哒嗪并[4,5－b]吲哚－1－乙酰胺衍生物在制备用于治疗与周围神经受体苯并二氮杂的...的制作方法
专利名称：哒嗪并[4,5－b]吲哚－1－乙酰胺衍生物在制备用于治疗与周围神经受体苯并二氮杂的 ...的制作方法
在检索可以促进周围神经细胞的轴突损伤后再生的化合物时，在国际专利申请PCT/FR98/01667的化合物中鉴别出了一小组通式(I)的化合物 其中X代表卤原子；Y代表一个或多个选自H、卤素和羟基、甲基、甲氧基和硝基的原子或基团；R1代表(C1-C4)烷基；R2和R3各自独立地代表H或C1-C4烷基，或者R2和R3与跟它们相连的氮原子一起形成一个吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
这些化合物对周围神经型苯并二氮杂受体(p位点，或PBR)具有很高的亲和性，特别是有些化合物会使面部神经划伤后面部神经核中神经元的损伤减小。这些化合物还具有保护心脏和肾脏的作用。
特别优选的用于本发明的化合物例如是7-氯-N，N，5-三甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酰胺。
后者例如可以按照下列方法制备。实施例(下表中的化合物1)1. 6-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯在室温下，把1.8g(45mmol)60％氢化钠(事先用石油醚洗涤)和8.0g(35.8mmol)6-氯-1H-吲哚-2-甲酸乙酯在80ml N，N-二甲基甲酰胺中的悬浮液搅拌2小时，然后加入2.8ml(45mmol)的碘甲烷，在室温下搅拌混合物4小时。
加入5ml无水乙醇，在减压下蒸去溶剂。用水浸取残留物，用二氯甲烷萃取混合物，干燥有机相，过滤，在减压下蒸去溶剂，残留物通过硅胶色谱柱纯化，分离出8.5g(35.7mmol)白色结晶的化合物。熔点75.5-76.5℃。2. 6-氯-2-(乙氧基羰基)-1-甲基-α-氧代-1H-吲哚-3-乙酸乙酯把4ml(36.4mmol)四氯化钛加入4ml(36mmol)氯代氧代乙酸乙酯在100ml 1，2-二氯乙烷中的溶液中，在室温下搅拌反应混合物30分钟，然后加入7.8g(32.8mmol)6-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯，在室温下搅拌反应混合物4小时。
冷却反应介质，加入200ml二氯甲烷和100ml水，滗出有机相，用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩滤液，残留物通过硅胶色谱柱纯化，分离出9.4g(29.0mmol)产物。熔点94-95℃3. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲酸乙酯在室温下，把4ml(40.6mmol)苯肼加入4.6g(13.6mmol)6-氯-2-(乙氧基羰基)-1-甲基-α-氧代-1H-吲哚-3-乙酸乙酯在120ml乙酸中的溶液中，在室温下搅拌反应混合物30分钟，然后回流搅拌4小时。冷却反应介质，加入350ml二氯甲烷和100ml水。滗出有机相，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化，分离出4.1g(10.7mmol)产物。熔点216-218.5℃。4. 7-氯-1-(羟甲基)-5-甲基-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-4-酮把2.5g(66.1mmol)硼氢化钠加入4.04g(10.6mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲酸乙酯在150ml四氢呋喃中的溶液中。然后在搅拌下逐步加入2.25ml甲醇，然后加热回流混合物5小时。
把混合物倒入冰冷却的1M盐酸溶液中，通过在烧结玻璃上过滤而除去不溶物，用水和乙醚洗涤，然后干燥，分离出3.3g(9.7mmol)白色固体的化合物，该化合物用于下一步中。熔点219-220.5℃。5. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲醛把5.7g(65.6mmol)二氧化锰加入3.3g(9.7mmol)7-氯-1-(羟甲基)-5-甲基-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-4-酮在300ml二氯甲烷中的溶液中，搅拌回流反应混合物24小时。
冷却反应介质，在TéflonTM膜上过滤，用二氯甲烷冲洗固体，然后在减压下浓缩滤液。分离出2.88g(8.53mmol)白色固体的化合物，该化合物用于下一步反应中。熔点235-236℃。6. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙腈分小批量地把1.27g(10.96mmol)1，1-二甲基乙醇钾加入2.14g(10.96mmol)1-[(异氰基甲基)-磺酰基]-4-甲基苯在50ml1，2-二甲氧基乙烷中的溶液中，在-60℃下搅拌反应混合物30分钟，加入2.88g(8.53mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲醛，在-60℃下搅拌反应混合物3小时30分钟，加入9ml甲醇，然后在室温下再次搅拌反应混合物30分钟，回流1小时。
