一种治疗肾病的药物组合物及该组合物的制备方法

专利名称：：一种治疗肾病的药物组合物及该组合物的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗肾病的药物组合物及该组合物的制备方法，特别涉及一种用于治疗各种原因引起的肾小球及肾小管间质病变慢性肾小球肾炎，IgA肾病，肾病综合征，慢性肾功能不全，早期氮质血症的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
：慢性肾小球疾病是一种对人类健康危害极大的临床常见病和难治病。在我国约有半数以上慢性肾功能衰竭患者，原发病为慢性肾小球疾病。蛋白尿是慢性肾小球疾病最显著的临床特点，持续性的蛋白尿预后不良，常增加肾病患者的死亡率，是实质性肾疾病严重程度的反应。目前西医对此类疾病多采用较长时间激素和细胞毒免疫抑制剂治疗，由于存在着较大的毒副作用，用药时间较长及许多基础疾病(如糖尿病肾病)等因素都限制了这些药物在临床上的使用，同时相当数量的患者对这种疗法并不敏感，这促使我们从中医中药上寻找新的治疗途径。中医中药在慢性肾炎的治疗上有较好的疗效，已经得到医学界的共识。特别是慢性肾炎病程较长，可能涉及到多个作用机制。中药复方配伍从多系统、多靶点治疗肾脏病，发挥了现代医学不可替代的优势。近年来临床以单、验方结合辩证施治治疗蛋白尿的报道较多，但是有效地治疗慢性肾炎减少尿蛋白的中成药却还未发现。很多时候，临床医生苦于没有合适的中药成药给病人服用。在长期的临床实践中，我们逐步摸索总结出了由柴胡、黄芪等七味中药组成的药物组合物，该方对治疗慢性肾小球及肾小管间质病变，减少尿蛋白排泄有良好的作用。在与洛丁新治疗组的对比研究中，31例初步的临床观察结果表明，总有效率为80.32％(洛丁新治疗组为60.6％)，因而我们认为该方应该具有良好的开发前景。因此，我们对其进行了全面的药效学研究、毒理学研究和药学研究。经过查新表明，国内外研制的用于治疗肾小球及肾小管间质病变的中药配方中，均未见以柴胡、黄芪、当归、穿山龙、水蛭五味中药为处方制成药物制剂的研究报道。
发明内容本发明的一个目的在于公开一种具有益气活血，清热利湿作用，用于治疗各种原因引起的肾小球及肾小管间质病变慢性肾小球肾炎，IgA肾病，肾病综合症，慢性肾功能不全，早期氮质血症等疾病的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开上述中药组合物的制备方法。本发明的目的是这样实现的，根据中医药学及脏医药学理论，利用草药独特的药性，采用柴胡、黄芪、当归、穿山龙、水蛭按照配伍要求，经过常规工艺加工而成。本发明配方与生产工艺简单，服用方便，疗效显著，市场广阔，其推广应用必为人们身体健康做出突出贡献，创造优异的社会与经济效益。本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)黄芪450～550重量份、当归200～300重量份、穿山龙320～420重量份、柴胡200～300重量份、水蛭60～90重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选配比为(按重量份)黄芪503重量份、当归252重量份、穿山龙377重量份、柴胡252重量份、水蛭76重量份。本药物组合物的制备方法在疗效范围内，对本发明的药物组合物制备方法进行正交实验分析主要参数指标穿山龙、柴胡、当归，用40～95％乙醇提取2～4次；黄芪、水蛭，水煎煮1～3次，最后确定最佳制备方法如下以上五味，当归、穿山龙、柴胡，用60％乙醇提取3次，浓缩得稠膏。黄芪、水蛭，水煎煮2次，滤液浓缩得稠膏。合并上述两个稠膏，干燥、粉碎，得干粉，制成丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂。本发明药物组合物用于治疗各种原因引起的肾小球及肾小管间质病变慢性肾小球肾炎，IgA肾病，肾病综合症，慢性肾功能不全，早期氮质血症等疾病。益气活血，清热利湿。下述实验例用于进一步说明本发明。实验例观察本发明组合提取物治疗肾小球及肾小管间质病变的疗效。一、本发明提取物对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)诱导的大鼠肾病综合征伴局灶节段性肾小球硬化的治疗作用观察实验材料动物动物wistar种大鼠，雄性，体重180~200g，II级动物。