一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物的制作方法
专利名称：一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，主要是由甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物，属于药物复方制剂。
背景技术：
在我国，肝脏疾病是常见病和多发病。仅乙型肝炎病毒携带者就高达一亿多人，占我国人口的10％以上。每年有100万新生儿由于母婴垂直转播，可能会感染乙肝病毒。另外，饮酒、药物、环境污染以及自身免疫性疾病也是引起肝损害的常见原因。
肝脏疾病的发病机理极为复杂。目前临床上多采用辩证施治，并加用肝脏疾病辅助治疗药物以提高疗效。但是这些药物的效果不理想，部分病人的预后很差。由于慢性肝损害主要发生在青壮年，一旦转变成肝硬化，除诱发肝癌外，其自身也是一种不可逆转的病理过程，给社会和家庭在经济和精神上造成极大的负担和痛苦。
甘草甜素虽然可以作为治疗肝脏疾病的辅助药物，但长期口服有钠水潴留、高血压和低血钾等严重不良反应。静脉注射给药，因疗程太长，患者难以接受。苦参碱也可用作治疗肝脏疾病的辅助药物，但单独使用疗效不确切，并有利尿等副作用。
发明内容
因此，人们对疗效更好的保护肝脏和防冶肝癌的药物有很大需求。本发明的目的就是提供一种保护肝脏和防冶肝癌的复方制剂。本发明人经过反复研究，并通过动物试验的反复验证，终于找到了有更好疗效保护肝脏和防治肝癌的口服药物，即将甘草甜素和苦参碱组成复方组分，该复方组分能口服给药，并增加其疗效，降低其不良反应。从而完成了本发明。本发明的技术方案是将甘草甜素(glycyrrhizin，分子式C42H62O16)和苦参碱(matrine，分子式C15H24N2O)的含量重量比为甘草甜素苦参碱等于1∶(0.25-4)或苦参碱∶甘草甜素值等于1∶(0.25-4)组成药物组合物。该药物组合物可口服给药，用于保护肝脏、防治肝癌。
甘草甜素结构式苦参碱结构式本发明研究了甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物在保护肝脏中的应用。
醋氨酚肝损害模型是研究和筛选保肝药物最常用的模型方法之一。其机理是中毒量醋氨酚在肝脏CYP450氧化酶作用下，生成活性中间产物，使肝脏还原型谷胱甘肽耗竭，并与生物大分子结合，产生大量TNF-α，引起肝细胞坏死。甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物(以下用《GS》表示)能明显降低中毒量醋氨酚所致的小鼠死亡率，对醋氨酚引起的肝脏还原型谷胱甘肽耗竭也有明显保护作用。该作用不仅与对照组有显著差异，也优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。这一结果表明，《GS》具有明显保护肝脏的作用，其疗效比口服甘草甜素或苦参碱单一成分好。
本发明研究了保护肝脏的甘草甜素和苦参碱的药物组合物复方组分的剂量比。
本发明采用醋氨酚模型，以肝脏还原型谷胱甘肽含量变化为指标，研究了《GS》中甘草甜素与苦参碱的剂量比。实验结果表明，甘草甜素∶苦参碱或苦参碱∶甘草甜素的比值等于1∶(0.25-4)时，对肝脏还原型谷胱甘肽的保护作用明显优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。比值为1∶0.125时，疗效增加不明显。比值为1∶5时，疗效不再增加。
本发明研究了甘草甜素和苦参碱复方组分在防治肝癌中的应用。
二乙基亚硝胺已被证明能诱发人和动物肝脏肿瘤，也是食物和环境中常见的致癌物质。本发明采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝脏癌前期病变，验证了《GS》的防治肝癌作用。结果表明，《GS》除能降低二乙基亚硝胺引起的大鼠肝/体重比增加外，并能明显抑制γ一谷氨酰肽酶阳性灶的个数(个/cm2)，使单位体积的阳性灶面积(mm2/cm3)和阳性灶的平均面积(mm2/个)也明显缩小。说明《GS》不仅能保护肝脏，而且对二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝脏癌前期病变有明显防治作用。《GS》的这一作用也明显优于单独使用甘草甜素或苦参碱单一成分。
实验结果证明，该复方组分不仅可口服给药，而且疗效好，不良反应明显减少。
长期大量口服甘草甜素可引起钠水潴留、高血压和低血钾等严重不良反应，限制了该类药物的临床应用。苦参碱的主要不良反应是利尿排钠。所以，尿量过多的病人不宜选用苦参碱类药物。本发明比较了《GS》与甘草甜素或苦参碱单一成分给药对小鼠尿量、钠、钾和氯离子累积排泄量的影响。发现给予甘草甜素一周后，小鼠9h累积排尿量明显减少，尿液中钾离子含量增加，钠离子含量降低。而《GS》组小鼠，无论尿量，还是钠、钾离子浓度与对照组比，均无显著差异。说明《GS》无潴钠排钾的不良反应。
本发明的另外一个目的是提供了该药物复方制剂的制备方法。
