老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症性脂肪肝的药物中的应用的制作方法
专利名称：老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症性脂肪肝的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及老鹰茶总黄酮的用途，确切地说是在制药领域中的应用。
背景技术：
老鹰茶是我国江南农村的一种传统饮料，千百年来深受朋友的喜爱和欢迎，原因在于原料丰富，加工简单，便于保管，饮用方便，而且是一种无毒、无污染的纯天然饮料。近年来，由于环境受到一定程度的污染，人们回归自然的意识不断增加，这种纯天然饮料越来越受到人们的青睐。为了认识和了解这一野生自然资源，更好的开发与利用，现将老鹰茶的研究与开发现状综述如下。
老鹰茶的植物学分类属于樟科、木姜子属、毛豹皮樟，俗称“白茶”，也叫老阴茶。学名Litsea coreana Levc.vav.是一种常绿小乔木或乔木。常生长在海拔1000米左右的低山常绿阔叶林中，分布在四川、贵州、安徽、云南、重庆、湖南和江西等地。
当年生枝紫褐色或绿色，有卷曲柔毛，皮孔黄褐色或绿色，第二年枝秃净。芽卵行，鳞片外绿色或黄褐色绢毛。
叶革质、互生、椭圆形、狭椭圆形或倒卵状椭圆形，先端渐尖或突尖，基部锲形，长5-15cm，宽1.5-5.cm，背面灰白色，有卷曲柔毛，有时秃净，侧脉6-10条，叶柄长0.5-1.5cm，有毛。在自然环境下，年萌发新芽2轮，4-5月为春芽，8-9月为秋芽，以春芽产量为高。
花，腊黄色、花序无梗，数个簇生在叶腋，总苞外有短毛，每序有花4-8朵，花朵直径4-5mm。
果，近球状(有长椭圆形和倒椭圆形)，直径约6mm，果梗粗壮，长0.5-0.8mm，有毛，果托扁平膨大，有宿存的花被裂片。花期8-9月，果期次年5-8月。
种子，由一层较薄的果皮包裹，种子坚硬，有蜡质。种子直径约6mm。
老鹰茶中含有丰富的氨基酸，总含量为0.82％，8种人体必需氨基酸齐全，含量以亮氨酸最高，赖氨酸次之，蛋氨酸最低，这和绿茶相似，其中蛋氨酸含量还略高于绿茶。在非必需氨基酸中，以谷氨酸含量最高，其次是天冬氨酸和精氨酸，与绿茶相比无明显差异。从氨基酸总量上看，绿茶的氨基酸高于老鹰茶，其主要原因是绿茶中特有茶氨酸的含量高，茶氨酸在一定程度上反映绿茶与老鹰茶的口感差异，另一方面也说明绿茶原植物与老鹰茶植物有不同的氨基酸代谢类型。
老鹰茶富含多种矿物质元素，其中钾(K)、磷(P)、钙(Ca)、镁(Mg)、钠(Na)、锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)都是人体必需的营养元素，尤其是锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)元素含量高于绿茶，对造血、健脑有较好作用。更值得一提的是有害元素铅的含量明显低于绿茶。
老鹰茶含有的水溶性维生素主要是VC、VB1和VB2，其含量比绿茶稍低，可能与加工过程与代谢途径等因素有关。
老鹰茶中总黄酮(TF，total flavonoid)含量远高于绿茶，绿茶只有1.22％左右，而老鹰茶可高达3.45％，已经确定的有山柰酚(kaempferol)，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)1.2.2.5.挥发油成分老鹰茶经过常压水蒸气蒸馏提取老鹰茶的挥发性成分，得到浅黄色油状液体，香味浓郁，出油率0.1％左右。经色谱和质谱分析，鉴定出32种成分(其中萜类化合物及其衍生物20种)，已鉴定的含量占挥发油组成的95％，主要成分是正奎醛(decanal)含量为71.53％；其次是10-烯-十一醛(10-undecenal)，含量为5.02％；壬醛(n-nonaldehyde)，含量3.58％；正十二酸乙烯酯(dodecanoic acid，ethenyl ester)，含量2.63％。香味的主要成分为萜类，其中主要是分子量为204的萜类。