冷却介质，在减压下浓缩，向残留物中加入5ml乙酸和200ml二氯甲烷，滗出有机相，用二氯甲烷萃取水相。合并有机相，用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，残留物通过硅胶色谱纯化，分离出1.87g(5.36mmol)白色固体的化合物，该化合物用于下一步中。熔点305-315℃。7. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酸甲酯把氯化氢通入1.83g(5.25mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙腈在250ml甲醇中的溶液中，直到该溶液饱和，搅拌回流反应混合物4小时。
冷却反应介质，在减压下浓缩反应混合物，向残留物中加入25ml水和25ml甲醇。搅拌后，通过过滤回收不溶物，用水和乙醚洗涤，干燥，并通过硅胶柱色谱纯化，分离出1.00g(2.62mmol)白色固体的化合物。熔点188.5-190℃。8. 7-氯-N，N，5-三甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酰胺在0℃和氩气气氛下，把3ml(6mmol)三甲基铝(2M的甲苯溶液)加入0.49g(6mmol)二甲基胺盐酸盐在80ml甲苯中的溶液中，在室温下搅拌反应混合物1小时30分钟。
加入0.21g(0.55mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酸甲酯，搅拌回流反应混合物6小时。
把反应介质冷却到4℃，加入10ml水和100ml二氯甲烷，过滤溶液，在减压下浓缩滤液。
向残留物中加入水、1M盐酸和150ml二氯甲烷，分离出有机相，用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化。
在二氯甲烷和乙酸乙酯混合物中重结晶后，分离出0.2g(0.51mmol)棉花状白色固体的化合物。熔点229.5-230℃。
下表详细说明可用于本发明的一些化合物的化学结构和物理性能。表中的符号“Me”和“Et”分别代表甲基和乙基；“pyrrolid”、“piperid”和“morph”分别代表吡咯烷基、哌啶基和吗啉基。
表
试验方法以及试验结果如下所述。[3H]Ro5-4864与周围神经型苯并二氮杂受体结合力的研究测定了本发明的化合物对周围神经型苯并二氮杂受体(p位点或PBR)的亲和性。
可以通过在[3H]Ro5-4864存在下温育而在大鼠肾脏膜中选择性地标记p位点的受体。在试管中研究化合物对这些受体的亲和性。所用的动物是180-300mg的雄性Sprague-Dawley大鼠(Iffa Credo)。断头后，取出肾脏，在4℃下，在用NaH2PO4把pH调节到7.5的35倍体积的50mM Na2HPO4缓冲液中，用PolytronTM均化器以6/10最大速度把组织匀浆2分钟。膜匀浆液在纱布上过滤，用缓冲液稀释10倍。
在100μl膜匀浆液存在下，在最终体积为1ml的含有试验化合物的缓冲液中温育[3H]Ro5-4864(比放射性70-90居里/毫摩尔；NewEngland Nuclear)。
在0℃下温育3小时后，通过在Whatman GF/BTM过滤器上过滤来回收膜，以4.5ml冷的温育用的缓冲液(0℃)洗涤过滤器两次。通过液体闪烁照相法测定过滤器所保留的放射性数量。
对于每个浓度的被研究化合物，测定对[3H]Ro5-4864结合力的抑制百分数，然后确定浓度CI50，即抑制50％的特异性结合力的浓度。
大多数活性化合物的CI50值在0.6 nM-20 nM的范围。
结果，可用于本发明的化合物是对周围神经型苯并二氮杂受体具有很高亲和性的配体。神经萎缩活性的研究通过测量睑反射的功能恢复来试验受损伤的面部神经的再生，按照K.Kujawa等人在Experimental Neurology(1989)，105，80-85中所述方法的一种改进方法进行。
通过局部冷冻而产生的面部神经的损伤能引起面部神经的远端部分发生退化以及使眼皮的眨眼功能丧失。要研究的产物通过腹膜注射或口服方式给药，每天两次，其中间间隔6-8小时，共延续10天(试验期)。第一次给药是在损伤前30分钟。动物的监测每天每次给药前，按照0-4的理论分值对受损伤动物眼皮的功能恢复进行监测，在第1天至第5天，每天早晨监测一次；在第6天至第10天，每天监测两次(早晚各一次，中间间隔6-8小时)。
0分眼睛睁开；1分眼睛闭上的程度少于一半；2分眼睛闭上的程度介于1/2和3/4之间；3分眼睛闭上的程度大于3/4；4分眼睛完全闭上。
结果用服药组与对照组的AUC(曲线下面的面积)的比值来表示。大多数活性化合物的AUC比值介于1.12和1.20之间。
因此，这些化合物使面部神经损伤后睑反射的恢复增大了12-20％。在4天龄的大鼠中进行的面部神经切断后运动神经元存活的试验在未成熟大鼠的面部神经损伤后，面神经核的运动神经元因凋亡而发生神经元的死亡。使用组织学计数方法和神经元计数方法对神经元的存活进行评价。