药物(1)受试药物本发明提取物蒸馏水溶解。(2)阳性对照药蒙诺片(福辛普利钠片)，片剂，规格10毫克/片，人日用量为10毫克，由中美上海施贵宝制药有限公司生产，批号0302086。试剂氨基核苷嘌啉霉素(PAN)购于Sigma公司，批号22K4061。仪器代谢笼苏州市冯氏实验动物设备有限公司722光栅分光光度计上海第三分析仪器厂全自动生化分析仪美国CD-1600滑走式切片机日本SAKURA共览显微镜日本OLYMPUS数码相机日本OLYMPUSCAMEDIAC-5050ZOOM实验方法1.分组与给药实验用大鼠60只，随机分为6组，每组10只，即假性手术对照组，模型对照组，蒙诺治疗组(0.833mg/kg，相当于人用剂量的5倍)，本发明提取物治疗组，分为小剂量组0.55g/kg，中剂量组1.1g/kg，大剂量组2.2g/kg，分别相当于人用剂量的5倍，10倍和20倍，假性手术对照组，模型对照组按1ml/100g体重从手术次日开始给生理盐水，以后每天一次，直至实验结束，蒙诺治疗组，本发明提取物治疗组，也均按上述实验设计剂量于手术次日开始给药，以后每天一次，直至实验结束，共观察23周。2.模型制作经颈静脉插管按5mg/100g鼠体重给造模药氨基核苷嘌呤霉素，制作大鼠肾病综合征伴局灶节段性肾小球硬化模型。假性手术组给予生理盐水，其余各组均按上述剂量给造模药。指标观察(1)尿蛋白检查分别于造模后第5、10、15、20、42(6周)、56(8周)、70(10周)、77(11周)、84(12周)、91(13周)、98(14周)、105(15周)、112(16周)、119(17周)、133(19周)、147(21周)、161(23周)天，将大鼠放入代谢笼内，禁食给水，取24小时尿，用双缩脲法测定24小时尿中蛋白排泄总量。(2)血清生化学检查分别于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(第23周)，眼眶取血，离心后取血清，用全自动血生化分析仪测定血清总蛋白、血清白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、血清尿素氮、血清肌酐等血清生化学指标。(3)病理组织学检查于造模后23周，处死大鼠时，取肾组织，用10％中性福尔马林溶液固定，乙醇脱水，石蜡包埋，切割制备2-3mm的组织薄片，进行PAS和Masson染色，光镜下观察肾组织病理学变化，并采用评分法对其进行半定量分析。(4)统计学方法所有计量资料以均数±标准差(X±SD)表示，组间差异比较采用独立样本t检验，由统计软件SPSS11.0完成。实验结果(一)本发明提取物对PAN诱导的慢性肾病大鼠24小时尿中蛋白排泄量的影响我们观察了造模后5、10、15、20、42(6周)、56(8周)、70(10周)、77(11周)、84(12周)、91(13周)、98(14周)、105(15周)、112(16周)、119(17周)、133(19周)、147(21周)、161(23周)天24小时尿中蛋白排泄量，结果见表1。表1本发明提取物对PAN诱导的慢性肾炎大鼠24小时尿中蛋白排泄总量的影响(mg/d，X±SD)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表1可见，在造模后20天内，模型组可见到大量的蛋白尿而本发明提取物三个剂量组均具有对大量蛋白尿的抑制作用，尤其是在第15天，三个剂量组均表现出对大量蛋白尿的明显抑制作用，与模型组比较，具有非常明显的统计学意义(P＜0.001)。在这个模型的第二时相，即是从第16周起到第23周，模型组动物尿蛋白再度上升，而本发明提取物三个剂量组均再次表现出对这种升高的抑制作用，并具有统计学意义(P＜0.05)。(二)本发明提取物对PAN诱导的慢性肾病大鼠血清总蛋白及血清白蛋白的影响分别于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(23周)，取大鼠血清测定血清总蛋白、血清白蛋白含量、观察本发明提取物对上述指标的影响，结果见表2。表2本发明提取物对PAN诱导的慢性肾炎大鼠血清蛋白的影响(g/dl，X±SD)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表2可见，在造模后第10天，也就是本模型的第一时相内，模型组动物由于尿中蛋白的大量丢失，血清总蛋白和白蛋白与假手术组(即正常组)相比均显著下降。