一种中药组合物及其制备方法
专利名称：一种中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及该组合物的制备方法，特别涉及一种用于治疗视网膜静脉阻塞的中药组合物及其制备方法背景技术视网膜静脉阻塞是一种较为常见的眼底疾病，视网膜静脉阻塞的特征是视网膜血液瘀滞、视网膜出血和水肿。可分为视网膜中央静脉阻塞及视网膜静脉分支阻塞。Hayreh把它分成？静脉郁滞性视网膜病变(中青年视力下降较少，视网膜静脉循环郁滞、预后较好)。？出血性视网膜病变(中年以上视力高度减退，静脉郁滞前后有中央动脉供血不足，预后差)。
一些原因使眼底静脉栓塞而导致眼底出血，病程缓慢冗长，造成视力下降。少数病人可并发严重的合并症，导致视力明显下降，甚至失明。该病原因比较复杂，常由多种因素造成。
引起该病的原因有血管外的压迫，静脉血流的淤滞以及静脉血管内壁的损害等，血管外的压迫多由于视神经内或视网膜动、静脉交叉处的视网膜中央动脉或分支小动脉硬化，压迫其邻近的静脉所致，因此多见于高血压或动脉硬化等老年病人；静脉血流的淤滞则见于视网膜动脉灌注压不足或眼压增高及血液粘滞度增高的病人，因而常发生于颈动脉供血不足、大量失血、低血压、青光眼，红细胞增多症等；血管内壁的损害常由于视网膜血管炎所致，因此多见于年轻病人及糖尿病患者。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种具有益气养元，扶正祛邪，活血祛瘀，通脉活络作用、用于治疗视网膜静脉阻塞的中药组合物；本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明的目的是这样实现的，根据中医药学理论，利用草药独特的药性，采用黄芪、三七、灯盏细辛按照一定的配伍要求，经过特定工艺加工而成。
制备本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)黄芪80～120重量份三七20～30重量份灯盏细辛26～38重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选配比为(按重量份)
黄芪90～110重量份三七23～28重量份灯盏细辛30～35重量份。
本发明药物组合物的原料药组成最佳配比为(按重量份)黄芪100重量份三七25重量份灯盏细辛32重量份。
本发明药物可以将黄芪、三七和灯盏细辛混合，一起用乙醇或水提取，得提取物，加入赋形剂，制成不同的药物剂型，也可以分别提取三种原料药，得到三种提取物，然后，合并上述三个提取物，加入适量辅料，制成临床上可以接受的剂型，如丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂。
如果先分别提取三种原料药得到提取物，然后再制成制剂，其制备步骤如下先分别制备上述的黄芪提取物、三七提取物和灯盏细辛提取物取黄芪药材粗粉，加50～90％乙醇，优选加70％乙醇，提取1～3次，优选提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有非极性或弱极性树脂的色谱柱中，优选AB-8树脂，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇、85～95％乙醇洗脱，优选依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱。收集40～80％乙醇洗脱部分，优选收集70％乙醇洗脱部分，并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加50～90％乙醇，优选加70％乙醇，提取1～3次，优选提取3次，滤过，滤液浓缩后通过非极性或弱极性树脂柱，优选AB-8树脂，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用35～85％乙醇溶液洗脱，优选用70％乙醇溶液洗脱，收集35～85％乙醇洗脱部分，优选收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加60～90％乙醇，优选加75％乙醇，提取1～4次，优选提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至中性至弱碱性，优选pH值约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，优选pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，加入适量辅料，制成临床上可以接受的剂型。其中本发明药物组合物注射剂的制备方法优选如下取适量稳定剂溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液A；
另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，优选1∶1的溶液，搅拌使溶解，得溶液B将溶液A加入到溶液B中，混合，加注射用水，灭菌，得到注射液。
本发明的药物产品可以以原料的组成表述，也可以以提取物的用量配比描述。
如果以上述三种提取物为原料制备本发明药物组合物，用三种提取物的配比表述本发明药物如下黄芪提取物6～10重量份、三七提取物80～120重量份、灯盏细辛提取物8～12重量份。
三种提取物的优选配比为黄芪提取物7～9重量份、三七提取物90～110重量份、灯盏细辛提取物9～11重量份。
三种提取物的优选配比为黄芪提取物8重量份、三七提取物100重量份、灯盏细辛提取物10重量份。
本发明药物的优选剂型是注射剂，以三种提取物为原料制备本发明药物注射液的方法为取适量稳定剂，优选取乙二胺四醋酸钙钠0.5g，溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至中性至弱酸性，优选pH值7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液(A)。
另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，优选乙醇∶丙二醇＝1∶1的溶液，搅拌使溶解，得溶液(B)。
将溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水灭菌，即得到本发明药物组合物注射液。
本发明药物用于治疗视网膜静脉阻塞，具益气养元，扶正祛邪，活血祛瘀，通脉活络等功效。
本发明药物的发明人在原料药的选择及其配伍方面，进行了一系列实验研究，通过拆方试验研究，确定了制备本发明药物的原料药组成，使其与现有技术相比具有明显的突出疗效优势，实现了重要配伍组合的增效目的。
下述实验例通过观察本发明注射液制剂治疗视网膜静脉阻塞的疗效，进一步说明本发明药物的医疗用途。
为了了解其组方伍用增效作用，本研究采用4种活血化瘀动物试验模型，观察本发明注射液三种组分伍用对动物药理作用的影响。
实验例一 本发明注射液不同组份对家兔实验性视网膜出血、静脉阻塞的治疗作用1、受试样品三七提取物、灯盏细辛提取物、黄芪提取物。1g提取物相当于生药67g。
药物配制①三七提取物单药组6mg/kg。称取三七提取物600mg加蒸馏水至100ml，浓度为0.6％，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
②灯盏细辛提取物单药组3mg/kg。称取三七提取物300mg加蒸馏水至100ml，浓度为0.3％，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
③黄芪提取物单药组3mg/kg，称取黄芪提取物300mg加蒸馏水至100ml，浓度为0.3％，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
④三七、灯盏细辛伍用组称取三七600mg、灯盏细辛提取物300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑤三七、黄芪伍用组称取三七提取物600mg、黄芪提取物300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑥灯盏细辛、黄芪伍用组称取灯盏细辛、黄芪提取物各300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑦三七、灯盏细辛、黄芪伍用组称取三七600mg、灯盏细辛、黄芪提取物各300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
2、阳性对照药血塞通注射液(简称血塞通)，批号020101，规格250mg/5ml，昆明兴中制药有限责任公司生产，静脉注射。药物配制取60ml(50mg/ml)血塞通注射液加注射用水至100.0ml，配成3％，冷藏待用。
3、检测仪器及试剂血管造影剂荧光素钠，配成20％溶液，100ml。
3％戊巴比妥钠取戊巴比妥钠3g加水至100ml，室温保存。
1％阿托品取阿托品1g加水至100ml，室温保存。
天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
Aγ+眼科激光治疗机，型号ARGON/YAGE，西德制造。
