一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法
专利名称：一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，尤其是涉及一种用于治疗骨质疏松症的中药组合物，属中药领域。
背景技术：
骨质疏松是全身骨骼成分减少的一种现象，主要表现为骨组织内单位体积中骨量减少，骨矿物质和骨基质随年龄的增加(或妇女绝经后)等比例的减少，骨组织的显微结构发生改变而致其骨组织的正常荷载功能发生变化。骨质疏松在临床上表现为腰背疼、病理性骨折、椎体变形、体态变形致“龟背”出现，伴有周身骨骼的疼痛等症状，称为骨质疏松症，是一种全身性的骨骼疾病。因其发病率日益升高，已成为严重影响老年人身体健康的疾病。因此，探索一种治疗骨质疏松症的药物非常必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备治疗肝肾不足，淤血阻络所致骨质疏松症药物中应用的药物组合物及其制备方法；本发明的目的还在于提供一种药物组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的处方组成淫羊藿120～160重量份 续断18～22重量份 丹参8～12重量份知母8～12重量份补骨脂8～12重量份 地黄8～12重量份优选后的重量比为淫羊藿14重量份 续断2重量份 丹参1重量份知母1重量份补骨脂1重量份 地黄1重量份应用以上处方，结合现代制剂技术，就可以制成多种剂型，包括片剂、胶囊剂和丸剂等，下面分别叙述。
胶囊剂的制备以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮1次，每次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，干燥、粉碎，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。
片剂的制备以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，制成颗粒，再加入适量粘和剂、崩解剂，混匀干燥，压片，即得。
丸剂的制备以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至相对密度约为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，减压干燥，干膏粉碎成细粉，加羧甲淀粉钠及淀粉适量，混匀，泛丸，干燥，即得。
由上可见，将各味原料药提取精制成药物细粉是所有制剂工艺中最核心的部分，无论做成何种固体制剂，都要经过提取精制过程，因而该过程也是本发明要重点保护的。
研究出制剂工艺，得到了相应的剂型，但在生产上还必须有质量控制手段来保证产品的安全有效，所以发明人又制定了质量控制方法。
本发明药物组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和\或含量测定。其中的定性鉴别可以是如下一种或几种方法的组合a.取本发明组合物制剂少量，置显微镜下观察草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行。石细胞近无色或淡黄色，类圆形、类三角形、类长方形或不规则形，直径20～65μm，边缘不平整。种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物。
b.取本发明组合物制剂2～5g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品液；另取补骨脂素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
c.取本发明组合物制剂3～6g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定则如下色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含淫羊藿苷40μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明组合物制剂0.5～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟(100W，50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。取续滤液以微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品液。
测定法 分别精密吸取供试品液、对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明药物制剂具有滋补肝肾，活血通络，强筋壮骨，用于肝肾不足，淤血阻络所致骨质疏松等症状的疾病。发明人还根据其功能主治，从预防骨质疏松方面对其药效学进行了研究。
受试药物按按照前述三种剂型的制备方法而制得的本品制剂1、2、3号，含2.499g生药/g的制剂。
补肾健骨胶囊武汉健民制药厂生产，批号20040301。
维甲酸由东北制药总厂提供，批号000220。
动物Wistar大鼠，雌雄兼用，150～210g；昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g；均由山东医科大学实验动物中心提供。
主要仪器UMSP？O型显微分光光度仪，VIDAS全自动图像分析系统试验1对维甲酸造成的大鼠骨质疏松症的试验研究将大鼠随机分成6组，每组10只，A组为正常对照组；B组为模型组；C组为对照药物治疗组，每日给予补肾健骨胶囊0.9g/kg；D、E、F组分别为本品制剂1、2、3号治疗组，每日给药剂量分别为0.36g/kg。除A组外，其他各组均每日灌胃给予维甲酸70mg/kg，2周后停用。实验期间A、B组每日给予生理盐水5ml/kg灌饲，其他各组治疗药物用水溶解后灌胃，连续用药4周(即维甲酸停用后，继续使用2周)。实验于给药4周后结束，实验结束时进行采血、取骨。在荧光照射下，使用显微分光光度仪将胫骨切片图像全部输入全自动图像分析系统，然后各组随机抽取6张切片，每张切片图像中任选8点做骨形态计量学测量，在计算机内进行数据和图像处理。股骨生物力学测定选用三点弯曲试验。所有资料数据均计算均值和标准差，运用方差法进行分析，显著性差异检验用U检验或t检验。结果如下
表1各组大鼠股骨计量学变化(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较，**P＜0.05，**P＜0.01，与C组比较，#P＜0.05。
表1表明，各组股骨体积均小于B组、差异有显著性意义(P＜0.05)；但股骨干重、灰重、骨钙、骨密度均明显高于B组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。使用本品制剂治疗的D、E、F组，骨密度测值明显高于对照治疗的C组，差异有显著性意义(P＜0.05)。