而柴黄益肾组则显著提升了血清中总蛋白和白蛋白的含量(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。在相对缓解期(第7周)，也可看到相类似的作用(P＜0.05，P＜0.01)。在尿蛋白再度上升的阶段(第23周)，各给药组同样表现出了与模型组相比提升血清总蛋白和白蛋白的作用(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。(三)本发明提取物对PAN诱导的慢性肾病大鼠血清总胆固醇及血清甘油三酯的影响分别于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(第23周)，取大鼠血清测定血清总胆固醇及血清甘油三酯，观察本发明提取物对上述指标的影响，结果见表3。由表3可见，在造模后10天内，模型组动物表现出典型的肾病综合证症状，胆固醇和甘油三酯均较假手术组(正常组)明显上升，而本发明提取物各个剂量组均表现出对此两项指标的明显的抑制作用(P＜0.01，P＜0.001)。在相对缓解期(第7周)里，各组的这两项指标均没有明显差异，在尿蛋白再度上升的第二时相段里，由于长期的慢性疾病的消耗，模型组的胆固醇和甘油三酯都显著低于正常组(假手术组)，而本发明提取物各个剂量组均有提升这两项指标的作用，使其达到或接近正常组(假手术组)的水平。表3本发明提取物对PAN诱导的慢性肾炎大鼠血脂的影响(mg/dl，X±SD)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.(四)本发明提取物对PAN诱导的慢性肾炎大鼠肾功能的影响分别于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(23周)，取大鼠血清测定血清尿素氮及血清肌酐，观察本发明提取物对上述指标的影响，结果见表4。表4本发明提取物对PAN诱导的慢性肾炎大鼠肾功能的影响(mg/dl，X±SD)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表4可见，在造模后的十天内，模型组动物血清尿素氮有所上升，而本发明提取物中、大剂量组均有改善肾功能的作用(P＜0.01，P＜0.001)，在其他各个时段各组没有表现出显著性差异。(五)病理组织学结果我们将各试验组的病理组织学标本置于低倍镜下，每份标本随机观察5个肾小球、肾小管间质视野，对肾小管上皮细胞空泡变形、肾小管扩张、肾小管萎缩、肾间质水肿、间质纤维化、间质细胞浸润等6项病理学指标按照Radford建议的标准进行了半定量评分，结果见表5。表5本发明提取物对PAN诱导的慢性肾炎大鼠病理组织切片评分结果(X±SD)由表5可见，在上述六个方面，本发明各个剂量组与模型组比较，均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。实验动物病理检查报告实验项目本发明提取物对PAN诱导的大鼠慢性肾炎的药效学研究实验药物本发明提取物送检目的观察肾脏病理改变及其程度标本来源雄性Wistar大鼠送检脏器大鼠肾脏1.材料和方法1.1.所用仪器产地规格型号切片机日本SAKURA光学显微镜日本OLYMPUSBH-2自动照相生物显微镜日本OLYMPUSBH-2试剂甲醛溶液；乙醇；二甲苯；切片石蜡56～58℃；中性树胶。1.3实验动物分组与制片Wistar大鼠(雄性)60只，分为6组正常对照组，模型对照组，阳性药对照蒙诺片组，本发明提取物大剂量组、中剂量组、及小剂量组。每组10只。动物处死后，取肾脏固定于10％甲醛溶液(含甲醛4％)内，固定后取肾组织组织，经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，PAS染色、Masson染色，中性树胶封片，光学显微镜观察，照相。对各实验组的每份标本在低倍镜下单盲观察5个肾小球、肾小管间质视野，对以下6项病理指标进行半定量评分。