造模用激光能量5.0WJ X0.2秒X 300μX100。
彩色荧光眼底成像系统机，型号TRC-50EX，日本制造。
眼底检查镜COWa眼底照相机，日本产品。
4、动物家兔72只。
5、试验方法与结果取家兔72只，随机分为9组，每组8只。
①阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g体重；②血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，静脉注射0.1ml/100g体重。
③三七提取物单药组6mg/kg。取药物浓度为0.6％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
④灯盏细辛提取物单药组3mg/kg。取灯盏细辛提取物浓度为0.3％的溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑤黄芪提取物单药组3mg/kg，取黄芪提取物浓度为0.3％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑥三七、灯盏细辛伍用组取三七、灯盏细辛提取物混合药液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑦三七、黄芪伍用组取三七提取物、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑧灯盏细辛、黄芪伍用组取灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑨三七、灯盏细辛、黄芪伍用组取三七、灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。以上各组动物每天给药一次，连续2周，停药后继续观察4周。
模型制备造模前每只兔的左眼交替点1％阿托品和托吡卡胺充分散瞳。3％戊巴比妥钠耳缘静脉注射(1ml/kg)，用氩离子激光光凝左眼视网膜动脉各分支，造成缺血型视网膜中静脉阻塞，光凝长度为1PD，光斑大小为50μm，曝光时间为0.2秒，能量为120-170mW，直至血管内血流中断成白色。
观察指标及评价方法折方试验观察项目主要有治疗前和治疗后6周内隔天眼底检查(治疗前、治疗后1、3、5………41天)，并记录治疗后眼底出血完全吸收时间，判断标准及等级见表1，等级为0级时为出血被完全吸收。统计照射后出血被完全吸收的时间；用T-test统计软件，给药组与对照组出血被完全吸收时间进行比较，评价药物的治疗效果，激光光束致视网膜损伤症状及分级见表1。
表1、激光光束致视网膜损伤症状及分级
兔眼底出血完全吸收时间及动物数见表2。
表2、对兔眼底出血完全吸收时间的影响(X±S，n＝8)
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与三七、灯盏细辛组比较，#P＜0.05。
试验结果显示三七提取物对动物激光致视网膜出血吸收有一定的促进作用，三七提取物与灯盏细辛提取物伍用对家兔视网膜促进出血吸收作用有进一步增强(P＜0.05)。当三七提取物、灯盏细辛提取物、黄芪提取物三者合用时，其治疗效果明显增强，统计差别显著(P＜0.05-P＜0.01)，完全吸收时间比对照组提前7天，统计差别显著(P＜0.01)。
实验例二 本发明注射液不同组份伍用对大鼠旁路血栓形成的影响1、受试样品同实验例一。
药物配制方法同实验例一。
2、阳性对照药同实验例一。
3、仪器及试剂天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
聚乙稀管(内经1mm，2mm)，动脉夹，丝线(4#、7#)，手术器械等。
12500μ/ml肝素注射液上海生物化学制药厂，批号990407。
4、动物Wister大鼠，90只，体重300～340g，雌雄各半。
5、试验方法与结果取大白鼠90只，随机分为9组，每组10只，雌雄各半。
①阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g体重；②血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，静脉注射0.1ml/100g体重。
③三七提取物单药组6mg/kg。取药物浓度为0.6％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
④灯盏细辛提取物单药组3mg/kg。取三七提取物浓度为0.3％的溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑤黄芪提取物单药组3mg/kg，取黄芪提取物浓度为0.3％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑥三七、灯盏细辛伍用组取三七、灯盏细辛提取物混合药液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑦三七、黄芪伍用组取三七提取物、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑧灯盏细辛、黄芪伍用组取灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑨三七、灯盏细辛、黄芪伍用组取三七、灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。以上各组动物每天给药一次，连续7天，于末次给药后30分钟，腹腔注射3％的戊巴比妥钠0.035g/kg，气管内插聚乙烯管以便清除气管内分泌物，并分离右颈总动脉及左颈外静脉。在三段聚乙烯管的中段放入一段长5cm的4号手术丝线。将肝素生理盐水溶液(50μ/ml)充满聚乙烯管。将管一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉，手术完成5分钟后开放血流，则血流从右颈总动脉流经聚乙烯管，返回左颈外静脉。开放血流15分钟后中断血流，迅速取出丝线称重，总重量减去丝线重(6mg)即血栓湿重，并进行统计学处理(t检验)。
结果见表3。
表3、三组方伍用静脉注射对大鼠血栓形成的影响(X±S，n＝6)
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与三七、灯盏细辛组比较，#P＜0.05。
结果显示三七单药6mg/kg组可减少动-静脉环路血栓的湿重，抑制率6.6％，三七分别与灯盏细辛和黄芪伍用，其抑制率提高至9.8-9.4％。三七与灯盏细辛伍和黄芪三者伍用，其抑制率提高至18.4％(P＜0.01)。提示三七提取物、灯盏细辛提取物、黄芪提取物三者合用明显增强抑制血栓形成的作用，疗效优于两味药物的组合。
实验例三 本发明注射液不同组份伍用对家兔颈动脉血栓溶栓作用的影响1、受试样品同实验例一。
药物配制同实验例一。
2、阳性对照药同实验例一。
3、测定试剂纤维蛋白原(FIBROTEK，FIB)测定试剂盒，批号527523，日本德灵公司产品。
凝血酶原时间(Prothrombin Time，PT)测定试剂盒，批号527062，日本德灵公司产品。
凝血酶时间(Thrombin Time，TT)测定试剂盒，批号611005，日本德灵公司产品。
白陶土激活的部分凝血活酶时间(Kaolin-Activated PartialThromboplastin Time，APTT)测定试剂盒，批号527142，日本德灵公司产。
戊巴比妥钠进口分装，配成3％溶液备用。
肝素上海第一生化药业公司、上海生物化学制药厂产品。配制成0.5％溶液备用。
氯化钠注射液北京双鹤药业股份有限公司产品，批号020318812。
Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。
4、动物家兔72只，体重2.25±0.23kg，雌雄兼用。
5、仪器Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。
MFV-2100电磁血流量计，日本光电公司产品。
SEN-7103电子刺激器，日本光电公司产品。
CA-6000全自动血凝仪，日本Sysmex公司产品6、试验方法与结果(1)试验方法手术过程，试验前动物禁食12小时，自由饮水。3％戊巴比妥钠(30mgkg-1)麻醉动物。动物仰卧位固定在手术台上，颈部正中切口，分离出一侧颈动脉，长度3cm左右，将直径2.5～3.5mm的电磁流量计探头安放在合适位置，电磁流量计探头连接于MFV-2100电磁流量计上，记录颈动脉的血流量；耳缘静脉建立静脉通道，供给药、补液和取血用。
血栓模型制备在血流探头近心端取长度约1cm的血管，在此段血管内用特制的血管钳夹闭动脉，使血管内膜粗糙，每次夹闭20sec，间隔5min，重复6次。将颈动脉的近心端和远心端用动脉夹阻断血流，向该段血管内注入10U凝血酶，20min后去掉动脉夹，电磁流量计读数为零，表明颈动脉已形成稳定的血栓，稳定10min后即可进行各项参数的观察和测定。
手术完毕及模型成功后，将所有信号输入powerlab/8SP记录仪并经生物信号采集和处理系统进行连续信号采集，试验参数由计算机全程进行监控和显示并储存于计算机上，试验结束后，作脱机处理进行数据分析、打印原始记录。