本发明药物可以采用常规方法制备成任何口服制剂。例如可以将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按配比混合均匀制成颗粒剂。可以将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按配比混合均匀加入适量辅料制成片剂。也可以将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按配比混合均匀制成胶囊剂或制成各种缓释制剂。但是这些不能用于限制本发明的保护范围。
本发明研究了甘草甜素和苦参碱组成的复方组分对水及电介质代谢的影响。
本发明将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按1∶0.25、1∶1和1∶4重量比混合，制备片剂、胶囊剂和颗粒剂，考察了这三种不同剂型在常温下6个月和恒温40℃3个月的稳定性。实验结果表明，无论室温下6个月还是恒温40℃3个月，《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的颜色及重量无明显改变。采用高效液相色谱测定甘草甜素和苦参碱含量，结果显示，甘草甜素苦参碱或苦参碱甘草甜素含量比为1∶(0.25-4)时，三种剂型中甘草甜素和苦参碱的降解率均小于5％。说明由《GS》制备的片剂、胶囊剂和颗粒剂稳定性好，符合《中华人民共和国药典》规定。
实验结果证明，该药物组合物不仅可口服给药，而且疗效好，不良反应明显减少。
具体实施例方式
以下通过试验例来进一步阐明本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物的药效学试验和药剂学试验。
试验例1《GS》对醋氨酚所致小鼠肝毒性的保护作用80只昆明种小鼠(购于中科院上海实验动物中心，清洁级)，♀♂兼用，随机分成四组，每组20只。甘草甜素组给予0.1％甘草甜素(连云港正大天晴制药公司，批号980414)25mg/kg，ig；苦参碱组给予0.1％苦参碱(上海第一生化药业公司，批号9804215)25mg/kg，ig；《GS》组给予含甘草甜素和苦参碱各1mg/ml的《GS》0.5ml/20g，ig；对照组给予等量注射用水，ig。上述各组每天给药一次，连续七天。于第七次给药后，腹腔注射2％醋氨酚500mg/kg，观察其48h死亡率。结果见表1。
表1《GS》对醋氨酚致小鼠肝毒性的保护作用(n＝20)组别 死亡数(只)死亡率(％)甘草甜素组1155.0苦参碱组 1260.0《GS》组 6*30.0*对照组1680.0*与对照组比，P＜0.05实验结果表明，《GS》能明显降低中毒量醋氨酚所致的小鼠死亡率，该作用不仅与对照组比有显著差异(P＜0.05)，而且比甘草甜素组和苦参碱组分别提高了25％和30％，说明《GS》的保肝作用明显优于单独使用甘草甜素或苦参碱单一成分。
试验例2《GS》对小鼠尿量及K+、Na+、Cl-累积排泄量的影响40只昆明种小鼠，♀♂兼用，随机分成四组，每组10只。按第一实施例所述剂量和方法处理。于第七次给药后，将小鼠分别置于代谢笼中，收集9h尿液，测定其体积及尿液中K+、Na+、Cl-离子含量。结果见表2。
表2《GS》对小鼠尿量及K+、Na+、Cl-累积排泄量的影响(x±SD，mg，n＝10)组别 尿量 Na+K+Cl-甘草甜素组1.6±0.44*3.2±0.7*8.0±2.619.6±4.3苦参碱组 2.5±0.68 4.6±1.5 6.1±2.017.2±4.2《GS》组 2.2±0.68 4.4±1.3 6.2±2.316.2±5.3对照组2.3±0.59 4.3±1.2 5.8±1.916.8±5.2*与对照组比，P＜0.05实验结果显示，给予甘草甜素一周后，小鼠9h累积排尿量明显减少，尿液中钾离子含量增加，钠离子含量降低。而《GS》组小鼠，无论尿量，还是钠、钾离子浓度与对照组比，均无显著差异。说明《GS》无潴钠排钾的不良反应。
试验例3《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用50只昆明种小鼠，♀♂参半，随机分成5组，每组10只。按第一实施例所述剂量和方法处理。于第七次给药后，甘草甜素组，苦参碱组、《GS》组和模型对照组腹腔注射0.8％醋氨酚200mg/kg，正常对照组给予等量注射用水。45min后，解剖肝脏，测定其还原型谷胱甘肽(GSH)含量，结果见表3。
表3《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用(x±SD，μmol/g肝脏组织，n＝10)组别 肝GSH含量甘草甜素组103.1±21.0苦参碱组 81.7±17.3《GS》组 147.6±32.6**模型对照组41.8±10.4正常对照组244.8±50.6**与甘草甜素组或苦参碱组比，P＜0.01实验结果表明，《GS》对醋氨酚引起的肝脏还原型谷胱甘肽耗竭有明显保护作用，该作用不仅与对照组有显著差异，也优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。