现将肾小管、肾小管间质各类病变程度划分及病理分级标准列于下(1)肾小管上皮细胞空泡变性无变性0分轻度局灶节段变性1分中度节段或轻度弥漫变性2分广泛或弥漫中度以上变形3分(2)肾小管扩张无0分轻度(＜相应视野区域25％)1分中度(25-50％，相应肾小管变扁平)2分重度(＞50％，扩张肾小管直径超过肾小球直径)3分(3)肾小管萎缩无0分轻度(＜相应视野区域25％)1分中度(相应视野25-50％，)2分重度(＞相应视野50％，)3分(4)肾间质水肿无0分轻度(肾小管管腔相邻)1分中度(轻度弥漫或局灶中度小管分离)2分重度(肾小管重度分离)3分(5)间质纤维化无0分轻度(＜相应视野区域25％)1分中度(相应视野25-50％，)2分重度(＞相应视野50％，)3分(6)肾间质细胞浸润无0分轻度(轻度局灶细胞浸润)1分中度(轻度弥漫或局灶中度细胞浸润)2分重度(重度细胞浸润)3分结果2.1镜下观察结果正常对照组肾小球未见肿大、硬化，球囊间隙未见增宽，肾小管未见扩张、萎缩，肾间质未见明显淋巴细胞浸润，未见纤维化病变。模型对照组部分肾小球局灶节段硬化，球囊粘连，或球囊间隙增宽，系膜细胞增生，肾间质部分纤维化，单个核细胞浸润。部分肾小管上皮细胞脱落，可见管腔扩张或萎缩。部分视野下可见肾小管内蛋白管型。阳性药对照组部分肾小球局灶节段硬化，球囊粘连，系膜细胞轻度增生，肾间质纤维化明显减轻，单个核细胞轻度浸润。肾小管基本正常。本发明提取物大剂量组肾小球局灶节段硬化明显减轻，系膜细胞轻度增生，肾间质部分纤维化，炎细胞浸润明显减轻。部分肾小管可见管腔扩张或萎缩。本发明提取物中剂量组肾小球无局灶节段硬化，球囊间隙正常，系膜细胞无增生，肾间质无纤维化和炎细胞浸润。肾小管基本正常。本发明提取物小剂量组肾小球无局灶节段硬化，系膜细胞无增生，肾间质轻度纤维化和炎细胞浸润。部分肾小管管腔扩张或萎缩。病理组织学评分结果见表5。二、本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的大鼠慢性肾损害治疗作用观察实验材料1.动物SD大鼠，雄性，体重为170？90g药物(1)受试药物本发明提取物蒸馏水溶解。(2)阳性对照药蒙诺片(福辛普利钠片)，片剂，规格10毫克/片，人日用量为10毫克，由中美上海施贵宝制药有限公司生产，批号0302086。高蛋白饲料高蛋白饲料组成如下玉米17.6％豆粕33％次粉14％面粉14％草粉1％鱼粉15％酵母粉2％食盐0.4％石粉1％植物油1％添加剂1％4.仪器代谢笼苏州市冯氏实验动物设备有限公司722光栅分光光度计上海第三分析仪器厂全自动生化分析仪美国CD-1600滑走式切片机日本SAKURA共览显微镜日本OLYMPUS数码相机日本OLYMPUSCAMEDIAC-5050ZOOM实验方法1.分组与给药将SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只。①组为正常鼠，余组均造模①正常对照组按1ml/100g·d体重给蒸馏水②模型对照组按1ml/100g·d体重给蒸馏水③蒙诺组蒙诺片0.833mg/kg·d体重(相当于人用剂量的5倍)④小剂量组本发明0.55g/kg·d(相当于临床剂量5倍)⑤中剂量组本发明1.1g/kg·d(相当于临床剂量10倍)⑥大剂量组本发明2.2g/kg·d(相当于临床剂量20倍)正常对照组，模型对照组在造模后第5天起给蒸馏水，蒙诺治疗组，本发明提取物治疗组，按上述设计剂量同时灌胃给药，连续观察13周。2.饲养与观察1982年Brenner等指出肾小球滤过功能随食入蛋白质的量而变化。高蛋白饮食RPF及GFR均增加，而此高灌注、高滤过状态促进肾小球硬化。故本实验选择含30％蛋白质的饲料喂养，给药同时喂食高蛋白饲料。3.模型制作I期手术，大鼠经1％戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉。体外触及左侧肾脏，剪去局部3cm×3cm被毛。在触诊肾脏与脊柱之间沿与脊柱平行方向切开皮肤，切口1.5～2cm。逐层分离皮下筋膜及肌肉，于腹膜后仔细分离肾动脉，用手指追查至肾脏，检查无误后，结扎2/3肾动脉，逐层关闭肌肉、皮肤。间隔1周后，进行II期手术，以与I期手术相同的方法确认右肾后，结扎肾脏全部血管，摘除肾脏，建立大鼠慢性肾损害模型。指标观察(1)尿蛋白检查分别于造模后第3、5、7、9、11、13周，将大鼠转入代谢笼内，禁食给水，收集24小时尿液，用双缩脲法检测24小时尿中蛋白排泄总量，共6次。