一种防治心血管疾病的中药组合物及其制备方法
专利名称：一种防治心血管疾病的中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及该组合物的制备方法，特别涉及一种用于治疗冠心病的中药组合物及其制备方法，属中药领域。
背景技术：
冠心病是冠状动脉粥样硬化性心脏病的简称，是指冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病。由冠状动脉病变的部位、范围和程度的不同，本病可分为五型1)隐性或无症状冠心病，无症状，但有心肌缺血的心电图改变。2)心绞痛是冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时的缺血与缺氧所引起的临床症状。3)心肌梗塞是冠状动脉闭塞，血流中断，使部分心肌严重持久的缺血而发生局部坏死。临床上有剧烈而较持久的胸骨后疼痛，发热。白细胞增多、红细胞沉降率加快等。4)心肌硬化即心肌纤维化，为心肌长期供血不足，心肌纤维发生障碍或萎缩，以致纤维组织增生所致。其特点是心脏逐渐扩大，发生心律失常和心力衰竭。5)猝死指自然发生、出乎意料的突然死亡。各种心脏病都有可能生猝死，其中一半以上为冠心病所引起。因而要从根本上解决心脏病的猝死问题，首先必须有效地防治冠心病。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种具有益气活血，用于防治冠心病的中药组合物；本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明的目的是这样实现的，根据中医药学理论，利用草药独特的药性，采用毛冬青、黄芪按照一定的配伍要求，经过特定工艺加工而成。
制备本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)毛冬青1～5重量份黄芪1～10重量份优选后的比例为毛冬青1～2重量份黄芪1～5重量份进一步优选后的最佳比例为毛冬青2重量份 黄芪1～5重量份该药物组合物可以采用传统方法水煎服，也可以采用现代工艺提取精制加工成多种临床可用剂型，包括丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂等。
虽然以上制剂的剂型不同，但却可以采用相同的前处理过程，即取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取2～4次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。或取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇洗脱，收集40～80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。
这里所说的常用药用辅料，包括崩解剂，如羧甲淀粉钠；粘合剂，如不同浓度乙醇；助流剂，如硬脂酸镁；防腐剂，如亚硫酸氢钠；助溶剂，如F68；也包括能够取得相同效果的这些辅料的代用品。本方法中所用的非极性树脂，是指D101、D201、AB-8中的任一种。
针对药物特性及适应症的特点，发明人选择注射剂为最优剂型，并优选了其制备方法如下取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
或者，取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，提取液浓缩后通入装有树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。也可根据需要，制成冻干粉针剂。
本发明药物的发明人在原料药的选择及其配伍方面，进行了一系列实验研究，通过拆方试验研究，确定了制备本发明药物的原料药组成，使其与现有技术相比具有明显的突出疗效优势，实现了重要配伍组合的增效目的。
下述实验例通过观察本发明注射液制剂治疗冠心病的疗效，进一步说明本发明药物的医疗用途。
一、药效试验动物Wistar大鼠72只，雌雄各半，体重260-300g。
仪器聚乙稀管(内经1mm，2mm)，动脉夹，丝线(4#、7#)，手术器械等。电子分析天平，JUPITER S2-160A型，日本KYOTO产品。电热恒温水温箱HH.W21.Cu600，上海跃进医疗器械厂生产。722型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。
受试样品毛冬青黄芪提取物，制成的注射液。取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加注射用水，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
以总皂苷计10mg/kg、5mg/kg剂量。
