对乙酰氨基苯乙醚用于检测肝脏功能的用途的制作方法
专利名称：对乙酰氨基苯乙醚用于检测肝脏功能的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医用检测试剂技术领域，是对乙酰氨基苯乙醚(phenacetin，非那西丁)用于检测肝脏功能的用途。
背景技术：
正确评价肝脏功能，是目前临床医学迫切需要解决的重要课题。其涉及到慢性肝病病人肝脏损害程度的评价，肝部分切除术病人肝脏贮备功能的评估，肝移植病人供肝的选择，合理用药及新药的设计与开发。为此，国内外临床和基础工作者进行了长期大量的实验研究。其中包括磺酸钠排泄试验，氨基酸代谢试验，14C-氨基比林呼吸试验，胆汁酸代谢试验，安替比林半衰期试验等。被研究过的模型药物至少有四十多个。虽然利多卡因氮位去乙基代谢试验(MEGX test)被Abbort公司制成荧光偏震免疫检测试剂盒，推向市场。但所有这些方法都不能满足临床的需要。因为评价肝脏功能的研究有五大难以逾越的障碍①现有评价方法灵敏度低，特异性差。②同位素试验违背环保要求，且临床实用性差。③肝外代谢的存在和代偿影响对肝脏功能的正确评价。例如，利多卡因氮位去乙基代谢产物有30％以上来自肝外代谢，这就不能真实反映肝脏的功能。④正常与异常的界定常有交叉区。⑤动物实验与人体实验结果常不一致。
发明内容
本发明采用对乙酰氨基苯乙醚检测肝脏功能。对乙酰氨基苯乙醚属于乙酰苯胺类化合物，是细胞色素P450 1A2氧化酶的特异性底物。其分子式为C10H13NO2，结构式为 对乙酰氨基苯乙醚通常被用作感冒药，是复方阿司匹林等感冒药的主要成分之一。其在肝脏细胞色素P450 1A2氧化酶作用下，生成对乙酰氨基酚，代谢途径为；
对乙酰氨基苯乙醚 对乙酰氨基酚我们最近发现，对乙酰氨基苯乙醚的肝外代谢极低，且不被经典肝药酶诱导剂苯巴比妥钠所诱导。因此，可采用口服或静脉注射对乙酰氨基苯乙醚，一定时间后，测定血液中对乙酰氨基苯乙醚及其氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，以两者含量之比，评价肝脏功能。该方法可以是对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚的比值，也可以是对乙酰氨基苯乙醚/对乙酰氨基酚的比值。由于对乙酰氨基苯乙醚副作用少，不良反应小，人体最小致死量为5克，口服后血液中对乙酰氨基酚与对乙酰氨基苯乙醚的含量之比受干扰因素少，指标灵敏、可靠，故可将对乙酰氨基苯乙醚用于检测肝脏功能。
具体实施例方式
CCL4诱导的大鼠慢性肝损害模型，是目前最常用的慢性肝损害模型之一。其简便、易行，能从生物化学，分子生物学及组织形态学多角度观察肝脏的功能和结构变化。我们用对乙酰氨基苯乙醚作为探针，以正常大鼠为对照，从血液生化指标、组织结构和对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢三个方面，研究了慢性肝损害大鼠的肝脏变化。实验结果表明，与正常大鼠相比，模型组大鼠肝小叶结构破坏，多数肝细胞呈气球样变性，伴灶性坏死、大量炎性细胞浸润和纤维组织增生。另外，与肝细胞损害有关的指标明显升高，如血清丙氨酸转氨酶(ALT)和γ-丙氨酰转移酶(γ-GT)等。而除血清总胆红素(TBil)外，其他与肝脏功能有关的指标，如血浆白蛋白(AIb)和凝血酶原时间(TT)，却未见明显改变。值得注意的是，若用分光光度法测定对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，模型组是正常对照组的30％；而用高效液相色谱法(HPLC)测定对乙酰氨基苯乙醚和对乙酰氨基酚含量，计算对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值，模型组大鼠仅为正常对照组的1/17.3。这一结果说明，对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法是评价慢性肝损害大鼠肝脏功能的一个非常灵敏的指标。
慢性乙型病毒性肝炎在我国是一种常见病与多发病。其中，部分病人可发展成肝纤维化和肝癌，对社会和家庭造成严重影响。在慢性病毒性肝炎的早期，及时了解肝脏的功能状态，正确评估肝脏的功能，对确定病情，评价药物疗效，判断预后非常重要。另外，在临床实践中，经常遇到一些病人肝功能检查正常，但肝部分切除后，或经肝动脉插管化疗后，出现严重肝功能衰竭。所以，我们选择慢性乙型肝炎病人为对象，以对乙酰氨基苯乙醚为探针，评价了慢性乙肝病人的肝脏功能。
