越鞠胶囊的制备工艺及质量控制方法
专利名称：越鞠胶囊的制备工艺及质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药的药物组合物的胶囊剂的制备工艺、质量控制方法及新用途，特别是涉及一种越鞠组合物的胶囊剂的制备工艺、质量控制方法及新用途。
背景技术：
越鞠丸收载于《中华人民共和国药典》2000年版一部P598。该方为水泛丸剂，原工艺为“以上五味，粉碎为细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥，即得”用法与用量为“口服，一次6～9g，一日2次”，功能主治为“理气解郁，宽胸除满。用于胸脘痞闷，腹中胀满，饮食停滞，嗳气吞酸。”水泛丸为中药的一种常见剂型，在过去发挥了很大的作用，但其弊端也十分明显。水泛丸服用剂量大，微生物控制困难，稳定性差是该剂型的通病。对于该处方而言，水泛丸具有以下不足1.该处方大多数药物含有挥发性成分，水泛丸对这一类成分的保存不利。2.该处方服用量较大，最大为18g生药/日，对于抑郁症患者而言，服用量大会带来治疗上医从性的困难。3.处方中六神曲由多味药物及面粉与麦麸发酵制成，直接入药，在储存及运输过程中微生物不易控制，尤其是霉菌，不符合现代中药的要求。4.处方原用于治疗胸脘痞闷，腹中胀满，饮食停滞，嗳气吞酸，现拟增加治疗抑郁症的适应症，因此对处方进行提取精制，去粗存精很有必要，为兴利除弊，现在水泛丸的基础上拟开发成胶囊剂。
发明内容
本发明的目的在于提供越鞠组合物胶囊剂的制备工艺及越鞠组合物的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3～4倍量水浸润1小时后，加8～10倍量水提取挥发油6～8小时，滤渣加入8～12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时。将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15±0.02，加4～10倍浸膏量的70-90％乙醇，充分搅拌，静置8-24小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40～50℃减压干燥，粉碎得浸膏粉。挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比为1∶8-12，40～60℃下保温搅拌，搅拌速度为400～1200rpm，搅拌时间为1～3小时。浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1～3，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5-2.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得。
越鞠组合物的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。
鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种A.取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇15～30ml超声处理20～40分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4～6∶2.5～3.5∶1∶1比例的醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开、取出、晾干；喷以5～15％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B.取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚20～40ml，加热回流1-1.5小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4～6％对二甲氨基苯甲醛的8-12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
C.取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，研细，加醋酸乙酯10～20ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；另川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8～10∶1比例的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点。
D.取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚15～30ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩为1ml作为供试品溶液；另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液溶液各10ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5～6比例的醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以4～6％磷钼酸-乙醇溶液，105～110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱在相应的位置，显相同颜色的斑点。
本发明中栀子苷的含量测定方法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10～20∶80～90乙腈-水为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长238nm；柱温35℃；外标法峰面积定量。
对照品溶液制备称取在60℃减压干燥3～5小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液即得。
供试品溶液制备取药物组合物的浸膏粉0.1g，恒重后称定，置25ml容量瓶中加甲醇至刻度，超声处理20～40分钟，放冷，用甲醇补足体积，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明胶囊剂每粒含栀子苷计不得少于4.50～6.00mg；含量测定方法中的甲醇可由70％乙醇或乙酸乙酯替代；其中的超声处理方法可由水浴回流方法替代；乙腈-水流动相可由乙腈-0.1％磷酸溶液流动相替代。
在本发明的栀子苷的含量测定方法中，线性关系考察试验证明栀子苷浓度在0ug/ml-76ug/ml范围内与吸收度呈很好的线性关系。栀子苷浓度在0-76ug/ml范围内与吸收度呈很好的线性关系。精密度实验结果证明精密度试验平均峰面积为158073，RSD＝1.28％，表明精密度良好。稳定性实验证明供试品溶液在配制后12小时内测定，结果稳定，对照品溶液在配制后12小时内测定，结果稳定。重现性实验结果表明重现性良好。加样回收率实验结果表明回收率良好。
胶囊剂通过提取工艺及成型工艺，使服用量减少，药物整洁、美观、容易吞服、携带、运输也很方便，微生物控制方便易行，通过挥发油的包合工艺可完整的保存其挥发性成分，使其稳定性强。下面药学与药效学实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1药材投料状态考察本处方中，川芎、苍术含有挥发油，粉碎为粉状的物料在提取过程中易糊化，因此考虑块状药材投料或者饮片投料，以挥发油的收得量考察药材的投料状态，研究全处方药材混合提取的方式。结果见表1表1药材投料状态的考察
由表1可知，饮片投料与块状药材投料在挥发油收得方面有较大差异，因此选用以饮片投料。
实验例2提取挥发油加水量的考察按处方比例，称取药材5份，每份100g，以挥发油总收得率为指标，加不同量的水浸泡1小时后，提取挥发油8小时，结果见表2表2挥发油提取中加水量的考察
由表2可见，加水量对处方中挥发油的提取影响较大，但8倍量以上的加水量所提取的挥发油接近。由于处方属于混合提取，六神曲经煎煮后易成糊状，因此考虑滤过等因素，选用10倍量水提取挥发油。
实验例3挥发油提取时间的考察按处方比例，称取药材3份，每份200g，以挥发油总收得率为指标，加10倍量的水浸泡1小时后，提取挥发油，记录不同的时间的得油率及累计收油率，结果见表3表3挥发油提取中提取时间的考察
由表3可见，处方中的药物在提取到8小时时已基本将油提取完备，在6小时时，提取率达到了0.55％，累计的收油率已达到90％，为了节约生产成本及能源，缩短生产周期，确定挥发油的提取时间为6小时。
实验例4提取工艺路线的研究按处方比例称取药材200g，其中栀子为40g，按3条工艺路线分别进行提取，以HPLC法测定其中栀子苷的含量，并结合干膏得率与药材中栀子苷的含量，计算栀子苷的转移率。结果见表5。
表4工艺路线的设定
表5三条工艺路线试验结果
表5显示，3种提取方法的栀子苷转移率均较高，但干浸膏的收率差异较大，从胶囊的成型工艺考虑，水提醇沉法较为合理。
实验例5水提工艺的研究在挥发油提取以后的水提工艺采用正交设计，以加水倍数，煎煮时间，煎煮次数为因素，每因素取3水平，进行L9(34)正交试验，采用HPLC测定栀子苷的得量(栀子苷含量×收膏率)作为评价指标。结果见表6、表7。
表6水提工艺考察因素水平表
按比例称取处方4500g，在挥发油提取完毕后，滤取药渣，按质量平均分为9份，每份生药含量为500g，按表7确定的水提工艺进行提取。
表7水提工艺考察正交试验及结果
对结果进行方差分析，从方差分析因素主次关系为B＞A＞C最佳的方案为B2A3C2。即用12倍量水，煎煮2次，每次2小时。但方差分析中发现，除因素B差异较外，A因素和C因素各水平间都不具有显著性差异，从生产成本及生产周期出发，水提方案选用B2A1C1，即用8倍量水煎煮2次，时间为1小时。
实验例6浸膏干燥工艺考察对提取浸膏进行了3种干燥方法的考察，结果见表8表8浸膏干燥工艺考察
产品分别在40℃、50℃、60℃条件下进行减压干燥；结果，40℃和50℃下减压干燥所得的产品为棕黄色，干燥失重低于5％；60℃下减压干燥所得的产品表面为深黄色，且较粘结。综合考虑干燥效率与干燥效果，产品干燥以40℃～50℃减压干燥为宜。
实验例7醇沉工艺研究按比例称取药材4500g，按确定的挥发油提取及水提工艺进行提取，滤取水提液，浓缩至不同相对密度(60℃)的稠膏，按质量平均分为9份，每份生药含量为500g，其中栀子药材的量为100g。醇沉工艺采用正交设计，乙醇浓度，乙醇用量，水浸膏密度，静置时间为考察因素，每因素取3水平，进行L9(34)正交试验，采用HPLC法测定栀子苷的含量，收膏率作为评价指标。结果见表9、表10。
表9醇沉工艺考察因素水平表
综合评分＝栀子苷含量(试)/栀子苷含量(max)×80％+收膏率(试)/收膏率(max)×20％表10醇沉工艺考察正交试验及结果
对结果进行方差分析，从方差分析因素主次关系为A＞B＞D＞C，佳的方案为A1B1C1D2，从方差分析中看出，B、C、D因素的各水平之间无显著性差异，从生产实际和节省时间出发，考察选择A1B3C1D2。即加入90％的乙醇4倍量，静置12小时。
实验例8挥发油包合工艺考察挥发油在制剂中的保存，以包合物的形式保存为佳，包合工艺的确定以正交试验设计筛选，根据包合工艺的影响因素，选择挥发油与β-环糊精的投料比，包合温度，搅拌时间，搅拌速度为因素，每因素取3水平，进行L9(3′)正交试验，采用包合物收得率与包合率作为评价指标。结果见表11、表12
表11挥发油包合工艺正交表头设计
表12挥发油包合工艺考察正交试验及结果
对结果进行方差分析，从方差分析因素主次关系为A＞D＞B＞C最佳的方案为A2D3B3C3。即挥发油与β-环糊精的投料比为1∶10，60℃下保温搅拌，搅拌速度为1200rpm，搅拌时间为3小时。方差分析中发现，除因素A具有显著性差异外，其余因素各水平间都不具有显著性差异，B，C，D的各水平间生产周期及能耗差别不大，因此最佳方案选择A2D3B3C3。
实验例9辅料的剂量选择实验由于本方在制备中运用了β-环糊精包合挥发油，并且浸膏的得率与β-环糊精的用量比较恒定。因此，β-环糊精在颗粒中可起一定的稀释作用，可减少辅料淀粉的用量，按下表混合比例，90％乙醇制粒，考察淀粉的用量，结果见表13。