动物分组家兔72只，雌雄兼用，按体重随机分为9组，每组8只。阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g；血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，静脉注射0.1ml/100g。其它给药组按以上给药剂量静脉注射给药，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
给药时间为在颈动脉血栓形成并老化30min后，以上药物1分钟内静脉注射完，观察时间为120min。
检测指标颈动脉血流量将电磁流量计的输出端连接至Powerlab/8SP记录仪输入端，显示和储存数据，同时，电磁流量计上显示出每分钟血流量，读取并记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的血流量值。
心电图将针状电极插入四肢，经ML-132心电放大器测量标准II导联心电图。记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的心率变化。
栓塞动脉再通的判定连续记录颈动脉血流量，以给药后血流量回升达到基础值的50％以上，为颈动脉血管再通，再灌注后血流量再次降至零为再栓塞。统计给药后120min血管再通动物数，并计算血管再通率(％)。
统计学处理所有数据以平均数±标准差表示。采用配对t检验比较给药前后均数差异显著性，非配对t检验比较组间平均数差异显著性。
(2)、结果①对颈动脉血栓的溶栓效果家兔静脉注射三种提取物单药、伍用给药溶栓效果见表4。
表4、对栓塞颈动脉再通动物数及再通率的影响(X±S，n＝8)
试验结果显示，血栓形成后，血管外观呈暗红色，血栓形成段血流呈终止状态。生理盐水对照组在整个试验过程中未见栓塞血管再通。三七提取物组血管再率为37.5％，与灯盏细辛伍用血管再通率分别为50％。当三者合用时，血管再通率提高至87.5％，提示三者合用作用明显增强，优于两药合用。
②本发明注射液对家兔颈动脉栓塞后血流量的影响试验结果见表5。
表5.对家兔血流量的影响(X±S，n＝6)
血流量为ml/min。与三七组比较*P＞0.05，与三七+灯盏辛组比较#P＞0.05，与三七+黄芪组比较，▲P＞0.05，▲▲P＞0.05。
于生理盐水对照组的栓塞血管未再通，给药后，颈动脉血流量基本维持在栓塞后的水平，直至试验结束。三七、黄芪、灯盏细辛三位单药组和三七与黄芪伍用或三七与灯盏细辛伍用组，三七+黄芪+灯盏细辛血流量明显高于三七单药组和三七与黄芪和三七与灯盏细辛伍用组，提示三组提取物伍用效果增强。
③对家兔心率影响结果见表6。
表6、对家兔心率的影响(X±S，n＝6)
家兔心率(次/min)。
各组动物血栓形成后，心电图无明显变化，所有试验家兔的心率变化不大，与给药前比较，本发明注射液各剂量组和阳性药血塞通对照组对心率无明显变化，与生理盐水对照组比较差别也不显著(P＞0.05)，提示本发明注射液各组份在具有溶血栓剂量时对心功能无影响。
采用三氯化铁致家兔颈动脉血栓形成模型，溶栓结果显示三七、灯盏细辛、黄芪单一提取物溶血栓效果不明显。三者合用时，血管再通率明显提高，由单药再通率25-37.5％提高至87.5％。
实验例四 本发明注射液不同组份伍用对大鼠全血比粘度的影响1、受试样品同实验例一。
药物配制同实验例一。
2、阳性对照药同实验例一。
3、仪器及试剂普利生公司生产LBY-N6B锥-板粘度计。12500μ/ml肝素注射液上海生物化学制药厂，批号990407。
4、动物大鼠80只，雌雄各半，体重250-280g。
5、试验方法与结果大鼠90只，雌雄各半，按体重随机分为9组，每组10只。阴性对照组，静脉注射注射用水体积0.1ml/100g体重。血塞通注射液，3％，30mg/kg，静脉注射体积0.1ml/100g体重。给药组动物按以上给药剂量静脉注射给药。以上各组给药途径均为静脉注射，每日一次，连续7天。第7天给药1小时后，用5％异戊巴比妥钠麻醉动物，腹主动脉取血，分离血浆。采用普利生公司生产LBY-N6B锥-板粘度计，测定大鼠外周血血浆比粘度。降低率计算如下公式
结果见表7表7、对血浆比粘度的影响(X±S，n＝10)
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与三七、灯盏细辛组比较，#＜0.05；结果显示在本试验条件下，灯盏细辛、黄芪单组份及两组份伍用均未能显示降低血浆粘度作用。三七提取物对大鼠血浆比粘度比对照组下降12.0％(P＞0.05)。三七与灯盏细辛伍用降低血浆粘度作用增至18.7％，三七、灯盏细辛、黄芪三种组份合用，其降底全血浆比粘度作用更为明显，其降低率提高至30.7％(P＞0.01)。
实验例五 本发明注射液三种组份不同配比对离体凝血时间的影响试验材料1、受试样品同实验例一。
药物配制分别取三七提取物5、3、1mg；灯盏细辛提取物5、3、1mg；黄芪提取物1.6、0.8、0.4mg，按L9(33)正交表进行正交试验方法(见表8)分别溶解于10ml生理盐水，并用0.1Mol/L的碳酸氢钠溶液调节pH～7.2，各取0.5ml置于5ml玻璃管中，因素试管号为1-9。现配现用。
表8、本发明注射液抗凝血作用的因素和水平
2、血液样品Beagle狗后肢静脉取血18ml。动物由军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号SCXK-(军)2002-001号，动物设施条件认可证号SYXK-(军)2002-001号。
3、测量仪器天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
4、实验方法与结果Beagle狗后肢静脉取血18ml，0.5ml沿试管壁注入9个试管药液中，轻轻混匀，然后将试管放入37℃水浴中，每隔30秒钟将试管倾斜一次，直至试管倒置时血液不流动为止，计算凝血时间。试验开始第60分钟，取出试管内上清液，并称血块重量。试验重复1次。
药效评定指标1、形成血块时间(肉眼观察法)及血块的重量(称量法)。各试验管形成血块时间及血块重量进行比较，凝血时间的延长，血块重量变轻，均示为受试物抗凝效果。
通过试验找出3因素(三七、灯盏细辛、黄芪)的3个水平(高、中、低剂量)较佳组合，结果见表9-10。
表9、本发明提取物抗凝血块重量正交设计及结果
表10、本发明提取物抗凝血时间正交设计及结果
结果表明，本发明提取物对纤维蛋白原转变成纤维蛋白所需时间有明显影响，提示该药抗凝血作用可能与凝血的因子激活有关。另外，三七的差值绝对值最大，说明三七对实验影响最大，且大剂量的抗凝血时间最长，血块重量较小。而灯盏细辛、黄芪各给药剂量对实验的影响较小。故其较佳组合为三七高剂量，灯盏细辛和黄芪各用低剂量。
以下是本发明药物的制备实施例，但是，本发明药物的剂型并不尽限于如下所说的具体实施例1黄芪501克三七126克灯盏细辛161克取黄芪药材粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，滤过，滤液浓缩后通过装有AB-8树脂的色谱柱中，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加75％乙醇提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
取乙二胺四醋酸钙钠0.5g溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液(A)。
另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇(1∶1)溶液，搅拌使溶解，得溶液(B)。
将溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水灭菌，即得到本发明药物组合物注射液。每日一次，每次10～20ml。
实施例2黄芪1200克三七300克灯盏细辛380克取黄芪药材粗粉，加90％乙醇，提取2次，滤过，提取液浓缩后通入装有D101树脂的色谱柱中，依次用水、15％乙醇、40％乙醇、85％乙醇洗脱。收集40％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加50％乙醇，提取2次，滤过，滤液浓缩后通过D101树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用35％乙醇溶液洗脱，收集35％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加60％乙醇提取2次，提取液浓缩后，调节pH值至弱碱性，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，静置，析出沉淀物。分取沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，用60％乙醇制粒，60℃以下干燥，制成片剂。每日3次，每次3～4片。
实施例3黄芪100克三七25克灯盏细辛32克。
