鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用的制作方法
专利名称：鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。
背景技术：
鞣酸小檗碱又名无味黄连素，临床主要用于敏感病原菌所致的胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染，又文献报道鞣酸小檗碱具有治疗宫颈糜烂的作用，见[李冬平，焦鲁霞，李亚里，等.鞣酸小檗碱膜治疗宫颈糜烂80例的疗效.人民军医.1996，228]。本发明人通过大量试验惊奇地发现鞣酸小檗碱具有治疗急慢性咽炎的作用。
发明内容
本发明提供了鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。
本发明提供了用于急慢性咽炎的鞣酸小檗碱含片。
本发明提供了鞣酸小檗碱含片的制备方法。
本发明人通过试验进一步证明了鞣酸小檗碱对急慢性咽炎的治疗作用，见试验例。在试验例中鞣酸小檗碱简称为RS。
鞣酸小檗碱用于急慢性咽炎的应用剂量范围是50-2400mg，优选为200-400mg。
本发明提供的鞣酸小檗碱含片含有鞣酸小糪碱、稀释剂、粘合剂和润滑剂，其中鞣酸小檗碱∶稀释剂∶粘合剂∶润滑剂的比例为1-15∶90-96∶10-20∶0.5-1.5。
稀释剂选自乳糖、糖粉、甘露醇、糊精或麦芽糖糊精中的一种或几种；粘合剂选自聚维酮K30乙醇溶液、羟丙甲基纤维素、明胶、单糖浆或卡波姆中的一种或几种；润滑剂为硬脂酸镁。
本发明所述的鞣酸小檗碱含片的制备方法如下将处方量鞣酸小檗碱过100目(下同)筛，加入麦芽糖糊精混匀、过筛，加入甘露醇混匀、过筛，加入剩余量麦芽糖糊精、甘露醇混匀、过筛，加入处方量糖粉混匀、过筛，得混合粉；处方量冰片溶于无水乙醇中，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以2％PVPK3075％乙醇水溶液作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约800mg/片，还可以外包薄膜衣或糖衣，其使用方法为口腔含化，1-8片/日。
本发明含片的配方中还可以含有矫味剂，矫味剂优选为薄荷脑，本发明人经过大量的试验研究，结果见表1，发现薄荷脑占含片重量的0.3-0.7％为宜，优选为0.5％。
表1.薄荷脑的用量对口感的影响薄荷脑的用量口感0.25％ 无清凉效果0.5％ 口感清凉0.75％ 口感清凉，略麻具体实施方式
制备例1制备小檗碱含片将鞣酸小糪碱50g过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入甘露醇100g混匀、过筛，加入麦芽糖糊精100混匀、过筛，加入500g糖粉混匀、过筛，得混合粉；将适量(含片重量的0.5％)薄荷脑溶于140ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以100ml 60％糖浆作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入含片重量0.5％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，得1000片，片重约0.8g/片。
制备例2制备含片将50g鞣酸小糪碱过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入100g甘露醇混匀、过筛，加入150g麦芽糖糊精、150g甘露醇混匀、过筛，加入100g乳糖、200g糖粉混匀、过筛，得混合粉；2.38g冰片、5％重的薄荷脑溶于170ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以1％HPMC溶液120ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入含片0.5％重的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。
常规包制薄膜衣。
制备例3制备含片将50g鞣酸小糪碱过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入100g甘露醇混匀、过筛，加入100g麦芽糖糊精、150g甘露醇混匀、过筛，加入350g乳糖混匀、过筛，得混合粉；2.38g冰片、片重0.6％的薄荷脑溶于170ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以5％明胶溶液120ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入片重0.5％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。常规包制薄膜衣。
