含有紫杉碱类或难溶药物的纳米级乳剂的制作方法
专利名称：含有紫杉碱类或难溶药物的纳米级乳剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有紫杉碱类化合物的组合物，其含有紫杉碱类化合物，油、水，表面活性剂和助表面活性剂。本发明的组合物以水包油的乳剂形式使用，且乳制中紫杉碱的粒径为纳米级，故也可称为纳米乳剂。
背景技术：
紫杉醇(paclitaxel，I)作为紫杉碱类化合物的一员，是从红豆杉科红豆属(Taxus)植物中提取、分离得到的一种对治疗多种肿瘤有效的药物。紫杉醇本身几乎不溶于水，所以目前临床所用的制剂如Taxol(美国Bristol-Myers-squibb公司)、Anzatax(澳大利亚Faulding公司)以及国产的紫素、泰素等商品均为I的聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)和乙醇(50∶50(V/V))混合溶液。处方中的Cremophor EL对I有良好的增溶作用，但其毒性很大，会引起体内组胺释放，发生过敏反应；而且会与常用的聚氯乙烯塑料输液器相互作用，浸提其中的增塑剂邻苯二甲酸二辛酯(DEHP)，引起毒性，所以必须改用玻璃或聚乙烯输液器并需预服抗组胺药，这对医师对患者带来了诸多不便。上述市售品在临用前通常需用等渗葡萄糖溶液稀释(9倍)后供静脉滴注用，且滴注时间较长，可达24小时。
紫杉醇制成脂质体后，毒性虽有减小，但其生产成本较高，而且必需制成冻干制剂贮藏，并在用前分散成脂质体方可供用。但无论怎样，目前由于含紫杉碱类化合物制剂的稳定性及安全性问题还没有一种用于滴注的大体积紫杉碱类制剂。
发明内容
因此，迫切需要一种稳定而易于制备的、具有高效生物相容性而毒性作用小的紫杉碱类制剂。本发明的目的是异按并开发新的含紫杉碱类化合物的制剂，该制剂在解决紫杉碱在制剂中溶解度的同时，并明显降低制剂使用时的毒性。
本发明人经研究，现已发明将紫杉碱类化合物与油、水，表面活性剂和助表面活性剂等混合可得到一种紫杉碱类化合物在制剂中有良好生物相容性且所得制剂的毒性又明显降低的制剂。该制剂优选为乳剂形式，并且适用于网状内皮系统肿瘤如肝癌的治疗。
本发明第一方面涉及含紫杉碱或难溶药物的纳米级乳剂，其包含紫杉碱或难溶药物，油、水，表面活性剂，助表面活性剂和稳定剂其中乳剂的粒径为10-100nm。
本发明还步及紫杉碱或难溶药物的纳米级乳剂的制备方法，其包括将紫杉碱或难溶药物与油，表面活性剂，助表面活性，稳定剂及水混合，用高压均质机在冷却下挤压所得混合物成粒径10-100nm的乳剂，所得纳米级乳剂进一步过滤并加热灭菌。
根据本发明，本发明中所用的油可为任何种类的油如矿物油、植物油、动物油、精油，合成油，或其混合物，优选为富含甘油三酯的油，如红花油、大豆油、麻油、茶油、棉子油、中链甘油三酯，它们的混合物或与其它植物油的混合物；所用表面活性剂可为任何表面活性剂，通常为磷脂如大豆磷脂或卵磷脂，Pluronic F68、Tween80，烷基磷酰胆碱，烷基甘油磷酰胆碱，1，3-二烷基甘油磷酰胆碱或它们两种或两种以上的混合物；助表示活性剂可为乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯浣酮、甘油或它们的两种或两种以上混合物。
根据本发明，以乳剂重量计，紫杉碱的用量为约0.05％至约0.1％，油的用量为约1％至30％，表面活性剂的用量为约0.5％至约5％，助表面活性剂的用量为约0.5％至5％。
如果需要，组合物中还可加入渗透压调节剂以调节渗透压到280至320毫渗透压摩尔每升(mos/L)，举例讲，渗透压调节剂可为甘油，木糖醇，葡萄糖，甘露醇，乳酸林格氐液或它们的混合物。渗透压调节剂以乳剂重量计，通常为0.5至5％。
根据本发明，乳剂中还可含甾醇如胆固醇或长链(C14-C22)醇的增溶剂，其用量以乳剂重量计，约为0.1至1％。