在慢性乙型肝炎病人，标志肝脏功能的三大主要指标，血浆白蛋白含量、凝血酶原时间和血清胆红素含量都在正常范围。这说明二个问题，一是肝脏代偿功能很强，另一是临床现有评价肝脏功能的指标灵敏度太低。
我们用对乙酰氨基苯乙醚作探针，对正常人和慢性乙型肝炎患者进行检测。发现慢性乙型肝炎病人血液中对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，比正常人减少了72％，对乙酰氨基苯乙醚含量比正常人高了1.15倍，而对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值只有正常人的1/7.6。显然，用对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法评价慢性乙型肝炎病人的肝脏功能，方法简单，结果灵敏可靠，具有临床实用价值。
实施例对乙酰氨基苯乙醚用于检测慢性肝损害大鼠的肝脏功能试验40只大鼠，雄性，体重166±20克，购自中科院实验动物中心。随机分成二组，即慢性肝损害模型组和正常对照组，每组20只。模型组腹腔注射四氯化碳橄榄油，配比为1∶6，1-4周注射剂量为0.025毫升/只，5-9周注射剂量为0.05毫升/只。均为隔日一次。正常对照组则隔日注射等体积注射用水。9周后，先禁食12小时，再每鼠尾静脉注射0.6％对乙酰氨基苯乙醚20毫克/公斤，30分钟后，从眼球后静脉取血，置于抗凝管内，-20℃保存。同时，取右肝叶，中性福尔马林固定，常规石腊包埋切片，HE染色，进行组织学分析检查。采用日立-7150生化自动分析仪测定血液生化指标。采用高效液相色谱法测定对乙酰氨基苯乙醚及对乙酰氨基酚含量。采用紫外分光光度法测定血液中对乙酰氨基酚含量。检测数据用单因素方差分析及RIDIT法进行统计分析和显著性检验。结果见表1和表2。
表1慢性肝损害大鼠与正常对照大鼠血液生化指标的检测数据(x±SD，n＝20)
**与正常对照组比，P＜0.01表2对乙酰氨基苯乙醚用于检测慢性肝损害大鼠的肝脏功能(μg/ml，n＝20)
**与正常对照组比，P＜0.01由表1-2可见，与正常对照组比，模型组大鼠肝细胞损害的生化指标ALT、Tbil和γ-GT明显升高，说明四氯化碳造成大鼠肝脏损害。在四氯化碳诱导的慢性肝损害大鼠，虽然与肝脏功能有关的指标AIb和TT无明显改变，但对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量比正常大鼠减少了70％，尤其是对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值，模型组大鼠只有正常对照组的1/17.3。说明对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法是检测慢性肝损害大鼠肝脏功能的一个灵敏指标。
实施例对乙酰氨基苯乙醚用于检测慢性乙型肝炎病人肝脏功能26例慢性乙型肝炎病人，男性20例，女性6例，年龄32±8岁(20-54岁)，符合1995年全国第五届传染病寄生虫病学术会议病毒性肝炎诊断标准。血清乙型肝炎病毒-DNA与乙型肝炎病毒e抗原阳性，血清丙氨酸转氨酶＞40u.L-1，血清胆红素＜50μmol.L-1，总胆红素＜85.5μmol.L-1。所有病人知情同意，无血液系统疾病，无活动性消化性溃疡，无解热镇痛药过敏史。心肾功能正常，近期未使用过细胞色素P450诱导剂与抑制剂。8例健康受试者，男女各半，年龄22-48岁。常规体检正常，近一周内未使用过任何药物。无解热镇痛药过敏史。
所有受试者空腹口服对乙酰氨基苯乙醚0.5克，200毫升温开水服下。2小时后抽静脉血1毫升，置于抗凝管内，-20℃保存。采用高效液相色谱法测定血浆中对乙酰氨基苯乙醚及其氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，计算对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值，用分组t检验法检验两组间差异的显著性，结果见表3。
表3慢性乙肝病人和健康对照者血液对乙酰氨基苯乙醚与对乙酰氨基酚含量(μg/ml)
