挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的制作方法
挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的制作方法
【专利摘要】提供分解促进剂，其为被挥发性有机卤素化合物污染的土地利用微生物的净化(生物降解)中使用的分解促进剂，通过提高微生物的分解活性、特别是投与初始阶段的微生物活性，能够使挥发性有机卤素化合物迅速地无害化。一种挥发性有机卤素化合物的分解促进剂，其特征在于，其含有下述(A)～(C)中的1种或者2种以上。(A)柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物，(B)柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物，(C)含有下述(1)～(3)全部的配混物(1)甘油(2)乳蛋白和/或酵母提取物(3)维生素B12。
【专利说明】挥发性有机卤素化合物的分解促进剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及挥发性有机卤素化合物的分解促进剂以及分解促进方法，具体来说， 涉及能够利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的分解促进剂、以及使用其的分解促 进方法。
【背景技术】
[0002] 土地的土壤、地下水有时会被天然或者人工的各种化学物质污染。这样的土地污 染无论是将该土地作为用于粮食生产的耕地使用时，还是试图在居住、商业利用时都会变 成重大问题。
[0003] 但是，与直接入口的饮食品、接触肌肤的衣服/化妆品/装饰品等不同，土地的污 染、特别是土壤污染不太受到关注，过去也有挖洞填埋化学物质进行处理的例子。
[0004] 这样的土地的污染的净化最近成为重大问题，针对于此，提出并实行了各种净化 处理方法。
[0005] 若大致分类该土地的净化方法，则可以分类为以下四种：通过高温加热分解化学 物质或使其吸附于活性炭等的物理处理；通过化学反应使化学物质无害化的化学处理；利 用具有分解化学物质能力的微生物的微生物净化法；以及利用具有吸收或吸附化学物质的 能力的植物的植物净化法。
[0006] 其中，使用微生物、植物的方法在能抑制对环境的担忧、成本方面最近备受瞩目， 利用微生物的净化方法也被称为"生物降解"、利用植物的净化方法也被称为"植物降解"， 进行着各种研究开发，从能处理的土壤体积大的方面出发，正在积极进行着生物降解的研 究开发。
[0007] 生物降解有两种技术。一种是在污染场所应用已预先确定对于对象污染物质的分 解发挥效果的微生物的技术，被称为生物强化。另一种是通过向污染场所的土著微生物给 予氧、营养源，使微生物的活动活化，促进净化作用的技术，被称为生物刺激。
[0008] 此外，生物降解有两种方法。一种是去除被污染的土壤、地下水，在其他场所进行 处理的方法，被称为"设施型处理"。另一种是在该场所净化被污染的土壤、地下水的方法， 被称为"原位置净化"。
[0009] 作为近年成为重大问题的污染物质，有以四氯乙烯、三氯乙烯、二氯乙烯、二噁英 类、多氯联苯类等有机氯化合物为代表的有机卤素化合物。其中，关于四氯乙烯、三氯乙烯、 二氯乙烯等挥发性有机卤素化合物，担心通过呼吸对人体的影响，因此常见有需要尽快处 理的情况。
[0010] 该挥发性有机卤素化合物容易浸透至土壤，到达地下水脈，容易扩大污染至较大 范围。分解这样的挥发性有机卤素化合物的土壤微生物虽然也存在，但一般来说土壤越接 近表面有机物越多，土壤微生物也大量存在，而随着从表层向深部有机物及土壤微生物都 减少，若深入到Im以上则微生物的活性减少至表层的1/100以下。根据上述情况，一旦被 挥发性有机卤素化合物污染的土地存在着长时间较低浓度且较大范围地被污染的问题。 toon] 这样较低浓度且较大范围地被污染的土地的净化以生物降解为有效的手段，所以 提出了以净化挥发性有机卤素化合物的污染作为目的的各种方案。
[0012] 例如提出了以下方案：利用包含聚乳酸与甘油、木糖醇、山梨糖醇、季戊四醇等多 官能醇的酯的组合物的生物刺激（例如参见专利文献1);利用包含酵母、脂肪酸、碳水化合 物等的组合物的生物刺激（例如参见专利文献2);利用氨基酸与羟基羧酸的缩合反应产物 的生物刺激（例如参见专利文献3)。需要说明的是，在非专利文献1中记载有使各种分解 促进剂与微生物存在的土壤和/或地下水接触的方法。
[0013] 另一方面，作为被挥发性有机卤素化合物污染的土地净化所使用的微生物已知有 厌氧性细菌、特别是脱卤拟球菌属细菌。若为该微生物不存在的状态，则挥发性有机卤素化 合物不会分解至最终的乙烯为止，而是分解可能停在作为中间物质的二氯乙烯，因此可能 会引起无法进行完全的净化。然而，还已知有：即使是例如脱卤拟球菌属细菌也通常根据其 种类决定可分解的化合物，从四氯乙烯至乙烯的分解中需要有多种脱卤拟球菌参与（参见 非专利文献2)。因此，脱卤拟球菌属细菌的各种挥发性有机卤素化合物分解速度并不一定 快，此外，即使存在脱卤拟球菌属细菌也不一定参与挥发性有机卤素化合物的分解。
[0014] 因此，提出有如下方案：使用多个脱卤拟球菌属细菌的混合菌株的生物强化（例 如参见非专利文献3);使用脱卤拟球菌属细菌与链球菌作为主菌体的菌群（consortia)的 生物强化（例如参见专利文献4)。然而，使用该混合菌株的方法也存在由土壤的污染情况、 pH、进而有机质含量而造成净化速度延迟的问题。
[0015] 现有技术文献
[0016] 专利文献
[0017] 专利文献1 :日本特表2000-511969号公报
[0018] 专利文献2 :日本特开2005-185870号公报
[0019] 专利文献3 :日本特开2010-104962号公报
[0020] 专利文献4 :日本特开2011-244769号公报
[0021] 非专利文献
[0022] 非专利文献1 :株式会社工业调查会"化学装置"2007年7月号、山崎裕"土壤/地 下水净化技术-VOC的分解净化技术株式会社工業調査会「化学装置」2007年7月号、 山崎裕「土壌?地下水浄化技術一VOC〇分解浄化技術一」）
[0023] 非专利文献2 :崎原盛他"乙烯基氯类作为对象的原位置生物降解中的脱卤拟 球菌属细菌的行为解析"关于地下水/ 土壤污染及其防止对策的研究集会演讲集（2008) (崎原盛他「夕口口工亍>類全対象i亡原位置八4才工^于、工一；3 >(二耔汁石Dehalococcoides属細菌〇挙動解析」地下水?土壌汚染i〇防止対策(二関t 3研究集 会講演集（2008))
[0024] 非专利文献3 :矢木修身"土地修复技术的现状与今后的展望""谋求食品与环境 的安全-农林水产生态系中的有害化学物质-要旨集10页"(2007年）（矢木修身「土地修 復技術〇現状i今後〇展望」「食i環境〇安全&求*T一農林水産生態系(二杉汁3有害 化学物質一要旨集10?一'7'」（2007年））
【发明内容】
[0025] 发明要解决的问是页
[0026] 然而，关于专利文献1、专利文献3所记载的方法，投与初始阶段的微生物的活性 低，因此，对于特别是大量含有挥发性有机卤素化合物的污染土壤、特别是地下水，存在净 化处理速度低、无害化所需的时间长的问题。此外，关于专利文献2所记载的方法，虽然有 促进挥发性有机卤素化合物的分解反应的效果，但微生物的活化仍不充分，还是存在无害 化所需的时间长的问题。另一方面，如非专利文献3、专利文献4公开的使用混合菌株的方 法，也存在因土壤的污染情况、pH、进而有机质含量而造成净化速度延迟的问题。
[0027] 因此，本发明的目的在于提供分解促进剂，其为被挥发性有机卤素化合物污染的 土地利用微生物的净化（生物降解）中使用的分解促进剂，特别是通过提高投与初始阶段 的微生物的活性，能够使挥发性有机卤素化合物迅速无害化。
[0028] 此外，本发明的目的在于提供利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的方 法，其为被挥发性有机卤素化合物污染的土地利用微生物进行净化（生物降解）时，特别 是通过提高投与初始阶段的微生物的活性，能够使挥发性有机卤素化合物迅速无害化的方 法。
[0029] 用于解决问题的方案
[0030] 本发明人等为了达成上述目的而进行了各种研究，结果发现，使用下述（A)?（C) 中的1种或者2种以上作为挥发性有机卤素化合物的分解促进剂时，能有效地促进挥发性 有机卤素化合物利用微生物的分解，从而完成了本发明。