分组及给药观察神经症状及组织生化指标测定试验取Wistar大鼠72只，分为6组(即假手术组，模型组、灯盏花素20mg/kg组、本品注射液10mg/kg、5mg/kg、3mg/kg组)，每组12只，雌雄各半。各组动物于缺血即刻于舌静脉给药，6小时后再给药一次。假手术组与模型组给予等量的生理盐水。
观察脑梗塞范围测定试验取Wistar大鼠72只，分为6组(即假手术组，模型组、灯盏花素20mg/kg组、本品注射液16mg/kg、8mg/kg、4mg/kg组)，每组12只，雌雄各半。给药方法同上。
方法手术过程大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，仰卧固定，分离右颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA和CCA，用静脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于距ECA与ICA分叉处约0.5cm的颈总动脉处作一切口，插入一端涂有石蜡的尼龙线(0.285mm)，插入深度为1.85±0.5mm，实现心动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留线头至略有阻力以实现心血管中动脉再灌注。在缺血3小时和再灌注0.5小时内用电灯维持大鼠肛温在35-36℃左右。假手术与其他模型鼠一样分离颈总动脉、颈内动脉及颈外静脉，但只结扎右侧颈总动脉CCA。
1.注射液5mg/kg-10mg/kg静脉注射给药对狗冠脉结扎引起的心电图ST段的影响。
表1给药前后心电图ST段的变化
试验结果表明，注射液8mg/kg-10mg/kg静脉注射给药对狗冠脉结扎引起的心电图ST段明显升高有显著治疗作用。
2.显著减小心肌梗塞范围。
表2对缺血再灌注大鼠心梗范围的影响(X±SD)
与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
试验结果显示，模型组、给药组大鼠均有不同程度梗塞灶，本品注射液10mg/kg、8mg/kg组的大鼠梗塞程度明显减轻，与模型组比较差异显著(P＜0.01和0.05)。5mg剂量组梗塞程度有一定的改善，但未能显示出统计意义。
二、对缺血再灌注模型大鼠的保护作用药物与试剂受试药及试剂同试验1。
药物配制同试验1。
试剂红四氮唑(TTC)，A.R.，北京化学试剂公司生产，批号04040414。
动物Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重180-220g。
仪器聚乙稀管(内经1mm，2mm)，静脉夹，丝线(4#、7#)，手术器械等。微循环显微观察系统。A0显微镜FOUCS FS-2088，美国产品(American Optical)。GGQ型高压汞灯，军事医学科学院实验仪器厂生产。记录系统，SHARP VC-790ET。显示器，SHARP SOLAR 21，日本产品。电子天平，JUPITER S2 160A型，日本生产。
方法与结果分组及给药取Wistar大鼠60只，分为6组(即模型对照组、灯盏花素注射液组、本品注射液10mg/kg、5mg/kg、3mg/kg组)，每组10只，雌雄各半。本品注射液各剂量组和灯盏花素注射液20mg/kg组，缺血后立即静脉注射给药一次。模型对照组给生理盐水。
方法大鼠腹腔注射3％戊巴比妥纳0.1ml/100g麻醉。大鼠右侧卧位固定，结扎右侧颈总动脉，并于其远心端及左侧颈外静脉近心端插管，两管相连以引流椎动脉供入脑Willis环的血流，同时夹闭左侧颈总动脉，造成脑缺血。缺血45min后，再灌注时间为1h。
微循环的观察在大鼠脑颞顶部开颅窗，在显微镜下小心剥离硬脑膜，用AO显微镜FOUCS FS-2088微循环显微镜观察系统下观察脑软膜微循环并录像待作进一步图像分析。分8个时点记录(给药前、给药、给药后10、20、30、40、50、60min)，录像资料的图像分析用MediaCybemetics公司出品的Image-Pro Plus图像分析软件。每只动物均观察下述几个指标①固定一根血管直径、②固定一个区域计数血管数，计算出不同时点毛细血管开放程度，比较不同组间的变化比值的差异，从而得出药物对微循环调节功能的作用。
缺血再灌注损伤程度的观测获得微循环指标后，处死大鼠，立即取脑，连续切成5片，置1％红四氮唑(TTC)中避光孵育15min，然后置10％甲醛溶液中固定24h，固定的同时褪去非特异性吸收附的染料。然后采集每片脑组强染色后图像，计算5片单面苍白区与红色区面积比，分析组间梗塞范围差异数据统计学处理数据用X±SD表示，微循环观察观测指标用方差分析进行检验。
结果对梗塞范围的影响TTC染色结果，模型组10只动物有8只脑组织大体切片染色呈不均匀染色，左右不对称，2只染色呈均匀红色；本品注射液高、中、低剂量组各10只动物分别有9、7、4只脑组织切片呈均匀染色。本品注射液三个剂量组动物大脑染色较淡(显示缺血性损伤)与均匀红色比值(染色较淡区面积/染色红色区)明显小于模型对照组，其中本品注射液高、中剂量组与对照组比较差别显著(P＜0.05-0.01)。低剂量组亦能减轻大鼠梗塞范围，但与对照组比较未能显示出统计学意义。