用戊巴比妥(3mg/kg，通过腹膜注射方式给药)麻醉4天龄的未成熟大鼠。把右边面神经暴露出来，并且切断，留下茎突孔。待年幼的大鼠恢复知觉后，使其回到母亲身边，并且以1-10mg/kg的剂量通过口服或腹膜注射方式给药，每天一次或两次，共给药7天。在动物受损伤7天后，把动物断头，将其大脑放在-40℃的异戊烷中冷冻。使用恒冷切片机把面部神经核全部切成10μm的片。用甲酚紫给运动神经元染色，在HistoTM软件(BiocomTM)的辅助下给运动神经元计数。
在这个模型中，大多数活性化合物都能使神经元的存活率增大大约10-30％，例如实施例中描述的化合物(表中的化合物1)通过腹膜注射方式给药使神经元的存活率增大了31％。
上述试验结果表明，通式(I)的化合物能促进神经的再生。心脏保护作用的研究针对从经受了局部缺血和再灌注的野兔身上剥离下来的心脏，研究了心脏保护作用。测定了再灌注后梗塞的尺寸和收缩功能的恢复程度。
用氯胺酮-甲苯噻嗪混合物把新西兰野兔(2.3-2.5kg，ESD法国)麻醉，并且肝素化。取出心脏，迅速通过逆行动脉方式在75mmHg的压力下注入Krebs Henselheit-型溶液。把一个气泡引入左心室中，施加5mmHg的远端舒张压。稳定20分钟后，在缺血前15分钟和进行试验的整个期间把被研究的化合物(1mM)或其载体加入灌注液中。局部缺血是通过完全结扎左侧冠状动脉30分钟而产生的，然后再灌注心脏2小时。
在整个试验期间监测心室压、心率和冠状动脉的流量参数。
再灌注后，再次堵塞冠状动脉并注入中国墨水以便划分危险区域，然后制备切片，在1％三苯基四唑翁溶液中温育以测定梗塞的尺寸。坏死区域的数量用危险区面积的％表示，可利用图象分析软件获得。
例如，实施例中描述的化合物(表中的化合物1)使得梗塞的尺寸显著地减小了47％(对照组41.7±5.3，而被研究的化合物22±3.3，p＜0.01)。在两组中危险区域相当，都大约为50％。
化合物1减少了再灌注期间发生的痉挛，显著地修复了左侧心室压(再灌注2小时后恢复到局部缺血前心室压的百分数在对照组中为36％，而在给药的动物中为65％)、最大和最小dP/dt值以及双倍的频率-压力乘积。肾脏保护作用的研究在270-330g的Sprague-Dawley雄性大鼠(Charles RiverFrance)上进行试验。用戊巴比妥(60mg/kg，腹膜注射)麻醉动物，用喉管插入法进行人工通气，维持37-38℃的温度。
以仰卧位对动物进行剖腹术，把左右肾动脉暴露出来，并且堵塞30分钟，然后在视觉监测下对肾脏进行再灌注，封闭切口。根据在第0天(麻醉前)、第1天、第2天、第3天、第4天、第8天(堵塞-再灌注1天后)从眼眶窦采集的血液样品测定血清中肌酸酐和尿氮水平。
在堵塞前，通过腹膜注射方式，用60分钟以3mg/kg的剂量，把被研究的化合物或其载体给药到动物中。
例如，与载体相比，化合物1在第3天把肌酸血减少了56％，把尿血减少了49％。化合物1还减少了动物的死亡率1/12，而只接受了载体的动物的死亡率为4/9。
前面两个试验表明，一方面本发明的化合物可用于减小由大鼠心脏局部缺血-再灌注引起的梗塞的尺寸，使得再灌注后收缩功能能更好地恢复，另一方面，本发明的化合物能限制由肾脏局部缺血-再灌注意外引起的急性肾衰竭。
因此，通式(I)的化合物可用于制备预防和治疗各种周围神经病，例如与外伤有关的神经病或缺血性神经病、感染性神经病、与酒精有关的神经病、与药物有关的神经病或普通的神经病以及运动神经元疾病例如脊柱肌萎缩和肌萎缩性侧索硬化。还发现这些药物可用于治疗急性的中枢神经系统的神经退化病例如脑血管意外伤害以及脑颅和髓外伤，或者可用于治疗慢性的中枢神经系统的神经退化病例如自免疫疾病(多发性硬化症)、早老性痴呆症、帕金森氏病以及其它被认为可通过服用神经营养因子而达到治疗效果的疾病。
可用于本发明的化合物也可用于治疗急性或慢性肾衰竭、肾小球肾炎、糖尿病性肾病、心脏缺血、心力衰竭、心肌梗塞、下肢缺血、冠状血管痉挛、心绞痛、与心脏瓣膜有关的疾病、发炎性心脏病、由心脏毒性药物或心脏外科手术后产生的副作用、动脉粥样硬化及其血栓栓塞性综合症、再狭窄病、移植排斥、与平滑肌细胞的非正常增殖或迁移相关的疾病。
而且，最近文献数据表明，周围神经型苯并二氮杂受体在调控细胞增殖和癌变的过程中发挥着基本作用。总之，在各种类型的肿瘤和癌组织中观察到的周围神经型苯并二氮杂受体的密度比在正常组织中的高。
在人类星形细胞瘤中，周围神经型苯并二氮杂受体的表达水平与肿瘤的恶变程度、增殖指数和病人的存活率相关。在人类大脑肿瘤中，周围神经型苯并二氮杂受体数量的增加被用作医学成象中的诊断指标，并且被用作由一种周围神经型苯并二氮杂受体的配体和一种细胞静止剂构成的共轭物的治疗目标。在卵巢瘤和乳腺癌中也观察到高密度的周围神经型苯并二氮杂受体。对于后者，已经证明，周围神经型苯并二氮杂受体的表达水平与肿瘤的扩张势能相关；而且，周围神经型苯并二氮杂受体拮抗剂的存在还激发了乳腺癌细胞线的生长。
所有这些结果都暗示在癌变过程中，周围神经型苯并二氮杂受体功能发生恶化，为寻找能特异性地阻断周围神经型苯并二氮杂受体作用的合成配体奠定了相关的基础。
因此，这些化合物可用于治疗肿瘤和癌症。
周围神经型苯并二氮杂受体还存在于皮肤中，由于这些受体，可用于本发明的化合物可以用于预防或治疗皮肤应激。
应当把术语皮肤应激理解为是指能引起损伤特别是表皮程度上的各种情况，而不管引起这种应激的试剂。这种试剂可以是体内的/或体外的，例如是化学试剂或自由基试剂，或者是其它外在的东西，例如紫外线。