根据本发明，本发明中紫杉碱意指包括名称如“紫杉烷”的各种形式。举例讲，紫杉碱可包括但不限于紫杉醇，紫杉醚，司匹卡亭，紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-，环9，10-缩丙酮乙酸酯；紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-环9，10-缩丙酮；紫杉烷-2β，5β，9β，10β-四醇，环9，10-缩丙酮；紫杉烷；三尖杉宁碱-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰三尘杉宁碱；10-去乙酰三尖杉宁碱；三尖杉宁碱；紫杉醇B；13-(2’，3’一二羟基-3’-苯基丙酰基)浆果赤霉素III；云南红豆杉醇(yunnanxol)；7-(4-叠氮苯酰基)浆果霉素III；N-去苯酰基紫极醇A；O-乙酰基浆果赤霉素IV；7-(三乙硅烷基)浆果赤霉素III；7，10-双-O-[(2，2，2-三氯乙氧基)羰基]浆果赤霉素III；浆果赤霉素III 13-O-乙酸酯；浆果赤霉素二乙酸酯；浆果赤霉素；浆果赤霉素VII；浆果赤霉素VI；浆果赤霉素IV；7-表-浆果赤霉素；浆果赤霉素V；浆果赤霉素I，浆果赤霉素III；浆果赤霉素A；10-去乙酰-7-表紫杉醇；表紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇C；7-木糖酰-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇和10-去乙酰紫杉醇B等紫杉醇同系物。
本发明所述的难溶性药物，举例讲如多烯紫杉醇、羟基喜树碱、鬼臼乙叉甙、榄香烯、鸦胆子油、香葵油、三尖杉酯碱、替尼泊苷、环孢菌素、甲氨喋呤、丝裂霉素、维A酸等。
根据本发明，本发明乳剂中还可含有稳定剂，举例讲如HP-βCD、枸橼酸、EDTA-2Na，VE、BHT、BHA、浸食子丙酸、抗坏血酸或棕榈酸酯。稳定剂含量以乳剂重量计为0.1％-5.0％。
根据本发明，本发明乳剂的PH为4.5-7.0，优选为5。本发明乳剂可以50ml，100ml，150ml，200ml，250ml或500ml规格使用。
根据本发明，本发明乳剂的制备举例讲描述为将紫杉醇、豆磷脂、胆固醇，在加热通氮条件下，共溶于油中，冷至室温与溶有甘油等物质的水溶液混合搅匀成水包油初乳，再通过高压匀质机冷却挤压成纳米级乳剂；亦可将紫杉醇先溶于适量乙醇(或异丙醇)或乙醚中，再加磷脂、胆固醇熔解，加注射用油混匀，置旋转蒸发仪上减压或通氮除去醇或乙醚，再与溶有甘油等物质的水溶液混合搅匀成水包油初乳，再通过高压匀质机冷却挤压成纳米级乳剂(高压匀质过程要保持冷却，以免活性成份在水性介质中高温时降解)，经0.22μm微孔滤膜滤过后灌装于输液瓶内，通氮加塞轧盖后100℃10-15分钟灭菌。
具体实施方案下面的实施例用来进一步说明本发明，但其不意味着对本发明的任何限制。
实施例1 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 5％豆磷脂 2％VE 0.1％丙二醇 1％甘油 2.5％0.003％EDTA-2Na注射用水溶液加至100％将豆磷脂、VE、大豆油、在通N2，搅拌条件下加热溶解，再加紫杉醇溶解后放冷为油相，另将丙二醇、甘油与0.003％EDTA-2Na注射用水溶液混匀为水相，将油水两相搅拌成初乳后，用高压匀质机(Mcrofluidizer)制成紫杉醇的纳米级乳剂，以0.22μm滤膜过滤，分装于50ml-500ml的输液瓶内，通N2，加塞压盖后经100℃10-15分钟灭菌即可。
实施例2 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 2.5％
中链三甘油酯(MCT) 2.5％注射用豆磷酯 2％VE0.1％PEG4001％甘油 2.5％注射用水加至 10％将紫杉醇、大豆油、MCT、豆磷脂、VE用适量乙醇溶解后，用旋转蒸发仪器除乙醇得油相，将PEG400、甘油与注射用水混匀得水相，随后操作同例1。
实施例3 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用红花油 5％注射用豆磷酯 2％Pluronic F68 0.1％VE0.1％甘油 2.5％乙醇 1％注射用水加至 100％制法同实施例例1实施例4 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用红花油 5％注射用豆磷酯 2％