**与正常对照组比，P＜0.01由表3可见，在慢性乙型肝炎病人，对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量只有健康受试者的28％，而对乙酰氨基苯乙醚血浓度比正常人高了1.15倍。值得注意的是，以对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值为指标，两组间差别高达7.6倍。说明用对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法检测肝脏功能，比单纯使用对乙酰氨基苯乙醚代谢产物对乙酰氨基酚含量检测肝脏功能更灵敏、可靠。另外，该实验还说明，静脉注射对乙酰氨基苯乙醚后，用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚含量，也能反映肝脏功能的变化，但与高效液相色谱法比，不如用对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法灵敏。
权利要求
1.对乙酰氨基苯乙醚在制备检测肝脏功能制剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及医用检测试剂技术领域，是对乙酰氨基苯乙醚用于检测肝脏功能的用途。对乙酰氨基苯乙醚是复方阿司匹林等感冒药的主要成分之一，其经肝脏代谢后，生成对乙酰氨基酚。急慢性肝病患者接受对乙酰氨基苯乙醚后，血液中检测到的对乙酰氨基酚明显低于正常人，而对乙酰氨基苯乙醚则明显高于正常人。血液中对乙酰氨基酚与对乙酰氨基苯乙醚两者的比值更能反映患者与正常人肝脏功能的差异。该发明较现有检测肝脏功能的指标灵敏，受干扰因素少，能客观地反映肝脏功能的状态。该发明方法简单，只要在口服或静脉注射对乙酰氨基苯乙醚一定时间后，检测血液中的对乙酰氨基酚和对乙酰氨基苯乙醚的含量，计算对乙酰氨基酚与对乙酰氨基苯乙醚的比值，或者是计算对乙酰氨基苯乙醚与对乙酰氨基酚的比值即可。
文档编号A61B5/145GK1588065SQ200410066858
公开日2005年3月2日 申请日期2004年9月29日 优先权日2004年9月29日
发明者贺平, 李晓冬 申请人:贺平, 杨晓冬
技术领域：
本发明涉及医用检测试剂技术领域，是对乙酰氨基苯乙醚(phenacetin，非那西丁)用于检测肝脏功能的用途。
背景技术：
正确评价肝脏功能，是目前临床医学迫切需要解决的重要课题。其涉及到慢性肝病病人肝脏损害程度的评价，肝部分切除术病人肝脏贮备功能的评估，肝移植病人供肝的选择，合理用药及新药的设计与开发。为此，国内外临床和基础工作者进行了长期大量的实验研究。其中包括磺酸钠排泄试验，氨基酸代谢试验，14C-氨基比林呼吸试验，胆汁酸代谢试验，安替比林半衰期试验等。被研究过的模型药物至少有四十多个。虽然利多卡因氮位去乙基代谢试验(MEGX test)被Abbort公司制成荧光偏震免疫检测试剂盒，推向市场。但所有这些方法都不能满足临床的需要。因为评价肝脏功能的研究有五大难以逾越的障碍①现有评价方法灵敏度低，特异性差。②同位素试验违背环保要求，且临床实用性差。③肝外代谢的存在和代偿影响对肝脏功能的正确评价。例如，利多卡因氮位去乙基代谢产物有30％以上来自肝外代谢，这就不能真实反映肝脏的功能。④正常与异常的界定常有交叉区。⑤动物实验与人体实验结果常不一致。
发明内容
本发明采用对乙酰氨基苯乙醚检测肝脏功能。对乙酰氨基苯乙醚属于乙酰苯胺类化合物，是细胞色素P450 1A2氧化酶的特异性底物。其分子式为C10H13NO2，结构式为 对乙酰氨基苯乙醚通常被用作感冒药，是复方阿司匹林等感冒药的主要成分之一。其在肝脏细胞色素P450 1A2氧化酶作用下，生成对乙酰氨基酚，代谢途径为；
对乙酰氨基苯乙醚 对乙酰氨基酚我们最近发现，对乙酰氨基苯乙醚的肝外代谢极低，且不被经典肝药酶诱导剂苯巴比妥钠所诱导。因此，可采用口服或静脉注射对乙酰氨基苯乙醚，一定时间后，测定血液中对乙酰氨基苯乙醚及其氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，以两者含量之比，评价肝脏功能。该方法可以是对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚的比值，也可以是对乙酰氨基苯乙醚/对乙酰氨基酚的比值。由于对乙酰氨基苯乙醚副作用少，不良反应小，人体最小致死量为5克，口服后血液中对乙酰氨基酚与对乙酰氨基苯乙醚的含量之比受干扰因素少，指标灵敏、可靠，故可将对乙酰氨基苯乙醚用于检测肝脏功能。
