升麻有机酸的提取方法及新用途的制作方法
专利名称：升麻有机酸的提取方法及新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药有机酸的提取方法及新用途。特别是涉及升麻有机酸的提取方法及新用途。
背景技术：
药典2000版一部P55记载升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cimicifugaheracleifolia Kom.\兴安升麻Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim.\或升麻Cimicifu foetida L.的干燥根茎。秋季采挖。性味与归经辛、微甘，微寒。归肺、胃、大肠经。功能与主治发表透疹，清热解毒，升举阳气。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑；脱肛，子宫脱垂。用法与用量3-9克。
乙型肝炎又称为血清性肝炎、乙型病毒性肝炎(简称乙肝)，是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。通过血液与体液传播，具有慢性携带状态。中国是乙型肝炎最流行的国家，人群感染率高，在某些地区感染率达到35％以上，是当前危害人民健康最严重的传染病.我国HBsAg携带人口在1亿以上，占全世界HBsAg携带人口的50％。根据我国肝炎调查结果，估计我国乙肝病人约有2700万人，每年新发病人约有900万。
乙肝临床表现多样化，易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病人可转化为原发性肝癌.肝纤维化是诸多慢性肝病发展为肝硬化过程的共有病理变化，而慢性、持续性肝损伤是肝纤维化形成的前提。造成肝损伤的因素很多，一般因药物、大量酒精、过敏等造成急性肝损伤，乙肝、肝硬化、长服某些药物等可导致急慢性肝损伤。
目前市场上用于乙肝的药物中，干扰素是首选药，是国内外公认的较为有效的抗病毒药物。由于机体对干扰素的反应存在较大个体差异，不少研究结果表明，欧美国家患者疗效较佳，而东方(如中国、日本)患者疗效较差，大多数患者在干扰素治疗期间均有不同程度的副作用。另核苷类药物具改善肝组织学病变和肝功能的作用，其安全性和耐受性较好，但在长期应用过程中出现病毒基因的变异，从而降低对药物的敏感产生耐药现象，停药以后发病率相当高。
我国中药治疗乙肝的疗效已被大量的临床所证实，中药在抗病毒、降低转氨酶、调整机体免疫力、保护肝细胞等方面都可发挥较好的疗效，但是目前上市药物多为中药复方制剂，本发明治疗乙肝的药物为单味中药提取物制剂，副作用小，同时具有多方面的药理作用。
发明内容
本发明的一个目的在于公开升麻有机酸的提取方法；本发明的另一个目的在于公开升麻有机酸抗乙肝病毒，预防和治疗乙型肝炎的新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的A脂溶性有机酸取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩、干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸溶液调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份；B水溶性有机酸取升麻药材1000重量份，加蒸馏水5000-8000体积份，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。
本发明所称的升麻有机酸是指由上述方法所得的脂溶性有机酸和(或)水溶性有机酸。本发明的升麻有机酸加上药剂学接受的辅料制成临床可接受的各种剂型，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、皮下给药制剂、栓剂等剂型。
本发明中重量份/体积份与克/毫升相对应。
升麻有机酸经药理作用研究，证明具有良好的抗乙肝病毒作用，可缓解乙肝的进一步发展。升麻有机酸制成的药物具有比较显著的对抗乙肝病毒、保护肝功能作用。以下实验例的药效学研究用于进一步说明但不限于本发明的新用途。
药效学研究实验例1体外对乙型肝炎病毒的抑制作用试验受试药物升麻有机酸(脂溶性有机酸、水溶性有机酸)由中国中医研究院中药研究所提供。体外实验前用高纯水配制成10mg/ml的母液，过滤除菌，4℃保存备用。2.2.15细胞乙型肝炎病毒DNA克隆转染的人肝癌细胞(Hep-G2)的2.2.15系，由北京大学第一附属医院病毒室提供。试剂乙型肝炎表面抗原检测试剂盒、乙型肝炎e抗原检测试剂盒，为华美生物工程公司产品；乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测试剂盒安达基因诊断中心产品，G418；Engls培养液，日本产品。酶标仪750，Bayer公司产品；ABI5700荧光定量PCR仪。阳性对照药拉米呋啶，葛兰史克制药有限公司产品实验前用高纯水配成20mg/ml的原药液，过滤消毒备用。
对2.2.15细胞培养系分泌HBsAg、HBeAg的影响取已长成单层细胞的2.2.15细胞培养板(24孔)，倒掉培养液，加入无毒浓度以下相应稀释度的药液，浓度分别为0.625、0.312、0.156和0.078mg/ml，1ml/孔，每个稀释度做6个复孔，同时设拉米呋啶对照药及细胞对照。置37℃5％CO2培养箱中培养，第8天收集上清，二批实验所收集的上清同时测定HBsAg、HBeAg。采用酶联免疫吸附方法测定，计算抑制率。
结果显示对2.2.15细胞分泌HBsAg，在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01>，且呈现良好的量效相关性。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBsAg无抑制作用。结果见表1。
对2.2.15细胞分泌HBeAg，在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量均有明显的抑制作用，第一批实验组与对照组比较有显著性差异(P＜0.05>，第二批实验由于个别对照空细胞生长状态差抑制率较低，统计学无意义。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBeAg无抑制作用。结果见表2。
表1升麻提取物对2.2.15培养细胞分泌HBsAg的影响
与细胞对照组比较**P＜0.01 *P＜0.05表中结果显示在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量对2.2.15细胞分泌HBsAg均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01>，且呈现良好的量效相关性。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBsAg无抑制作用。