由上表13可见，辅料量与浸膏粉量在1∶1左右时已能满足制粒的要求，考虑胶囊的载药量及服用量，淀粉的用量不应过大。
实验例10颗粒粘合剂的研究乙醇作为颗粒的粘合剂，其浓度对制粒效果影响很大，现考察制粒的乙醇浓度。将浸膏粉、β-环糊精、淀粉按等量递加稀释法混合均匀，喷入乙醇，制成软材，积压通过20目药筛，制得颗粒，考察颗粒情况。结果见表14表14制粒用乙醇浓度的考察
由上表14可见，用90％的乙醇制粒较为理想。
实验例11颗粒干燥方法的研究制备的颗粒中含有β-环糊精，制粒用乙醇的浓度较高，因此干燥的温度不能太高，温度以50℃为宜。
表15颗粒干燥方法考察
因此颗粒的干燥方法为电热鼓风干燥，干燥时间为1.5小时。
实验例12颗粒辅料的选择研究颗粒的休止角相对较大，流动性有待改善，因此需添加一定的润滑剂改善其流动性，选用微粉硅胶作为润滑剂。取一定量的颗粒，按不同比例加入微粉硅胶，考察其休止角，结果见表16表16微粉硅胶用量筛选
由上表16可见，当微粉硅胶的用量在1.5％以上时，颗粒的流动性比较理想，因此微粉硅胶的用量选择在1.5％左右。
实验例13栀子的定性鉴别试验取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，粉碎，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，滤液浓缩近干，加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。试验考察了四种展开系统进行筛选的照薄层色谱法试验A.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-氨水(4∶1∶0.1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇液，热风吹至斑点显色。
B.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸乙酯-内酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色。
C.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸丁酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色。
D.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶2∶1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色。
结果显示，展开系统B的展开及分离效果较好，确定B为栀子TLC鉴别的方法。
按此方法进行，重复三批样品，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例14苍术的定性鉴别试验苍术，主要含有苍术素等，取越鞠胶囊内容物4g，粉碎，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
试验考察了四种展开系统进行筛选，照薄层色谱法实验A.以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(20∶1))为展开剂，展开，取出晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇液，热风吹至斑点显色清晰。
B.以石油醚(60～90℃)为展开剂，展开，取出晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇液，热风吹至斑点显色清晰。
C.以甲苯-醋酸乙酯(95∶5)展开，置紫外光灯(365nm)处检视。
D.以苯-醋酸乙酯-正己烷(3∶3∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)处检视。
结果显示，展开系统B的展开及分离效果较好，确定B为苍术TLC鉴别的方法。
按此方法进行，重复三批样品，在与对照药材色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例15川芎的性状鉴别试验川芎，主要含有川芎嗪、阿魏酸等，试验考察了两种方法进行筛选，照薄层色谱法实验A.取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，粉碎，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解作为供试品液。另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。
B.取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，粉碎，加醋酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。
结果显示，展开系统B的展开及分离效果较好，确定B为川芎TLC鉴别的方法。按此方法进行，重复三批样品，在与对照药材色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例16香附的性状鉴别试验取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，粉碎，加乙醚20ml，超声20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液。另取香附对照药材2g，同法制成对照药材溶液。
试验考察了三种展开系统进行筛选，照薄层色谱法试验A.以醋酸乙酯-石油醚(15∶85)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5％磷钼酸-乙醇溶液，105℃烘至斑点显色。
B.以醋酸乙酯-苯-冰醋酸(5∶92∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯(254nm)处下检视。
C.以醋酸乙酯-石油醚(25∶75)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5％磷钼酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色。
结果显示，展开系统A的展开及分离效果较好，确定A为香附TLC鉴别的方法。
按此方法进行，重复三批样品，在与对照色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例17栀子药材的含量测定试验检测波长的选择取栀子苷对照品，加10％甲醇水溶液，以10％甲醇水溶液为空白，分别于200～400nm波长范围内进行扫描，由扫描图可见，栀子苷对照品在238-239nm处有最大吸收，空白试剂在此波长无吸收，选择238nm作为检测波长。
提取溶媒的选择取样品(批号020201)约0.1g3份，精密称定，置50ml容量瓶中，分别加入甲醇，70％乙醇，乙酸乙酯约40ml，超声处理30分钟，放冷，用相应溶媒补足体积，摇匀，滤过。测定栀子苷含量，结果见表17。
表17提取溶媒的选择
由以上可知，3种溶剂的提取效果接近，色谱分析中，甲醇使用最广泛，因此选用甲醇作为提取溶剂。
提取方法的选择取样品(批号020201)约0.1g2份，精密称定，置50ml圆底烧瓶中，分别加入甲醇30ml，采用以下2种方法处理样品，结果见表18A.超声处理30分钟，放冷，滤至50ml容量瓶中，甲醇洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，滤过。测定栀子苷含量。
B.水浴回流提取30分钟，放冷，滤至50ml容量瓶中，甲醇洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，滤过。测定栀子苷含量。
表18提取方法的选择
以上试验说明，回流提取与超声处理的效果接近。
提取时间的选择取样品(批号020201)约0.1g4份，精密称定，置50ml容量瓶中，分别加入甲醇约40ml，分别超声处理样品15分钟，20分钟，30分钟，40分钟，超声结束后放冷，用甲醇补足体积，滤过，取续滤液，即得。测定栀子苷含量。结果见表19表19提取时间的选择
以上试验表明，提取时间超过20分钟后，提取效果接近，因此列入正文。
提取溶媒量的选择取样品(批号020201)约0.1g4份，精密称定，以不同量的甲醇超产处理，取续滤液测定栀子苷含量。结果见表20表20提取溶媒量的选择
以上试验表明，当取样量为0.1g时，溶媒量在20ml以上时，对含量测定无影响，结合容量瓶规格，因此提取溶媒的量确定为25ml。考虑样品的浓度及检测限，提取液以稀释2倍左右为佳，因此提取液滤过后，稀释2倍作为供试品溶液。
流动相的选择实验分别以Diamonsil C185u 4.6mm×200mm柱为分析柱，考察了两种流动相对样品的分离效果，结果如下A.以乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
B.以乙腈-0.1％磷酸溶液(17∶83)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
以上两种流动相均能达到满意的分离效果，但B流动相的配制较为烦琐，故实验最终选用乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，柱温35℃。
色谱柱的选择实验分别考察了两种分析柱对样品的分离效果，如下A.以Diamonsil C185u 4.6mm×200mm为分析柱，以乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
B.以Kromasil C185u 4.6mm×200mm为分析柱，以乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
两种分析柱的分离效果均能满足要求，从本实验室的使用经验出发，最终选用Diamonsil C185u 4.6mm×200mm为分析柱。
下面药效学实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例18抗利血平眼睑下垂抑郁模型试验选取72只昆明种小鼠，皆为雄性，体重18～22g，按体重随机分为6组，多次给药按表21所列药物和剂量每日灌胃给药1次，各组动物于给药后60min，腹腔注射利血平注射剂2mg/kg。连续10日，于第10日，注射后60min将小鼠放于支架上观察2min，观察各组动物中眼睑至少关闭一半以上的动物个数，以FISHER精确检验统计，结果见表21。
表21越鞠浸膏多次给药对小鼠利血平致眼睑下垂的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01表21显示，越鞠浸膏6g/kg组连续10天给药对小鼠利血平致眼睑下垂具有显著抑制作用(P＜0.05)。
实验例19抗利血平致运动不能抑郁模型试验选取72只昆明种小鼠，皆为雄性，鼠龄7～8周，体重18～22g，按体重随机分为6组，多次给药试验按表22所列药物和剂量每日灌胃给药一次，连续7日，观察30sec内各组动物中仍然呆在滤纸中的个数，以FISHER精确检验统计，结果见表22。
表22越鞠浸膏多次给药对小鼠利血平致运动不能的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表22显示，越鞠浸膏6、3g/kg剂量组和越鞠丸组给药7天后，对小鼠利血平致运动不能分别具有极显著、明显和显著对抗作用(P＜0.001、P＜0.05或P＜0.001)。
实验例20小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型试验选取72只昆明种小鼠，皆为雄性，鼠龄8～9周，体重18～22g，按体重随机分为6组，每组12只。单次给药按表23所列药物和剂量灌胃给药一次，各组动物于给药后30min，将小鼠尾部距尖1cm处用胶布粘贴于直径1cm的PVC管上，勿使小鼠尾部扭曲折叠，然后架空PVC管，使小鼠呈倒悬状，头部距台面5cm，每两只小鼠间用隔板隔开，使其互不干扰，观察每只动物6min内的累计不动的时间(不动指标为动物除呼吸外所有肢体均不动)，结果见表23。多次给药按表20所列药物和剂量每日灌胃给药一次，连续10天，结果见表24。