(2)血清生化学检查于造模后第13周，杀鼠腹主动脉取血，离心后取血清，用全自动血生化分析仪测定血清总蛋白、血清白蛋白、血清尿素氮、血清尿肌酐、总胆固醇、甘油三酯等血清生化学指标。(3)病理组织学检查于造模后13周，处死大鼠时，取肾组织，用10％中性福尔马林溶液固定，乙醇脱水，石蜡包埋，切割制备2-3mm的组织薄片，进行PAS和Masson染色，光镜下观察肾组织病理学变化。(4)统计学方法所有计量资料以均数±标准差(X±SD)表示，组间差异比较采用独立样本t检验，由统计软件SPSS11.0完成。实验结果(一)本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠24小时尿中蛋白排泄量的影响我们观察了造模后第3、5、7、9、11、13周24小时尿中蛋白排泄量，结果见表6。表6本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠24小时尿中蛋白排泄总量的影响(mg/d，X±SD，n＝10)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表可见，在造模后13周内，模型组有大量蛋白尿出现，且呈逐渐缓慢上升趋势，在第11周，蒙诺治疗组、本发明提取物大剂量组表现出对大量蛋白尿的明显抑制作用，与模型组比较，具有显著的统计学意义(P＜0.05)。在第13周，蒙诺治疗组、本发明提取物三个剂量组均表现出对大量蛋白尿的明显抑制作用，与模型组比较，具有显著的统计学意义(P＜0.05)，且有明显的量效关系。(二)本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠血清总蛋白及血清白蛋白的影响于造模后第13周，杀鼠取血清测定血清总蛋白、血清白蛋白含量、观察本发明提取物对上述指标的影响，结果见表7。表7本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠血清蛋白的影响(X±SD，n＝10)<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="643">组别剂量总蛋白定量(TPg/dl)白蛋白定量(ALBg/dl)A/G正常组5.89±0.27**3.14±0.10***1.15±0.07*模型组5.44±0.342.82±0.191.08±0.05蒙诺组0.833mg/kg5.70±0.342.86±0.231.01±0.09大剂量组2.20g/kg5.74±0.23*2.99±0.11*1.09±0.10中剂量组1.10g/kg5.90±0.40*2.94±0.161.00±0.09*小剂量组0.55g/kg5.70±0.12*2.90±0.071.04±0.06</table></tables>注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表7可见，在造模后13周内，模型组动物由于尿中蛋白的大量丢失，血清总蛋白和白蛋白与假手术组(即正常组)相比均显著下降。而本发明提取物大剂量组则显著提升了血清中总蛋白和白蛋白的含量(P＜0.05)。(三)本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠血清总胆固醇及血清甘油三酯的影响于造模后第13周，杀鼠取血清测定血清总胆固醇及血清甘油三酯，观察本发明提取物对上述指标的影响，结果见表8。表8本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠血脂的影响(mg/dl，X±SD，n＝10)<tablesid="table7"num="007"><tablewidth="650">组别剂量总胆固醇(CHO)甘油三脂(TG)正常组53.90±7.20**46.60±20.17*模型组89.90±37.7077.50±37.71蒙诺组0.833mg/kg60.40±8.40*56.70±27.70大剂量组2.20g/kg59.20±16.83*36.10±19.68**中剂量组1.10g/kg87.10±37.5945.10±26.17*小剂量组0.55g/kg82.40±27.9950.50±24.88</table></tables>注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表可见，在造模后13周内，模型组动物表现出典型的慢性肾损害症状，胆固醇和甘油三酯均较假手术组(正常组)明显上升，而本发明提取物大剂量组则表现出对此两项指标的明显的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，且有明显的量效线性关系。