试验例4不同剂量比的《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用180只小鼠，♀♂不限，随机分成18组，每组10只。甘草甜素+苦参碱组共8组，除一组只给甘草甜素25mg/kg，ig外，另外七组同时分别给予苦参碱2.5、5、10、20、40、80、100mg/kg，ig。苦参碱+甘草甜素组也分8组，除一组只给苦参碱25mg/kg；ig外，另外七组同时分别给予甘草甜素2.5、5、10、20、40、80、100mg/kg，ig。于第七次给药后，甘草甜素+苦参碱组、苦参碱+甘草甜素组和模型对照组腹腔注射0.8％醋氨酚200mg/kg，正常对照组给予等量注射用水。45min后，解剖肝脏，测定其还原型GSH含量，结果见表4。
表4不同剂量比的《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用(x±SD，μmol/g肝脏组织，肝GSH含量(GS剂量比mg.kg-1/mg.kg-1)组别(20/0)(20/2.5) (20/5)(20/10)(20/20)(20/40)(20/80) (20/100)甘草甜素90.3± 108.5 117.6 138.1 159.3 178.0 180.7+ 89.1±18.417.6☆☆±20.7*±20.4**±28.3**±32.6**±39.4*±41.3**苦参碱组苦参碱73.4± 90.8 110.4 138.1 164.0 189.5 191.6+ 77.4±16.114.8☆☆±18.2*±21.4**±28.3**±35.6**±43.3**±47.7**甘草甜素组正常对照组 269.0±52.5模型对照组 45.6±8.4△△△△P＜0.01与正常对照组比；☆☆P＜0.01，与模型对照组比；*P＜0.05，**P＜0.01，与甘草甜素或苦参碱单一组分比。
实验结果表明，模型对照组小鼠肝脏还原型GSH含量仅为正常对照组的16.9％，说明本发明建立的醋氨酚肝损害模型是成功的。虽然甘草甜素或苦参碱单一成分对肝脏还原型GSH有保护作用，但其作用强度明显低于甘草甜素和苦参碱组成的复方组分。如表4所示。当甘草甜素苦参碱或苦参碱∶甘草甜素的剂量比等于1∶(0.25-4)时，对肝脏还原型GSH的保护作用明显优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。比值为1∶0.125时，疗效增加不明显。比值为1∶5时，疗效不再增加。
试验例5《GS》对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的防治作用40只Waster大鼠(购于中科院上海实验动物中心，清洁级)，♀♂兼用，随机分成4组，每组10只。适应一周后，按第一实施例所述剂量和方法给药，对照组给予等量注射用水。同时腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)100mg/kg；给予DEN二周后，饲以含0.015％的二乙酰氨基芴(2-AAF)饲料二周。停用2-AAF一周后，行左和中叶肝切除术。术后第三天将大鼠断头处死，解剖肝脏，统一取右肝叶，4℃丙酮∶酒精(1∶1 v/v)固定。参照文献报道的方法测定γ-谷氨酰转肽酶(GGT)阳性灶面灶，然后计算每平方厘米肝切面上GGT阳性灶个数(个/cm2)，面积(mm2/cm3)及灶的平均面积(m2/个)，结果见表5。
表5《GS》对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的防治作用(x±SD，n＝10)肝/体重 GGT阳性情况组别(g/100g)个/cm2mm2/cm3mm2/个对照组3.6±0.625.7±18.14.3±2.80.25±0.21甘草甜素组3.2±0.517.8±11.62.8±1.90.20±0.18苦参碱组 3.7±0.623.4±17.43.8±2.60.24±0.27《GS》组 2.7±0.5* 10.2±4.8** 1.1±0.8* 0.12±0.12**与对照组比，*P＜0.05；**P＜0.01实验结果表明，《GS》除能降低二乙基亚硝胺引起的大鼠肝/体重比增加外，并能明显抑制γ一谷氨酰转肽酶阳性灶的个数(个/cm2)，使单位体积的阳性灶面积(mm2/cm3)和阳性灶的平均面积(mm2/个)也明显缩小。说明《GS》不仅能保护肝脏，而且对二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝脏癌前期病变有明显防治作用。《GS》的这一作用也明显优于单独使用甘草甜素或苦参碱单一成分。