因此，可用于本发明的化合物可以用来预防和/或治疗皮肤过敏、皮肤病、红斑、麻醉障碍性过敏、过热性过敏、皮肤搔痒和/或粘膜搔痒、衰老，并且可用于治疗皮肤病，例如牛皮癣、痒疹病、疱疹、光照性皮肤病、特异性皮炎、接触性皮肤病、藓、痒疹、搔痒、昆虫叮咬、纤维变性和其它胶原化脓病以及免疫性疾病或其它皮肤病例如湿疹。
因此，本发明的目的是通式(I)的化合物在制备药物组合物中的用途，该组合物含有有效剂量的以药学上可接受的碱、盐或溶剂合物或其混合物形式存在的至少一种通式(I)的化合物，以及如果合适的话，还含有一种合适的赋形剂。
所说的赋形剂可根据药剂的剂型和希望的给药方式来选择。
因此，本发明的药物组合物可用于口服、舌下给药、皮下给药、肌肉注射、静脉注射、局部给药、气管内给药、鼻腔给药、透皮给药、直肠给药或眼球内给药。
用于给药的单位剂型例如可以是片剂、胶囊、颗粒、粉末、口服或注射的溶液或悬浮液、透皮贴或栓剂。用于局部给药的剂型可以包括油膏、洗液和洗眼液。
根据盖仑剂型的不同，所说的单位剂型的剂量允许每kg体重施用0.001-20mg的活性组份。
为了制备片剂，向微粒化或其它形态的活性组份中加入药用载体，药用载体可以由稀释剂例如乳糖、微晶纤维素、淀粉和成型助剂例如粘合剂(聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等)、滑动剂例如硅胶、润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油基三(二十二碳烷酸)酯、硬脂酰基富马酸钠组成。也可以添加增湿剂或表面活性剂例如月桂基硫酸钠。
制剂技术可以是直接压缩、干法造粒、湿法造粒或热熔融。
片剂可以是没有包衣的、糖包衣的例如用蔗糖包衣的、用各种聚合物或其它合适的材料包衣的。可以利用聚合物基质或包衣中所用的特定聚合物来设计片剂，使其迅速释放、延迟释放或延长释放活性组份。
为了制备胶囊，把活性组份与干燥的(简单混合、干法造粒、湿法造粒或热熔融)、液体的或半固体状的药用载体混合。
胶囊可以是具有迅速释放、延迟释放或延长释放活性(例如肠衣型)方式的硬胶囊或软胶囊、薄膜包衣的或其它形态。
糖浆型或酏剂型的组合物或滴剂型的药物组合物可以含有活性组份以及一种甜味剂，优选不产热的甜味剂、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、调味剂和着色剂。
可分散于水中的粉末和颗粒可以含有以与分散剂或增湿剂形成的混合物形式存在的活性组份、或分散剂例如聚乙烯基吡咯烷酮以及甜味剂和增味剂。
用于直肠给药时，使用栓剂，使用可在直肠温度下融化的粘合剂例如可可油或聚乙二醇来制备栓剂。
用于非肠胃给药时，使用含有药学上容许的分散剂和/或增湿剂例如丙二醇或丁二醇的可注射的水悬浮液、等渗的盐水溶液或无菌液。
可以任选地用一种或多种载体或添加剂，或者用聚合物基质或环糊精把活性组份配制成微胶囊形式(透皮贴、延长释放型)。
本发明的局部用组合物包含一种与皮肤相容的介质。该组合物尤其是呈以下剂型水溶液、醇溶液或水-醇溶液、凝胶、具有乳膏或凝胶外观的水/油或油/水型乳液、微乳液、气溶胶或含有离子型和/或非离子型脂质的起泡的分散液。这些盖仑剂型可以按照本领域中的常规方法制备。
最后，本发明的药物组合物除了含有通式(I)的化合物外，还可以包含其它可用于治疗上述障碍和疾病的活性组份。
权利要求
1.通式(I)的化合物在制备用于预防和治疗与周围神经型苯并二氮杂受体的功能失调有关的疾病和障碍的药物中的用途 其中X代表卤原子；Y代表一或多个选自H、卤素和羟基、甲基、甲氧基和硝基的原子或基团；R1代表(C1-C4)烷基；R2和R3各自独立地代表H或C1-C4烷基，或者R2和R3与跟它们相连的氮原子一起形成一个吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
2.权利要求1的用途，其特征在于通式(I)的化合物是7-氯-N，N，5-三甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酰胺。
3.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是中枢神经系统或周围神经系统的退化病。
4.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是心脏疾病或障碍。
5.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是肾脏病。
6.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是皮肤应激。
7.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是肿瘤或癌症。
全文摘要
本申请涉及通式(I)的化合物在制备用于预防或治疗与周围神经型苯并二氮杂受体有关的疾病的药物中的用途,其中:X代表一个卤原子;Y代表一个或多个选自H、卤素原子和羟基、甲基、甲氧基和硝基的原子或基团;R
文档编号A61P25/02GK1344161SQ0080527
公开日2002年4月10日 申请日期2000年1月21日 优先权日1999年1月26日
发明者B·菲尔扎兹, J·贝纳维德斯, F·马圭特, J·弗罗伊桑特, B·马拉布特, Y·埃范诺, M·塞夫林, P·雅尼尔克 申请人:圣诺菲-合成实验室公司
