油菜蜂花粉有效部位药物及制备方法和用途的制作方法
专利名称：油菜蜂花粉有效部位药物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属植物有效部位药物，主要涉及油菜(Brassica campestris L)蜂花粉(Pollen of Brassin Campestris L)制备的药物及制备方法。制备的药物可在治疗前列腺肿瘤中应用。
背景技术：
前列腺肿瘤是男性最常见的癌症之一，美国1997年癌症统计显示，在男性肿瘤中，前列腺肿瘤居发病率之首，占41％，居癌症死亡的第二位，占14％，50岁以上男性尸解前列腺肿瘤发生率高达30％。到目前为止，我国前列腺肿瘤发病率虽远低于欧美发达国家，但其发病率显著上升。随着我国人口的老年化和前列腺肿瘤普查的开展，将会出现越来越多的前列腺肿瘤患者，前列腺肿瘤已成为越来越影响公众健康的问题前列腺肿瘤的传统疗法包括手术、激光治疗、放化疗和冷冻治疗等，以上疗法均有较好疗效，但仍会有大约1/3的病人会复发且副作用较大。目前临床上多采用传统疗法加药物治疗的联合治疗，但临床上可供选择的治疗前列腺肿瘤的药物较少。
在我国的中草药宝库中，有很多治疗前列腺肿瘤的药材和药方，其中有不少药物经临床验证具有较好的疗效。采用现代化的生物和化学方法，从这些中药材中提取并筛选出活性成分或活性部位，有望获得安全高效的抗前列腺肿瘤的新药，这将产生巨大的经济效益。油菜是十字花科芸苔属植物，以菜籽榨油为种植目的一年生或越年生草本植物，油菜蜂花粉是其另一主要的经济产物。油菜蜂花粉的成分很复杂，含有蛋白质、氨基酸、糖类、维生素、激素、矿物质、脂肪酸、酶、微量元素等多种营养物质，除作为营养补剂外，还具抑制前列腺增生、调节免疫、改善糖代谢等药理活性，现经研究试验发现，花粉提取物具有抗肿瘤作用。
发明内容
本发明的目的是提供含油菜蜂花粉有效部位的药物，其制剂组成是油菜蜂花粉有效部位和药用辅料。
本发明的另一个目的是提供油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，通过以下步骤实现1、以油菜蜂花粉为原料，40～60℃干燥，再机械粉碎或超微破壁粉碎，用有机溶剂在25～40℃浸泡提取数次，有机溶剂选自乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、石油醚中任一种；2、将上述提取液浓缩，加30～50％乙醇溶解，用有机溶剂萃取，有机溶剂选自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中任一种；3、上述萃取物用硅胶拌样，过硅胶柱或使用中压分离制备仪经过高效反相硅胶柱，用混合溶剂梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集具有明显抑制作用的馏分、合并，即为具治疗前列腺肿瘤作用的油菜蜂花粉有效部位，有效部位在油菜蜂花粉生药中的质量分数得率为0.2～2.0％；硅胶选自50～100目、100～200目、200～300目中任一种。
其中过硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自比例为10∶0～0∶10的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0～0∶10的石油醚∶丙酮或10∶0∶0～1∶1∶8的石油醚∶氯仿∶丙酮中任一种。收集比例为10∶0.5～10∶3的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0.4～10∶1.5的石油醚∶丙酮或10∶10∶0.1～10∶9∶1的石油醚∶氯仿∶丙酮的洗脱馏分并合并。
高效反相硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自甲醇∶水或异丙醇∶甲醇∶水或氯仿∶甲醇∶水中的任一种。收集98∶2的甲醇∶水或20∶75∶5的异丙醇∶甲醇∶水或10∶86∶4的氯仿∶甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
TLC薄层层析条件选择硅胶G板的薄层层析板；展开剂选自8∶2的石油醚∶丙酮或4∶6的石油醚∶氯仿或5∶3∶2的石油醚∶氯仿∶丙酮或6∶4的氯仿∶乙酸乙酯；碘蒸气或醋酐∶硫酸或10％硫酸乙醇或三氯化锑的显色剂。
本发明的又一个目的是油菜蜂花粉有效部位在制备治疗前列腺肿瘤药物中的应用。
本发明提供的油菜蜂花粉有效部位加入药用辅料，制成的制剂剂型可选自软胶囊、胶囊、口服液、注射液、微乳剂。
本发明以油菜蜂花粉为原料，油菜(Brassica campestris L)是以菜籽榨油为目的一年生成越年生草本植物，在世界范围内广泛种植，我国是油菜种植大国，种植面积、年产量及消费量均居世界第一，以油菜花科作为原料，资源丰富易得，年产量700万吨以上。本发明以乙醇等有机溶剂为提取溶媒，污染小，成本低，操作方便。提取物经有机溶剂萃取分离、硅胶柱纯化精制，通过体外细胞模型筛选，去除花粉中没有抗肿瘤活性的成分，保留了具抗前列腺肿瘤的活性成分。
本发明的有益效果集中有(1)扩大了油菜蜂花粉有效部位药物在治疗前列腺肿瘤的用途。(2)在油菜蜂花粉中提供一个具治疗前列腺肿瘤作用的活性部位。(3)本发明方法设计先进、合理、稳定，操作方便，生物利用度高，同时工艺生产成本低，具较强的实用性和社会性。
具体实施例方式
本发明结合实施例作进一步说明。
实施例1取油菜蜂花粉1000g，干燥，机械粉碎，用95％乙醇35℃浸泡提取五次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加40-58％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位5g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例2取油菜花粉1500g，干燥，机械粉碎，用95％乙醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位11g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例3
取油菜蜂花粉1500g，干燥，机械粉碎，用95％乙醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200-300目硅胶拌样，经过200-300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位15g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例4取油菜蜂花粉2000g，干燥，机械粉碎，用丙酮25℃浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位14g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例5取油菜花粉2000g，干燥，机械粉碎，用28℃丙酮浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例6
取油菜蜂花粉1000g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇35℃浸泡提取五次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位6g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例7取油菜花粉1500g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位10g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例8取油菜蜂花粉1500g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0-1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位19g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例9
取油菜蜂花粉2000g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇20℃浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位10g。
