一种哲罗鱼生物制片技术的制作方法
专利名称：一种哲罗鱼生物制片技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种制片技术。
背景技术：
目前，采用的常规生物制片技术都是用苯醇类作为透明剂和石蜡的有机溶剂，经苯醇类作用的一些生物材料会收缩变形，硬化脆化，不能制做成完整的片子，致使实验无法继续进行，而且苯类物质对人的造血器官、神经系统、消化系统都有毒害作用，如长期反复接触苯类，甚至对中枢神经有麻痹作用，同时也会造成环境污染；常规生物制片技术是采用中性树胶作为封片剂，但是存在封片后看不清楚的问题。现有的常规生物制片技术针对性差，缺少针对单一物种的制片技术。
发明内容
本发明提供了一种哲罗鱼生物制片技术，目的是为了解决现有常规生物制片技术存在制片不完整、封片后看不清楚以及试剂有害的问题。哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇(Terpineol)中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色(苏木精-伊红染色法)，然后采用Euparal (英译汉为优巴拉尔)封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的各种组织；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本发明采用兼具脱水作用的透明剂松油醇(Terpineol)代替无水乙醇和二甲苯制作石蜡切片，并以Euparal (优巴拉尔)封片，改变了历来采用的苯醇类作为有机溶剂，中性树胶作为封片剂，这不仅解决了生物制片技术的难题，而且较常规制作方法节省了许多步聚，减少了环境污染，获得了满意的效果。本发明采用松油醇的优点是它能与醇和醚相混溶，难溶于水，也可溶解石蜡、优巴拉尔，且无毒。本发明采用Euparal的优点是1、生物样本可以直接从乙醇固定液中取出，封片； 2、干燥快一般24h ；3、折光率为1. 483较中性树胶(1. 578)为低，比较接近动植物细胞的折光系数(1.4左右)，因此，许多染色或染色很浅的组织，在中性树胶中看不清的，用优巴拉尔封片就能显示出来。本发明哲罗鱼生物制片技术所得的哲罗鱼玻片标本，具有染色新鲜，酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明的特点。
图1为具体实施方式
九中所得哲罗鱼成熟的卵子的玻片标本的显微图；图2为具体实施方式
十中所得哲罗鱼口腔上皮组织的玻片标本的显微图；图3为具体实施方式
十一中所得哲罗鱼幽门盲囊的玻片标本的显微图；图4为具体实施方式
十二中所得哲罗鱼卵巢的玻片标本的显微图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇 (Terpineol)中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行 HE染色(苏木精-伊红染色法)，然后采用Euparal (英译汉为优巴拉尔)封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的各种组织；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本实施方式步骤一中流水冲后的哲罗鱼样本可置于体积浓度为70%的乙醇中长期保存。本实施方式中松油醇(Terpineol)和Euparal (英译汉为优巴拉尔)，均为现有市售产品，可购买得到。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中Bouin氏液由 25ml的甲醛、75ml的苦味酸饱和溶液和5ml的冰醋酸组成。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一置于松油醇中 30min，中间须更换松油醇一次。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一置于石蜡中池进行包埋，中间须更换石蜡一次。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中40min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中32 38min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中35min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
九本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中35min， 取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼成熟的卵子；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼成熟的卵子的玻片标本，由图1中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
具体实施方式
十本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30min， 取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的口腔上皮组织；步骤一中甲液按体积份数由 6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼口腔上皮组织的玻片标本，由图2中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
具体实施方式
十一本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中40min， 取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的幽门盲囊；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼幽门盲囊的玻片标本，由图3中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
具体实施方式
十二 本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定2h，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的卵巢；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼卵巢的玻片标本，由图4中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
权利要求
1.一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、 哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中 30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的各种组织；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成。
2.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤一中Bouin氏液由25ml的甲醛、75ml的苦味酸饱和溶液和5ml的冰醋酸组成。
3.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤一置于松油醇中 30min，中间须更换松油醇一次。
4.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤一置于石蜡中池进行包埋，中间须更换石蜡一次。
5.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中32 38min。
6.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中35min。
全文摘要
一种哲罗鱼生物制片技术，它涉及一种制片技术。它解决了现有常规生物制片技术存在制片不完整、封片后看不清楚以及试剂有害的问题。方法一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定，然后流水冲洗，再依次置于甲液、乙液和松油醇中；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中，再置于石蜡中包埋，冷却后切片；三、切片进行HE染色，然后采用优巴拉尔封片即完成。本发明中哲罗鱼生物制片技术所得的哲罗鱼玻片标本，具有染色新鲜，酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明的特点，较常规制作方法节省了许多步骤，减少了环境污染。
文档编号G09B23/36GK102184670SQ20111002828
公开日2011年9月14日 申请日期2011年1月26日 优先权日2011年1月26日
发明者关海红, 尹家胜 申请人:中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
技术领域：
本发明涉及一种制片技术。
背景技术：