对血管直径大小的影响对大鼠脑微血管上端直径大小的试验结果见表3。
表3对缺血再灌注大鼠血管直径(um)的影响(X±SD)
注表中除模型对照组给生理盐水后与给药前比较无差别外，其它各剂量组给药60分钟后，与给药前比较差别均显著(P＜0.05-0.01)，提示给药能明显增加血管直径。
三、对家兔颈动脉血栓溶栓作用的影响受试样品同试验一。
阳性对照药同试验一。
测定试剂纤维蛋白原(FIBROTEK，FIB)测定试剂盒，批号527523，日本德灵公司产品。凝血酶原时间(Prothrombin Time，PT)测定试剂盒，批号527062，日本德灵公司产品。凝血酶时间(Thrombin Time，TT)测定试剂盒，批号611005，日本德灵公司产品。白陶土激活的部分凝血活酶时间(Kaolin-Activated PartialThromboplastin Time，APTT)测定试剂盒，批号527142，日本德灵公司产。
戊巴比妥钠进口分装，配成3％溶液备用。
肝素上海第一生化药业公司、上海生物化学制药厂产品。配制成0.5％溶液备用。
氯化钠注射液北京双鹤药业股份有限公司产品，批号020318812。
Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。
动物家兔72只，体重2.25±0.23kg，雌雄兼用。
仪器Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。MFV-2100电磁血流量计，日本光电公司产品。SEN-7103电子刺激器，日本光电公司产品。CA-6000全自动血凝仪，日本Sysmex公司产品。
试验方法与结果试验方法手术过程，试验前动物禁食12小时，自由饮水。3％戊巴比妥钠(30mgkg-1)麻醉动物。动物仰卧位固定在手术台上，颈部正中切口，分离出一侧颈动脉，长度3cm左右，将直径2.5～3.5mm的电磁流量计探头安放在合适位置，电磁流量计探头连接于MFV-2100电磁流量计上，记录颈动脉的血流量耳缘静脉建立静脉通道，供给药、补液和取血用。
血栓模型制备在血流探头近心端取长度约1cm的血管，在此段血管内用特制的血管钳夹闭动脉，使血管内膜粗糙，每次夹闭20sec，间隔5min，重复6次。将颈动脉的近心端和远心端用动脉夹阻断血流，向该段血管内注入10U凝血酶，20min后去掉动脉夹，电磁流量计读数为零，表明颈动脉已形成稳定的血栓，稳定10min后即可进行各项参数的观察和测定。
手术完毕及模型成功后，将所有信号输入powerlab/8SP记录仪并经生物信号采集和处理系统进行连续信号采集，试验参数由计算机全程进行监控和显示并储存于计算机上，试验结束后，作脱机处理进行数据分析、打印原始记录。
动物分组家兔72只，雌雄兼用，按体重随机分为9组，每组8只。阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g；灯盏花素注射液20mg/kg，给药时间为在颈动脉血栓形成并老化30min后，以上药物1分钟内静脉注射完，观察时间为120min。
检测指标颈动脉血流量 将电磁流量计的输出端连接至Powerlab/8SP记录仪输入端，显示和储存数据，同时，电磁流量计上显示出每分钟血流量，读取并记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的血流量值。
心电图将针状电极插入四肢，经ML-132心电放大器测量标准II导联心电图。记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的心率变化。
栓塞动脉再通的判定连续记录颈动脉血流量，以给药后血流量回升达到基础值的50％以上，为颈动脉血管再通，再灌注后血流量再次降至零为再栓塞。统计给药后120min血管再通动物数，并计算血管再通率(％)。
统计学处理所有数据以平均数±标准差表示。采用配对t检验比较给药前后均数差异显著性，非配对t检验比较组间平均数差异显著性。
结果对颈动脉血栓的溶栓效果家兔静脉注射三种提取物单药、伍用给药溶栓效果见表4。
表4对栓塞颈动脉再通动物数及再通率的影响(X±S，n＝8)
试验结果显示，血栓形成后，血管外观呈暗红色，血栓形成段血流呈终止状态。生理盐水对照组在整个试验过程中未见栓塞血管再通。
以下以
具体实施例方式
来进一步阐述本发明的技术方案，但本发明申请所要保护的内容并不仅于这些剂型。实际生产中原料药的用量也不仅于实施例用量，可以以吨、公斤、克等为单位，但各原料药的用量配比仍依据本发明的技术方案。
具体实施例方式
实施例1毛冬青500g 黄芪5000g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加50％乙醇，提取1次，滤过，减压浓缩成稠膏，真空干燥，干膏粉碎成细粉，加适量淀粉制成1000片，包薄膜衣，即得。