有效部位加入一定稀释剂，制成微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例10取油菜花粉2000g，干燥，机械粉碎，用26℃无水乙醇浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位41g。
有效部位加入一定稀释剂，制成微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例11取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，机械粉碎，用甲醇5℃浸泡提取五次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位3g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例12
取油菜花粉1500g，50℃干燥，机械粉碎，用甲醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位24g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例13取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，机械粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位36g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例14取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，机械粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位31g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例15取油菜花粉2000g，40℃干燥，机械粉碎，用甲醇35℃浸泡提取三次。每次26小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位36g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例16取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇5℃浸泡提取五次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位17g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例17取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位32g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例18取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位46g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例19取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位51g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例20取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇35℃浸泡提取三次。每次26小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位76g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例21取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚5℃浸泡提取五次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～55％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位11g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例22取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚10℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位32g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例23取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚15℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚∶氯仿∶丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位46g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例24取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚20℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例25取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚35℃浸泡提取三次。每次26小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位67g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例26取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚5℃浸泡提取五次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加15％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位35g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例27取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚10℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加20％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例28取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚15℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加16％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位42g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例29取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚20℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加18％乙醇700ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次2000ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位41g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例30取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚35℃浸泡提取三次。每次26小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加15％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位47g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例31本发明油菜花粉抗前列腺癌有效部位药的药理学试验1、油菜花粉抗前列腺癌有效部位用二甲亚砜(DMSO)溶解，设不同梯度浓度，以阿霉素作阳性对照，DMSO作阴性对照，分别加入前列腺癌细胞株PC-3中培养96小时，用MTT法测细胞活性，测得花粉有效部位对人前列腺癌细胞株PC-3体外抑制作用半数死亡浓度(IC50)为16.21ug/ml，最强达到3.7ug/ml。
