杞菊地黄口服液的质量控制方法
专利名称：杞菊地黄口服液的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g制成的杞菊地黄口服液的质量控制方法，特别是涉及用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量和用薄层色谱法鉴别中药材菊花、泽泻的杞菊地黄口服液质量控制方法。
背景技术：
《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3-B-2146-96)中治疗肝肾阴虚，眩晕耳鸣，羞明畏光，视物昏花疾病药物杞菊地黄口服液，该药物配方由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g组成，上述原料共制成1000ml；并颁布了其质量控制标准，但卫生部颁发的现有的杞菊地黄口服液质量控制方法中，检测方法项下有PH值、相对密度、装量及微生物限度检查，及含量测定，但无药材定性鉴别，专属性不强，局限性较大，难以控制杞菊地黄口服液的质量；《中国药典》2000版一部收载的杞菊地黄丸质量控制方法采用药材牡丹皮、山茱萸的薄层鉴别，并有一项显微鉴别，无含测指标，难以控制杞菊地黄丸的质量；本发明是克服现有技术的不足，提高杞菊地黄口服液的质量控制标准，改进制剂中含量测定检测方法，提高芍药苷含量的最低限度，增加菊花、泽泻两味药材的薄层色谱定性鉴别方法，使样品处理更加简便，保证了本复方制剂较高的质量标准水平。
发明内容
本发明的目的是提供杞菊地黄口服液的新的质量控制方法，保证质量检测标准的准确性和先进性。
《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3-B-2146-96)中杞菊地黄口服液配方由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g组成，牡丹皮是方中主要药味，为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，具有清热凉血，活血散瘀之功效，主要含有芍药甙、丹皮酚、丹皮酚原甙等化学成分；菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium morifolium Ramat.的头状花序，具有疏风清热，解毒，明目的功效；泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale(Sam.)Juzep.块茎，味甘，淡，寒，具有利水渗湿，泄热的功效，主要含有泽泻醇A、B、C及泽泻醇A乙酸酯、泽泻醇B乙酸酯、泽泻醇C乙酸酯等化学成分；杞菊地黄口服液的工艺为水提，故显微鉴别不适用，山茱萸中的化学成分熊果酸为脂溶性成分，不适用于作为建立本制剂的含测指标，另外，本发明增加了杞菊地黄口服液中菊花、泽泻的薄层定性鉴别。并进一步改善了芍药苷的含量测定方法，杞菊地黄口服液按原标准制备的供试品浓度太大，流动相分离效果也欠佳，杂质干扰较大，使得测定结果不准确，经研究，对原标准进行了如下改进(1)由于本品较浓，萃取时先稀释并加大了萃取溶剂水饱和正丁醇的体积，有利于两相分层，减少损失；(2)最后定容体积定为25ml，使供试品溶液主峰峰面积与对照品相当，减少了杂质峰的干扰，提高了准确度；(3)提高了芍药苷的最低限度。研究结果表明，提高后的标准能更好地反映和控制制剂的内在质量。
完成本发明通过下述技术方案予以实现其一用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量；其二用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花和泽泻。
具体的杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，可通过以下步骤预以实现试验仪器、试药与试剂高效液相色谱仪Waters600型泵，Waters600控制器，Waters486型紫外检测器；江申色谱工作软件(JS-3030版，大连江申分离科学技术公司)；超声波清洗仪(SK5200H型，上海科导超声仪器有限公司)；METTLER电子分析天平(AE240型，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。
芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号0736-200116，含量测定用)。
乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量包括下列步骤a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温25-30℃，检测波长230±2nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备称取经干燥的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备取本品置分液漏斗中，加水稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取多次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加流动相或甲醇适量使溶解，加流动相或甲醇稀释并定容；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；上述色谱条件流动相的数值范围值可选取乙腈-水(10-19∶81-90)、优选乙腈-水(12∶88)；对照品溶液的制备最好精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成每1ml含10-60μg的对照品溶液；供试品制备加5ml水稀释，加10ml水饱和正丁醇萃取条件最佳，最后定容体积可以在25-50ml，最好定容为25ml；分别精密吸取对照品和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
本发明中药材菊花薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材，加乙醇回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；上述菊花薄层鉴别样品处理可采用上聚酰胺柱的方法，优选酰胺柱为(3g，30-60目，直径1cm)，展开剂为氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸，氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸的比例(5∶5∶2∶0.5)为最佳，显色剂为三氯化铁乙醇溶液最佳。
中药材泽泻薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材，加乙醇，回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加醋酸乙酯振摇提取多次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品，加乙醚振摇提取多次，合并乙醚液，用碱溶液振摇提取多次，弃去碱水液，乙醚液加水振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇，室温放置数分钟至斑点显色清晰。
上述泽泻薄层鉴别样品处理可采用乙醚萃取，碱溶液除杂、展开剂为石油醚-醋酸乙酯-甲酸，显色剂为醋酐-硫酸-无水乙醇；上述的碱溶液可用5％碳酸氢钠溶液；展开剂为石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸，展开剂的比例(6∶4∶0.1)为最佳；显色剂比例为醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
优选中药材菊花的薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1-3g，加乙醇50-150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20-60ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
优选中药材泽泻的薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4-10g，加70％乙醇50-150ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为对照药材溶液。