表23越鞠浸膏单次给药对小鼠悬尾试验的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表23显示，越鞠浸膏6～1.5g/kg剂量组单次给药对小鼠悬尾不动时间分别有显著、明显和明显缩短(P＜0.01，P＜0.05或P＜0.05)。
表24越鞠浸膏多次给药对小鼠悬尾试验的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表24显示，越鞠浸膏6～1.5g/kg剂量组给药10天后，对小鼠悬尾不动时间分别有极显著、极显著和明显缩短(P＜0.001，P＜0.001或P＜0.05)。
实验例21慢性应激性大鼠抑郁模型的行为学试验选取SD种大鼠70只，雌雄各半，鼠龄9～10周，体重180～220g，按体重随机分层分为7组，每组10只。除正常对照组动物外，造模动物全部每笼一只孤养，接受21天各种不同的应激刺激，包括冰水游泳(4℃，5min)、夹尾(3min)、禁水(40h)、禁食(40h)、配对饲养及潮湿、束缚和通宵照明刺激，平均每种刺激2～3次。正常组大鼠每笼5只饲养，不予任何刺激。各给药组于造模同时按表25所示药物和剂量灌胃给药，连续21天。采用Open-field法观察行为。本实验所用敞箱为立方形，高40cm，长宽80cm，周壁、底面由面积相等的25块组成，用白线划分。以动物穿越底面块数为水平活动(crossing)得分，以直立次数为垂直活动(rearing)得分。第22天进行观察，每只动物测定1次，每次测定时间为3min，计数水平活动得分和垂直活动得分。结果见表25。
表25越鞠浸膏对慢性应激性抑郁模型大鼠Open-field法行为的影响
注①模型组对照组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001②各给药组与模型比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表25结果显示，慢性应激性抑郁模型大鼠的水平运动和垂直运动均极显著减少(P＜0.001)，越鞠浸膏6～1.5g/kg剂量组分别能明显或显著对抗水平运动减少(P＜0.05、P＜0.05或P＜0.01)，分别明显或显著对抗垂直运动减少(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.01)。
实验例22L-5-羟色氨酸所致小鼠震颤试验选用90只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，按体重和性别随机分层分为7组。按表26所示药物和剂量各组小鼠灌胃给药1次。给药后60min，各鼠腹腔注射5-羟色氨酸200mg/kg(不引起小鼠震颤的最高剂量)，随后将小鼠单个放在笼内(16×27cm)，观察20min内出现震颤(以动物出现特征性甩头行为为指针)的动物数。以FISHER精确检验统计，结果见表26。
表26越鞠浸膏对5-羟色氨酸震颤作用的影响
注各给药组与蒸馏水+5-羟色氨酸组比较***P＜0.001表26结果显示，仅给予小鼠L-5-羟色氨酸或受试药(越鞠浸膏和氟西汀胶囊)，动物不出现震颤，而在给予受试药后再给5-羟色氨酸，则随着越鞠浸膏剂量的增大，出现震颤的动物数增多，但无明显差异(P＞0.05)，说明越鞠浸膏有加强5-羟色氨酸震颤作用的趋势。
实验例23加强左旋多巴行为效应的试验选用90只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，按体重和性别随机分层分为7组。按表27所示药物和剂量各组小鼠灌胃给药1次。给药后60min，各鼠腹腔注射左旋多巴200mg/kg(不引起小鼠奔跑的最高剂量)，随后将小鼠单个放在笼内，观察30min内出现奔跑的动物数。以FISHER精确检验，结果见表27。
表27越鞠浸膏对左旋多巴行为效应的影响
注各给药组与蒸馏水+左旋多巴组比较***P＜0.001表27结果显示，仅给予小鼠左旋多巴或受试药(越鞠浸膏和氟西汀胶囊)，动物不出现震颤，而在给予受试药后再给左旋多巴，则有部分动物沿着笼子来回奔跑，并且随着越鞠浸膏剂量的增大，出现奔跑的动物数增多，(P＞0.05)，说明越鞠浸膏有加强左旋多巴行为效应的作用趋势。
实验例24越鞠浸膏对小鼠自发活动的影响选用84只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，随机分为7组，每组12只，试验前禁食不禁水12小时，试验安排于夜间进行，实验室温度控制在24～26℃。按表28所列药物与剂量灌胃一次。给药后0.5h，测定小鼠自发活动。测定方法将小鼠放入ZL-1计算机控制小动物成套行为活动测定仪中适应1min后，测定其3min内的活动次数，按下式计算镇静率，结果见表28。
表28越鞠浸膏对小鼠自发活动的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01表28显示，越鞠浸膏6和3g/kg剂量组对小鼠自发活动分别有显著和明显的抑制作用(P＜0.01或P＜0.05)。
实验例25阈剂量戊巴比妥钠协同催眠试验选取72只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，随机分为6组，每组12只，按表29所列药物与剂量各组分别灌胃一次，30min后，每只小鼠腹腔注射0.38％戊巴比妥钠38mg/kg，以翻正反射消失1分钟以上为入睡时间，从翻正反射消失到翻正反射恢复为睡眠时间，结果见表29。
表29越鞠浸膏协同阈剂量戊巴比妥钠催眠作用
注各给药组与蒸馏水组比较**P＜0.01
表29显示，越鞠浸膏对阈剂量戊巴比妥钠催眠小鼠的入睡时间和睡眠时间均无明显影响(P＞0.05)。
实验例26肝郁证模型试验选取60只SD大鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重180～200g，随机分为5组，按表30所列药物与剂量各组分别灌胃每日一次，正常对照组和肝郁模型组灌胃等体积蒸馏水。给药当天开始各组SD大鼠戴模具(单笼饲养)18天，模具为两块厚0.2cm，直径4cm的红色有机玻璃组成类似颈部枷锁形模具。
观察动物戴模具后前后情况(暴跳，抓咬笼具、模具，不断嘶叫，反应迟钝，行为迟缓，动物眼睛眯小，有眼屎，毛色枯黄，粪便小、干、少、尾呈棕红色并有鳞片出现，消瘦，体重减轻等)，第18天测定大鼠自发活动(测定方法同慢性应激性大鼠模型)，并计算自发活动增加率，并从股动脉取血测定血液流变性指标。结果用T检验统计。
表30越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠Open-field法行为的影响
注①肝郁模型组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001②各给药组与正常对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表30显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠垂直活动和水平活动都显著减少(P＜0.001)。与模型组比较，越鞠浸膏6和3g/kg剂量组皆能极显著增加动物垂直活动次数(P＜0.001)，分别能极显著和明显增加动物水平活动次数(P＜0.01或P＜0.05)。
表31越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠体重增长的影响
注①肝郁模型组与正常对照组比较▲P＜0.05▲▲▲P＜0.001②各给药组与模型组比较*P＜0.05表31显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠与正常对照组大鼠比较，体重增长极显著减少(P＜0.001)。越鞠浸膏6g/kg剂量组能明显对抗大鼠体重降低(P＜0.05)，3和1.5g/kg剂量组有对抗的趋势(P＞0.05和P＞0.05)。
表32越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠血液流变性的影响(x±SD)
注①模型组对照组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表32显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠全血粘度(高切和低切)和红细胞聚集指数均极显著升高(P＜0.001)。越鞠浸膏3和1.5g/kg剂量组分别能显著或极显著抑制全血粘度(高切和低切)的升高(P＜0.001或P＜0.01)，且与正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05)；越鞠浸膏6、3和1.5g/kg剂量组均能极显著抑制红细胞聚集指数的升高(P＜0.001)。
表33越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠脑内单胺类神经递质及代谢产物含量的影响
注①模型组与正常对照组比较▲P＜0.05▲▲P＜0.01②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表33结果显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠与对照组大鼠比较，脑内DOPAC、NE、5-HT和5-HIAA含量分别极显著、明显、显著和显著降低(P＜0.001、P＜0.05、P＜0.01和P＜0.01)。连续给药18天后越鞠浸膏6g/kg剂量组分别能明显和显著升高模型动物脑内多巴胺(DA)和5-羟吲哚(5-HIAA)的含量(P＜0.05和P＜0.01)。
实施例1越鞠胶囊剂的制备取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、炒栀子400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，每粒装胶囊内容物0.5g。
实施例2越鞠胶囊剂的制备方法取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3.5倍量水浸润1小时后，加9倍量水提取挥发油7小时；滤渣加入10倍量水煎煮2次，每次2小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15±0.02，加8倍浸膏量的80％乙醇，搅拌，静置20小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏45℃减压干燥，粉碎，得浸膏粉；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比为1∶10，50℃下保温搅拌，搅拌速度为1000rpm，搅拌时间为2小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶2，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为2时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得；实施例3取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3倍量以上水浸润1小时后，加10倍量水提取挥发油6小时，滤渣加入8倍量水煎煮2次，每次1小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15，加4倍浸膏量的90％乙醇，搅拌，静置12小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40℃减压干燥，粉碎；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比例为1∶10，60℃下保温搅拌，搅拌速度为1200rpm，搅拌时间为3小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得；实施例4三批中试样品中栀子苷含量测定取三批中试生产，对栀子苷含量进行了测定，每批平行测定3次，结果见表34。
表34样品中栀子苷含量测定结果表34
根据三批样品测定结果，每粒含栀子苷计不少于5.80mg。