实施例2毛冬青4000g 黄芪800g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，减压浓缩成稠膏，真空干燥，干膏粉碎成细粉，加适量淀粉制成300g，装胶囊，制成1000粒，即得。
实施例3毛冬青1000g 黄芪5000g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加60％乙醇，提取2次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加吐温8015ml、亚硫酸氢钠2g、注射用水适量，制成1000ml，滤过，即得。
实施例4毛冬青3000g 黄芪1500g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加60％乙醇，提取2次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、15％乙醇、40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加0.1％的亚硫酸氢钠、注射用水适量，制成1000ml，滤过，即得。
实施例5毛冬青2000g 黄芪2000g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有大孔树脂AB-8型的色谱柱中，依次用水、25％乙醇、80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加5％甘露醇，经冻干，制成注射用冻干粉，即得。
实施例5其他各实验例中两味药配比关系
权利要求
1.一种防治心血管疾病的中药组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的毛冬青1～5重量份、黄芪1～10重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述原料药制成的毛冬青1～2重量份、黄芪1～5重量份。
3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述原料药制成的毛冬青2重量份、黄芪1～5重量份。
4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于该组合物被制成丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂中的任一种。
5.如权利要求4所述中物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下过程取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取2～4次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。
6.如权利要求5所述中药组合物的制备方法，其特征在于注射剂的制备方法为取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
7.如权利要求4所述中物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下过程取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇洗脱，收集40～80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。
8.如权利要求7所述中药组合物的制备方法，其特征在于注射剂的制备方法为取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，提取液浓缩后通入装有树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
9.如权利要求7或8所述的中药组合物的制备方法，其特征在于所说的非极性树脂是指大孔树脂D101、大孔树脂D201、大孔树脂AB-8中的任一种。
10.如权利要求1或2或3所述的药物组合物在制备用于防治冠心病的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗心血管疾病的中药组合物。该中药组合物是以毛冬青、黄芪为原料，按照一定的配伍要求，用乙醇对原料药进行混合提取、精制得到提取物，制备成各种药物剂型，优选制备成注射剂。该中药组合物对心血管疾病，尤其是冠心病有显著的治疗作用。本发明同时公开了该中药组合物的制备方法。
文档编号A61P9/00GK1981803SQ20051020079
公开日2007年6月20日 申请日期2005年12月13日 优先权日2005年12月13日
发明者黄伟民 申请人:黄伟民
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及该组合物的制备方法，特别涉及一种用于治疗冠心病的中药组合物及其制备方法，属中药领域。
