注射用脉络宁粉针剂及其制备方法
专利名称：注射用脉络宁粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗周围血管病和脑血管病等疾病的传统中药复方制剂以及该制剂的制备方法。
背景技术：
脉络宁以著名医方“四妙勇安汤”为基础研发而成。四妙勇安汤是我国多年来沿用的传统治疗方剂，收载于清代《验方新编》一书，由金银花、玄参、当归、甘草四味药组成，具有清热解毒、活血止痛之功效。
脉络宁是中药复方制剂，具有清热养阴、活血化瘀的作用，临床用于血管闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症等病。
中国专利申请CN048148A(申请号92107848.X)公开了一种“脉络宁静脉注射液的工艺方法”，此方法是将金银花、牛膝、玄参、石斛四味药按比例配伍后，加水浸煮，将煎液浓缩成半固体状，以乙醇淀析，醇液回收乙醇后用醋酸乙酯抽提，提取液用蒸馏水转溶，滤取水溶液加适量吐温-80及20％NaOH溶液调节其PH值，得到此发明所说的成品。
中国专利申请CN 1345250A(申请号03119593.8)公开了一种“注射用脉络宁口服固体制剂的制备方法”，此方法是以传统中药忍冬金银花、黄草石斛、浙玄参和怀牛膝为原料，粉碎后加入甲醇、氯仿，运用现代超声技术提取有效成分，减压回收有机溶剂，除尽溶剂，再进行相应的后处理，即可得到此发明所说的制成品。
中药材的品种繁多，质量不一。在本发明涉及的药材中，中国药典2000版收载金银花4种；石斛的品种更多，其中中国药典2000版收载6种、江苏省药品检验所2003年颁布的石斛标准中收载4种。不同品种药材的活性成分不同且含量不同，有不同的药理毒理作用。因此将原材料具体化即选择合适的原材料具体品种，对于提高方剂的药理药效作用和产品质量的可控性十分关键。
此外，现有的脉络宁为水针剂型或水溶液等，水针在长期储存和运输方面存在局限性。
发明内容
本发明的目的之一是克服现有水剂型注射用脉络宁制剂在长期储存和运输方面、药理药效作用和产品质量可控性方面的局限性，提供一种注射用脉络宁粉针剂。
本发明的目的之二是提供一种上述注射用脉络宁粉针剂的制备方法。
本发明之一的注射用脉络宁粉针剂是这样实现的本发明的注射用脉络宁粉针剂，包括重量配比均为25％的原药材忍冬、玄参、牛膝、石斛的有效提取物。
本发明的优选原药材组分为球花石斛(或铁皮石斛)、玄参、牛膝、忍冬，每个组分的含量均为25％(重量份)。
由上述原药材组分得到注射用脉络宁粉针剂可以通过如下的方法制备将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原(即除去分子量为5000～20000左右的蛋白或内毒素)、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
上述的骨架剂可以为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
具体的制备方法可以按照下述的步骤进行一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
本发明之二的注射用脉络宁粉针剂的制备方法是这样实现的将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
上述的骨架剂可以为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
上述方法的具体步骤可以是一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
上述的活性炭添加量为1.0‰；真空条件为10-3mmHg；逐步升温25小时使冻干箱达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱达到30℃；保温5小时。
由于本发明的注射用脉络宁粉针剂为经过冷冻干燥的固体粉针剂，含水量低，可以长期贮存并保持稳定的质量，而且方便运输，实用性好。本发明的注射用脉络宁粉针剂还具有剂量准确，外观优良，质地疏松，加水迅速溶解恢复药液原有特性的特点。
本发明的注射用脉络宁粉针剂制备方法由于避免了接触污染的机会较，因此其中的微粒物质含量较少。
本发明的注射用脉络宁粉针剂是脉络宁注射液的新剂型。脉络宁注射液是由石斛、玄参、牛膝、金银花等四味药材制成，其中有法定标准得石斛药材有9种，包括环草石斛、马鞭石斛、黄草石斛、铁皮石斛、金钗石斛、短棒石斛、叠鞘石斛、球花石斛、鼓槌石斛；有法定标准的金银花药材有四种，包括忍冬、红腺忍冬、山银花、毛花柱忍冬。
本发明特别优选了金银花、石斛原药材的优选品种忍冬和球花石斛(或铁皮石斛)。经实验证明，滨蒿内酯是石斛药材的主要有效成分，石斛药材的各品种中以球花石斛和铁皮石斛中滨蒿内酯的含量较高；绿原酸为金银花中的有效成分，并且是衡量其药材质量的法定定量指标，而异绿原酸与绿原酸相比药理作用要小毒性要大，在金银花的各品种中，以忍冬中的异绿原酸含量较低且绿原酸含量较高。因此，本发明具有更高的药理药效作用，提高了产品质量的可控性。
本发明的注射用脉络宁(MLN)经过了动物试验，包括药效学试验、一般药理学试验、小鼠急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、溶血、局部刺激、过敏试验等。
试验按照下列的表1对石斛和金银花药材的具体品种通过制剂的动物试验(药理、药效、毒理试验)进行筛选。
