半乳糖化羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒的制备方法
专利名称：半乳糖化羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种对肝癌基因治疗药品纳米颗粒的制备方法。
背景技术：
原发性肝癌是世界最流行的10种恶性肿瘤之一，全世界每年约38.6万人死于肝癌，其中45％在中国。目前临床常规治疗，手术切除率低，化疗靶向性差，毒副作用明显。近年来，尽管基因治疗在基础研究方面取得很多成绩，然而临床试验的结果尚不令人满意。
发明内容
本发明的目的，是要提供一种化疗靶向性好，毒副作用小的肝癌基因治疗药品——半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒的制备方法。
本发明的技术方案是取羟基磷灰石纳米粒，用水洗涤除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响。以高速离心收集沉淀，真空干燥，研磨。取羟基磷灰石纳米粒粉末沉淀悬浮于Na2CO3溶液中，超声波振荡，加入半乳糖化多聚赖氨酸溶液，混匀，搅拌。离心去上清，沉淀悬于PH＝7.4的PBS中，即制得半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒混悬液。
用本发明制得的羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒，属有机-无机纳米粒，该纳米粒实现了与DNA的高效结合，羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒DNA复合体内外给药，实现了靶向基因治疗与羟基磷灰石纳米粒子自身杀癌作用的“双重给药”，提高了纳米DNA复合体治疗肝癌的效果，为原发性肝癌的靶向基因治疗提供了理论依据和试验基础，并进一步延伸至病毒性肝炎基因治疗及基因工程肝细胞的构建。
具体实施例方式
下面结合实施例具体介绍制备一份半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒。
应用还原胺化法合成半乳糖化多聚赖氨酸。取多聚赖氨酸200mg，alpha-乳糖800mg，氰硼酸钠500mg共溶于200ml去离子水中，电热恒温水浴箱37℃反应24h，应用精密酸度计向反应液中加入适当NaOH溶液，将PH值调至8.5，37℃继续反应6h。反应液在室温下用水透析终止反应去除未反应的乳糖，过SephadexG-25柱纯化，纯化产物真空干燥。
取适量羟基磷灰石纳米粒，用去离子水洗涤5次，除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响。以高速离心收集沉淀，100℃真空干燥24h，再用匀浆器充分研磨。精密称取羟基磷灰石纳米粒粉末2mg，沉淀悬浮于2ml 1mol/l Na2CO3溶液中，超声波振荡15min，加入300μl 0.1％的半乳糖化多聚赖氨酸溶液，充分混匀，在4℃温度下连续搅拌24h。离心去上清，沉淀悬于1ml PH＝7.4的PBS中，即制得半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒混悬液。
权利要求
1.一种半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒的制备方法，设制备一份半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒，其步骤是取多聚赖氨酸200mg，alpha-乳糖800mg，氰硼酸钠500mg共溶于200ml去离子水中，电热恒温水浴箱37℃反应24h，应用精密酸度计向反应液中加入适当NaOH溶液将PH调至8.5，37℃继续反应6h，反应液室温下用水透析终止反应去除未反应的乳糖，过SephadexG-25柱纯化，纯化产物真空干燥；取适量羟基磷灰石纳米粒，用去离子水洗涤5次，除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响，以高速离心收集沉淀，100℃真空干燥24h，再用匀浆器充分研磨；精密称取羟基磷灰石纳米粒粉末2mg，沉淀悬浮于2ml 1mol/l Na2CO3溶液中，超声波振荡15min，加入300μl 0.1％的半乳糖化多聚赖氨酸溶液，充分混匀，在4℃温度下连续搅拌24h，离心去上清，沉淀悬于1ml PH＝7.4的PBS中，即制得半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒混悬液。
全文摘要
一种半乳糖化羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒的制备方法，本发明的技术方案是取羟基磷灰石纳米粒，用水洗涤除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响。以高速离心收集沉淀，真空干燥，研磨。取羟基磷灰石纳米粒粉末沉淀悬浮于水中，超声波振荡，加入半乳糖化多聚赖氨酸溶液，混匀，搅拌。离心去上清，沉淀悬于去离子水中，即制得半乳糖化羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒混悬液。用本发明制得的羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒，实现了与DNA的高效结合。羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒DNA复合体内外给药，实现了靶向基因治疗与羟基磷灰石纳米粒子自身杀癌作用的“双重给药”，提高了纳米DNA复合体治疗肝癌的效果，为原发性肝癌的靶向基因治疗提供了理论依据和试验基础。