制备例4制备含片将鞣酸小糪碱50g过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入甘露醇100g混匀、过筛，加入100g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入545g糖粉混匀、过筛，得混合粉；片重0.5％的薄荷脑溶于140ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以60％糖浆100ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入片重1.0％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。
制备例5制备含片将鞣酸小糪碱200g过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入100g甘露醇混匀、过筛，加入100g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入350g糖粉混匀、过筛，得混合粉；片重0.5％的薄荷脑溶于140ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以60％糖浆100ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入片重1.5％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。
试验1 RS对毛细血管通透性影响试验1.材料乙酸，天津化学试剂厂，批号990727，含量＞99.5％)；鞣酸小檗碱，四川玉鑫制药厂，批号020405；离心机DL-4000B冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；分光光度计UV-9100，北京瑞利科学仪器厂；电子天平sartious BPs210 0.1mg德国；2.动物二级昆明种小白鼠，雌雄各半，体重22-24g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字20010603。
取小鼠50只，雄性，随机分为5组。生理盐水组每只小鼠静脉注射0.5％伊文思蓝溶液，注射剂量0.10ml/10g，随即腹腔注射0.8％的醋酸0.20ml与生理盐水0.20ml，10分钟后再腹腔注射生理盐水0.20ml，10分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，分两次(3ml，3ml)洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，15min)，于590nm测定吸收值。RS组(低、中、高三个剂量组均给予远低于口服给药剂量的鞣酸小檗碱，浓度分别为0.1、0.2、0.4mg/ml)每只小鼠静脉注射0.5％伊文思蓝溶液，注射剂量0.10ml/10g，随即腹腔注射0.8％的醋酸0.20ml与低浓度的RS溶液，10分钟后再腹腔注射等量同浓度RS溶液，再10分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，分两次(3ml，3ml)洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，15min)，于590nm测定吸收值。阳性对照(口服双氯芬酸钠)组每只小鼠灌服1.5mg/ml双氯芬酸钠溶液，60分钟后腹腔注射0.8％的醋酸0.20ml与生理盐水0.20ml，10分钟后再腹腔注射生理盐水0.20ml，再10分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，分两次(3ml，3ml)洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，15min)，于590nm波长处测定吸收值。
结果显示(表2)，口服双氯芬酸钠可明显减少毛细血管内体液的渗出。低浓度小剂量RS对毛细血管通透性有一定的抑制作用；RS高剂量组与生理盐水组比较，腹腔洗液的的吸光度值明显降低(P＜0.01)；RS中剂量组与生理盐水组比较，腹腔洗液的的吸光度值明显降低(P＜0.05)。表明RS可减少血管内体液的渗出，说明低浓度RS局部给药对小鼠毛细血管通透性有明显的抑制作用。