表2各组大鼠胫骨骨小梁变化(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔΔP＜0.01；与B组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与C组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
表2表明，各组骨小梁总体积、骨小梁百分比、平均骨小梁宽度明显高于B组，平均骨小梁间隙宽度明显小于B组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。使用本品制剂治疗的D、E、F组骨小梁总体积、骨小梁百分比也明显高于对照组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。
表3胫骨中酸性粘多糖类变化(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较， **P＜0.01，与C组比较，##P＜0.01。
表3表明，各组酸性粘多糖面积均值、酸性粘多糖百分比均值明显高于B组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。使用本品制剂治疗的D、E、F组以上两项指标也明显高于C组，差异有显著性意义(P＜0.01)。
表4治疗对大鼠骨质疏松模型骨生物力学检测指标的影响(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较，*P(0.05，**P＜0.01。
表5治疗对大鼠骨质疏松模型骨生物力学检测指标的影响(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较，*P＜0.05，**＜0.01。
表4、5表明，使用本品制剂治疗的大鼠，股骨生物力学检测指标与B组比较明显改善，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。
以上结果说明，本品制剂可明显抑制维甲酸造成的大鼠骨质丢失，改善骨质疏松模型大鼠的骨生物力学状态，提高骨骼抵抗外力冲击的能力，避免骨折的发生。
试验2急性毒性试验一日内给小鼠灌胃本品制剂浸膏20g/kg，相当于临床70kg人每公斤体重日用量的350倍以上，连续观察七天，小鼠一般状况良好，无一死亡，说明本品低毒、安全。
具体实施例方式
实施例一处方淫羊藿120kg 续断18kg 丹参8kg知母8kg 补骨脂8kg 地黄8kg制法以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮一次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。
实施例二处方淫羊藿160kg 续断22kg 丹参12kg知母12kg 补骨脂12kg地黄12kg制法以上六味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入羧甲淀粉钠8g，微晶纤维素50g，加淀粉至400g，制成颗粒，干燥，压片，即得。
实施例三处方淫羊藿 1167kg续断 167kg 丹参 83kg知母 83kg 补骨脂 83kg 地黄 83kg制法以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至相对密度约为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，减压干燥，干膏粉碎成细粉，过100目筛，取加羧甲淀粉钠及淀粉适量，混匀，加水泛丸，干燥，即得。
实施例四上述本发明组合物制成的丸剂的质量控制方法
鉴别a.取本发明丸剂2g，置显微镜下观察草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行。石细胞近无色或淡黄色，类圆形、类三角形、类长方形或不规则形，直径20～65μm，边缘不平整。种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物。
b.取本发明丸剂3g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品液；另取补骨脂素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
c.取本发明丸剂3g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(25∶75)为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含淫羊藿苷40μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明丸剂0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟(100W，50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。取续滤液以微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品液。
测定法 分别精密吸取供试品液、对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每单位量含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计，不得少于0.53mg。
上述单位量是指含相当0.4998g原药材的成品药剂量。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述重量份的原料药制成的淫羊藿120～160份、续断18～22份、丹参8～12份、知母8～12份、补骨脂8～12份、地黄8～12份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于各原料药的重量比为淫羊藿14份、续断2份、丹参1份、知母1份、补骨脂1份、地黄1份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物可制成临床所需的多种剂型，包括片剂、胶囊剂及丸剂。
4.如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下提取精制步骤取原料药，将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮，煎液浓缩成稠膏，加入上述药材的细粉，混匀，干燥，粉碎，得到药物细粉。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下提取精制步骤取原料药，将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，浓缩至30℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，干燥，粉碎，得到药物细粉。
