复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的制作方法
专利名称：复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及药品组合物及其生产方法，是一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂及其制备工艺，特别适用于对非典型肺炎的预防。
背景技术：
非典型肺炎是一种名为冠状病毒引起的，传染性很强的，严重威胁人类身心健康的呼吸系统疾病。世界卫生组织将这一传染性非典型肺炎称之为严重急性呼吸综合症(SevereAcuute Respiratory Syndromes)，简称SARS。
中国维吾尔医药学是中华医药学的重要组成部分，中国维吾尔人民在长期生活实践中形成了一套完整的维吾尔医药理论体系。非典型肺炎，维吾尔医学列为流行病之一，归属于“瓦巴”病症(即瘟病)的范畴，并且已经认识到这类病症具有较强的传染性，即传播较快、发病较高的流行病学特点，如一千多年前伟大的医药学家阿维森那所著巨著《艾里 卡农非提比》(大医典)中和800多年前著名的和田维吾尔医药学家加马里丁·阿克萨拉依所著专著《阿克萨拉依》(白色宫殿)中，曾记载此类病症，并其称之为“努木尼亚 瓦巴依”、“杂提日也瓦巴依”(瘟疫性肺炎)、“台皮瓦巴依”(瘟病性发热)，“苏阿里亚比斯瓦巴依”(瘟疫性干咳嗽)等。维吾尔医学认为在空气中流窜而腐败的特殊“加拉斯木”(即病毒)，通过呼吸道等途径，侵犯人体，使肺脏气质发生干热性或胆液质性急剧变化，从而导致“赛非拉依木台热开”(即烧焦胆液质)的产生，促使这一疾病的爆发。并认为此病多发生在肺脏元气虚弱、素质较差的人群中，通过空气传染；症状多见为发热发烧，头痛脑胀，发冷怕寒，全身酸痛，呼吸困难，剧烈咳嗽，多为干咳，顽痰不化，时有痰中血丝等。若及时不进行预防，治疗效果较差。
发明内容
本发明提供了一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂及其制备工艺，其复方内鲁帕尔抗病毒汤剂能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力，从而特别适用于对非典型肺炎的预防。
本发明的技术方案之一是这样来实现的一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，其按原料重量份含有睡莲花100份至180份、菊苣100份至180份、欧李100份至180份、蜀葵花80份至120份、神香草80份至120份、一枝蒿80份至120份、琐琐葡萄48份至72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份至24份。
本发明的技术方案之二是这样来实现的上述复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的制备工艺是按下述步骤进行的在上述所需要量的睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿和琐琐葡萄七种原料中，按七种原料的总重量加6倍至10倍量水煎煮1次至3次，时间为0.5小时至2.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至药材药液为1∶3至1∶7时，在每100毫升药液中，加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂B组分1毫升至3毫升，再加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂A组分2毫升至6毫升，搅匀，60℃至70℃水浴保温0.5小时至1.5小时，2℃至6℃静置20小时至25小时，滤过，滤液减压浓缩至在60℃时相对密度为1.05至1.08，加入常规药用量的2％尼泊金乙酯乙醇液、常规药用量的10％苯甲酸液和所需要量的蛋白糖，加水使其液体总重量至1000份得到复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
本发明是根据维吾尔医药学理论，经过大量的实验和优选才得到的。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂由睡莲花等七味药组成的复方，其第一味药“睡莲花”维语称“内鲁帕尔”，本制剂的名称是根据睡莲花的维语名称，加剂型名构成的。
本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，产品质量稳定，在临床剂量条件下是安全的，其量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，对体外B淋巴细胞培养有明显的增殖作用，对T淋巴细胞无明显影响，能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，其能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力，从而特别适用于对非典型肺炎的预防。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂制备工艺便于实现产业化。