实施例4栀子的定性鉴别取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开、取出、晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照品则无此斑点；实施例5取越鞠胶囊4g，研细，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml溶解作为供试品溶液；取缺苍术阴性样品4g，同法制成阴性样品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材液；取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以70℃石油醚为展开剂，展开，取出晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性样品则无此斑点；实施例6取越鞠胶囊4g，研细，加醋酸乙酯15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；取缺川芎阴性样品4g，同法制成阴性样品溶液；另川芎对照药材1g，同法制成对照品溶液；取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干；置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点，阴性样品则无此斑点；实施例7取越鞠胶囊3g，研细，加乙醚20ml，超声处理20分钟后，滤过，滤液浓缩为1ml作为供试品溶液；取缺香附阴性样品3g，同法制成阴性样品溶液；另取香附对照药材，同法制成对照药材溶液；吸取上述三种溶液各10ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5.5醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以5％磷钼酸-乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱在相应的位置显相同颜色的斑点，阴性样品则无此斑点；实施例8越鞠胶囊剂的应用1取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于抑郁症。口服，一次3粒，一日3次。
实施例9越鞠胶囊剂的应用2取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于出现眼睑下垂、四肢无力、疲倦、嗜睡等症状的抑郁症患者。口服，一次3粒，一日3次。
实施例10越鞠胶囊剂的应用3取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于出现反应迟钝，运动不能、精神抑郁的抑郁症患者。口服，一次3粒，一目3次。
实施例11越鞠胶囊剂的应用4取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于肝郁患者。口服，一次3粒，一日3次。
权利要求
1.一种中药的药物组合物，其特征在于该药物组合物胶囊剂的制备方法包括以下步骤取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3～4倍量水浸润1小时后，加8～10倍量水提取挥发油6～8小时；滤渣加入8～12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15±0.02，加4～10倍浸膏量的70-90％乙醇，搅拌，静置8-24小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40～50℃减压干燥，粉碎，得浸膏粉；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比为1∶8-12，40～60℃下保温搅拌，搅拌速度为400～1200rpm，搅拌时间为1～3小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1～3，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5-2.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物胶囊剂的制备方法包括以下步骤取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3倍量以上水浸润1小时后，加10倍量水提取挥发油6小时，滤渣加入8倍量水煎煮2次，每次1小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15，加4倍浸膏量的90％乙醇，搅拌，静置12小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40℃减压干燥，粉碎；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比例为1∶10，60℃下保温搅拌，搅拌速度为1200rpm，搅拌时间为3小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中胶囊剂的鉴别方法包括如下方法中的一种或几种A、取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇15～30ml超声处理20～40分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；取供试品溶和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4～6∶2.5～3.5∶1∶1比例的醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开、取出、晾干；喷以5～15％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚20～40ml，加热回流1～1.5小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液；取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4～6％对二甲氨基苯甲醛的8～12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；C、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚15～30ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩为1ml作为供试品溶液；另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5～6比例的醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以4～6％磷钼酸-乙醇溶液，105～110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置，显相同颜色的斑点；D、取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，研细，加醋酸乙酯10～20ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液；取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8～10∶1比例的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干；置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点。
4.如权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于该方法包括如下方法中的一种或几种A、取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1比例的醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩为1ml，作为供试品溶液；另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5.5比例的醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1比例的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
5.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定包括如下测定方法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10～20∶80～90乙腈-水为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长238nm；柱温35℃；外标法峰面积定量；对照品溶液制备称取在60℃减压干燥3～5小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液即得；供试品溶液制备取药物组合物的浸膏粉0.1g，恒重后称定，置25ml容量瓶中加甲醇至刻度，超声处理20～40分钟，放冷，用甲醇补足体积，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物的胶囊剂每粒含栀子苷计不得少于4.50～6.00mg。
6.如权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下测定方法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；15∶85乙腈-水为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长238nm；柱温35℃；外标法峰面积定量；对照品溶液制备称取在60℃减压干燥4小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液即得；供试品溶液制备取药物组合物的浸膏粉0.1g，恒重后称定，置25ml容量瓶中加甲醇至刻度，超声处理20分钟，放冷，用甲醇补足体积，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明胶囊剂每粒含栀子苷计不得少于4.5mg。
7.如权利要求5或6所述的含量测定方法，其特征在于其中甲醇可由70％乙醇或乙酸乙酯替代。
8.如权利要求5或6所述的含量测定方法，其特征在于其中的超声处理方法可由水浴回流方法替代。
9.如权利要求5或6所述的含量测定方法，其特征在于其中乙腈-水流动相可由乙腈-0.1％磷酸溶液流动相替代。
10.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗抑郁症的药物中的应用。
11.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备具有抑制全血粘度和红细胞聚集指数升高的功能的药物中的应用。
12.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备具有升高脑内多巴胺和5-羟吲哚含量的功能的药物中的应用。
13.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备具有治疗肝郁作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开一种越鞠组合物的胶囊剂的制备工艺、质量控制方法及其新用途。将原料药以饮片投料，加水浸润后，提取挥发油，滤渣加入8～12倍量水煎煮。将水提物滤液浓缩加乙醇，搅拌，静置，滤过，浓缩，干燥，粉碎。挥发油用β－环糊精包合，乙醇制粒，加润滑剂，制成胶囊，即得。本发明还公开了越鞠组合物胶囊制剂内容物的鉴别方法和栀子苷的含量测定方法。本发明同时公开了越鞠组合物在制备治疗抑郁症及肝郁作用的药物中的应用。
文档编号A61P7/00GK1733189SQ20041007012
公开日2006年2月15日 申请日期2004年8月2日 优先权日2004年8月2日
发明者张漪 申请人:四川亚宝光泰药业有限公司
技术领域：