[0031] 即，本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的特征在于，其含有下述 ㈧?（C)中的1种或者2种以上。
[0032] (A)柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物
[0033] (B)柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物
[0034] (C)含有下述⑴?（3)全部的配混物
[0035] (1)甘油
[0036] (2)乳蛋白和/或酵母提取物
[0037] (3)维生素B12
[0038] 此外，优选的是，本发明的分解促进剂含有（A)以及（B)中的至少1种时，前述提 取物为以水作为溶剂获得的提取物。
[0039] 优选的是，本发明的分解促进剂含有（C)时，相对于前述（1)的甘油1质量份，含 有以固体成分计为〇. 1?3质量份的前述（2)的乳蛋白和/或酵母提取物。
[0040] 此外，优选的是，本发明的分解促进剂含有（C)时，相对于前述（1)的甘油1质量 份，含有0. 00001?0. 001质量份的前述（3)的维生素B12。
[0041] 本发明的分解促进剂组合物的特征在于，其含有分解促进剂作为有效成分。
[0042] 本发明的利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的方法的特征在于，使上述 任意的分解促进剂或者上述分解促进剂组合物与包含挥发性有机齒素化合物的土壤和/ 或地下水接触。
[0043] 在本发明的方法中，优选前述挥发性有机卤素化合物为有机氯系化合物。
[0044] 此外，在本发明的方法中，优选的是，前述有机氯化合物为选自由四氯化碳、氯仿、 二氯甲烷、一氯甲烷、1，2-二氯乙烷、1，1-二氯乙烯、顺式-1，2-二氯乙烯、反式-1，2-二氯 乙烯、1,3-二氯丙烯、四氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1,2-三氯乙烷、三氯乙烯以及氯乙烯 组成的组中的至少1种。
[0045] 此外，在本发明的方法中，优选的是，前述微生物为选自由梭菌属（Clostridium) 细菌、脱齒素杆菌属（Dehalobacter)细菌、脱齒拟球菌属（Dehalococcoides)细菌、脱齒 螺菌属（Dehalospirilum)细菌、脱硫杆菌属（Desulfobacterium)细菌、脱硫单胞菌属 (Desulfomonas)细菌以及脱硫念珠菌属（Desulfomonile)细菌组成的组中的至少1种。
[0046] 发明的效果
[0047] 本发明的分解促进剂容易处理，通过在被挥发性有机卤素化合物污染的土地利用 微生物的净化（生物降解）中使用，能够使污染土壤、地下水迅速无害化，且低价并对环境 无负担。
[0048] 此外，本发明的方法低成本并对环境无负担，能够促进被挥发性有机卤素化合物 污染的土壤、地下水利用微生物的净化。
【专利附图】
【附图说明】
[0049] 图1为表示实施例1中的c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0050] 图2为表示实施例2中的c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0051] 图3为表示比较例1中的c-DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0052] 图4为表示比较例2中的c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0053] 图5为表示实施例7中的三氯乙烯、c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0054] 图6为表示比较例3中的三氯乙烯、c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0055] 图7为表示实施例15中的三氯乙烯、二氯乙烯、氯乙烯、乙烯的量的推移的曲线 图。
【具体实施方式】
[0056] 以下，对本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂进行详细叙述。需要说明 的是，在本说明书中，挥发性有机卤素化合物的分解是指挥发性有机卤素化合物的脱卤素 化。
[0057] 本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的特征在于，其含有下述（A)? (C)中的1种或者2种以上。
[0058] (A)柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物
[0059] (B)柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物
[0060] (C)含有下述⑴?（3)全部的配混物 [0061] ⑴甘油
[0062] (2)乳蛋白和/或酵母提取物
[0063] (3)维生素B12
[0064] 首先，对上述（A)成分以及（B)成分进行说明。
[0065] 对于上述㈧成分以及⑶成分的柑橘类的种类，并没有特别的限制，只要为属于 芸香科柑橘亚科的植物即可，特别是芸香科柑橘亚科柑橘属或者金橘属中所含的植物，优 选通过使用该柑橘属、金橘属杂交等所产生的植物。作为柑橘类的具体例，例如可以举出： 晚仑西亚橙、脐橙、血橙、葡萄柚、柠檬、柚、酸橙、温州蜜桔、八朔、甘夏、文旦、金柑、橘、进而 这些杂交等产生的伊予柑、清见、不知火等柑橘、塞米诺尔、明尼橘柚等橘柚等。其中，从容 易获得并可大量低价获得的方面出发，优选使用晚仑西亚橙、葡萄柚、柠檬、温州蜜桔中的 一种以上。
[0066]对于上述㈧成分以及⑶成分，可以是上述柑橘类的整个果实，也可以是果实的 一部分，但从分解促进效果高的方面出发，优选果皮。
[0067]对于上述㈧成分以及⑶成分的形态，没有特别的限制，例如可以举出：果实、果 皮、果肉直接使用的形态；果实、果皮、果肉经干燥的形态；果实、果皮、果肉经粉碎而分散 于水的形态；果实、果皮、果肉经粉末化的形态；果汁等。此外，也可以是以温水、热水等水 从果实、特别是果皮提取的提取物；以乙醇、丙酮、乙酸乙酯等极性溶剂、己烷等非极性溶剂 提取的提取物。
[0068] 其中，以温水、热水等水从果皮提取的提取物应用于土壤时具有即效性，此外从获 得高效果的观点出发是优选的。需要说明的是，提取时水的温度优选为30?KKTC、更优选 为60?95°C、进一步优选为60?80°C。
[0069]作为上述提取所使用的提取分离装置，只要为能有效地取得构成本发明的挥发性 有机卤素化合物的分解促进剂的提取物的装置即可，例如可以举出：连续离心装置、膜分离 装置、超临界提取装置等。
[0070] 需要说明的是，柑橘类的果皮在制造柑橘类果实的一次加工品（果汁、罐头等）时 大量副产，目前没有有用的用途而大部分被丢弃，本发明的挥发性有机卤素化合物的分解 促进剂将其作为原料，不仅能提供比目前已知的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂廉价 的产品，而且从资源的有效利用方面出发也是有意义的。
[0071] 进而，对于上述（A)成分以及（B)成分的一个形态的上述提取物，可以是从果实提 取果胶、香气成分、色素类、橘皮苷等成分后的残渣中提取的提取物，也可以含有这些以外 的成分。
[0072] 需要说明的是，柑橘类的果实自古以来被食用，将其作为原料的本发明的挥发性 有机卤素化合物的分解促进剂从安全性高、且对热也较稳定的方面出发也容易处理。
[0073] 作为上述（A)成分以及（B)成分，柑橘类的果实中，特别是其果皮发挥高分解促进 效果，此外，通过温水、热水等的水提取获得的提取物的效果高。因此，详细原因虽不清楚， 但作为一个可能性，认为是发挥本发明的分解促进剂的效果的柑橘类果实中所含的成分为 水溶性糖类、盐类、有机酸类的混合物。
[0074] 接着，对上述（C)成分进行说明。
[0075] 上述（C)成分为含有下述（1)?（3)全部的配混物。
[0076] (1)甘油
[0077] (2)乳蛋白和/或酵母提取物
[0078] ⑶维生素B12
[0079] 上述（C)成分的配混物中使用的甘油为微生物的碳源，并且成为用于取代有机氯 系化合物的氯原子的氢的供给源，即供氢体，可以使用甘油本身，也可以为结合有1?3个 脂肪酸的甘油酯的形态，优选使用甘油本身。使用市售的甘油时，并不限定于纯度为1〇〇%、 99%以上的甘油（例如，试剂特级），也可以使用日本药典的甘油（纯度80?90%)、纯化 甘油D、食品添加物甘油、化妆品用浓甘油（均为LionCorporation.制造）等。