在检索可以促进周围神经细胞的轴突损伤后再生的化合物时，在国际专利申请PCT/FR98/01667的化合物中鉴别出了一小组通式(I)的化合物 其中X代表卤原子；Y代表一个或多个选自H、卤素和羟基、甲基、甲氧基和硝基的原子或基团；R1代表(C1-C4)烷基；R2和R3各自独立地代表H或C1-C4烷基，或者R2和R3与跟它们相连的氮原子一起形成一个吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
这些化合物对周围神经型苯并二氮杂受体(p位点，或PBR)具有很高的亲和性，特别是有些化合物会使面部神经划伤后面部神经核中神经元的损伤减小。这些化合物还具有保护心脏和肾脏的作用。
特别优选的用于本发明的化合物例如是7-氯-N，N，5-三甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酰胺。
后者例如可以按照下列方法制备。实施例(下表中的化合物1)1. 6-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯在室温下，把1.8g(45mmol)60％氢化钠(事先用石油醚洗涤)和8.0g(35.8mmol)6-氯-1H-吲哚-2-甲酸乙酯在80ml N，N-二甲基甲酰胺中的悬浮液搅拌2小时，然后加入2.8ml(45mmol)的碘甲烷，在室温下搅拌混合物4小时。
加入5ml无水乙醇，在减压下蒸去溶剂。用水浸取残留物，用二氯甲烷萃取混合物，干燥有机相，过滤，在减压下蒸去溶剂，残留物通过硅胶色谱柱纯化，分离出8.5g(35.7mmol)白色结晶的化合物。熔点75.5-76.5℃。2. 6-氯-2-(乙氧基羰基)-1-甲基-α-氧代-1H-吲哚-3-乙酸乙酯把4ml(36.4mmol)四氯化钛加入4ml(36mmol)氯代氧代乙酸乙酯在100ml 1，2-二氯乙烷中的溶液中，在室温下搅拌反应混合物30分钟，然后加入7.8g(32.8mmol)6-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯，在室温下搅拌反应混合物4小时。
冷却反应介质，加入200ml二氯甲烷和100ml水，滗出有机相，用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩滤液，残留物通过硅胶色谱柱纯化，分离出9.4g(29.0mmol)产物。熔点94-95℃3. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲酸乙酯在室温下，把4ml(40.6mmol)苯肼加入4.6g(13.6mmol)6-氯-2-(乙氧基羰基)-1-甲基-α-氧代-1H-吲哚-3-乙酸乙酯在120ml乙酸中的溶液中，在室温下搅拌反应混合物30分钟，然后回流搅拌4小时。冷却反应介质，加入350ml二氯甲烷和100ml水。滗出有机相，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化，分离出4.1g(10.7mmol)产物。熔点216-218.5℃。4. 7-氯-1-(羟甲基)-5-甲基-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-4-酮把2.5g(66.1mmol)硼氢化钠加入4.04g(10.6mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲酸乙酯在150ml四氢呋喃中的溶液中。然后在搅拌下逐步加入2.25ml甲醇，然后加热回流混合物5小时。
把混合物倒入冰冷却的1M盐酸溶液中，通过在烧结玻璃上过滤而除去不溶物，用水和乙醚洗涤，然后干燥，分离出3.3g(9.7mmol)白色固体的化合物，该化合物用于下一步中。熔点219-220.5℃。5. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲醛把5.7g(65.6mmol)二氧化锰加入3.3g(9.7mmol)7-氯-1-(羟甲基)-5-甲基-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-4-酮在300ml二氯甲烷中的溶液中，搅拌回流反应混合物24小时。
冷却反应介质，在TéflonTM膜上过滤，用二氯甲烷冲洗固体，然后在减压下浓缩滤液。分离出2.88g(8.53mmol)白色固体的化合物，该化合物用于下一步反应中。熔点235-236℃。6. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙腈分小批量地把1.27g(10.96mmol)1，1-二甲基乙醇钾加入2.14g(10.96mmol)1-[(异氰基甲基)-磺酰基]-4-甲基苯在50ml1，2-二甲氧基乙烷中的溶液中，在-60℃下搅拌反应混合物30分钟，加入2.88g(8.53mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-甲醛，在-60℃下搅拌反应混合物3小时30分钟，加入9ml甲醇，然后在室温下再次搅拌反应混合物30分钟，回流1小时。
