去热原。所以，本发明在制剂工艺中采用超滤技术后，注射液的质量得到了明显的改善与提高。
发明内容
本发明是对复方丹参片(见《药典》2000年版一部，国家药典委员会编)的剂型改进，目的在于提供一种起效迅速、剂型先进、制剂稳定的注射用复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。本发明采用水煎煮法、醇提取法、树脂吸附法以及超滤法对复方丹参片制剂中的丹参、三七进行提取和纯化，得到其水溶性提取物，利用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)对处方中的冰片进行包合，解决了其在注射液水溶液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。
本发明分别采用离子交换树脂法和大孔吸附树脂法对丹参和三七中的水溶性成分进行了富集纯化，并采用超滤法超滤，保证了注射液的澄明度和热原合格，同时除去了丹参药材中的鞣质，使注射剂的质量和疗效得到显著提高。
另外，丹参中的水溶性有效成分多为醛类和酸类成分，在水溶液中易氧化变质(提高复方丹参注射液稳定性的方法[J].中国药师，1998(3)143)，本发明将其制成冻干粉针剂，很好的解决了上述问题，使制剂的稳定性得到明显提高。
本发明通过以下技术方案实现1、提取与制备(1)取丹参药材饮片，加水煎煮三次，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，先用水洗去杂质再用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调pH值至4-5，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹参提取物。
(2)三七粉碎成最粗粉，分别用50-80％的乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释(提取液∶药材＝1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用1倍树脂柱体积的水洗去杂质，再用50-80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
(3)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，冰片乙醇液加完后，持续搅拌数小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(4)取上述丹参、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入冻干赋型剂，调PH值为5.0-6.5，用0.2％的活性炭80℃保温15分钟，滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至8.0，滤过，灌装，冻冷干燥，即得。
本发明所用大孔吸附树脂可以是非极性或弱极性的大孔树脂，包括D101和AB-8型大孔树脂。
本发明所用冻干赋形剂可以是甘露醇和乳糖中一种或二种的混合物。
试验例一注射用复方冻干粉针剂的初步稳定性试验1、试验仪器与材料DL 302型调温调湿箱(上海吴凇五金厂)；HP 1100液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)。甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯，水为超纯水；原儿茶醛对照品由中国药品生物制品检定所提供。
注射用复方丹参冻干粉针剂与复方丹参注射液(广东天之骄药物开发有限公司提供)2方法采用加速试验法测定注射用复方丹参冻干粉针剂与复方丹参注射液的稳定性，将二者置于DL 302型调温调湿箱中，39±1℃、相对湿度在75％的条件下分别于0、1、2、3月测定二者中原儿醛的含量。
3含量测定3.1色谱条件及系统适用性 十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇-0.5％醋酸(20∶80)为流动相；检测波长280nm。
3.2检测波长的选择 取原儿茶醛对照品溶液适量，在200～400nm波长范围记录光谱曲线，原儿茶醛在280.0nm波长处有最大吸收，因此选择280nm作为检测波长。
3.3样品制备 取本发明的注射用复方丹参冻干粉针剂加水溶解，与复方丹参注射液直接进样以外标法进行测定。
4 结果表1初步稳定性试验结果表原儿茶醛含量 时间(月)(Mg/ml) 0月 1月2月3月注射用复方丹参冻0.653 0.644 0.650 0.646干粉针剂复方丹参注射液 0.650 0.623 0.610 0.593试验结果表明，普通复方丹参注射液在加速试验条件下，含量下降了近期10％，而本发明的注射用复方丹参冻干粉针剂原儿茶醛含量基本保持不变，具有较好的稳定性。
试验例二注射用复方丹参冻干粉针剂对大鼠急性心肌缺血的影响1、实验仪器与材料动物Wistar大白鼠；垂体后叶素注射液，北京生化制药厂生产。
2、方法与结果2.1复方丹参注射制剂对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响取体重250～300g Wistar大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，连续ip给药7d，剂量见表1。各组动物于末次给药30min后，腹腔注射25％乌拉坦0.4ml/100g麻醉，仰卧固定，标准电压1mv＝15mm，走纸速度50mm/s，记录II导联心电图。舌下静脉注射垂体后叶素0.75u/kg于5s内注射完。每30s记录一次心电图。大鼠静脉注射垂体后叶素1min内，大多数表现为心率减慢，T波高耸，ST段抬高等变化。分别观察用药前后30s、1min及50min上T波增殖的变化。
表2本发明的复方丹参注射制剂与丹参注射液对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响。
T波增值(mV)组别 动物数剂量30s 1min5min生理盐水组 100.6ml 0.35±0.12 0.25±0.16 0.18±0.022丹参注射液组 100.6ml/kg0.26±0.06* 0.15±0.041*0.098±0.015*本发明的复方100.6ml/kg0.19±0.05**0.10±0.034** 0.052±0.011**丹参注射液组维拉帕米 105mg/kg 0.16±0.020** 0.08±0.032** 0.030±0.018**与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01从以上结果可看出，本发明的复方丹参注射制剂能显著降低30s、1min及5min时的T波增殖，比普通丹参注射液效果更明显。
具体实施例实施例一处方 丹参1657.4g 三七324.2g 冰片18.4g取丹参饮片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二、三次分别加6倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，水洗除杂后用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调PH值为4-5，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，浸膏在搅拌的情况下加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹参提取物。
三七粉碎成最粗粉，分别加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小时，第二、三次为1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释(提取液∶药材＝1∶1)，高速离心，上清液过处理好的D101大孔树脂吸附，1倍树脂量的水洗树脂去杂质，再用80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，搅拌速度每分钟4000转，冰片乙醇液加完后，持续搅拌5小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，备用。