具体实施例方式
CCL4诱导的大鼠慢性肝损害模型，是目前最常用的慢性肝损害模型之一。其简便、易行，能从生物化学，分子生物学及组织形态学多角度观察肝脏的功能和结构变化。我们用对乙酰氨基苯乙醚作为探针，以正常大鼠为对照，从血液生化指标、组织结构和对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢三个方面，研究了慢性肝损害大鼠的肝脏变化。实验结果表明，与正常大鼠相比，模型组大鼠肝小叶结构破坏，多数肝细胞呈气球样变性，伴灶性坏死、大量炎性细胞浸润和纤维组织增生。另外，与肝细胞损害有关的指标明显升高，如血清丙氨酸转氨酶(ALT)和γ-丙氨酰转移酶(γ-GT)等。而除血清总胆红素(TBil)外，其他与肝脏功能有关的指标，如血浆白蛋白(AIb)和凝血酶原时间(TT)，却未见明显改变。值得注意的是，若用分光光度法测定对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，模型组是正常对照组的30％；而用高效液相色谱法(HPLC)测定对乙酰氨基苯乙醚和对乙酰氨基酚含量，计算对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值，模型组大鼠仅为正常对照组的1/17.3。这一结果说明，对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法是评价慢性肝损害大鼠肝脏功能的一个非常灵敏的指标。
慢性乙型病毒性肝炎在我国是一种常见病与多发病。其中，部分病人可发展成肝纤维化和肝癌，对社会和家庭造成严重影响。在慢性病毒性肝炎的早期，及时了解肝脏的功能状态，正确评估肝脏的功能，对确定病情，评价药物疗效，判断预后非常重要。另外，在临床实践中，经常遇到一些病人肝功能检查正常，但肝部分切除后，或经肝动脉插管化疗后，出现严重肝功能衰竭。所以，我们选择慢性乙型肝炎病人为对象，以对乙酰氨基苯乙醚为探针，评价了慢性乙肝病人的肝脏功能。
在慢性乙型肝炎病人，标志肝脏功能的三大主要指标，血浆白蛋白含量、凝血酶原时间和血清胆红素含量都在正常范围。这说明二个问题，一是肝脏代偿功能很强，另一是临床现有评价肝脏功能的指标灵敏度太低。
我们用对乙酰氨基苯乙醚作探针，对正常人和慢性乙型肝炎患者进行检测。发现慢性乙型肝炎病人血液中对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，比正常人减少了72％，对乙酰氨基苯乙醚含量比正常人高了1.15倍，而对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值只有正常人的1/7.6。显然，用对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法评价慢性乙型肝炎病人的肝脏功能，方法简单，结果灵敏可靠，具有临床实用价值。
实施例对乙酰氨基苯乙醚用于检测慢性肝损害大鼠的肝脏功能试验40只大鼠，雄性，体重166±20克，购自中科院实验动物中心。随机分成二组，即慢性肝损害模型组和正常对照组，每组20只。模型组腹腔注射四氯化碳橄榄油，配比为1∶6，1-4周注射剂量为0.025毫升/只，5-9周注射剂量为0.05毫升/只。均为隔日一次。正常对照组则隔日注射等体积注射用水。9周后，先禁食12小时，再每鼠尾静脉注射0.6％对乙酰氨基苯乙醚20毫克/公斤，30分钟后，从眼球后静脉取血，置于抗凝管内，-20℃保存。同时，取右肝叶，中性福尔马林固定，常规石腊包埋切片，HE染色，进行组织学分析检查。采用日立-7150生化自动分析仪测定血液生化指标。采用高效液相色谱法测定对乙酰氨基苯乙醚及对乙酰氨基酚含量。采用紫外分光光度法测定血液中对乙酰氨基酚含量。检测数据用单因素方差分析及RIDIT法进行统计分析和显著性检验。结果见表1和表2。
表1慢性肝损害大鼠与正常对照大鼠血液生化指标的检测数据(x±SD，n＝20)