具体实施例方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定具体的实施例1，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣100份、欧李100份、蜀葵花80份、神香草80份、一枝蒿80份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例2，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣180份、欧李180份、蜀葵花120份、神香草120份、一枝蒿120份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例3，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣180份、欧李100份、蜀葵花120份、神香草80份、一枝蒿120份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例4，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣100份、欧李180份、蜀葵花80份、神香草120份、一枝蒿80份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例5，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣100份、欧李180份、蜀葵花120份、神香草80份、一枝蒿80份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例6，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣180份、欧李100份、蜀葵花80份、神香草120份、一枝蒿120份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例7，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣100份、欧李100份、蜀葵花80份、神香草120份、一枝蒿120份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例8，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣180份、欧李180份、蜀葵花120份、神香草80份、一枝蒿80份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例9，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花140份份、菊苣140份、欧李140份、蜀葵花100份、神香草100份、一枝蒿100份、琐琐葡萄60份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖20份。
上述实施例中的复方内鲁帕尔抗病毒汤剂可通过以下制备工艺得到在上述所需要量的睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿和琐琐葡萄七种原料中，按七种原料的总重量加6倍或10倍量水煎煮1次或3次，时间为0.5小时或2.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至药材药液为1∶3或1∶7时，在每100毫升药液中，加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂B组分1毫升或3毫升，再加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂A组分2毫升或6毫升，搅匀，60℃或70℃水浴保温0.5小时或1.5小时，2℃或6℃静置20小时或25小时，滤过，滤液减压浓缩至在60℃时相对密度为1.05或1.08，加入常规药用量的2％尼泊金乙酯乙醇液、常规药用量的10％苯甲酸液和所需要量的蛋白糖，加水使其液体总重量至1000份得到复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
在本发明中所用的尼泊金乙酯乙醇液和苯甲酸液都是药剂学常用的防腐剂，其用量都控制在常规药用量的范围内，例如在毕殿洲主编、人民卫生出版社出版的第四版《药剂学》中，对尼泊金乙酯乙醇液和苯甲酸液等药剂学常用的防腐剂种类、用量都作了详细论述；所用的ZTC1+1-III型天然澄清剂A和ZTC1+1-III型天然澄清剂B是采用天津市地方标准DB12-065-96中的食品添加剂。
下面对上述实施例所得产品即复方内鲁帕尔抗病毒汤剂进行药效学试验、毒理学实验和稳定性实验如下一.对小鼠血清溶血素生成的影响实验材料NIH小鼠40只；受试物上述实施例所得产品复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
实验方法1绵羊红细胞悬液的制备在无菌条件下，从健康成年绵羊颈外静脉取血50ml，置于盛有玻璃球的灭菌锥形瓶中，摇动10分钟以除去纤维蛋白，加入相当于羊血体积2倍的Alsever液摇匀。置4℃冰箱中保存备用，临用时以生理盐水洗3次(1500rpm离心5分钟)，弃上清液，用生理盐水3∶5(V/V)稀释，使血球浓度为20亿个/mL。
2.免疫及给药小鼠40只，依体重、性别随机分为生理盐水对照组；本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂小、中、大(3.0g/Kg、6.0g/Kg、12.0g/Kg)3个不同剂量组。ig给药连续8天，第三天给药后2h，各组均腹腔注射20％羊红细胞悬液0.2ml/只，免疫后5天眼眶取血，测血清溶血素。
3、溶血素测定眼眶取血于1ml塑料离心管内，放置1h，2000rpm离心10分钟，取血清，以生理盐水稀释500倍后按下表进行实验。然后在37℃水浴中保温10分钟，冰浴终止反应后2000rpm离心5分钟，取上清液1ml，另加都氏试剂3ml于试管内。同时取绵羊红细胞稀释液0.25ml、都氏试剂4ml于另一试管内，充分摇匀，放置10分钟后，各管均于540nm以对照作空白，分别测定各管吸收度。
样品管 对照管500倍稀释血清 1ml生理盐水 ？1ml绵羊红细胞稀释液 0.5ml 0.5ml1∶10豚鼠血清稀释液 1ml 1ml4、计算按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC50样品HC50＝(样品吸收度均值/羊红细胞半数溶血时吸收度值)×血清稀释倍数给药各组的HC50与对照组作组间均数t检验。结果见表1表1本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对血清溶血素的影响(X±SD)