取黄芪药材粗粉100克，加50％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有D101-T树脂的色谱柱中，依次用水、25％乙醇、80％乙醇、95％乙醇洗脱。收集80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉25克，加50％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩后通过D101-T树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用85％乙醇溶液洗脱，收集85％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；
取灯盏细辛药材32克，加60％乙醇提取4次，提取液浓缩后，调节pH值至弱碱性，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，静置，析出沉淀物。分取沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，混均，用80％乙醇制粒，60℃以下干燥，装入胶囊，制成胶囊剂，或者压制成软胶囊。每日3次，每次2～3粒。
实施例4取黄芪药材粗粉499克，加7倍量70％乙醇，回流提取3次，滤过，合并滤液。提取液减压浓缩，即为上柱样品液。将样品液按1BV上样量通入装有D101树脂的色谱柱中，依次用10BV的水、6BV的40％乙醇、9BV的70％乙醇、10BV的95％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分；70％乙醇洗脱液减压浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得黄芪总皂苷提取物，备用。
取三七粗粉124克，加8倍量70％乙醇提取3次。合并提取液，滤过，滤液浓缩，通过D101型大孔树脂柱，加样量为0.4BV，控制流速2.0BV/h，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，弃去洗脱液，再用5BV的70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，回收乙醇，减压浓缩，60℃减压干燥，得三七提取物，备用。
取灯盏细辛159克，粉碎成粗粉，加8倍量75％乙醇提取三次，合并提取液，滤过，滤液浓缩成浸膏，加5％碳酸氢钠溶液调节pH值至约7～8，搅拌使溶解，滤过，滤液加入稀盐酸溶液适量，调节pH值1～2，室温静置12小时，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，用适量蒸馏水洗至pH值中性，再用乙醇洗至乙醇液呈淡黄色，加乙醇加热溶解，回收乙醇至一定量，趁热滤过，滤液静置，待沉淀完全后，滤过，将沉淀物60℃真空干燥，备用。
取乙二胺四醋酸钙钠2.5g溶于注射用水500ml中，加入灯盏花提取物0.9克，搅匀，加入5％碳酸氢钠溶液适量，调pH值至7.0～7.5，充分搅拌使溶解，加入三七提取物9.9克，搅拌使溶解，得溶液(A)备用。
另取黄芪提取物0.7克，加乙醇∶丙二醇(7∶3)溶液，搅拌使溶解，得溶液(B)。
将溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水至1000ml，灭菌，即得到本发明药物组合物注射液。静脉滴注，用5～10％葡萄糖注射液250～500ml或氯化钠注射液250～500ml，稀释后，缓缓滴注，一日1次，一次10～20ml。
实施例5黄芪100克三七25克灯盏细辛32克。
取黄芪药材粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱。收集70％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，滤过，滤液浓缩后通过非极性树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加75％乙醇提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，混均，用70％乙醇制粒，制成颗粒剂，每日3次，每次18g。
实施例6黄芪500克三七125克灯盏细辛160克。
取以上三位药材，混合粉碎后，第一次加入7倍量水，煎煮1.5小时，滤过，滤液备用；第二次加入5倍量水，煎煮1小时，滤过，滤液备用；第三次加入3倍量水，煎煮0.5小时，滤过，滤液备用。
合并三次滤液，浓缩至10000ml，加入山梨酸20克，蔗糖500克，混均，制成合剂，每日三次，每次70ml。
实施例7黄芪480克三七120克灯盏细辛150克。
取以上三位药材，粉碎成粗粉，第一次加入4倍量50度白酒，浸渍72小时，滤过，滤液备用；第二次加入3倍量50度白酒，浸渍48小时，滤过，滤液备用；第三次加入2倍量50度白酒，浸渍24小时，滤过，滤液备用。
合并三次滤液，加入蜂蜜200ml，混均，制成酒剂，每日三次，每次30～50ml。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪80～120重量份、三七20～30重量份、灯盏细辛26～38重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪90～110重量份、三七23～28重量份、灯盏细辛30～35重量份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪100重量份、三七25重量份、灯盏细辛32重量份。
4.如权利要求1或2或3所述药物组合物的制备方法，其特征在于取黄芪药材粗粉，加50～90％乙醇，提取1～3次，滤过，提取液浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇、85～95％乙醇洗脱，收集40～80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加50～90％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩后通过非极性树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用35～85％乙醇溶液洗脱，收集35～85％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加60～90％乙醇提取1～4次，提取液浓缩后，调节pH值至弱碱性，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，静置，析出沉淀物，分取沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物；合并上述三个提取物，加入适量辅料，制成药物剂型。
5.如权利要求4所述的药物组合物制备方法，其特征在于所说的药物剂型是丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂当中的一种。
6.如权利要求5所述注射剂的制备方法，其特征在于该方法为取黄芪药材粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，滤过，滤液浓缩后通过AB-8树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加75％乙醇提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物，分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物；取适量稳定剂溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液A；另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，搅拌使溶解，得溶液B；将溶液A加入到溶液B中，混合，加注射用水，灭菌，得到注射液。
7.如权利要求6所述注射剂的制备方法，其特征在于所说的稳定剂是乙二胺四醋酸钙钠。
8.如权利要求6所述注射剂的制备方法，其特征在于所说的乙醇∶丙二醇溶液的配比是1∶1。
9.如权利要求6所述注射剂的制备方法，其特征在于将A、B混合后，加入0.1％～0.5％的活性炭，煮沸5～30分钟，滤过，得到注射液。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于将A、B混合后，加入0.3％的活性炭，煮沸15分钟，滤过，得到注射液。
11.如权利要求1或2或3所述的药物组合物在制备治疗视网膜静脉阻塞的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物及其制备方法，特别是一种用于治疗视网膜静脉阻塞的注射剂。该药物是以黄芪、三七、灯盏细辛为原料，按照一定的配伍要求，用乙醇对三种原料药进行分别或者混合提取、精制得到提取物，然后加入辅料，制备成各种药物剂型，优选制备成注射剂。
文档编号A61K9/00GK1883539SQ20051020033
公开日2006年12月27日 申请日期2005年6月20日 优先权日2005年6月20日
发明者张红 申请人:北京华夏医胜创新科技有限责任公司