[0080] 在上述（C)成分的配混物中，使用乳蛋白和/或酵母提取物作为微生物的氮源。
[0081] 作为上述的乳蛋白，可以仅为乳清蛋白、仅为酪蛋白、组合使用酪蛋白与乳清蛋白 中的任意者，但更优选组合使用乳清蛋白与酪蛋白。
[0082] 此外，上述乳蛋白优选为水溶性。使用市售的乳蛋白时，只要为以高浓度含有乳 蛋白的制品、且食品用、化妆品用等对人体无害的乳蛋白（或者不会明显地阻碍微生物生 长的乳蛋白）即可，例如可以举出：酪蛋白钠、酪蛋白钾、乳清粉、WPC(乳清蛋白浓缩物）、 WPI(乳清蛋白分离物）、全乳蛋白（TMP)、蛋白质浓缩乳清粉、全奶粉、脱脂奶粉、脱乳糖乳 清，脱乳糖乳清粉、酪乳粉、加糖奶粉、调制奶粉、乳蛋白浓缩物（MPC)等。本发明中，从脂质 含量低、且保存稳定性高的方面出发，优选为全乳蛋白（TMP)和/或脱脂奶粉、更优选为脱 脂奶粉。
[0083] 上述酵母提取物是指通过对酵母的培养物进行自溶、酶、热水、物理破碎、酸分解、 碱分解、冷冻熔融法等处理从而提取的提取物。对酵母提取物的制造中使用的酵母的种类 并没有特别的限制，可以没有特别限制地使用面包酵母、啤酒酵母、红酒酵母、圆酵母等。其 中，优选使用属于酵母属（Saccharomyces)的酵母。酵母提取物可以为糊状、粉末状、颗粒 状中的任意者。
[0084] 本发明的上述乳蛋白以及酵母提取物中，可以仅使用上述乳蛋白，此外也可以仅 使用酵母提取物，但优选仅使用乳蛋白、进一步优选组合使用乳蛋白与酵母提取物。
[0085] 其中，对于组合使用时的混合比，相对于乳蛋白1质量份，使酵母提取物以固体成 分计优选为〇. 1?2质量份、更优选为0. 3?1质量份。
[0086] 上述（C)成分的配混物中，对于上述（1)的甘油、（2)的乳蛋白和/或酵母提取物 的含量比，相对于上述（1)的甘油1质量份，使上述（2)的乳蛋白和/或酵母提取物以固体 成分计优选为〇. 1?3质量份、更优选为0. 1?1质量份。
[0087] 上述（C)成分的配混物中，使用维生素B12。
[0088] 维生素B12为含有钴的维生素的总称，是水溶性维生素的一种，有羟钴胺素、腺苷 钴胺素、甲基钴胺素、氰钴胺素、亚硫酸钴胺素等，本发明中可以使用其任意者。
[0089] 本发明中可以使用其纯化品，此外，也可以使用大量含有维生素B12的食品。例 如，维生素B12大多含有在海苔、贝、动物性食品的肝中。
[0090] 上述（C)成分的配混物中，对于上述（1)的甘油、（3)的维生素B12的含量比，相 对于上述（1)的甘油1质量份，使上述（3)的维生素B12优选为0. 00001?0. 001质量份、 更优选为〇. 00002?0. 0001质量份。
[0091] 本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂可以含有除上述（A)成分、（B)成 分、（C)成分以外的其他成分。
[0092] 作为上述其他成分，例如，可以与成为微生物的营养源的葡萄糖、果糖、硫酸铵、尿 素、铵盐、硫化合物、磷化合物、氯化钾等钾化合物，氯化镁、硫酸镁等镁化合物、酵母提取 物、或蛋白胨等一起使用。此外，相对于本发明的分解促进剂，也可以形成添加了合适量的 上述添加剂的分解促进剂组合物。形成分解促进剂组合物时，对各添加剂的配混量并没有 特别的限制，例如，使用粉末酵母提取物、果糖时，相对于果实的提取物的固体成分100质 量份，各自以固体成分计优选为1?200质量份、更优选为10?100质量份。
[0093]其中，作为本发明使用（C)成分时，作为上述其他成分，优选不含有能成为微生物 的营养成分的成分，例如：葡萄糖、果糖、硫酸铵、尿素、铵盐、硫化合物、磷化合物、氯化钾等 钾化合物、氯化镁、硫酸镁等镁化合物、或蛋白胨等。特别是在土壤、地下水中存在硫酸还原 菌时，在硫酸离子共存下与该硫酸还原菌竞争，因此变得无法进行挥发性有机卤素化合物 的分解，因此优选不包含硫酸铵、硫酸镁等硫酸盐。
[0094]对本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的形态并没有特别的限制，可以 采用固体（包含粉末状、颗粒状）、液体（包含糊状）等各种形态。此外，也可以在利用水等 溶剂进行了稀释的状态下使用。
[0095]本发明的分解促进剂通过与被挥发性有机卤素化合物污染的土壤、地下水、其他 试样接触，促进该挥发性有机卤素化合物利用微生物的分解。成为本发明的对象的挥发性 有机卤素化合物优选为有机氯系化合物，例如可以举出：四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、一氯甲 烧、1，2_二氣乙烧、1，1-二氣乙稀、顺式_1，2_二氣乙稀、反式_1，2_二氣乙稀、1，3_二氣丙 烯、四氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、三氯乙烯、氯乙烯等。
[0096]其中，本发明的分解促进剂能够适宜地促进四氯乙烯、三氯乙烯、二氯乙烯类、氯 乙烯等乙烯基氯类的分解。
[0097]例如，四氯乙烯通过微生物依次被分解为三氯乙烯、二氯乙烯、一氯乙烯（氯乙 烯）、乙烯。
[0098]本发明的分解促进剂为促进挥发性有机卤素化合物利用微生物的分解，可以利用 成为净化对象的土壤、地下水中原本存在的微生物，也可以同时使用对挥发性有机卤素化 合物的分解有用的微生物。此外，也可以同时使用包含上述微生物的组合物。即，在成为净 化对象的土壤、地下水中充分包含分解挥发性有机卤素化合物的微生物时可以使本发明的 分解促进剂、分解促进剂组合物直接应用于对象土壤。另一方面，土壤中的微生物量较少 时，或希望加快分解时，可以与预先准备的微生物、包含微生物的组合物一同使用本发明的 分解促进剂、分解促进剂组合物。
[0099]作为对挥发性有机卤素化合物的分解有用的微生物，优选为厌氧性微生物，例如 可以举出：梭菌属、脱卤素杆菌属、脱卤拟球菌属、脱卤螺菌属、脱硫杆菌属、脱硫单胞菌属、 脱硫念珠菌属等微生物。
[0100] 使用本发明的分解促进剂时，优选预先测定包含挥发性有机卤素化合物的试样中 的厌氧性微生物，例如，脱卤拟球菌属细菌的存在量。脱卤拟球菌属细菌的定量可以利用实 时PCR法等公知的方法（例如，参见非专利文献1)。
[0101] 对于使本发明的分解促进剂与土壤和/或地下水接触的方法并没有特别的限制， 可以是去除被污染的土壤、地下水，在其他的场所进行处理的"设施型处理"，也可以是在该 场所净化被污染的土壤、地下水的"原位置净化"，但从分解挥发性有机卤素化合物的微生 物在厌氧的条件下最大限度地发挥该效果出发，优选为原位置净化。
[0102] 在设施型净化的情况下，对于使本发明的分解促进剂与存在微生物的土壤和/或 地下水接触的方法并没有特别的限制，例如可以举出：堆积经挖掘的污染土壤，向其中直接 注入的方法；与污染土壤混合搅拌的方法；在污染土壤中加水而以流动状?液态的形式进 行添加的方法等。
[0103] 在原位置净化的情况下，对于使本发明的分解促进剂与存在微生物的土壤和/或 地下水接触的方法并没有特别的限制，例如可以为：直接埋设于土壤的方法；使用注入井 注入至地下水或者土壤中的直接注入法；使用利用地下水的流动的透过性反应净化壁的方 法，但优选为直接注入法。
[0104] 需要说明的是，本发明的分解促进剂的供给量只要为能够获得充分的净化效果的 程度即可，通过预先事前调查确定污染区域的范围、污染的程度、污染物质的种类等来决定 即可。
[0105] 实施例
[0106] 〈乙烯基氯类的分解实验1>
[0107] (分解促进剂的制造1)
[0108] 〈柑橘类提取物的制造〉
[0109] (制造例1)
[0110] 充分水洗温州蜜桔后，剥皮，利用盘式磨粉机粉碎果皮（干燥重量IOOg)后，以 60°C的温水2000ml搅拌提取1小时。将其过滤，滤液利用旋转蒸发器浓缩后，利用真空干 燥机进行干燥，从而获得温州蜜桔的果皮温水提取物（约l〇g)。将获得的果皮温水提取物 直接作为本发明的分解促进剂A。
[0111] (制造例2)
[0112] 相对于制造例1中获得的果皮温水提取物100质量份，添加粉末酵母提取物50质 量份以及果糖50质量份且均质地混合，将其作为本发明的分解促进剂B。
[0113] (制造例3)
[0114] 使用98°C热水代替提取所使用的60°C温水，除此之外，与制造例1同样地获得本 发明的分解促进剂C。
[0115] (制造例4)
[0116] 使用晚仑西亚橙代替温州蜜桔，除此之外，与制造例1同样地获得本发明的分解 促进剂D。
[0117] (制造例5)