组别n 剂量(g/kg) HC50生理盐水组 1010.0 53.2±20.3本发明所得汤剂 103.0 64.8±36.3*106.0 80.3±35.7**1012.0 95.5±39.2***p＞0.05，**p＜0.05，***p＜0.01均与NS组比较。
结论结果说明本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂中、大剂量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，对非特异性免疫有增强作用，能增加抗体的生成，随剂量增加作用增强。
二.小鼠B、T淋巴细胞增殖的影响材料NIH小鼠，MTT，MERCK，Lot474314105。酶标仪，Bio-Rad，Mode 550。ConA，北京医药站分装，LPS，Sigma，批号，69H4046。
方法取NIH小鼠6只，体重18-22克，雄性，摘眼球放血致死，0.1％新洁尔灭消毒，剖腹取脾脏，剪碎过100目筛，离心去上清，加0.17mol/L NH4Cl去红细胞，用HBSS液洗脾细胞3次，加10％NBS-RPMI-1640培养液，调整细胞浓度为1×106个/ml。每孔加脾细胞悬液100ul/孔，药液100ul，ConA(5mg/L)50ul，或LPS(10mg/L)50ul(以上操作均在无菌条件下进行)，37℃、5％CO2温孵44小时，加MTT(1g/L)50ul，37℃温育4小时，去上清，加DMS0300ul摇匀，酶标仪570nm测定。(结果见表2)表2本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对小鼠B、T淋巴细胞增殖的影响(n＝3 X±SD)mg/L(生药) 静止期 ConA(5mg/L)LPS(10mg/L)对照 0.0 0.453±0.121 0.371±0.142 0.433±0.1420.00010.442±0.132 0.363±0.122 0.437±0.1330.001 0.463±0.114 0.350±0.123 0.545±0.153**0.01 0.445±0.123 0.354±0.131 0.576±0.142**0.1 0.467±0.111 0.360±0.124 0.577±0.139**1.0 0.434±0.121 0.353±0.126 0.669±0.133**10.0 0.440±0.132 0.340±0.126*0.565±0.139**100.0 0.442±0.134 0.345±0.119*0.443±0.140**p＜0.05，***p＜0.01均与对照组比较。
实验结果表明，本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对体外B淋巴细胞在0.001-10mg/L之间有增殖作用，能促进抗体生成，有量效关系，对T淋巴细胞增殖没有影响。
三.对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响方法(1)NIH小鼠6只，ip 0.5％淀粉生理盐水(煮沸15分钟)0.5ml/只，3天后摘眼球放血致死，腹腔注射HBSS 2ml，轻柔腹部，并于腹部剪一小口，用滴管吸出腹腔液，离心1500rpm 10分钟，弃上清液，加HBSS液5ml，洗三次，用15％NBS-1640营养液(不含HEPES)调细胞浓度至1×106个/ml，以上操作均在0-4℃无菌条件下进行。
(2)白葡菌液制备用无菌生理盐水洗下固体培养基上的白葡菌，用生理盐水调A＝0.5(λ＝620nm)再用15％NBS-1640营养液稀释32倍。
(3)复方内鲁帕尔抗病毒汤剂用生理盐水配成0.001克/毫升浓度，用时以营养液稀释致所需浓度。
(4)具体操作组别 剂量 MΦ 白葡菌 药液 营养液(μg·L-1) (μl)(μl) (μl) (μl)
表3本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响组别 剂量 放射量吞噬指数(PI)μg·L-1dmp ％NS组 -5680.2±1121.0NS+MΦ组 -3625.3±1324 37.2本发明所得汤剂1.0 2624.0±1031.054.310.0 2046.0±894.0 63.8
100.0 1623.0±886.072.1结果表明本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂各剂量组均有增强腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用，10.0、100.0μg/ml剂量组差异有显著性，作用随剂量增大而增强。
结论本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂在6.0g/Kg、12.0g/Kg剂量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，在0.001-10.0mg/L之间对体外B淋巴细胞培养有明显的增殖作用，对T淋巴细胞无明显影响，体外10-100μg/L能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。综合以上试验结果说明，能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力。
综上所述，通过测定血清溶血素生成，MTT法测T、B淋巴细胞的增殖，3H-TdR法测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂(4.0，.0g/kg)能够明显增强小鼠血清溶血素生成(P＜0.05)，本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂(0.01-10mg/L)能够促进小鼠体外B淋巴细胞增殖，对T淋巴细胞无明显影响，能够增强小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬功能。结论本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂能够增强非特异性免疫功能。