表2 低浓度RS对毛细血管通透性影响组别 浓度 剂量 吸收度生理盐水组 ------ 0.195±0.032阳性对照组 1.5mg/ml 15mg/kg 0.112±0.029**RS小剂量组 0.1mg/ml 2mg/kg0.171±0.033RS中剂量组 0.2mg/ml 4mg/kg0.146±0.023*RS高剂量组 0.4mg/ml 8mg/kg0.125±0.043****P＜0.01，*P＜0.05，与生理盐水组比较。
试验2 RS对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响1.材料鞣酸小檗碱，四川玉鑫制药厂，批号020405；电子天平sartious BPs210 0.1mg德国；2.动物SD大鼠，体重150-180g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字20010602；大鼠随机分为5组，雄性，(生理盐水组，阳性药组，RS大、中、小剂量组)，每组10只，乙醚麻醉，肩胛部皮肤碘酊消毒，酒精脱碘，肩胛间切一1cm的切口，止血钳钝性分离两侧皮肤与皮下组织，切口两侧皮下各植入消毒棉球一个(重20mg左右)，缝合切口。手术当日开始给药。阳性对照组双氯芬酸钠每日腹腔注射给药一次，给药剂量8.8mg/kg，给药体积0.5ml/100g)；生理盐水组及RS给药组(鞣酸小檗碱小剂量组、中剂量组、高剂量组的给药体积相同，浓度分别为0.20、0.40、0.60mg/ml)每日剂量均分三次早、中、晚给药(切口处注药)，每次给药体积0.4ml/100g。一周后脱臼处死，取出棉球，剔除脂肪组织，70℃烘12小时，称重，减去棉球原重，即为肉芽肿重量。
结果显示(表3)，双氯芬酸钠腹腔注射给药可明显抑制棉球肉芽肿的形成；RS局部给药对棉球肉芽肿的形成亦有明显的抑制作用。
表3 RS对大鼠棉球肉芽肿形成的影响组别 浓度(mg/ml)剂量(mg/kg) 肉芽肿重(mg)生理盐水组----- ----- 42.2±12.5双氯芬酸钠组 1.76 8.827.6±6.8*RS小剂量组0.20 2.428.2±6.9**RS中剂量组0.40 4.827.8±7.0**RS高剂量组0.60 7.226.0±5.2****P＜0.01，*P＜0.05，与生理盐水组比较。
本研究对经典的抗炎试验方法进行一定的改进，观察了鞣酸小檗碱局部低浓度小剂量给药的抗炎作用，更符合口腔局部用药的实际情况。在毛细血管通透性增高实验中，将腹腔粘膜作为实验界面，观察了腹腔给予小剂量RS后，对毛细血管通透性增高的抑制作用，证明小剂量RS在吸收发挥全身作用之前，即可在局部发挥明显的抗炎作用。RS对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响实验进一步证明了小剂量局部用药亦可抑制慢性炎症过程中肉芽组织的形成。
根据以上实验结果，鞣酸小檗碱局部的药物浓度达到0.20mg/ml，即可对急性炎症渗出及慢性炎症的增生产生明显的抑制。
口腔含片给药，局部药物浓度与唾液分泌量存在密切关系。唾液分泌分为静态唾液分泌和动态唾液分泌，分别以静态唾液总流率及动态唾液总流率表示赵竹陶，王松灵，朱宣智唾液量的检测.中华口腔医学杂志1998；33(5)317。唾液静态分泌量不多于0.6g/min(按比重为1计算，即0.6ml/min)，动态分泌量(酸刺激或咀嚼胶姆)不高于3g/min(约3ml/min)。
含服片剂时有一定刺激唾液分泌的作用，按动态唾液量计算，含服时间预计20-30min(按30min计)，唾液分泌量约90ml(3×30)。含服鞣酸小檗碱时唾液中的浓度要达到0.2mg/ml的有效浓度，30min含服药物的量约为20mg(90×0.2)。因此，鞣酸小檗碱口含片设计规格不小于20mg/片，即可达到有效的治疗浓度。
试验3 鞣酸小檗碱抗慢性咽炎动物模型试验研究1、材料与方法动物新西兰家兔，体重2.0-2.2kg，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字200106001氨水(浓度25％～28％，烟台三和化学试剂有限公司，批号020907)；松节油(浓度25％～28％，广州市新港化工厂，批号010903)。
大佛喉露喷雾器(以下简称喷雾器 香港美加康医药保健公司)；喉头喷雾器(上海市嘉定区医疗设备厂)；日立H-600透射电镜；CC-180型电子血球计数仪(日本制造)；多用光学显微镜、医用额镜、婴儿秤、扁桃体注射针、自制兔开口器、压舌板等。
2、试验方法采用“慢性咽炎动物模型研究”中的方法，见[彭顺林等，慢性咽炎动物模型研究，成都中医药大学学报，1999，22(1)51]将40只家兔随机分为造模组、自然恢复组、鞣酸小檗碱组和空白对照组4组，具体操作如下。