表2升麻提取物对2.2.15培养细胞分泌HBeAg的影响
与细胞对照组比较**P＜0.01 *P＜0.05表中结果显示在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量对2.2.15细胞分泌HBeAg均有明显的抑制作用，第一批实验组与对照组比较有显著性差异(P＜0.05>，第二批实验由于个别对照空细胞生长状态差抑制率较第，统计学无意义。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBeAg无抑制作用。
实验例2升麻提取物抗鸭乙型肝炎病毒的药效学试验受试药物升麻有机酸(脂溶性有机酸、水溶性有机酸)，由中国中医研究院中药研究所提供，棕色粉末，用2号胶囊包装3mg～12mg/粒胶囊。阳性对照药物拉米呋啶，葛兰素威康英国行动有限公司生产，压碎后自制成5mg/粒的胶囊。动物采用健康成年的重庆麻鸭产的蛋孵化的1日龄雏鸭，经腹腔接种0.1mlDHBV DNA阳性病毒血清。接种1周后，分别颈外静脉抽血，用地高辛标记的DHBV DNA探针经斑点杂交检测筛选出感染阳性鸭，饲养至2周龄作为实验动物。
试验方法将感染阳性鸭55只随机分为5组病毒对照组(11只)用淀粉胶囊，每日口腔灌喂1次，剂量为500mg/只。阳性药物对照组(12只)用拉米夫定胶囊，每日口腔灌喂1次，剂量为50mg.Kg-1.D-1。提取物小剂量组(10只)每日口腔灌喂1次，剂量为60mg.Kg-1.D-1。提取物大剂量组(12只)每日口腔灌喂1次，剂量为120mg.Kg-1.D-1。
实验用药时间为28天，停药观察7天。观察指标如下血清DHBV DNA改变情况于用药前、用药7天、14天、21天、28天、停药7天分别颈外静脉抽血，分离血清于-20℃保存待检。采用斑点杂交法，用罗氏公司的地高辛标记试剂盒制备DHBV DNA探针统一检测，用VuegoScan(Brisa-620ST)扫描仪进行膜片扫描；用the Discovery SeriesQuantity One软件对斑点进行定量分析，斑点值为volume(volume＝intensity×mm2)。统计学采用spss软件，配对t检验。
血清DHBsAg改变情况于用药前、用药7天、14天、21天、28天、停药7天分别颈外静脉抽血，分离血清于-20℃保存待检。将用药前后的血清统一对比检测，采用ELISA快速法、酶标阅读仪(Bio-TEK公司)490nm读取O.D值。统计学采用spss软件，配对t检验。
各组用药前、中、后血清DHBsAg O.D值改变情况随着时间的推移，各组DHBsAg O.D值呈现下降趋势，经统计学比较病毒对照组血清DHBsAg O.D值的改变无统计学意义；而拉米呋啶组及提取物各剂量组不同用药时间均出现血清DHBsAg O.D值明显降低(P＜0.01)，至停药7天血清DHBsAg O.D值用药前比较仍有持续降低(P＜0.01)。结果见表3表3各组用药前后血清DHBsAgO.D值改变情况(X±S)
注上表所列为各组DHBsAgO.D值平均数及标准差，统计学采用配对t检验。(″*″P＜0.05，″*″P＜0.01)，为不同时间DHBsAgO.D值与同组用药前DHBsAg0.D值的比较用药前、中、后血清DHBV DNA滴度改变情况病毒对照组用药前后血清DHBV DNA滴度无明显降低，并呈现轻微上升趋势。拉米夫定组用药7天后开始出现血清DHBV DNA滴度降低(P＜0.01)，停药后有DHBV DNA回升现象。提取物各剂量组分别于用药14天开始出现血清DHBV DNA滴度降低(P＜0.05、P＜0.01)，停药后DHBV DNA回升现象不明显；结果见表4
表4升麻提取物用药前后血清DHBV DNA滴度变化(X±S)
注上表所列为各组DNA斑点volume值的平均数及标准差，统计学采用配对t检验(″*″P＜0.05″**″P＜0.01)，为不同时间DNA斑点值与同组用药前DNA斑点值的比较。
实施例1升麻脂溶性有机酸的制备取升麻药材1000克，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流2次，每次6500毫升，过滤，取滤液。浓缩，干燥，得提取物120克。取该提取物30.0克，以850毫升60℃蒸馏水分4次将之尽可能溶解并转移到2000毫升分液漏斗中，加入8毫升36％盐酸并搅拌均匀。以醋酸乙酯萃取5次，每次300毫升，合并上层相溶液。上层相溶液以3％氢氧化钠溶液500毫升、400毫升和300毫升共萃取3次。合并下层碱液，以36％盐酸调节pH至2-3后，以醋酸乙酯萃取4次，每次350毫升。合并澄清的上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次140毫升，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-5。该有机层相溶液经除去醋酸乙酯后得到脂溶性有机酸4.6克，收率1.84％。
实施例2升麻水溶性有机酸的制备取升麻药材1000克，加6000毫升蒸馏水，加热煮沸2小时。沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少。过滤，取滤液。药渣加5000毫升蒸馏水进行第二次加热煮沸2小时，过滤，取滤液。合并滤液，浓缩到1000毫升，慢慢加入2.8倍体积(2800毫升)的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置16小时，以3000rpm离心20分钟，取滤液。该滤液经减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000毫升。取该提取液600毫升，通过已预处理过的732型强酸性阳离子交换树脂柱(H型)，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH中性为止，共收集流出液约5000毫升。此流出液全部通过已预处理过的717型强碱性阴离子交换树脂柱(OH型)，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH中性后，改用0.5N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止。该流出液经减压蒸干后，加入少量蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-5为止，即得水溶性有机酸5.7克，得率0.95％。