实施例1不同剂量比的《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的制备及其稳定性研究按《中华人民共和国药典》2000年版关于片剂、胶囊剂和颗粒剂的有关规定，首先将甘草甜素(药用原料，由连云港正大天晴制药公司提供)和苦参碱(药用原料，由上海第一生化药业公司提供)分别与药用淀粉制粒，两者使用同一目数的筛网，确保具有较好的均质性。制粒后，按1∶0.25、1∶1和1∶4的含量比常规压片，或制备胶囊剂与颗粒剂。片剂的规格为每片0.3g，甘草甜素∶苦参碱或苦参碱∶甘草甜素＝25mg∶6.25mg、25mg∶25mg和25mg∶100mg。每片误差小于±5％，每板12粒，铝铂包装。胶囊剂为1号胶囊，每粒0.3g，甘草甜素与苦参碱的含量比同片剂，每粒误差小于±7.5％，每板12粒，铝铂包装。颗粒剂的规格是每袋10g，甘草甜素与苦参碱的含量同片剂和胶囊剂。整粒后，采用PVC袋密闭包装，每袋误差小于±7.5％不同剂量比的三种剂型分别生产三批，每批每种6份，分成室温组和40℃加速实验组。室温组置于室内，温度为18-25℃。加速实验组置于40℃恒温箱内，相对湿度为75％。室温组放置6个月，加速实验组放置3个月。界时，精密称量试药，研细后加水，充分震荡。过滤后，置于1000毫升的容量瓶内定容。按文献报道方法，采用高效液相色谱测定甘草甜素和苦参碱含量。结果见表6。
实验结果表明，无论室温下6个月还是恒温40℃3个月，《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的颜色无明显改变，片剂的重量误差小于5％，胶囊剂和颗粒剂的重量误差小于7.5％。采用高效液相色谱测定甘草甜素和苦参碱含量，结果显示，甘草甜素∶苦参碱或苦参碱∶甘草甜素含量比为1∶(0.25-4)时，三种剂型中甘草甜素和苦参碱的降解率均小于5％。说明由《GS》制备的片剂、胶囊剂和颗粒剂稳定性好，符合《中华人民共和国药典》规定。
表6不同剂量《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的稳定性实验(x±SE，n＝9)25mg/6.25mg 25mg/25mg 25mg/100mg室温6个月 60℃3个月 室温6个月 60℃3个月 室温6个月 60℃3个月(甘草甜素+ 24.2±0.5 23.9±0.4 24.0±0.4 23.8±0.4 24.2±0.4 23.8±0.4苦参碱)片/6.1±0.1 /6.0±0.1 /24.3±0.3 /24.0±0.4 /97.1±1.9 /95.8±1.7(苦参碱+甘 24.4±0.4 24.1±0.4 24.5±0.4 24.0±0.4 24.3±0.4 24.0±0.4草甜素)片/6.0±0.1 /5.9±0.1 /23.9±0.5 /23.8±0.4 /97.0±1.9 /95.1±1.7(甘草甜素+ 24.1±0.4 23.7±0.4 24.2±0.4 23.8±0.4 24.0±0.4 23.8±0.4苦参碱)胶囊 /6.1±0.1 /5.9±0.1 /24.3±0.5 /23.9±0.4 /97.2±1.8 /95.8±1.8(苦参碱+甘 24.5±0.4 24.1±0.4 24.3±0.4 24.0±0.4 24.4±0.4 24.1±0.5草甜素)胶囊 /6.0±0.1 /6.0±0.1 /24.1±0.4 /23.8±0.4 /97.7±1.8 /96.3±1.6(甘草甜素+ 24.3±0.4 24.0±0.4 24.1±0.5 24.9±0.4 24.1±0.4 23.9±0.4苦参碱)颗粒 /6.1±0.1 /6.0±0.1 /24.4±0.4 /24.2±0.3 /97.4±1.9 /96.6±1.8(苦参碱+甘 24.4±0.4 24.2±0.4 24.1±0.4 24.0±0.4 24.3±0.4 24.1±0.4草甜素)颗粒 /6.0±0.1 /5.9±0.1 /23.9±0.4 /23.7±0.4 /96.5±1.9 /95.9±1.9
权利要求
1.一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于它主要是由甘草甜素和苦参碱组成的复方制成，其中甘草甜素和苦参碱的含量重量比为甘草甜素∶苦参碱等于1∶(0.25-4)或苦参碱∶甘草甜素等于1∶(0.25-4)。
2.根据权利要求1所述的一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于该药物组合物是口服制剂。
3.根据权利要求1或2所述的一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于该药物组合物的口服剂型为胶囊、片剂或颗粒剂。
4.根据权利要求1或2所述的一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于该药物组合物是采用常规方法来制备成各种口服剂型。
全文摘要
本发明涉及一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，是甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物。现有甘草甜素类药物口服有钠水潴留、高血压和低血钾等严重不良反应。静脉注射，因疗程长，病人难以接受。苦参碱类药物口服给药疗效不确切，并有利尿等副作用。本发明将甘草甜素和苦参碱组成复方组分，其含量比是1∶(0.25～4)。该药物组合物可口服给药，用于保护肝脏、防治肝癌。实验结果证明，该药物组合物不仅疗效好，而且不良反应明显减少。