三、急性毒性试验目的1.目的观察复方内鲁帕尔抗病毒汤剂给小鼠口服后产生的急性毒性反应和死亡情况。
2.动物NIH小鼠，雌雄各半，体重19.9±1.4g，新疆医学实验动物中心提供，生产证书新医动字第(96)16？01。
3.药物上述实施例所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
4.方法与结果(1)预试验选取小鼠4只，复方内鲁帕尔抗病毒汤剂以0.4ml/10g容量灌胃，观察24小时，未见一只死亡，精神及活动状态亦无异常，说明无法测出LD50，只能依法做最大耐受量实验。
(2)最大耐受量(MTD)的测定选取健康小鼠20只，雌雄各半，体重19.9±1.4g，以0.4ml/10g灌胃给药二次，间隔6小时，给药后连续观察四小时，之后每天上午、下午个观察一次，连续观察七天，结果受试小鼠精神与活动状态无异常，亦无一只死亡。实验结束时小鼠平均体重为24.1±1.3g。故最大耐受量按生药计应为22.4g/kg。
5.结论复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的最大耐受量按生药计为22.4g/kg，相当于成人(体重按60kg计)每日每公斤用量的80倍。说明本制剂无明显毒性，口服用药是安全的。
四、稳定性实验参照中国药典2000年版二部附录XI C药物稳定性试验指导原则项下规定的方法进行本发明实施例所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的稳定性试验。
1.加速试验取上述实施例1、2、3三批复方内鲁帕尔抗病毒汤剂供试品，按市售包装，置于人工智能气候箱内，调节温度至40±2℃，相对湿度75±5％，放置6个月，取样间隔时间0，1，2，3，6个月，目前已经完成了加速试验的所有内容，试验结果见表1。
表1加速条件下制剂稳定性试验结果样品实施例1所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
样品实施例2所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
样品实施例3所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
2.长期稳定性试验取三批复方内鲁帕尔抗病毒汤剂供试品，批号030802、030803和030804，按市售包装，在温度25±2℃，相对湿度60±10％的条件下贮存24个月，取样间隔时间0，3，6，9，12，18，24个月，目前仅取得前6个月的试验数据，结果见表2，实验仍在进行中。
表2长期稳定性试验制剂初步稳定性试验报告样品实施例5所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
样品实施例7所得复方内鲁帕尔抗病霉汤剂
样品实施例9所得复方内鲁帕尔抗病霉汤剂
3.结论6个月的加速试验结果表明，复方内鲁帕尔抗病毒汤剂采用市售包装，在温度40±2℃，相对湿度75±5％条件下放置6个月，各项指标未见明显变化。
权利要求
1.一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，其特征在于按原料重量份含有睡莲花100份至180份、菊苣100份至180份、欧李100份至180份、蜀葵花80份至120份、神香草80份至120份、一枝蒿80份至120份、琐琐葡萄48份至72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份至24份。
2.一种根据权利要求1所述的复方内鲁帕尔抗病毒汤剂制备工艺，其特征在于按下述步骤进行的在上述所需要量的睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿和琐琐葡萄七种原料中，按七种原料的总重量加6倍至10倍量水煎煮1次至3次，时间为0.5小时至2.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至药材∶药液为1∶3至1∶7时，在每100毫升药液中，加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂B组分1毫升至3毫升，再加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂A组分2毫升至6毫升，搅匀，60℃至70℃水浴保温0.5小时至1.5小时，2℃至6℃静置20小时至25小时，滤过，滤液减压浓缩至在60℃时相对密度为1.05至1.08，加入常规药用量的2％尼泊金乙酯乙醇液、常规药用量的10％苯甲酸液和所需要量的蛋白糖，加水使其液体总重量至1000份得到复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
全文摘要
一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，其按原料重量份含有睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿、琐琐葡萄、2％尼泊金乙酯、10％苯甲酸、蛋白糖。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，产品质量稳定，在临床剂量条件下是安全的，其量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，对体外B淋巴细胞培养有明显的增殖作用，对T淋巴细胞无明显影响，能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，其能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力，从而特别适用于对非典型肺炎的预防。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂制备工艺便于实现产业化。