[0118] 使用葡萄柚代替温州蜜桔，除此之外，与制造例1同样地获得本发明的分解促进 剂E。
[0119] (制造例6)
[0120] 使用柠檬代替温州蜜桔，除此之外，与制造例1同样地获得本发明的分解促进剂 F0
[0121] (分解促进剂的评价方法1)
[0122] 〈细菌液的制作〉
[0123] (关于分解促进剂A?F)
[0124] 将在如下所示的矿物质基础培养基中以0.lg/L的方式加入酵母提取物的培养基 50mL取至IOOmL容量玻璃制小瓶，经氮置换后，利用高压釜进行灭菌处理后，加入从被乙烯 基氯类污染的土壤所采取的地下水25mL，经氮置换后，封入氢2. 5mL以及顺式-1，2-二氯 乙烯0.58以1^(相当于10!^/1)，在201：下暗处静置培养。定期测定顶部空间中的乙烯基氯 类，在测不到乙烯基氯类的时刻采取lmL，继续接种至添加酵母提取物0.lg/L的高压灭菌 过的矿物质基础培养基75mL中。将进行该再次培养6次的物质作为"细菌液"，用于下述乙 烯基氯类的分解实验。
[0125]〈矿物质基础培养基（pH7. 0?7. 5)的制造〉
[0126] 将下述盐储备液10ml、下述微量元素溶液A1ml、下述微量元素溶液Blml、刃天 青钠溶液（〇. 5 %w/v) 50μ1、乙酸钠0.lg、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物0. 3g、碳酸氢钠 2. 52g、硫化钠九水合物0. 048g填满至1000ml，将其作为矿物质基础培养基。
[0127]〈盐储备液的制造〉
[0128] 将下述成分用水溶解且填满至1000ml，作为盐储备液。
[0129]IOOgNaCl、50gMgCl2 · 6H20、20gKH2PO4'30gNH4Cl、30gKCl、1.5gCaCl2 · 2H20
[0130]〈微量元素溶液A的制造〉
[0131] 将下述成分用水溶解且填满至1000ml，作为微量元素溶液A。
[0132]IOmLHCl(25%溶液、w/w)、1· 5gFeCl2 ·4Η20、0· 19gCoCl2 ·6Η20、0·IgMnCl2 ·4Η20、 70mgZnCl2、6mgH3B03、36mgNa2MoO4 · 2H20、24mgNiCl2 · 6H20、2mgCuCl2 · 2Η20
[0133]〈微量元素溶液B的制造〉
[0134] 将下述成分用水溶解且填满至1000ml，作为微量元素溶液Β。
[0135] 6mg Na2SeO3 · 5H20、8mg Na2WO4 · 2Η20、0· 5g NaOH
[0136]〈乙烯基氯类的分解实验1>
[0137](实施例1)
[0138] 假定被乙烯基氯类污染的地下水，通过下述方法进行分解试验。
[0139] 将上述矿物质基础培养基75ml取至玻璃制IOOml容量的小瓶中，以0.lg/L的方 式添加上述分解促进剂A，经氮置换后用高压釜进行灭菌处理。冷却后，加入上述细菌液 I. 5ml，经氮置换后，以10μg/ml的方式封入顺式-1，2-二氯乙烯（c-DCE)。
[0140] 在20°C下将该小瓶进行静置培养。0天、3天、10天、18天、24天、36天、45天、49天、 59天、66天、75天、84天、87天后，通过气相色谱法测定小瓶的顶部空间中的顺式-1，2-二 氯乙烯（c-DCE)含量、氯乙烯（VC)含量、乙烯含量。
[0141] 关于实验结果，首先，在图1中示出第0天?第87天的顺式-1,2-二氯乙烯 (c-DCE)含量、氯乙烯（VC)含量、乙烯含量的消长。
[0142] 此外，考虑微生物的活化是初始引起的，因此将至第18天的c-DCE含量的每1天 的减少量作为初始分解速度示于表1。
[0143](实施例2)
[0144] 以0. 2g/L的方式添加分解促进剂B代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验，结果记载于图2以及表1。
[0145](比较例1)
[0146] 不添加分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施例1同样地进行乙烯基氯类的分 解实验，结果记载于图3以及表1。
[0147](比较例2)
[0148] 不添加分解促进剂B0. 2g/L，而添加酵母提取物0. 05g/L以及果糖0. 05g/L，除此 之外，与实施例2同样地进行乙烯基氯类的分解实验，结果记载于图4以及表1。
[0149](实施例3)
[0150] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂C代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。其中，取样设为第O天、第3天、第10天、第18天， 第18天为止，与实施例1同样地计算至第18天的c-DCE的含量的每1天的减少量作为初 始分解速度示于表1。
[0151] (实施例4)
[0152] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂D代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。另外，取样设为与实施例3同样的期间，仅计算初 始分解速度，结果记载于表1。
[0153] (实施例5)
[0154] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂E代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。另外，取样设为与实施例3同样的期间，仅计算初 始分解速度，结果记载于表1。
[0155] (实施例6)
[0156] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂F代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。另外，取样设为与实施例3同样的期间，仅计算初 始分解速度，结果记载于表1。
[0157] [表 1]
[0158]
【权利要求】
1. 一种挥发性有机卤素化合物的分解促进剂，其特征在于，其含有下述（A)?（C)中的 1种或者2种以上， (A) 柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物 (B) 柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物 (C) 含有下述（1)?（3)全部的配混物 (1) 甘油 (2) 乳蛋白和/或酵母提取物 (3) 维生素B12。
2. 根据权利要求1所述的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂，其中，分解促进剂含 有（A)以及（B)中的至少1种时，所述提取物为以水作为溶剂获得的提取物。
3. 根据权利要求1所述的分解促进剂，其中，分解促进剂含有（C)时，相对于所述（1) 的甘油1质量份，含有以固体成分计为〇. 1?3质量份的所述（2)的乳蛋白和/或酵母提 取物。
4. 根据权利要求1或2所述的分解促进剂，其中，分解促进剂含有（C)时，相对于所述 (1)的甘油1质量份，含有0. 00001?0. 001质量份的所述（3)的维生素B12。
5. -种挥发性有机卤素化合物的分解促进剂组合物，其特征在于，其含有权利要求1 所述的分解促进剂作为有效成分。
6. -种利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的方法，其特征在于，使权利要求 1所述的分解促进剂或者权利要求5所述的分解促进剂组合物与包含挥发性有机卤素化合 物的土壤和/或地下水接触。
7. 根据权利要求6所述的方法，其中，挥发性有机卤素化合物为有机氯系化合物。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中，有机氯系化合物为选自由四氯化碳、氯仿、二氯 甲烷、一氯甲烷、1，2-二氯乙烷、1，1-二氯乙烯、顺式-1，2-二氯乙烯、反式-1，2-二氯乙 烯、1，3-二氯丙烯、四氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、三氯乙烯、氯乙烯组成的 组中的至少1种。
9. 根据权利要求6所述的方法，其中，微生物为选自由梭菌属细菌、脱卤素杆菌属细 菌、脱卤拟球菌属细菌、脱卤螺菌属细菌、脱硫杆菌属细菌、脱硫单胞菌属细菌、脱硫念珠菌 属细菌组成的组中的至少1种。