实施例3升麻脂溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流3次，每次7000升，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物110kg；取该提取物30kg，以800升60℃蒸馏水分3次将其溶解并转移到分液装置中，加入9.6升30％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取4次，每次300升，合并上层相溶液；上层相溶液以3％氢氧化钠溶液300升萃取5次，取下层碱液；下层碱液以30％盐酸调节pH至2-3后，每次300升的醋酸乙酯萃取，共萃取3次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次100升，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH5；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸4kg。
实施例4升麻脂溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加80％乙醇使液面漫过药材，浸泡10小时后加热回流4次，每次7500升，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物120kg；取该提取物35kg，以900升65℃蒸馏水分5次将其溶解并转移到分液装置中，加入8升35％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取5次，每次400升，合并上层相溶液；上层相溶液以4％氢氧化钠溶液500升萃取4次，取下层碱液；下层碱液以35％盐酸调节pH至3后，每次400升的醋酸乙酯萃取，共萃取4次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次150升，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸5kg。
实施例5升麻水溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加蒸馏水，加热煮沸2次，每次保持6000升，沸腾2小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到1000升，放冷后，慢慢加入3000升的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置15小时，以2500rpm离心20分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000升；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.4N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1时为止；该流出液经减压蒸干后，加入30升蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH6为止，即得水溶性有机酸8kg。
实施例6升麻水溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加蒸馏水，加热煮沸3次，每次保持7000升，沸腾2.5小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到1100升，放冷后，慢慢加入3500升的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置30小时，以3500rpm离心40分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1100升；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH7后，改用0.6N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入60升蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH5为止，即得水溶性有机酸12kg。
实施例7制备脂溶性有机酸取升麻药材，按上述脂溶性有机酸提取方法得脂溶性有机酸100-300克，按常规方法制成胶囊1000粒，肝炎患者服用，按成人60公斤体重计算，每次1-2粒，每日2次。
实施例8制备水溶性有机酸取升麻药材，按上述水溶性有机酸提取方法得水溶性有机酸100-300克，按常规方法制成片剂1000片，肝炎患者服用，按成人60公斤体重计算，每次1-2片，每日2次。
实施例9制备脂溶性有机酸取升麻药材，按上述脂溶性有机酸提取方法得脂溶性有机酸100-300克，按常规方法制成颗粒剂1000袋，肝炎患者服用，按成人60公斤体重计算，每次1-2袋，每日2次。
实施例10制备水溶性有机酸取升麻药材，按上述水溶性有机酸提取方法得水溶性有机酸100-300克，按常规方法制成注射液1000支，10-20毫升/支，肝炎患者静脉滴注，按成人60公斤体重计算，每次1-2支，每日1次。
实施例11制备脂溶性有机酸取升麻药材，按上述脂溶性有机酸提取方法得脂溶性有机酸100-300克，按常规方法制成冻干粉针1000支，肝炎患者静脉滴注，按成人60公斤体重计算，每次1-2支，每日1次。
实施例12制备水溶性有机酸取升麻药材，按上述水溶性有机酸提取方法得水溶性有机酸100-300克，按常规方法制成栓剂1000支，肝炎患者肛门给药，按成人60公斤体重计算，每次1支，每日1-2次。
权利要求
1.一种升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，共萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份。
2.如权利要求1所述的升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流2次，每次6500体积份，过滤，取滤液浓缩，干燥，得提取物120重量份；取该提取物30.0重量份，以850体积份60℃蒸馏水分4次将之尽可能溶解并转移到2000体积份分液装置中，加入8体积份浓盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取5次，每次300体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以3％氢氧化钠溶液500体积份、400体积份和300体积份共萃取3次；合并下层碱液，以浓盐酸调节pH至2-3后，以醋酸乙酯萃取4次，每次350体积份；合并澄清的上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次140体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-5；该有机层相溶液经除去醋酸乙酯后得到脂溶性有机酸4.6重量份。