文档编号A61P35/00GK1736365SQ200410046678
公开日2006年2月22日 申请日期2004年8月19日 优先权日2004年8月19日
发明者张阳德 申请人:张阳德
技术领域：
本发明涉及一种对肝癌基因治疗药品纳米颗粒的制备方法。
背景技术：
原发性肝癌是世界最流行的10种恶性肿瘤之一，全世界每年约38.6万人死于肝癌，其中45％在中国。目前临床常规治疗，手术切除率低，化疗靶向性差，毒副作用明显。近年来，尽管基因治疗在基础研究方面取得很多成绩，然而临床试验的结果尚不令人满意。
发明内容
本发明的目的，是要提供一种化疗靶向性好，毒副作用小的肝癌基因治疗药品——半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒的制备方法。
本发明的技术方案是取羟基磷灰石纳米粒，用水洗涤除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响。以高速离心收集沉淀，真空干燥，研磨。取羟基磷灰石纳米粒粉末沉淀悬浮于Na2CO3溶液中，超声波振荡，加入半乳糖化多聚赖氨酸溶液，混匀，搅拌。离心去上清，沉淀悬于PH＝7.4的PBS中，即制得半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒混悬液。
用本发明制得的羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒，属有机-无机纳米粒，该纳米粒实现了与DNA的高效结合，羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒DNA复合体内外给药，实现了靶向基因治疗与羟基磷灰石纳米粒子自身杀癌作用的“双重给药”，提高了纳米DNA复合体治疗肝癌的效果，为原发性肝癌的靶向基因治疗提供了理论依据和试验基础，并进一步延伸至病毒性肝炎基因治疗及基因工程肝细胞的构建。
具体实施例方式
下面结合实施例具体介绍制备一份半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒。
应用还原胺化法合成半乳糖化多聚赖氨酸。取多聚赖氨酸200mg，alpha-乳糖800mg，氰硼酸钠500mg共溶于200ml去离子水中，电热恒温水浴箱37℃反应24h，应用精密酸度计向反应液中加入适当NaOH溶液，将PH值调至8.5，37℃继续反应6h。反应液在室温下用水透析终止反应去除未反应的乳糖，过SephadexG-25柱纯化，纯化产物真空干燥。
取适量羟基磷灰石纳米粒，用去离子水洗涤5次，除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响。以高速离心收集沉淀，100℃真空干燥24h，再用匀浆器充分研磨。精密称取羟基磷灰石纳米粒粉末2mg，沉淀悬浮于2ml 1mol/l Na2CO3溶液中，超声波振荡15min，加入300μl 0.1％的半乳糖化多聚赖氨酸溶液，充分混匀，在4℃温度下连续搅拌24h。离心去上清，沉淀悬于1ml PH＝7.4的PBS中，即制得半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒混悬液。
权利要求
1.一种半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒的制备方法，设制备一份半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒，其步骤是取多聚赖氨酸200mg，alpha-乳糖800mg，氰硼酸钠500mg共溶于200ml去离子水中，电热恒温水浴箱37℃反应24h，应用精密酸度计向反应液中加入适当NaOH溶液将PH调至8.5，37℃继续反应6h，反应液室温下用水透析终止反应去除未反应的乳糖，过SephadexG-25柱纯化，纯化产物真空干燥；取适量羟基磷灰石纳米粒，用去离子水洗涤5次，除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响，以高速离心收集沉淀，100℃真空干燥24h，再用匀浆器充分研磨；精密称取羟基磷灰石纳米粒粉末2mg，沉淀悬浮于2ml 1mol/l Na2CO3溶液中，超声波振荡15min，加入300μl 0.1％的半乳糖化多聚赖氨酸溶液，充分混匀，在4℃温度下连续搅拌24h，离心去上清，沉淀悬于1ml PH＝7.4的PBS中，即制得半乳糖化羟基磷灰石-多聚赖氨酸纳米粒混悬液。
全文摘要
一种半乳糖化羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒的制备方法，本发明的技术方案是取羟基磷灰石纳米粒，用水洗涤除去游离离子对纳米粒表面ζ电位的影响。以高速离心收集沉淀，真空干燥，研磨。取羟基磷灰石纳米粒粉末沉淀悬浮于水中，超声波振荡，加入半乳糖化多聚赖氨酸溶液，混匀，搅拌。离心去上清，沉淀悬于去离子水中，即制得半乳糖化羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒混悬液。用本发明制得的羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒，实现了与DNA的高效结合。羟基磷灰石－多聚赖氨酸纳米粒DNA复合体内外给药，实现了靶向基因治疗与羟基磷灰石纳米粒子自身杀癌作用的“双重给药”，提高了纳米DNA复合体治疗肝癌的效果，为原发性肝癌的靶向基因治疗提供了理论依据和试验基础。
文档编号A61P35/00GK1736365SQ200410046678
公开日2006年2月22日 申请日期2004年8月19日 优先权日2004年8月19日
发明者张阳德 申请人:张阳德
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