表1石斛和金银花药材的筛选试验编号表
动物试验的药物使用剂量MLN拟临床静脉注射的人日用量为成年人每日一次静脉滴注0.65g或1.3g(相当于100克或200克药材)，按60kg人计算，人日用剂量约为0.0108g/kg或0.0217g/kg。经折算大鼠的等效剂量为0.0697g/kg、0.139g/kg，本试验中设定MLN大鼠的低、中、高剂量分别为0.0697g/kg、0.139g/kg、0.279g/kg；兔的等效剂量约为0.036g/kg、0.073g/kg，本试验中设定MLN家兔低、中、高剂量组分别为0.036g/kg、0.073g/kg、0.145g/kg；小鼠的等效剂量约为0.098g/kg～0.196g/kg，本试验中设定MLN小鼠的低、中、高剂量分别为0.098g/kg、0.196g/kg、0.393g/kg；犬的等效剂量约为0.021g/kg～0.042g/kg，本试验中设定MLN犬的低、中、高剂量分别为0.021g/kg、0.042g/kg、0.084g/kg。
1、药效学试验大鼠全血粘度MLN 0.139g/kg、0.279g/kg ip(单次腹腔注射)10d对200/s、30/s、3/s切变率下大鼠全血粘度(P＜0.05)和红细胞比容的影响所有处方的制成品均能显著降低大鼠全血粘度(P＜0.05)和红细胞比容。
大鼠最大血小板聚集率MLN 0.279g/kg ip 10d对ADP诱导的大鼠最大血小板聚集率的影响均显著降低(P＜0.01)，抑制率为35.1％～43.4％，其中处方A1B4和A1B8的抑制率为42.9％。
大鼠下腔静脉血栓形成MLN 0.070g/kg、0.139g/kg、0.279g/kg ip 10d对大鼠下腔静脉血栓形成的作用均显著抑制(P＜0.01)，MLN 0.070g/kg、处方A1B4和A1B8的抑制率为28.6％，显著高于其他处方组成。
大鼠结扎双侧颈总动脉造成的急性不完全性脑缺血MLN 0.139g/kg、0.279g/kg对大鼠结扎双侧颈总动脉造成的急性不完全性脑缺血的作用均有显著的保护作用，并使脑梗塞面积、脑指数、脑水分均较盐水组显著降低(P＜0.05)。
家兔颈总动脉血栓湿重、血栓重量/长度指数、重量/重量指数 MLN0.073g/kg、0.145g/kg iv(静脉注射)10d对家兔颈总动脉血栓湿重、血栓重量/长度指数、重量/重量指数的作用其中处方A1B4和A1B8的抑制率分别为20.9％及38.2％、21.2％和37.9％、28.6％和37.7％，显著高于其他处方组成。
静脉注射花生四烯酸致小鼠死亡率MLN 0.196g/kg、0.393g/kg iv10d对静脉注射花生四烯酸致小鼠死亡率的影响均能降低死亡率，其中处方A1B4和A1B8的死亡率由盐水组的90.0％降低至66.7％和56.7％，显著高于其他处方组成(P＜0.05)。
离体血管平滑肌试验MLN 3.3mg/ml～7.2mg/ml浓度依赖性地抑制去甲肾上腺素(10-7～10-5mol/L)和KCl(20～80mmol/L)对大鼠胸主动脉血管环的作用均能显著收缩胸主动脉血管环(P＜0.01)，处方A1B4和A1B8的IC50值分别为2.96mg/ml(95％可信区间为2.37mg/ml～3.70mg/ml)和5.23mg/ml(95％可信区间为4.78mg/ml～5.70mg/ml)，显著高于其他处方组成。
2、一般药理学试验小鼠试验MLN 0.098g/kg、0.196g/kg、0.393g/kg iv 10d对小鼠体重一般精神状态、自主活动次数、悬尾停动时间、平衡杆跌落次数及倾斜板滑下角度和滑下时间、小鼠胃肠推进率均无显著影响。
麻醉犬试验 MLN 0.021g/kg、0.042g/kg、0.084g/kg iv剂量依赖性地降低麻醉犬血压(收缩压、舒张压和平均动脉压)，用药后均在20min～30min时血压降低最显著，药后60min开始逐渐恢复。处方A1B4和A1B8分别使平均血压降到药前的55％、45％、37％，120min时分别恢复至药前的92％、71％、53％，血压下降幅度及有效时间均显著高于其他组。
所有组成的MLN对麻醉犬脏血流动力学指标均有一定的抑制作用，表现为LVSP、LVEDP、+dP/dt、-dP/dt等指标于药后20min～30min显著降低，药后60min渐恢复。处方A1B4和A1B8的LVSP、+dp/dtmax，-dp/dtmax分别降至药前的30％～50％，用药后120min时可恢复至用药前62％～78％，作用强度及有效时间均显著高于其他组。
所有组成的MLN药后20min～30min麻醉犬心率显著减慢，中、高剂量组药后90min～120min麻醉犬心率加快。MLN对麻醉犬心电图PR间期、QRS波宽和QT间期等指标无显著影响。
MLN药后麻醉犬脑血流量立即增加，处方A1B4和A1B8药后10min达高峰，20min开始下降，30min时降到药前水平以下，持续时间20min并显著高于其他组。
3、小鼠急性毒性试验小鼠单次腹腔注射(ip)或静脉注射(iv)最大可给药量(4.06g/kg)均未引起受试鼠出现任何异常反应。
一日内多次ip或iv给药，日用药量3×4.06g/kg，药后14日受试鼠均未出现任何异常反应，试验观察期间受试鼠无一死亡，试验结束动物尸检未发现受试鼠各脏器出现任何异常表现。急性毒性试验结论为，MLN毒性小，单次或一日内多次ip或iv给药均不能引起受试鼠出现死亡。各组成的单次ip或iv的最大耐受量及多次用药的日用药最大耐受量没有显著差异，处方A1B4和A1B8单次ip或iv的最大耐受量为4.06g/kg，约相当于拟临床人日用量的370倍；多次用药的日用药最大耐受量为12.18g/kg，约相当于拟临床人日用量的1110倍。