文档编号A61K31/7028GK1634094SQ20041006749
公开日2005年7月6日 申请日期2004年10月26日 优先权日2004年10月26日
发明者贺平, 李晓冬 申请人:贺平, 李晓冬
技术领域：
本发明涉及一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，主要是由甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物，属于药物复方制剂。
背景技术：
在我国，肝脏疾病是常见病和多发病。仅乙型肝炎病毒携带者就高达一亿多人，占我国人口的10％以上。每年有100万新生儿由于母婴垂直转播，可能会感染乙肝病毒。另外，饮酒、药物、环境污染以及自身免疫性疾病也是引起肝损害的常见原因。
肝脏疾病的发病机理极为复杂。目前临床上多采用辩证施治，并加用肝脏疾病辅助治疗药物以提高疗效。但是这些药物的效果不理想，部分病人的预后很差。由于慢性肝损害主要发生在青壮年，一旦转变成肝硬化，除诱发肝癌外，其自身也是一种不可逆转的病理过程，给社会和家庭在经济和精神上造成极大的负担和痛苦。
甘草甜素虽然可以作为治疗肝脏疾病的辅助药物，但长期口服有钠水潴留、高血压和低血钾等严重不良反应。静脉注射给药，因疗程太长，患者难以接受。苦参碱也可用作治疗肝脏疾病的辅助药物，但单独使用疗效不确切，并有利尿等副作用。
发明内容
因此，人们对疗效更好的保护肝脏和防冶肝癌的药物有很大需求。本发明的目的就是提供一种保护肝脏和防冶肝癌的复方制剂。本发明人经过反复研究，并通过动物试验的反复验证，终于找到了有更好疗效保护肝脏和防治肝癌的口服药物，即将甘草甜素和苦参碱组成复方组分，该复方组分能口服给药，并增加其疗效，降低其不良反应。从而完成了本发明。本发明的技术方案是将甘草甜素(glycyrrhizin，分子式C42H62O16)和苦参碱(matrine，分子式C15H24N2O)的含量重量比为甘草甜素苦参碱等于1∶(0.25-4)或苦参碱∶甘草甜素值等于1∶(0.25-4)组成药物组合物。该药物组合物可口服给药，用于保护肝脏、防治肝癌。
甘草甜素结构式苦参碱结构式本发明研究了甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物在保护肝脏中的应用。
醋氨酚肝损害模型是研究和筛选保肝药物最常用的模型方法之一。其机理是中毒量醋氨酚在肝脏CYP450氧化酶作用下，生成活性中间产物，使肝脏还原型谷胱甘肽耗竭，并与生物大分子结合，产生大量TNF-α，引起肝细胞坏死。甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物(以下用《GS》表示)能明显降低中毒量醋氨酚所致的小鼠死亡率，对醋氨酚引起的肝脏还原型谷胱甘肽耗竭也有明显保护作用。该作用不仅与对照组有显著差异，也优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。这一结果表明，《GS》具有明显保护肝脏的作用，其疗效比口服甘草甜素或苦参碱单一成分好。
本发明研究了保护肝脏的甘草甜素和苦参碱的药物组合物复方组分的剂量比。
本发明采用醋氨酚模型，以肝脏还原型谷胱甘肽含量变化为指标，研究了《GS》中甘草甜素与苦参碱的剂量比。实验结果表明，甘草甜素∶苦参碱或苦参碱∶甘草甜素的比值等于1∶(0.25-4)时，对肝脏还原型谷胱甘肽的保护作用明显优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。比值为1∶0.125时，疗效增加不明显。比值为1∶5时，疗效不再增加。
本发明研究了甘草甜素和苦参碱复方组分在防治肝癌中的应用。
二乙基亚硝胺已被证明能诱发人和动物肝脏肿瘤，也是食物和环境中常见的致癌物质。本发明采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝脏癌前期病变，验证了《GS》的防治肝癌作用。结果表明，《GS》除能降低二乙基亚硝胺引起的大鼠肝/体重比增加外，并能明显抑制γ一谷氨酰肽酶阳性灶的个数(个/cm2)，使单位体积的阳性灶面积(mm2/cm3)和阳性灶的平均面积(mm2/个)也明显缩小。说明《GS》不仅能保护肝脏，而且对二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝脏癌前期病变有明显防治作用。《GS》的这一作用也明显优于单独使用甘草甜素或苦参碱单一成分。
实验结果证明，该复方组分不仅可口服给药，而且疗效好，不良反应明显减少。
长期大量口服甘草甜素可引起钠水潴留、高血压和低血钾等严重不良反应，限制了该类药物的临床应用。苦参碱的主要不良反应是利尿排钠。所以，尿量过多的病人不宜选用苦参碱类药物。本发明比较了《GS》与甘草甜素或苦参碱单一成分给药对小鼠尿量、钠、钾和氯离子累积排泄量的影响。发现给予甘草甜素一周后，小鼠9h累积排尿量明显减少，尿液中钾离子含量增加，钠离子含量降低。而《GS》组小鼠，无论尿量，还是钠、钾离子浓度与对照组比，均无显著差异。说明《GS》无潴钠排钾的不良反应。