文档编号A61K36/28GK1726981SQ200510200390
公开日2006年2月1日 申请日期2005年7月12日 优先权日2005年7月12日
发明者顾政一, 孙玉华, 邢建国, 许馨燕, 阿不都热依木, 阿合旦, 郭风元 申请人:新疆维吾尔自治区药物研究所
技术领域：
本发明涉及药品组合物及其生产方法，是一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂及其制备工艺，特别适用于对非典型肺炎的预防。
背景技术：
非典型肺炎是一种名为冠状病毒引起的，传染性很强的，严重威胁人类身心健康的呼吸系统疾病。世界卫生组织将这一传染性非典型肺炎称之为严重急性呼吸综合症(SevereAcuute Respiratory Syndromes)，简称SARS。
中国维吾尔医药学是中华医药学的重要组成部分，中国维吾尔人民在长期生活实践中形成了一套完整的维吾尔医药理论体系。非典型肺炎，维吾尔医学列为流行病之一，归属于“瓦巴”病症(即瘟病)的范畴，并且已经认识到这类病症具有较强的传染性，即传播较快、发病较高的流行病学特点，如一千多年前伟大的医药学家阿维森那所著巨著《艾里 卡农非提比》(大医典)中和800多年前著名的和田维吾尔医药学家加马里丁·阿克萨拉依所著专著《阿克萨拉依》(白色宫殿)中，曾记载此类病症，并其称之为“努木尼亚 瓦巴依”、“杂提日也瓦巴依”(瘟疫性肺炎)、“台皮瓦巴依”(瘟病性发热)，“苏阿里亚比斯瓦巴依”(瘟疫性干咳嗽)等。维吾尔医学认为在空气中流窜而腐败的特殊“加拉斯木”(即病毒)，通过呼吸道等途径，侵犯人体，使肺脏气质发生干热性或胆液质性急剧变化，从而导致“赛非拉依木台热开”(即烧焦胆液质)的产生，促使这一疾病的爆发。并认为此病多发生在肺脏元气虚弱、素质较差的人群中，通过空气传染；症状多见为发热发烧，头痛脑胀，发冷怕寒，全身酸痛，呼吸困难，剧烈咳嗽，多为干咳，顽痰不化，时有痰中血丝等。若及时不进行预防，治疗效果较差。
发明内容
本发明提供了一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂及其制备工艺，其复方内鲁帕尔抗病毒汤剂能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力，从而特别适用于对非典型肺炎的预防。
本发明的技术方案之一是这样来实现的一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，其按原料重量份含有睡莲花100份至180份、菊苣100份至180份、欧李100份至180份、蜀葵花80份至120份、神香草80份至120份、一枝蒿80份至120份、琐琐葡萄48份至72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份至24份。
本发明的技术方案之二是这样来实现的上述复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的制备工艺是按下述步骤进行的在上述所需要量的睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿和琐琐葡萄七种原料中，按七种原料的总重量加6倍至10倍量水煎煮1次至3次，时间为0.5小时至2.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至药材药液为1∶3至1∶7时，在每100毫升药液中，加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂B组分1毫升至3毫升，再加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂A组分2毫升至6毫升，搅匀，60℃至70℃水浴保温0.5小时至1.5小时，2℃至6℃静置20小时至25小时，滤过，滤液减压浓缩至在60℃时相对密度为1.05至1.08，加入常规药用量的2％尼泊金乙酯乙醇液、常规药用量的10％苯甲酸液和所需要量的蛋白糖，加水使其液体总重量至1000份得到复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
本发明是根据维吾尔医药学理论，经过大量的实验和优选才得到的。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂由睡莲花等七味药组成的复方，其第一味药“睡莲花”维语称“内鲁帕尔”，本制剂的名称是根据睡莲花的维语名称，加剂型名构成的。
本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，产品质量稳定，在临床剂量条件下是安全的，其量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，对体外B淋巴细胞培养有明显的增殖作用，对T淋巴细胞无明显影响，能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，其能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力，从而特别适用于对非典型肺炎的预防。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂制备工艺便于实现产业化。