背景技术：
冠心病是冠状动脉粥样硬化性心脏病的简称，是指冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病。由冠状动脉病变的部位、范围和程度的不同，本病可分为五型1)隐性或无症状冠心病，无症状，但有心肌缺血的心电图改变。2)心绞痛是冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时的缺血与缺氧所引起的临床症状。3)心肌梗塞是冠状动脉闭塞，血流中断，使部分心肌严重持久的缺血而发生局部坏死。临床上有剧烈而较持久的胸骨后疼痛，发热。白细胞增多、红细胞沉降率加快等。4)心肌硬化即心肌纤维化，为心肌长期供血不足，心肌纤维发生障碍或萎缩，以致纤维组织增生所致。其特点是心脏逐渐扩大，发生心律失常和心力衰竭。5)猝死指自然发生、出乎意料的突然死亡。各种心脏病都有可能生猝死，其中一半以上为冠心病所引起。因而要从根本上解决心脏病的猝死问题，首先必须有效地防治冠心病。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种具有益气活血，用于防治冠心病的中药组合物；本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明的目的是这样实现的，根据中医药学理论，利用草药独特的药性，采用毛冬青、黄芪按照一定的配伍要求，经过特定工艺加工而成。
制备本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)毛冬青1～5重量份黄芪1～10重量份优选后的比例为毛冬青1～2重量份黄芪1～5重量份进一步优选后的最佳比例为毛冬青2重量份 黄芪1～5重量份该药物组合物可以采用传统方法水煎服，也可以采用现代工艺提取精制加工成多种临床可用剂型，包括丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂等。
虽然以上制剂的剂型不同，但却可以采用相同的前处理过程，即取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取2～4次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。或取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇洗脱，收集40～80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。
这里所说的常用药用辅料，包括崩解剂，如羧甲淀粉钠；粘合剂，如不同浓度乙醇；助流剂，如硬脂酸镁；防腐剂，如亚硫酸氢钠；助溶剂，如F68；也包括能够取得相同效果的这些辅料的代用品。本方法中所用的非极性树脂，是指D101、D201、AB-8中的任一种。
针对药物特性及适应症的特点，发明人选择注射剂为最优剂型，并优选了其制备方法如下取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
或者，取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，提取液浓缩后通入装有树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。也可根据需要，制成冻干粉针剂。
本发明药物的发明人在原料药的选择及其配伍方面，进行了一系列实验研究，通过拆方试验研究，确定了制备本发明药物的原料药组成，使其与现有技术相比具有明显的突出疗效优势，实现了重要配伍组合的增效目的。
下述实验例通过观察本发明注射液制剂治疗冠心病的疗效，进一步说明本发明药物的医疗用途。
一、药效试验动物Wistar大鼠72只，雌雄各半，体重260-300g。
仪器聚乙稀管(内经1mm，2mm)，动脉夹，丝线(4#、7#)，手术器械等。电子分析天平，JUPITER S2-160A型，日本KYOTO产品。电热恒温水温箱HH.W21.Cu600，上海跃进医疗器械厂生产。722型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。
受试样品毛冬青黄芪提取物，制成的注射液。取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加注射用水，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
以总皂苷计10mg/kg、5mg/kg剂量。
分组及给药观察神经症状及组织生化指标测定试验取Wistar大鼠72只，分为6组(即假手术组，模型组、灯盏花素20mg/kg组、本品注射液10mg/kg、5mg/kg、3mg/kg组)，每组12只，雌雄各半。各组动物于缺血即刻于舌静脉给药，6小时后再给药一次。假手术组与模型组给予等量的生理盐水。