本发明涉及一种中药的药物组合物的胶囊剂的制备工艺、质量控制方法及新用途，特别是涉及一种越鞠组合物的胶囊剂的制备工艺、质量控制方法及新用途。
背景技术：
越鞠丸收载于《中华人民共和国药典》2000年版一部P598。该方为水泛丸剂，原工艺为“以上五味，粉碎为细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥，即得”用法与用量为“口服，一次6～9g，一日2次”，功能主治为“理气解郁，宽胸除满。用于胸脘痞闷，腹中胀满，饮食停滞，嗳气吞酸。”水泛丸为中药的一种常见剂型，在过去发挥了很大的作用，但其弊端也十分明显。水泛丸服用剂量大，微生物控制困难，稳定性差是该剂型的通病。对于该处方而言，水泛丸具有以下不足1.该处方大多数药物含有挥发性成分，水泛丸对这一类成分的保存不利。2.该处方服用量较大，最大为18g生药/日，对于抑郁症患者而言，服用量大会带来治疗上医从性的困难。3.处方中六神曲由多味药物及面粉与麦麸发酵制成，直接入药，在储存及运输过程中微生物不易控制，尤其是霉菌，不符合现代中药的要求。4.处方原用于治疗胸脘痞闷，腹中胀满，饮食停滞，嗳气吞酸，现拟增加治疗抑郁症的适应症，因此对处方进行提取精制，去粗存精很有必要，为兴利除弊，现在水泛丸的基础上拟开发成胶囊剂。
发明内容
本发明的目的在于提供越鞠组合物胶囊剂的制备工艺及越鞠组合物的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3～4倍量水浸润1小时后，加8～10倍量水提取挥发油6～8小时，滤渣加入8～12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时。将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15±0.02，加4～10倍浸膏量的70-90％乙醇，充分搅拌，静置8-24小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40～50℃减压干燥，粉碎得浸膏粉。挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比为1∶8-12，40～60℃下保温搅拌，搅拌速度为400～1200rpm，搅拌时间为1～3小时。浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1～3，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5-2.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得。
越鞠组合物的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。
鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种A.取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇15～30ml超声处理20～40分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4～6∶2.5～3.5∶1∶1比例的醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开、取出、晾干；喷以5～15％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B.取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚20～40ml，加热回流1-1.5小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4～6％对二甲氨基苯甲醛的8-12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
C.取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，研细，加醋酸乙酯10～20ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；另川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8～10∶1比例的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点。
D.取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚15～30ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩为1ml作为供试品溶液；另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液溶液各10ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5～6比例的醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以4～6％磷钼酸-乙醇溶液，105～110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱在相应的位置，显相同颜色的斑点。
本发明中栀子苷的含量测定方法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10～20∶80～90乙腈-水为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长238nm；柱温35℃；外标法峰面积定量。
对照品溶液制备称取在60℃减压干燥3～5小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液即得。
供试品溶液制备取药物组合物的浸膏粉0.1g，恒重后称定，置25ml容量瓶中加甲醇至刻度，超声处理20～40分钟，放冷，用甲醇补足体积，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明胶囊剂每粒含栀子苷计不得少于4.50～6.00mg；含量测定方法中的甲醇可由70％乙醇或乙酸乙酯替代；其中的超声处理方法可由水浴回流方法替代；乙腈-水流动相可由乙腈-0.1％磷酸溶液流动相替代。
在本发明的栀子苷的含量测定方法中，线性关系考察试验证明栀子苷浓度在0ug/ml-76ug/ml范围内与吸收度呈很好的线性关系。栀子苷浓度在0-76ug/ml范围内与吸收度呈很好的线性关系。精密度实验结果证明精密度试验平均峰面积为158073，RSD＝1.28％，表明精密度良好。稳定性实验证明供试品溶液在配制后12小时内测定，结果稳定，对照品溶液在配制后12小时内测定，结果稳定。重现性实验结果表明重现性良好。加样回收率实验结果表明回收率良好。
胶囊剂通过提取工艺及成型工艺，使服用量减少，药物整洁、美观、容易吞服、携带、运输也很方便，微生物控制方便易行，通过挥发油的包合工艺可完整的保存其挥发性成分，使其稳定性强。下面药学与药效学实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1药材投料状态考察本处方中，川芎、苍术含有挥发油，粉碎为粉状的物料在提取过程中易糊化，因此考虑块状药材投料或者饮片投料，以挥发油的收得量考察药材的投料状态，研究全处方药材混合提取的方式。结果见表1表1药材投料状态的考察
由表1可知，饮片投料与块状药材投料在挥发油收得方面有较大差异，因此选用以饮片投料。
实验例2提取挥发油加水量的考察按处方比例，称取药材5份，每份100g，以挥发油总收得率为指标，加不同量的水浸泡1小时后，提取挥发油8小时，结果见表2表2挥发油提取中加水量的考察
由表2可见，加水量对处方中挥发油的提取影响较大，但8倍量以上的加水量所提取的挥发油接近。由于处方属于混合提取，六神曲经煎煮后易成糊状，因此考虑滤过等因素，选用10倍量水提取挥发油。
实验例3挥发油提取时间的考察按处方比例，称取药材3份，每份200g，以挥发油总收得率为指标，加10倍量的水浸泡1小时后，提取挥发油，记录不同的时间的得油率及累计收油率，结果见表3表3挥发油提取中提取时间的考察
由表3可见，处方中的药物在提取到8小时时已基本将油提取完备，在6小时时，提取率达到了0.55％，累计的收油率已达到90％，为了节约生产成本及能源，缩短生产周期，确定挥发油的提取时间为6小时。
实验例4提取工艺路线的研究按处方比例称取药材200g，其中栀子为40g，按3条工艺路线分别进行提取，以HPLC法测定其中栀子苷的含量，并结合干膏得率与药材中栀子苷的含量，计算栀子苷的转移率。结果见表5。
表4工艺路线的设定
表5三条工艺路线试验结果
表5显示，3种提取方法的栀子苷转移率均较高，但干浸膏的收率差异较大，从胶囊的成型工艺考虑，水提醇沉法较为合理。
实验例5水提工艺的研究在挥发油提取以后的水提工艺采用正交设计，以加水倍数，煎煮时间，煎煮次数为因素，每因素取3水平，进行L9(34)正交试验，采用HPLC测定栀子苷的得量(栀子苷含量×收膏率)作为评价指标。结果见表6、表7。
表6水提工艺考察因素水平表
按比例称取处方4500g，在挥发油提取完毕后，滤取药渣，按质量平均分为9份，每份生药含量为500g，按表7确定的水提工艺进行提取。
表7水提工艺考察正交试验及结果
对结果进行方差分析，从方差分析因素主次关系为B＞A＞C最佳的方案为B2A3C2。即用12倍量水，煎煮2次，每次2小时。但方差分析中发现，除因素B差异较外，A因素和C因素各水平间都不具有显著性差异，从生产成本及生产周期出发，水提方案选用B2A1C1，即用8倍量水煎煮2次，时间为1小时。
实验例6浸膏干燥工艺考察对提取浸膏进行了3种干燥方法的考察，结果见表8表8浸膏干燥工艺考察
产品分别在40℃、50℃、60℃条件下进行减压干燥；结果，40℃和50℃下减压干燥所得的产品为棕黄色，干燥失重低于5％；60℃下减压干燥所得的产品表面为深黄色，且较粘结。综合考虑干燥效率与干燥效果，产品干燥以40℃～50℃减压干燥为宜。
实验例7醇沉工艺研究按比例称取药材4500g，按确定的挥发油提取及水提工艺进行提取，滤取水提液，浓缩至不同相对密度(60℃)的稠膏，按质量平均分为9份，每份生药含量为500g，其中栀子药材的量为100g。醇沉工艺采用正交设计，乙醇浓度，乙醇用量，水浸膏密度，静置时间为考察因素，每因素取3水平，进行L9(34)正交试验，采用HPLC法测定栀子苷的含量，收膏率作为评价指标。结果见表9、表10。
表9醇沉工艺考察因素水平表
综合评分＝栀子苷含量(试)/栀子苷含量(max)×80％+收膏率(试)/收膏率(max)×20％表10醇沉工艺考察正交试验及结果
对结果进行方差分析，从方差分析因素主次关系为A＞B＞D＞C，佳的方案为A1B1C1D2，从方差分析中看出，B、C、D因素的各水平之间无显著性差异，从生产实际和节省时间出发，考察选择A1B3C1D2。即加入90％的乙醇4倍量，静置12小时。
实验例8挥发油包合工艺考察挥发油在制剂中的保存，以包合物的形式保存为佳，包合工艺的确定以正交试验设计筛选，根据包合工艺的影响因素，选择挥发油与β-环糊精的投料比，包合温度，搅拌时间，搅拌速度为因素，每因素取3水平，进行L9(3′)正交试验，采用包合物收得率与包合率作为评价指标。结果见表11、表12
表11挥发油包合工艺正交表头设计
表12挥发油包合工艺考察正交试验及结果
对结果进行方差分析，从方差分析因素主次关系为A＞D＞B＞C最佳的方案为A2D3B3C3。即挥发油与β-环糊精的投料比为1∶10，60℃下保温搅拌，搅拌速度为1200rpm，搅拌时间为3小时。方差分析中发现，除因素A具有显著性差异外，其余因素各水平间都不具有显著性差异，B，C，D的各水平间生产周期及能耗差别不大，因此最佳方案选择A2D3B3C3。
实验例9辅料的剂量选择实验由于本方在制备中运用了β-环糊精包合挥发油，并且浸膏的得率与β-环糊精的用量比较恒定。因此，β-环糊精在颗粒中可起一定的稀释作用，可减少辅料淀粉的用量，按下表混合比例，90％乙醇制粒，考察淀粉的用量，结果见表13。
由上表13可见，辅料量与浸膏粉量在1∶1左右时已能满足制粒的要求，考虑胶囊的载药量及服用量，淀粉的用量不应过大。
实验例10颗粒粘合剂的研究乙醇作为颗粒的粘合剂，其浓度对制粒效果影响很大，现考察制粒的乙醇浓度。将浸膏粉、β-环糊精、淀粉按等量递加稀释法混合均匀，喷入乙醇，制成软材，积压通过20目药筛，制得颗粒，考察颗粒情况。结果见表14表14制粒用乙醇浓度的考察