具体实施例方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定具体的实施例1，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣100份、欧李100份、蜀葵花80份、神香草80份、一枝蒿80份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例2，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣180份、欧李180份、蜀葵花120份、神香草120份、一枝蒿120份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例3，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣180份、欧李100份、蜀葵花120份、神香草80份、一枝蒿120份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例4，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣100份、欧李180份、蜀葵花80份、神香草120份、一枝蒿80份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例5，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣100份、欧李180份、蜀葵花120份、神香草80份、一枝蒿80份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例6，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣180份、欧李100份、蜀葵花80份、神香草120份、一枝蒿120份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例7，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花100份、菊苣100份、欧李100份、蜀葵花80份、神香草120份、一枝蒿120份、琐琐葡萄72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖24份。
实施例8，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花180份、菊苣180份、欧李180份、蜀葵花120份、神香草80份、一枝蒿80份、琐琐葡萄48份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份。
实施例9，该复方内鲁帕尔抗病毒汤剂按原料重量份含有睡莲花140份份、菊苣140份、欧李140份、蜀葵花100份、神香草100份、一枝蒿100份、琐琐葡萄60份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖20份。
上述实施例中的复方内鲁帕尔抗病毒汤剂可通过以下制备工艺得到在上述所需要量的睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿和琐琐葡萄七种原料中，按七种原料的总重量加6倍或10倍量水煎煮1次或3次，时间为0.5小时或2.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至药材药液为1∶3或1∶7时，在每100毫升药液中，加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂B组分1毫升或3毫升，再加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂A组分2毫升或6毫升，搅匀，60℃或70℃水浴保温0.5小时或1.5小时，2℃或6℃静置20小时或25小时，滤过，滤液减压浓缩至在60℃时相对密度为1.05或1.08，加入常规药用量的2％尼泊金乙酯乙醇液、常规药用量的10％苯甲酸液和所需要量的蛋白糖，加水使其液体总重量至1000份得到复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
在本发明中所用的尼泊金乙酯乙醇液和苯甲酸液都是药剂学常用的防腐剂，其用量都控制在常规药用量的范围内，例如在毕殿洲主编、人民卫生出版社出版的第四版《药剂学》中，对尼泊金乙酯乙醇液和苯甲酸液等药剂学常用的防腐剂种类、用量都作了详细论述；所用的ZTC1+1-III型天然澄清剂A和ZTC1+1-III型天然澄清剂B是采用天津市地方标准DB12-065-96中的食品添加剂。
下面对上述实施例所得产品即复方内鲁帕尔抗病毒汤剂进行药效学试验、毒理学实验和稳定性实验如下一.对小鼠血清溶血素生成的影响实验材料NIH小鼠40只；受试物上述实施例所得产品复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
实验方法1绵羊红细胞悬液的制备在无菌条件下，从健康成年绵羊颈外静脉取血50ml，置于盛有玻璃球的灭菌锥形瓶中，摇动10分钟以除去纤维蛋白，加入相当于羊血体积2倍的Alsever液摇匀。置4℃冰箱中保存备用，临用时以生理盐水洗3次(1500rpm离心5分钟)，弃上清液，用生理盐水3∶5(V/V)稀释，使血球浓度为20亿个/mL。
2.免疫及给药小鼠40只，依体重、性别随机分为生理盐水对照组；本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂小、中、大(3.0g/Kg、6.0g/Kg、12.0g/Kg)3个不同剂量组。ig给药连续8天，第三天给药后2h，各组均腹腔注射20％羊红细胞悬液0.2ml/只，免疫后5天眼眶取血，测血清溶血素。
3、溶血素测定眼眶取血于1ml塑料离心管内，放置1h，2000rpm离心10分钟，取血清，以生理盐水稀释500倍后按下表进行实验。然后在37℃水浴中保温10分钟，冰浴终止反应后2000rpm离心5分钟，取上清液1ml，另加都氏试剂3ml于试管内。同时取绵羊红细胞稀释液0.25ml、都氏试剂4ml于另一试管内，充分摇匀，放置10分钟后，各管均于540nm以对照作空白，分别测定各管吸收度。
样品管 对照管500倍稀释血清 1ml生理盐水 ？1ml绵羊红细胞稀释液 0.5ml 0.5ml1∶10豚鼠血清稀释液 1ml 1ml4、计算按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC50样品HC50＝(样品吸收度均值/羊红细胞半数溶血时吸收度值)×血清稀释倍数给药各组的HC50与对照组作组间均数t检验。结果见表1表1本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对血清溶血素的影响(X±SD)