观察脑梗塞范围测定试验取Wistar大鼠72只，分为6组(即假手术组，模型组、灯盏花素20mg/kg组、本品注射液16mg/kg、8mg/kg、4mg/kg组)，每组12只，雌雄各半。给药方法同上。
方法手术过程大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，仰卧固定，分离右颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA和CCA，用静脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于距ECA与ICA分叉处约0.5cm的颈总动脉处作一切口，插入一端涂有石蜡的尼龙线(0.285mm)，插入深度为1.85±0.5mm，实现心动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留线头至略有阻力以实现心血管中动脉再灌注。在缺血3小时和再灌注0.5小时内用电灯维持大鼠肛温在35-36℃左右。假手术与其他模型鼠一样分离颈总动脉、颈内动脉及颈外静脉，但只结扎右侧颈总动脉CCA。
1.注射液5mg/kg-10mg/kg静脉注射给药对狗冠脉结扎引起的心电图ST段的影响。
表1给药前后心电图ST段的变化
试验结果表明，注射液8mg/kg-10mg/kg静脉注射给药对狗冠脉结扎引起的心电图ST段明显升高有显著治疗作用。
2.显著减小心肌梗塞范围。
表2对缺血再灌注大鼠心梗范围的影响(X±SD)
与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
试验结果显示，模型组、给药组大鼠均有不同程度梗塞灶，本品注射液10mg/kg、8mg/kg组的大鼠梗塞程度明显减轻，与模型组比较差异显著(P＜0.01和0.05)。5mg剂量组梗塞程度有一定的改善，但未能显示出统计意义。
二、对缺血再灌注模型大鼠的保护作用药物与试剂受试药及试剂同试验1。
药物配制同试验1。
试剂红四氮唑(TTC)，A.R.，北京化学试剂公司生产，批号04040414。
动物Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重180-220g。
仪器聚乙稀管(内经1mm，2mm)，静脉夹，丝线(4#、7#)，手术器械等。微循环显微观察系统。A0显微镜FOUCS FS-2088，美国产品(American Optical)。GGQ型高压汞灯，军事医学科学院实验仪器厂生产。记录系统，SHARP VC-790ET。显示器，SHARP SOLAR 21，日本产品。电子天平，JUPITER S2 160A型，日本生产。
方法与结果分组及给药取Wistar大鼠60只，分为6组(即模型对照组、灯盏花素注射液组、本品注射液10mg/kg、5mg/kg、3mg/kg组)，每组10只，雌雄各半。本品注射液各剂量组和灯盏花素注射液20mg/kg组，缺血后立即静脉注射给药一次。模型对照组给生理盐水。
方法大鼠腹腔注射3％戊巴比妥纳0.1ml/100g麻醉。大鼠右侧卧位固定，结扎右侧颈总动脉，并于其远心端及左侧颈外静脉近心端插管，两管相连以引流椎动脉供入脑Willis环的血流，同时夹闭左侧颈总动脉，造成脑缺血。缺血45min后，再灌注时间为1h。
微循环的观察在大鼠脑颞顶部开颅窗，在显微镜下小心剥离硬脑膜，用AO显微镜FOUCS FS-2088微循环显微镜观察系统下观察脑软膜微循环并录像待作进一步图像分析。分8个时点记录(给药前、给药、给药后10、20、30、40、50、60min)，录像资料的图像分析用MediaCybemetics公司出品的Image-Pro Plus图像分析软件。每只动物均观察下述几个指标①固定一根血管直径、②固定一个区域计数血管数，计算出不同时点毛细血管开放程度，比较不同组间的变化比值的差异，从而得出药物对微循环调节功能的作用。
缺血再灌注损伤程度的观测获得微循环指标后，处死大鼠，立即取脑，连续切成5片，置1％红四氮唑(TTC)中避光孵育15min，然后置10％甲醛溶液中固定24h，固定的同时褪去非特异性吸收附的染料。然后采集每片脑组强染色后图像，计算5片单面苍白区与红色区面积比，分析组间梗塞范围差异数据统计学处理数据用X±SD表示，微循环观察观测指标用方差分析进行检验。
结果对梗塞范围的影响TTC染色结果，模型组10只动物有8只脑组织大体切片染色呈不均匀染色，左右不对称，2只染色呈均匀红色；本品注射液高、中、低剂量组各10只动物分别有9、7、4只脑组织切片呈均匀染色。本品注射液三个剂量组动物大脑染色较淡(显示缺血性损伤)与均匀红色比值(染色较淡区面积/染色红色区)明显小于模型对照组，其中本品注射液高、中剂量组与对照组比较差别显著(P＜0.05-0.01)。低剂量组亦能减轻大鼠梗塞范围，但与对照组比较未能显示出统计学意义。
对血管直径大小的影响对大鼠脑微血管上端直径大小的试验结果见表3。
表3对缺血再灌注大鼠血管直径(um)的影响(X±SD)