3.一种升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加蒸馏水5000-8000体积份，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。
4.如权利要求3所述的升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加6000体积份蒸馏水，加热煮沸2小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液；药渣加5000体积份蒸馏水进行第二次加热煮沸2小时，过滤，取滤液；合并滤液，浓缩到1000体积份，加入2800体积份的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置16小时，以3000rpm离心20分钟，取滤液；该滤液经减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000体积份；取该提取液600体积份，通过已预处理过的732型强酸性阳离子交换树脂柱H型，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH中性为止，共收集流出液约5000体积份；此流出液全部通过已预处理过的717型强碱性阴离子交换树脂柱OH型，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH中性后，改用0.5N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入少量蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-5为止，即得水溶性有机酸5.7重量份。
5.一种升麻有机酸的提取方法，其特征在于该方法包括如下方法中任一种A、取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，共萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份；B、取升麻药材1000重量份，加蒸馏水，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，慢慢加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。
6.如权利要求5所述的升麻有机酸的提取方法，其特征在于该方法包括如下方法中的任一种A、取升麻药材1000重量份，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流2次，每次6500体积份，过滤，取滤液浓缩，干燥，得提取物120重量份；取该提取物30.0重量份，以850体积份60℃蒸馏水分4次将之尽可能溶解并转移到2000体积份分液装置中，加入8体积份浓盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取5次，每次300体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以3％氢氧化钠溶液500体积份、400体积份和300体积份共萃取3次；合并下层碱液，以浓盐酸调节pH至2-3后，以醋酸乙酯萃取4次，每次350体积份；合并澄清的上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次140体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-5；该有机层相溶液经除去醋酸乙酯后得到脂溶性有机酸4.6重量份；B、取升麻药材1000重量份，加6000体积份蒸馏水，加热煮沸2小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液；药渣加5000体积份蒸馏水进行第二次加热煮沸2小时，过滤，取滤液；合并滤液，浓缩到1000体积份，加入2800体积份的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置16小时，以3000rpm离心20分钟，取滤液；该滤液经减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000体积份；取该提取液600体积份，通过已预处理过的732型强酸性阳离子交换树脂柱H型，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH中性为止，共收集流出液约5000体积份；此流出液全部通过已预处理过的717型强碱性阴离子交换树脂柱OH型，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH中性后，改用0.5N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入少量蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-5为止，即得水溶性有机酸5.7重量份。
7.如权利要求1-4所述的升麻有机酸，其特征在于该有机酸加上药剂学接受的辅料制成临床上或药学上可接受的剂型片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、皮下给药制剂或栓剂。
8.如权利要求1-4所述的升麻有机酸在制备治疗或预防乙型肺炎的药物中的应用。
9.如权利要求1-4所述的升麻有机酸在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用。
10.如权利要求1-4所述的升麻有机酸在制备具有抑制血清中HBsAg、HBeAg和HBV DNA滴度作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了升麻有机酸的提取方法及新用途。升麻脂溶性有机酸制备方法为加乙醇浸泡、加热回流，过滤；将提取物溶解，加盐酸，以醋酸乙酯萃取；合并上层相溶液，以氢氧化钠萃取；取下层碱液，调节pH，醋酸乙酯萃取，合并上层相溶液、洗涤，除去醋酸乙酯后得到。升麻水溶性有机酸制备方法为加蒸馏水加热、过滤，取滤液，浓缩加乙醇，静置、离心；滤液至无醇味，加蒸馏水、过树脂柱，洗脱；收集流出液减压蒸干、加入蒸馏水并反复蒸干，即得。同时公开了升麻有机酸在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
文档编号A61P31/00GK1730448SQ20041005801
公开日2006年2月8日 申请日期2004年8月6日 优先权日2004年8月6日
发明者崔晓兰, 巢志茂 申请人:于水