**与正常对照组比，P＜0.01表2对乙酰氨基苯乙醚用于检测慢性肝损害大鼠的肝脏功能(μg/ml，n＝20)
**与正常对照组比，P＜0.01由表1-2可见，与正常对照组比，模型组大鼠肝细胞损害的生化指标ALT、Tbil和γ-GT明显升高，说明四氯化碳造成大鼠肝脏损害。在四氯化碳诱导的慢性肝损害大鼠，虽然与肝脏功能有关的指标AIb和TT无明显改变，但对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量比正常大鼠减少了70％，尤其是对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值，模型组大鼠只有正常对照组的1/17.3。说明对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法是检测慢性肝损害大鼠肝脏功能的一个灵敏指标。
实施例对乙酰氨基苯乙醚用于检测慢性乙型肝炎病人肝脏功能26例慢性乙型肝炎病人，男性20例，女性6例，年龄32±8岁(20-54岁)，符合1995年全国第五届传染病寄生虫病学术会议病毒性肝炎诊断标准。血清乙型肝炎病毒-DNA与乙型肝炎病毒e抗原阳性，血清丙氨酸转氨酶＞40u.L-1，血清胆红素＜50μmol.L-1，总胆红素＜85.5μmol.L-1。所有病人知情同意，无血液系统疾病，无活动性消化性溃疡，无解热镇痛药过敏史。心肾功能正常，近期未使用过细胞色素P450诱导剂与抑制剂。8例健康受试者，男女各半，年龄22-48岁。常规体检正常，近一周内未使用过任何药物。无解热镇痛药过敏史。
所有受试者空腹口服对乙酰氨基苯乙醚0.5克，200毫升温开水服下。2小时后抽静脉血1毫升，置于抗凝管内，-20℃保存。采用高效液相色谱法测定血浆中对乙酰氨基苯乙醚及其氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量，计算对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值，用分组t检验法检验两组间差异的显著性，结果见表3。
表3慢性乙肝病人和健康对照者血液对乙酰氨基苯乙醚与对乙酰氨基酚含量(μg/ml)
**与正常对照组比，P＜0.01由表3可见，在慢性乙型肝炎病人，对乙酰氨基苯乙醚氧位脱乙基代谢产物对乙酰氨基酚含量只有健康受试者的28％，而对乙酰氨基苯乙醚血浓度比正常人高了1.15倍。值得注意的是，以对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值为指标，两组间差别高达7.6倍。说明用对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法检测肝脏功能，比单纯使用对乙酰氨基苯乙醚代谢产物对乙酰氨基酚含量检测肝脏功能更灵敏、可靠。另外，该实验还说明，静脉注射对乙酰氨基苯乙醚后，用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚含量，也能反映肝脏功能的变化，但与高效液相色谱法比，不如用对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯乙醚比值法灵敏。
权利要求
1.对乙酰氨基苯乙醚在制备检测肝脏功能制剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及医用检测试剂技术领域，是对乙酰氨基苯乙醚用于检测肝脏功能的用途。对乙酰氨基苯乙醚是复方阿司匹林等感冒药的主要成分之一，其经肝脏代谢后，生成对乙酰氨基酚。急慢性肝病患者接受对乙酰氨基苯乙醚后，血液中检测到的对乙酰氨基酚明显低于正常人，而对乙酰氨基苯乙醚则明显高于正常人。血液中对乙酰氨基酚与对乙酰氨基苯乙醚两者的比值更能反映患者与正常人肝脏功能的差异。该发明较现有检测肝脏功能的指标灵敏，受干扰因素少，能客观地反映肝脏功能的状态。该发明方法简单，只要在口服或静脉注射对乙酰氨基苯乙醚一定时间后，检测血液中的对乙酰氨基酚和对乙酰氨基苯乙醚的含量，计算对乙酰氨基酚与对乙酰氨基苯乙醚的比值，或者是计算对乙酰氨基苯乙醚与对乙酰氨基酚的比值即可。
文档编号A61B5/145GK1588065SQ200410066858
公开日2005年3月2日 申请日期2004年9月29日 优先权日2004年9月29日
发明者贺平, 李晓冬 申请人:贺平, 杨晓冬
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