注表中除模型对照组给生理盐水后与给药前比较无差别外，其它各剂量组给药60分钟后，与给药前比较差别均显著(P＜0.05-0.01)，提示给药能明显增加血管直径。
三、对家兔颈动脉血栓溶栓作用的影响受试样品同试验一。
阳性对照药同试验一。
测定试剂纤维蛋白原(FIBROTEK，FIB)测定试剂盒，批号527523，日本德灵公司产品。凝血酶原时间(Prothrombin Time，PT)测定试剂盒，批号527062，日本德灵公司产品。凝血酶时间(Thrombin Time，TT)测定试剂盒，批号611005，日本德灵公司产品。白陶土激活的部分凝血活酶时间(Kaolin-Activated PartialThromboplastin Time，APTT)测定试剂盒，批号527142，日本德灵公司产。
戊巴比妥钠进口分装，配成3％溶液备用。
肝素上海第一生化药业公司、上海生物化学制药厂产品。配制成0.5％溶液备用。
氯化钠注射液北京双鹤药业股份有限公司产品，批号020318812。
Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。
动物家兔72只，体重2.25±0.23kg，雌雄兼用。
仪器Powerlab/8SP数据记录分析仪，澳大利亚ADInstrument Pty.Ltd.产品。MFV-2100电磁血流量计，日本光电公司产品。SEN-7103电子刺激器，日本光电公司产品。CA-6000全自动血凝仪，日本Sysmex公司产品。
试验方法与结果试验方法手术过程，试验前动物禁食12小时，自由饮水。3％戊巴比妥钠(30mgkg-1)麻醉动物。动物仰卧位固定在手术台上，颈部正中切口，分离出一侧颈动脉，长度3cm左右，将直径2.5～3.5mm的电磁流量计探头安放在合适位置，电磁流量计探头连接于MFV-2100电磁流量计上，记录颈动脉的血流量耳缘静脉建立静脉通道，供给药、补液和取血用。
血栓模型制备在血流探头近心端取长度约1cm的血管，在此段血管内用特制的血管钳夹闭动脉，使血管内膜粗糙，每次夹闭20sec，间隔5min，重复6次。将颈动脉的近心端和远心端用动脉夹阻断血流，向该段血管内注入10U凝血酶，20min后去掉动脉夹，电磁流量计读数为零，表明颈动脉已形成稳定的血栓，稳定10min后即可进行各项参数的观察和测定。
手术完毕及模型成功后，将所有信号输入powerlab/8SP记录仪并经生物信号采集和处理系统进行连续信号采集，试验参数由计算机全程进行监控和显示并储存于计算机上，试验结束后，作脱机处理进行数据分析、打印原始记录。
动物分组家兔72只，雌雄兼用，按体重随机分为9组，每组8只。阴性对照组，静脉注射注射用水0.1ml/100g；灯盏花素注射液20mg/kg，给药时间为在颈动脉血栓形成并老化30min后，以上药物1分钟内静脉注射完，观察时间为120min。
检测指标颈动脉血流量 将电磁流量计的输出端连接至Powerlab/8SP记录仪输入端，显示和储存数据，同时，电磁流量计上显示出每分钟血流量，读取并记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的血流量值。
心电图将针状电极插入四肢，经ML-132心电放大器测量标准II导联心电图。记录栓塞前、栓塞后、给药前、给药后15、30、45、60、90和120min时的心率变化。
栓塞动脉再通的判定连续记录颈动脉血流量，以给药后血流量回升达到基础值的50％以上，为颈动脉血管再通，再灌注后血流量再次降至零为再栓塞。统计给药后120min血管再通动物数，并计算血管再通率(％)。
统计学处理所有数据以平均数±标准差表示。采用配对t检验比较给药前后均数差异显著性，非配对t检验比较组间平均数差异显著性。
结果对颈动脉血栓的溶栓效果家兔静脉注射三种提取物单药、伍用给药溶栓效果见表4。
表4对栓塞颈动脉再通动物数及再通率的影响(X±S，n＝8)
试验结果显示，血栓形成后，血管外观呈暗红色，血栓形成段血流呈终止状态。生理盐水对照组在整个试验过程中未见栓塞血管再通。
以下以
具体实施例方式
来进一步阐述本发明的技术方案，但本发明申请所要保护的内容并不仅于这些剂型。实际生产中原料药的用量也不仅于实施例用量，可以以吨、公斤、克等为单位，但各原料药的用量配比仍依据本发明的技术方案。
具体实施例方式
实施例1毛冬青500g 黄芪5000g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加50％乙醇，提取1次，滤过，减压浓缩成稠膏，真空干燥，干膏粉碎成细粉，加适量淀粉制成1000片，包薄膜衣，即得。
实施例2毛冬青4000g 黄芪800g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，减压浓缩成稠膏，真空干燥，干膏粉碎成细粉，加适量淀粉制成300g，装胶囊，制成1000粒，即得。
实施例3毛冬青1000g 黄芪5000g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加60％乙醇，提取2次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加吐温8015ml、亚硫酸氢钠2g、注射用水适量，制成1000ml，滤过，即得。