冷却介质，在减压下浓缩，向残留物中加入5ml乙酸和200ml二氯甲烷，滗出有机相，用二氯甲烷萃取水相。合并有机相，用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，残留物通过硅胶色谱纯化，分离出1.87g(5.36mmol)白色固体的化合物，该化合物用于下一步中。熔点305-315℃。7. 7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酸甲酯把氯化氢通入1.83g(5.25mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙腈在250ml甲醇中的溶液中，直到该溶液饱和，搅拌回流反应混合物4小时。
冷却反应介质，在减压下浓缩反应混合物，向残留物中加入25ml水和25ml甲醇。搅拌后，通过过滤回收不溶物，用水和乙醚洗涤，干燥，并通过硅胶柱色谱纯化，分离出1.00g(2.62mmol)白色固体的化合物。熔点188.5-190℃。8. 7-氯-N，N，5-三甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酰胺在0℃和氩气气氛下，把3ml(6mmol)三甲基铝(2M的甲苯溶液)加入0.49g(6mmol)二甲基胺盐酸盐在80ml甲苯中的溶液中，在室温下搅拌反应混合物1小时30分钟。
加入0.21g(0.55mmol)7-氯-5-甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酸甲酯，搅拌回流反应混合物6小时。
把反应介质冷却到4℃，加入10ml水和100ml二氯甲烷，过滤溶液，在减压下浓缩滤液。
向残留物中加入水、1M盐酸和150ml二氯甲烷，分离出有机相，用水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化。
在二氯甲烷和乙酸乙酯混合物中重结晶后，分离出0.2g(0.51mmol)棉花状白色固体的化合物。熔点229.5-230℃。
下表详细说明可用于本发明的一些化合物的化学结构和物理性能。表中的符号“Me”和“Et”分别代表甲基和乙基；“pyrrolid”、“piperid”和“morph”分别代表吡咯烷基、哌啶基和吗啉基。
表
试验方法以及试验结果如下所述。[3H]Ro5-4864与周围神经型苯并二氮杂受体结合力的研究测定了本发明的化合物对周围神经型苯并二氮杂受体(p位点或PBR)的亲和性。
可以通过在[3H]Ro5-4864存在下温育而在大鼠肾脏膜中选择性地标记p位点的受体。在试管中研究化合物对这些受体的亲和性。所用的动物是180-300mg的雄性Sprague-Dawley大鼠(Iffa Credo)。断头后，取出肾脏，在4℃下，在用NaH2PO4把pH调节到7.5的35倍体积的50mM Na2HPO4缓冲液中，用PolytronTM均化器以6/10最大速度把组织匀浆2分钟。膜匀浆液在纱布上过滤，用缓冲液稀释10倍。
在100μl膜匀浆液存在下，在最终体积为1ml的含有试验化合物的缓冲液中温育[3H]Ro5-4864(比放射性70-90居里/毫摩尔；NewEngland Nuclear)。
在0℃下温育3小时后，通过在Whatman GF/BTM过滤器上过滤来回收膜，以4.5ml冷的温育用的缓冲液(0℃)洗涤过滤器两次。通过液体闪烁照相法测定过滤器所保留的放射性数量。
对于每个浓度的被研究化合物，测定对[3H]Ro5-4864结合力的抑制百分数，然后确定浓度CI50，即抑制50％的特异性结合力的浓度。
大多数活性化合物的CI50值在0.6 nM-20 nM的范围。
结果，可用于本发明的化合物是对周围神经型苯并二氮杂受体具有很高亲和性的配体。神经萎缩活性的研究通过测量睑反射的功能恢复来试验受损伤的面部神经的再生，按照K.Kujawa等人在Experimental Neurology(1989)，105，80-85中所述方法的一种改进方法进行。
通过局部冷冻而产生的面部神经的损伤能引起面部神经的远端部分发生退化以及使眼皮的眨眼功能丧失。要研究的产物通过腹膜注射或口服方式给药，每天两次，其中间间隔6-8小时，共延续10天(试验期)。第一次给药是在损伤前30分钟。动物的监测每天每次给药前，按照0-4的理论分值对受损伤动物眼皮的功能恢复进行监测，在第1天至第5天，每天早晨监测一次；在第6天至第10天，每天监测两次(早晚各一次，中间间隔6-8小时)。
0分眼睛睁开；1分眼睛闭上的程度少于一半；2分眼睛闭上的程度介于1/2和3/4之间；3分眼睛闭上的程度大于3/4；4分眼睛完全闭上。
结果用服药组与对照组的AUC(曲线下面的面积)的比值来表示。大多数活性化合物的AUC比值介于1.12和1.20之间。
因此，这些化合物使面部神经损伤后睑反射的恢复增大了12-20％。在4天龄的大鼠中进行的面部神经切断后运动神经元存活的试验在未成熟大鼠的面部神经损伤后，面神经核的运动神经元因凋亡而发生神经元的死亡。使用组织学计数方法和神经元计数方法对神经元的存活进行评价。
用戊巴比妥(3mg/kg，通过腹膜注射方式给药)麻醉4天龄的未成熟大鼠。把右边面神经暴露出来，并且切断，留下茎突孔。待年幼的大鼠恢复知觉后，使其回到母亲身边，并且以1-10mg/kg的剂量通过口服或腹膜注射方式给药，每天一次或两次，共给药7天。在动物受损伤7天后，把动物断头，将其大脑放在-40℃的异戊烷中冷冻。使用恒冷切片机把面部神经核全部切成10μm的片。用甲酚紫给运动神经元染色，在HistoTM软件(BiocomTM)的辅助下给运动神经元计数。