本发明的另外一个目的是提供了该药物复方制剂的制备方法。
本发明药物可以采用常规方法制备成任何口服制剂。例如可以将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按配比混合均匀制成颗粒剂。可以将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按配比混合均匀加入适量辅料制成片剂。也可以将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按配比混合均匀制成胶囊剂或制成各种缓释制剂。但是这些不能用于限制本发明的保护范围。
本发明研究了甘草甜素和苦参碱组成的复方组分对水及电介质代谢的影响。
本发明将甘草甜素和苦参碱分别制粒，然后按1∶0.25、1∶1和1∶4重量比混合，制备片剂、胶囊剂和颗粒剂，考察了这三种不同剂型在常温下6个月和恒温40℃3个月的稳定性。实验结果表明，无论室温下6个月还是恒温40℃3个月，《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的颜色及重量无明显改变。采用高效液相色谱测定甘草甜素和苦参碱含量，结果显示，甘草甜素苦参碱或苦参碱甘草甜素含量比为1∶(0.25-4)时，三种剂型中甘草甜素和苦参碱的降解率均小于5％。说明由《GS》制备的片剂、胶囊剂和颗粒剂稳定性好，符合《中华人民共和国药典》规定。
实验结果证明，该药物组合物不仅可口服给药，而且疗效好，不良反应明显减少。
具体实施例方式
以下通过试验例来进一步阐明本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物的药效学试验和药剂学试验。
试验例1《GS》对醋氨酚所致小鼠肝毒性的保护作用80只昆明种小鼠(购于中科院上海实验动物中心，清洁级)，♀♂兼用，随机分成四组，每组20只。甘草甜素组给予0.1％甘草甜素(连云港正大天晴制药公司，批号980414)25mg/kg，ig；苦参碱组给予0.1％苦参碱(上海第一生化药业公司，批号9804215)25mg/kg，ig；《GS》组给予含甘草甜素和苦参碱各1mg/ml的《GS》0.5ml/20g，ig；对照组给予等量注射用水，ig。上述各组每天给药一次，连续七天。于第七次给药后，腹腔注射2％醋氨酚500mg/kg，观察其48h死亡率。结果见表1。
表1《GS》对醋氨酚致小鼠肝毒性的保护作用(n＝20)组别 死亡数(只)死亡率(％)甘草甜素组1155.0苦参碱组 1260.0《GS》组 6*30.0*对照组1680.0*与对照组比，P＜0.05实验结果表明，《GS》能明显降低中毒量醋氨酚所致的小鼠死亡率，该作用不仅与对照组比有显著差异(P＜0.05)，而且比甘草甜素组和苦参碱组分别提高了25％和30％，说明《GS》的保肝作用明显优于单独使用甘草甜素或苦参碱单一成分。
试验例2《GS》对小鼠尿量及K+、Na+、Cl-累积排泄量的影响40只昆明种小鼠，♀♂兼用，随机分成四组，每组10只。按第一实施例所述剂量和方法处理。于第七次给药后，将小鼠分别置于代谢笼中，收集9h尿液，测定其体积及尿液中K+、Na+、Cl-离子含量。结果见表2。
表2《GS》对小鼠尿量及K+、Na+、Cl-累积排泄量的影响(x±SD，mg，n＝10)组别 尿量 Na+K+Cl-甘草甜素组1.6±0.44*3.2±0.7*8.0±2.619.6±4.3苦参碱组 2.5±0.68 4.6±1.5 6.1±2.017.2±4.2《GS》组 2.2±0.68 4.4±1.3 6.2±2.316.2±5.3对照组2.3±0.59 4.3±1.2 5.8±1.916.8±5.2*与对照组比，P＜0.05实验结果显示，给予甘草甜素一周后，小鼠9h累积排尿量明显减少，尿液中钾离子含量增加，钠离子含量降低。而《GS》组小鼠，无论尿量，还是钠、钾离子浓度与对照组比，均无显著差异。说明《GS》无潴钠排钾的不良反应。
试验例3《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用50只昆明种小鼠，♀♂参半，随机分成5组，每组10只。按第一实施例所述剂量和方法处理。于第七次给药后，甘草甜素组，苦参碱组、《GS》组和模型对照组腹腔注射0.8％醋氨酚200mg/kg，正常对照组给予等量注射用水。45min后，解剖肝脏，测定其还原型谷胱甘肽(GSH)含量，结果见表3。
表3《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用(x±SD，μmol/g肝脏组织，n＝10)组别 肝GSH含量甘草甜素组103.1±21.0苦参碱组 81.7±17.3《GS》组 147.6±32.6**模型对照组41.8±10.4正常对照组244.8±50.6**与甘草甜素组或苦参碱组比，P＜0.01实验结果表明，《GS》对醋氨酚引起的肝脏还原型谷胱甘肽耗竭有明显保护作用，该作用不仅与对照组有显著差异，也优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。