实施例4毛冬青3000g 黄芪1500g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加60％乙醇，提取2次，滤过，提取液浓缩后通入装有AB-8树脂的色谱柱中，依次用水、15％乙醇、40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加0.1％的亚硫酸氢钠、注射用水适量，制成1000ml，滤过，即得。
实施例5毛冬青2000g 黄芪2000g取毛冬青、黄芪药材，粉碎成粗粉，加70％乙醇，提取3次，滤过，提取液浓缩后通入装有大孔树脂AB-8型的色谱柱中，依次用水、25％乙醇、80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加5％甘露醇，经冻干，制成注射用冻干粉，即得。
实施例5其他各实验例中两味药配比关系
权利要求
1.一种防治心血管疾病的中药组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的毛冬青1～5重量份、黄芪1～10重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述原料药制成的毛冬青1～2重量份、黄芪1～5重量份。
3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述原料药制成的毛冬青2重量份、黄芪1～5重量份。
4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于该组合物被制成丸剂、散剂、胶剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂中的任一种。
5.如权利要求4所述中物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下过程取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取2～4次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。
6.如权利要求5所述中药组合物的制备方法，其特征在于注射剂的制备方法为取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤1次，将正丁醇液蒸干，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
7.如权利要求4所述中物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下过程取毛冬青、黄芪药材，加20～40％乙醇，提取1～3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，浓缩后通入装有非极性树脂的色谱柱中，依次用水、15～25％乙醇、40～80％乙醇洗脱，收集40～80％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，将此提取物加入常规药用辅料，制成所需剂型。
8.如权利要求7所述中药组合物的制备方法，其特征在于注射剂的制备方法为取毛冬青、黄芪药材，加30％乙醇，提取3次，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇使含醇量为75％，滤过，回收乙醇，水液滤过，提取液浓缩后通入装有树脂的色谱柱中，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部分并经过真空干燥，得总皂苷提取物，加注射用水及适量辅料，搅拌使溶解，滤过，灭菌，得注射液。
9.如权利要求7或8所述的中药组合物的制备方法，其特征在于所说的非极性树脂是指大孔树脂D101、大孔树脂D201、大孔树脂AB-8中的任一种。
10.如权利要求1或2或3所述的药物组合物在制备用于防治冠心病的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗心血管疾病的中药组合物。该中药组合物是以毛冬青、黄芪为原料，按照一定的配伍要求，用乙醇对原料药进行混合提取、精制得到提取物，制备成各种药物剂型，优选制备成注射剂。该中药组合物对心血管疾病，尤其是冠心病有显著的治疗作用。本发明同时公开了该中药组合物的制备方法。
文档编号A61P9/00GK1981803SQ20051020079
公开日2007年6月20日 申请日期2005年12月13日 优先权日2005年12月13日
发明者黄伟民 申请人:黄伟民
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