增强薏苡仁活性的工艺方法
专利名称：增强薏苡仁活性的工艺方法
技术领域：
本发明涉及到用微生物转化技术处理中药的方法。
背景技术：
薏苡仁是一种药、食两用的中药，具有抗癌、抗病毒、调节免疫等诸多功效，可以开发成各种药物、保健食品、美容化妆品等。1957年，日本中山宗春发现薏苡仁乙醇提取物有抗癌作用，1984年，沼田光弘经研究认为抗癌成分是棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸。我国刘和众发明了一种用索氏抽提法从薏苡仁中提取抗癌物质中性脂的方法(91106269.6)，还申请了薏苡仁提取物在制备治疗红斑角化症、鳞状毛囊角化症、红皮症药物中的应用(ZL93115904.0)，李大鹏(申请号95115453.2)申请了薏苡仁的新医疗用途，即薏苡仁在制备具有抗艾滋病、止痛和保护胃粘膜作用的药物中的应用，李大鹏还申请了(申请号92110839.7)一种用于配制抗癌静脉乳剂用的提取中性油脂的方法。邹远东(申请号01141627.0)通过利用蛋白酶处理来增加人对薏苡有效成分的吸收，增加其抗癌活性。
采取某种工艺提高和增加薏苡仁的药用活性成分再进行提取，目前尚无有效的方法。
发明内容
本发明的目的在于克服已有技术的缺陷，提供一种通过微生物途径增强薏苡仁活性的工艺方法。
本发明所述的增强薏苡仁活性的工艺方法由以下步骤组成一、将薏苡仁粉碎，放入容器内，加入水使其充分湿润；二、将已培养好的根霉菌培养物或提取根霉菌所产生的酶，加入上述薏苡仁粉中，搅拌均匀，在40-100℃条件下转化处理4-30小时。
上述的薏苡仁为市售的薏苡仁，既可以是薏苡仁，也可以是薏苡仁中特定的有效成分；所述的根霉菌可以为市售的根霉菌如根霉酒曲；所述的根霉菌培养物为根霉菌用常规方法培养而获得的培养物；所述的根霉菌产生的酶为根霉菌按常规的微生物培养方法培养后，经常规的酶提取方法获得的酶。所述的根霉菌可直接采用市售的、连载体一起加入，也可以采用将根霉菌株接种于培养液中，培养好后，用其培养物，其用量为0.01％--10％，达到发酵目的即可。所述的提取根霉菌所产生的酶的用量为0.001％--0.1％。
在步骤一中加入水的目的主要是使薏苡仁粉充分湿润，便于转化，加入量一般为薏苡仁粉的1倍以上，如果加入量太大，会增加后处理的成本。
本发明所述的根霉菌含有丰富的酶系，如糖化酶、淀粉酶、脂肪酶等，不仅能降解薏苡仁的大分子如淀粉、蛋白质、脂肪等，有利于薏苡仁的有效的成分吸收，而且还能利用根霉中的一些其它酶将薏苡仁中一些没有活性的前体物质转化成有活性的成分。
本发明要解决的技术问题是通过微生物转化的方法，将薏苡仁中的无活性或低活性的前体物质转化为高活性的有效成分，或将薏苡仁中影响有效成分释放的大分子降解，从而有利于有效小分子成分的提取或吸收，从而达到提高薏苡仁的药用有效成分的含量、种类和提取得率、或增强人体的吸收的效果，还可改善口感，提高薏苡仁作为药品、食品等各种产品的开发价值。
为了更好地理解本发明，下面用实验数据进行说明一、对本发明产物采用浸渍法分三次直接加入6倍量的95％的乙醇浸泡，减压浓缩干燥，得胶状提取物600g，胶状物再经丙酮提取后，可得含抗癌成分的油状物200g，比未用该方法的薏苡仁按相同方法提取得到的油状物总量增加30％以上。该产物经MTT法抗癌细胞活性测定，对A549、BEL-7402、B16、SPC-A1、K562等癌细胞株有效，半数致死浓度为(IC50)为千分之一，主要有效成分为油酸、亚油酸及其酯类。
