杈戴氏霉真菌在降解氯酚类化合物中的应用的制作方法

杈戴氏霉真菌在降解氯酚类化合物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种杈戴氏霉GZUIFR-H104.1在降解降解氯酚类化合物中的应用。该产品降解酚类化合物具有酶适用于较宽的pH值和温度范围，对环境友好，过程控制简单方便等优点。
【专利说明】杈戴氏霉真菌在降解氯酚类化合物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其涉及杈戴氏霉真菌在降解氯酚类化合物中的应用。
[0002]
【背景技术】
[0003]酚类物质是一类非常重要的工业有机化合物，被广泛应用于许多商品如染料、颜料、防腐剂、除草剂、杀虫剂和杀菌剂等。由于酚类化合物具有不同程度的毒性，因此生产上述物质时所排放的工业废水是一种对环境和人类健康都会造成严重危害的污染物。
[0004]目前报道的降解酚类废水的方法有臭氧法、絮凝法、吸附法、溶剂萃取法、离子交换法以及超声波催化降解法等。但上述方法普遍存在成本高、操作繁琐等缺点，因而限制了它们在实际生产中的进一步应用。
[0005]

【发明内容】

[0006]本发明的目的在于克服上述缺点而提供一种具有酶适用于较宽的pH值和温度范围，对环境友好，过程控制简单方便的杈戴氏霉真菌在降解氯酚类化合物中的应用。
[0007]以下以4-氯苯酚作为氯酚类化合物的模型物，将用杈戴氏霉GZnFR_H104.1发酵制得的漆酶粗酶液对4-氯苯酚(即:4-CP)的降解实验及结果来说明其在降解氯酚类化合物中的应用，具体步骤如下:
I)杈戴氏霉GZnFR-H104.1粗酶液的制备
、孢子液的制备:取4°C保藏菌株斜面，用接种环挑取少量菌丝，采用划线法将其接种于PDA固体培养基上，37°C培养箱中培养。5d后发现所接微生物已大量扩增，用灭菌的5%o Tween-80轻轻洗出平板表面上的分生孢子，并在无菌条件下用16层纱布过滤，所得孢子悬浮液以血球计数器计数后置于4°C冰箱保存；
b、粗酶液的提取:移取Iml浓度为I X IOVmL的孢子液至300ml三角烧瓶中(内装80ml产酶培养液)，于40°C，120rpm摇床上培养；7d后将发酵液于6000rpm下离心8min，取上清夜即得；
(2)杈戴氏霉GZnFR-H104.1漆酶粗酶液催化降解酚类废水的实验
a、酚含量的测定:采用4-氨基安替比林直接分光光度法
酚标准使用液的配制:准确称取新蒸馏182?184°C的苯酚约lg，溶入水中移入IOOOml容量瓶，加水稀释至刻度。
[0008]标准曲线的绘制:于一组50ml比色管中分别加入0ml、0.50ml、l.00ml、l.50ml、
2.00ml、2.50ml、5.0Oml和10.0Oml的酚标准使用液，加蒸馏水至50ml ;加入0.5ml缓冲溶液，Iml 2%的4-氨基安替比林溶液混匀，加入Iml浓度为80mg/L的铁氰化钾溶液显色，混匀，放置IOmin ;以试剂空白为参比，在510nm波长处，用IOmm比色皿测量吸光值；得到标准曲线公式为:y=0.49x-0.5，R2=0.9997.x表示吸光值，y表示标准苯酚含量。
[0009]待测水样的预蒸馏:250ml水样于蒸馏瓶中，加入2滴甲基橙指示剂，用(1+9)磷酸调节水样pH至溶液至红橙色，加入10% (质量浓度)硫酸铜(CuSO4°C 5H20)5ml，加入数粒玻璃珠，加热蒸馏，用250ml量筒收集馏出液；待馏出液达225ml后，停止蒸馏。蒸馏瓶内液面静止后，加入25ml水，继续蒸馏至馏出液为250ml为止；
水样的测定:取50ml待测水样于50ml比色管中，加入0.5ml缓冲溶液，Iml的2%的4-氨基安替比林溶液混匀，再加入Iml浓度为80mg/L铁氰化钾显色，放置IOmin ;以试剂空白为参比，于510nm波长处，用IOmm比色皿测量吸光值。
[0010]酚含量经下式计算得到:
【权利要求】
1.一种杈戴氏霉GZHFR-H104.1，菌株保藏号为:CCTCC M 209119，在降解氯酚类化合物中的应用。
2.如权利要求1所述的杈戴氏霉GZHFR-H104.1在降解4-氯苯酚中的应用。
【文档编号】A62D3/02GK103816637SQ201310742281
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2013年12月30日 优先权日:2013年12月30日
【发明者】韩燕峰, 赵丹, 张延威, 初华丽, 邹晓, 梁宗琦 申请人:贵州大学