试验例4不同剂量比的《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用180只小鼠，♀♂不限，随机分成18组，每组10只。甘草甜素+苦参碱组共8组，除一组只给甘草甜素25mg/kg，ig外，另外七组同时分别给予苦参碱2.5、5、10、20、40、80、100mg/kg，ig。苦参碱+甘草甜素组也分8组，除一组只给苦参碱25mg/kg；ig外，另外七组同时分别给予甘草甜素2.5、5、10、20、40、80、100mg/kg，ig。于第七次给药后，甘草甜素+苦参碱组、苦参碱+甘草甜素组和模型对照组腹腔注射0.8％醋氨酚200mg/kg，正常对照组给予等量注射用水。45min后，解剖肝脏，测定其还原型GSH含量，结果见表4。
表4不同剂量比的《GS》对醋氨酚致小鼠肝脏还原型谷胱甘肽耗竭的保护作用(x±SD，μmol/g肝脏组织，肝GSH含量(GS剂量比mg.kg-1/mg.kg-1)组别(20/0)(20/2.5) (20/5)(20/10)(20/20)(20/40)(20/80) (20/100)甘草甜素90.3± 108.5 117.6 138.1 159.3 178.0 180.7+ 89.1±18.417.6☆☆±20.7*±20.4**±28.3**±32.6**±39.4*±41.3**苦参碱组苦参碱73.4± 90.8 110.4 138.1 164.0 189.5 191.6+ 77.4±16.114.8☆☆±18.2*±21.4**±28.3**±35.6**±43.3**±47.7**甘草甜素组正常对照组 269.0±52.5模型对照组 45.6±8.4△△△△P＜0.01与正常对照组比；☆☆P＜0.01，与模型对照组比；*P＜0.05，**P＜0.01，与甘草甜素或苦参碱单一组分比。
实验结果表明，模型对照组小鼠肝脏还原型GSH含量仅为正常对照组的16.9％，说明本发明建立的醋氨酚肝损害模型是成功的。虽然甘草甜素或苦参碱单一成分对肝脏还原型GSH有保护作用，但其作用强度明显低于甘草甜素和苦参碱组成的复方组分。如表4所示。当甘草甜素苦参碱或苦参碱∶甘草甜素的剂量比等于1∶(0.25-4)时，对肝脏还原型GSH的保护作用明显优于单独使用甘草甜素或单独使用苦参碱。比值为1∶0.125时，疗效增加不明显。比值为1∶5时，疗效不再增加。
试验例5《GS》对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的防治作用40只Waster大鼠(购于中科院上海实验动物中心，清洁级)，♀♂兼用，随机分成4组，每组10只。适应一周后，按第一实施例所述剂量和方法给药，对照组给予等量注射用水。同时腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)100mg/kg；给予DEN二周后，饲以含0.015％的二乙酰氨基芴(2-AAF)饲料二周。停用2-AAF一周后，行左和中叶肝切除术。术后第三天将大鼠断头处死，解剖肝脏，统一取右肝叶，4℃丙酮∶酒精(1∶1 v/v)固定。参照文献报道的方法测定γ-谷氨酰转肽酶(GGT)阳性灶面灶，然后计算每平方厘米肝切面上GGT阳性灶个数(个/cm2)，面积(mm2/cm3)及灶的平均面积(m2/个)，结果见表5。
表5《GS》对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的防治作用(x±SD，n＝10)肝/体重 GGT阳性情况组别(g/100g)个/cm2mm2/cm3mm2/个对照组3.6±0.625.7±18.14.3±2.80.25±0.21甘草甜素组3.2±0.517.8±11.62.8±1.90.20±0.18苦参碱组 3.7±0.623.4±17.43.8±2.60.24±0.27《GS》组 2.7±0.5* 10.2±4.8** 1.1±0.8* 0.12±0.12**与对照组比，*P＜0.05；**P＜0.01实验结果表明，《GS》除能降低二乙基亚硝胺引起的大鼠肝/体重比增加外，并能明显抑制γ一谷氨酰转肽酶阳性灶的个数(个/cm2)，使单位体积的阳性灶面积(mm2/cm3)和阳性灶的平均面积(mm2/个)也明显缩小。说明《GS》不仅能保护肝脏，而且对二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝脏癌前期病变有明显防治作用。《GS》的这一作用也明显优于单独使用甘草甜素或苦参碱单一成分。