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及该组合物的制备方法，特别涉及一种用于治疗视网膜静脉阻塞的中药组合物及其制备方法背景技术视网膜静脉阻塞是一种较为常见的眼底疾病，视网膜静脉阻塞的特征是视网膜血液瘀滞、视网膜出血和水肿。可分为视网膜中央静脉阻塞及视网膜静脉分支阻塞。Hayreh把它分成？静脉郁滞性视网膜病变(中青年视力下降较少，视网膜静脉循环郁滞、预后较好)。？出血性视网膜病变(中年以上视力高度减退，静脉郁滞前后有中央动脉供血不足，预后差)。
一些原因使眼底静脉栓塞而导致眼底出血，病程缓慢冗长，造成视力下降。少数病人可并发严重的合并症，导致视力明显下降，甚至失明。该病原因比较复杂，常由多种因素造成。
引起该病的原因有血管外的压迫，静脉血流的淤滞以及静脉血管内壁的损害等，血管外的压迫多由于视神经内或视网膜动、静脉交叉处的视网膜中央动脉或分支小动脉硬化，压迫其邻近的静脉所致，因此多见于高血压或动脉硬化等老年病人；静脉血流的淤滞则见于视网膜动脉灌注压不足或眼压增高及血液粘滞度增高的病人，因而常发生于颈动脉供血不足、大量失血、低血压、青光眼，红细胞增多症等；血管内壁的损害常由于视网膜血管炎所致，因此多见于年轻病人及糖尿病患者。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种具有益气养元，扶正祛邪，活血祛瘀，通脉活络作用、用于治疗视网膜静脉阻塞的中药组合物；本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明的目的是这样实现的，根据中医药学理论，利用草药独特的药性，采用黄芪、三七、灯盏细辛按照一定的配伍要求，经过特定工艺加工而成。
制备本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)黄芪80～120重量份三七20～30重量份灯盏细辛26～38重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选配比为(按重量份)
黄芪90～110重量份三七23～28重量份灯盏细辛30～35重量份。
本发明药物组合物的原料药组成最佳配比为(按重量份)黄芪100重量份三七25重量份灯盏细辛32重量份。
本发明药物可以将黄芪、三七和灯盏细辛混合，一起用乙醇或水提取，得提取物，加入赋形剂，制成不同的药物剂型，也可以分别提取三种原料药，得到三种提取物，然后，合并上述三个提取物，加入适量辅料，制成临床上可以接受的剂型，如丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂。
如果先分别提取三种原料药得到提取物，然后再制成制剂，其制备步骤如下先分别制备上述的黄芪提取物、三七提取物和灯盏细辛提取物取黄芪药材粗粉，加50～90％乙醇，优选加70％乙醇，提取1～3次，优选提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有非极性或弱极性树脂的色谱柱中，优选AB-8树脂，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇、85～95％乙醇洗脱，优选依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱。收集40～80％乙醇洗脱部分，优选收集70％乙醇洗脱部分，并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加50～90％乙醇，优选加70％乙醇，提取1～3次，优选提取3次，滤过，滤液浓缩后通过非极性或弱极性树脂柱，优选AB-8树脂，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用35～85％乙醇溶液洗脱，优选用70％乙醇溶液洗脱，收集35～85％乙醇洗脱部分，优选收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加60～90％乙醇，优选加75％乙醇，提取1～4次，优选提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至中性至弱碱性，优选pH值约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，优选pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，加入适量辅料，制成临床上可以接受的剂型。其中本发明药物组合物注射剂的制备方法优选如下取适量稳定剂溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液A；
另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，优选1∶1的溶液，搅拌使溶解，得溶液B将溶液A加入到溶液B中，混合，加注射用水，灭菌，得到注射液。
本发明的药物产品可以以原料的组成表述，也可以以提取物的用量配比描述。
如果以上述三种提取物为原料制备本发明药物组合物，用三种提取物的配比表述本发明药物如下黄芪提取物6～10重量份、三七提取物80～120重量份、灯盏细辛提取物8～12重量份。
三种提取物的优选配比为黄芪提取物7～9重量份、三七提取物90～110重量份、灯盏细辛提取物9～11重量份。
三种提取物的优选配比为黄芪提取物8重量份、三七提取物100重量份、灯盏细辛提取物10重量份。
本发明药物的优选剂型是注射剂，以三种提取物为原料制备本发明药物注射液的方法为取适量稳定剂，优选取乙二胺四醋酸钙钠0.5g，溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至中性至弱酸性，优选pH值7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液(A)。
另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，优选乙醇∶丙二醇＝1∶1的溶液，搅拌使溶解，得溶液(B)。
将溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水灭菌，即得到本发明药物组合物注射液。
本发明药物用于治疗视网膜静脉阻塞，具益气养元，扶正祛邪，活血祛瘀，通脉活络等功效。
本发明药物的发明人在原料药的选择及其配伍方面，进行了一系列实验研究，通过拆方试验研究，确定了制备本发明药物的原料药组成，使其与现有技术相比具有明显的突出疗效优势，实现了重要配伍组合的增效目的。
下述实验例通过观察本发明注射液制剂治疗视网膜静脉阻塞的疗效，进一步说明本发明药物的医疗用途。
为了了解其组方伍用增效作用，本研究采用4种活血化瘀动物试验模型，观察本发明注射液三种组分伍用对动物药理作用的影响。
实验例一 本发明注射液不同组份对家兔实验性视网膜出血、静脉阻塞的治疗作用1、受试样品三七提取物、灯盏细辛提取物、黄芪提取物。1g提取物相当于生药67g。
药物配制①三七提取物单药组6mg/kg。称取三七提取物600mg加蒸馏水至100ml，浓度为0.6％，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
②灯盏细辛提取物单药组3mg/kg。称取三七提取物300mg加蒸馏水至100ml，浓度为0.3％，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
③黄芪提取物单药组3mg/kg，称取黄芪提取物300mg加蒸馏水至100ml，浓度为0.3％，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
④三七、灯盏细辛伍用组称取三七600mg、灯盏细辛提取物300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑤三七、黄芪伍用组称取三七提取物600mg、黄芪提取物300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑥灯盏细辛、黄芪伍用组称取灯盏细辛、黄芪提取物各300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑦三七、灯盏细辛、黄芪伍用组称取三七600mg、灯盏细辛、黄芪提取物各300mg加蒸馏水至100ml，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
2、阳性对照药血塞通注射液(简称血塞通)，批号020101，规格250mg/5ml，昆明兴中制药有限责任公司生产，静脉注射。药物配制取60ml(50mg/ml)血塞通注射液加注射用水至100.0ml，配成3％，冷藏待用。
3、检测仪器及试剂血管造影剂荧光素钠，配成20％溶液，100ml。
3％戊巴比妥钠取戊巴比妥钠3g加水至100ml，室温保存。
1％阿托品取阿托品1g加水至100ml，室温保存。
天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
Aγ+眼科激光治疗机，型号ARGON/YAGE，西德制造。
造模用激光能量5.0WJ X0.2秒X 300μX100。