二、对本发明产物采用浸渍法分三次直接加入6倍量的20％的乙醇浸泡，过滤得滤液，将滤液浓缩至5-10升时，加入1.5倍量的95％乙醇，滤掉沉淀→回收滤液中的酒精，继续蒸干，得黄褐色物质500克，经处理后该物质的得率比未处理薏苡仁按同样方法提取能增加得率200％以上，经MTT法测定，该提取物对癌细胞具有明显的活性。
具体实施方案实施例1取薏苡仁10千克→粉碎至能过40目筛，置于50升发酵容器→加入米根霉(Rhizopus oryzae)麦麸培养物500g→加入1.2倍量的水→搅拌均匀→80℃转化处理4-12小时→本发明产物。
本发明产物为一中间产物，对其采用浸渍法分三次直接加入6倍量的95％的乙醇浸泡，减压浓缩干燥，得胶状提取物600g，胶状物再经丙酮提取后，可得含抗癌成分的油状物200g，比未用该方法的薏苡仁按相同方法提取得到的油状物总量增加30％以上。该产物经MTT法抗癌细胞活性测定，对A549、BEL-7402、B16、SPC-A1、K562等癌细胞株有效，半数致死浓度为(IC50)为千分之一，主要有效成分为油酸、亚油酸及其酯类。
实施例2配制3％--10％薏苡仁粉水溶液→灭菌→接种纯种米根霉，28℃条件摇瓶发酵3-7天→将含根霉菌的培养物按1％的重量比加入充分湿润的薏苡粉中→搅拌均匀→60℃转化处理12-25小时→本发明产物。后续处理同实施例1。
实施例3配制马铃薯液体培养基→灭菌→接种纯种米根霉，28℃条件摇瓶发酵3-7天→加入2-10倍量的硫酸铵于培养基中，过滤沉淀，得根霉菌粗酶制剂→加入薏苡仁粉重量百分比0.05％根霉菌酶于薏苡仁粉中→加入1倍量的水→搅拌均匀→60℃转化处理6-16小时→本发明产物。
本发明产物为一中间产物，对其采用浸渍法分三次直接加入6倍量的20％的乙醇浸泡，过滤得滤液，将滤液浓缩至5-10升时，加入1.5倍量的95％乙醇，滤掉沉淀→回收滤液中的酒精，继续蒸干，得黄褐色物质500克，经处理后该物质的得率比未处理薏苡仁按同样方法提取能增加得率200％以上，经MTT法测定，该提取物对癌细胞具有明显的活性。
上述两种方法的所得的油状物和黄褐色水溶性成分经处理后，可用于抗癌药物的制备或功能食品的开发。
权利要求
1.一种增强薏苡仁活性的工艺方法，其特征在于由以下步骤组成一、将薏苡仁粉碎，放入容器内，加入水使其充分湿润；二、将已培养好的根霉菌培养物或提取根霉菌所产生的酶，加入上述薏苡仁粉中，搅拌均匀，在40-100℃条件下转化处理4-30小时。
2.按照权利要求1所述的增强薏苡仁活性的工艺方法，其特征在于步骤二中所加入的已培养好的根霉菌培养物的重量百分比为0.01％--10％。
3.按照权利要求1所述的增强薏苡仁活性的工艺方法，其特征在于步骤二中所加入的提取根霉菌所产生的酶的重量百分比为0.001％--0.1％。
全文摘要
本发明涉及到用微生物转化技术处理中药的方法。本发明所述方法由以下步骤组成一.将薏苡仁粉碎，放入容器内，加入水使其充分湿润；二.将已培养好的根霉菌培养物或提取根霉菌所产生的酶，加入上述薏苡仁粉中，搅拌均匀，在40－100℃条件下发酵处理4－30小时。本发明要解决的技术问题是通过微生物转化的方法，将薏苡仁中的无活性或低活性的前体物质转化为高活性的有效成分，或将薏苡仁中影响有效成分释放的大分子降解，从而有利于有效小分子成分的提取或吸收，达到提高薏苡仁的药用有效成分的含量、种类和提取得率的效果，提高薏苡仁作为药品、食品等各种产品的开发价值。
文档编号A61P37/00GK1634372SQ20041007956
公开日2005年7月6日 申请日期2004年11月17日 优先权日2004年11月17日
发明者王兴红 申请人:云南大学
技术领域：