c.供试品的制备取本品60-180ml，加乙醚振摇提取三次，每次30-90ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15-30ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5-20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
更优选中药材菊花薄层色谱(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别方法步骤a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。
更优选中药材泽泻的薄层色谱法鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述的治疗肝肾阴虚，眩晕耳鸣，羞明畏光，视物昏花疾病杞菊地黄口服液的制备方法，是按《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3-B-2146-96)中的制备方法制成，每袋容量为10ml，口服，一次10ml，一日2次。
本发明提供了菊花、泽泻的TCL鉴别，对原含量测定的质量标准进行了改进，包括改进制剂中含量测定方法以及提高芍药苷含量的最低限度。经过多次重复试验，确认方法简便、结果准确，可作为杞菊地黄口服液质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
测定方法的方法学考察(1)线性关系精密量取芍药苷对照品母液(0.2408mg/ml)0.25，0.5，1，1.5，2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按本发明的方法，注入液相色谱仪中，测定芍药苷峰面积。以进样量(m)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程A＝11862479m-20262.4，r＝0.9998，直线通过原点，线性范围0.0301～0.2408μg。
(2)精密度试验取浓度为14.08μg/ml的芍药苷对照品溶液，精密吸取5μl，注入液相色谱仪，测定芍药苷峰面积，连续测定6次，结果见表2。
表2、精密度试验结果序号峰面积平均值RSD％(n＝6)1 13598992 14227593 14062921389283 1.744 13668955 13984896 1381366以上结果表明，本方法精密度良好。
(3)稳定性试验取本品供试品溶液(批号0301001)，每隔一定时间，注入液相色谱仪，测定芍药苷峰面积，结果见表3。
表3、稳定性试验结果序号间隔时间(小时)峰面积RSD％(n＝5)
10 97996921 98189132 988169 0.8143 98854454 969000以上结果表明，样品在4小时内稳定，本方法稳定性良好。
(4)重现性试验取本品5份(批号0301001)，按本发明方法测定，结果见表4。
表4、重现性试验结果序号含量mg/ml 平均含量mg/ml RSD％(n＝5)1 0.1172 0.1113 0.114 0.114 1.964 0.1135 0.115以上结果表明，本方法重现性良好。
(5)回收率试验精密量取本品2ml，精密加入对照品母液适量，按本发明方法测定芍药苷含量，按下式计算回收率，结果见表5。
表5、回收率试验结果已知量加入量 测得量回收率平均值RSD％序号mgmgmg％ ％ (n＝5)1 0.2280 0.2408 0.4752102.662 0.2280 0.2408 0.4727101.623 0.2280 0.2408 0.4786100.75 102.041.024 0.2280 0.2408 0.4771103.455 0.2280 0.2408 0.4729101.70以上结果表明，本方法回收率良好。
(6)阴性干扰试验取不含牡丹皮药材制成的阴性对照品，按本发明方法测定芍药苷峰面积，结果表明无干扰。
(7)样品测定取本品8批，按本发明方法，测定芍药苷含量，结果见表6。
表6、8批样品测定结果序号 批号含量mg/ml平均值mg/ml0.1141 03010010.1140.1130.1202 03010020.1200.1200.1173 03010030.1160.1140.1144 03020010.1140.1150.1245 03020020.1260.1280.1206 03040010.1210.1220.0907 03040020.0900.0890.0958 03040030.0950.094根据以上结果和原标准，规定本品每1ml含牡丹皮以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.07mg。
具体实施例方式
实施例1、取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液；d.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.用薄层色谱法鉴别该药物中药材泽泻a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法作为该药物质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
实施例2取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.用薄层色谱法鉴别该药物中药材泽泻a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.用薄层色谱法鉴别该药物中药材牡丹皮a.对照品的制备取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并，低温蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法作为该药物质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
实施例3取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，该方法可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(10∶90)为流动相，柱温25℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含10μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材3g，加乙醇150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材10g，加70％乙醇150ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品180ml，加乙醚振摇提取三次，每次90ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次30ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例4
取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，该方法可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(19∶81)为流动相，柱温27℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品6ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加甲醇适量使溶解，移置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材2g，加乙醇50-150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品40ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)6g，加70％乙醇100ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