(四)本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠肾功能的影响于造模后第13周，杀鼠取血清测定血清尿素氮及血清肌酐，观察本发明提取物对上述指标的影响，结果见表9。表9本发明提取物对结扎5/6肾动脉诱导的慢性肾损害大鼠肾功能的影响(mg/dl，X±SD，n＝10)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表9可见，在造模后13周内，模型组动物血清尿素氮有所上升，而本发明提取物三个剂量组均有改善肾功能的作用，且有明显的量效关系。(五)病理组织学结果我们将各试验组的病理组织学标本置于低倍镜下，每份标本随机观察5个肾小管间质视野，对肾小管上皮细胞空泡变形、肾小管扩张、肾小管萎缩、肾间质水肿、间质纤维化、间质细胞浸润等6项病理学指标按照Radford评判系统进行了半定量评分；同时，每份标本随机观察20个肾小球，对肾小球系膜基质扩张按照Raij评判系统进行了半定量评分，结果见表10。表10本发明提取物对5/6肾动脉结扎诱导的慢性肾损害大鼠病理组织切片评分结果(X±SD，n＝10)由表10可见，在上述七个方面，本发明各个剂量组与模型组比较，均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。详细病理变化见所附病理报告书及照片。实验动物病理检查报告实验项目本发明提取物对5/6肾动脉结扎诱导的大鼠慢性肾损害的药效学研究实验药物本发明提取物送检目的观察肾脏病理改变及其程度标本来源雄性SD大鼠送检脏器大鼠肾脏1.材料和方法1.1.所用仪器产地规格型号切片机日本SAKURA光学显微镜日本OLYMPUSBH-2自动照相生物显微镜日本OLYMPUSBH-2试剂甲醛溶液；乙醇；二甲苯；切片石蜡56～58℃；中性树胶。1.3实验动物分组与制片SD大鼠(雄性)60只，分为6组正常对照组，模型组，阳性药对照蒙诺片组，本发明提取物大剂量组、中剂量组、及小剂量组。每组10只。动物处死后，取肾脏固定于10％甲醛溶液(含甲醛4％)内，固定后取肾组织，经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，PAS染色、Masson染色，中性树胶封片，光学显微镜观察，照相。对各实验组的每份标本在低倍镜下单盲观察5个肾小管间质视野，对以下6项病理指标进行半定量评分。现将肾小球、肾小管间质各类病变程度划分及病理分级标准列于下(1)肾小管上皮细胞空泡变性无变性0分轻度局灶节段变性1分中度节段或轻度弥漫变性2分广泛或弥漫中度以上变形3分(2)肾小管扩张无0分轻度(＜相应视野区域25％)1分中度(25-50％，相应肾小管变扁平)2分重度(＞50％，扩张肾小管直径超过肾小球直径)3分(3)肾小管萎缩无0分轻度(＜相应视野区域25％)1分中度(相应视野25-50％，)2分重度(＞相应视野50％，)3分(4)肾间质水肿无0分轻度(肾小管管腔相邻)1分中度(轻度弥漫或局灶中度小管分离)2分重度(肾小管重度分离)3分(5)间质纤维化无0分轻度(＜相应视野区域25％)1分中度(相应视野25-50％，)2分重度(＞相应视野50％，)3分(6)肾间质细胞浸润无0分轻度(轻度局灶细胞浸润)1分中度(轻度弥漫或局灶中度细胞浸润)2分重度(重度细胞浸润)3分对各实验组的每份标本在低倍镜下单盲观察20个肾小球视野，对其系膜基质扩张的病理指标进行半定量评分。现将肾小球病变程度划分及病理分级标准列于下肾小球系膜基质扩张无0每个肾小球系膜基质扩张面积0-25％+1每个肾小球系膜基质扩张面积25-50％+2每个肾小球系膜基质扩张面积50-75％+3每个肾小球系膜基质扩张面积75-100％+4每份标本评分规则[1×a/20+2×b/20+3×c/20]×100a＝‘+1’的个数b＝‘+2’的个数c＝‘+3’的个数结果2.1镜下观察结果正常对照组肾小球未见肿大、硬化，球囊间隙未见增宽，肾小管未见扩张、萎缩，肾间质未见明显淋巴细胞浸润，未见纤维化病变。