【文档编号】A62D101/22GK104411370SQ201380032349
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2013年4月16日 优先权日:2012年4月18日
【发明者】小池诚治, 柴崎淳二, 吉冈恵美 申请人:株式会社Adeka
【专利摘要】提供分解促进剂，其为被挥发性有机卤素化合物污染的土地利用微生物的净化(生物降解)中使用的分解促进剂，通过提高微生物的分解活性、特别是投与初始阶段的微生物活性，能够使挥发性有机卤素化合物迅速地无害化。一种挥发性有机卤素化合物的分解促进剂，其特征在于，其含有下述(A)～(C)中的1种或者2种以上。(A)柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物，(B)柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物，(C)含有下述(1)～(3)全部的配混物(1)甘油(2)乳蛋白和/或酵母提取物(3)维生素B12。
【专利说明】挥发性有机卤素化合物的分解促进剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及挥发性有机卤素化合物的分解促进剂以及分解促进方法，具体来说， 涉及能够利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的分解促进剂、以及使用其的分解促 进方法。
【背景技术】
[0002] 土地的土壤、地下水有时会被天然或者人工的各种化学物质污染。这样的土地污 染无论是将该土地作为用于粮食生产的耕地使用时，还是试图在居住、商业利用时都会变 成重大问题。
[0003] 但是，与直接入口的饮食品、接触肌肤的衣服/化妆品/装饰品等不同，土地的污 染、特别是土壤污染不太受到关注，过去也有挖洞填埋化学物质进行处理的例子。
[0004] 这样的土地的污染的净化最近成为重大问题，针对于此，提出并实行了各种净化 处理方法。
[0005] 若大致分类该土地的净化方法，则可以分类为以下四种：通过高温加热分解化学 物质或使其吸附于活性炭等的物理处理；通过化学反应使化学物质无害化的化学处理；利 用具有分解化学物质能力的微生物的微生物净化法；以及利用具有吸收或吸附化学物质的 能力的植物的植物净化法。
[0006] 其中，使用微生物、植物的方法在能抑制对环境的担忧、成本方面最近备受瞩目， 利用微生物的净化方法也被称为"生物降解"、利用植物的净化方法也被称为"植物降解"， 进行着各种研究开发，从能处理的土壤体积大的方面出发，正在积极进行着生物降解的研 究开发。
[0007] 生物降解有两种技术。一种是在污染场所应用已预先确定对于对象污染物质的分 解发挥效果的微生物的技术，被称为生物强化。另一种是通过向污染场所的土著微生物给 予氧、营养源，使微生物的活动活化，促进净化作用的技术，被称为生物刺激。
[0008] 此外，生物降解有两种方法。一种是去除被污染的土壤、地下水，在其他场所进行 处理的方法，被称为"设施型处理"。另一种是在该场所净化被污染的土壤、地下水的方法， 被称为"原位置净化"。
[0009] 作为近年成为重大问题的污染物质，有以四氯乙烯、三氯乙烯、二氯乙烯、二噁英 类、多氯联苯类等有机氯化合物为代表的有机卤素化合物。其中，关于四氯乙烯、三氯乙烯、 二氯乙烯等挥发性有机卤素化合物，担心通过呼吸对人体的影响，因此常见有需要尽快处 理的情况。
[0010] 该挥发性有机卤素化合物容易浸透至土壤，到达地下水脈，容易扩大污染至较大 范围。分解这样的挥发性有机卤素化合物的土壤微生物虽然也存在，但一般来说土壤越接 近表面有机物越多，土壤微生物也大量存在，而随着从表层向深部有机物及土壤微生物都 减少，若深入到Im以上则微生物的活性减少至表层的1/100以下。根据上述情况，一旦被 挥发性有机卤素化合物污染的土地存在着长时间较低浓度且较大范围地被污染的问题。 toon] 这样较低浓度且较大范围地被污染的土地的净化以生物降解为有效的手段，所以 提出了以净化挥发性有机卤素化合物的污染作为目的的各种方案。
[0012] 例如提出了以下方案：利用包含聚乳酸与甘油、木糖醇、山梨糖醇、季戊四醇等多 官能醇的酯的组合物的生物刺激（例如参见专利文献1);利用包含酵母、脂肪酸、碳水化合 物等的组合物的生物刺激（例如参见专利文献2);利用氨基酸与羟基羧酸的缩合反应产物 的生物刺激（例如参见专利文献3)。需要说明的是，在非专利文献1中记载有使各种分解 促进剂与微生物存在的土壤和/或地下水接触的方法。
[0013] 另一方面，作为被挥发性有机卤素化合物污染的土地净化所使用的微生物已知有 厌氧性细菌、特别是脱卤拟球菌属细菌。若为该微生物不存在的状态，则挥发性有机卤素化 合物不会分解至最终的乙烯为止，而是分解可能停在作为中间物质的二氯乙烯，因此可能 会引起无法进行完全的净化。然而，还已知有：即使是例如脱卤拟球菌属细菌也通常根据其 种类决定可分解的化合物，从四氯乙烯至乙烯的分解中需要有多种脱卤拟球菌参与（参见 非专利文献2)。因此，脱卤拟球菌属细菌的各种挥发性有机卤素化合物分解速度并不一定 快，此外，即使存在脱卤拟球菌属细菌也不一定参与挥发性有机卤素化合物的分解。
[0014] 因此，提出有如下方案：使用多个脱卤拟球菌属细菌的混合菌株的生物强化（例 如参见非专利文献3);使用脱卤拟球菌属细菌与链球菌作为主菌体的菌群（consortia)的 生物强化（例如参见专利文献4)。然而，使用该混合菌株的方法也存在由土壤的污染情况、 pH、进而有机质含量而造成净化速度延迟的问题。
[0015] 现有技术文献
[0016] 专利文献
[0017] 专利文献1 :日本特表2000-511969号公报
[0018] 专利文献2 :日本特开2005-185870号公报
[0019] 专利文献3 :日本特开2010-104962号公报
[0020] 专利文献4 :日本特开2011-244769号公报
[0021] 非专利文献
[0022] 非专利文献1 :株式会社工业调查会"化学装置"2007年7月号、山崎裕"土壤/地 下水净化技术-VOC的分解净化技术株式会社工業調査会「化学装置」2007年7月号、 山崎裕「土壌?地下水浄化技術一VOC〇分解浄化技術一」）
[0023] 非专利文献2 :崎原盛他"乙烯基氯类作为对象的原位置生物降解中的脱卤拟 球菌属细菌的行为解析"关于地下水/ 土壤污染及其防止对策的研究集会演讲集（2008) (崎原盛他「夕口口工亍>類全対象i亡原位置八4才工^于、工一；3 >(二耔汁石Dehalococcoides属細菌〇挙動解析」地下水?土壌汚染i〇防止対策(二関t 3研究集 会講演集（2008))
[0024] 非专利文献3 :矢木修身"土地修复技术的现状与今后的展望""谋求食品与环境 的安全-农林水产生态系中的有害化学物质-要旨集10页"(2007年）（矢木修身「土地修 復技術〇現状i今後〇展望」「食i環境〇安全&求*T一農林水産生態系(二杉汁3有害 化学物質一要旨集10?一'7'」（2007年））
【发明内容】
[0025] 发明要解决的问是页
[0026] 然而，关于专利文献1、专利文献3所记载的方法，投与初始阶段的微生物的活性 低，因此，对于特别是大量含有挥发性有机卤素化合物的污染土壤、特别是地下水，存在净 化处理速度低、无害化所需的时间长的问题。此外，关于专利文献2所记载的方法，虽然有 促进挥发性有机卤素化合物的分解反应的效果，但微生物的活化仍不充分，还是存在无害 化所需的时间长的问题。另一方面，如非专利文献3、专利文献4公开的使用混合菌株的方 法，也存在因土壤的污染情况、pH、进而有机质含量而造成净化速度延迟的问题。
[0027] 因此，本发明的目的在于提供分解促进剂，其为被挥发性有机卤素化合物污染的 土地利用微生物的净化（生物降解）中使用的分解促进剂，特别是通过提高投与初始阶段 的微生物的活性，能够使挥发性有机卤素化合物迅速无害化。
[0028] 此外，本发明的目的在于提供利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的方 法，其为被挥发性有机卤素化合物污染的土地利用微生物进行净化（生物降解）时，特别 是通过提高投与初始阶段的微生物的活性，能够使挥发性有机卤素化合物迅速无害化的方 法。
[0029] 用于解决问题的方案
[0030] 本发明人等为了达成上述目的而进行了各种研究，结果发现，使用下述（A)?（C) 中的1种或者2种以上作为挥发性有机卤素化合物的分解促进剂时，能有效地促进挥发性 有机卤素化合物利用微生物的分解，从而完成了本发明。