彩色荧光眼底成像系统机，型号TRC-50EX，日本制造。
眼底检查镜COWa眼底照相机，日本产品。
4、动物家兔72只。
5、试验方法与结果取家兔72只，随机分为9组，每组8只。
①阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g体重；②血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，静脉注射0.1ml/100g体重。
③三七提取物单药组6mg/kg。取药物浓度为0.6％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
④灯盏细辛提取物单药组3mg/kg。取灯盏细辛提取物浓度为0.3％的溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑤黄芪提取物单药组3mg/kg，取黄芪提取物浓度为0.3％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑥三七、灯盏细辛伍用组取三七、灯盏细辛提取物混合药液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑦三七、黄芪伍用组取三七提取物、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑧灯盏细辛、黄芪伍用组取灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑨三七、灯盏细辛、黄芪伍用组取三七、灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。以上各组动物每天给药一次，连续2周，停药后继续观察4周。
模型制备造模前每只兔的左眼交替点1％阿托品和托吡卡胺充分散瞳。3％戊巴比妥钠耳缘静脉注射(1ml/kg)，用氩离子激光光凝左眼视网膜动脉各分支，造成缺血型视网膜中静脉阻塞，光凝长度为1PD，光斑大小为50μm，曝光时间为0.2秒，能量为120-170mW，直至血管内血流中断成白色。
观察指标及评价方法折方试验观察项目主要有治疗前和治疗后6周内隔天眼底检查(治疗前、治疗后1、3、5………41天)，并记录治疗后眼底出血完全吸收时间，判断标准及等级见表1，等级为0级时为出血被完全吸收。统计照射后出血被完全吸收的时间；用T-test统计软件，给药组与对照组出血被完全吸收时间进行比较，评价药物的治疗效果，激光光束致视网膜损伤症状及分级见表1。
表1、激光光束致视网膜损伤症状及分级
兔眼底出血完全吸收时间及动物数见表2。
表2、对兔眼底出血完全吸收时间的影响(X±S，n＝8)
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与三七、灯盏细辛组比较，#P＜0.05。
试验结果显示三七提取物对动物激光致视网膜出血吸收有一定的促进作用，三七提取物与灯盏细辛提取物伍用对家兔视网膜促进出血吸收作用有进一步增强(P＜0.05)。当三七提取物、灯盏细辛提取物、黄芪提取物三者合用时，其治疗效果明显增强，统计差别显著(P＜0.05-P＜0.01)，完全吸收时间比对照组提前7天，统计差别显著(P＜0.01)。
实验例二 本发明注射液不同组份伍用对大鼠旁路血栓形成的影响1、受试样品同实验例一。
药物配制方法同实验例一。
2、阳性对照药同实验例一。
3、仪器及试剂天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
聚乙稀管(内经1mm，2mm)，动脉夹，丝线(4#、7#)，手术器械等。
12500μ/ml肝素注射液上海生物化学制药厂，批号990407。
4、动物Wister大鼠，90只，体重300～340g，雌雄各半。
5、试验方法与结果取大白鼠90只，随机分为9组，每组10只，雌雄各半。
①阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g体重；②血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，静脉注射0.1ml/100g体重。
③三七提取物单药组6mg/kg。取药物浓度为0.6％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
④灯盏细辛提取物单药组3mg/kg。取三七提取物浓度为0.3％的溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑤黄芪提取物单药组3mg/kg，取黄芪提取物浓度为0.3％溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑥三七、灯盏细辛伍用组取三七、灯盏细辛提取物混合药液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑦三七、黄芪伍用组取三七提取物、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑧灯盏细辛、黄芪伍用组取灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
⑨三七、灯盏细辛、黄芪伍用组取三七、灯盏细辛、黄芪提取物混合溶液，静脉注射体积0.1ml/100g体重。以上各组动物每天给药一次，连续7天，于末次给药后30分钟，腹腔注射3％的戊巴比妥钠0.035g/kg，气管内插聚乙烯管以便清除气管内分泌物，并分离右颈总动脉及左颈外静脉。在三段聚乙烯管的中段放入一段长5cm的4号手术丝线。将肝素生理盐水溶液(50μ/ml)充满聚乙烯管。将管一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉，手术完成5分钟后开放血流，则血流从右颈总动脉流经聚乙烯管，返回左颈外静脉。开放血流15分钟后中断血流，迅速取出丝线称重，总重量减去丝线重(6mg)即血栓湿重，并进行统计学处理(t检验)。
结果见表3。
表3、三组方伍用静脉注射对大鼠血栓形成的影响(X±S，n＝6)
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与三七、灯盏细辛组比较，#P＜0.05。
结果显示三七单药6mg/kg组可减少动-静脉环路血栓的湿重，抑制率6.6％，三七分别与灯盏细辛和黄芪伍用，其抑制率提高至9.8-9.4％。三七与灯盏细辛伍和黄芪三者伍用，其抑制率提高至18.4％(P＜0.01)。提示三七提取物、灯盏细辛提取物、黄芪提取物三者合用明显增强抑制血栓形成的作用，疗效优于两味药物的组合。
实验例三 本发明注射液不同组份伍用对家兔颈动脉血栓溶栓作用的影响1、受试样品同实验例一。
药物配制同实验例一。
2、阳性对照药同实验例一。
3、测定试剂纤维蛋白原(FIBROTEK，FIB)测定试剂盒，批号527523，日本德灵公司产品。
凝血酶原时间(Prothrombin Time，PT)测定试剂盒，批号527062，日本德灵公司产品。
凝血酶时间(Thrombin Time，TT)测定试剂盒，批号611005，日本德灵公司产品。
白陶土激活的部分凝血活酶时间(Kaolin-Activated PartialThromboplastin Time，APTT)测定试剂盒，批号527142，日本德灵公司产。
戊巴比妥钠进口分装，配成3％溶液备用。
肝素上海第一生化药业公司、上海生物化学制药厂产品。配制成0.5％溶液备用。
氯化钠注射液北京双鹤药业股份有限公司产品，批号020318812。
Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。
4、动物家兔72只，体重2.25±0.23kg，雌雄兼用。
5、仪器Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。
MFV-2100电磁血流量计，日本光电公司产品。
SEN-7103电子刺激器，日本光电公司产品。
CA-6000全自动血凝仪，日本Sysmex公司产品6、试验方法与结果(1)试验方法手术过程，试验前动物禁食12小时，自由饮水。3％戊巴比妥钠(30mgkg-1)麻醉动物。动物仰卧位固定在手术台上，颈部正中切口，分离出一侧颈动脉，长度3cm左右，将直径2.5～3.5mm的电磁流量计探头安放在合适位置，电磁流量计探头连接于MFV-2100电磁流量计上，记录颈动脉的血流量；耳缘静脉建立静脉通道，供给药、补液和取血用。
血栓模型制备在血流探头近心端取长度约1cm的血管，在此段血管内用特制的血管钳夹闭动脉，使血管内膜粗糙，每次夹闭20sec，间隔5min，重复6次。将颈动脉的近心端和远心端用动脉夹阻断血流，向该段血管内注入10U凝血酶，20min后去掉动脉夹，电磁流量计读数为零，表明颈动脉已形成稳定的血栓，稳定10min后即可进行各项参数的观察和测定。
手术完毕及模型成功后，将所有信号输入powerlab/8SP记录仪并经生物信号采集和处理系统进行连续信号采集，试验参数由计算机全程进行监控和显示并储存于计算机上，试验结束后，作脱机处理进行数据分析、打印原始记录。