模型组部分肾小球系膜基质扩张，局灶节段硬化，球囊粘连或球囊间隙增宽，部分视野下可见新月体或玻璃样变。肾间质部分纤维化，可见弥漫或局灶性炎细胞浸润。部分肾小管管腔扩张或萎缩，可见肾小管内蛋白管型。阳性药对照组肾小球系膜基质轻度扩张，局灶节段硬化减轻，球囊粘连或球囊间隙增宽。肾间质纤维化明显减轻，可见局灶性细胞浸润。肾小管基本正常。本发明提取物大剂量组肾小球无系膜基质扩张，球囊间隙正常。肾间质无纤维化和炎细胞浸润。肾小管基本正常。本发明提取物中剂量组肾小球无局灶节段硬化，系膜基质无扩张。肾间质轻度纤维化和炎细胞浸润。部分肾小管管腔扩张或萎缩。本发明提取物小剂量组肾小球系膜基质轻度扩张，局灶节段硬化明显减轻。肾间质部分纤维化，炎细胞浸润明显减轻。部分肾小管可见管腔扩张或萎缩。三、本发明提取物对水负荷大鼠利尿作用的观察实验材料动物Wistar大鼠，二级，雄性，体重为180？20g。药物(1)受试药物本发明提取物蒸馏水溶解。(2)阳性对照药氢氯噻嗪片，片剂，规格25毫克/片，人日用量为100毫克，由天津力生制药股份有限公司生产，批号0308007。方法与结果1.筛选代谢笼试验方法，新进大鼠预先使适应代谢笼环境1～2日，观察自由饮水条件下尿量是否稳定。实验前18h禁食不禁水，用药前按体重灌以去离子水(蒸馏水)2.5mL/100g，使实验动物体内水平衡。收集2h尿液，凡尿量超过40％水负荷者，可继续进行正式实验。2.分组与给药取筛选合格大鼠60只，随机分为正常对照组，模型对照组，氢氯噻嗪治疗组(50mg/kg，相当于人用剂量的30倍)，本发明提取物治疗组，随即分为小剂量组0.55g/kg，中剂量组1.1g/kg和大剂量组2.2g/kg，分别相当于临床有效剂量的5倍，10倍和20倍，每组10只。正常对照组，模型对照组，氢氯噻嗪治疗组按1ml/100g体重在实验前8天开始给常水，以后每天一次，直至实验结束。本发明提取物治疗组，按上述实验设计剂量在实验前8天开始给药，以后每天一次，直至实验结束。3.模型制作及指标观察模型对照组，本发明提取物治疗组，以常水配制成1％NaCl溶液，按5ml/100g体重灌胃。这种浓度的NaCl溶液可使细胞外液增加，模拟水钠滞留状态。氢氯噻嗪治疗组，以1％NaCl溶液溶解的氢氯噻嗪(浓度1g/L，剂量5ml/100g)灌胃。正常对照组，以5ml/100g体重常水灌胃。然后压迫大鼠下腹，使膀胱内余尿排尽，置代谢笼内，收集1h、3h、5h、7h的排尿量，各组之间各时间排尿量及总排尿量均用t检验处理。4.结果见表11。表11本发明提取物对水负荷大鼠排尿量的影响(ml，x±s)(n＝10)注与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表可见，本发明提取物治疗组在3、5、7h等时段里，均表现出显著的“利尿”作用，且有一定量效关系，从总排尿量观察，该药也具有显著的“利尿”作用，有明显的统计学意义(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。小结通过上述实验说明，本发明组合提取物具能有效减少蛋白尿的排泄，使血浆白蛋白升高，降低血脂，有效地保护肾功能，减轻肾组织的病理损害，对慢性肾小球及肾小管间质病变有良好的治疗作用。为临床用于治疗肾小球及肾小管间质病变提供了理论依据。四、观察本发明颗粒剂治疗慢性肾小球肾炎的疗效1.病例选择凡临床表现符合中国中医药学会内科肾脏病专业委员会慢性肾炎诊断标准，排除了急性感染后肾小球肾炎、过敏性紫癜、狼疮性肾炎等继发性肾小球疾病的可能性；且参照慢性肾炎中医辨证标准，符合气虚血淤证者51例纳入受试对象。2.治疗方法观察病例随机分2组，本发明颗粒剂治疗组(简称治疗组)31例，其中男22例，女9例；年龄16-82岁，平均40.53±15.4岁；病程2-15年。临床表现为单纯蛋白尿20例，蛋白尿兼镜下血尿11例。16例具有病理诊断结果，其中轻微病变8例，IgA肾病4例，特发性局灶节段性肾炎4例。西药治疗对照组(简称对照组)21例，其中男15例，女6例；年龄18-55岁，平均年龄33.21±12.3岁；病程1.5-9年。临床表现为单纯蛋白尿11例，蛋白尿兼镜下血尿10例。11例有病理诊断结果，其中轻微病变5例，IgA肾病3例，特发性局灶节段性肾炎3例。2组性别、年龄、病程、病情差异均无显著性意义，具有可比性。