老鹰茶中还含有多糖、皂甙、生物碱、多酚和天然色素等。
另外，尤其值得一提的是，与绿茶相比，老鹰茶的化学成分不含咖啡碱物质，无兴奋作用，不影响睡眠，这对需要控制咖啡碱摄入的人更是一种良好的选择。
老鹰茶(Litsea coreana Levc.vav)在我国江南广大农村饮用由来已久，深受广大劳动人民的喜爱，但仅仅作为一种饮料。近年来，四川、贵州等地进行了一些开发和利用，但也仅限于粗加工，还没有充分认识到它的药理功能，它所潜在的药理作用机制更无前人探讨。根据文献报道，长期饮用有防馊、防腐、消暑解渴、消食化积、解毒、消肿利尿，明目、健胃、益思的作用。
本发明的目的在于提供老鹰茶总黄酮的新用途，即在制药中的新应用。
实际上，本发明提供了老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症和高脂血症性脂肪肝的药物中的应用。
随着人类寿命的延长，生活水平的不断提高，高脂血症(hyperlipidmia)的发病率在逐年上升，且是心血管和肝脏疾病的重要诱发因素，具有很高的致残率和致死率，严重威胁着人类的健康。据保守估计，全球高脂血症的患者近三亿，而我国就有将近四千万。脂肪肝(fattyliver)是由多种疾病和病因引起的肝脏脂肪性变，表现为脂类物质(主要为甘油三酯)在肝内过多的蓄积。同样，由于生活水平的提高和膳食结构的改变，因高脂血症引起的脂肪肝的比例在逐年增加，世界卫生组织已将防治这一类疾病列为全球人类健康的重要问题之一。
近年来，治疗高脂血症的药物发展较快，但治疗高脂血症性脂肪肝的药物却发展很慢，至今尚未突破，治疗高脂血症性脂肪肝的药物主要有HMG-CoA还原酶抑制剂主要用于IIa和IIb型高脂蛋白血症的治疗。其对于高脂血症性脂肪肝的治疗还处于临床试验阶段，其疗效有待于进一步考察。虽然其不良反应较少，主要是肝功能异常，可能会加重脂肪肝患者的病情，而且价格昂贵，不易被患者所接受。
烟酸类可以用于II、III、IV、V型高脂蛋白血症和高脂血症性脂肪肝。其不良反应较多皮肤潮红、瘙痒以及胃肠道反应等。
苯氧酸类临床应用于IIb、III、IV、V型高脂蛋白血症，对于高脂血症性脂肪肝的治疗也是在临床试验阶段。其不良反应较少，主要是胃肠道反应，但价格昂贵，不易被患者所接受。
胆碱和蛋氨酸市场上的东宝肝泰就属于这类药物。两者常常配伍用于高脂血症和高脂血症性脂肪肝的治疗，但由于慢性肝病患者长期或大量口服蛋氨酸治疗，有诱发肝性脑病的危险，故已很少应用。
不饱和脂肪酸及磷脂类可用于高脂血症性脂肪肝的治疗，但由于不饱和脂肪酸易引起脂质过氧化，反而可能加重脂肪肝，故尚存在争议。
护肝降酶药因为将近50％的脂肪肝患者出现肝功能异常，故对这部分患者应予以保肝治疗。
上述调血脂药物在治疗脂肪肝的地位，尚存在许多争议。因为许多调血脂药物可能导致血脂更集中于肝脏中进行代谢而促进脂质在肝内的蓄积，并损害肝功能。脂肪肝往往会导致血糖升高和肝功能异常，而治疗高脂血症性脂肪肝的药物往往不能兼顾这些并发症，故目前缺乏有效治疗脂肪肝的药物。
老鹰茶总黄酮的制备称取老鹰茶叶，溶媒提取后，经过水溶和滤过，然后经大孔吸附树脂吸附，再经醇洗脱、减压浓缩后，经过真空干燥，得到总黄酮，得率约为4％，总黄酮含量大于50％。
药理学实验研究结果表明，老鹰茶总黄酮对脂肪乳剂所诱导的高脂血症性脂肪肝大鼠有明显降低血清TG、ALT、AST、MDA和升高SOD的作用，也能明显降低肝匀浆的TG、MDA和升高SOD的作用，同时能降低因脂肪肝而导致的血糖异常升高，病理显示肝组织脂肪变性明显减轻。以上各指标均优于阳性对照药烟酸和山楂精。使用方法口服。
老鹰茶总黄酮的主要优点1、采用口服给药，服用方便，毒副作用小，长期服药无危害。
2、疗效确切，作用于多个环节，适用于各型高脂血症和高脂血症性脂肪肝及其并发症。