d.供试品的制备取本品100ml，加乙醚振摇提取三次，每次60ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次20ml，弃去碱水液，乙醚液加水20ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，该方法可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(15∶85)为流动相，柱温26℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
e.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含40μg的溶液。
f.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材2g，加乙醇100ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品40ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材8g，加70％乙醇100ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品100ml，加乙醚振摇提取三次，每次60ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次20ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例6取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(14∶86)为流动相，柱温29℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含30μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品8ml，置分液漏斗中，加水10ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例7取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加甲醇适量使溶解，移置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法作为该药物质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
权利要求
1.一种由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g制成的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量；(2)、用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花；(3)、用薄层色谱法鉴别该药物中药材泽泻。
2.根据权利要求1的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温25-30℃，检测波长230±2nm；b.对照品溶液的制备称取经干燥的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备取本品置分液漏斗中，加水稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取多次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加流动相或甲醇适量使溶解，加流动相或甲醇稀释并定容；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；(2).用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材，加乙醇回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；(3).药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材，加乙醇，回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加醋酸乙酯振摇提取多次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品，加乙醚振摇提取多次，合并乙醚液，用碱溶液振摇提取多次，弃去碱水液，乙醚液加水振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇。
3.根据权利要求2的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(10-19∶81-90)为流动相，柱温25-30℃，检测波长230±2nm；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成每1ml含10-60μg的溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5-10ml，置分液漏斗中，加水5-10ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相或甲醇适量使溶解，移置25-50ml量瓶中，加流动相或甲醇稀释至刻度，摇匀；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定。(2).用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1-3g，加乙醇50-150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品20-60ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。(3).药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材4-10g，加70％乙醇50-150ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品60-180ml，加乙醚振摇提取三次，每次30-90ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15-30ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
4.根据权利要求3所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；d.芍药苷的含量测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定芍药苷的含量。(2)药物中药材菊花用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。(3)药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
5.根据权利要求2-4任一所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于含量测定方法中a.供试品加水稀释，加水饱和正丁醇萃取；b.最后定容体积定为25-50ml；c.芍药苷的最低限度为0.07mg/ml。
6.根据权利要求5所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于a.供试品加5ml水稀释，加10ml水饱和正丁醇萃取；b.最后定容体积定为25ml；c.芍药苷的最低限度为0.07mg/ml。
7.根据权利要求2-4任一所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于中药材菊花薄层色谱鉴别方法中样品上聚酰胺柱、展开剂为氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸、显色剂用三氯化铁乙醇溶液。
8.根据权利要求7杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)、展开剂氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)。