2、花粉有效部位对人前列腺癌细胞PC-3裸鼠移植瘤生产影响的药效学研究表明，腹腔给药12日后，测量肿瘤体积表明，三个样品组裸鼠移植瘤生长较阴性对照组和环磷酰胺(CTX)组缓慢，且具备量效关系。
有效部位对裸鼠移植瘤生产的抑制作用试验(第12天)
注1.TV为肿瘤体积(mm3)2.RTV为第12天与0天肿瘤体积之比3.T/C为给药组与阴性对照药RTV之比实施例32经特征显色反应及薄层层析检查，本发明油菜蜂花粉抗前腺肿瘤活性有效部位含植物脂肪酸、大量甾醇类等物质，高效液相色谱法测定本发明中抗前列腺肿瘤有效部位中活性成分甾醇类物质的含量仪器Waters高效液相仪色 谱 柱C18柱4.6mm×250mm流 动 相乙腈-水(97∶3)检测波长210nm流速1ml/min结果测得甾醇类的含量为20-90％。
无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的实施方案应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
权利要求
1.油菜蜂花粉有效部位的药物组合物，其特征是制备它的有效组分原料含有油菜蜂花粉有效部位和药用辅料。
2.油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，通过以下步骤实现(1)以油菜蜂花粉为原料，40～60℃干燥，再机械粉碎或超微破壁粉碎，用有机溶剂在25～40℃浸泡提取；(2)将步骤(1)的提取液浓缩，加30～50％乙醇溶解，用有机溶剂萃取，有机溶剂选自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中任一种；(3)将步骤(2)的萃取物用硅胶拌样，过硅胶柱或高效反相硅胶柱，用混合溶剂梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集具有明显抑制作用的馏分并合并，即为油菜蜂花粉有效部位，有效部位在油菜蜂花粉生药中的质量分数得率为0.2～2.0％。
3.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(1)中有机溶剂选自乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、石油醚中任一种。
4.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(2)中硅胶选自50～100目、100～200目、200～300目中任一种。
5.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(3)中过硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自比例为10∶0～0∶10的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0～0∶10的石油醚∶丙酮或10∶0∶0～1∶1∶8的石油醚∶氯仿∶丙酮中任一种。
6.根据权利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集比例为10∶0.5～10∶3的石油醚∶乙酸乙酯的洗脱馏分并合并。
7.根据权利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集比例为10∶0.4～10∶1.5的石油醚∶丙酮的洗脱馏分并合并。
8.根据权利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集比例为10∶10∶0.1～10∶9∶1的石油醚∶氯仿∶丙酮的洗脱馏分并合并。
19.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(3)中高效反相硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自甲醇∶水或异丙醇∶甲醇∶水或氯仿∶甲醇∶水中的任一种。
10.根据权利要求9所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集洗脱用混合溶剂比例为98∶2的甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
11.根据权利要求9所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集洗脱用混合溶剂比例为20∶75∶5的异丙醇∶甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
12.根据权利要求19所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集洗脱用混合溶剂比例为10∶86∶4的氯仿∶甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
13.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(3)中TLC薄层层析条件选用硅胶G板的薄层层析板，展开剂选自8∶2的石油醚∶丙酮或4∶6的石油醚∶氯仿或5∶3∶2的石油醚∶氯仿∶丙酮或6∶4的氯仿∶乙酸乙酯中任一种，显色剂选自碘蒸气或醋酐∶硫酸或10％硫酸乙醇或三氯化锑中的任一种。
14.根据权利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位在制备治疗前列腺肿瘤药物中的应用。
15.根据权利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位的药物，制剂剂型可选自软胶囊、胶囊、口服液、注射液、微乳剂中的任一种。
全文摘要
本发明涉及一种由油菜蜂花粉中得到的有效部位制成的药物及制备方法和用途。该药物具有治疗前列腺肿瘤作用，以油菜蜂花粉为原料，经有机溶剂提取、萃取制备花粉提取物，然后花粉提取物进一步通过硅胶柱层析纯化精制，得到具有抗前列腺肿瘤作用的有效部位，该有效部位制成的药物制剂，用于治疗前列腺肿瘤。本发明的抗前列腺肿瘤有效部位富含治疗前列腺肿瘤及相应症状的活性成分，工艺先进、稳定、生产成本低，具有极强的生产性和实用性。
文档编号A61K9/10GK1660225SQ20041007351
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月22日 优先权日2004年12月22日
发明者张冯敏, 吴健, 阮碧芳, 邱红英, 姚建标 申请人:浙江康恩贝制药股份有限公司, 浙江康恩贝药品研究开发有限公司
技术领域：
本发明属植物有效部位药物，主要涉及油菜(Brassica campestris L)蜂花粉(Pollen of Brassin Campestris L)制备的药物及制备方法。制备的药物可在治疗前列腺肿瘤中应用。
背景技术：
前列腺肿瘤是男性最常见的癌症之一，美国1997年癌症统计显示，在男性肿瘤中，前列腺肿瘤居发病率之首，占41％，居癌症死亡的第二位，占14％，50岁以上男性尸解前列腺肿瘤发生率高达30％。到目前为止，我国前列腺肿瘤发病率虽远低于欧美发达国家，但其发病率显著上升。随着我国人口的老年化和前列腺肿瘤普查的开展，将会出现越来越多的前列腺肿瘤患者，前列腺肿瘤已成为越来越影响公众健康的问题前列腺肿瘤的传统疗法包括手术、激光治疗、放化疗和冷冻治疗等，以上疗法均有较好疗效，但仍会有大约1/3的病人会复发且副作用较大。目前临床上多采用传统疗法加药物治疗的联合治疗，但临床上可供选择的治疗前列腺肿瘤的药物较少。