动物分组家兔72只，雌雄兼用，按体重随机分为9组，每组8只。阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g；血塞通注射液30mg/kg，取3.0％血塞通注射液100ml，静脉注射0.1ml/100g。其它给药组按以上给药剂量静脉注射给药，静脉注射体积0.1ml/100g体重。
给药时间为在颈动脉血栓形成并老化30min后，以上药物1分钟内静脉注射完，观察时间为120min。
检测指标颈动脉血流量将电磁流量计的输出端连接至Powerlab/8SP记录仪输入端，显示和储存数据，同时，电磁流量计上显示出每分钟血流量，读取并记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的血流量值。
心电图将针状电极插入四肢，经ML-132心电放大器测量标准II导联心电图。记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的心率变化。
栓塞动脉再通的判定连续记录颈动脉血流量，以给药后血流量回升达到基础值的50％以上，为颈动脉血管再通，再灌注后血流量再次降至零为再栓塞。统计给药后120min血管再通动物数，并计算血管再通率(％)。
统计学处理所有数据以平均数±标准差表示。采用配对t检验比较给药前后均数差异显著性，非配对t检验比较组间平均数差异显著性。
(2)、结果①对颈动脉血栓的溶栓效果家兔静脉注射三种提取物单药、伍用给药溶栓效果见表4。
表4、对栓塞颈动脉再通动物数及再通率的影响(X±S，n＝8)
试验结果显示，血栓形成后，血管外观呈暗红色，血栓形成段血流呈终止状态。生理盐水对照组在整个试验过程中未见栓塞血管再通。三七提取物组血管再率为37.5％，与灯盏细辛伍用血管再通率分别为50％。当三者合用时，血管再通率提高至87.5％，提示三者合用作用明显增强，优于两药合用。
②本发明注射液对家兔颈动脉栓塞后血流量的影响试验结果见表5。
表5.对家兔血流量的影响(X±S，n＝6)
血流量为ml/min。与三七组比较*P＞0.05，与三七+灯盏辛组比较#P＞0.05，与三七+黄芪组比较，▲P＞0.05，▲▲P＞0.05。
于生理盐水对照组的栓塞血管未再通，给药后，颈动脉血流量基本维持在栓塞后的水平，直至试验结束。三七、黄芪、灯盏细辛三位单药组和三七与黄芪伍用或三七与灯盏细辛伍用组，三七+黄芪+灯盏细辛血流量明显高于三七单药组和三七与黄芪和三七与灯盏细辛伍用组，提示三组提取物伍用效果增强。
③对家兔心率影响结果见表6。
表6、对家兔心率的影响(X±S，n＝6)
家兔心率(次/min)。
各组动物血栓形成后，心电图无明显变化，所有试验家兔的心率变化不大，与给药前比较，本发明注射液各剂量组和阳性药血塞通对照组对心率无明显变化，与生理盐水对照组比较差别也不显著(P＞0.05)，提示本发明注射液各组份在具有溶血栓剂量时对心功能无影响。
采用三氯化铁致家兔颈动脉血栓形成模型，溶栓结果显示三七、灯盏细辛、黄芪单一提取物溶血栓效果不明显。三者合用时，血管再通率明显提高，由单药再通率25-37.5％提高至87.5％。
实验例四 本发明注射液不同组份伍用对大鼠全血比粘度的影响1、受试样品同实验例一。
药物配制同实验例一。
2、阳性对照药同实验例一。
3、仪器及试剂普利生公司生产LBY-N6B锥-板粘度计。12500μ/ml肝素注射液上海生物化学制药厂，批号990407。
4、动物大鼠80只，雌雄各半，体重250-280g。
5、试验方法与结果大鼠90只，雌雄各半，按体重随机分为9组，每组10只。阴性对照组，静脉注射注射用水体积0.1ml/100g体重。血塞通注射液，3％，30mg/kg，静脉注射体积0.1ml/100g体重。给药组动物按以上给药剂量静脉注射给药。以上各组给药途径均为静脉注射，每日一次，连续7天。第7天给药1小时后，用5％异戊巴比妥钠麻醉动物，腹主动脉取血，分离血浆。采用普利生公司生产LBY-N6B锥-板粘度计，测定大鼠外周血血浆比粘度。降低率计算如下公式
结果见表7表7、对血浆比粘度的影响(X±S，n＝10)
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与三七、灯盏细辛组比较，#＜0.05；结果显示在本试验条件下，灯盏细辛、黄芪单组份及两组份伍用均未能显示降低血浆粘度作用。三七提取物对大鼠血浆比粘度比对照组下降12.0％(P＞0.05)。三七与灯盏细辛伍用降低血浆粘度作用增至18.7％，三七、灯盏细辛、黄芪三种组份合用，其降底全血浆比粘度作用更为明显，其降低率提高至30.7％(P＞0.01)。
实验例五 本发明注射液三种组份不同配比对离体凝血时间的影响试验材料1、受试样品同实验例一。
药物配制分别取三七提取物5、3、1mg；灯盏细辛提取物5、3、1mg；黄芪提取物1.6、0.8、0.4mg，按L9(33)正交表进行正交试验方法(见表8)分别溶解于10ml生理盐水，并用0.1Mol/L的碳酸氢钠溶液调节pH～7.2，各取0.5ml置于5ml玻璃管中，因素试管号为1-9。现配现用。
表8、本发明注射液抗凝血作用的因素和水平
2、血液样品Beagle狗后肢静脉取血18ml。动物由军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号SCXK-(军)2002-001号，动物设施条件认可证号SYXK-(军)2002-001号。
3、测量仪器天平，Adventurer，AR1140，SNR1203140383。
4、实验方法与结果Beagle狗后肢静脉取血18ml，0.5ml沿试管壁注入9个试管药液中，轻轻混匀，然后将试管放入37℃水浴中，每隔30秒钟将试管倾斜一次，直至试管倒置时血液不流动为止，计算凝血时间。试验开始第60分钟，取出试管内上清液，并称血块重量。试验重复1次。
药效评定指标1、形成血块时间(肉眼观察法)及血块的重量(称量法)。各试验管形成血块时间及血块重量进行比较，凝血时间的延长，血块重量变轻，均示为受试物抗凝效果。
通过试验找出3因素(三七、灯盏细辛、黄芪)的3个水平(高、中、低剂量)较佳组合，结果见表9-10。
表9、本发明提取物抗凝血块重量正交设计及结果
表10、本发明提取物抗凝血时间正交设计及结果
结果表明，本发明提取物对纤维蛋白原转变成纤维蛋白所需时间有明显影响，提示该药抗凝血作用可能与凝血的因子激活有关。另外，三七的差值绝对值最大，说明三七对实验影响最大，且大剂量的抗凝血时间最长，血块重量较小。而灯盏细辛、黄芪各给药剂量对实验的影响较小。故其较佳组合为三七高剂量，灯盏细辛和黄芪各用低剂量。
以下是本发明药物的制备实施例，但是，本发明药物的剂型并不尽限于如下所说的具体实施例1黄芪501克三七126克灯盏细辛161克取黄芪药材粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，滤过，滤液浓缩后通过装有AB-8树脂的色谱柱中，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加75％乙醇提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
取乙二胺四醋酸钙钠0.5g溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液(A)。
另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇(1∶1)溶液，搅拌使溶解，得溶液(B)。
将溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水灭菌，即得到本发明药物组合物注射液。每日一次，每次10～20ml。
实施例2黄芪1200克三七300克灯盏细辛380克取黄芪药材粗粉，加90％乙醇，提取2次，滤过，提取液浓缩后通入装有D101树脂的色谱柱中，依次用水、15％乙醇、40％乙醇、85％乙醇洗脱。收集40％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加50％乙醇，提取2次，滤过，滤液浓缩后通过D101树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用35％乙醇溶液洗脱，收集35％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加60％乙醇提取2次，提取液浓缩后，调节pH值至弱碱性，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，静置，析出沉淀物。分取沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，用60％乙醇制粒，60℃以下干燥，制成片剂。每日3次，每次3～4片。
实施例3黄芪100克三七25克灯盏细辛32克。
取黄芪药材粗粉100克，加50％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有D101-T树脂的色谱柱中，依次用水、25％乙醇、80％乙醇、95％乙醇洗脱。收集80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉25克，加50％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩后通过D101-T树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用85％乙醇溶液洗脱，收集85％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；