Tween80 0.1％VE0.5％甘油 2.5％丙二醇1％注射用水加至 100％制法同实施例2实施例5 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用大豆油 2.5％中链三甘油酯(MCT 2.5％注射用豆磷脂 2％VE0.1％Pluronic F68 0.1％胆固醇0.67％PVP 1％甘油 2.5％注射用水加至 100％制法同实施例1实施例6 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用红花油 5％注射用豆磷酯 2％VE0.1％
Pluronic F68 0.1％乙醇 1％HP-β-CD 1％甘油 2.5％注射用水加至 100％制法同实施例1生物活性实施例紫杉醇纳米乳的主要药效学研究结果表明静注(5、10mg/kg)对大鼠移植瘤肉瘤180(S180)、艾氏癌实体型(EC)的肿瘤生长具有明显的抑制作用(P＜0.01＝，且对大鼠的体重无影响；静注(10mg/kg)对大鼠移植瘤肝癌实体型(Heps)的肿瘤生长具有明显的抑制作用(P＜0.01，P＜0.05＝，而相同剂量的市售的泰素(四川太极制药有限公司，批号(020203)对Heps肿瘤的生长无显著抑制作用(P＞0.05)。紫杉醇纳米乳静脉给药10mg/kg对人乳腺癌的MDA-MB-435裸大鼠移植瘤有明显的生长和抑制作用，与市售品，作用相当。紫杉醇纳米乳各组无明显毒性反应，而市售品各组有一定的毒性反应，表现为大鼠体重减轻。
紫杉醇纳米乳小鼠的急性毒性实验结果表明在最大给药容量(0.4ml/20g/次)和最大给药浓度(3mg/ml)条件下，小鼠静注的最大给药量为120mg/kg(给药后观察14天，小鼠未出现死亡和任何毒副作用，体重皆有所增加)，而文献报道紫杉醇注射液的LD50为33.0mg/kg/d，故可认为紫杉纳米乳比紫杉醇注射液(市售品)具有较低的毒性。
结果见表1至表5紫杉醇纳米乳灭菌前后的粒径变化不大(用Malvern粒度测定仪测定)，实施例1-6的本发明紫杉醇纳米乳剂放置稳定性较好见表1。
表1
表2 实施例乳剂iv对小鼠移植瘤EC的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.05**p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较表3实施例1乳剂iv对小鼠移植瘤Siao的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.05**p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较表4ip实施例1乳剂对Heps腹水型小鼠延长作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较表5ip实施例1乳剂对S180腹水型小鼠生命延长作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较小鼠急性毒性实验研究结果表明实施例1-6乳剂小鼠iv最大给药剂量为120mg/kg，动物未见明显毒性症状，文献报道(魏昌华，姚春芳 新型抗癌药-紫杉醇 中国药学杂志，1996，31(5)259-263)紫杉醇注射液的LD50为33.0mg/kg/d，本实验结果表明，实施例1-6乳剂小鼠iv LD50大于120mg/kg为紫杉醇注射液的LD50的四倍，实施例1-6乳剂比紫杉醇注射液的急性毒性降低。
大鼠iv不同剂型紫杉醇毒性比较实验结果表明本发明紫杉醇纳米乳剂(8，4mg/kg)组与相同剂量紫杉醇商品注射液组相比对大鼠有核细胞骨髓增生抑制作用均有明显减轻(p＜0.01；紫杉醇商品注射液(8mg/kg)组iv给药后8d大鼠体重明显减轻(p＜0.01；而相同剂量本发明紫杉醇纳米乳剂对大氧体重未见明显减轻(p＜0.05；紫杉醇商品注射液(8mg/kg)组iv给药后8d、18d时脾、淋巴结、十二指肠、胸腺有病理组织学改变，与对照组相比紫杉醇商品注射液(8mg/kg)组给药后18d肝病理组织学有明显改变(p＜0.05，而相同剂量本发明紫杉醇纳米乳剂组病理组织形态好于商品注射液组。
权利要求
1.含紫杉碱类化合物或难溶药物的纳米乳剂，其包括以乳剂重量计，0.05％-0.1％的紫杉碱类化合物或难溶药物，1％-30％的油，0.5％-5％的表面活性剂，0.5％-5％的助表面活性剂及水，其中乳剂的粒径平均为10-100nm。