3、可根据需要开发为药品和保健品。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用老鹰茶总黄酮的药理实验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
老鹰茶总黄酮对高脂血症和高脂血症性脂肪肝大鼠作用实验如下1、材料与方法1.1主要药物与试剂老鹰茶总黄酮(自制)，烟酸片(上海九福药业有限公司，批号030701)，山楂精(宁夏启元药业有限公司，批号02029433)，胆固醇(中国医药(集团)上海化学试剂公司，AR级，批号F20030410)；脱氧胆酸钠(北京双旋微生物培养基制品厂，批号20030617)；丙基硫氧嘧啶(上海复星朝晖药业有限公司，批号030505)；吐温80(蚌埠化学试剂厂，符合药用标准，批号20030602)；1-2丙二醇(淮南市化学试剂厂，AR级，批号20021020)；猪油自制。TG、TC测定试剂盒购自北京福瑞生物工程公司。AST、ALT、MDA、SOD、GLU、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.2主要仪器电子天平FA2004(上海精天天平厂)、79HW-1恒温磁力搅拌器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)、722紫外分光光度计(上海分析仪器厂制造)，医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)1.3实验动物Spague-Dawlay(SD)大鼠70只，雌雄各半，体重180-200g，由安徽医科大学实验动物中心提供(皖医实动准第02号)。
1.4动物实验SD大鼠在本实验室饲养一周后，按体重随机分为7组(每组10只)正常对照组；模型组；给药组分别给予老鹰茶总黄酮80、40、20mg·kg-1·d-1三个剂量；烟酸组(120mg·kg-1·d-1)，山楂精组(0.5片·kg-1·d-1)。大鼠高脂血症性脂肪肝的复制参照刘明的方法，加以改进。除正常组外，各组每天上午灌脂肪乳剂(10ml·kg-1·d-1)，下午给予相应的药物，正常组予以等量的蒸馏水灌胃。于1周后，断尾取血，测定血清脂质；3周后，放血处死动物，迅速取出肝脏，脾脏备用。
1.5观察指标及测定方法1.5.1一般情况实验前，实验后每周称体重1次，观察食欲行为、粪便、毛发及动物死亡情况；实验结束时处死动物称量体重、肝脏湿重。
1.5.2粪便脂质变化于实验开始后第3天用代谢笼(每笼1只)收集大鼠72小时的粪便，低温烤干后用生理盐水制成20％的匀浆，3000r/min离心15min，提取上清夜，用酶法测定TG、TC含量。
1.5.3血清生化血清TG、TC、AST、ALT、SOD、MDA、GLU测定按试剂盒规范操作。
1.5.4肝脏生化取肝脏左叶少许自然解冻，冰生理盐水冲洗、滤纸吸湿后，在相同部位精确称取0.3g，加入预冷的生理盐水，在冰水中制成10％的匀浆，4℃3000r/min离心15min，提取上清夜，测定TG、TC、MDA、SOD含量。
1.5.5组织学病检中性福尔马林固定肝标本，石蜡切片进行HE染色，在光镜下观察肝脂肪变性和炎症活动情况。
1.6统计学处理计量资料mean±SD表示，各组间实验数据的比较采用两样本均数的t检验，P＜0.05有显著性差异。
2.结果2.1一般情况实验中前两周两组体重无明显差异，处死前模型组的体重下降，并有少数大鼠出现腹泻现象，可能于ALT、AST升高有关。在实验第19天模型组死亡1只。各组之间体重无明显差异，模型组肝、脾指数(肝、脾湿重/体重×100％)与正常组相比明显增大，烟酸组、山楂精组及大剂量组能明显降低肝指数；脾指数各组之间均无显著性差异(见表1)。
表1各组体重、肝指数的变化(x±s，n＝10)
**p＜0.01，与正常组比较，##p＜0.01，与模型组比较2.2粪便脂质变化粪便匀浆TG、TC用酶法测定，模型组TG和小剂量组比正常组显著升高，烟酸组、烟酸组、中剂量组及大剂量组与模型组相比明显降低，小剂量组与模型组相当；模型组TC比正常组显著升高，而给药组与模型组之间无显著性差异，各给药组之间也无显著性差异(见表2)。
表2各组粪便脂质变化(x±s，n＝10)