4、大鼠长期毒性试验MLN 0.072g/kg、0.22g/kg、0.65g/kg，每日1次，连续ip给药90天，仅0.22g/kg、0.65g/kg组在连续用药90天时，处方A1B4和A1B8的大鼠血液凝固时间分别由盐水组的3.3±0.5min延长至4.3±0.9min和5.3±1.0min(P＜0.01)，各组成的延长时间没有显著性差异。停药15天大鼠血液凝固时间均基本恢复正常；其他指标包括一般状态、血液学指标、血液生化学指标和组织形态学等均未见任何异常。
5、溶血、局部刺激、过敏试验体外溶血试验6.5mg/ml浓度以下均未见溶血和红细胞凝集反应。
血管刺激试验0.036g/kg和0.073g/kg，隔日1次兔耳静脉滴注，连续5次。
结果均未见滴注局部血管及周围组织有红肿、充血、硬结或溃烂等。组织学检查显示，血管内无淤血、无血栓形成，血管内皮细胞无增生，血管壁无增生、变性，无出血、水肿和炎性渗出，血管壁及周围组织无钙化或其他异常物质沉着。给药侧和对照侧相比无明显差别，表明MLN静脉滴注对兔耳缘静脉无局部刺激反应。
过敏试验制成6.5％生理盐水溶液，豚鼠隔日连续3次腹腔注射，每次0.5ml/只致敏。于第1次用药的第14天、第21天、第28天，分别静脉注射6.5％MLN生理盐水溶液1ml/只进行激发。结果表明动物未出现任何过敏反应表现。
6、统计方法试验结果以x±s表示，用SPSS统计软件对各组结果进行方差分析比较；以分组t检验比较各组间差异显著性，以配对t检验比较给药前后差异显著性。
本发明的注射用脉络宁粉针剂通过以下方法进行质量检验，检验结果表明注射用脉络宁粉针剂完全符合规定。
性状成品性状为黄棕色至红棕色的松散块状物。
鉴别(1)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，量取1ml，加水4ml，轻摇，逐滴加入碘化铋钾试液5滴，即生成橙红色沉淀。
(2)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，量取2ml，加水4ml，滴加醋酐10滴，沿壁加硫酸1ml，两界面处呈红棕色环。
(3)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，作为供试品溶液，另取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上清液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，至分液漏斗中，用氯仿提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴中浓缩至干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取滨蒿内酯对照品，加氯仿制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液1μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸丁酯(2∶3∶3)为展开剂，展开，取出，吹干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
pH值取成品1瓶，加水20ml溶解，依中国药典2000版一部附录VIIG所述方法测定，结果为7.2。
蛋白质取成品1瓶，加水10ml，量取5ml，加30％磺基水杨酸溶液5ml，混匀，放置5分钟，没有发生浑浊。
溶血试验取成品1瓶，加水10ml，精密量取0.3ml，精密加生理盐水0.2ml和2％兔血红细胞生理盐水混悬液2.5ml，摇匀，置36.5±0.5℃恒温水浴中，观察2小时，没有溶血和粘集现象。
热原取成品1瓶，加水10ml，剂量按家兔体重每1kg注射2ml，依中国药典2000版一部附录XIIIA所述方法检测，应符合规定。
重金属取成品1g，依中国药典2000版一部附录IXE第二法检查，含重金属低于10ppm。
肉桂酸含量按照中国药典2000版一部附录VID所述测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(60∶40)为流动相；检测波长为278nm。理论塔板数按肉桂酸峰计算应不低于1500。取肉桂酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml中含2μg的溶液作为对照溶液；取成品装量差异下内容物，研匀，精密称取适量，加水溶解，制得0.04g药材/ml的溶液，即得供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按照峰面积以外标法计算，得肉桂酸含量2.9mg/瓶。
本发明通过药理和生化等方面实验研究证明脉络宁有扩张血管、改善微循环、增加血流量及抗凝血、溶血栓等作用。临床上可用于治疗周围血管、脑血管闭塞性疾病。另外，在中药注射剂的研制生产中，要求较好的控制药材质量，而筛选出良好药效、较明显药理作用、较低毒性的金银花和石斛药材的具体品种，这样才有利于提高制剂质量的可控性。为此，本发明通过药效、药理、毒性等动物试验对金银花和石斛药材进行了筛选。