组别n 剂量(g/kg) HC50生理盐水组 1010.0 53.2±20.3本发明所得汤剂 103.0 64.8±36.3*106.0 80.3±35.7**1012.0 95.5±39.2***p＞0.05，**p＜0.05，***p＜0.01均与NS组比较。
结论结果说明本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂中、大剂量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，对非特异性免疫有增强作用，能增加抗体的生成，随剂量增加作用增强。
二.小鼠B、T淋巴细胞增殖的影响材料NIH小鼠，MTT，MERCK，Lot474314105。酶标仪，Bio-Rad，Mode 550。ConA，北京医药站分装，LPS，Sigma，批号，69H4046。
方法取NIH小鼠6只，体重18-22克，雄性，摘眼球放血致死，0.1％新洁尔灭消毒，剖腹取脾脏，剪碎过100目筛，离心去上清，加0.17mol/L NH4Cl去红细胞，用HBSS液洗脾细胞3次，加10％NBS-RPMI-1640培养液，调整细胞浓度为1×106个/ml。每孔加脾细胞悬液100ul/孔，药液100ul，ConA(5mg/L)50ul，或LPS(10mg/L)50ul(以上操作均在无菌条件下进行)，37℃、5％CO2温孵44小时，加MTT(1g/L)50ul，37℃温育4小时，去上清，加DMS0300ul摇匀，酶标仪570nm测定。(结果见表2)表2本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对小鼠B、T淋巴细胞增殖的影响(n＝3 X±SD)mg/L(生药) 静止期 ConA(5mg/L)LPS(10mg/L)对照 0.0 0.453±0.121 0.371±0.142 0.433±0.1420.00010.442±0.132 0.363±0.122 0.437±0.1330.001 0.463±0.114 0.350±0.123 0.545±0.153**0.01 0.445±0.123 0.354±0.131 0.576±0.142**0.1 0.467±0.111 0.360±0.124 0.577±0.139**1.0 0.434±0.121 0.353±0.126 0.669±0.133**10.0 0.440±0.132 0.340±0.126*0.565±0.139**100.0 0.442±0.134 0.345±0.119*0.443±0.140**p＜0.05，***p＜0.01均与对照组比较。
实验结果表明，本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对体外B淋巴细胞在0.001-10mg/L之间有增殖作用，能促进抗体生成，有量效关系，对T淋巴细胞增殖没有影响。
三.对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响方法(1)NIH小鼠6只，ip 0.5％淀粉生理盐水(煮沸15分钟)0.5ml/只，3天后摘眼球放血致死，腹腔注射HBSS 2ml，轻柔腹部，并于腹部剪一小口，用滴管吸出腹腔液，离心1500rpm 10分钟，弃上清液，加HBSS液5ml，洗三次，用15％NBS-1640营养液(不含HEPES)调细胞浓度至1×106个/ml，以上操作均在0-4℃无菌条件下进行。
(2)白葡菌液制备用无菌生理盐水洗下固体培养基上的白葡菌，用生理盐水调A＝0.5(λ＝620nm)再用15％NBS-1640营养液稀释32倍。
(3)复方内鲁帕尔抗病毒汤剂用生理盐水配成0.001克/毫升浓度，用时以营养液稀释致所需浓度。
(4)具体操作组别 剂量 MΦ 白葡菌 药液 营养液(μg·L-1) (μl)(μl) (μl) (μl)
表3本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响组别 剂量 放射量吞噬指数(PI)μg·L-1dmp ％NS组 -5680.2±1121.0NS+MΦ组 -3625.3±1324 37.2本发明所得汤剂1.0 2624.0±1031.054.310.0 2046.0±894.0 63.8
100.0 1623.0±886.072.1结果表明本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂各剂量组均有增强腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用，10.0、100.0μg/ml剂量组差异有显著性，作用随剂量增大而增强。
结论本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂在6.0g/Kg、12.0g/Kg剂量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，在0.001-10.0mg/L之间对体外B淋巴细胞培养有明显的增殖作用，对T淋巴细胞无明显影响，体外10-100μg/L能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。综合以上试验结果说明，能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力。
综上所述，通过测定血清溶血素生成，MTT法测T、B淋巴细胞的增殖，3H-TdR法测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂(4.0，.0g/kg)能够明显增强小鼠血清溶血素生成(P＜0.05)，本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂(0.01-10mg/L)能够促进小鼠体外B淋巴细胞增殖，对T淋巴细胞无明显影响，能够增强小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬功能。结论本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂能够增强非特异性免疫功能。