**p＜0.01，与正常组比较，##p＜0.01，与模型组比较2.3血清脂质变化每次采血后离心，血清放入-70℃冰箱保存备用。末次采血后离心取血清连同第一次同时用酶法测定。模型组TG明显比正常组升高，烟酸组、山楂精组、中剂量组及大剂量组与模型组相比明显降低。模型组TC明显比正常组升高，而给药组均无降低TC作用(见表3)。
表3各组血清脂质动态变化(x±s，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，均与正常组比较；#p＜0.05，##p＜0.01，均与模型组比较2.4血清ALT、AST、SOD、MDA的变化末次采血后离心取血清ALT、AST用赖氏法测定，MDA用BTA法测定，SOD用黄嘌呤氧化酶法测定、GLU用葡萄糖氧化酶法测定。模型组ALT、MDA、GLU明显比正常组升高，AST也有升高趋势，SOD则有下降趋势；中剂量组及大剂量组ALT、AST与模型组相比明显降低，大剂量组MDA与模型组相比明显下降，烟酸组、山楂精组及大剂量组SOD与模型组相比有升高趋势，山楂精组、大剂量组GLU与模型组相比明显下降，烟酸组、中剂量组及小剂量组GLU也有下降趋势(见表4)。
表4各组血清ALT、AST、MDA、SOD的变化(x±s，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，均与正常组比较；#p＜0.05，##p＜0.01，均与模型组比较2.5肝脏脂质及MDA、SOD变化10％的肝匀浆TG、TC、MDA、SOD测定同血清检测方法，MDA、SOD并用考马斯亮兰蛋白试剂盒进行蛋白校正。肝匀浆TG、TC、MDA、SOD的变化(见表5)。
表5各组肝匀浆TG、TC、MDA、SOD的变化(x±s，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，均与正常组比较；#p＜0.05，##p＜0.01，均与模型组比较2.6肝脏病理学变化2.6.1眼观察正常肝脏无异常变化。模型组3W后肝脏体积明显增大，包膜紧张，部分肝脏呈奶黄色，切面油腻。烟酸组、山楂精组及大剂量组肝脏均比模型组明显减轻，中剂量组也减轻，但没有大剂量组好，小剂量组与模型组相比改变不明显。
2.6.2光镜结果光镜下，正常组大鼠肝脏基本无异常情况。模型组3W后均出现程度不同的弥漫性肝细胞脂肪变性，且100％存在小叶内炎症，75％出现汇管区炎症，还有汇管区变性及点状坏死或坏死灶，但未见肝纤维化。脂变肝细胞极度肿胀成圆形，体积较正常明显增加，胞浆内充满大量脂肪空泡，酷似泡沫细胞，界限不清，肝窦狭窄。烟酸组和山楂精组可见较多的肝细胞脂肪变性，同时小叶内和汇管区也出现炎症，但比模型组程度轻。老鹰茶总黄酮组肝细胞脂肪变性和炎症与模型组相比均明显减轻，甚至没有炎症，优于烟酸组和山楂精组。
3.结论老鹰茶总黄酮具有明显防治高脂血症和高脂血症性脂肪肝作用。
老鹰茶总黄酮物理性状该品为深黄色粉末，易吸潮，水溶性较差，易溶于乙醇，无特殊气味。
老鹰茶总黄酮临床推荐剂量600～1200mg/d，口服，分3次服用。
权利要求
1.老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症性脂肪肝的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症性脂肪肝的药物中的应用。药理学实验研究结果表明，老鹰茶总黄酮对脂肪乳剂所诱导的高脂血症性脂肪肝大鼠有明显降低血清TG、ALT、AST、MDA和升高SOD的作用，也能明显降低肝匀浆的TG、MDA和升高SOD的作用，同时能降低因脂肪肝而导致的血糖异常升高，病理显示肝组织脂肪变性明显减轻。
文档编号A61P1/16GK1723962SQ20041006473
公开日2006年1月25日 申请日期2004年9月21日 优先权日2004年9月21日