技术领域：
本发明涉及一种中药有机酸的提取方法及新用途。特别是涉及升麻有机酸的提取方法及新用途。
背景技术：
药典2000版一部P55记载升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cimicifugaheracleifolia Kom.\兴安升麻Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim.\或升麻Cimicifu foetida L.的干燥根茎。秋季采挖。性味与归经辛、微甘，微寒。归肺、胃、大肠经。功能与主治发表透疹，清热解毒，升举阳气。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑；脱肛，子宫脱垂。用法与用量3-9克。
乙型肝炎又称为血清性肝炎、乙型病毒性肝炎(简称乙肝)，是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。通过血液与体液传播，具有慢性携带状态。中国是乙型肝炎最流行的国家，人群感染率高，在某些地区感染率达到35％以上，是当前危害人民健康最严重的传染病.我国HBsAg携带人口在1亿以上，占全世界HBsAg携带人口的50％。根据我国肝炎调查结果，估计我国乙肝病人约有2700万人，每年新发病人约有900万。
乙肝临床表现多样化，易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病人可转化为原发性肝癌.肝纤维化是诸多慢性肝病发展为肝硬化过程的共有病理变化，而慢性、持续性肝损伤是肝纤维化形成的前提。造成肝损伤的因素很多，一般因药物、大量酒精、过敏等造成急性肝损伤，乙肝、肝硬化、长服某些药物等可导致急慢性肝损伤。
目前市场上用于乙肝的药物中，干扰素是首选药，是国内外公认的较为有效的抗病毒药物。由于机体对干扰素的反应存在较大个体差异，不少研究结果表明，欧美国家患者疗效较佳，而东方(如中国、日本)患者疗效较差，大多数患者在干扰素治疗期间均有不同程度的副作用。另核苷类药物具改善肝组织学病变和肝功能的作用，其安全性和耐受性较好，但在长期应用过程中出现病毒基因的变异，从而降低对药物的敏感产生耐药现象，停药以后发病率相当高。
我国中药治疗乙肝的疗效已被大量的临床所证实，中药在抗病毒、降低转氨酶、调整机体免疫力、保护肝细胞等方面都可发挥较好的疗效，但是目前上市药物多为中药复方制剂，本发明治疗乙肝的药物为单味中药提取物制剂，副作用小，同时具有多方面的药理作用。
发明内容
本发明的一个目的在于公开升麻有机酸的提取方法；本发明的另一个目的在于公开升麻有机酸抗乙肝病毒，预防和治疗乙型肝炎的新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的A脂溶性有机酸取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩、干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸溶液调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份；B水溶性有机酸取升麻药材1000重量份，加蒸馏水5000-8000体积份，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。
本发明所称的升麻有机酸是指由上述方法所得的脂溶性有机酸和(或)水溶性有机酸。本发明的升麻有机酸加上药剂学接受的辅料制成临床可接受的各种剂型，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、皮下给药制剂、栓剂等剂型。
本发明中重量份/体积份与克/毫升相对应。
升麻有机酸经药理作用研究，证明具有良好的抗乙肝病毒作用，可缓解乙肝的进一步发展。升麻有机酸制成的药物具有比较显著的对抗乙肝病毒、保护肝功能作用。以下实验例的药效学研究用于进一步说明但不限于本发明的新用途。
药效学研究实验例1体外对乙型肝炎病毒的抑制作用试验受试药物升麻有机酸(脂溶性有机酸、水溶性有机酸)由中国中医研究院中药研究所提供。体外实验前用高纯水配制成10mg/ml的母液，过滤除菌，4℃保存备用。2.2.15细胞乙型肝炎病毒DNA克隆转染的人肝癌细胞(Hep-G2)的2.2.15系，由北京大学第一附属医院病毒室提供。试剂乙型肝炎表面抗原检测试剂盒、乙型肝炎e抗原检测试剂盒，为华美生物工程公司产品；乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测试剂盒安达基因诊断中心产品，G418；Engls培养液，日本产品。酶标仪750，Bayer公司产品；ABI5700荧光定量PCR仪。阳性对照药拉米呋啶，葛兰史克制药有限公司产品实验前用高纯水配成20mg/ml的原药液，过滤消毒备用。
对2.2.15细胞培养系分泌HBsAg、HBeAg的影响取已长成单层细胞的2.2.15细胞培养板(24孔)，倒掉培养液，加入无毒浓度以下相应稀释度的药液，浓度分别为0.625、0.312、0.156和0.078mg/ml，1ml/孔，每个稀释度做6个复孔，同时设拉米呋啶对照药及细胞对照。置37℃5％CO2培养箱中培养，第8天收集上清，二批实验所收集的上清同时测定HBsAg、HBeAg。采用酶联免疫吸附方法测定，计算抑制率。
结果显示对2.2.15细胞分泌HBsAg，在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01>，且呈现良好的量效相关性。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBsAg无抑制作用。结果见表1。
对2.2.15细胞分泌HBeAg，在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量均有明显的抑制作用，第一批实验组与对照组比较有显著性差异(P＜0.05>，第二批实验由于个别对照空细胞生长状态差抑制率较低，统计学无意义。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBeAg无抑制作用。结果见表2。
表1升麻提取物对2.2.15培养细胞分泌HBsAg的影响
与细胞对照组比较**P＜0.01 *P＜0.05表中结果显示在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量对2.2.15细胞分泌HBsAg均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01>，且呈现良好的量效相关性。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBsAg无抑制作用。