(1)造模组10只，第1～15天上、下午各用2.5％氨水喷其咽部1次，每次用喷雾器喷3揿。第8日，用扁桃体注射针将0.5ml松节油注射于家兔咽部粘膜下。第16日股动脉放血处死动物后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
(2)自然恢复组10只，咽部喷氨水及松节油注射同造模组。第16～25日让其自然恢复，第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
(3)鞣酸小檗碱组10只，咽部喷氨水及松节油注射同造模组。第16～25日用喉头喷雾器给家兔咽部喷鞣酸小檗碱含片粉末(用蒸馏水配成混悬液，根据人与家兔体表系数折算)，第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
(4)空白对照组10只，第1～15日用蒸馏水(与造模组同体积)喷咽部，第16～25用蒸馏水喷咽都，第26日处死。
3、观察指标3.1客观指标 将家兔咽部粘膜及其下组织切片作病理形态学观察。
3.1辅助指标 实验每日观察记录各组动物外观状态，每2日观察1次动物咽部情况，包括粘膜形态、色泽及分泌物等。
4、试验结果4.1一般状态从造模第3日开始，造模组大部分家兔逐渐出现搔抓口部，频饮水而量不多，口腔分泌物增多，精神疲乏，纳食减少，自发活动减少，咽部充血呈暗红色、微肿胀等症状与体征；造模第15天症状较明显。空白对照组则未出现上述情况；鞣酸小檗碱治疗10天后，上述症状体征基本恢复正常；自然恢复组在第25天(造模后10天)上述症状体征仍然存在。
4.2咽部病理学观察模型组家兔咽部呈慢性充血状态，暗红色，光泽度欠佳，粘液性分泌物增多。粘膜上皮呈钉突状增生，固有膜不同程度肿胀，血管增生、数量增多，可见明显炎细胞浸润，以淋巴细胞和单核细胞为主，粘膜下层淋巴细胞、组织细胞和纤维母细胞增生，浆液腺粘液化等改变。
自然恢复组肉眼观察动物咽部组织呈慢性充血、暗红色，光泽度欠佳。光镜观察大多数实验动物咽部组织粘膜上皮仍有轻度增生，固有膜仍见轻、中度充血肿胀，血管数量增多血管扩张瘀血，炎细胞浸润存在(以淋巴细胞和单核细胞为主)，少部分动物粘膜固有层内仍有纤维组织增生现象，总体上较模型组病变为轻。
鞣酸小檗碱治疗后病变得以纠正，病理观察炎症改变明显恢复。肉眼观察显示动物咽部组织基本接近正常，但仍有部分动物可见轻度慢性充血，粘膜光泽度欠佳，分泌物较多。光镜观察，动物咽部粘膜层虽存在一定病变，但程度明显轻于模型组。咽部组织上皮增生较轻，固有层内充血轻，炎细胞(以淋巴细胞和单核细胞多见)浸润轻，极少数动物固有层内有轻度纤维增生现象。
空白对照组肉眼观察显示咽部组织淡红色、湿润，表面光滑，未见充血、肿胀等病理现象。
以上实验结果表明，局部应用鞣酸小檗碱，可明显减轻慢性咽炎的炎症程度，即鞣酸小檗碱局部用药对慢性咽炎具有良好的治疗作用。
权利要求
1.鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其使用剂量范围为50mg-2400mg。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于其使用剂量优选为200-400mg。
4.含有权利要求1-3任一所述鞣酸小檗碱的药物组合物，可以是口含片、片、胶囊或颗粒剂。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其优选为口含片。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，口含片含有鞣酸小檗碱、稀释剂、粘合剂和润滑剂，其比例为1-15∶90-96∶10-20∶0.5-1.5
7.据权利要求6所述的药物组合物，含片还可以含有矫味剂，薄荷脑为矫味剂时其占含片重量的0.3-0.7％。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，薄荷脑为矫味剂时优选占含片重量的0.5％。
9.根据权利要求5-7所述的任一组合物，其中稀释剂选自乳糖、糖粉、甘露醇、糊精或麦芽糖糊精中的一种或几种；粘合剂选自聚维酮K30乙醇溶液、羟丙甲基纤维素、明胶、单糖浆或卡波姆中的一种或几种；润滑剂为硬脂酸镁。
10.根据权利要求4-7任一所述的药物组合物，单元剂量为50-400mg。
全文摘要
本发明提供了鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。本发明还提供了含有鞣酸小檗碱的用于急慢性咽炎的药物组合物，该药物组合物可以以片、胶囊、颗料等形式存在，优选以口含片的形式存在。本发明提供的口含片对急慢性咽炎效果非常好。
文档编号A61K31/4353GK1572297SQ20041004862
公开日2005年2月2日 申请日期2004年6月3日 优先权日2003年6月7日