试验结果表明所有处方的制成品均有良好的药效、较明显的药理作用、较低的毒性，其中处方A1B4(铁皮石斛、忍冬)和A1B8(球花石斛、忍冬)的药效及药理作用显著高于其他组成，毒性与其他组成没有显著差异，因此选用A1B4和A1B8作为石斛及金银花药材的具体品种用于本发明的原药材组分。
具体实施例方式
本发明的注射用脉络宁粉针剂及其制备方法可以这样实现一、取得药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对冻干箱和凝结器进行真空处理，使其真空度达到10-3mmHg后，逐步升温25小时使冻干箱和凝结器达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱和凝结器达到30℃，保温5小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
权利要求
1.一种注射用脉络宁粉针剂，其特征在于该制剂包括重量配比均为25％的原药材忍冬、玄参、牛膝、石斛的有效提取物。
2.根据权利要求1所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于上述的石斛为球花石斛或铁皮石斛。
3.根据权利要求1或2所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于该制剂通过下列方法得到将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
4.根据权利要求3所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于所述的骨架剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
5.根据权利要求3所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于该制剂的制备方法由下列步骤构成一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
6.根据权利要求5所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于所述的活性炭添加量为1.0‰；真空条件为10-3mmHg；逐步升温25小时使冻干箱达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱达到30℃；保温5小时。
7.根据权利要求1～6之一所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于该制剂的制备方法为将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
8.根据权利要求7所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于所述的骨架剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
9.根据权利要求7所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于该制剂的制备方法为一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
10.根据权利要求9所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于所述的活性炭添加量为1.0‰；真空条件为10-3mmHg；逐步升温25小时使冻干箱达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱达到30℃；保温5小时。
全文摘要
本发明为注射用脉络宁粉针剂及其制备方法。本发明将石斛、玄参、牛膝、忍冬(其中优选球花石斛或铁皮石斛)上述四种原药材等量混匀，用常规方法水煎提取浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、活性炭吸附除热原、滤过除炭除菌后，得到半成品溶液。然后调节冻干箱的真空度和温度对半成品溶液进行冷冻处理，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。本发明的注射用脉络宁粉针剂含水量低，可以长期贮存并保持稳定的质量，而且方便运输，实用性好。另外，还具有剂量准确，外观优良，质地疏松，加水迅速溶解恢复药液原有特性的特点。
文档编号A61P9/10GK1714849SQ20041006223
公开日2006年1月4日 申请日期2004年7月1日 优先权日2004年7月1日
发明者石秀坤 申请人:石秀坤
技术领域：
本发明涉及一种治疗周围血管病和脑血管病等疾病的传统中药复方制剂以及该制剂的制备方法。
背景技术：
脉络宁以著名医方“四妙勇安汤”为基础研发而成。四妙勇安汤是我国多年来沿用的传统治疗方剂，收载于清代《验方新编》一书，由金银花、玄参、当归、甘草四味药组成，具有清热解毒、活血止痛之功效。
脉络宁是中药复方制剂，具有清热养阴、活血化瘀的作用，临床用于血管闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症等病。