对照组使用洛丁新，每次10mg，每天1次口服。此外，积极预防和治疗感染，避免用损害肾脏的药物。治疗组患者停用西药，口服本发明颗粒剂，每天2次，每次约8g。3.疗效标准与治疗结果参照中国中医药学会内科肾脏病专业委员会第二次全国肾病专题学术讨论会通过的疗效评定标准。完全缓解尿蛋白持续阴性，高倍镜下尿红细胞消失。基本缓解尿蛋白持续减少≥50％，高倍镜下尿红细胞不超过4个。好转尿蛋白持续减少≥25％，高倍镜下尿红细胞不超过4个。无效尿蛋白或尿红细胞无显著变化。治疗结果治疗组的疗效明显优于对照组(P＜0.01)。本发明组合颗粒制剂治疗慢性肾小球肾炎31例疗效明显，在减少尿蛋白的排泄方面总有效率达到90％以上。实施例1黄芪503g当归252g穿山龙377g柴胡252g水蛭76g取黄芪、水蛭加水煎煮三次，合并煎液，滤液浓缩得稠膏①。当归、穿山龙、柴胡加60％乙醇浸渍提取三次，浸泡3天，合并三次提取液，得稠膏②。合并稠膏①、②混匀，真空干燥，粉碎。取干粉，加糊精1.4倍，混匀，加75％乙醇适量制粒，干燥，制成颗粒剂，口服一次8g，每日2次。实施例2黄芪450g、当归200g、穿山龙320g、柴胡200g、水蛭60g。当归、穿山龙、柴胡，用90％乙醇提取4次，浓缩得稠膏。黄芪、水蛭，水煎煮3次，滤液浓缩得稠膏。合并上述两个稠膏，干燥得干粉，加入适量辅料，制成片剂。每日2次，每次3～4片。实施例3黄芪550g、当归300g、穿山龙420g、柴胡300g、水蛭90g。当归、穿山龙、柴胡，用40％乙醇提取2次，浓缩得稠膏。黄芪、水蛭，水煎煮2次，滤液浓缩得稠膏。合并上述两个稠膏，干燥得干粉，加入适量辅料，制软胶囊。每日2次，每次2～3粒。实施例4黄芪503g当归252g穿山龙377g柴胡252g水蛭76g取黄芪、水蛭加水煎煮三次，合并煎液，滤液浓缩得稠膏①。当归、穿山龙、柴胡加60％乙醇浸渍提取三次，浸泡3天，合并三次提取液，得稠膏②。合并稠膏①、②混匀，真空干燥，粉碎。取干粉，加糊精1.4倍，混匀，加75％乙醇适量制粒，干燥，装胶囊，制成胶囊剂，每日2次，每次1.8g。权利要求1.一种治疗肾病的药物组合物，其特征在于是包含下述原料药制成的黄芪450～550重量份、当归200～300重量份、穿山龙320～420重量份、柴胡200～300重量份、水蛭60～90重量份。2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于是包含下述原料药制成的黄芪503重量份、当归252重量份、穿山龙377重量份、柴胡252重量份、水蛭76重量份。3.如权利要求1、2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于穿山龙、柴胡、当归，用40～95％乙醇提取2～4次，减压浓缩得稠膏；黄芪、水蛭，水煎煮1～3次，滤液浓缩得稠膏；合并上述两个稠膏，干燥、粉碎，得干粉。4.如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为穿山龙、柴胡、当归，用60％乙醇提取3次，减压浓缩得稠膏；黄芪、水蛭，水煎煮2次，滤液浓缩得稠膏；合并上述两个稠膏，干燥、粉碎，得干粉。5.如权利要求3、4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该制备方法制备的干粉，加入适宜的辅料，制成丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂。6.如权利要求1、2所述的药物组合物在制备治疗各种原因引起的肾小球及肾小管间质病变慢性肾小球肾炎，IgA肾病，肾病综合征，慢性肾功能不全，早期氮质血症的药物的应用。全文摘要本发明公开了一种治疗肾病的药物组合物及该组合物的制备方法。该药物组合物由穿山龙、柴胡、当归、黄芪、水蛭制成的，用于治疗各种原因引起的肾小球及肾小管间质病变慢性肾小球肾炎，IgA肾病，肾病综合征，慢性肾功能不全，早期氮质血症的中药组合物及其制备方法；用本发明的制备方法实现的制剂疗效确切。文档编号A61K35/02GK1846724SQ20051020021公开日2006年10月18日申请日期2005年4月6日优先权日2005年4月6日发明者李平,莫用元,张红,陈玉武,赵世萍,李克明,郭景珍,付桂香申请人:中日友好医院,北京华夏医胜创新科技有限责任公司