由上表14可见，用90％的乙醇制粒较为理想。
实验例11颗粒干燥方法的研究制备的颗粒中含有β-环糊精，制粒用乙醇的浓度较高，因此干燥的温度不能太高，温度以50℃为宜。
表15颗粒干燥方法考察
因此颗粒的干燥方法为电热鼓风干燥，干燥时间为1.5小时。
实验例12颗粒辅料的选择研究颗粒的休止角相对较大，流动性有待改善，因此需添加一定的润滑剂改善其流动性，选用微粉硅胶作为润滑剂。取一定量的颗粒，按不同比例加入微粉硅胶，考察其休止角，结果见表16表16微粉硅胶用量筛选
由上表16可见，当微粉硅胶的用量在1.5％以上时，颗粒的流动性比较理想，因此微粉硅胶的用量选择在1.5％左右。
实验例13栀子的定性鉴别试验取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，粉碎，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，滤液浓缩近干，加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。试验考察了四种展开系统进行筛选的照薄层色谱法试验A.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-氨水(4∶1∶0.1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇液，热风吹至斑点显色。
B.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸乙酯-内酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色。
C.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸丁酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色。
D.取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶2∶1)为展开剂，展开、取出、晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色。
结果显示，展开系统B的展开及分离效果较好，确定B为栀子TLC鉴别的方法。
按此方法进行，重复三批样品，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例14苍术的定性鉴别试验苍术，主要含有苍术素等，取越鞠胶囊内容物4g，粉碎，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
试验考察了四种展开系统进行筛选，照薄层色谱法实验A.以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(20∶1))为展开剂，展开，取出晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇液，热风吹至斑点显色清晰。
B.以石油醚(60～90℃)为展开剂，展开，取出晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇液，热风吹至斑点显色清晰。
C.以甲苯-醋酸乙酯(95∶5)展开，置紫外光灯(365nm)处检视。
D.以苯-醋酸乙酯-正己烷(3∶3∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)处检视。
结果显示，展开系统B的展开及分离效果较好，确定B为苍术TLC鉴别的方法。
按此方法进行，重复三批样品，在与对照药材色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例15川芎的性状鉴别试验川芎，主要含有川芎嗪、阿魏酸等，试验考察了两种方法进行筛选，照薄层色谱法实验A.取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，粉碎，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解作为供试品液。另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。
B.取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，粉碎，加醋酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。
结果显示，展开系统B的展开及分离效果较好，确定B为川芎TLC鉴别的方法。按此方法进行，重复三批样品，在与对照药材色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例16香附的性状鉴别试验取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，粉碎，加乙醚20ml，超声20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液。另取香附对照药材2g，同法制成对照药材溶液。
试验考察了三种展开系统进行筛选，照薄层色谱法试验A.以醋酸乙酯-石油醚(15∶85)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5％磷钼酸-乙醇溶液，105℃烘至斑点显色。
B.以醋酸乙酯-苯-冰醋酸(5∶92∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯(254nm)处下检视。
C.以醋酸乙酯-石油醚(25∶75)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5％磷钼酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色。
结果显示，展开系统A的展开及分离效果较好，确定A为香附TLC鉴别的方法。
按此方法进行，重复三批样品，在与对照色谱相应的位置均显相同颜色的斑点。
实验例17栀子药材的含量测定试验检测波长的选择取栀子苷对照品，加10％甲醇水溶液，以10％甲醇水溶液为空白，分别于200～400nm波长范围内进行扫描，由扫描图可见，栀子苷对照品在238-239nm处有最大吸收，空白试剂在此波长无吸收，选择238nm作为检测波长。
提取溶媒的选择取样品(批号020201)约0.1g3份，精密称定，置50ml容量瓶中，分别加入甲醇，70％乙醇，乙酸乙酯约40ml，超声处理30分钟，放冷，用相应溶媒补足体积，摇匀，滤过。测定栀子苷含量，结果见表17。
表17提取溶媒的选择
由以上可知，3种溶剂的提取效果接近，色谱分析中，甲醇使用最广泛，因此选用甲醇作为提取溶剂。
提取方法的选择取样品(批号020201)约0.1g2份，精密称定，置50ml圆底烧瓶中，分别加入甲醇30ml，采用以下2种方法处理样品，结果见表18A.超声处理30分钟，放冷，滤至50ml容量瓶中，甲醇洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，滤过。测定栀子苷含量。
B.水浴回流提取30分钟，放冷，滤至50ml容量瓶中，甲醇洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，滤过。测定栀子苷含量。
表18提取方法的选择
以上试验说明，回流提取与超声处理的效果接近。
提取时间的选择取样品(批号020201)约0.1g4份，精密称定，置50ml容量瓶中，分别加入甲醇约40ml，分别超声处理样品15分钟，20分钟，30分钟，40分钟，超声结束后放冷，用甲醇补足体积，滤过，取续滤液，即得。测定栀子苷含量。结果见表19表19提取时间的选择
以上试验表明，提取时间超过20分钟后，提取效果接近，因此列入正文。
提取溶媒量的选择取样品(批号020201)约0.1g4份，精密称定，以不同量的甲醇超产处理，取续滤液测定栀子苷含量。结果见表20表20提取溶媒量的选择
以上试验表明，当取样量为0.1g时，溶媒量在20ml以上时，对含量测定无影响，结合容量瓶规格，因此提取溶媒的量确定为25ml。考虑样品的浓度及检测限，提取液以稀释2倍左右为佳，因此提取液滤过后，稀释2倍作为供试品溶液。
流动相的选择实验分别以Diamonsil C185u 4.6mm×200mm柱为分析柱，考察了两种流动相对样品的分离效果，结果如下A.以乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
B.以乙腈-0.1％磷酸溶液(17∶83)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
以上两种流动相均能达到满意的分离效果，但B流动相的配制较为烦琐，故实验最终选用乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，柱温35℃。
色谱柱的选择实验分别考察了两种分析柱对样品的分离效果，如下A.以Diamonsil C185u 4.6mm×200mm为分析柱，以乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
B.以Kromasil C185u 4.6mm×200mm为分析柱，以乙腈-水(15∶85)为流动相，流速1ml/分钟，进行试验研究，结果达到满意的分离效果，主峰已达基线分离，峰形对称。
两种分析柱的分离效果均能满足要求，从本实验室的使用经验出发，最终选用Diamonsil C185u 4.6mm×200mm为分析柱。
下面药效学实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例18抗利血平眼睑下垂抑郁模型试验选取72只昆明种小鼠，皆为雄性，体重18～22g，按体重随机分为6组，多次给药按表21所列药物和剂量每日灌胃给药1次，各组动物于给药后60min，腹腔注射利血平注射剂2mg/kg。连续10日，于第10日，注射后60min将小鼠放于支架上观察2min，观察各组动物中眼睑至少关闭一半以上的动物个数，以FISHER精确检验统计，结果见表21。
表21越鞠浸膏多次给药对小鼠利血平致眼睑下垂的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01表21显示，越鞠浸膏6g/kg组连续10天给药对小鼠利血平致眼睑下垂具有显著抑制作用(P＜0.05)。
实验例19抗利血平致运动不能抑郁模型试验选取72只昆明种小鼠，皆为雄性，鼠龄7～8周，体重18～22g，按体重随机分为6组，多次给药试验按表22所列药物和剂量每日灌胃给药一次，连续7日，观察30sec内各组动物中仍然呆在滤纸中的个数，以FISHER精确检验统计，结果见表22。
表22越鞠浸膏多次给药对小鼠利血平致运动不能的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表22显示，越鞠浸膏6、3g/kg剂量组和越鞠丸组给药7天后，对小鼠利血平致运动不能分别具有极显著、明显和显著对抗作用(P＜0.001、P＜0.05或P＜0.001)。
实验例20小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型试验选取72只昆明种小鼠，皆为雄性，鼠龄8～9周，体重18～22g，按体重随机分为6组，每组12只。单次给药按表23所列药物和剂量灌胃给药一次，各组动物于给药后30min，将小鼠尾部距尖1cm处用胶布粘贴于直径1cm的PVC管上，勿使小鼠尾部扭曲折叠，然后架空PVC管，使小鼠呈倒悬状，头部距台面5cm，每两只小鼠间用隔板隔开，使其互不干扰，观察每只动物6min内的累计不动的时间(不动指标为动物除呼吸外所有肢体均不动)，结果见表23。多次给药按表20所列药物和剂量每日灌胃给药一次，连续10天，结果见表24。
表23越鞠浸膏单次给药对小鼠悬尾试验的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表23显示，越鞠浸膏6～1.5g/kg剂量组单次给药对小鼠悬尾不动时间分别有显著、明显和明显缩短(P＜0.01，P＜0.05或P＜0.05)。
