假单胞菌属hzn6及其在降解尼古丁中的应用的制作方法
专利名称：假单胞菌属hzn6及其在降解尼古丁中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株新型高效尼古丁降解菌，特别涉及一株新型高效假单胞属尼古丁降解菌，即假单胞菌属HZN6及其应用。
背景技术：
尼古丁(nicotine)，俗称烟碱，是多种烟草中所特有的、最重要的生物碱，约占烟草干重的1%_2%，是影响烟叶品质的重要因素之一，同时也是烟叶和卷烟的主要有害成分之
一。尼古丁的分子式为CltlH14N2，结构式如式(I )所示。
权利要求
1.假单胞菌属HZN6(Pseudomonas sp. HZN6),保藏于中国典型培养物保藏中心，地址湖北省武汉市珞珈山武汉大学，保藏日期为2010年8月9日，保藏编号为CCTCCNo:M2010196o
2.如权利要求I所述的假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用。
3.如权利要求2所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的应用为以尼古丁为底物，以无机盐培养液为反应介质，以假单胞菌属HZN6为降解菌，在25 45°C、pH值为5. 5^9. 0的条件下反应8 15h使反应液中尼古丁的质量含量小于0. 1%，达到降解尼古丁的目的。
4.如权利要求2所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的应用为将无机盐培养液与尼古丁混合，使尼古丁终浓度为10(T3000mg/L，再加入含假单胞菌属HZN6的细胞悬液构成反应体系，在25 45°C、pH值为5. 5^9. 0的条件黑暗振荡培养至反应液中尼古丁的质量残留量小于0. 1% ;所述含假单胞菌属HZN6的细胞悬液加入量使反应 体系中假单胞菌属HZN6终浓度为I X 1(T5 X IO9个/ml。
5.如权利要求3所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的含假单胞菌属HZN6的细胞悬液的制备方法为 (1)斜面培养将假单胞菌属HZN6接种于斜面培养基，25 45°C培养5 7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基的终浓度组成为酵母粉10g/L，蛋白胨5. Og/L，氯化钠10. Og/L，琼脂糖2. Og/L，溶剂为水； (2)种子培养从步骤(I)菌体斜面上挑取一接种环菌体接种至无机盐培养基中，.25 45°C培养5 7天，获得种子液；所述无机盐培养基终浓度组成为每升培养液中含有NaCl lg，K2HPO4 I. 5g，KH2PO4 0. 5g，(NH4) 2S041. 5g，MgSO4 0. lg，Iml 微量元素溶液，溶剂为水，自然PH值，121°C高压蒸汽灭菌20min后制得，其中每升微量元素溶液中含MnSO4 H2O.0.13g, ZnCl2 0. 23g, CuSO4 H2O 0. 03g, CoCl2 6H20 0. 42g, Na2Mo04 2H20 0. 15g,AlCl3 6H20 0. 05g，溶剂为水； (3)扩大培养将步骤(2)获得的种子液以体积浓度1(T20%的接种量接种至LB液体培养基中，300C、150rpm振荡养至对数生长期，获得菌液，将菌液离心，弃上清，沉淀用pH值为.7.0的磷酸缓冲液悬浮，获得含假单胞菌属HZN6的细胞悬液；所述LB液体培养基终浓度组成为每升培养中含有酵母粉10g，蛋白胨5. 0g，氯化钠10. 0g，溶剂为水，自然pH值。
6.如权利要求5所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的应用为将无机盐培养液与尼古丁混合制成混合液，使尼古丁终浓度为200mg/L，再加入含假单胞菌属HZN6的细胞悬液构成反应体系，在30°C、pH7. 0、150rpm条件下黑暗振荡培养8h，使反应液中尼古丁的质量残留量小于0. 1%，达到降解尼古丁的目的；所述含假单胞菌属HZN6的细胞悬液的加入量使反应体系中假单胞菌属HZN6终浓度为I X IO7^XlO9个/ml。
全文摘要
本发明公开了一种假单胞菌属HZN6(Pseudomonas sp.HZN6)及其在降解尼古丁中的应用，所述应用是以尼古丁为底物，以无机盐培养液为反应介质，以假单胞菌属HZN6为酶，在25~45℃、pH值为5.5~9.0的条件下反应8~15h使反应液中尼古丁的质量含量小于0.1%，达到降解尼古丁的目的；本发明所述假单胞菌属HZN6可通过直接投加的方式应用于水体和土壤中尼古丁的降解，能安全、高效、快速的降解水体、土壤等物体上残留的尼古丁，含有该菌株的菌剂制备工艺简单，成本低廉，使用方便，具有很好的应用前景。
文档编号A62D3/02GK102796681SQ201210272570
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月1日 优先权日2012年8月1日
发明者马云, 邱吉国, 刘学虎, 魏银 申请人:浙江工业大学