发明者李俊, 金涌, 程文明, 吕雄文, 陈飞虎, 倪鸿昌 申请人:安徽医科大学
技术领域：
本发明涉及老鹰茶总黄酮的用途，确切地说是在制药领域中的应用。
背景技术：
老鹰茶是我国江南农村的一种传统饮料，千百年来深受朋友的喜爱和欢迎，原因在于原料丰富，加工简单，便于保管，饮用方便，而且是一种无毒、无污染的纯天然饮料。近年来，由于环境受到一定程度的污染，人们回归自然的意识不断增加，这种纯天然饮料越来越受到人们的青睐。为了认识和了解这一野生自然资源，更好的开发与利用，现将老鹰茶的研究与开发现状综述如下。
老鹰茶的植物学分类属于樟科、木姜子属、毛豹皮樟，俗称“白茶”，也叫老阴茶。学名Litsea coreana Levc.vav.是一种常绿小乔木或乔木。常生长在海拔1000米左右的低山常绿阔叶林中，分布在四川、贵州、安徽、云南、重庆、湖南和江西等地。
当年生枝紫褐色或绿色，有卷曲柔毛，皮孔黄褐色或绿色，第二年枝秃净。芽卵行，鳞片外绿色或黄褐色绢毛。
叶革质、互生、椭圆形、狭椭圆形或倒卵状椭圆形，先端渐尖或突尖，基部锲形，长5-15cm，宽1.5-5.cm，背面灰白色，有卷曲柔毛，有时秃净，侧脉6-10条，叶柄长0.5-1.5cm，有毛。在自然环境下，年萌发新芽2轮，4-5月为春芽，8-9月为秋芽，以春芽产量为高。
花，腊黄色、花序无梗，数个簇生在叶腋，总苞外有短毛，每序有花4-8朵，花朵直径4-5mm。
果，近球状(有长椭圆形和倒椭圆形)，直径约6mm，果梗粗壮，长0.5-0.8mm，有毛，果托扁平膨大，有宿存的花被裂片。花期8-9月，果期次年5-8月。
种子，由一层较薄的果皮包裹，种子坚硬，有蜡质。种子直径约6mm。
老鹰茶中含有丰富的氨基酸，总含量为0.82％，8种人体必需氨基酸齐全，含量以亮氨酸最高，赖氨酸次之，蛋氨酸最低，这和绿茶相似，其中蛋氨酸含量还略高于绿茶。在非必需氨基酸中，以谷氨酸含量最高，其次是天冬氨酸和精氨酸，与绿茶相比无明显差异。从氨基酸总量上看，绿茶的氨基酸高于老鹰茶，其主要原因是绿茶中特有茶氨酸的含量高，茶氨酸在一定程度上反映绿茶与老鹰茶的口感差异，另一方面也说明绿茶原植物与老鹰茶植物有不同的氨基酸代谢类型。
老鹰茶富含多种矿物质元素，其中钾(K)、磷(P)、钙(Ca)、镁(Mg)、钠(Na)、锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)都是人体必需的营养元素，尤其是锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)元素含量高于绿茶，对造血、健脑有较好作用。更值得一提的是有害元素铅的含量明显低于绿茶。
老鹰茶含有的水溶性维生素主要是VC、VB1和VB2，其含量比绿茶稍低，可能与加工过程与代谢途径等因素有关。
老鹰茶中总黄酮(TF，total flavonoid)含量远高于绿茶，绿茶只有1.22％左右，而老鹰茶可高达3.45％，已经确定的有山柰酚(kaempferol)，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)1.2.2.5.挥发油成分老鹰茶经过常压水蒸气蒸馏提取老鹰茶的挥发性成分，得到浅黄色油状液体，香味浓郁，出油率0.1％左右。经色谱和质谱分析，鉴定出32种成分(其中萜类化合物及其衍生物20种)，已鉴定的含量占挥发油组成的95％，主要成分是正奎醛(decanal)含量为71.53％；其次是10-烯-十一醛(10-undecenal)，含量为5.02％；壬醛(n-nonaldehyde)，含量3.58％；正十二酸乙烯酯(dodecanoic acid，ethenyl ester)，含量2.63％。香味的主要成分为萜类，其中主要是分子量为204的萜类。
老鹰茶中还含有多糖、皂甙、生物碱、多酚和天然色素等。
另外，尤其值得一提的是，与绿茶相比，老鹰茶的化学成分不含咖啡碱物质，无兴奋作用，不影响睡眠，这对需要控制咖啡碱摄入的人更是一种良好的选择。