9.根据权利要求2-4任一所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于中药材泽泻薄层色谱鉴别方法中供试品的制备采用乙醚萃取、碱溶液除杂、展开剂为石油醚-醋酸乙酯-甲酸，显色剂为醋酐-硫酸-无水乙醇。
10.根据权利要求9所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于采用乙醚萃取、5％碳酸氢钠溶液除杂、展开剂为石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)，显色剂为醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
全文摘要
本发明涉及《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3－B－2146－96)中杞菊地黄口服液新的质量控制方法，该药物由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g组成，具体的是利用高效液相色谱法测定杞菊地黄口服液中芍药苷的含量，方法简便、重现性好、结果准确；用薄层色谱法鉴别杞菊地黄口服液中中药材菊花、泽泻，专属、可行，保证了质量检测标准的准确性和先进性，能够有效地控制杞菊地黄口服液的质量。
文档编号A61J3/00GK1600364SQ20041006097
公开日2005年3月30日 申请日期2004年10月12日 优先权日2004年10月12日
发明者卢建中, 王伟兰, 李诒光, 徐昌瑞 申请人:江西江中药业股份有限公司
技术领域：
本发明涉及一种由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g制成的杞菊地黄口服液的质量控制方法，特别是涉及用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量和用薄层色谱法鉴别中药材菊花、泽泻的杞菊地黄口服液质量控制方法。
背景技术：
《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3-B-2146-96)中治疗肝肾阴虚，眩晕耳鸣，羞明畏光，视物昏花疾病药物杞菊地黄口服液，该药物配方由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g组成，上述原料共制成1000ml；并颁布了其质量控制标准，但卫生部颁发的现有的杞菊地黄口服液质量控制方法中，检测方法项下有PH值、相对密度、装量及微生物限度检查，及含量测定，但无药材定性鉴别，专属性不强，局限性较大，难以控制杞菊地黄口服液的质量；《中国药典》2000版一部收载的杞菊地黄丸质量控制方法采用药材牡丹皮、山茱萸的薄层鉴别，并有一项显微鉴别，无含测指标，难以控制杞菊地黄丸的质量；本发明是克服现有技术的不足，提高杞菊地黄口服液的质量控制标准，改进制剂中含量测定检测方法，提高芍药苷含量的最低限度，增加菊花、泽泻两味药材的薄层色谱定性鉴别方法，使样品处理更加简便，保证了本复方制剂较高的质量标准水平。
发明内容
本发明的目的是提供杞菊地黄口服液的新的质量控制方法，保证质量检测标准的准确性和先进性。
《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3-B-2146-96)中杞菊地黄口服液配方由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g组成，牡丹皮是方中主要药味，为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，具有清热凉血，活血散瘀之功效，主要含有芍药甙、丹皮酚、丹皮酚原甙等化学成分；菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium morifolium Ramat.的头状花序，具有疏风清热，解毒，明目的功效；泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale(Sam.)Juzep.块茎，味甘，淡，寒，具有利水渗湿，泄热的功效，主要含有泽泻醇A、B、C及泽泻醇A乙酸酯、泽泻醇B乙酸酯、泽泻醇C乙酸酯等化学成分；杞菊地黄口服液的工艺为水提，故显微鉴别不适用，山茱萸中的化学成分熊果酸为脂溶性成分，不适用于作为建立本制剂的含测指标，另外，本发明增加了杞菊地黄口服液中菊花、泽泻的薄层定性鉴别。并进一步改善了芍药苷的含量测定方法，杞菊地黄口服液按原标准制备的供试品浓度太大，流动相分离效果也欠佳，杂质干扰较大，使得测定结果不准确，经研究，对原标准进行了如下改进(1)由于本品较浓，萃取时先稀释并加大了萃取溶剂水饱和正丁醇的体积，有利于两相分层，减少损失；(2)最后定容体积定为25ml，使供试品溶液主峰峰面积与对照品相当，减少了杂质峰的干扰，提高了准确度；(3)提高了芍药苷的最低限度。研究结果表明，提高后的标准能更好地反映和控制制剂的内在质量。
完成本发明通过下述技术方案予以实现其一用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量；其二用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花和泽泻。
具体的杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，可通过以下步骤预以实现试验仪器、试药与试剂高效液相色谱仪Waters600型泵，Waters600控制器，Waters486型紫外检测器；江申色谱工作软件(JS-3030版，大连江申分离科学技术公司)；超声波清洗仪(SK5200H型，上海科导超声仪器有限公司)；METTLER电子分析天平(AE240型，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。
芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号0736-200116，含量测定用)。
乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量包括下列步骤a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温25-30℃，检测波长230±2nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备称取经干燥的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备取本品置分液漏斗中，加水稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取多次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加流动相或甲醇适量使溶解，加流动相或甲醇稀释并定容；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；上述色谱条件流动相的数值范围值可选取乙腈-水(10-19∶81-90)、优选乙腈-水(12∶88)；对照品溶液的制备最好精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成每1ml含10-60μg的对照品溶液；供试品制备加5ml水稀释，加10ml水饱和正丁醇萃取条件最佳，最后定容体积可以在25-50ml，最好定容为25ml；分别精密吸取对照品和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
本发明中药材菊花薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材，加乙醇回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；上述菊花薄层鉴别样品处理可采用上聚酰胺柱的方法，优选酰胺柱为(3g，30-60目，直径1cm)，展开剂为氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸，氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸的比例(5∶5∶2∶0.5)为最佳，显色剂为三氯化铁乙醇溶液最佳。