技术领域：
本发明涉及一株新型高效尼古丁降解菌，特别涉及一株新型高效假单胞属尼古丁降解菌，即假单胞菌属HZN6及其应用。
背景技术：
尼古丁(nicotine)，俗称烟碱，是多种烟草中所特有的、最重要的生物碱，约占烟草干重的1%_2%，是影响烟叶品质的重要因素之一，同时也是烟叶和卷烟的主要有害成分之
一。尼古丁的分子式为CltlH14N2，结构式如式(I )所示。
权利要求
1.假单胞菌属HZN6(Pseudomonas sp. HZN6),保藏于中国典型培养物保藏中心，地址湖北省武汉市珞珈山武汉大学，保藏日期为2010年8月9日，保藏编号为CCTCCNo:M2010196o
2.如权利要求I所述的假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用。
3.如权利要求2所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的应用为以尼古丁为底物，以无机盐培养液为反应介质，以假单胞菌属HZN6为降解菌，在25 45°C、pH值为5. 5^9. 0的条件下反应8 15h使反应液中尼古丁的质量含量小于0. 1%，达到降解尼古丁的目的。
4.如权利要求2所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的应用为将无机盐培养液与尼古丁混合，使尼古丁终浓度为10(T3000mg/L，再加入含假单胞菌属HZN6的细胞悬液构成反应体系，在25 45°C、pH值为5. 5^9. 0的条件黑暗振荡培养至反应液中尼古丁的质量残留量小于0. 1% ;所述含假单胞菌属HZN6的细胞悬液加入量使反应 体系中假单胞菌属HZN6终浓度为I X 1(T5 X IO9个/ml。
5.如权利要求3所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的含假单胞菌属HZN6的细胞悬液的制备方法为 (1)斜面培养将假单胞菌属HZN6接种于斜面培养基，25 45°C培养5 7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基的终浓度组成为酵母粉10g/L，蛋白胨5. Og/L，氯化钠10. Og/L，琼脂糖2. Og/L，溶剂为水； (2)种子培养从步骤(I)菌体斜面上挑取一接种环菌体接种至无机盐培养基中，.25 45°C培养5 7天，获得种子液；所述无机盐培养基终浓度组成为每升培养液中含有NaCl lg，K2HPO4 I. 5g，KH2PO4 0. 5g，(NH4) 2S041. 5g，MgSO4 0. lg，Iml 微量元素溶液，溶剂为水，自然PH值，121°C高压蒸汽灭菌20min后制得，其中每升微量元素溶液中含MnSO4 H2O.0.13g, ZnCl2 0. 23g, CuSO4 H2O 0. 03g, CoCl2 6H20 0. 42g, Na2Mo04 2H20 0. 15g,AlCl3 6H20 0. 05g，溶剂为水； (3)扩大培养将步骤(2)获得的种子液以体积浓度1(T20%的接种量接种至LB液体培养基中，300C、150rpm振荡养至对数生长期，获得菌液，将菌液离心，弃上清，沉淀用pH值为.7.0的磷酸缓冲液悬浮，获得含假单胞菌属HZN6的细胞悬液；所述LB液体培养基终浓度组成为每升培养中含有酵母粉10g，蛋白胨5. 0g，氯化钠10. 0g，溶剂为水，自然pH值。
6.如权利要求5所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用，其特征在于所述的应用为将无机盐培养液与尼古丁混合制成混合液，使尼古丁终浓度为200mg/L，再加入含假单胞菌属HZN6的细胞悬液构成反应体系，在30°C、pH7. 0、150rpm条件下黑暗振荡培养8h，使反应液中尼古丁的质量残留量小于0. 1%，达到降解尼古丁的目的；所述含假单胞菌属HZN6的细胞悬液的加入量使反应体系中假单胞菌属HZN6终浓度为I X IO7^XlO9个/ml。
全文摘要
本发明公开了一种假单胞菌属HZN6(Pseudomonas sp.HZN6)及其在降解尼古丁中的应用，所述应用是以尼古丁为底物，以无机盐培养液为反应介质，以假单胞菌属HZN6为酶，在25~45℃、pH值为5.5~9.0的条件下反应8~15h使反应液中尼古丁的质量含量小于0.1%，达到降解尼古丁的目的；本发明所述假单胞菌属HZN6可通过直接投加的方式应用于水体和土壤中尼古丁的降解，能安全、高效、快速的降解水体、土壤等物体上残留的尼古丁，含有该菌株的菌剂制备工艺简单，成本低廉，使用方便，具有很好的应用前景。
文档编号A62D3/02GK102796681SQ201210272570
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月1日 优先权日2012年8月1日
发明者马云, 邱吉国, 刘学虎, 魏银 申请人:浙江工业大学
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