在这个模型中，大多数活性化合物都能使神经元的存活率增大大约10-30％，例如实施例中描述的化合物(表中的化合物1)通过腹膜注射方式给药使神经元的存活率增大了31％。
上述试验结果表明，通式(I)的化合物能促进神经的再生。心脏保护作用的研究针对从经受了局部缺血和再灌注的野兔身上剥离下来的心脏，研究了心脏保护作用。测定了再灌注后梗塞的尺寸和收缩功能的恢复程度。
用氯胺酮-甲苯噻嗪混合物把新西兰野兔(2.3-2.5kg，ESD法国)麻醉，并且肝素化。取出心脏，迅速通过逆行动脉方式在75mmHg的压力下注入Krebs Henselheit-型溶液。把一个气泡引入左心室中，施加5mmHg的远端舒张压。稳定20分钟后，在缺血前15分钟和进行试验的整个期间把被研究的化合物(1mM)或其载体加入灌注液中。局部缺血是通过完全结扎左侧冠状动脉30分钟而产生的，然后再灌注心脏2小时。
在整个试验期间监测心室压、心率和冠状动脉的流量参数。
再灌注后，再次堵塞冠状动脉并注入中国墨水以便划分危险区域，然后制备切片，在1％三苯基四唑翁溶液中温育以测定梗塞的尺寸。坏死区域的数量用危险区面积的％表示，可利用图象分析软件获得。
例如，实施例中描述的化合物(表中的化合物1)使得梗塞的尺寸显著地减小了47％(对照组41.7±5.3，而被研究的化合物22±3.3，p＜0.01)。在两组中危险区域相当，都大约为50％。
化合物1减少了再灌注期间发生的痉挛，显著地修复了左侧心室压(再灌注2小时后恢复到局部缺血前心室压的百分数在对照组中为36％，而在给药的动物中为65％)、最大和最小dP/dt值以及双倍的频率-压力乘积。肾脏保护作用的研究在270-330g的Sprague-Dawley雄性大鼠(Charles RiverFrance)上进行试验。用戊巴比妥(60mg/kg，腹膜注射)麻醉动物，用喉管插入法进行人工通气，维持37-38℃的温度。
以仰卧位对动物进行剖腹术，把左右肾动脉暴露出来，并且堵塞30分钟，然后在视觉监测下对肾脏进行再灌注，封闭切口。根据在第0天(麻醉前)、第1天、第2天、第3天、第4天、第8天(堵塞-再灌注1天后)从眼眶窦采集的血液样品测定血清中肌酸酐和尿氮水平。
在堵塞前，通过腹膜注射方式，用60分钟以3mg/kg的剂量，把被研究的化合物或其载体给药到动物中。
例如，与载体相比，化合物1在第3天把肌酸血减少了56％，把尿血减少了49％。化合物1还减少了动物的死亡率1/12，而只接受了载体的动物的死亡率为4/9。
前面两个试验表明，一方面本发明的化合物可用于减小由大鼠心脏局部缺血-再灌注引起的梗塞的尺寸，使得再灌注后收缩功能能更好地恢复，另一方面，本发明的化合物能限制由肾脏局部缺血-再灌注意外引起的急性肾衰竭。
因此，通式(I)的化合物可用于制备预防和治疗各种周围神经病，例如与外伤有关的神经病或缺血性神经病、感染性神经病、与酒精有关的神经病、与药物有关的神经病或普通的神经病以及运动神经元疾病例如脊柱肌萎缩和肌萎缩性侧索硬化。还发现这些药物可用于治疗急性的中枢神经系统的神经退化病例如脑血管意外伤害以及脑颅和髓外伤，或者可用于治疗慢性的中枢神经系统的神经退化病例如自免疫疾病(多发性硬化症)、早老性痴呆症、帕金森氏病以及其它被认为可通过服用神经营养因子而达到治疗效果的疾病。
可用于本发明的化合物也可用于治疗急性或慢性肾衰竭、肾小球肾炎、糖尿病性肾病、心脏缺血、心力衰竭、心肌梗塞、下肢缺血、冠状血管痉挛、心绞痛、与心脏瓣膜有关的疾病、发炎性心脏病、由心脏毒性药物或心脏外科手术后产生的副作用、动脉粥样硬化及其血栓栓塞性综合症、再狭窄病、移植排斥、与平滑肌细胞的非正常增殖或迁移相关的疾病。
而且，最近文献数据表明，周围神经型苯并二氮杂受体在调控细胞增殖和癌变的过程中发挥着基本作用。总之，在各种类型的肿瘤和癌组织中观察到的周围神经型苯并二氮杂受体的密度比在正常组织中的高。
在人类星形细胞瘤中，周围神经型苯并二氮杂受体的表达水平与肿瘤的恶变程度、增殖指数和病人的存活率相关。在人类大脑肿瘤中，周围神经型苯并二氮杂受体数量的增加被用作医学成象中的诊断指标，并且被用作由一种周围神经型苯并二氮杂受体的配体和一种细胞静止剂构成的共轭物的治疗目标。在卵巢瘤和乳腺癌中也观察到高密度的周围神经型苯并二氮杂受体。对于后者，已经证明，周围神经型苯并二氮杂受体的表达水平与肿瘤的扩张势能相关；而且，周围神经型苯并二氮杂受体拮抗剂的存在还激发了乳腺癌细胞线的生长。
所有这些结果都暗示在癌变过程中，周围神经型苯并二氮杂受体功能发生恶化，为寻找能特异性地阻断周围神经型苯并二氮杂受体作用的合成配体奠定了相关的基础。
因此，这些化合物可用于治疗肿瘤和癌症。
周围神经型苯并二氮杂受体还存在于皮肤中，由于这些受体，可用于本发明的化合物可以用于预防或治疗皮肤应激。
应当把术语皮肤应激理解为是指能引起损伤特别是表皮程度上的各种情况，而不管引起这种应激的试剂。这种试剂可以是体内的/或体外的，例如是化学试剂或自由基试剂，或者是其它外在的东西，例如紫外线。