[0031] 即，本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的特征在于，其含有下述 ㈧?（C)中的1种或者2种以上。
[0032] (A)柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物
[0033] (B)柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物
[0034] (C)含有下述⑴?（3)全部的配混物
[0035] (1)甘油
[0036] (2)乳蛋白和/或酵母提取物
[0037] (3)维生素B12
[0038] 此外，优选的是，本发明的分解促进剂含有（A)以及（B)中的至少1种时，前述提 取物为以水作为溶剂获得的提取物。
[0039] 优选的是，本发明的分解促进剂含有（C)时，相对于前述（1)的甘油1质量份，含 有以固体成分计为〇. 1?3质量份的前述（2)的乳蛋白和/或酵母提取物。
[0040] 此外，优选的是，本发明的分解促进剂含有（C)时，相对于前述（1)的甘油1质量 份，含有0. 00001?0. 001质量份的前述（3)的维生素B12。
[0041] 本发明的分解促进剂组合物的特征在于，其含有分解促进剂作为有效成分。
[0042] 本发明的利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的方法的特征在于，使上述 任意的分解促进剂或者上述分解促进剂组合物与包含挥发性有机齒素化合物的土壤和/ 或地下水接触。
[0043] 在本发明的方法中，优选前述挥发性有机卤素化合物为有机氯系化合物。
[0044] 此外，在本发明的方法中，优选的是，前述有机氯化合物为选自由四氯化碳、氯仿、 二氯甲烷、一氯甲烷、1，2-二氯乙烷、1，1-二氯乙烯、顺式-1，2-二氯乙烯、反式-1，2-二氯 乙烯、1,3-二氯丙烯、四氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1,2-三氯乙烷、三氯乙烯以及氯乙烯 组成的组中的至少1种。
[0045] 此外，在本发明的方法中，优选的是，前述微生物为选自由梭菌属（Clostridium) 细菌、脱齒素杆菌属（Dehalobacter)细菌、脱齒拟球菌属（Dehalococcoides)细菌、脱齒 螺菌属（Dehalospirilum)细菌、脱硫杆菌属（Desulfobacterium)细菌、脱硫单胞菌属 (Desulfomonas)细菌以及脱硫念珠菌属（Desulfomonile)细菌组成的组中的至少1种。
[0046] 发明的效果
[0047] 本发明的分解促进剂容易处理，通过在被挥发性有机卤素化合物污染的土地利用 微生物的净化（生物降解）中使用，能够使污染土壤、地下水迅速无害化，且低价并对环境 无负担。
[0048] 此外，本发明的方法低成本并对环境无负担，能够促进被挥发性有机卤素化合物 污染的土壤、地下水利用微生物的净化。
【专利附图】
【附图说明】
[0049] 图1为表示实施例1中的c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0050] 图2为表示实施例2中的c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0051] 图3为表示比较例1中的c-DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0052] 图4为表示比较例2中的c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0053] 图5为表示实施例7中的三氯乙烯、c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0054] 图6为表示比较例3中的三氯乙烯、c_DCE、VC、乙烯量的推移的曲线图。
[0055] 图7为表示实施例15中的三氯乙烯、二氯乙烯、氯乙烯、乙烯的量的推移的曲线 图。
【具体实施方式】
[0056] 以下，对本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂进行详细叙述。需要说明 的是，在本说明书中，挥发性有机卤素化合物的分解是指挥发性有机卤素化合物的脱卤素 化。
[0057] 本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的特征在于，其含有下述（A)? (C)中的1种或者2种以上。
[0058] (A)柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物
[0059] (B)柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物
[0060] (C)含有下述⑴?（3)全部的配混物 [0061] ⑴甘油
[0062] (2)乳蛋白和/或酵母提取物
[0063] (3)维生素B12
[0064] 首先，对上述（A)成分以及（B)成分进行说明。
[0065] 对于上述㈧成分以及⑶成分的柑橘类的种类，并没有特别的限制，只要为属于 芸香科柑橘亚科的植物即可，特别是芸香科柑橘亚科柑橘属或者金橘属中所含的植物，优 选通过使用该柑橘属、金橘属杂交等所产生的植物。作为柑橘类的具体例，例如可以举出： 晚仑西亚橙、脐橙、血橙、葡萄柚、柠檬、柚、酸橙、温州蜜桔、八朔、甘夏、文旦、金柑、橘、进而 这些杂交等产生的伊予柑、清见、不知火等柑橘、塞米诺尔、明尼橘柚等橘柚等。其中，从容 易获得并可大量低价获得的方面出发，优选使用晚仑西亚橙、葡萄柚、柠檬、温州蜜桔中的 一种以上。
[0066]对于上述㈧成分以及⑶成分，可以是上述柑橘类的整个果实，也可以是果实的 一部分，但从分解促进效果高的方面出发，优选果皮。
[0067]对于上述㈧成分以及⑶成分的形态，没有特别的限制，例如可以举出：果实、果 皮、果肉直接使用的形态；果实、果皮、果肉经干燥的形态；果实、果皮、果肉经粉碎而分散 于水的形态；果实、果皮、果肉经粉末化的形态；果汁等。此外，也可以是以温水、热水等水 从果实、特别是果皮提取的提取物；以乙醇、丙酮、乙酸乙酯等极性溶剂、己烷等非极性溶剂 提取的提取物。
[0068] 其中，以温水、热水等水从果皮提取的提取物应用于土壤时具有即效性，此外从获 得高效果的观点出发是优选的。需要说明的是，提取时水的温度优选为30?KKTC、更优选 为60?95°C、进一步优选为60?80°C。
[0069]作为上述提取所使用的提取分离装置，只要为能有效地取得构成本发明的挥发性 有机卤素化合物的分解促进剂的提取物的装置即可，例如可以举出：连续离心装置、膜分离 装置、超临界提取装置等。
[0070] 需要说明的是，柑橘类的果皮在制造柑橘类果实的一次加工品（果汁、罐头等）时 大量副产，目前没有有用的用途而大部分被丢弃，本发明的挥发性有机卤素化合物的分解 促进剂将其作为原料，不仅能提供比目前已知的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂廉价 的产品，而且从资源的有效利用方面出发也是有意义的。
[0071] 进而，对于上述（A)成分以及（B)成分的一个形态的上述提取物，可以是从果实提 取果胶、香气成分、色素类、橘皮苷等成分后的残渣中提取的提取物，也可以含有这些以外 的成分。
[0072] 需要说明的是，柑橘类的果实自古以来被食用，将其作为原料的本发明的挥发性 有机卤素化合物的分解促进剂从安全性高、且对热也较稳定的方面出发也容易处理。
[0073] 作为上述（A)成分以及（B)成分，柑橘类的果实中，特别是其果皮发挥高分解促进 效果，此外，通过温水、热水等的水提取获得的提取物的效果高。因此，详细原因虽不清楚， 但作为一个可能性，认为是发挥本发明的分解促进剂的效果的柑橘类果实中所含的成分为 水溶性糖类、盐类、有机酸类的混合物。
[0074] 接着，对上述（C)成分进行说明。
[0075] 上述（C)成分为含有下述（1)?（3)全部的配混物。
[0076] (1)甘油
[0077] (2)乳蛋白和/或酵母提取物
[0078] ⑶维生素B12
[0079] 上述（C)成分的配混物中使用的甘油为微生物的碳源，并且成为用于取代有机氯 系化合物的氯原子的氢的供给源，即供氢体，可以使用甘油本身，也可以为结合有1?3个 脂肪酸的甘油酯的形态，优选使用甘油本身。使用市售的甘油时，并不限定于纯度为1〇〇%、 99%以上的甘油（例如，试剂特级），也可以使用日本药典的甘油（纯度80?90%)、纯化 甘油D、食品添加物甘油、化妆品用浓甘油（均为LionCorporation.制造）等。