6.如权利要求4或5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法还包括如下制剂成型工艺将提取精制得到的药物细粉，加入适宜的辅料，制成所需剂型，包括片剂、胶囊剂和丸剂。
7.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包含如下定性鉴别方法中的一种或几种a.取本发明组合物制剂少量，置显微镜下观察，可见草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行；石细胞近无色或淡黄色，类圆形、类三角形、类长方形或不规则形，直径20～65μm，边缘不平整；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物；b.取本发明组合物制剂2～5g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品液；另取补骨脂素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ml、对照品溶液1ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；c.取本发明组合物制剂3～6g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以19∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法的还包括如下定量方法色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；25∶75的乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含淫羊藿苷40μg的对照品溶液，即得；供试品溶液的制备 取本发明组合物制剂0.5～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品液；测定法 分别精密吸取供试品液、对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
9.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备用于治疗肝肾不足、淤血阻络所致骨质疏松症药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种药物组合物，确切地说是一种中药组合物，属中药领域。该药物组合物是由一定比例的淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂、地黄等原料药制备而得，对于骨质疏松症有较好的治疗作用。同时，本发明公开了该药物组合物的制备方法和质量控制方法。
文档编号A61K9/48GK1868522SQ200510200298
公开日2006年11月29日 申请日期2005年5月24日 优先权日2005年5月24日
发明者冯新刚 申请人:冯新刚
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，尤其是涉及一种用于治疗骨质疏松症的中药组合物，属中药领域。
背景技术：
骨质疏松是全身骨骼成分减少的一种现象，主要表现为骨组织内单位体积中骨量减少，骨矿物质和骨基质随年龄的增加(或妇女绝经后)等比例的减少，骨组织的显微结构发生改变而致其骨组织的正常荷载功能发生变化。骨质疏松在临床上表现为腰背疼、病理性骨折、椎体变形、体态变形致“龟背”出现，伴有周身骨骼的疼痛等症状，称为骨质疏松症，是一种全身性的骨骼疾病。因其发病率日益升高，已成为严重影响老年人身体健康的疾病。因此，探索一种治疗骨质疏松症的药物非常必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备治疗肝肾不足，淤血阻络所致骨质疏松症药物中应用的药物组合物及其制备方法；本发明的目的还在于提供一种药物组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的处方组成淫羊藿120～160重量份 续断18～22重量份 丹参8～12重量份知母8～12重量份补骨脂8～12重量份 地黄8～12重量份优选后的重量比为淫羊藿14重量份 续断2重量份 丹参1重量份知母1重量份补骨脂1重量份 地黄1重量份应用以上处方，结合现代制剂技术，就可以制成多种剂型，包括片剂、胶囊剂和丸剂等，下面分别叙述。
胶囊剂的制备以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮1次，每次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，干燥、粉碎，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。
片剂的制备以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，制成颗粒，再加入适量粘和剂、崩解剂，混匀干燥，压片，即得。
丸剂的制备以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至相对密度约为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，减压干燥，干膏粉碎成细粉，加羧甲淀粉钠及淀粉适量，混匀，泛丸，干燥，即得。
由上可见，将各味原料药提取精制成药物细粉是所有制剂工艺中最核心的部分，无论做成何种固体制剂，都要经过提取精制过程，因而该过程也是本发明要重点保护的。
研究出制剂工艺，得到了相应的剂型，但在生产上还必须有质量控制手段来保证产品的安全有效，所以发明人又制定了质量控制方法。
本发明药物组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和\或含量测定。其中的定性鉴别可以是如下一种或几种方法的组合a.取本发明组合物制剂少量，置显微镜下观察草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行。石细胞近无色或淡黄色，类圆形、类三角形、类长方形或不规则形，直径20～65μm，边缘不平整。种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物。
b.取本发明组合物制剂2～5g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品液；另取补骨脂素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