三、急性毒性试验目的1.目的观察复方内鲁帕尔抗病毒汤剂给小鼠口服后产生的急性毒性反应和死亡情况。
2.动物NIH小鼠，雌雄各半，体重19.9±1.4g，新疆医学实验动物中心提供，生产证书新医动字第(96)16？01。
3.药物上述实施例所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
4.方法与结果(1)预试验选取小鼠4只，复方内鲁帕尔抗病毒汤剂以0.4ml/10g容量灌胃，观察24小时，未见一只死亡，精神及活动状态亦无异常，说明无法测出LD50，只能依法做最大耐受量实验。
(2)最大耐受量(MTD)的测定选取健康小鼠20只，雌雄各半，体重19.9±1.4g，以0.4ml/10g灌胃给药二次，间隔6小时，给药后连续观察四小时，之后每天上午、下午个观察一次，连续观察七天，结果受试小鼠精神与活动状态无异常，亦无一只死亡。实验结束时小鼠平均体重为24.1±1.3g。故最大耐受量按生药计应为22.4g/kg。
5.结论复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的最大耐受量按生药计为22.4g/kg，相当于成人(体重按60kg计)每日每公斤用量的80倍。说明本制剂无明显毒性，口服用药是安全的。
四、稳定性实验参照中国药典2000年版二部附录XI C药物稳定性试验指导原则项下规定的方法进行本发明实施例所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂的稳定性试验。
1.加速试验取上述实施例1、2、3三批复方内鲁帕尔抗病毒汤剂供试品，按市售包装，置于人工智能气候箱内，调节温度至40±2℃，相对湿度75±5％，放置6个月，取样间隔时间0，1，2，3，6个月，目前已经完成了加速试验的所有内容，试验结果见表1。
表1加速条件下制剂稳定性试验结果样品实施例1所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
样品实施例2所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
样品实施例3所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
2.长期稳定性试验取三批复方内鲁帕尔抗病毒汤剂供试品，批号030802、030803和030804，按市售包装，在温度25±2℃，相对湿度60±10％的条件下贮存24个月，取样间隔时间0，3，6，9，12，18，24个月，目前仅取得前6个月的试验数据，结果见表2，实验仍在进行中。
表2长期稳定性试验制剂初步稳定性试验报告样品实施例5所得复方内鲁帕尔抗病毒汤剂
样品实施例7所得复方内鲁帕尔抗病霉汤剂
样品实施例9所得复方内鲁帕尔抗病霉汤剂
3.结论6个月的加速试验结果表明，复方内鲁帕尔抗病毒汤剂采用市售包装，在温度40±2℃，相对湿度75±5％条件下放置6个月，各项指标未见明显变化。
权利要求
1.一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，其特征在于按原料重量份含有睡莲花100份至180份、菊苣100份至180份、欧李100份至180份、蜀葵花80份至120份、神香草80份至120份、一枝蒿80份至120份、琐琐葡萄48份至72份、常规药用量的2％尼泊金乙酯、常规药用量的10％苯甲酸、蛋白糖16份至24份。
2.一种根据权利要求1所述的复方内鲁帕尔抗病毒汤剂制备工艺，其特征在于按下述步骤进行的在上述所需要量的睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿和琐琐葡萄七种原料中，按七种原料的总重量加6倍至10倍量水煎煮1次至3次，时间为0.5小时至2.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至药材∶药液为1∶3至1∶7时，在每100毫升药液中，加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂B组分1毫升至3毫升，再加入浓度为1％的ZTC1+1-III型天然澄清剂A组分2毫升至6毫升，搅匀，60℃至70℃水浴保温0.5小时至1.5小时，2℃至6℃静置20小时至25小时，滤过，滤液减压浓缩至在60℃时相对密度为1.05至1.08，加入常规药用量的2％尼泊金乙酯乙醇液、常规药用量的10％苯甲酸液和所需要量的蛋白糖，加水使其液体总重量至1000份得到复方内鲁帕尔抗病毒汤剂。
全文摘要
一种复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，其按原料重量份含有睡莲花、菊苣、欧李、蜀葵花、神香草、一枝蒿、琐琐葡萄、2％尼泊金乙酯、10％苯甲酸、蛋白糖。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂，产品质量稳定，在临床剂量条件下是安全的，其量能明显增加小鼠血清溶血素的生成，对体外B淋巴细胞培养有明显的增殖作用，对T淋巴细胞无明显影响，能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，其能够增强体液免疫和非特异性免疫功能，有助于抗体生成，增强抵抗力，从而特别适用于对非典型肺炎的预防。本发明复方内鲁帕尔抗病毒汤剂制备工艺便于实现产业化。
文档编号A61K36/28GK1726981SQ200510200390
公开日2006年2月1日 申请日期2005年7月12日 优先权日2005年7月12日
发明者顾政一, 孙玉华, 邢建国, 许馨燕, 阿不都热依木, 阿合旦, 郭风元 申请人:新疆维吾尔自治区药物研究所
最新回复(0)