2.权利要求1的乳剂，其中紫杉碱类化合物选自紫杉醇，紫杉醚，司匹卡亭，紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-，环9，10-缩丙酮乙酸酯；紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-环9，10-缩丙酮；紫杉烷-2β，5β，9β，10β-四醇，环9，10-缩丙酮；紫杉烷；三尖杉宁碱-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰三尘杉宁碱；10-去乙酰三尖杉宁碱；三尖杉宁碱；紫杉醇B；13-(2’，3’一二羟基-3’-苯基丙酰基)浆果赤霉素III；云南红豆杉醇(yunnanxol)；7-(4-叠氮苯酰基)浆果霉素III；N-去苯酰基紫杉醇A；O-乙酰基浆果赤霉素IV；7-(三乙硅烷基)浆果赤霉素III；7，10-双-O-[(2，2，2-三氯乙氧基)羰基]浆果赤霉素III；浆果赤霉素III 13-O-乙酸酯；浆果赤霉素二乙酸酯；浆果赤霉素；浆果赤霉素VII；浆果赤霉素VI；浆果赤霉素IV；7-表-浆果赤霉素；浆果赤霉素V；浆果赤霉素I，浆果赤霉素III；浆果赤霉素A；10-去乙酰-7-表紫杉醇；表紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇C；7-木糖酰-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇和10-去乙酰紫杉醇B等紫杉醇同系物。难溶药物选自多烯紫杉醇、羟基喜树碱、鬼臼乙叉甙、榄香烯、鸦胆子油、香葵油、三尖杉酯碱、替尼泊苷、环孢菌素、甲氨喋呤、丝裂霉素、维A酸等。
3.权利要求1或2的乳剂，其中所述油选自矿物油、植物油、动物油、精油，合成油，或其混合物，优选为富含甘油三酯的油，如红花油、大豆油、麻油、茶油、棉子油、中链甘油三酯，它们的混合物或与其它植物油的混合物，所述表面活性剂选自任何表面活性剂，通常为磷脂如大豆磷脂或卵磷脂，Pluronic F68、Tween80，烷基磷酰胆碱，烷基甘油磷酰胆碱，1，3-二烷基甘油磷酰胆碱或它们两种或两种以上的混合物，所述助表面活性剂选自乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甘油或它们的两种或两种以上混合物。
4.权利要求3的乳剂，其中所述乳剂还包括0.1％-5％选自HP-βCD、枸橼酸、EDTA-2Na，VE、BHT、BHA、浸食子丙酸、抗坏血酸或棕榈酸酯的稳定剂和/或0.5％-5％选自甘油，木糖醇，葡萄糖，甘露醇，乳酸林格氐液或它们的混合物的渗透压调节剂和/或0.1％-1％选自甾醇如胆固醇或长链(C14-C22)醇的增溶剂。
5.权利要求1-4任一要求的乳剂，其中所述乳剂的PH为4.5-7.0。
6.权利要求5的乳剂，其中所述乳剂PH为5.0。
7.权利要求1-6任一要求的乳剂，其中所述乳剂的单位规格或体积为50ml，100ml，150ml，200ml，250ml或500ml。
8.权利要求7的乳剂，其中所述乳剂组成为成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 5％豆磷脂 2％VE 0.1％丙二醇 1％甘油 2.5％0.003％EDTA-2Na注射用水溶液加至100％
9.权利要求7的乳剂，其中所述乳剂组成为成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 2.5％中链三甘油酯(MCT) 2.5％注射用豆磷酯 2％VE 0.1％PEG4001％甘油 2.5％注射用水 加至100％
10.含紫杉碱类化合物或难溶药物的纳米级乳剂的制备方法，其包括将紫杉碱或难溶药物与油，表面活性剂，助表面活性及水混合，用高压均质机在冷却下挤压所得混合物成粒径10-100nm的乳剂，所得纳米级乳剂进一步过滤并加热灭菌。
全文摘要
本发明涉及含有紫杉碱类化合物的组合物，其含有紫杉碱类化合物，油、水，表面活性剂，助表面活性剂，稳定剂和渗透压调节剂。本发明的组合物以水包油的乳剂形式使用，且乳制中紫杉碱的粒径为纳米级，故也可称为纳米乳剂。