中药材泽泻薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材，加乙醇，回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加醋酸乙酯振摇提取多次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品，加乙醚振摇提取多次，合并乙醚液，用碱溶液振摇提取多次，弃去碱水液，乙醚液加水振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇，室温放置数分钟至斑点显色清晰。
上述泽泻薄层鉴别样品处理可采用乙醚萃取，碱溶液除杂、展开剂为石油醚-醋酸乙酯-甲酸，显色剂为醋酐-硫酸-无水乙醇；上述的碱溶液可用5％碳酸氢钠溶液；展开剂为石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸，展开剂的比例(6∶4∶0.1)为最佳；显色剂比例为醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
优选中药材菊花的薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1-3g，加乙醇50-150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20-60ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
优选中药材泽泻的薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4-10g，加70％乙醇50-150ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为对照药材溶液。
c.供试品的制备取本品60-180ml，加乙醚振摇提取三次，每次30-90ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15-30ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5-20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
更优选中药材菊花薄层色谱(2000版中国药典一部附录VIB)鉴别方法步骤a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。
更优选中药材泽泻的薄层色谱法鉴别按下列步骤进行a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述的治疗肝肾阴虚，眩晕耳鸣，羞明畏光，视物昏花疾病杞菊地黄口服液的制备方法，是按《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3-B-2146-96)中的制备方法制成，每袋容量为10ml，口服，一次10ml，一日2次。
本发明提供了菊花、泽泻的TCL鉴别，对原含量测定的质量标准进行了改进，包括改进制剂中含量测定方法以及提高芍药苷含量的最低限度。经过多次重复试验，确认方法简便、结果准确，可作为杞菊地黄口服液质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
测定方法的方法学考察(1)线性关系精密量取芍药苷对照品母液(0.2408mg/ml)0.25，0.5，1，1.5，2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按本发明的方法，注入液相色谱仪中，测定芍药苷峰面积。以进样量(m)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程A＝11862479m-20262.4，r＝0.9998，直线通过原点，线性范围0.0301～0.2408μg。
(2)精密度试验取浓度为14.08μg/ml的芍药苷对照品溶液，精密吸取5μl，注入液相色谱仪，测定芍药苷峰面积，连续测定6次，结果见表2。
表2、精密度试验结果序号峰面积平均值RSD％(n＝6)1 13598992 14227593 14062921389283 1.744 13668955 13984896 1381366以上结果表明，本方法精密度良好。
(3)稳定性试验取本品供试品溶液(批号0301001)，每隔一定时间，注入液相色谱仪，测定芍药苷峰面积，结果见表3。
表3、稳定性试验结果序号间隔时间(小时)峰面积RSD％(n＝5)
10 97996921 98189132 988169 0.8143 98854454 969000以上结果表明，样品在4小时内稳定，本方法稳定性良好。
(4)重现性试验取本品5份(批号0301001)，按本发明方法测定，结果见表4。
表4、重现性试验结果序号含量mg/ml 平均含量mg/ml RSD％(n＝5)1 0.1172 0.1113 0.114 0.114 1.964 0.1135 0.115以上结果表明，本方法重现性良好。
(5)回收率试验精密量取本品2ml，精密加入对照品母液适量，按本发明方法测定芍药苷含量，按下式计算回收率，结果见表5。
表5、回收率试验结果已知量加入量 测得量回收率平均值RSD％序号mgmgmg％ ％ (n＝5)1 0.2280 0.2408 0.4752102.662 0.2280 0.2408 0.4727101.623 0.2280 0.2408 0.4786100.75 102.041.024 0.2280 0.2408 0.4771103.455 0.2280 0.2408 0.4729101.70以上结果表明，本方法回收率良好。
(6)阴性干扰试验取不含牡丹皮药材制成的阴性对照品，按本发明方法测定芍药苷峰面积，结果表明无干扰。
(7)样品测定取本品8批，按本发明方法，测定芍药苷含量，结果见表6。
表6、8批样品测定结果序号 批号含量mg/ml平均值mg/ml0.1141 03010010.1140.1130.1202 03010020.1200.1200.1173 03010030.1160.1140.1144 03020010.1140.1150.1245 03020020.1260.1280.1206 03040010.1210.1220.0907 03040020.0900.0890.0958 03040030.0950.094根据以上结果和原标准，规定本品每1ml含牡丹皮以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.07mg。
具体实施例方式
实施例1、取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液；d.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.用薄层色谱法鉴别该药物中药材泽泻a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法作为该药物质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
实施例2取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.用薄层色谱法鉴别该药物中药材泽泻a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.用薄层色谱法鉴别该药物中药材牡丹皮a.对照品的制备取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并，低温蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法作为该药物质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
实施例3取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，该方法可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(10∶90)为流动相，柱温25℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含10μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材3g，加乙醇150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材10g，加70％乙醇150ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品180ml，加乙醚振摇提取三次，每次90ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次30ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯3ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例4