在我国的中草药宝库中，有很多治疗前列腺肿瘤的药材和药方，其中有不少药物经临床验证具有较好的疗效。采用现代化的生物和化学方法，从这些中药材中提取并筛选出活性成分或活性部位，有望获得安全高效的抗前列腺肿瘤的新药，这将产生巨大的经济效益。油菜是十字花科芸苔属植物，以菜籽榨油为种植目的一年生或越年生草本植物，油菜蜂花粉是其另一主要的经济产物。油菜蜂花粉的成分很复杂，含有蛋白质、氨基酸、糖类、维生素、激素、矿物质、脂肪酸、酶、微量元素等多种营养物质，除作为营养补剂外，还具抑制前列腺增生、调节免疫、改善糖代谢等药理活性，现经研究试验发现，花粉提取物具有抗肿瘤作用。
发明内容
本发明的目的是提供含油菜蜂花粉有效部位的药物，其制剂组成是油菜蜂花粉有效部位和药用辅料。
本发明的另一个目的是提供油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，通过以下步骤实现1、以油菜蜂花粉为原料，40～60℃干燥，再机械粉碎或超微破壁粉碎，用有机溶剂在25～40℃浸泡提取数次，有机溶剂选自乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、石油醚中任一种；2、将上述提取液浓缩，加30～50％乙醇溶解，用有机溶剂萃取，有机溶剂选自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中任一种；3、上述萃取物用硅胶拌样，过硅胶柱或使用中压分离制备仪经过高效反相硅胶柱，用混合溶剂梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集具有明显抑制作用的馏分、合并，即为具治疗前列腺肿瘤作用的油菜蜂花粉有效部位，有效部位在油菜蜂花粉生药中的质量分数得率为0.2～2.0％；硅胶选自50～100目、100～200目、200～300目中任一种。
其中过硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自比例为10∶0～0∶10的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0～0∶10的石油醚∶丙酮或10∶0∶0～1∶1∶8的石油醚∶氯仿∶丙酮中任一种。收集比例为10∶0.5～10∶3的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0.4～10∶1.5的石油醚∶丙酮或10∶10∶0.1～10∶9∶1的石油醚∶氯仿∶丙酮的洗脱馏分并合并。
高效反相硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自甲醇∶水或异丙醇∶甲醇∶水或氯仿∶甲醇∶水中的任一种。收集98∶2的甲醇∶水或20∶75∶5的异丙醇∶甲醇∶水或10∶86∶4的氯仿∶甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
TLC薄层层析条件选择硅胶G板的薄层层析板；展开剂选自8∶2的石油醚∶丙酮或4∶6的石油醚∶氯仿或5∶3∶2的石油醚∶氯仿∶丙酮或6∶4的氯仿∶乙酸乙酯；碘蒸气或醋酐∶硫酸或10％硫酸乙醇或三氯化锑的显色剂。
本发明的又一个目的是油菜蜂花粉有效部位在制备治疗前列腺肿瘤药物中的应用。
本发明提供的油菜蜂花粉有效部位加入药用辅料，制成的制剂剂型可选自软胶囊、胶囊、口服液、注射液、微乳剂。
本发明以油菜蜂花粉为原料，油菜(Brassica campestris L)是以菜籽榨油为目的一年生成越年生草本植物，在世界范围内广泛种植，我国是油菜种植大国，种植面积、年产量及消费量均居世界第一，以油菜花科作为原料，资源丰富易得，年产量700万吨以上。本发明以乙醇等有机溶剂为提取溶媒，污染小，成本低，操作方便。提取物经有机溶剂萃取分离、硅胶柱纯化精制，通过体外细胞模型筛选，去除花粉中没有抗肿瘤活性的成分，保留了具抗前列腺肿瘤的活性成分。
本发明的有益效果集中有(1)扩大了油菜蜂花粉有效部位药物在治疗前列腺肿瘤的用途。(2)在油菜蜂花粉中提供一个具治疗前列腺肿瘤作用的活性部位。(3)本发明方法设计先进、合理、稳定，操作方便，生物利用度高，同时工艺生产成本低，具较强的实用性和社会性。
具体实施例方式
本发明结合实施例作进一步说明。
实施例1取油菜蜂花粉1000g，干燥，机械粉碎，用95％乙醇35℃浸泡提取五次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加40-58％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位5g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例2取油菜花粉1500g，干燥，机械粉碎，用95％乙醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位11g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例3
取油菜蜂花粉1500g，干燥，机械粉碎，用95％乙醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200-300目硅胶拌样，经过200-300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位15g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例4取油菜蜂花粉2000g，干燥，机械粉碎，用丙酮25℃浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位14g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例5取油菜花粉2000g，干燥，机械粉碎，用28℃丙酮浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例6
取油菜蜂花粉1000g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇35℃浸泡提取五次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位6g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例7取油菜花粉1500g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位10g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例8取油菜蜂花粉1500g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加乙醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0-1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位19g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例9
取油菜蜂花粉2000g，干燥，机械粉碎，用无水乙醇20℃浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位10g。
有效部位加入一定稀释剂，制成微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例10取油菜花粉2000g，干燥，机械粉碎，用26℃无水乙醇浸泡提取三次。每次24小时，加丙酮量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位41g。
有效部位加入一定稀释剂，制成微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例11取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，机械粉碎，用甲醇5℃浸泡提取五次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位3g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例12