取灯盏细辛药材32克，加60％乙醇提取4次，提取液浓缩后，调节pH值至弱碱性，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，静置，析出沉淀物。分取沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，混均，用80％乙醇制粒，60℃以下干燥，装入胶囊，制成胶囊剂，或者压制成软胶囊。每日3次，每次2～3粒。
实施例4取黄芪药材粗粉499克，加7倍量70％乙醇，回流提取3次，滤过，合并滤液。提取液减压浓缩，即为上柱样品液。将样品液按1BV上样量通入装有D101树脂的色谱柱中，依次用10BV的水、6BV的40％乙醇、9BV的70％乙醇、10BV的95％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分；70％乙醇洗脱液减压浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得黄芪总皂苷提取物，备用。
取三七粗粉124克，加8倍量70％乙醇提取3次。合并提取液，滤过，滤液浓缩，通过D101型大孔树脂柱，加样量为0.4BV，控制流速2.0BV/h，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，弃去洗脱液，再用5BV的70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，回收乙醇，减压浓缩，60℃减压干燥，得三七提取物，备用。
取灯盏细辛159克，粉碎成粗粉，加8倍量75％乙醇提取三次，合并提取液，滤过，滤液浓缩成浸膏，加5％碳酸氢钠溶液调节pH值至约7～8，搅拌使溶解，滤过，滤液加入稀盐酸溶液适量，调节pH值1～2，室温静置12小时，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，用适量蒸馏水洗至pH值中性，再用乙醇洗至乙醇液呈淡黄色，加乙醇加热溶解，回收乙醇至一定量，趁热滤过，滤液静置，待沉淀完全后，滤过，将沉淀物60℃真空干燥，备用。
取乙二胺四醋酸钙钠2.5g溶于注射用水500ml中，加入灯盏花提取物0.9克，搅匀，加入5％碳酸氢钠溶液适量，调pH值至7.0～7.5，充分搅拌使溶解，加入三七提取物9.9克，搅拌使溶解，得溶液(A)备用。
另取黄芪提取物0.7克，加乙醇∶丙二醇(7∶3)溶液，搅拌使溶解，得溶液(B)。
将溶液(A)加入到溶液(B)中，混合，加注射用水至1000ml，灭菌，即得到本发明药物组合物注射液。静脉滴注，用5～10％葡萄糖注射液250～500ml或氯化钠注射液250～500ml，稀释后，缓缓滴注，一日1次，一次10～20ml。
实施例5黄芪100克三七25克灯盏细辛32克。
取黄芪药材粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱。收集70％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，滤过，滤液浓缩后通过非极性树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加75％乙醇提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物。分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物。
合并上述三个提取物，混均，用70％乙醇制粒，制成颗粒剂，每日3次，每次18g。
实施例6黄芪500克三七125克灯盏细辛160克。
取以上三位药材，混合粉碎后，第一次加入7倍量水，煎煮1.5小时，滤过，滤液备用；第二次加入5倍量水，煎煮1小时，滤过，滤液备用；第三次加入3倍量水，煎煮0.5小时，滤过，滤液备用。
合并三次滤液，浓缩至10000ml，加入山梨酸20克，蔗糖500克，混均，制成合剂，每日三次，每次70ml。
实施例7黄芪480克三七120克灯盏细辛150克。
取以上三位药材，粉碎成粗粉，第一次加入4倍量50度白酒，浸渍72小时，滤过，滤液备用；第二次加入3倍量50度白酒，浸渍48小时，滤过，滤液备用；第三次加入2倍量50度白酒，浸渍24小时，滤过，滤液备用。
合并三次滤液，加入蜂蜜200ml，混均，制成酒剂，每日三次，每次30～50ml。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪80～120重量份、三七20～30重量份、灯盏细辛26～38重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪90～110重量份、三七23～28重量份、灯盏细辛30～35重量份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪100重量份、三七25重量份、灯盏细辛32重量份。
4.如权利要求1或2或3所述药物组合物的制备方法，其特征在于取黄芪药材粗粉，加50～90％乙醇，提取1～3次，滤过，提取液浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇、85～95％乙醇洗脱，收集40～80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加50～90％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩后通过非极性树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用35～85％乙醇溶液洗脱，收集35～85％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加60～90％乙醇提取1～4次，提取液浓缩后，调节pH值至弱碱性，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值至酸性，静置，析出沉淀物，分取沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物；合并上述三个提取物，加入适量辅料，制成药物剂型。
5.如权利要求4所述的药物组合物制备方法，其特征在于所说的药物剂型是丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂当中的一种。
6.如权利要求5所述注射剂的制备方法，其特征在于该方法为取黄芪药材粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、40％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得黄芪总皂苷提取物；取三七粗粉，加70％乙醇提取3次，滤过，滤液浓缩后通过AB-8树脂柱，先以蒸馏水洗至流出液不显molish反应，再用70％乙醇溶液洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，浓缩并干燥，得三七提取物；取灯盏细辛药材，加75％乙醇提取3次，提取液浓缩后，调节pH值至约7～8，滤过，滤液加入稀酸溶液适量，调节pH值1～2，静置，析出黄色沉淀物，分取黄色沉淀物，干燥，得到灯盏细辛提取物；取适量稳定剂溶于注射用水中，加入灯盏细辛提取物，调pH值至7.0～7.5，加入三七提取物，得溶液A；另取黄芪提取物，加乙醇∶丙二醇＝7～3∶3～7的溶液，搅拌使溶解，得溶液B；将溶液A加入到溶液B中，混合，加注射用水，灭菌，得到注射液。
7.如权利要求6所述注射剂的制备方法，其特征在于所说的稳定剂是乙二胺四醋酸钙钠。
8.如权利要求6所述注射剂的制备方法，其特征在于所说的乙醇∶丙二醇溶液的配比是1∶1。
9.如权利要求6所述注射剂的制备方法，其特征在于将A、B混合后，加入0.1％～0.5％的活性炭，煮沸5～30分钟，滤过，得到注射液。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于将A、B混合后，加入0.3％的活性炭，煮沸15分钟，滤过，得到注射液。
11.如权利要求1或2或3所述的药物组合物在制备治疗视网膜静脉阻塞的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物及其制备方法，特别是一种用于治疗视网膜静脉阻塞的注射剂。该药物是以黄芪、三七、灯盏细辛为原料，按照一定的配伍要求，用乙醇对三种原料药进行分别或者混合提取、精制得到提取物，然后加入辅料，制备成各种药物剂型，优选制备成注射剂。
文档编号A61K9/00GK1883539SQ20051020033
公开日2006年12月27日 申请日期2005年6月20日 优先权日2005年6月20日
发明者张红 申请人:北京华夏医胜创新科技有限责任公司
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