取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，该方法可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(19∶81)为流动相，柱温27℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品6ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加甲醇适量使溶解，移置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材2g，加乙醇50-150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品40ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)6g，加70％乙醇100ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
d.供试品的制备取本品100ml，加乙醚振摇提取三次，每次60ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次20ml，弃去碱水液，乙醚液加水20ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
杞菊地黄口服液新的质量控制检测方法，该方法可以按下列测定步骤进行1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(15∶85)为流动相，柱温26℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
e.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含40μg的溶液。
f.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材2g，加乙醇100ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品40ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材8g，加70％乙醇100ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品100ml，加乙醚振摇提取三次，每次60ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次20ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例6取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(14∶86)为流动相，柱温29℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含30μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品8ml，置分液漏斗中，加水10ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例7取中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g，上述原料菊花、牡丹皮用20倍药材水量水蒸气蒸馏4小时，蒸馏液再进行重蒸馏，收集重蒸馏液适量；药渣加10倍药材加水量煎煮1.5小时，滤过，药液备用。枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻加药材8倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。滤液与菊花、牡丹皮水煎液合并，浓缩至约880ml，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇。茯苓加20倍量水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将蒸馏液与上述各药液合并，加单糖浆250ml、苯甲酸钠2.5g，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，每袋容量为10ml。
1.用高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量测定及其标准a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液。
c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加甲醇适量使溶解，移置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每ml杞菊地黄口服液含牡丹皮以芍药苷计，不得少于0.07mg。
2.用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(2000版中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(2-3个)。
3.该药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材(购自中国药品生物制品检定所，批号21081-200302)4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液。
b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液。
c.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)，室温放置数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法作为该药物质量控制和考察工艺的稳定性的指标。
权利要求
1.一种由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g制成的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量；(2)、用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花；(3)、用薄层色谱法鉴别该药物中药材泽泻。
2.根据权利要求1的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，柱温25-30℃，检测波长230±2nm；b.对照品溶液的制备称取经干燥的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成溶液；c.供试品溶液的制备取本品置分液漏斗中，加水稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取多次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加流动相或甲醇适量使溶解，加流动相或甲醇稀释并定容；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；(2).用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材，加乙醇回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品，上聚酰胺柱，先后以水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；(3).药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材，加乙醇，回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加醋酸乙酯振摇提取多次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品，加乙醚振摇提取多次，合并乙醚液，用碱溶液振摇提取多次，弃去碱水液，乙醚液加水振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇。