因此，可用于本发明的化合物可以用来预防和/或治疗皮肤过敏、皮肤病、红斑、麻醉障碍性过敏、过热性过敏、皮肤搔痒和/或粘膜搔痒、衰老，并且可用于治疗皮肤病，例如牛皮癣、痒疹病、疱疹、光照性皮肤病、特异性皮炎、接触性皮肤病、藓、痒疹、搔痒、昆虫叮咬、纤维变性和其它胶原化脓病以及免疫性疾病或其它皮肤病例如湿疹。
因此，本发明的目的是通式(I)的化合物在制备药物组合物中的用途，该组合物含有有效剂量的以药学上可接受的碱、盐或溶剂合物或其混合物形式存在的至少一种通式(I)的化合物，以及如果合适的话，还含有一种合适的赋形剂。
所说的赋形剂可根据药剂的剂型和希望的给药方式来选择。
因此，本发明的药物组合物可用于口服、舌下给药、皮下给药、肌肉注射、静脉注射、局部给药、气管内给药、鼻腔给药、透皮给药、直肠给药或眼球内给药。
用于给药的单位剂型例如可以是片剂、胶囊、颗粒、粉末、口服或注射的溶液或悬浮液、透皮贴或栓剂。用于局部给药的剂型可以包括油膏、洗液和洗眼液。
根据盖仑剂型的不同，所说的单位剂型的剂量允许每kg体重施用0.001-20mg的活性组份。
为了制备片剂，向微粒化或其它形态的活性组份中加入药用载体，药用载体可以由稀释剂例如乳糖、微晶纤维素、淀粉和成型助剂例如粘合剂(聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等)、滑动剂例如硅胶、润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油基三(二十二碳烷酸)酯、硬脂酰基富马酸钠组成。也可以添加增湿剂或表面活性剂例如月桂基硫酸钠。
制剂技术可以是直接压缩、干法造粒、湿法造粒或热熔融。
片剂可以是没有包衣的、糖包衣的例如用蔗糖包衣的、用各种聚合物或其它合适的材料包衣的。可以利用聚合物基质或包衣中所用的特定聚合物来设计片剂，使其迅速释放、延迟释放或延长释放活性组份。
为了制备胶囊，把活性组份与干燥的(简单混合、干法造粒、湿法造粒或热熔融)、液体的或半固体状的药用载体混合。
胶囊可以是具有迅速释放、延迟释放或延长释放活性(例如肠衣型)方式的硬胶囊或软胶囊、薄膜包衣的或其它形态。
糖浆型或酏剂型的组合物或滴剂型的药物组合物可以含有活性组份以及一种甜味剂，优选不产热的甜味剂、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、调味剂和着色剂。
可分散于水中的粉末和颗粒可以含有以与分散剂或增湿剂形成的混合物形式存在的活性组份、或分散剂例如聚乙烯基吡咯烷酮以及甜味剂和增味剂。
用于直肠给药时，使用栓剂，使用可在直肠温度下融化的粘合剂例如可可油或聚乙二醇来制备栓剂。
用于非肠胃给药时，使用含有药学上容许的分散剂和/或增湿剂例如丙二醇或丁二醇的可注射的水悬浮液、等渗的盐水溶液或无菌液。
可以任选地用一种或多种载体或添加剂，或者用聚合物基质或环糊精把活性组份配制成微胶囊形式(透皮贴、延长释放型)。
本发明的局部用组合物包含一种与皮肤相容的介质。该组合物尤其是呈以下剂型水溶液、醇溶液或水-醇溶液、凝胶、具有乳膏或凝胶外观的水/油或油/水型乳液、微乳液、气溶胶或含有离子型和/或非离子型脂质的起泡的分散液。这些盖仑剂型可以按照本领域中的常规方法制备。
最后，本发明的药物组合物除了含有通式(I)的化合物外，还可以包含其它可用于治疗上述障碍和疾病的活性组份。
权利要求
1.通式(I)的化合物在制备用于预防和治疗与周围神经型苯并二氮杂受体的功能失调有关的疾病和障碍的药物中的用途 其中X代表卤原子；Y代表一或多个选自H、卤素和羟基、甲基、甲氧基和硝基的原子或基团；R1代表(C1-C4)烷基；R2和R3各自独立地代表H或C1-C4烷基，或者R2和R3与跟它们相连的氮原子一起形成一个吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
2.权利要求1的用途，其特征在于通式(I)的化合物是7-氯-N，N，5-三甲基-4-氧代-3-苯基-3，5-二氢-4H-哒嗪并[4，5-b]吲哚-1-乙酰胺。
3.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是中枢神经系统或周围神经系统的退化病。
4.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是心脏疾病或障碍。
5.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是肾脏病。
6.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是皮肤应激。
7.权利要求1和2的任何一个的用途，其特征在于所说的疾病或障碍是肿瘤或癌症。
全文摘要
本申请涉及通式(I)的化合物在制备用于预防或治疗与周围神经型苯并二氮杂受体有关的疾病的药物中的用途,其中:X代表一个卤原子;Y代表一个或多个选自H、卤素原子和羟基、甲基、甲氧基和硝基的原子或基团;R
文档编号A61P25/02GK1344161SQ0080527
公开日2002年4月10日 申请日期2000年1月21日 优先权日1999年1月26日
发明者B·菲尔扎兹, J·贝纳维德斯, F·马圭特, J·弗罗伊桑特, B·马拉布特, Y·埃范诺, M·塞夫林, P·雅尼尔克 申请人:圣诺菲-合成实验室公司
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