取丹参、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分钟，冷藏，滤过，续滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋型剂，调整体积至1000ml，调PH值为8.0，除菌滤过，分装，冻干，即得。
实施例二处方 丹参1657.4g 三七324.2g 冰片18.4g取丹参饮片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二、三次分别加6倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，水洗除杂后用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调PH值为4-5，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，浸膏在搅拌的情况下加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹参提取物。
三七粉碎成最粗粉，分别加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小时，第二、三次为1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释(提取液∶药材＝1∶1)，高速离心，上清液过处理好的AB-8型大孔树脂吸附，先用1倍树脂量的水洗去杂质，再用70％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，搅拌速度每分钟4000转，冰片乙醇液加完后，持续搅拌5小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，备用。
取丹参、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分钟，冷藏，滤过，续滤液用截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋型剂，调整体积至1000ml，调PH值为8.0，除菌滤过，分装，冻干，即得。
权利要求
1.一种注射用复方丹参冻干粉针剂，其原料为丹参、三七和冰片，其特征在于它是由丹参、三七的水溶性提取物和冰片羟丙基β-环糊精包合物及水溶性药用辅料组成，即通过以下制备方法制成(1)取丹参药材饮片，加水煎煮三次，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，先用水洗去杂质后再用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调pH值为4-5，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.25-1.35的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得丹参提取物；(2)三七粉碎成最粗粉，用50-80％的乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用1倍树脂柱体积的水洗去杂质，再用50-80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得三七提取物；(3)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，冰片乙醇液加完后，持续搅拌数小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物；(4)取上述丹参、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋形剂，调pH值为5.0-6.5，用0.2％的活性炭80℃保温15分钟，滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至8.0，滤过，灌装，冻冷干燥，即得。
2.权利要求1所述的复方丹参冻干粉针剂的制备方法，其特征在于它包括以下制备步骤取丹参饮片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二、三次分别加6倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，续滤液用阴离子交换树脂吸附，水洗除杂后用稀碱液洗脱，碱洗脱液用酸调PH值为4-5，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，浸膏在搅拌的情况下加乙醇使含醇量达60-80％，静置，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.25-1.35的浸膏；浸膏边搅拌边加乙醇使含醇量达70-85％，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，并减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得丹参提取物；将三七粉碎成最粗粉，分别加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小时，第二、三次为1.5小时，合并提取液，提取液∶药材＝1∶1，滤过，回收乙醇至尽后，加水稀释，高速离心，上清液过处理好的D101大孔树脂吸附，1倍树脂量的水洗树脂去杂质，再用80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩至50℃时相对密度为1.20-1.30的浸膏，真空干燥得三七提取物；将冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD饱和液中，边加边搅拌，搅拌速度每分钟4000转，冰片乙醇液加完后，持续搅拌5小时，混合液冷藏，滤过，沉淀低温干燥，备用；取丹参、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分钟，冷藏，滤过，续滤液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD包合物混合，加入冻干赋形剂，调整体积至1000ml，调PH值为8.0，除菌滤过，分装，冻干。
3.根据权利要求1所述的复方丹参冻干粉针剂，其特征在于其中的吸附树脂可以是非极性或弱极性的大孔树脂。
4.根据权利要求3所述的复方丹参冻干粉针剂，其特征在于其中的吸附树脂为D101和AB-8型大孔树脂。
5.根据权利要求1所述的复方丹参冻干粉针剂，其特征在于其中的冻干赋形剂是甘露醇和乳糖中的一种或二种的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种复方丹参冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于它主要由丹参、三七水溶性有效部位和冰片羟丙基β－环糊精包合物组成。本发明对丹参、三七中的有效成分采用提取后过树脂柱富集以及超滤法纯化，对冰片采用羟丙基β－环糊精(HP－β－CD)包合，解决其在注射液中的溶解度小的问题，使复方丹参注射剂在澄明度、有效成分的含量、制剂的稳定性等质量和临床疗效方面得到显著提高。本发明的注射用复方丹参冻干粉针剂，具有有效成分含量高，稳定性好，疗效显著的特点。
文档编号A61P9/10GK1583131SQ20041004612
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月1日 优先权日2004年6月1日
发明者张正生 申请人:北京神农坛医药科技有限公司
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