表2升麻提取物对2.2.15培养细胞分泌HBeAg的影响
与细胞对照组比较**P＜0.01 *P＜0.05表中结果显示在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量对2.2.15细胞分泌HBeAg均有明显的抑制作用，第一批实验组与对照组比较有显著性差异(P＜0.05>，第二批实验由于个别对照空细胞生长状态差抑制率较第，统计学无意义。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBeAg无抑制作用。
实验例2升麻提取物抗鸭乙型肝炎病毒的药效学试验受试药物升麻有机酸(脂溶性有机酸、水溶性有机酸)，由中国中医研究院中药研究所提供，棕色粉末，用2号胶囊包装3mg～12mg/粒胶囊。阳性对照药物拉米呋啶，葛兰素威康英国行动有限公司生产，压碎后自制成5mg/粒的胶囊。动物采用健康成年的重庆麻鸭产的蛋孵化的1日龄雏鸭，经腹腔接种0.1mlDHBV DNA阳性病毒血清。接种1周后，分别颈外静脉抽血，用地高辛标记的DHBV DNA探针经斑点杂交检测筛选出感染阳性鸭，饲养至2周龄作为实验动物。
试验方法将感染阳性鸭55只随机分为5组病毒对照组(11只)用淀粉胶囊，每日口腔灌喂1次，剂量为500mg/只。阳性药物对照组(12只)用拉米夫定胶囊，每日口腔灌喂1次，剂量为50mg.Kg-1.D-1。提取物小剂量组(10只)每日口腔灌喂1次，剂量为60mg.Kg-1.D-1。提取物大剂量组(12只)每日口腔灌喂1次，剂量为120mg.Kg-1.D-1。
实验用药时间为28天，停药观察7天。观察指标如下血清DHBV DNA改变情况于用药前、用药7天、14天、21天、28天、停药7天分别颈外静脉抽血，分离血清于-20℃保存待检。采用斑点杂交法，用罗氏公司的地高辛标记试剂盒制备DHBV DNA探针统一检测，用VuegoScan(Brisa-620ST)扫描仪进行膜片扫描；用the Discovery SeriesQuantity One软件对斑点进行定量分析，斑点值为volume(volume＝intensity×mm2)。统计学采用spss软件，配对t检验。
血清DHBsAg改变情况于用药前、用药7天、14天、21天、28天、停药7天分别颈外静脉抽血，分离血清于-20℃保存待检。将用药前后的血清统一对比检测，采用ELISA快速法、酶标阅读仪(Bio-TEK公司)490nm读取O.D值。统计学采用spss软件，配对t检验。
各组用药前、中、后血清DHBsAg O.D值改变情况随着时间的推移，各组DHBsAg O.D值呈现下降趋势，经统计学比较病毒对照组血清DHBsAg O.D值的改变无统计学意义；而拉米呋啶组及提取物各剂量组不同用药时间均出现血清DHBsAg O.D值明显降低(P＜0.01)，至停药7天血清DHBsAg O.D值用药前比较仍有持续降低(P＜0.01)。结果见表3表3各组用药前后血清DHBsAgO.D值改变情况(X±S)
注上表所列为各组DHBsAgO.D值平均数及标准差，统计学采用配对t检验。(″*″P＜0.05，″*″P＜0.01)，为不同时间DHBsAgO.D值与同组用药前DHBsAg0.D值的比较用药前、中、后血清DHBV DNA滴度改变情况病毒对照组用药前后血清DHBV DNA滴度无明显降低，并呈现轻微上升趋势。拉米夫定组用药7天后开始出现血清DHBV DNA滴度降低(P＜0.01)，停药后有DHBV DNA回升现象。提取物各剂量组分别于用药14天开始出现血清DHBV DNA滴度降低(P＜0.05、P＜0.01)，停药后DHBV DNA回升现象不明显；结果见表4
表4升麻提取物用药前后血清DHBV DNA滴度变化(X±S)
注上表所列为各组DNA斑点volume值的平均数及标准差，统计学采用配对t检验(″*″P＜0.05″**″P＜0.01)，为不同时间DNA斑点值与同组用药前DNA斑点值的比较。
实施例1升麻脂溶性有机酸的制备取升麻药材1000克，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流2次，每次6500毫升，过滤，取滤液。浓缩，干燥，得提取物120克。取该提取物30.0克，以850毫升60℃蒸馏水分4次将之尽可能溶解并转移到2000毫升分液漏斗中，加入8毫升36％盐酸并搅拌均匀。以醋酸乙酯萃取5次，每次300毫升，合并上层相溶液。上层相溶液以3％氢氧化钠溶液500毫升、400毫升和300毫升共萃取3次。合并下层碱液，以36％盐酸调节pH至2-3后，以醋酸乙酯萃取4次，每次350毫升。合并澄清的上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次140毫升，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-5。该有机层相溶液经除去醋酸乙酯后得到脂溶性有机酸4.6克，收率1.84％。
实施例2升麻水溶性有机酸的制备取升麻药材1000克，加6000毫升蒸馏水，加热煮沸2小时。沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少。过滤，取滤液。药渣加5000毫升蒸馏水进行第二次加热煮沸2小时，过滤，取滤液。合并滤液，浓缩到1000毫升，慢慢加入2.8倍体积(2800毫升)的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置16小时，以3000rpm离心20分钟，取滤液。该滤液经减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000毫升。取该提取液600毫升，通过已预处理过的732型强酸性阳离子交换树脂柱(H型)，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH中性为止，共收集流出液约5000毫升。此流出液全部通过已预处理过的717型强碱性阴离子交换树脂柱(OH型)，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH中性后，改用0.5N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止。该流出液经减压蒸干后，加入少量蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-5为止，即得水溶性有机酸5.7克，得率0.95％。