取油菜花粉1500g，50℃干燥，机械粉碎，用甲醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位24g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例13取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，机械粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位36g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例14取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，机械粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位31g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例15取油菜花粉2000g，40℃干燥，机械粉碎，用甲醇35℃浸泡提取三次。每次26小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位36g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例16取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇5℃浸泡提取五次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位17g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例17取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇40℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位32g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例18取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50-60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位46g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例19取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位51g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例20取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇35℃浸泡提取三次。每次26小时，加甲醇量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位76g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例21取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚5℃浸泡提取五次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～55％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位11g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例22取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚10℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位32g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例23取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚15℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚∶氯仿∶丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位46g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例24取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚20℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇700ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例25取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚35℃浸泡提取三次。每次26小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加50～60％乙醇600ml，混匀后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位67g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例26取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚5℃浸泡提取五次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加15％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅胶拌样，经过50～100目硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脱的馏分，合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位35g。
有效部位加入一定量的稀释剂，制成软胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例27取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚10℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加20％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅胶拌样，经过100～200目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的馏分，经体外PC-3抑制试验，具明显抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀释剂，制成胶囊，规格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治疗前列腺肿瘤作的药物制剂。
实施例28取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚15℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3000ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加16％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分，经PC-3体外抑制试验，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具治疗前列腺肿瘤作用的有效部位42g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有药物制剂。
实施例29取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚20℃浸泡提取三次。每次24小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加18％乙醇700ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次2000ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，各馏分经体外PC-3细胞试验，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脱收集的馏分具有明显的抑制作用，有明显抑制作用的馏分合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位41g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服液，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的药物制剂。