表24越鞠浸膏多次给药对小鼠悬尾试验的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表24显示，越鞠浸膏6～1.5g/kg剂量组给药10天后，对小鼠悬尾不动时间分别有极显著、极显著和明显缩短(P＜0.001，P＜0.001或P＜0.05)。
实验例21慢性应激性大鼠抑郁模型的行为学试验选取SD种大鼠70只，雌雄各半，鼠龄9～10周，体重180～220g，按体重随机分层分为7组，每组10只。除正常对照组动物外，造模动物全部每笼一只孤养，接受21天各种不同的应激刺激，包括冰水游泳(4℃，5min)、夹尾(3min)、禁水(40h)、禁食(40h)、配对饲养及潮湿、束缚和通宵照明刺激，平均每种刺激2～3次。正常组大鼠每笼5只饲养，不予任何刺激。各给药组于造模同时按表25所示药物和剂量灌胃给药，连续21天。采用Open-field法观察行为。本实验所用敞箱为立方形，高40cm，长宽80cm，周壁、底面由面积相等的25块组成，用白线划分。以动物穿越底面块数为水平活动(crossing)得分，以直立次数为垂直活动(rearing)得分。第22天进行观察，每只动物测定1次，每次测定时间为3min，计数水平活动得分和垂直活动得分。结果见表25。
表25越鞠浸膏对慢性应激性抑郁模型大鼠Open-field法行为的影响
注①模型组对照组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001②各给药组与模型比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表25结果显示，慢性应激性抑郁模型大鼠的水平运动和垂直运动均极显著减少(P＜0.001)，越鞠浸膏6～1.5g/kg剂量组分别能明显或显著对抗水平运动减少(P＜0.05、P＜0.05或P＜0.01)，分别明显或显著对抗垂直运动减少(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.01)。
实验例22L-5-羟色氨酸所致小鼠震颤试验选用90只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，按体重和性别随机分层分为7组。按表26所示药物和剂量各组小鼠灌胃给药1次。给药后60min，各鼠腹腔注射5-羟色氨酸200mg/kg(不引起小鼠震颤的最高剂量)，随后将小鼠单个放在笼内(16×27cm)，观察20min内出现震颤(以动物出现特征性甩头行为为指针)的动物数。以FISHER精确检验统计，结果见表26。
表26越鞠浸膏对5-羟色氨酸震颤作用的影响
注各给药组与蒸馏水+5-羟色氨酸组比较***P＜0.001表26结果显示，仅给予小鼠L-5-羟色氨酸或受试药(越鞠浸膏和氟西汀胶囊)，动物不出现震颤，而在给予受试药后再给5-羟色氨酸，则随着越鞠浸膏剂量的增大，出现震颤的动物数增多，但无明显差异(P＞0.05)，说明越鞠浸膏有加强5-羟色氨酸震颤作用的趋势。
实验例23加强左旋多巴行为效应的试验选用90只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，按体重和性别随机分层分为7组。按表27所示药物和剂量各组小鼠灌胃给药1次。给药后60min，各鼠腹腔注射左旋多巴200mg/kg(不引起小鼠奔跑的最高剂量)，随后将小鼠单个放在笼内，观察30min内出现奔跑的动物数。以FISHER精确检验，结果见表27。
表27越鞠浸膏对左旋多巴行为效应的影响
注各给药组与蒸馏水+左旋多巴组比较***P＜0.001表27结果显示，仅给予小鼠左旋多巴或受试药(越鞠浸膏和氟西汀胶囊)，动物不出现震颤，而在给予受试药后再给左旋多巴，则有部分动物沿着笼子来回奔跑，并且随着越鞠浸膏剂量的增大，出现奔跑的动物数增多，(P＞0.05)，说明越鞠浸膏有加强左旋多巴行为效应的作用趋势。
实验例24越鞠浸膏对小鼠自发活动的影响选用84只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，随机分为7组，每组12只，试验前禁食不禁水12小时，试验安排于夜间进行，实验室温度控制在24～26℃。按表28所列药物与剂量灌胃一次。给药后0.5h，测定小鼠自发活动。测定方法将小鼠放入ZL-1计算机控制小动物成套行为活动测定仪中适应1min后，测定其3min内的活动次数，按下式计算镇静率，结果见表28。
表28越鞠浸膏对小鼠自发活动的影响
注各给药组与蒸馏水组比较*P＜0.05 **P＜0.01表28显示，越鞠浸膏6和3g/kg剂量组对小鼠自发活动分别有显著和明显的抑制作用(P＜0.01或P＜0.05)。
实验例25阈剂量戊巴比妥钠协同催眠试验选取72只昆明种小鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重18～22g，随机分为6组，每组12只，按表29所列药物与剂量各组分别灌胃一次，30min后，每只小鼠腹腔注射0.38％戊巴比妥钠38mg/kg，以翻正反射消失1分钟以上为入睡时间，从翻正反射消失到翻正反射恢复为睡眠时间，结果见表29。
表29越鞠浸膏协同阈剂量戊巴比妥钠催眠作用
注各给药组与蒸馏水组比较**P＜0.01
表29显示，越鞠浸膏对阈剂量戊巴比妥钠催眠小鼠的入睡时间和睡眠时间均无明显影响(P＞0.05)。
实验例26肝郁证模型试验选取60只SD大鼠，雌雄各半，鼠龄8～9周，体重180～200g，随机分为5组，按表30所列药物与剂量各组分别灌胃每日一次，正常对照组和肝郁模型组灌胃等体积蒸馏水。给药当天开始各组SD大鼠戴模具(单笼饲养)18天，模具为两块厚0.2cm，直径4cm的红色有机玻璃组成类似颈部枷锁形模具。
观察动物戴模具后前后情况(暴跳，抓咬笼具、模具，不断嘶叫，反应迟钝，行为迟缓，动物眼睛眯小，有眼屎，毛色枯黄，粪便小、干、少、尾呈棕红色并有鳞片出现，消瘦，体重减轻等)，第18天测定大鼠自发活动(测定方法同慢性应激性大鼠模型)，并计算自发活动增加率，并从股动脉取血测定血液流变性指标。结果用T检验统计。
表30越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠Open-field法行为的影响
注①肝郁模型组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001②各给药组与正常对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表30显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠垂直活动和水平活动都显著减少(P＜0.001)。与模型组比较，越鞠浸膏6和3g/kg剂量组皆能极显著增加动物垂直活动次数(P＜0.001)，分别能极显著和明显增加动物水平活动次数(P＜0.01或P＜0.05)。
表31越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠体重增长的影响
注①肝郁模型组与正常对照组比较▲P＜0.05▲▲▲P＜0.001②各给药组与模型组比较*P＜0.05表31显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠与正常对照组大鼠比较，体重增长极显著减少(P＜0.001)。越鞠浸膏6g/kg剂量组能明显对抗大鼠体重降低(P＜0.05)，3和1.5g/kg剂量组有对抗的趋势(P＞0.05和P＞0.05)。
表32越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠血液流变性的影响(x±SD)
注①模型组对照组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表32显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠全血粘度(高切和低切)和红细胞聚集指数均极显著升高(P＜0.001)。越鞠浸膏3和1.5g/kg剂量组分别能显著或极显著抑制全血粘度(高切和低切)的升高(P＜0.001或P＜0.01)，且与正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05)；越鞠浸膏6、3和1.5g/kg剂量组均能极显著抑制红细胞聚集指数的升高(P＜0.001)。
表33越鞠浸膏对模具法激怒肝郁证模型大鼠脑内单胺类神经递质及代谢产物含量的影响
注①模型组与正常对照组比较▲P＜0.05▲▲P＜0.01②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表33结果显示，模具法激怒肝郁证模型大鼠与对照组大鼠比较，脑内DOPAC、NE、5-HT和5-HIAA含量分别极显著、明显、显著和显著降低(P＜0.001、P＜0.05、P＜0.01和P＜0.01)。连续给药18天后越鞠浸膏6g/kg剂量组分别能明显和显著升高模型动物脑内多巴胺(DA)和5-羟吲哚(5-HIAA)的含量(P＜0.05和P＜0.01)。
实施例1越鞠胶囊剂的制备取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、炒栀子400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，每粒装胶囊内容物0.5g。
实施例2越鞠胶囊剂的制备方法取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3.5倍量水浸润1小时后，加9倍量水提取挥发油7小时；滤渣加入10倍量水煎煮2次，每次2小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15±0.02，加8倍浸膏量的80％乙醇，搅拌，静置20小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏45℃减压干燥，粉碎，得浸膏粉；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比为1∶10，50℃下保温搅拌，搅拌速度为1000rpm，搅拌时间为2小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶2，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为2时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得；实施例3取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3倍量以上水浸润1小时后，加10倍量水提取挥发油6小时，滤渣加入8倍量水煎煮2次，每次1小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15，加4倍浸膏量的90％乙醇，搅拌，静置12小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40℃减压干燥，粉碎；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比例为1∶10，60℃下保温搅拌，搅拌速度为1200rpm，搅拌时间为3小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得；实施例4三批中试样品中栀子苷含量测定取三批中试生产，对栀子苷含量进行了测定，每批平行测定3次，结果见表34。
表34样品中栀子苷含量测定结果表34
根据三批样品测定结果，每粒含栀子苷计不少于5.80mg。