发明者蒋王林, 王超云, 田京伟, 王振华, 傅风华 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司
技术领域：
本发明涉及鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。
背景技术：
鞣酸小檗碱又名无味黄连素，临床主要用于敏感病原菌所致的胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染，又文献报道鞣酸小檗碱具有治疗宫颈糜烂的作用，见[李冬平，焦鲁霞，李亚里，等.鞣酸小檗碱膜治疗宫颈糜烂80例的疗效.人民军医.1996，228]。本发明人通过大量试验惊奇地发现鞣酸小檗碱具有治疗急慢性咽炎的作用。
发明内容
本发明提供了鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。
本发明提供了用于急慢性咽炎的鞣酸小檗碱含片。
本发明提供了鞣酸小檗碱含片的制备方法。
本发明人通过试验进一步证明了鞣酸小檗碱对急慢性咽炎的治疗作用，见试验例。在试验例中鞣酸小檗碱简称为RS。
鞣酸小檗碱用于急慢性咽炎的应用剂量范围是50-2400mg，优选为200-400mg。
本发明提供的鞣酸小檗碱含片含有鞣酸小糪碱、稀释剂、粘合剂和润滑剂，其中鞣酸小檗碱∶稀释剂∶粘合剂∶润滑剂的比例为1-15∶90-96∶10-20∶0.5-1.5。
稀释剂选自乳糖、糖粉、甘露醇、糊精或麦芽糖糊精中的一种或几种；粘合剂选自聚维酮K30乙醇溶液、羟丙甲基纤维素、明胶、单糖浆或卡波姆中的一种或几种；润滑剂为硬脂酸镁。
本发明所述的鞣酸小檗碱含片的制备方法如下将处方量鞣酸小檗碱过100目(下同)筛，加入麦芽糖糊精混匀、过筛，加入甘露醇混匀、过筛，加入剩余量麦芽糖糊精、甘露醇混匀、过筛，加入处方量糖粉混匀、过筛，得混合粉；处方量冰片溶于无水乙醇中，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以2％PVPK3075％乙醇水溶液作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约800mg/片，还可以外包薄膜衣或糖衣，其使用方法为口腔含化，1-8片/日。
本发明含片的配方中还可以含有矫味剂，矫味剂优选为薄荷脑，本发明人经过大量的试验研究，结果见表1，发现薄荷脑占含片重量的0.3-0.7％为宜，优选为0.5％。
表1.薄荷脑的用量对口感的影响薄荷脑的用量口感0.25％ 无清凉效果0.5％ 口感清凉0.75％ 口感清凉，略麻具体实施方式
制备例1制备小檗碱含片将鞣酸小糪碱50g过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入甘露醇100g混匀、过筛，加入麦芽糖糊精100混匀、过筛，加入500g糖粉混匀、过筛，得混合粉；将适量(含片重量的0.5％)薄荷脑溶于140ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以100ml 60％糖浆作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入含片重量0.5％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，得1000片，片重约0.8g/片。
制备例2制备含片将50g鞣酸小糪碱过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入100g甘露醇混匀、过筛，加入150g麦芽糖糊精、150g甘露醇混匀、过筛，加入100g乳糖、200g糖粉混匀、过筛，得混合粉；2.38g冰片、5％重的薄荷脑溶于170ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以1％HPMC溶液120ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入含片0.5％重的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。
常规包制薄膜衣。
制备例3制备含片将50g鞣酸小糪碱过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入100g甘露醇混匀、过筛，加入100g麦芽糖糊精、150g甘露醇混匀、过筛，加入350g乳糖混匀、过筛，得混合粉；2.38g冰片、片重0.6％的薄荷脑溶于170ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以5％明胶溶液120ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入片重0.5％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。常规包制薄膜衣。