c.取本发明组合物制剂3～6g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定则如下色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含淫羊藿苷40μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明组合物制剂0.5～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟(100W，50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。取续滤液以微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品液。
测定法 分别精密吸取供试品液、对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明药物制剂具有滋补肝肾，活血通络，强筋壮骨，用于肝肾不足，淤血阻络所致骨质疏松等症状的疾病。发明人还根据其功能主治，从预防骨质疏松方面对其药效学进行了研究。
受试药物按按照前述三种剂型的制备方法而制得的本品制剂1、2、3号，含2.499g生药/g的制剂。
补肾健骨胶囊武汉健民制药厂生产，批号20040301。
维甲酸由东北制药总厂提供，批号000220。
动物Wistar大鼠，雌雄兼用，150～210g；昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g；均由山东医科大学实验动物中心提供。
主要仪器UMSP？O型显微分光光度仪，VIDAS全自动图像分析系统试验1对维甲酸造成的大鼠骨质疏松症的试验研究将大鼠随机分成6组，每组10只，A组为正常对照组；B组为模型组；C组为对照药物治疗组，每日给予补肾健骨胶囊0.9g/kg；D、E、F组分别为本品制剂1、2、3号治疗组，每日给药剂量分别为0.36g/kg。除A组外，其他各组均每日灌胃给予维甲酸70mg/kg，2周后停用。实验期间A、B组每日给予生理盐水5ml/kg灌饲，其他各组治疗药物用水溶解后灌胃，连续用药4周(即维甲酸停用后，继续使用2周)。实验于给药4周后结束，实验结束时进行采血、取骨。在荧光照射下，使用显微分光光度仪将胫骨切片图像全部输入全自动图像分析系统，然后各组随机抽取6张切片，每张切片图像中任选8点做骨形态计量学测量，在计算机内进行数据和图像处理。股骨生物力学测定选用三点弯曲试验。所有资料数据均计算均值和标准差，运用方差法进行分析，显著性差异检验用U检验或t检验。结果如下
表1各组大鼠股骨计量学变化(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较，**P＜0.05，**P＜0.01，与C组比较，#P＜0.05。
表1表明，各组股骨体积均小于B组、差异有显著性意义(P＜0.05)；但股骨干重、灰重、骨钙、骨密度均明显高于B组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。使用本品制剂治疗的D、E、F组，骨密度测值明显高于对照治疗的C组，差异有显著性意义(P＜0.05)。
表2各组大鼠胫骨骨小梁变化(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔΔP＜0.01；与B组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与C组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
表2表明，各组骨小梁总体积、骨小梁百分比、平均骨小梁宽度明显高于B组，平均骨小梁间隙宽度明显小于B组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。使用本品制剂治疗的D、E、F组骨小梁总体积、骨小梁百分比也明显高于对照组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。
表3胫骨中酸性粘多糖类变化(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较， **P＜0.01，与C组比较，##P＜0.01。
表3表明，各组酸性粘多糖面积均值、酸性粘多糖百分比均值明显高于B组，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。使用本品制剂治疗的D、E、F组以上两项指标也明显高于C组，差异有显著性意义(P＜0.01)。
表4治疗对大鼠骨质疏松模型骨生物力学检测指标的影响(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较，*P(0.05，**P＜0.01。
表5治疗对大鼠骨质疏松模型骨生物力学检测指标的影响(X±S，n＝10)
与A组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与B组比较，*P＜0.05，**＜0.01。
表4、5表明，使用本品制剂治疗的大鼠，股骨生物力学检测指标与B组比较明显改善，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01)。
以上结果说明，本品制剂可明显抑制维甲酸造成的大鼠骨质丢失，改善骨质疏松模型大鼠的骨生物力学状态，提高骨骼抵抗外力冲击的能力，避免骨折的发生。
试验2急性毒性试验一日内给小鼠灌胃本品制剂浸膏20g/kg，相当于临床70kg人每公斤体重日用量的350倍以上，连续观察七天，小鼠一般状况良好，无一死亡，说明本品低毒、安全。
具体实施例方式
实施例一处方淫羊藿120kg 续断18kg 丹参8kg知母8kg 补骨脂8kg 地黄8kg制法以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮一次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。
实施例二处方淫羊藿160kg 续断22kg 丹参12kg知母12kg 补骨脂12kg地黄12kg制法以上六味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.35～1.38(30℃)的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入羧甲淀粉钠8g，微晶纤维素50g，加淀粉至400g，制成颗粒，干燥，压片，即得。
实施例三处方淫羊藿 1167kg续断 167kg 丹参 83kg知母 83kg 补骨脂 83kg 地黄 83kg制法以上六味，续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至相对密度约为1.35～1.38(30℃)的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，减压干燥，干膏粉碎成细粉，过100目筛，取加羧甲淀粉钠及淀粉适量，混匀，加水泛丸，干燥，即得。