目前，采用的常规生物制片技术都是用苯醇类作为透明剂和石蜡的有机溶剂，经苯醇类作用的一些生物材料会收缩变形，硬化脆化，不能制做成完整的片子，致使实验无法继续进行，而且苯类物质对人的造血器官、神经系统、消化系统都有毒害作用，如长期反复接触苯类，甚至对中枢神经有麻痹作用，同时也会造成环境污染；常规生物制片技术是采用中性树胶作为封片剂，但是存在封片后看不清楚的问题。现有的常规生物制片技术针对性差，缺少针对单一物种的制片技术。
发明内容
本发明提供了一种哲罗鱼生物制片技术，目的是为了解决现有常规生物制片技术存在制片不完整、封片后看不清楚以及试剂有害的问题。哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇(Terpineol)中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色(苏木精-伊红染色法)，然后采用Euparal (英译汉为优巴拉尔)封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的各种组织；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本发明采用兼具脱水作用的透明剂松油醇(Terpineol)代替无水乙醇和二甲苯制作石蜡切片，并以Euparal (优巴拉尔)封片，改变了历来采用的苯醇类作为有机溶剂，中性树胶作为封片剂，这不仅解决了生物制片技术的难题，而且较常规制作方法节省了许多步聚，减少了环境污染，获得了满意的效果。本发明采用松油醇的优点是它能与醇和醚相混溶，难溶于水，也可溶解石蜡、优巴拉尔，且无毒。本发明采用Euparal的优点是1、生物样本可以直接从乙醇固定液中取出，封片； 2、干燥快一般24h ；3、折光率为1. 483较中性树胶(1. 578)为低，比较接近动植物细胞的折光系数(1.4左右)，因此，许多染色或染色很浅的组织，在中性树胶中看不清的，用优巴拉尔封片就能显示出来。本发明哲罗鱼生物制片技术所得的哲罗鱼玻片标本，具有染色新鲜，酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明的特点。
图1为具体实施方式
九中所得哲罗鱼成熟的卵子的玻片标本的显微图；图2为具体实施方式
十中所得哲罗鱼口腔上皮组织的玻片标本的显微图；图3为具体实施方式
十一中所得哲罗鱼幽门盲囊的玻片标本的显微图；图4为具体实施方式
十二中所得哲罗鱼卵巢的玻片标本的显微图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇 (Terpineol)中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行 HE染色(苏木精-伊红染色法)，然后采用Euparal (英译汉为优巴拉尔)封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的各种组织；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本实施方式步骤一中流水冲后的哲罗鱼样本可置于体积浓度为70%的乙醇中长期保存。本实施方式中松油醇(Terpineol)和Euparal (英译汉为优巴拉尔)，均为现有市售产品，可购买得到。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中Bouin氏液由 25ml的甲醛、75ml的苦味酸饱和溶液和5ml的冰醋酸组成。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一置于松油醇中 30min，中间须更换松油醇一次。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一置于石蜡中池进行包埋，中间须更换石蜡一次。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中40min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中32 38min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中35min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
九本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中35min， 取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼成熟的卵子；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼成熟的卵子的玻片标本，由图1中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
具体实施方式
十本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30min， 取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的口腔上皮组织；步骤一中甲液按体积份数由 6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼口腔上皮组织的玻片标本，由图2中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
具体实施方式
十一本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中40min， 取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的幽门盲囊；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼幽门盲囊的玻片标本，由图3中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
具体实施方式
十二 本实施方式哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定2h，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的卵巢；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成。本实施方式中所得哲罗鱼卵巢的玻片标本，由图4中，可见，标本中样品的酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明。
权利要求
1.一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于哲罗鱼生物制片技术按以下步骤进行一、 哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定池，然后用流水冲洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中 30 40min，取出后置于石蜡中池进行包埋，室温下冷却后进行切片；三、切片进行HE染色，然后采用Euparal封片，即完成哲罗鱼生物制片；其中步骤一中哲罗鱼样本为哲罗鱼的各种组织；步骤一中甲液按体积份数由6份无水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成；步骤一中乙液按体积份数由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸组成。
2.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤一中Bouin氏液由25ml的甲醛、75ml的苦味酸饱和溶液和5ml的冰醋酸组成。
3.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤一置于松油醇中 30min，中间须更换松油醇一次。
4.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤一置于石蜡中池进行包埋，中间须更换石蜡一次。
5.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中32 38min。
6.根据权利要求1所述的一种哲罗鱼生物制片技术，其特征在于步骤二中哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中35min。
全文摘要
一种哲罗鱼生物制片技术，它涉及一种制片技术。它解决了现有常规生物制片技术存在制片不完整、封片后看不清楚以及试剂有害的问题。方法一、哲罗鱼样本采用Bouin氏液固定，然后流水冲洗，再依次置于甲液、乙液和松油醇中；二、哲罗鱼样本从松油醇中取出后置于松油醇与石蜡等体积的混合液中，再置于石蜡中包埋，冷却后切片；三、切片进行HE染色，然后采用优巴拉尔封片即完成。本发明中哲罗鱼生物制片技术所得的哲罗鱼玻片标本，具有染色新鲜，酸碱细胞分明，制片结构完整，图像清晰，轮廓分明的特点，较常规制作方法节省了许多步骤，减少了环境污染。
文档编号G09B23/36GK102184670SQ20111002828
公开日2011年9月14日 申请日期2011年1月26日 优先权日2011年1月26日
发明者关海红, 尹家胜 申请人:中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
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