制备例4制备含片将鞣酸小糪碱50g过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入甘露醇100g混匀、过筛，加入100g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入545g糖粉混匀、过筛，得混合粉；片重0.5％的薄荷脑溶于140ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以60％糖浆100ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入片重1.0％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。
制备例5制备含片将鞣酸小糪碱200g过100目(下同)筛，加入50g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入100g甘露醇混匀、过筛，加入100g麦芽糖糊精混匀、过筛，加入350g糖粉混匀、过筛，得混合粉；片重0.5％的薄荷脑溶于140ml无水乙醇，加入混合粉中，混合均匀，60℃烘箱干燥1小时，以60％糖浆100ml作粘合剂，制适宜软材，18目筛制粒，60℃烘箱干燥2小时，16目尼龙筛整粒，加入片重1.5％的硬脂酸镁，混匀，椭圆形异型冲压片，片重约0.8g/片。
试验1 RS对毛细血管通透性影响试验1.材料乙酸，天津化学试剂厂，批号990727，含量＞99.5％)；鞣酸小檗碱，四川玉鑫制药厂，批号020405；离心机DL-4000B冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；分光光度计UV-9100，北京瑞利科学仪器厂；电子天平sartious BPs210 0.1mg德国；2.动物二级昆明种小白鼠，雌雄各半，体重22-24g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字20010603。
取小鼠50只，雄性，随机分为5组。生理盐水组每只小鼠静脉注射0.5％伊文思蓝溶液，注射剂量0.10ml/10g，随即腹腔注射0.8％的醋酸0.20ml与生理盐水0.20ml，10分钟后再腹腔注射生理盐水0.20ml，10分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，分两次(3ml，3ml)洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，15min)，于590nm测定吸收值。RS组(低、中、高三个剂量组均给予远低于口服给药剂量的鞣酸小檗碱，浓度分别为0.1、0.2、0.4mg/ml)每只小鼠静脉注射0.5％伊文思蓝溶液，注射剂量0.10ml/10g，随即腹腔注射0.8％的醋酸0.20ml与低浓度的RS溶液，10分钟后再腹腔注射等量同浓度RS溶液，再10分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，分两次(3ml，3ml)洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，15min)，于590nm测定吸收值。阳性对照(口服双氯芬酸钠)组每只小鼠灌服1.5mg/ml双氯芬酸钠溶液，60分钟后腹腔注射0.8％的醋酸0.20ml与生理盐水0.20ml，10分钟后再腹腔注射生理盐水0.20ml，再10分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，分两次(3ml，3ml)洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，15min)，于590nm波长处测定吸收值。
结果显示(表2)，口服双氯芬酸钠可明显减少毛细血管内体液的渗出。低浓度小剂量RS对毛细血管通透性有一定的抑制作用；RS高剂量组与生理盐水组比较，腹腔洗液的的吸光度值明显降低(P＜0.01)；RS中剂量组与生理盐水组比较，腹腔洗液的的吸光度值明显降低(P＜0.05)。表明RS可减少血管内体液的渗出，说明低浓度RS局部给药对小鼠毛细血管通透性有明显的抑制作用。
表2 低浓度RS对毛细血管通透性影响组别 浓度 剂量 吸收度生理盐水组 ------ 0.195±0.032阳性对照组 1.5mg/ml 15mg/kg 0.112±0.029**RS小剂量组 0.1mg/ml 2mg/kg0.171±0.033RS中剂量组 0.2mg/ml 4mg/kg0.146±0.023*RS高剂量组 0.4mg/ml 8mg/kg0.125±0.043****P＜0.01，*P＜0.05，与生理盐水组比较。