中国专利申请CN048148A(申请号92107848.X)公开了一种“脉络宁静脉注射液的工艺方法”，此方法是将金银花、牛膝、玄参、石斛四味药按比例配伍后，加水浸煮，将煎液浓缩成半固体状，以乙醇淀析，醇液回收乙醇后用醋酸乙酯抽提，提取液用蒸馏水转溶，滤取水溶液加适量吐温-80及20％NaOH溶液调节其PH值，得到此发明所说的成品。
中国专利申请CN 1345250A(申请号03119593.8)公开了一种“注射用脉络宁口服固体制剂的制备方法”，此方法是以传统中药忍冬金银花、黄草石斛、浙玄参和怀牛膝为原料，粉碎后加入甲醇、氯仿，运用现代超声技术提取有效成分，减压回收有机溶剂，除尽溶剂，再进行相应的后处理，即可得到此发明所说的制成品。
中药材的品种繁多，质量不一。在本发明涉及的药材中，中国药典2000版收载金银花4种；石斛的品种更多，其中中国药典2000版收载6种、江苏省药品检验所2003年颁布的石斛标准中收载4种。不同品种药材的活性成分不同且含量不同，有不同的药理毒理作用。因此将原材料具体化即选择合适的原材料具体品种，对于提高方剂的药理药效作用和产品质量的可控性十分关键。
此外，现有的脉络宁为水针剂型或水溶液等，水针在长期储存和运输方面存在局限性。
发明内容
本发明的目的之一是克服现有水剂型注射用脉络宁制剂在长期储存和运输方面、药理药效作用和产品质量可控性方面的局限性，提供一种注射用脉络宁粉针剂。
本发明的目的之二是提供一种上述注射用脉络宁粉针剂的制备方法。
本发明之一的注射用脉络宁粉针剂是这样实现的本发明的注射用脉络宁粉针剂，包括重量配比均为25％的原药材忍冬、玄参、牛膝、石斛的有效提取物。
本发明的优选原药材组分为球花石斛(或铁皮石斛)、玄参、牛膝、忍冬，每个组分的含量均为25％(重量份)。
由上述原药材组分得到注射用脉络宁粉针剂可以通过如下的方法制备将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原(即除去分子量为5000～20000左右的蛋白或内毒素)、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
上述的骨架剂可以为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
具体的制备方法可以按照下述的步骤进行一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
本发明之二的注射用脉络宁粉针剂的制备方法是这样实现的将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
上述的骨架剂可以为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
上述方法的具体步骤可以是一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
上述的活性炭添加量为1.0‰；真空条件为10-3mmHg；逐步升温25小时使冻干箱达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱达到30℃；保温5小时。
由于本发明的注射用脉络宁粉针剂为经过冷冻干燥的固体粉针剂，含水量低，可以长期贮存并保持稳定的质量，而且方便运输，实用性好。本发明的注射用脉络宁粉针剂还具有剂量准确，外观优良，质地疏松，加水迅速溶解恢复药液原有特性的特点。
本发明的注射用脉络宁粉针剂制备方法由于避免了接触污染的机会较，因此其中的微粒物质含量较少。
本发明的注射用脉络宁粉针剂是脉络宁注射液的新剂型。脉络宁注射液是由石斛、玄参、牛膝、金银花等四味药材制成，其中有法定标准得石斛药材有9种，包括环草石斛、马鞭石斛、黄草石斛、铁皮石斛、金钗石斛、短棒石斛、叠鞘石斛、球花石斛、鼓槌石斛；有法定标准的金银花药材有四种，包括忍冬、红腺忍冬、山银花、毛花柱忍冬。
本发明特别优选了金银花、石斛原药材的优选品种忍冬和球花石斛(或铁皮石斛)。经实验证明，滨蒿内酯是石斛药材的主要有效成分，石斛药材的各品种中以球花石斛和铁皮石斛中滨蒿内酯的含量较高；绿原酸为金银花中的有效成分，并且是衡量其药材质量的法定定量指标，而异绿原酸与绿原酸相比药理作用要小毒性要大，在金银花的各品种中，以忍冬中的异绿原酸含量较低且绿原酸含量较高。因此，本发明具有更高的药理药效作用，提高了产品质量的可控性。
本发明的注射用脉络宁(MLN)经过了动物试验，包括药效学试验、一般药理学试验、小鼠急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、溶血、局部刺激、过敏试验等。
试验按照下列的表1对石斛和金银花药材的具体品种通过制剂的动物试验(药理、药效、毒理试验)进行筛选。
表1石斛和金银花药材的筛选试验编号表
动物试验的药物使用剂量MLN拟临床静脉注射的人日用量为成年人每日一次静脉滴注0.65g或1.3g(相当于100克或200克药材)，按60kg人计算，人日用剂量约为0.0108g/kg或0.0217g/kg。经折算大鼠的等效剂量为0.0697g/kg、0.139g/kg，本试验中设定MLN大鼠的低、中、高剂量分别为0.0697g/kg、0.139g/kg、0.279g/kg；兔的等效剂量约为0.036g/kg、0.073g/kg，本试验中设定MLN家兔低、中、高剂量组分别为0.036g/kg、0.073g/kg、0.145g/kg；小鼠的等效剂量约为0.098g/kg～0.196g/kg，本试验中设定MLN小鼠的低、中、高剂量分别为0.098g/kg、0.196g/kg、0.393g/kg；犬的等效剂量约为0.021g/kg～0.042g/kg，本试验中设定MLN犬的低、中、高剂量分别为0.021g/kg、0.042g/kg、0.084g/kg。