实施例四上述本发明组合物制成的丸剂的质量控制方法
鉴别a.取本发明丸剂2g，置显微镜下观察草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行。石细胞近无色或淡黄色，类圆形、类三角形、类长方形或不规则形，直径20～65μm，边缘不平整。种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物。
b.取本发明丸剂3g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品液；另取补骨脂素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
c.取本发明丸剂3g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(25∶75)为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含淫羊藿苷40μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明丸剂0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟(100W，50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。取续滤液以微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品液。
测定法 分别精密吸取供试品液、对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每单位量含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计，不得少于0.53mg。
上述单位量是指含相当0.4998g原药材的成品药剂量。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述重量份的原料药制成的淫羊藿120～160份、续断18～22份、丹参8～12份、知母8～12份、补骨脂8～12份、地黄8～12份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于各原料药的重量比为淫羊藿14份、续断2份、丹参1份、知母1份、补骨脂1份、地黄1份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物可制成临床所需的多种剂型，包括片剂、胶囊剂及丸剂。
4.如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下提取精制步骤取原料药，将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮，煎液浓缩成稠膏，加入上述药材的细粉，混匀，干燥，粉碎，得到药物细粉。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下提取精制步骤取原料药，将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，其余淫羊藿等三味加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，浓缩至30℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入上述药材细粉，混匀，干燥，粉碎，得到药物细粉。
6.如权利要求4或5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法还包括如下制剂成型工艺将提取精制得到的药物细粉，加入适宜的辅料，制成所需剂型，包括片剂、胶囊剂和丸剂。
7.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包含如下定性鉴别方法中的一种或几种a.取本发明组合物制剂少量，置显微镜下观察，可见草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行；石细胞近无色或淡黄色，类圆形、类三角形、类长方形或不规则形，直径20～65μm，边缘不平整；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物；b.取本发明组合物制剂2～5g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品液；另取补骨脂素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ml、对照品溶液1ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；c.取本发明组合物制剂3～6g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以19∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法的还包括如下定量方法色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；25∶75的乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含淫羊藿苷40μg的对照品溶液，即得；供试品溶液的制备 取本发明组合物制剂0.5～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品液；测定法 分别精密吸取供试品液、对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
9.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备用于治疗肝肾不足、淤血阻络所致骨质疏松症药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种药物组合物，确切地说是一种中药组合物，属中药领域。该药物组合物是由一定比例的淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂、地黄等原料药制备而得，对于骨质疏松症有较好的治疗作用。同时，本发明公开了该药物组合物的制备方法和质量控制方法。
文档编号A61K9/48GK1868522SQ200510200298
公开日2006年11月29日 申请日期2005年5月24日 优先权日2005年5月24日
发明者冯新刚 申请人:冯新刚
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