实施例3升麻脂溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流3次，每次7000升，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物110kg；取该提取物30kg，以800升60℃蒸馏水分3次将其溶解并转移到分液装置中，加入9.6升30％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取4次，每次300升，合并上层相溶液；上层相溶液以3％氢氧化钠溶液300升萃取5次，取下层碱液；下层碱液以30％盐酸调节pH至2-3后，每次300升的醋酸乙酯萃取，共萃取3次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次100升，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH5；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸4kg。
实施例4升麻脂溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加80％乙醇使液面漫过药材，浸泡10小时后加热回流4次，每次7500升，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物120kg；取该提取物35kg，以900升65℃蒸馏水分5次将其溶解并转移到分液装置中，加入8升35％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取5次，每次400升，合并上层相溶液；上层相溶液以4％氢氧化钠溶液500升萃取4次，取下层碱液；下层碱液以35％盐酸调节pH至3后，每次400升的醋酸乙酯萃取，共萃取4次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次150升，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸5kg。
实施例5升麻水溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加蒸馏水，加热煮沸2次，每次保持6000升，沸腾2小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到1000升，放冷后，慢慢加入3000升的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置15小时，以2500rpm离心20分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000升；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.4N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1时为止；该流出液经减压蒸干后，加入30升蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH6为止，即得水溶性有机酸8kg。
实施例6升麻水溶性有机酸的制备取升麻药材1000kg，加蒸馏水，加热煮沸3次，每次保持7000升，沸腾2.5小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到1100升，放冷后，慢慢加入3500升的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置30小时，以3500rpm离心40分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1100升；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH7后，改用0.6N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入60升蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH5为止，即得水溶性有机酸12kg。
实施例7制备脂溶性有机酸取升麻药材，按上述脂溶性有机酸提取方法得脂溶性有机酸100-300克，按常规方法制成胶囊1000粒，肝炎患者服用，按成人60公斤体重计算，每次1-2粒，每日2次。
实施例8制备水溶性有机酸取升麻药材，按上述水溶性有机酸提取方法得水溶性有机酸100-300克，按常规方法制成片剂1000片，肝炎患者服用，按成人60公斤体重计算，每次1-2片，每日2次。
实施例9制备脂溶性有机酸取升麻药材，按上述脂溶性有机酸提取方法得脂溶性有机酸100-300克，按常规方法制成颗粒剂1000袋，肝炎患者服用，按成人60公斤体重计算，每次1-2袋，每日2次。
实施例10制备水溶性有机酸取升麻药材，按上述水溶性有机酸提取方法得水溶性有机酸100-300克，按常规方法制成注射液1000支，10-20毫升/支，肝炎患者静脉滴注，按成人60公斤体重计算，每次1-2支，每日1次。
实施例11制备脂溶性有机酸取升麻药材，按上述脂溶性有机酸提取方法得脂溶性有机酸100-300克，按常规方法制成冻干粉针1000支，肝炎患者静脉滴注，按成人60公斤体重计算，每次1-2支，每日1次。
实施例12制备水溶性有机酸取升麻药材，按上述水溶性有机酸提取方法得水溶性有机酸100-300克，按常规方法制成栓剂1000支，肝炎患者肛门给药，按成人60公斤体重计算，每次1支，每日1-2次。
权利要求
1.一种升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，共萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份。
2.如权利要求1所述的升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流2次，每次6500体积份，过滤，取滤液浓缩，干燥，得提取物120重量份；取该提取物30.0重量份，以850体积份60℃蒸馏水分4次将之尽可能溶解并转移到2000体积份分液装置中，加入8体积份浓盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取5次，每次300体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以3％氢氧化钠溶液500体积份、400体积份和300体积份共萃取3次；合并下层碱液，以浓盐酸调节pH至2-3后，以醋酸乙酯萃取4次，每次350体积份；合并澄清的上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次140体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-5；该有机层相溶液经除去醋酸乙酯后得到脂溶性有机酸4.6重量份。
3.一种升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加蒸馏水5000-8000体积份，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。