1、药效学试验大鼠全血粘度MLN 0.139g/kg、0.279g/kg ip(单次腹腔注射)10d对200/s、30/s、3/s切变率下大鼠全血粘度(P＜0.05)和红细胞比容的影响所有处方的制成品均能显著降低大鼠全血粘度(P＜0.05)和红细胞比容。
大鼠最大血小板聚集率MLN 0.279g/kg ip 10d对ADP诱导的大鼠最大血小板聚集率的影响均显著降低(P＜0.01)，抑制率为35.1％～43.4％，其中处方A1B4和A1B8的抑制率为42.9％。
大鼠下腔静脉血栓形成MLN 0.070g/kg、0.139g/kg、0.279g/kg ip 10d对大鼠下腔静脉血栓形成的作用均显著抑制(P＜0.01)，MLN 0.070g/kg、处方A1B4和A1B8的抑制率为28.6％，显著高于其他处方组成。
大鼠结扎双侧颈总动脉造成的急性不完全性脑缺血MLN 0.139g/kg、0.279g/kg对大鼠结扎双侧颈总动脉造成的急性不完全性脑缺血的作用均有显著的保护作用，并使脑梗塞面积、脑指数、脑水分均较盐水组显著降低(P＜0.05)。
家兔颈总动脉血栓湿重、血栓重量/长度指数、重量/重量指数 MLN0.073g/kg、0.145g/kg iv(静脉注射)10d对家兔颈总动脉血栓湿重、血栓重量/长度指数、重量/重量指数的作用其中处方A1B4和A1B8的抑制率分别为20.9％及38.2％、21.2％和37.9％、28.6％和37.7％，显著高于其他处方组成。
静脉注射花生四烯酸致小鼠死亡率MLN 0.196g/kg、0.393g/kg iv10d对静脉注射花生四烯酸致小鼠死亡率的影响均能降低死亡率，其中处方A1B4和A1B8的死亡率由盐水组的90.0％降低至66.7％和56.7％，显著高于其他处方组成(P＜0.05)。
离体血管平滑肌试验MLN 3.3mg/ml～7.2mg/ml浓度依赖性地抑制去甲肾上腺素(10-7～10-5mol/L)和KCl(20～80mmol/L)对大鼠胸主动脉血管环的作用均能显著收缩胸主动脉血管环(P＜0.01)，处方A1B4和A1B8的IC50值分别为2.96mg/ml(95％可信区间为2.37mg/ml～3.70mg/ml)和5.23mg/ml(95％可信区间为4.78mg/ml～5.70mg/ml)，显著高于其他处方组成。
2、一般药理学试验小鼠试验MLN 0.098g/kg、0.196g/kg、0.393g/kg iv 10d对小鼠体重一般精神状态、自主活动次数、悬尾停动时间、平衡杆跌落次数及倾斜板滑下角度和滑下时间、小鼠胃肠推进率均无显著影响。
麻醉犬试验 MLN 0.021g/kg、0.042g/kg、0.084g/kg iv剂量依赖性地降低麻醉犬血压(收缩压、舒张压和平均动脉压)，用药后均在20min～30min时血压降低最显著，药后60min开始逐渐恢复。处方A1B4和A1B8分别使平均血压降到药前的55％、45％、37％，120min时分别恢复至药前的92％、71％、53％，血压下降幅度及有效时间均显著高于其他组。
所有组成的MLN对麻醉犬脏血流动力学指标均有一定的抑制作用，表现为LVSP、LVEDP、+dP/dt、-dP/dt等指标于药后20min～30min显著降低，药后60min渐恢复。处方A1B4和A1B8的LVSP、+dp/dtmax，-dp/dtmax分别降至药前的30％～50％，用药后120min时可恢复至用药前62％～78％，作用强度及有效时间均显著高于其他组。
所有组成的MLN药后20min～30min麻醉犬心率显著减慢，中、高剂量组药后90min～120min麻醉犬心率加快。MLN对麻醉犬心电图PR间期、QRS波宽和QT间期等指标无显著影响。
MLN药后麻醉犬脑血流量立即增加，处方A1B4和A1B8药后10min达高峰，20min开始下降，30min时降到药前水平以下，持续时间20min并显著高于其他组。
3、小鼠急性毒性试验小鼠单次腹腔注射(ip)或静脉注射(iv)最大可给药量(4.06g/kg)均未引起受试鼠出现任何异常反应。
一日内多次ip或iv给药，日用药量3×4.06g/kg，药后14日受试鼠均未出现任何异常反应，试验观察期间受试鼠无一死亡，试验结束动物尸检未发现受试鼠各脏器出现任何异常表现。急性毒性试验结论为，MLN毒性小，单次或一日内多次ip或iv给药均不能引起受试鼠出现死亡。各组成的单次ip或iv的最大耐受量及多次用药的日用药最大耐受量没有显著差异，处方A1B4和A1B8单次ip或iv的最大耐受量为4.06g/kg，约相当于拟临床人日用量的370倍；多次用药的日用药最大耐受量为12.18g/kg，约相当于拟临床人日用量的1110倍。
4、大鼠长期毒性试验MLN 0.072g/kg、0.22g/kg、0.65g/kg，每日1次，连续ip给药90天，仅0.22g/kg、0.65g/kg组在连续用药90天时，处方A1B4和A1B8的大鼠血液凝固时间分别由盐水组的3.3±0.5min延长至4.3±0.9min和5.3±1.0min(P＜0.01)，各组成的延长时间没有显著性差异。停药15天大鼠血液凝固时间均基本恢复正常；其他指标包括一般状态、血液学指标、血液生化学指标和组织形态学等均未见任何异常。
5、溶血、局部刺激、过敏试验体外溶血试验6.5mg/ml浓度以下均未见溶血和红细胞凝集反应。