老鹰茶(Litsea coreana Levc.vav)在我国江南广大农村饮用由来已久，深受广大劳动人民的喜爱，但仅仅作为一种饮料。近年来，四川、贵州等地进行了一些开发和利用，但也仅限于粗加工，还没有充分认识到它的药理功能，它所潜在的药理作用机制更无前人探讨。根据文献报道，长期饮用有防馊、防腐、消暑解渴、消食化积、解毒、消肿利尿，明目、健胃、益思的作用。
本发明的目的在于提供老鹰茶总黄酮的新用途，即在制药中的新应用。
实际上，本发明提供了老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症和高脂血症性脂肪肝的药物中的应用。
随着人类寿命的延长，生活水平的不断提高，高脂血症(hyperlipidmia)的发病率在逐年上升，且是心血管和肝脏疾病的重要诱发因素，具有很高的致残率和致死率，严重威胁着人类的健康。据保守估计，全球高脂血症的患者近三亿，而我国就有将近四千万。脂肪肝(fattyliver)是由多种疾病和病因引起的肝脏脂肪性变，表现为脂类物质(主要为甘油三酯)在肝内过多的蓄积。同样，由于生活水平的提高和膳食结构的改变，因高脂血症引起的脂肪肝的比例在逐年增加，世界卫生组织已将防治这一类疾病列为全球人类健康的重要问题之一。
近年来，治疗高脂血症的药物发展较快，但治疗高脂血症性脂肪肝的药物却发展很慢，至今尚未突破，治疗高脂血症性脂肪肝的药物主要有HMG-CoA还原酶抑制剂主要用于IIa和IIb型高脂蛋白血症的治疗。其对于高脂血症性脂肪肝的治疗还处于临床试验阶段，其疗效有待于进一步考察。虽然其不良反应较少，主要是肝功能异常，可能会加重脂肪肝患者的病情，而且价格昂贵，不易被患者所接受。
烟酸类可以用于II、III、IV、V型高脂蛋白血症和高脂血症性脂肪肝。其不良反应较多皮肤潮红、瘙痒以及胃肠道反应等。
苯氧酸类临床应用于IIb、III、IV、V型高脂蛋白血症，对于高脂血症性脂肪肝的治疗也是在临床试验阶段。其不良反应较少，主要是胃肠道反应，但价格昂贵，不易被患者所接受。
胆碱和蛋氨酸市场上的东宝肝泰就属于这类药物。两者常常配伍用于高脂血症和高脂血症性脂肪肝的治疗，但由于慢性肝病患者长期或大量口服蛋氨酸治疗，有诱发肝性脑病的危险，故已很少应用。
不饱和脂肪酸及磷脂类可用于高脂血症性脂肪肝的治疗，但由于不饱和脂肪酸易引起脂质过氧化，反而可能加重脂肪肝，故尚存在争议。
护肝降酶药因为将近50％的脂肪肝患者出现肝功能异常，故对这部分患者应予以保肝治疗。
上述调血脂药物在治疗脂肪肝的地位，尚存在许多争议。因为许多调血脂药物可能导致血脂更集中于肝脏中进行代谢而促进脂质在肝内的蓄积，并损害肝功能。脂肪肝往往会导致血糖升高和肝功能异常，而治疗高脂血症性脂肪肝的药物往往不能兼顾这些并发症，故目前缺乏有效治疗脂肪肝的药物。
老鹰茶总黄酮的制备称取老鹰茶叶，溶媒提取后，经过水溶和滤过，然后经大孔吸附树脂吸附，再经醇洗脱、减压浓缩后，经过真空干燥，得到总黄酮，得率约为4％，总黄酮含量大于50％。
药理学实验研究结果表明，老鹰茶总黄酮对脂肪乳剂所诱导的高脂血症性脂肪肝大鼠有明显降低血清TG、ALT、AST、MDA和升高SOD的作用，也能明显降低肝匀浆的TG、MDA和升高SOD的作用，同时能降低因脂肪肝而导致的血糖异常升高，病理显示肝组织脂肪变性明显减轻。以上各指标均优于阳性对照药烟酸和山楂精。使用方法口服。
老鹰茶总黄酮的主要优点1、采用口服给药，服用方便，毒副作用小，长期服药无危害。
2、疗效确切，作用于多个环节，适用于各型高脂血症和高脂血症性脂肪肝及其并发症。
3、可根据需要开发为药品和保健品。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用老鹰茶总黄酮的药理实验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