实施例30取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚35℃浸泡提取三次。每次26小时，加石油醚量为每次3500ml，合并提取液，提取液浓缩至约300ml，加15％乙醇600ml，混匀后加乙酸乙酯萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅胶拌样，经过200～300目硅胶柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集馏分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脱的、并具明显抑制PC-3作用的馏分，合并、浓缩至干，得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效部位47g。
有效部位加入一定稀释剂，制成口服微乳，即得具有治疗前列腺肿瘤作用的有效药物。
实施例31本发明油菜花粉抗前列腺癌有效部位药的药理学试验1、油菜花粉抗前列腺癌有效部位用二甲亚砜(DMSO)溶解，设不同梯度浓度，以阿霉素作阳性对照，DMSO作阴性对照，分别加入前列腺癌细胞株PC-3中培养96小时，用MTT法测细胞活性，测得花粉有效部位对人前列腺癌细胞株PC-3体外抑制作用半数死亡浓度(IC50)为16.21ug/ml，最强达到3.7ug/ml。
2、花粉有效部位对人前列腺癌细胞PC-3裸鼠移植瘤生产影响的药效学研究表明，腹腔给药12日后，测量肿瘤体积表明，三个样品组裸鼠移植瘤生长较阴性对照组和环磷酰胺(CTX)组缓慢，且具备量效关系。
有效部位对裸鼠移植瘤生产的抑制作用试验(第12天)
注1.TV为肿瘤体积(mm3)2.RTV为第12天与0天肿瘤体积之比3.T/C为给药组与阴性对照药RTV之比实施例32经特征显色反应及薄层层析检查，本发明油菜蜂花粉抗前腺肿瘤活性有效部位含植物脂肪酸、大量甾醇类等物质，高效液相色谱法测定本发明中抗前列腺肿瘤有效部位中活性成分甾醇类物质的含量仪器Waters高效液相仪色 谱 柱C18柱4.6mm×250mm流 动 相乙腈-水(97∶3)检测波长210nm流速1ml/min结果测得甾醇类的含量为20-90％。
无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的实施方案应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
权利要求
1.油菜蜂花粉有效部位的药物组合物，其特征是制备它的有效组分原料含有油菜蜂花粉有效部位和药用辅料。
2.油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，通过以下步骤实现(1)以油菜蜂花粉为原料，40～60℃干燥，再机械粉碎或超微破壁粉碎，用有机溶剂在25～40℃浸泡提取；(2)将步骤(1)的提取液浓缩，加30～50％乙醇溶解，用有机溶剂萃取，有机溶剂选自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中任一种；(3)将步骤(2)的萃取物用硅胶拌样，过硅胶柱或高效反相硅胶柱，用混合溶剂梯度洗脱，洗脱下的馏分用TLC薄层层析检测，根据TLC检测结果收集具有明显抑制作用的馏分并合并，即为油菜蜂花粉有效部位，有效部位在油菜蜂花粉生药中的质量分数得率为0.2～2.0％。
3.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(1)中有机溶剂选自乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、石油醚中任一种。
4.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(2)中硅胶选自50～100目、100～200目、200～300目中任一种。
5.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(3)中过硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自比例为10∶0～0∶10的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0～0∶10的石油醚∶丙酮或10∶0∶0～1∶1∶8的石油醚∶氯仿∶丙酮中任一种。
6.根据权利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集比例为10∶0.5～10∶3的石油醚∶乙酸乙酯的洗脱馏分并合并。
7.根据权利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集比例为10∶0.4～10∶1.5的石油醚∶丙酮的洗脱馏分并合并。
8.根据权利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集比例为10∶10∶0.1～10∶9∶1的石油醚∶氯仿∶丙酮的洗脱馏分并合并。
19.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(3)中高效反相硅胶柱梯度洗脱用混合溶剂选自甲醇∶水或异丙醇∶甲醇∶水或氯仿∶甲醇∶水中的任一种。
10.根据权利要求9所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集洗脱用混合溶剂比例为98∶2的甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
11.根据权利要求9所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集洗脱用混合溶剂比例为20∶75∶5的异丙醇∶甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
12.根据权利要求19所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是收集洗脱用混合溶剂比例为10∶86∶4的氯仿∶甲醇∶水的洗脱馏分并合并。
13.根据权利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位药物的制备方法，其特征是步骤(3)中TLC薄层层析条件选用硅胶G板的薄层层析板，展开剂选自8∶2的石油醚∶丙酮或4∶6的石油醚∶氯仿或5∶3∶2的石油醚∶氯仿∶丙酮或6∶4的氯仿∶乙酸乙酯中任一种，显色剂选自碘蒸气或醋酐∶硫酸或10％硫酸乙醇或三氯化锑中的任一种。
14.根据权利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位在制备治疗前列腺肿瘤药物中的应用。
15.根据权利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位的药物，制剂剂型可选自软胶囊、胶囊、口服液、注射液、微乳剂中的任一种。
全文摘要
本发明涉及一种由油菜蜂花粉中得到的有效部位制成的药物及制备方法和用途。该药物具有治疗前列腺肿瘤作用，以油菜蜂花粉为原料，经有机溶剂提取、萃取制备花粉提取物，然后花粉提取物进一步通过硅胶柱层析纯化精制，得到具有抗前列腺肿瘤作用的有效部位，该有效部位制成的药物制剂，用于治疗前列腺肿瘤。本发明的抗前列腺肿瘤有效部位富含治疗前列腺肿瘤及相应症状的活性成分，工艺先进、稳定、生产成本低，具有极强的生产性和实用性。
文档编号A61K9/10GK1660225SQ20041007351
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月22日 优先权日2004年12月22日
发明者张冯敏, 吴健, 阮碧芳, 邱红英, 姚建标 申请人:浙江康恩贝制药股份有限公司, 浙江康恩贝药品研究开发有限公司
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