实施例1不同剂量比的《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的制备及其稳定性研究按《中华人民共和国药典》2000年版关于片剂、胶囊剂和颗粒剂的有关规定，首先将甘草甜素(药用原料，由连云港正大天晴制药公司提供)和苦参碱(药用原料，由上海第一生化药业公司提供)分别与药用淀粉制粒，两者使用同一目数的筛网，确保具有较好的均质性。制粒后，按1∶0.25、1∶1和1∶4的含量比常规压片，或制备胶囊剂与颗粒剂。片剂的规格为每片0.3g，甘草甜素∶苦参碱或苦参碱∶甘草甜素＝25mg∶6.25mg、25mg∶25mg和25mg∶100mg。每片误差小于±5％，每板12粒，铝铂包装。胶囊剂为1号胶囊，每粒0.3g，甘草甜素与苦参碱的含量比同片剂，每粒误差小于±7.5％，每板12粒，铝铂包装。颗粒剂的规格是每袋10g，甘草甜素与苦参碱的含量同片剂和胶囊剂。整粒后，采用PVC袋密闭包装，每袋误差小于±7.5％不同剂量比的三种剂型分别生产三批，每批每种6份，分成室温组和40℃加速实验组。室温组置于室内，温度为18-25℃。加速实验组置于40℃恒温箱内，相对湿度为75％。室温组放置6个月，加速实验组放置3个月。界时，精密称量试药，研细后加水，充分震荡。过滤后，置于1000毫升的容量瓶内定容。按文献报道方法，采用高效液相色谱测定甘草甜素和苦参碱含量。结果见表6。
实验结果表明，无论室温下6个月还是恒温40℃3个月，《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的颜色无明显改变，片剂的重量误差小于5％，胶囊剂和颗粒剂的重量误差小于7.5％。采用高效液相色谱测定甘草甜素和苦参碱含量，结果显示，甘草甜素∶苦参碱或苦参碱∶甘草甜素含量比为1∶(0.25-4)时，三种剂型中甘草甜素和苦参碱的降解率均小于5％。说明由《GS》制备的片剂、胶囊剂和颗粒剂稳定性好，符合《中华人民共和国药典》规定。
表6不同剂量《GS》片剂、胶囊剂和颗粒剂的稳定性实验(x±SE，n＝9)25mg/6.25mg 25mg/25mg 25mg/100mg室温6个月 60℃3个月 室温6个月 60℃3个月 室温6个月 60℃3个月(甘草甜素+ 24.2±0.5 23.9±0.4 24.0±0.4 23.8±0.4 24.2±0.4 23.8±0.4苦参碱)片/6.1±0.1 /6.0±0.1 /24.3±0.3 /24.0±0.4 /97.1±1.9 /95.8±1.7(苦参碱+甘 24.4±0.4 24.1±0.4 24.5±0.4 24.0±0.4 24.3±0.4 24.0±0.4草甜素)片/6.0±0.1 /5.9±0.1 /23.9±0.5 /23.8±0.4 /97.0±1.9 /95.1±1.7(甘草甜素+ 24.1±0.4 23.7±0.4 24.2±0.4 23.8±0.4 24.0±0.4 23.8±0.4苦参碱)胶囊 /6.1±0.1 /5.9±0.1 /24.3±0.5 /23.9±0.4 /97.2±1.8 /95.8±1.8(苦参碱+甘 24.5±0.4 24.1±0.4 24.3±0.4 24.0±0.4 24.4±0.4 24.1±0.5草甜素)胶囊 /6.0±0.1 /6.0±0.1 /24.1±0.4 /23.8±0.4 /97.7±1.8 /96.3±1.6(甘草甜素+ 24.3±0.4 24.0±0.4 24.1±0.5 24.9±0.4 24.1±0.4 23.9±0.4苦参碱)颗粒 /6.1±0.1 /6.0±0.1 /24.4±0.4 /24.2±0.3 /97.4±1.9 /96.6±1.8(苦参碱+甘 24.4±0.4 24.2±0.4 24.1±0.4 24.0±0.4 24.3±0.4 24.1±0.4草甜素)颗粒 /6.0±0.1 /5.9±0.1 /23.9±0.4 /23.7±0.4 /96.5±1.9 /95.9±1.9
权利要求
1.一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于它主要是由甘草甜素和苦参碱组成的复方制成，其中甘草甜素和苦参碱的含量重量比为甘草甜素∶苦参碱等于1∶(0.25-4)或苦参碱∶甘草甜素等于1∶(0.25-4)。
2.根据权利要求1所述的一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于该药物组合物是口服制剂。
3.根据权利要求1或2所述的一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于该药物组合物的口服剂型为胶囊、片剂或颗粒剂。
4.根据权利要求1或2所述的一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，其特征在于该药物组合物是采用常规方法来制备成各种口服剂型。
全文摘要
本发明涉及一种保护肝脏防治肝癌的药物组合物，是甘草甜素和苦参碱组成的药物组合物。现有甘草甜素类药物口服有钠水潴留、高血压和低血钾等严重不良反应。静脉注射，因疗程长，病人难以接受。苦参碱类药物口服给药疗效不确切，并有利尿等副作用。本发明将甘草甜素和苦参碱组成复方组分，其含量比是1∶(0.25～4)。该药物组合物可口服给药，用于保护肝脏、防治肝癌。实验结果证明，该药物组合物不仅疗效好，而且不良反应明显减少。
文档编号A61K31/7028GK1634094SQ20041006749
公开日2005年7月6日 申请日期2004年10月26日 优先权日2004年10月26日
发明者贺平, 李晓冬 申请人:贺平, 李晓冬
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