[0080] 在上述（C)成分的配混物中，使用乳蛋白和/或酵母提取物作为微生物的氮源。
[0081] 作为上述的乳蛋白，可以仅为乳清蛋白、仅为酪蛋白、组合使用酪蛋白与乳清蛋白 中的任意者，但更优选组合使用乳清蛋白与酪蛋白。
[0082] 此外，上述乳蛋白优选为水溶性。使用市售的乳蛋白时，只要为以高浓度含有乳 蛋白的制品、且食品用、化妆品用等对人体无害的乳蛋白（或者不会明显地阻碍微生物生 长的乳蛋白）即可，例如可以举出：酪蛋白钠、酪蛋白钾、乳清粉、WPC(乳清蛋白浓缩物）、 WPI(乳清蛋白分离物）、全乳蛋白（TMP)、蛋白质浓缩乳清粉、全奶粉、脱脂奶粉、脱乳糖乳 清，脱乳糖乳清粉、酪乳粉、加糖奶粉、调制奶粉、乳蛋白浓缩物（MPC)等。本发明中，从脂质 含量低、且保存稳定性高的方面出发，优选为全乳蛋白（TMP)和/或脱脂奶粉、更优选为脱 脂奶粉。
[0083] 上述酵母提取物是指通过对酵母的培养物进行自溶、酶、热水、物理破碎、酸分解、 碱分解、冷冻熔融法等处理从而提取的提取物。对酵母提取物的制造中使用的酵母的种类 并没有特别的限制，可以没有特别限制地使用面包酵母、啤酒酵母、红酒酵母、圆酵母等。其 中，优选使用属于酵母属（Saccharomyces)的酵母。酵母提取物可以为糊状、粉末状、颗粒 状中的任意者。
[0084] 本发明的上述乳蛋白以及酵母提取物中，可以仅使用上述乳蛋白，此外也可以仅 使用酵母提取物，但优选仅使用乳蛋白、进一步优选组合使用乳蛋白与酵母提取物。
[0085] 其中，对于组合使用时的混合比，相对于乳蛋白1质量份，使酵母提取物以固体成 分计优选为〇. 1?2质量份、更优选为0. 3?1质量份。
[0086] 上述（C)成分的配混物中，对于上述（1)的甘油、（2)的乳蛋白和/或酵母提取物 的含量比，相对于上述（1)的甘油1质量份，使上述（2)的乳蛋白和/或酵母提取物以固体 成分计优选为〇. 1?3质量份、更优选为0. 1?1质量份。
[0087] 上述（C)成分的配混物中，使用维生素B12。
[0088] 维生素B12为含有钴的维生素的总称，是水溶性维生素的一种，有羟钴胺素、腺苷 钴胺素、甲基钴胺素、氰钴胺素、亚硫酸钴胺素等，本发明中可以使用其任意者。
[0089] 本发明中可以使用其纯化品，此外，也可以使用大量含有维生素B12的食品。例 如，维生素B12大多含有在海苔、贝、动物性食品的肝中。
[0090] 上述（C)成分的配混物中，对于上述（1)的甘油、（3)的维生素B12的含量比，相 对于上述（1)的甘油1质量份，使上述（3)的维生素B12优选为0. 00001?0. 001质量份、 更优选为〇. 00002?0. 0001质量份。
[0091] 本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂可以含有除上述（A)成分、（B)成 分、（C)成分以外的其他成分。
[0092] 作为上述其他成分，例如，可以与成为微生物的营养源的葡萄糖、果糖、硫酸铵、尿 素、铵盐、硫化合物、磷化合物、氯化钾等钾化合物，氯化镁、硫酸镁等镁化合物、酵母提取 物、或蛋白胨等一起使用。此外，相对于本发明的分解促进剂，也可以形成添加了合适量的 上述添加剂的分解促进剂组合物。形成分解促进剂组合物时，对各添加剂的配混量并没有 特别的限制，例如，使用粉末酵母提取物、果糖时，相对于果实的提取物的固体成分100质 量份，各自以固体成分计优选为1?200质量份、更优选为10?100质量份。
[0093]其中，作为本发明使用（C)成分时，作为上述其他成分，优选不含有能成为微生物 的营养成分的成分，例如：葡萄糖、果糖、硫酸铵、尿素、铵盐、硫化合物、磷化合物、氯化钾等 钾化合物、氯化镁、硫酸镁等镁化合物、或蛋白胨等。特别是在土壤、地下水中存在硫酸还原 菌时，在硫酸离子共存下与该硫酸还原菌竞争，因此变得无法进行挥发性有机卤素化合物 的分解，因此优选不包含硫酸铵、硫酸镁等硫酸盐。
[0094]对本发明的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂的形态并没有特别的限制，可以 采用固体（包含粉末状、颗粒状）、液体（包含糊状）等各种形态。此外，也可以在利用水等 溶剂进行了稀释的状态下使用。
[0095]本发明的分解促进剂通过与被挥发性有机卤素化合物污染的土壤、地下水、其他 试样接触，促进该挥发性有机卤素化合物利用微生物的分解。成为本发明的对象的挥发性 有机卤素化合物优选为有机氯系化合物，例如可以举出：四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、一氯甲 烧、1，2_二氣乙烧、1，1-二氣乙稀、顺式_1，2_二氣乙稀、反式_1，2_二氣乙稀、1，3_二氣丙 烯、四氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、三氯乙烯、氯乙烯等。
[0096]其中，本发明的分解促进剂能够适宜地促进四氯乙烯、三氯乙烯、二氯乙烯类、氯 乙烯等乙烯基氯类的分解。
[0097]例如，四氯乙烯通过微生物依次被分解为三氯乙烯、二氯乙烯、一氯乙烯（氯乙 烯）、乙烯。
[0098]本发明的分解促进剂为促进挥发性有机卤素化合物利用微生物的分解，可以利用 成为净化对象的土壤、地下水中原本存在的微生物，也可以同时使用对挥发性有机卤素化 合物的分解有用的微生物。此外，也可以同时使用包含上述微生物的组合物。即，在成为净 化对象的土壤、地下水中充分包含分解挥发性有机卤素化合物的微生物时可以使本发明的 分解促进剂、分解促进剂组合物直接应用于对象土壤。另一方面，土壤中的微生物量较少 时，或希望加快分解时，可以与预先准备的微生物、包含微生物的组合物一同使用本发明的 分解促进剂、分解促进剂组合物。
[0099]作为对挥发性有机卤素化合物的分解有用的微生物，优选为厌氧性微生物，例如 可以举出：梭菌属、脱卤素杆菌属、脱卤拟球菌属、脱卤螺菌属、脱硫杆菌属、脱硫单胞菌属、 脱硫念珠菌属等微生物。
[0100] 使用本发明的分解促进剂时，优选预先测定包含挥发性有机卤素化合物的试样中 的厌氧性微生物，例如，脱卤拟球菌属细菌的存在量。脱卤拟球菌属细菌的定量可以利用实 时PCR法等公知的方法（例如，参见非专利文献1)。
[0101] 对于使本发明的分解促进剂与土壤和/或地下水接触的方法并没有特别的限制， 可以是去除被污染的土壤、地下水，在其他的场所进行处理的"设施型处理"，也可以是在该 场所净化被污染的土壤、地下水的"原位置净化"，但从分解挥发性有机卤素化合物的微生 物在厌氧的条件下最大限度地发挥该效果出发，优选为原位置净化。
[0102] 在设施型净化的情况下，对于使本发明的分解促进剂与存在微生物的土壤和/或 地下水接触的方法并没有特别的限制，例如可以举出：堆积经挖掘的污染土壤，向其中直接 注入的方法；与污染土壤混合搅拌的方法；在污染土壤中加水而以流动状?液态的形式进 行添加的方法等。
[0103] 在原位置净化的情况下，对于使本发明的分解促进剂与存在微生物的土壤和/或 地下水接触的方法并没有特别的限制，例如可以为：直接埋设于土壤的方法；使用注入井 注入至地下水或者土壤中的直接注入法；使用利用地下水的流动的透过性反应净化壁的方 法，但优选为直接注入法。
[0104] 需要说明的是，本发明的分解促进剂的供给量只要为能够获得充分的净化效果的 程度即可，通过预先事前调查确定污染区域的范围、污染的程度、污染物质的种类等来决定 即可。
[0105] 实施例
[0106] 〈乙烯基氯类的分解实验1>
[0107] (分解促进剂的制造1)
[0108] 〈柑橘类提取物的制造〉
[0109] (制造例1)
[0110] 充分水洗温州蜜桔后，剥皮，利用盘式磨粉机粉碎果皮（干燥重量IOOg)后，以 60°C的温水2000ml搅拌提取1小时。将其过滤，滤液利用旋转蒸发器浓缩后，利用真空干 燥机进行干燥，从而获得温州蜜桔的果皮温水提取物（约l〇g)。将获得的果皮温水提取物 直接作为本发明的分解促进剂A。
[0111] (制造例2)
[0112] 相对于制造例1中获得的果皮温水提取物100质量份，添加粉末酵母提取物50质 量份以及果糖50质量份且均质地混合，将其作为本发明的分解促进剂B。
[0113] (制造例3)
[0114] 使用98°C热水代替提取所使用的60°C温水，除此之外，与制造例1同样地获得本 发明的分解促进剂C。
[0115] (制造例4)
[0116] 使用晚仑西亚橙代替温州蜜桔，除此之外，与制造例1同样地获得本发明的分解 促进剂D。
[0117] (制造例5)