试验2 RS对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响1.材料鞣酸小檗碱，四川玉鑫制药厂，批号020405；电子天平sartious BPs210 0.1mg德国；2.动物SD大鼠，体重150-180g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字20010602；大鼠随机分为5组，雄性，(生理盐水组，阳性药组，RS大、中、小剂量组)，每组10只，乙醚麻醉，肩胛部皮肤碘酊消毒，酒精脱碘，肩胛间切一1cm的切口，止血钳钝性分离两侧皮肤与皮下组织，切口两侧皮下各植入消毒棉球一个(重20mg左右)，缝合切口。手术当日开始给药。阳性对照组双氯芬酸钠每日腹腔注射给药一次，给药剂量8.8mg/kg，给药体积0.5ml/100g)；生理盐水组及RS给药组(鞣酸小檗碱小剂量组、中剂量组、高剂量组的给药体积相同，浓度分别为0.20、0.40、0.60mg/ml)每日剂量均分三次早、中、晚给药(切口处注药)，每次给药体积0.4ml/100g。一周后脱臼处死，取出棉球，剔除脂肪组织，70℃烘12小时，称重，减去棉球原重，即为肉芽肿重量。
结果显示(表3)，双氯芬酸钠腹腔注射给药可明显抑制棉球肉芽肿的形成；RS局部给药对棉球肉芽肿的形成亦有明显的抑制作用。
表3 RS对大鼠棉球肉芽肿形成的影响组别 浓度(mg/ml)剂量(mg/kg) 肉芽肿重(mg)生理盐水组----- ----- 42.2±12.5双氯芬酸钠组 1.76 8.827.6±6.8*RS小剂量组0.20 2.428.2±6.9**RS中剂量组0.40 4.827.8±7.0**RS高剂量组0.60 7.226.0±5.2****P＜0.01，*P＜0.05，与生理盐水组比较。
本研究对经典的抗炎试验方法进行一定的改进，观察了鞣酸小檗碱局部低浓度小剂量给药的抗炎作用，更符合口腔局部用药的实际情况。在毛细血管通透性增高实验中，将腹腔粘膜作为实验界面，观察了腹腔给予小剂量RS后，对毛细血管通透性增高的抑制作用，证明小剂量RS在吸收发挥全身作用之前，即可在局部发挥明显的抗炎作用。RS对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响实验进一步证明了小剂量局部用药亦可抑制慢性炎症过程中肉芽组织的形成。
根据以上实验结果，鞣酸小檗碱局部的药物浓度达到0.20mg/ml，即可对急性炎症渗出及慢性炎症的增生产生明显的抑制。
口腔含片给药，局部药物浓度与唾液分泌量存在密切关系。唾液分泌分为静态唾液分泌和动态唾液分泌，分别以静态唾液总流率及动态唾液总流率表示赵竹陶，王松灵，朱宣智唾液量的检测.中华口腔医学杂志1998；33(5)317。唾液静态分泌量不多于0.6g/min(按比重为1计算，即0.6ml/min)，动态分泌量(酸刺激或咀嚼胶姆)不高于3g/min(约3ml/min)。
含服片剂时有一定刺激唾液分泌的作用，按动态唾液量计算，含服时间预计20-30min(按30min计)，唾液分泌量约90ml(3×30)。含服鞣酸小檗碱时唾液中的浓度要达到0.2mg/ml的有效浓度，30min含服药物的量约为20mg(90×0.2)。因此，鞣酸小檗碱口含片设计规格不小于20mg/片，即可达到有效的治疗浓度。
试验3 鞣酸小檗碱抗慢性咽炎动物模型试验研究1、材料与方法动物新西兰家兔，体重2.0-2.2kg，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字200106001氨水(浓度25％～28％，烟台三和化学试剂有限公司，批号020907)；松节油(浓度25％～28％，广州市新港化工厂，批号010903)。
大佛喉露喷雾器(以下简称喷雾器 香港美加康医药保健公司)；喉头喷雾器(上海市嘉定区医疗设备厂)；日立H-600透射电镜；CC-180型电子血球计数仪(日本制造)；多用光学显微镜、医用额镜、婴儿秤、扁桃体注射针、自制兔开口器、压舌板等。
2、试验方法采用“慢性咽炎动物模型研究”中的方法，见[彭顺林等，慢性咽炎动物模型研究，成都中医药大学学报，1999，22(1)51]将40只家兔随机分为造模组、自然恢复组、鞣酸小檗碱组和空白对照组4组，具体操作如下。
(1)造模组10只，第1～15天上、下午各用2.5％氨水喷其咽部1次，每次用喷雾器喷3揿。第8日，用扁桃体注射针将0.5ml松节油注射于家兔咽部粘膜下。第16日股动脉放血处死动物后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