文档编号A61K31/337GK1676125SQ20041006836
公开日2005年10月5日 申请日期2004年8月31日 优先权日2004年3月31日
发明者张钧寿 申请人:张昊
技术领域：
本发明涉及含有紫杉碱类化合物的组合物，其含有紫杉碱类化合物，油、水，表面活性剂和助表面活性剂。本发明的组合物以水包油的乳剂形式使用，且乳制中紫杉碱的粒径为纳米级，故也可称为纳米乳剂。
背景技术：
紫杉醇(paclitaxel，I)作为紫杉碱类化合物的一员，是从红豆杉科红豆属(Taxus)植物中提取、分离得到的一种对治疗多种肿瘤有效的药物。紫杉醇本身几乎不溶于水，所以目前临床所用的制剂如Taxol(美国Bristol-Myers-squibb公司)、Anzatax(澳大利亚Faulding公司)以及国产的紫素、泰素等商品均为I的聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)和乙醇(50∶50(V/V))混合溶液。处方中的Cremophor EL对I有良好的增溶作用，但其毒性很大，会引起体内组胺释放，发生过敏反应；而且会与常用的聚氯乙烯塑料输液器相互作用，浸提其中的增塑剂邻苯二甲酸二辛酯(DEHP)，引起毒性，所以必须改用玻璃或聚乙烯输液器并需预服抗组胺药，这对医师对患者带来了诸多不便。上述市售品在临用前通常需用等渗葡萄糖溶液稀释(9倍)后供静脉滴注用，且滴注时间较长，可达24小时。
紫杉醇制成脂质体后，毒性虽有减小，但其生产成本较高，而且必需制成冻干制剂贮藏，并在用前分散成脂质体方可供用。但无论怎样，目前由于含紫杉碱类化合物制剂的稳定性及安全性问题还没有一种用于滴注的大体积紫杉碱类制剂。
发明内容
因此，迫切需要一种稳定而易于制备的、具有高效生物相容性而毒性作用小的紫杉碱类制剂。本发明的目的是异按并开发新的含紫杉碱类化合物的制剂，该制剂在解决紫杉碱在制剂中溶解度的同时，并明显降低制剂使用时的毒性。
本发明人经研究，现已发明将紫杉碱类化合物与油、水，表面活性剂和助表面活性剂等混合可得到一种紫杉碱类化合物在制剂中有良好生物相容性且所得制剂的毒性又明显降低的制剂。该制剂优选为乳剂形式，并且适用于网状内皮系统肿瘤如肝癌的治疗。
本发明第一方面涉及含紫杉碱或难溶药物的纳米级乳剂，其包含紫杉碱或难溶药物，油、水，表面活性剂，助表面活性剂和稳定剂其中乳剂的粒径为10-100nm。
本发明还步及紫杉碱或难溶药物的纳米级乳剂的制备方法，其包括将紫杉碱或难溶药物与油，表面活性剂，助表面活性，稳定剂及水混合，用高压均质机在冷却下挤压所得混合物成粒径10-100nm的乳剂，所得纳米级乳剂进一步过滤并加热灭菌。
根据本发明，本发明中所用的油可为任何种类的油如矿物油、植物油、动物油、精油，合成油，或其混合物，优选为富含甘油三酯的油，如红花油、大豆油、麻油、茶油、棉子油、中链甘油三酯，它们的混合物或与其它植物油的混合物；所用表面活性剂可为任何表面活性剂，通常为磷脂如大豆磷脂或卵磷脂，Pluronic F68、Tween80，烷基磷酰胆碱，烷基甘油磷酰胆碱，1，3-二烷基甘油磷酰胆碱或它们两种或两种以上的混合物；助表示活性剂可为乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯浣酮、甘油或它们的两种或两种以上混合物。
根据本发明，以乳剂重量计，紫杉碱的用量为约0.05％至约0.1％，油的用量为约1％至30％，表面活性剂的用量为约0.5％至约5％，助表面活性剂的用量为约0.5％至5％。
如果需要，组合物中还可加入渗透压调节剂以调节渗透压到280至320毫渗透压摩尔每升(mos/L)，举例讲，渗透压调节剂可为甘油，木糖醇，葡萄糖，甘露醇，乳酸林格氐液或它们的混合物。渗透压调节剂以乳剂重量计，通常为0.5至5％。
根据本发明，乳剂中还可含甾醇如胆固醇或长链(C14-C22)醇的增溶剂，其用量以乳剂重量计，约为0.1至1％。