实施例4栀子的定性鉴别取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开、取出、晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照品则无此斑点；实施例5取越鞠胶囊4g，研细，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml溶解作为供试品溶液；取缺苍术阴性样品4g，同法制成阴性样品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材液；取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以70℃石油醚为展开剂，展开，取出晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性样品则无此斑点；实施例6取越鞠胶囊4g，研细，加醋酸乙酯15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；取缺川芎阴性样品4g，同法制成阴性样品溶液；另川芎对照药材1g，同法制成对照品溶液；取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干；置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点，阴性样品则无此斑点；实施例7取越鞠胶囊3g，研细，加乙醚20ml，超声处理20分钟后，滤过，滤液浓缩为1ml作为供试品溶液；取缺香附阴性样品3g，同法制成阴性样品溶液；另取香附对照药材，同法制成对照药材溶液；吸取上述三种溶液各10ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5.5醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以5％磷钼酸-乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱在相应的位置显相同颜色的斑点，阴性样品则无此斑点；实施例8越鞠胶囊剂的应用1取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于抑郁症。口服，一次3粒，一日3次。
实施例9越鞠胶囊剂的应用2取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于出现眼睑下垂、四肢无力、疲倦、嗜睡等症状的抑郁症患者。口服，一次3粒，一日3次。
实施例10越鞠胶囊剂的应用3取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于出现反应迟钝，运动不能、精神抑郁的抑郁症患者。口服，一次3粒，一目3次。
实施例11越鞠胶囊剂的应用4取香附(醋制)400g、川芎400g、苍术(炒)400g、栀子(炒)400g、六神曲(炒)400g、β-环糊精110g、淀粉110g、微粉硅胶5g，以上处方制成越鞠胶囊1000粒，用于肝郁患者。口服，一次3粒，一日3次。
权利要求
1.一种中药的药物组合物，其特征在于该药物组合物胶囊剂的制备方法包括以下步骤取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3～4倍量水浸润1小时后，加8～10倍量水提取挥发油6～8小时；滤渣加入8～12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15±0.02，加4～10倍浸膏量的70-90％乙醇，搅拌，静置8-24小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40～50℃减压干燥，粉碎，得浸膏粉；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比为1∶8-12，40～60℃下保温搅拌，搅拌速度为400～1200rpm，搅拌时间为1～3小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1～3，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5-2.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物胶囊剂的制备方法包括以下步骤取等量的醋制香附、炒栀子、炒苍术、川芎、炒六神曲五味药物以饮片投料，加入3倍量以上水浸润1小时后，加10倍量水提取挥发油6小时，滤渣加入8倍量水煎煮2次，每次1小时；将水提物滤液浓缩至60℃条件下相对密度为1.15，加4倍浸膏量的90％乙醇，搅拌，静置12小时，滤过，滤渣弃去，回收乙醇，浓缩，稠膏40℃减压干燥，粉碎；挥发油用β-环糊精包合，挥发油与β-环糊精的投料比例为1∶10，60℃下保温搅拌，搅拌速度为1200rpm，搅拌时间为3小时；浸膏粉加入β-环糊精及淀粉按2∶1∶1，用90％的乙醇制粒，50℃干燥，干燥时间为1.5小时，选择用量为1.5％的微粉硅胶作为润滑剂，装入空心胶囊，制成胶囊，即得。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中胶囊剂的鉴别方法包括如下方法中的一种或几种A、取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇15～30ml超声处理20～40分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；取供试品溶和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4～6∶2.5～3.5∶1∶1比例的醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开、取出、晾干；喷以5～15％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚20～40ml，加热回流1～1.5小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液；取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4～6％对二甲氨基苯甲醛的8～12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；C、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚15～30ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩为1ml作为供试品溶液；另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5～6比例的醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以4～6％磷钼酸-乙醇溶液，105～110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置，显相同颜色的斑点；D、取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，研细，加醋酸乙酯10～20ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液；取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8～10∶1比例的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干；置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点。
4.如权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于该方法包括如下方法中的一种或几种A、取越鞠组合物制剂胶囊内容物2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1比例的醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取越鞠组合物制剂胶囊内容物3g，研细，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩为1ml，作为供试品溶液；另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶5.5比例的醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开，取出，晾干；喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；D、取越鞠组合物制剂胶囊内容物4g，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1比例的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
5.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定包括如下测定方法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10～20∶80～90乙腈-水为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长238nm；柱温35℃；外标法峰面积定量；对照品溶液制备称取在60℃减压干燥3～5小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液即得；供试品溶液制备取药物组合物的浸膏粉0.1g，恒重后称定，置25ml容量瓶中加甲醇至刻度，超声处理20～40分钟，放冷，用甲醇补足体积，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物的胶囊剂每粒含栀子苷计不得少于4.50～6.00mg。
6.如权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下测定方法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；15∶85乙腈-水为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长238nm；柱温35℃；外标法峰面积定量；对照品溶液制备称取在60℃减压干燥4小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液即得；供试品溶液制备取药物组合物的浸膏粉0.1g，恒重后称定，置25ml容量瓶中加甲醇至刻度，超声处理20分钟，放冷，用甲醇补足体积，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明胶囊剂每粒含栀子苷计不得少于4.5mg。
7.如权利要求5或6所述的含量测定方法，其特征在于其中甲醇可由70％乙醇或乙酸乙酯替代。
8.如权利要求5或6所述的含量测定方法，其特征在于其中的超声处理方法可由水浴回流方法替代。
9.如权利要求5或6所述的含量测定方法，其特征在于其中乙腈-水流动相可由乙腈-0.1％磷酸溶液流动相替代。
10.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗抑郁症的药物中的应用。
11.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备具有抑制全血粘度和红细胞聚集指数升高的功能的药物中的应用。
12.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备具有升高脑内多巴胺和5-羟吲哚含量的功能的药物中的应用。
13.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备具有治疗肝郁作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开一种越鞠组合物的胶囊剂的制备工艺、质量控制方法及其新用途。将原料药以饮片投料，加水浸润后，提取挥发油，滤渣加入8～12倍量水煎煮。将水提物滤液浓缩加乙醇，搅拌，静置，滤过，浓缩，干燥，粉碎。挥发油用β－环糊精包合，乙醇制粒，加润滑剂，制成胶囊，即得。本发明还公开了越鞠组合物胶囊制剂内容物的鉴别方法和栀子苷的含量测定方法。本发明同时公开了越鞠组合物在制备治疗抑郁症及肝郁作用的药物中的应用。
文档编号A61P7/00GK1733189SQ20041007012
公开日2006年2月15日 申请日期2004年8月2日 优先权日2004年8月2日
发明者张漪 申请人:四川亚宝光泰药业有限公司
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