老鹰茶总黄酮对高脂血症和高脂血症性脂肪肝大鼠作用实验如下1、材料与方法1.1主要药物与试剂老鹰茶总黄酮(自制)，烟酸片(上海九福药业有限公司，批号030701)，山楂精(宁夏启元药业有限公司，批号02029433)，胆固醇(中国医药(集团)上海化学试剂公司，AR级，批号F20030410)；脱氧胆酸钠(北京双旋微生物培养基制品厂，批号20030617)；丙基硫氧嘧啶(上海复星朝晖药业有限公司，批号030505)；吐温80(蚌埠化学试剂厂，符合药用标准，批号20030602)；1-2丙二醇(淮南市化学试剂厂，AR级，批号20021020)；猪油自制。TG、TC测定试剂盒购自北京福瑞生物工程公司。AST、ALT、MDA、SOD、GLU、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.2主要仪器电子天平FA2004(上海精天天平厂)、79HW-1恒温磁力搅拌器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)、722紫外分光光度计(上海分析仪器厂制造)，医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)1.3实验动物Spague-Dawlay(SD)大鼠70只，雌雄各半，体重180-200g，由安徽医科大学实验动物中心提供(皖医实动准第02号)。
1.4动物实验SD大鼠在本实验室饲养一周后，按体重随机分为7组(每组10只)正常对照组；模型组；给药组分别给予老鹰茶总黄酮80、40、20mg·kg-1·d-1三个剂量；烟酸组(120mg·kg-1·d-1)，山楂精组(0.5片·kg-1·d-1)。大鼠高脂血症性脂肪肝的复制参照刘明的方法，加以改进。除正常组外，各组每天上午灌脂肪乳剂(10ml·kg-1·d-1)，下午给予相应的药物，正常组予以等量的蒸馏水灌胃。于1周后，断尾取血，测定血清脂质；3周后，放血处死动物，迅速取出肝脏，脾脏备用。
1.5观察指标及测定方法1.5.1一般情况实验前，实验后每周称体重1次，观察食欲行为、粪便、毛发及动物死亡情况；实验结束时处死动物称量体重、肝脏湿重。
1.5.2粪便脂质变化于实验开始后第3天用代谢笼(每笼1只)收集大鼠72小时的粪便，低温烤干后用生理盐水制成20％的匀浆，3000r/min离心15min，提取上清夜，用酶法测定TG、TC含量。
1.5.3血清生化血清TG、TC、AST、ALT、SOD、MDA、GLU测定按试剂盒规范操作。
1.5.4肝脏生化取肝脏左叶少许自然解冻，冰生理盐水冲洗、滤纸吸湿后，在相同部位精确称取0.3g，加入预冷的生理盐水，在冰水中制成10％的匀浆，4℃3000r/min离心15min，提取上清夜，测定TG、TC、MDA、SOD含量。
1.5.5组织学病检中性福尔马林固定肝标本，石蜡切片进行HE染色，在光镜下观察肝脂肪变性和炎症活动情况。
1.6统计学处理计量资料mean±SD表示，各组间实验数据的比较采用两样本均数的t检验，P＜0.05有显著性差异。
2.结果2.1一般情况实验中前两周两组体重无明显差异，处死前模型组的体重下降，并有少数大鼠出现腹泻现象，可能于ALT、AST升高有关。在实验第19天模型组死亡1只。各组之间体重无明显差异，模型组肝、脾指数(肝、脾湿重/体重×100％)与正常组相比明显增大，烟酸组、山楂精组及大剂量组能明显降低肝指数；脾指数各组之间均无显著性差异(见表1)。
表1各组体重、肝指数的变化(x±s，n＝10)
**p＜0.01，与正常组比较，##p＜0.01，与模型组比较2.2粪便脂质变化粪便匀浆TG、TC用酶法测定，模型组TG和小剂量组比正常组显著升高，烟酸组、烟酸组、中剂量组及大剂量组与模型组相比明显降低，小剂量组与模型组相当；模型组TC比正常组显著升高，而给药组与模型组之间无显著性差异，各给药组之间也无显著性差异(见表2)。
表2各组粪便脂质变化(x±s，n＝10)