根据本发明，本发明中紫杉碱意指包括名称如“紫杉烷”的各种形式。举例讲，紫杉碱可包括但不限于紫杉醇，紫杉醚，司匹卡亭，紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-，环9，10-缩丙酮乙酸酯；紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-环9，10-缩丙酮；紫杉烷-2β，5β，9β，10β-四醇，环9，10-缩丙酮；紫杉烷；三尖杉宁碱-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰三尘杉宁碱；10-去乙酰三尖杉宁碱；三尖杉宁碱；紫杉醇B；13-(2’，3’一二羟基-3’-苯基丙酰基)浆果赤霉素III；云南红豆杉醇(yunnanxol)；7-(4-叠氮苯酰基)浆果霉素III；N-去苯酰基紫极醇A；O-乙酰基浆果赤霉素IV；7-(三乙硅烷基)浆果赤霉素III；7，10-双-O-[(2，2，2-三氯乙氧基)羰基]浆果赤霉素III；浆果赤霉素III 13-O-乙酸酯；浆果赤霉素二乙酸酯；浆果赤霉素；浆果赤霉素VII；浆果赤霉素VI；浆果赤霉素IV；7-表-浆果赤霉素；浆果赤霉素V；浆果赤霉素I，浆果赤霉素III；浆果赤霉素A；10-去乙酰-7-表紫杉醇；表紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇C；7-木糖酰-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇和10-去乙酰紫杉醇B等紫杉醇同系物。
本发明所述的难溶性药物，举例讲如多烯紫杉醇、羟基喜树碱、鬼臼乙叉甙、榄香烯、鸦胆子油、香葵油、三尖杉酯碱、替尼泊苷、环孢菌素、甲氨喋呤、丝裂霉素、维A酸等。
根据本发明，本发明乳剂中还可含有稳定剂，举例讲如HP-βCD、枸橼酸、EDTA-2Na，VE、BHT、BHA、浸食子丙酸、抗坏血酸或棕榈酸酯。稳定剂含量以乳剂重量计为0.1％-5.0％。
根据本发明，本发明乳剂的PH为4.5-7.0，优选为5。本发明乳剂可以50ml，100ml，150ml，200ml，250ml或500ml规格使用。
根据本发明，本发明乳剂的制备举例讲描述为将紫杉醇、豆磷脂、胆固醇，在加热通氮条件下，共溶于油中，冷至室温与溶有甘油等物质的水溶液混合搅匀成水包油初乳，再通过高压匀质机冷却挤压成纳米级乳剂；亦可将紫杉醇先溶于适量乙醇(或异丙醇)或乙醚中，再加磷脂、胆固醇熔解，加注射用油混匀，置旋转蒸发仪上减压或通氮除去醇或乙醚，再与溶有甘油等物质的水溶液混合搅匀成水包油初乳，再通过高压匀质机冷却挤压成纳米级乳剂(高压匀质过程要保持冷却，以免活性成份在水性介质中高温时降解)，经0.22μm微孔滤膜滤过后灌装于输液瓶内，通氮加塞轧盖后100℃10-15分钟灭菌。
具体实施方案下面的实施例用来进一步说明本发明，但其不意味着对本发明的任何限制。
实施例1 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 5％豆磷脂 2％VE 0.1％丙二醇 1％甘油 2.5％0.003％EDTA-2Na注射用水溶液加至100％将豆磷脂、VE、大豆油、在通N2，搅拌条件下加热溶解，再加紫杉醇溶解后放冷为油相，另将丙二醇、甘油与0.003％EDTA-2Na注射用水溶液混匀为水相，将油水两相搅拌成初乳后，用高压匀质机(Mcrofluidizer)制成紫杉醇的纳米级乳剂，以0.22μm滤膜过滤，分装于50ml-500ml的输液瓶内，通N2，加塞压盖后经100℃10-15分钟灭菌即可。
实施例2 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 2.5％
中链三甘油酯(MCT) 2.5％注射用豆磷酯 2％VE0.1％PEG4001％甘油 2.5％注射用水加至 10％将紫杉醇、大豆油、MCT、豆磷脂、VE用适量乙醇溶解后，用旋转蒸发仪器除乙醇得油相，将PEG400、甘油与注射用水混匀得水相，随后操作同例1。
实施例3 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用红花油 5％注射用豆磷酯 2％Pluronic F68 0.1％VE0.1％甘油 2.5％乙醇 1％注射用水加至 100％制法同实施例例1实施例4 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用红花油 5％注射用豆磷酯 2％