(2)自然恢复组10只，咽部喷氨水及松节油注射同造模组。第16～25日让其自然恢复，第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
(3)鞣酸小檗碱组10只，咽部喷氨水及松节油注射同造模组。第16～25日用喉头喷雾器给家兔咽部喷鞣酸小檗碱含片粉末(用蒸馏水配成混悬液，根据人与家兔体表系数折算)，第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
(4)空白对照组10只，第1～15日用蒸馏水(与造模组同体积)喷咽部，第16～25用蒸馏水喷咽都，第26日处死。
3、观察指标3.1客观指标 将家兔咽部粘膜及其下组织切片作病理形态学观察。
3.1辅助指标 实验每日观察记录各组动物外观状态，每2日观察1次动物咽部情况，包括粘膜形态、色泽及分泌物等。
4、试验结果4.1一般状态从造模第3日开始，造模组大部分家兔逐渐出现搔抓口部，频饮水而量不多，口腔分泌物增多，精神疲乏，纳食减少，自发活动减少，咽部充血呈暗红色、微肿胀等症状与体征；造模第15天症状较明显。空白对照组则未出现上述情况；鞣酸小檗碱治疗10天后，上述症状体征基本恢复正常；自然恢复组在第25天(造模后10天)上述症状体征仍然存在。
4.2咽部病理学观察模型组家兔咽部呈慢性充血状态，暗红色，光泽度欠佳，粘液性分泌物增多。粘膜上皮呈钉突状增生，固有膜不同程度肿胀，血管增生、数量增多，可见明显炎细胞浸润，以淋巴细胞和单核细胞为主，粘膜下层淋巴细胞、组织细胞和纤维母细胞增生，浆液腺粘液化等改变。
自然恢复组肉眼观察动物咽部组织呈慢性充血、暗红色，光泽度欠佳。光镜观察大多数实验动物咽部组织粘膜上皮仍有轻度增生，固有膜仍见轻、中度充血肿胀，血管数量增多血管扩张瘀血，炎细胞浸润存在(以淋巴细胞和单核细胞为主)，少部分动物粘膜固有层内仍有纤维组织增生现象，总体上较模型组病变为轻。
鞣酸小檗碱治疗后病变得以纠正，病理观察炎症改变明显恢复。肉眼观察显示动物咽部组织基本接近正常，但仍有部分动物可见轻度慢性充血，粘膜光泽度欠佳，分泌物较多。光镜观察，动物咽部粘膜层虽存在一定病变，但程度明显轻于模型组。咽部组织上皮增生较轻，固有层内充血轻，炎细胞(以淋巴细胞和单核细胞多见)浸润轻，极少数动物固有层内有轻度纤维增生现象。
空白对照组肉眼观察显示咽部组织淡红色、湿润，表面光滑，未见充血、肿胀等病理现象。
以上实验结果表明，局部应用鞣酸小檗碱，可明显减轻慢性咽炎的炎症程度，即鞣酸小檗碱局部用药对慢性咽炎具有良好的治疗作用。
权利要求
1.鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其使用剂量范围为50mg-2400mg。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于其使用剂量优选为200-400mg。
4.含有权利要求1-3任一所述鞣酸小檗碱的药物组合物，可以是口含片、片、胶囊或颗粒剂。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其优选为口含片。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，口含片含有鞣酸小檗碱、稀释剂、粘合剂和润滑剂，其比例为1-15∶90-96∶10-20∶0.5-1.5
7.据权利要求6所述的药物组合物，含片还可以含有矫味剂，薄荷脑为矫味剂时其占含片重量的0.3-0.7％。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，薄荷脑为矫味剂时优选占含片重量的0.5％。
9.根据权利要求5-7所述的任一组合物，其中稀释剂选自乳糖、糖粉、甘露醇、糊精或麦芽糖糊精中的一种或几种；粘合剂选自聚维酮K30乙醇溶液、羟丙甲基纤维素、明胶、单糖浆或卡波姆中的一种或几种；润滑剂为硬脂酸镁。
10.根据权利要求4-7任一所述的药物组合物，单元剂量为50-400mg。
全文摘要
本发明提供了鞣酸小檗碱在制备治疗急慢性咽炎的药物中的应用。本发明还提供了含有鞣酸小檗碱的用于急慢性咽炎的药物组合物，该药物组合物可以以片、胶囊、颗料等形式存在，优选以口含片的形式存在。本发明提供的口含片对急慢性咽炎效果非常好。
文档编号A61K31/4353GK1572297SQ20041004862
公开日2005年2月2日 申请日期2004年6月3日 优先权日2003年6月7日
发明者蒋王林, 王超云, 田京伟, 王振华, 傅风华 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司
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