本发明涉及到用微生物转化技术处理中药的方法。
背景技术：
薏苡仁是一种药、食两用的中药，具有抗癌、抗病毒、调节免疫等诸多功效，可以开发成各种药物、保健食品、美容化妆品等。1957年，日本中山宗春发现薏苡仁乙醇提取物有抗癌作用，1984年，沼田光弘经研究认为抗癌成分是棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸。我国刘和众发明了一种用索氏抽提法从薏苡仁中提取抗癌物质中性脂的方法(91106269.6)，还申请了薏苡仁提取物在制备治疗红斑角化症、鳞状毛囊角化症、红皮症药物中的应用(ZL93115904.0)，李大鹏(申请号95115453.2)申请了薏苡仁的新医疗用途，即薏苡仁在制备具有抗艾滋病、止痛和保护胃粘膜作用的药物中的应用，李大鹏还申请了(申请号92110839.7)一种用于配制抗癌静脉乳剂用的提取中性油脂的方法。邹远东(申请号01141627.0)通过利用蛋白酶处理来增加人对薏苡有效成分的吸收，增加其抗癌活性。
采取某种工艺提高和增加薏苡仁的药用活性成分再进行提取，目前尚无有效的方法。
发明内容
本发明的目的在于克服已有技术的缺陷，提供一种通过微生物途径增强薏苡仁活性的工艺方法。
本发明所述的增强薏苡仁活性的工艺方法由以下步骤组成一、将薏苡仁粉碎，放入容器内，加入水使其充分湿润；二、将已培养好的根霉菌培养物或提取根霉菌所产生的酶，加入上述薏苡仁粉中，搅拌均匀，在40-100℃条件下转化处理4-30小时。
上述的薏苡仁为市售的薏苡仁，既可以是薏苡仁，也可以是薏苡仁中特定的有效成分；所述的根霉菌可以为市售的根霉菌如根霉酒曲；所述的根霉菌培养物为根霉菌用常规方法培养而获得的培养物；所述的根霉菌产生的酶为根霉菌按常规的微生物培养方法培养后，经常规的酶提取方法获得的酶。所述的根霉菌可直接采用市售的、连载体一起加入，也可以采用将根霉菌株接种于培养液中，培养好后，用其培养物，其用量为0.01％--10％，达到发酵目的即可。所述的提取根霉菌所产生的酶的用量为0.001％--0.1％。
在步骤一中加入水的目的主要是使薏苡仁粉充分湿润，便于转化，加入量一般为薏苡仁粉的1倍以上，如果加入量太大，会增加后处理的成本。
本发明所述的根霉菌含有丰富的酶系，如糖化酶、淀粉酶、脂肪酶等，不仅能降解薏苡仁的大分子如淀粉、蛋白质、脂肪等，有利于薏苡仁的有效的成分吸收，而且还能利用根霉中的一些其它酶将薏苡仁中一些没有活性的前体物质转化成有活性的成分。
本发明要解决的技术问题是通过微生物转化的方法，将薏苡仁中的无活性或低活性的前体物质转化为高活性的有效成分，或将薏苡仁中影响有效成分释放的大分子降解，从而有利于有效小分子成分的提取或吸收，从而达到提高薏苡仁的药用有效成分的含量、种类和提取得率、或增强人体的吸收的效果，还可改善口感，提高薏苡仁作为药品、食品等各种产品的开发价值。
为了更好地理解本发明，下面用实验数据进行说明一、对本发明产物采用浸渍法分三次直接加入6倍量的95％的乙醇浸泡，减压浓缩干燥，得胶状提取物600g，胶状物再经丙酮提取后，可得含抗癌成分的油状物200g，比未用该方法的薏苡仁按相同方法提取得到的油状物总量增加30％以上。该产物经MTT法抗癌细胞活性测定，对A549、BEL-7402、B16、SPC-A1、K562等癌细胞株有效，半数致死浓度为(IC50)为千分之一，主要有效成分为油酸、亚油酸及其酯类。
二、对本发明产物采用浸渍法分三次直接加入6倍量的20％的乙醇浸泡，过滤得滤液，将滤液浓缩至5-10升时，加入1.5倍量的95％乙醇，滤掉沉淀→回收滤液中的酒精，继续蒸干，得黄褐色物质500克，经处理后该物质的得率比未处理薏苡仁按同样方法提取能增加得率200％以上，经MTT法测定，该提取物对癌细胞具有明显的活性。