Tween80 0.1％VE0.5％甘油 2.5％丙二醇1％注射用水加至 100％制法同实施例2实施例5 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用大豆油 2.5％中链三甘油酯(MCT 2.5％注射用豆磷脂 2％VE0.1％Pluronic F68 0.1％胆固醇0.67％PVP 1％甘油 2.5％注射用水加至 100％制法同实施例1实施例6 紫杉醇的纳米级乳剂成份 W/V％紫杉醇0.1％注射用红花油 5％注射用豆磷酯 2％VE0.1％
Pluronic F68 0.1％乙醇 1％HP-β-CD 1％甘油 2.5％注射用水加至 100％制法同实施例1生物活性实施例紫杉醇纳米乳的主要药效学研究结果表明静注(5、10mg/kg)对大鼠移植瘤肉瘤180(S180)、艾氏癌实体型(EC)的肿瘤生长具有明显的抑制作用(P＜0.01＝，且对大鼠的体重无影响；静注(10mg/kg)对大鼠移植瘤肝癌实体型(Heps)的肿瘤生长具有明显的抑制作用(P＜0.01，P＜0.05＝，而相同剂量的市售的泰素(四川太极制药有限公司，批号(020203)对Heps肿瘤的生长无显著抑制作用(P＞0.05)。紫杉醇纳米乳静脉给药10mg/kg对人乳腺癌的MDA-MB-435裸大鼠移植瘤有明显的生长和抑制作用，与市售品，作用相当。紫杉醇纳米乳各组无明显毒性反应，而市售品各组有一定的毒性反应，表现为大鼠体重减轻。
紫杉醇纳米乳小鼠的急性毒性实验结果表明在最大给药容量(0.4ml/20g/次)和最大给药浓度(3mg/ml)条件下，小鼠静注的最大给药量为120mg/kg(给药后观察14天，小鼠未出现死亡和任何毒副作用，体重皆有所增加)，而文献报道紫杉醇注射液的LD50为33.0mg/kg/d，故可认为紫杉纳米乳比紫杉醇注射液(市售品)具有较低的毒性。
结果见表1至表5紫杉醇纳米乳灭菌前后的粒径变化不大(用Malvern粒度测定仪测定)，实施例1-6的本发明紫杉醇纳米乳剂放置稳定性较好见表1。
表1
表2 实施例乳剂iv对小鼠移植瘤EC的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.05**p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较表3实施例1乳剂iv对小鼠移植瘤Siao的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.05**p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较表4ip实施例1乳剂对Heps腹水型小鼠延长作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较表5ip实施例1乳剂对S180腹水型小鼠生命延长作用(X±SD)(n＝10)
*p＜0.01与5％葡萄糖注射液对照组比较小鼠急性毒性实验研究结果表明实施例1-6乳剂小鼠iv最大给药剂量为120mg/kg，动物未见明显毒性症状，文献报道(魏昌华，姚春芳 新型抗癌药-紫杉醇 中国药学杂志，1996，31(5)259-263)紫杉醇注射液的LD50为33.0mg/kg/d，本实验结果表明，实施例1-6乳剂小鼠iv LD50大于120mg/kg为紫杉醇注射液的LD50的四倍，实施例1-6乳剂比紫杉醇注射液的急性毒性降低。
大鼠iv不同剂型紫杉醇毒性比较实验结果表明本发明紫杉醇纳米乳剂(8，4mg/kg)组与相同剂量紫杉醇商品注射液组相比对大鼠有核细胞骨髓增生抑制作用均有明显减轻(p＜0.01；紫杉醇商品注射液(8mg/kg)组iv给药后8d大鼠体重明显减轻(p＜0.01；而相同剂量本发明紫杉醇纳米乳剂对大氧体重未见明显减轻(p＜0.05；紫杉醇商品注射液(8mg/kg)组iv给药后8d、18d时脾、淋巴结、十二指肠、胸腺有病理组织学改变，与对照组相比紫杉醇商品注射液(8mg/kg)组给药后18d肝病理组织学有明显改变(p＜0.05，而相同剂量本发明紫杉醇纳米乳剂组病理组织形态好于商品注射液组。
权利要求
1.含紫杉碱类化合物或难溶药物的纳米乳剂，其包括以乳剂重量计，0.05％-0.1％的紫杉碱类化合物或难溶药物，1％-30％的油，0.5％-5％的表面活性剂，0.5％-5％的助表面活性剂及水，其中乳剂的粒径平均为10-100nm。