血管刺激试验0.036g/kg和0.073g/kg，隔日1次兔耳静脉滴注，连续5次。
结果均未见滴注局部血管及周围组织有红肿、充血、硬结或溃烂等。组织学检查显示，血管内无淤血、无血栓形成，血管内皮细胞无增生，血管壁无增生、变性，无出血、水肿和炎性渗出，血管壁及周围组织无钙化或其他异常物质沉着。给药侧和对照侧相比无明显差别，表明MLN静脉滴注对兔耳缘静脉无局部刺激反应。
过敏试验制成6.5％生理盐水溶液，豚鼠隔日连续3次腹腔注射，每次0.5ml/只致敏。于第1次用药的第14天、第21天、第28天，分别静脉注射6.5％MLN生理盐水溶液1ml/只进行激发。结果表明动物未出现任何过敏反应表现。
6、统计方法试验结果以x±s表示，用SPSS统计软件对各组结果进行方差分析比较；以分组t检验比较各组间差异显著性，以配对t检验比较给药前后差异显著性。
本发明的注射用脉络宁粉针剂通过以下方法进行质量检验，检验结果表明注射用脉络宁粉针剂完全符合规定。
性状成品性状为黄棕色至红棕色的松散块状物。
鉴别(1)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，量取1ml，加水4ml，轻摇，逐滴加入碘化铋钾试液5滴，即生成橙红色沉淀。
(2)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，量取2ml，加水4ml，滴加醋酐10滴，沿壁加硫酸1ml，两界面处呈红棕色环。
(3)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，作为供试品溶液，另取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上清液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取成品1瓶，加水10ml，摇匀，至分液漏斗中，用氯仿提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴中浓缩至干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取滨蒿内酯对照品，加氯仿制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液1μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸丁酯(2∶3∶3)为展开剂，展开，取出，吹干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
pH值取成品1瓶，加水20ml溶解，依中国药典2000版一部附录VIIG所述方法测定，结果为7.2。
蛋白质取成品1瓶，加水10ml，量取5ml，加30％磺基水杨酸溶液5ml，混匀，放置5分钟，没有发生浑浊。
溶血试验取成品1瓶，加水10ml，精密量取0.3ml，精密加生理盐水0.2ml和2％兔血红细胞生理盐水混悬液2.5ml，摇匀，置36.5±0.5℃恒温水浴中，观察2小时，没有溶血和粘集现象。
热原取成品1瓶，加水10ml，剂量按家兔体重每1kg注射2ml，依中国药典2000版一部附录XIIIA所述方法检测，应符合规定。
重金属取成品1g，依中国药典2000版一部附录IXE第二法检查，含重金属低于10ppm。
肉桂酸含量按照中国药典2000版一部附录VID所述测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(60∶40)为流动相；检测波长为278nm。理论塔板数按肉桂酸峰计算应不低于1500。取肉桂酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml中含2μg的溶液作为对照溶液；取成品装量差异下内容物，研匀，精密称取适量，加水溶解，制得0.04g药材/ml的溶液，即得供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按照峰面积以外标法计算，得肉桂酸含量2.9mg/瓶。
本发明通过药理和生化等方面实验研究证明脉络宁有扩张血管、改善微循环、增加血流量及抗凝血、溶血栓等作用。临床上可用于治疗周围血管、脑血管闭塞性疾病。另外，在中药注射剂的研制生产中，要求较好的控制药材质量，而筛选出良好药效、较明显药理作用、较低毒性的金银花和石斛药材的具体品种，这样才有利于提高制剂质量的可控性。为此，本发明通过药效、药理、毒性等动物试验对金银花和石斛药材进行了筛选。
试验结果表明所有处方的制成品均有良好的药效、较明显的药理作用、较低的毒性，其中处方A1B4(铁皮石斛、忍冬)和A1B8(球花石斛、忍冬)的药效及药理作用显著高于其他组成，毒性与其他组成没有显著差异，因此选用A1B4和A1B8作为石斛及金银花药材的具体品种用于本发明的原药材组分。
具体实施例方式
本发明的注射用脉络宁粉针剂及其制备方法可以这样实现一、取得药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对冻干箱和凝结器进行真空处理，使其真空度达到10-3mmHg后，逐步升温25小时使冻干箱和凝结器达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱和凝结器达到30℃，保温5小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