具体实施方案实施例1取薏苡仁10千克→粉碎至能过40目筛，置于50升发酵容器→加入米根霉(Rhizopus oryzae)麦麸培养物500g→加入1.2倍量的水→搅拌均匀→80℃转化处理4-12小时→本发明产物。
本发明产物为一中间产物，对其采用浸渍法分三次直接加入6倍量的95％的乙醇浸泡，减压浓缩干燥，得胶状提取物600g，胶状物再经丙酮提取后，可得含抗癌成分的油状物200g，比未用该方法的薏苡仁按相同方法提取得到的油状物总量增加30％以上。该产物经MTT法抗癌细胞活性测定，对A549、BEL-7402、B16、SPC-A1、K562等癌细胞株有效，半数致死浓度为(IC50)为千分之一，主要有效成分为油酸、亚油酸及其酯类。
实施例2配制3％--10％薏苡仁粉水溶液→灭菌→接种纯种米根霉，28℃条件摇瓶发酵3-7天→将含根霉菌的培养物按1％的重量比加入充分湿润的薏苡粉中→搅拌均匀→60℃转化处理12-25小时→本发明产物。后续处理同实施例1。
实施例3配制马铃薯液体培养基→灭菌→接种纯种米根霉，28℃条件摇瓶发酵3-7天→加入2-10倍量的硫酸铵于培养基中，过滤沉淀，得根霉菌粗酶制剂→加入薏苡仁粉重量百分比0.05％根霉菌酶于薏苡仁粉中→加入1倍量的水→搅拌均匀→60℃转化处理6-16小时→本发明产物。
本发明产物为一中间产物，对其采用浸渍法分三次直接加入6倍量的20％的乙醇浸泡，过滤得滤液，将滤液浓缩至5-10升时，加入1.5倍量的95％乙醇，滤掉沉淀→回收滤液中的酒精，继续蒸干，得黄褐色物质500克，经处理后该物质的得率比未处理薏苡仁按同样方法提取能增加得率200％以上，经MTT法测定，该提取物对癌细胞具有明显的活性。
上述两种方法的所得的油状物和黄褐色水溶性成分经处理后，可用于抗癌药物的制备或功能食品的开发。
权利要求
1.一种增强薏苡仁活性的工艺方法，其特征在于由以下步骤组成一、将薏苡仁粉碎，放入容器内，加入水使其充分湿润；二、将已培养好的根霉菌培养物或提取根霉菌所产生的酶，加入上述薏苡仁粉中，搅拌均匀，在40-100℃条件下转化处理4-30小时。
2.按照权利要求1所述的增强薏苡仁活性的工艺方法，其特征在于步骤二中所加入的已培养好的根霉菌培养物的重量百分比为0.01％--10％。
3.按照权利要求1所述的增强薏苡仁活性的工艺方法，其特征在于步骤二中所加入的提取根霉菌所产生的酶的重量百分比为0.001％--0.1％。
全文摘要
本发明涉及到用微生物转化技术处理中药的方法。本发明所述方法由以下步骤组成一.将薏苡仁粉碎，放入容器内，加入水使其充分湿润；二.将已培养好的根霉菌培养物或提取根霉菌所产生的酶，加入上述薏苡仁粉中，搅拌均匀，在40－100℃条件下发酵处理4－30小时。本发明要解决的技术问题是通过微生物转化的方法，将薏苡仁中的无活性或低活性的前体物质转化为高活性的有效成分，或将薏苡仁中影响有效成分释放的大分子降解，从而有利于有效小分子成分的提取或吸收，达到提高薏苡仁的药用有效成分的含量、种类和提取得率的效果，提高薏苡仁作为药品、食品等各种产品的开发价值。
文档编号A61P37/00GK1634372SQ20041007956
公开日2005年7月6日 申请日期2004年11月17日 优先权日2004年11月17日
发明者王兴红 申请人:云南大学
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