2.权利要求1的乳剂，其中紫杉碱类化合物选自紫杉醇，紫杉醚，司匹卡亭，紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-，环9，10-缩丙酮乙酸酯；紫杉烷-2，13-二酮，5β，9β，10β-三羟基-环9，10-缩丙酮；紫杉烷-2β，5β，9β，10β-四醇，环9，10-缩丙酮；紫杉烷；三尖杉宁碱-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰三尘杉宁碱；10-去乙酰三尖杉宁碱；三尖杉宁碱；紫杉醇B；13-(2’，3’一二羟基-3’-苯基丙酰基)浆果赤霉素III；云南红豆杉醇(yunnanxol)；7-(4-叠氮苯酰基)浆果霉素III；N-去苯酰基紫杉醇A；O-乙酰基浆果赤霉素IV；7-(三乙硅烷基)浆果赤霉素III；7，10-双-O-[(2，2，2-三氯乙氧基)羰基]浆果赤霉素III；浆果赤霉素III 13-O-乙酸酯；浆果赤霉素二乙酸酯；浆果赤霉素；浆果赤霉素VII；浆果赤霉素VI；浆果赤霉素IV；7-表-浆果赤霉素；浆果赤霉素V；浆果赤霉素I，浆果赤霉素III；浆果赤霉素A；10-去乙酰-7-表紫杉醇；表紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇C；7-木糖酰-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇-7-木糖苷；7-表-10-去乙酰紫杉醇；10-去乙酰紫杉醇和10-去乙酰紫杉醇B等紫杉醇同系物。难溶药物选自多烯紫杉醇、羟基喜树碱、鬼臼乙叉甙、榄香烯、鸦胆子油、香葵油、三尖杉酯碱、替尼泊苷、环孢菌素、甲氨喋呤、丝裂霉素、维A酸等。
3.权利要求1或2的乳剂，其中所述油选自矿物油、植物油、动物油、精油，合成油，或其混合物，优选为富含甘油三酯的油，如红花油、大豆油、麻油、茶油、棉子油、中链甘油三酯，它们的混合物或与其它植物油的混合物，所述表面活性剂选自任何表面活性剂，通常为磷脂如大豆磷脂或卵磷脂，Pluronic F68、Tween80，烷基磷酰胆碱，烷基甘油磷酰胆碱，1，3-二烷基甘油磷酰胆碱或它们两种或两种以上的混合物，所述助表面活性剂选自乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甘油或它们的两种或两种以上混合物。
4.权利要求3的乳剂，其中所述乳剂还包括0.1％-5％选自HP-βCD、枸橼酸、EDTA-2Na，VE、BHT、BHA、浸食子丙酸、抗坏血酸或棕榈酸酯的稳定剂和/或0.5％-5％选自甘油，木糖醇，葡萄糖，甘露醇，乳酸林格氐液或它们的混合物的渗透压调节剂和/或0.1％-1％选自甾醇如胆固醇或长链(C14-C22)醇的增溶剂。
5.权利要求1-4任一要求的乳剂，其中所述乳剂的PH为4.5-7.0。
6.权利要求5的乳剂，其中所述乳剂PH为5.0。
7.权利要求1-6任一要求的乳剂，其中所述乳剂的单位规格或体积为50ml，100ml，150ml，200ml，250ml或500ml。
8.权利要求7的乳剂，其中所述乳剂组成为成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 5％豆磷脂 2％VE 0.1％丙二醇 1％甘油 2.5％0.003％EDTA-2Na注射用水溶液加至100％
9.权利要求7的乳剂，其中所述乳剂组成为成份 W/V％紫杉醇 0.1％注射用大豆油 2.5％中链三甘油酯(MCT) 2.5％注射用豆磷酯 2％VE 0.1％PEG4001％甘油 2.5％注射用水 加至100％
10.含紫杉碱类化合物或难溶药物的纳米级乳剂的制备方法，其包括将紫杉碱或难溶药物与油，表面活性剂，助表面活性及水混合，用高压均质机在冷却下挤压所得混合物成粒径10-100nm的乳剂，所得纳米级乳剂进一步过滤并加热灭菌。
全文摘要
本发明涉及含有紫杉碱类化合物的组合物，其含有紫杉碱类化合物，油、水，表面活性剂，助表面活性剂，稳定剂和渗透压调节剂。本发明的组合物以水包油的乳剂形式使用，且乳制中紫杉碱的粒径为纳米级，故也可称为纳米乳剂。
文档编号A61K31/337GK1676125SQ20041006836
公开日2005年10月5日 申请日期2004年8月31日 优先权日2004年3月31日
发明者张钧寿 申请人:张昊
最新回复(0)