权利要求
1.一种注射用脉络宁粉针剂，其特征在于该制剂包括重量配比均为25％的原药材忍冬、玄参、牛膝、石斛的有效提取物。
2.根据权利要求1所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于上述的石斛为球花石斛或铁皮石斛。
3.根据权利要求1或2所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于该制剂通过下列方法得到将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
4.根据权利要求3所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于所述的骨架剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
5.根据权利要求3所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于该制剂的制备方法由下列步骤构成一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
6.根据权利要求5所述的注射用脉络宁粉针剂，其特征在于所述的活性炭添加量为1.0‰；真空条件为10-3mmHg；逐步升温25小时使冻干箱达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱达到30℃；保温5小时。
7.根据权利要求1～6之一所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于该制剂的制备方法为将四种原药材等量混匀，用常规方法水煎、提取、浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、加入活性炭吸附除热原、滤过除炭、除菌，得到半成品溶液，再通过冻干半成品溶液得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
8.根据权利要求7所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于所述的骨架剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、环糊精、山梨醇、氯化钠、右旋糖酐的一种或几种的组合。
9.根据权利要求7所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于该制剂的制备方法为一、取得原药材提取物将四种原药材等量混匀，水煎两次，每次1.5小时，取合并滤液浓缩至浸膏状，二次醇沉，使最终含醇量达75.0％～85.0％，上清液通过回收乙醇至无醇味后得到回收液；二、取得浸膏状原药材提取物上述回收液用40％氢氧化钠溶液调节pH至3.0后，用等量乙酸乙酯连续萃取四次，合并萃取液，对合并后的萃取液进行减压回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴浓缩成浸膏状；三、取得预冻半成品对上述浸膏状回收液进行减压烘干，水转溶后，用40％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，使用沸水浴进行浓缩后，加入骨架剂甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，滤过除炭，补足水量，滤过除菌，得到半成品；四、冷冻将半成品放入冻干箱，调节冻干箱温度至-35℃以下，使半成品冻实，凝结器预先降温至-50℃以下后，与冻干箱接通；五、干燥对凝结器和冻干箱进行真空处理，使其真空度达到10-1～10-4mmHg后，逐步升温20～50小时使凝结器和冻干箱达到-20℃～0℃后，升温速度加快，升温5～15小时使凝结器和冻干箱达到30℃～35℃，保温2～6小时，通入无菌的空气，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。
10.根据权利要求9所述的注射用脉络宁粉针剂的制备方法，其特征在于所述的活性炭添加量为1.0‰；真空条件为10-3mmHg；逐步升温25小时使冻干箱达到0℃后，升温速度加快，升温5小时使冻干箱达到30℃；保温5小时。
全文摘要
本发明为注射用脉络宁粉针剂及其制备方法。本发明将石斛、玄参、牛膝、忍冬(其中优选球花石斛或铁皮石斛)上述四种原药材等量混匀，用常规方法水煎提取浓缩、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水转溶、浓缩后加骨架剂、活性炭吸附除热原、滤过除炭除菌后，得到半成品溶液。然后调节冻干箱的真空度和温度对半成品溶液进行冷冻处理，得到成品即注射用脉络宁粉针剂。本发明的注射用脉络宁粉针剂含水量低，可以长期贮存并保持稳定的质量，而且方便运输，实用性好。另外，还具有剂量准确，外观优良，质地疏松，加水迅速溶解恢复药液原有特性的特点。
文档编号A61P9/10GK1714849SQ20041006223
公开日2006年1月4日 申请日期2004年7月1日 优先权日2004年7月1日
发明者石秀坤 申请人:石秀坤
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