**p＜0.01，与正常组比较，##p＜0.01，与模型组比较2.3血清脂质变化每次采血后离心，血清放入-70℃冰箱保存备用。末次采血后离心取血清连同第一次同时用酶法测定。模型组TG明显比正常组升高，烟酸组、山楂精组、中剂量组及大剂量组与模型组相比明显降低。模型组TC明显比正常组升高，而给药组均无降低TC作用(见表3)。
表3各组血清脂质动态变化(x±s，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，均与正常组比较；#p＜0.05，##p＜0.01，均与模型组比较2.4血清ALT、AST、SOD、MDA的变化末次采血后离心取血清ALT、AST用赖氏法测定，MDA用BTA法测定，SOD用黄嘌呤氧化酶法测定、GLU用葡萄糖氧化酶法测定。模型组ALT、MDA、GLU明显比正常组升高，AST也有升高趋势，SOD则有下降趋势；中剂量组及大剂量组ALT、AST与模型组相比明显降低，大剂量组MDA与模型组相比明显下降，烟酸组、山楂精组及大剂量组SOD与模型组相比有升高趋势，山楂精组、大剂量组GLU与模型组相比明显下降，烟酸组、中剂量组及小剂量组GLU也有下降趋势(见表4)。
表4各组血清ALT、AST、MDA、SOD的变化(x±s，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，均与正常组比较；#p＜0.05，##p＜0.01，均与模型组比较2.5肝脏脂质及MDA、SOD变化10％的肝匀浆TG、TC、MDA、SOD测定同血清检测方法，MDA、SOD并用考马斯亮兰蛋白试剂盒进行蛋白校正。肝匀浆TG、TC、MDA、SOD的变化(见表5)。
表5各组肝匀浆TG、TC、MDA、SOD的变化(x±s，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，均与正常组比较；#p＜0.05，##p＜0.01，均与模型组比较2.6肝脏病理学变化2.6.1眼观察正常肝脏无异常变化。模型组3W后肝脏体积明显增大，包膜紧张，部分肝脏呈奶黄色，切面油腻。烟酸组、山楂精组及大剂量组肝脏均比模型组明显减轻，中剂量组也减轻，但没有大剂量组好，小剂量组与模型组相比改变不明显。
2.6.2光镜结果光镜下，正常组大鼠肝脏基本无异常情况。模型组3W后均出现程度不同的弥漫性肝细胞脂肪变性，且100％存在小叶内炎症，75％出现汇管区炎症，还有汇管区变性及点状坏死或坏死灶，但未见肝纤维化。脂变肝细胞极度肿胀成圆形，体积较正常明显增加，胞浆内充满大量脂肪空泡，酷似泡沫细胞，界限不清，肝窦狭窄。烟酸组和山楂精组可见较多的肝细胞脂肪变性，同时小叶内和汇管区也出现炎症，但比模型组程度轻。老鹰茶总黄酮组肝细胞脂肪变性和炎症与模型组相比均明显减轻，甚至没有炎症，优于烟酸组和山楂精组。
3.结论老鹰茶总黄酮具有明显防治高脂血症和高脂血症性脂肪肝作用。
老鹰茶总黄酮物理性状该品为深黄色粉末，易吸潮，水溶性较差，易溶于乙醇，无特殊气味。
老鹰茶总黄酮临床推荐剂量600～1200mg/d，口服，分3次服用。
权利要求
1.老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症性脂肪肝的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及老鹰茶总黄酮在制备防治高脂血症性脂肪肝的药物中的应用。药理学实验研究结果表明，老鹰茶总黄酮对脂肪乳剂所诱导的高脂血症性脂肪肝大鼠有明显降低血清TG、ALT、AST、MDA和升高SOD的作用，也能明显降低肝匀浆的TG、MDA和升高SOD的作用，同时能降低因脂肪肝而导致的血糖异常升高，病理显示肝组织脂肪变性明显减轻。
文档编号A61P1/16GK1723962SQ20041006473
公开日2006年1月25日 申请日期2004年9月21日 优先权日2004年9月21日
发明者李俊, 金涌, 程文明, 吕雄文, 陈飞虎, 倪鸿昌 申请人:安徽医科大学
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