3.根据权利要求2的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(10-19∶81-90)为流动相，柱温25-30℃，检测波长230±2nm；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相或甲醇制成每1ml含10-60μg的溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5-10ml，置分液漏斗中，加水5-10ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相或甲醇适量使溶解，移置25-50ml量瓶中，加流动相或甲醇稀释至刻度，摇匀；d.测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定。(2).用薄层色谱法鉴别该药物中药材菊花a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1-3g，加乙醇50-150ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-60ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1-3ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品20-60ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。(3).药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材4-10g，加70％乙醇50-150ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品60-180ml，加乙醚振摇提取三次，每次30-90ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15-30ml，弃去碱水液，乙醚液加水15-30ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5-3ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
4.根据权利要求3所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)、用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量a.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12∶88)为流动相，柱温28℃，检测波长230nm；b.对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥48小时的芍药苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液；c.供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置分液漏斗中，加水5ml稀释，加水饱和的正丁醇振摇提取四次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干。残渣加流动相适量使溶解，移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；d.芍药苷的含量测定方法分别精密吸取对照品和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定芍药苷的含量。(2)药物中药材菊花用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取菊花对照药材1g，加乙醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品20ml，上聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)，先后以水、10％乙醇、30％乙醇、95％乙醇各50ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。(3)药物中药材泽泻用薄层色谱法鉴别a.对照药材溶液的制备取泽泻对照药材4g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加醋酸乙酯振摇提取两次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为对照药材溶液；b.供试品的制备取本品60ml，加乙醚振摇提取三次，每次30ml，合并乙醚液，用5％碳酸氢钠溶液振摇提取两次，每次15ml，弃去碱水液，乙醚液加水15ml振摇提取，水液弃去，乙醚液蒸干，残渣加醋酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液；c.照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点在同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
5.根据权利要求2-4任一所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于含量测定方法中a.供试品加水稀释，加水饱和正丁醇萃取；b.最后定容体积定为25-50ml；c.芍药苷的最低限度为0.07mg/ml。
6.根据权利要求5所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于a.供试品加5ml水稀释，加10ml水饱和正丁醇萃取；b.最后定容体积定为25ml；c.芍药苷的最低限度为0.07mg/ml。
7.根据权利要求2-4任一所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于中药材菊花薄层色谱鉴别方法中样品上聚酰胺柱、展开剂为氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸、显色剂用三氯化铁乙醇溶液。
8.根据权利要求7杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于聚酰胺柱(3g，30-60目，直径1cm)、展开剂氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶5∶2∶0.5)。
9.根据权利要求2-4任一所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于中药材泽泻薄层色谱鉴别方法中供试品的制备采用乙醚萃取、碱溶液除杂、展开剂为石油醚-醋酸乙酯-甲酸，显色剂为醋酐-硫酸-无水乙醇。
10.根据权利要求9所述的杞菊地黄口服液的质量控制方法，其特征在于采用乙醚萃取、5％碳酸氢钠溶液除杂、展开剂为石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)，显色剂为醋酐-硫酸-无水乙醇(1∶1∶5)。
全文摘要
本发明涉及《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十一册(WS3－B－2146－96)中杞菊地黄口服液新的质量控制方法，该药物由中药材枸杞子33g、菊花33g、熟地黄130g、山茱萸(制)65g、牡丹皮50g、山药65g、茯苓50g、泽泻50g组成，具体的是利用高效液相色谱法测定杞菊地黄口服液中芍药苷的含量，方法简便、重现性好、结果准确；用薄层色谱法鉴别杞菊地黄口服液中中药材菊花、泽泻，专属、可行，保证了质量检测标准的准确性和先进性，能够有效地控制杞菊地黄口服液的质量。
文档编号A61J3/00GK1600364SQ20041006097
公开日2005年3月30日 申请日期2004年10月12日 优先权日2004年10月12日
发明者卢建中, 王伟兰, 李诒光, 徐昌瑞 申请人:江西江中药业股份有限公司
最新回复(0)