4.如权利要求3所述的升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到取升麻药材1000重量份，加6000体积份蒸馏水，加热煮沸2小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液；药渣加5000体积份蒸馏水进行第二次加热煮沸2小时，过滤，取滤液；合并滤液，浓缩到1000体积份，加入2800体积份的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置16小时，以3000rpm离心20分钟，取滤液；该滤液经减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000体积份；取该提取液600体积份，通过已预处理过的732型强酸性阳离子交换树脂柱H型，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH中性为止，共收集流出液约5000体积份；此流出液全部通过已预处理过的717型强碱性阴离子交换树脂柱OH型，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH中性后，改用0.5N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入少量蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-5为止，即得水溶性有机酸5.7重量份。
5.一种升麻有机酸的提取方法，其特征在于该方法包括如下方法中任一种A、取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，共萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份；B、取升麻药材1000重量份，加蒸馏水，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，慢慢加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；该滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。
6.如权利要求5所述的升麻有机酸的提取方法，其特征在于该方法包括如下方法中的任一种A、取升麻药材1000重量份，加75％乙醇使液面漫过药材，浸泡5小时后加热回流2次，每次6500体积份，过滤，取滤液浓缩，干燥，得提取物120重量份；取该提取物30.0重量份，以850体积份60℃蒸馏水分4次将之尽可能溶解并转移到2000体积份分液装置中，加入8体积份浓盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取5次，每次300体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以3％氢氧化钠溶液500体积份、400体积份和300体积份共萃取3次；合并下层碱液，以浓盐酸调节pH至2-3后，以醋酸乙酯萃取4次，每次350体积份；合并澄清的上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次140体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-5；该有机层相溶液经除去醋酸乙酯后得到脂溶性有机酸4.6重量份；B、取升麻药材1000重量份，加6000体积份蒸馏水，加热煮沸2小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液；药渣加5000体积份蒸馏水进行第二次加热煮沸2小时，过滤，取滤液；合并滤液，浓缩到1000体积份，加入2800体积份的95％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置16小时，以3000rpm离心20分钟，取滤液；该滤液经减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到1000体积份；取该提取液600体积份，通过已预处理过的732型强酸性阳离子交换树脂柱H型，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH中性为止，共收集流出液约5000体积份；此流出液全部通过已预处理过的717型强碱性阴离子交换树脂柱OH型，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH中性后，改用0.5N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入少量蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-5为止，即得水溶性有机酸5.7重量份。
7.如权利要求1-4所述的升麻有机酸，其特征在于该有机酸加上药剂学接受的辅料制成临床上或药学上可接受的剂型片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、皮下给药制剂或栓剂。
8.如权利要求1-4所述的升麻有机酸在制备治疗或预防乙型肺炎的药物中的应用。
9.如权利要求1-4所述的升麻有机酸在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用。
10.如权利要求1-4所述的升麻有机酸在制备具有抑制血清中HBsAg、HBeAg和HBV DNA滴度作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了升麻有机酸的提取方法及新用途。升麻脂溶性有机酸制备方法为加乙醇浸泡、加热回流，过滤；将提取物溶解，加盐酸，以醋酸乙酯萃取；合并上层相溶液，以氢氧化钠萃取；取下层碱液，调节pH，醋酸乙酯萃取，合并上层相溶液、洗涤，除去醋酸乙酯后得到。升麻水溶性有机酸制备方法为加蒸馏水加热、过滤，取滤液，浓缩加乙醇，静置、离心；滤液至无醇味，加蒸馏水、过树脂柱，洗脱；收集流出液减压蒸干、加入蒸馏水并反复蒸干，即得。同时公开了升麻有机酸在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
文档编号A61P31/00GK1730448SQ20041005801
公开日2006年2月8日 申请日期2004年8月6日 优先权日2004年8月6日
发明者崔晓兰, 巢志茂 申请人:于水
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