[0118] 使用葡萄柚代替温州蜜桔，除此之外，与制造例1同样地获得本发明的分解促进 剂E。
[0119] (制造例6)
[0120] 使用柠檬代替温州蜜桔，除此之外，与制造例1同样地获得本发明的分解促进剂 F0
[0121] (分解促进剂的评价方法1)
[0122] 〈细菌液的制作〉
[0123] (关于分解促进剂A?F)
[0124] 将在如下所示的矿物质基础培养基中以0.lg/L的方式加入酵母提取物的培养基 50mL取至IOOmL容量玻璃制小瓶，经氮置换后，利用高压釜进行灭菌处理后，加入从被乙烯 基氯类污染的土壤所采取的地下水25mL，经氮置换后，封入氢2. 5mL以及顺式-1，2-二氯 乙烯0.58以1^(相当于10!^/1)，在201：下暗处静置培养。定期测定顶部空间中的乙烯基氯 类，在测不到乙烯基氯类的时刻采取lmL，继续接种至添加酵母提取物0.lg/L的高压灭菌 过的矿物质基础培养基75mL中。将进行该再次培养6次的物质作为"细菌液"，用于下述乙 烯基氯类的分解实验。
[0125]〈矿物质基础培养基（pH7. 0?7. 5)的制造〉
[0126] 将下述盐储备液10ml、下述微量元素溶液A1ml、下述微量元素溶液Blml、刃天 青钠溶液（〇. 5 %w/v) 50μ1、乙酸钠0.lg、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物0. 3g、碳酸氢钠 2. 52g、硫化钠九水合物0. 048g填满至1000ml，将其作为矿物质基础培养基。
[0127]〈盐储备液的制造〉
[0128] 将下述成分用水溶解且填满至1000ml，作为盐储备液。
[0129]IOOgNaCl、50gMgCl2 · 6H20、20gKH2PO4'30gNH4Cl、30gKCl、1.5gCaCl2 · 2H20
[0130]〈微量元素溶液A的制造〉
[0131] 将下述成分用水溶解且填满至1000ml，作为微量元素溶液A。
[0132]IOmLHCl(25%溶液、w/w)、1· 5gFeCl2 ·4Η20、0· 19gCoCl2 ·6Η20、0·IgMnCl2 ·4Η20、 70mgZnCl2、6mgH3B03、36mgNa2MoO4 · 2H20、24mgNiCl2 · 6H20、2mgCuCl2 · 2Η20
[0133]〈微量元素溶液B的制造〉
[0134] 将下述成分用水溶解且填满至1000ml，作为微量元素溶液Β。
[0135] 6mg Na2SeO3 · 5H20、8mg Na2WO4 · 2Η20、0· 5g NaOH
[0136]〈乙烯基氯类的分解实验1>
[0137](实施例1)
[0138] 假定被乙烯基氯类污染的地下水，通过下述方法进行分解试验。
[0139] 将上述矿物质基础培养基75ml取至玻璃制IOOml容量的小瓶中，以0.lg/L的方 式添加上述分解促进剂A，经氮置换后用高压釜进行灭菌处理。冷却后，加入上述细菌液 I. 5ml，经氮置换后，以10μg/ml的方式封入顺式-1，2-二氯乙烯（c-DCE)。
[0140] 在20°C下将该小瓶进行静置培养。0天、3天、10天、18天、24天、36天、45天、49天、 59天、66天、75天、84天、87天后，通过气相色谱法测定小瓶的顶部空间中的顺式-1，2-二 氯乙烯（c-DCE)含量、氯乙烯（VC)含量、乙烯含量。
[0141] 关于实验结果，首先，在图1中示出第0天?第87天的顺式-1,2-二氯乙烯 (c-DCE)含量、氯乙烯（VC)含量、乙烯含量的消长。
[0142] 此外，考虑微生物的活化是初始引起的，因此将至第18天的c-DCE含量的每1天 的减少量作为初始分解速度示于表1。
[0143](实施例2)
[0144] 以0. 2g/L的方式添加分解促进剂B代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验，结果记载于图2以及表1。
[0145](比较例1)
[0146] 不添加分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施例1同样地进行乙烯基氯类的分 解实验，结果记载于图3以及表1。
[0147](比较例2)
[0148] 不添加分解促进剂B0. 2g/L，而添加酵母提取物0. 05g/L以及果糖0. 05g/L，除此 之外，与实施例2同样地进行乙烯基氯类的分解实验，结果记载于图4以及表1。
[0149](实施例3)
[0150] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂C代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。其中，取样设为第O天、第3天、第10天、第18天， 第18天为止，与实施例1同样地计算至第18天的c-DCE的含量的每1天的减少量作为初 始分解速度示于表1。
[0151] (实施例4)
[0152] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂D代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。另外，取样设为与实施例3同样的期间，仅计算初 始分解速度，结果记载于表1。
[0153] (实施例5)
[0154] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂E代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。另外，取样设为与实施例3同样的期间，仅计算初 始分解速度，结果记载于表1。
[0155] (实施例6)
[0156] 以0.lg/L的方式添加分解促进剂F代替分解促进剂A0.lg/L，除此之外，与实施 例1同样地进行乙烯基氯类的分解实验。另外，取样设为与实施例3同样的期间，仅计算初 始分解速度，结果记载于表1。
[0157] [表 1]
[0158]
【权利要求】
1. 一种挥发性有机卤素化合物的分解促进剂，其特征在于，其含有下述（A)?（C)中的 1种或者2种以上， (A) 柑橘类的果实或者由该果实获得的提取物 (B) 柑橘类的果皮或者由该果皮获得的提取物 (C) 含有下述（1)?（3)全部的配混物 (1) 甘油 (2) 乳蛋白和/或酵母提取物 (3) 维生素B12。
2. 根据权利要求1所述的挥发性有机卤素化合物的分解促进剂，其中，分解促进剂含 有（A)以及（B)中的至少1种时，所述提取物为以水作为溶剂获得的提取物。
3. 根据权利要求1所述的分解促进剂，其中，分解促进剂含有（C)时，相对于所述（1) 的甘油1质量份，含有以固体成分计为〇. 1?3质量份的所述（2)的乳蛋白和/或酵母提 取物。
4. 根据权利要求1或2所述的分解促进剂，其中，分解促进剂含有（C)时，相对于所述 (1)的甘油1质量份，含有0. 00001?0. 001质量份的所述（3)的维生素B12。
5. -种挥发性有机卤素化合物的分解促进剂组合物，其特征在于，其含有权利要求1 所述的分解促进剂作为有效成分。
6. -种利用微生物促进挥发性有机卤素化合物分解的方法，其特征在于，使权利要求 1所述的分解促进剂或者权利要求5所述的分解促进剂组合物与包含挥发性有机卤素化合 物的土壤和/或地下水接触。
7. 根据权利要求6所述的方法，其中，挥发性有机卤素化合物为有机氯系化合物。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中，有机氯系化合物为选自由四氯化碳、氯仿、二氯 甲烷、一氯甲烷、1，2-二氯乙烷、1，1-二氯乙烯、顺式-1，2-二氯乙烯、反式-1，2-二氯乙 烯、1，3-二氯丙烯、四氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、三氯乙烯、氯乙烯组成的 组中的至少1种。
9. 根据权利要求6所述的方法，其中，微生物为选自由梭菌属细菌、脱卤素杆菌属细 菌、脱卤拟球菌属细菌、脱卤螺菌属细菌、脱硫杆菌属细菌、脱硫单胞菌属细菌、脱硫念珠菌 属细菌组成的组中的至少1种。
【文档编号】A62D101/22GK104411370SQ201380032349
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2013年4月16日 优先权日:2012年4月18日
【发明者】小池诚治, 柴崎淳二, 吉冈恵美 申请人:株式会社Adeka
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