红车轴草提取物及其制剂的制作方法
专利名称：红车轴草提取物及其制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于红车轴草的提取物及其制剂，其中红车轴草的提取物可以通过离心、乙酸乙酯萃取得析晶，母液及余渣进一步醇提，通过调PH值，上大孔吸附树脂得到进一步的精制分离，而得到红车轴草总异黄酮提取物。
背景技术：
红车轴草又名红三叶、红菽草、红花苜蓿、红花车子、三叶草、金花菜等。红车轴草全草含多种黄酮类成分化合物鹰咀豆芽素B(即芝柄花素(formononetin)和A(biochaninA)、染料木素(genistein)、大豆素(daidzein)、红车轴草素、三叶紫檀甙、柳穿鱼甙，全草中尚含有a和β-胡萝卜素、维生素D、E、糖类及淀粉，目前还发现含有三种黄酮醇类化合物。
实际上，人们早在40年以前研究者就发现澳大利亚某些牧场中的绵羊生殖力强，研究者发现这是因为牧场中含有特殊的三叶草植物，其中富含芝柄花素即鹰咀豆芽素B，它是少数几种含4种异黄酮(植物雌激素)的植物之一。异黄酮类雌激素主要包括染料木素异黄酮和大豆苷元。染料木素异黄酮由其前体鹰咀豆芽素A转化而来，代谢为无雌激素活性的对乙基酚，大豆苷原的前体为芒柄花素、大豆苷，代谢为雌马酚和氧-去甲基安哥拉紫檀素(0-DMA)。植物中的异黄酮大多为结合形式的糖苷，在肠道菌作用下，去掉糖苷为有生物活性非结合形式的糖苷配基，经过不同的活化代谢途径，产生不同的代谢产物，吸收后经过肠肝循环。大部分在肝脏和葡萄糖醛酸结合，少部分以硫酸盐、硫酸葡萄苷酸的形式排出。
现代研究证实，红车轴草总异黄酮有以下作用(1)类似女性雌激素作用及抗激素的作用；
(2)抑制与癌相关酶活性的作用，特别是酪蛋酸激酶；(3)在癌细胞增殖的促进阶段具有抑制血管增生作用；(4)消除活性氧，从而具有抗氧化作用；(5)调节细胞周期；(6)此外染料木素异黄酮具有抑制一些与DNA切断有酶活性的作用。
总之，红车轴草异黄酮通过不同的配制起到一定的预防癌症效果，特别是弱雌激素作用。雌激素不足时可起到类雌激素效果，而雌激素过剩时，又起到抗雌激素作用，即双向调节作用。对于预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、改善骨质疏松和改善妇女更年期症状等有一定的作用，并且越来越广泛地应用于临床。
发明内容
目前市售的红车轴草提取物含量大多10％左右，现在已经发现稳定的，特别是具有活性的红车轴草总异酮提取物，它含有对药理活性起作用的主要化合物，具体是鹰咀豆芽素A和B、染料木素、大豆素、大豆苷等，它可以通过这样的方法制得，该方法包括下列步骤(1)用甲醇或乙醇提取红车轴草全草；(2)过滤该提取液并浓缩；(3)将浓缩液离心取渣；(4)将药渣用油性溶剂脱脂干燥；(5)用脂肪族的酯类萃取浓缩后，析晶得到提取物a；(6)将步骤(5)中不溶于酯类的药渣用50-90％的醇提取，并将提取液浓缩；(7)将步骤(5)中析晶后的母液及步骤(6)中浓缩液调PH值＝8-10以内，过聚苯乙烯大孔吸附树脂分离，得提取物b；
(8)将所得提取物a和b合并，用醇再精制。
具体实施例方式
优选实现本发明的方法是用甲醇或乙醇进行第一次提取(步骤(1))药材与溶剂的重体积比在1∶2到1∶20的范围内，优选为1∶2到1∶10的范围内，温度在室温到溶剂的回流范围内，优选在50-80℃。
用于步骤(4)所得药渣为离心所得或自然沉降所得。
用于步骤(4)所述脱脂溶剂为200#溶剂汽油、石油醚、正已烷之间优选，正已烷为最佳。
用于步骤(5)的脂肪族的酯类为乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯之间优选，乙酸乙酯为最佳。
所述脱脂溶剂比例为1∶2到1∶10范围之内优选，最佳为1∶4。
所述酯类溶剂用体积比1∶2到1∶10范围内优选，最佳为1∶10。最好用新的等份溶剂重复进行提取，一般至少3次，所得提取液将其浓缩至相对密度为1.02-1.15，充分静置而实现本步骤所得总异黄酮含量为30-60％之间。
进行步骤(6)的提取是为了充分将其渣里面的总异黄酮充分提取完全，所用的甲醇或乙醇浓度优选为5-95％之间，最佳为50-80％之间。
进行步骤(7)是将步骤(5)所得母液及步骤(6)所得浓缩液合并，再精制除杂，由于红车轴草活性物质不溶于水，故须将其调PH值＝8-10，以让其充分溶解，PH值优选范围为PH值＝8-11之间，最佳为PH值＝9。
实现此步骤所选用树脂范围为硅胶、聚酰胺、离子交换树脂、大孔吸附树脂，优选为大孔树脂为最佳。
实现步骤(8)是为了所得提取物含量进一步提高，所选用溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮，以乙醇为最佳。
影响本提取精制工艺的因素有原料的质量及加工过程中的实际操作情况、原料中总异黄酮的含量应不低于0.6％，这种含量的较大差异取决于收集该植物的时间及处理干燥的方式和该生药材中茎所占的比例。
与总提取物相比，在各种用来防治更年期综合症、骨质疏松药理模型中该提取物出人意料地具有高活性，并且不需要进一步的特殊处理，随着时间的推移活性是稳定的。
本发明提供了一种应用淫羊藿、维生素B1、B6及含维生素为组合与红车轴草配伍，在中医理论指导下，补肾、补充植物雌激素，使其得到充分发挥，从而能更好地预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和防治骨质疏松、更年期综合症。
下面以实施例说明该发明的应用，但不应理解为对本发明的限制。
红车轴草提取物与其他药物成分的组成配比如下红车轴草提取物30g淫羊藿提取物60g微晶纤维素120g淀粉105g将以上成分混匀，压片，制得的片剂主要用于补充雌激素，预防乳腺癌。
上述配比中红车轴草提取物按照发明内容的制备方法制备，其中含红车轴草总异黄酮50-70％，淫羊藿提取物为自己制备或购买，其中所含的淫羊藿总黄酮为50-60％，微晶纤维素和淀粉为本领域专业人员所熟知的制药辅料，主要用作填充剂和崩解剂。
权利要求
1.制备红车轴草提取物的方法，它包括(1)用甲醇或乙醇提取红车轴草全草；(2)过滤该提取液并浓缩；(3)将浓缩液离心取渣；(4)将药渣用油性溶剂脱脂干燥；(5)用脂肪族的酯类萃取浓缩后，析晶得到提取物a；(6)将步骤(5)中析晶后的母液调PH值＝8-10以内，过树脂分离，得提取物b；(7)将所得提取物a和b合并，用醇再精制。
2.如权利要求1所述的方法，其中步骤(5)中不溶于酯类的渣用50-90％的醇提取，回收醇得到浓缩液，该浓缩液与步骤(5)析晶后的母液混合。
3.如权利要求1所述的方法，用甲醇或乙醇进行步骤(1)的提取。
4.如权利要求1所述的方法，其中用200#溶剂汽油、石油醚或正已烷进行步骤(4)的脱脂，正已烷为最佳。
5.如权利要求1中所述的方法，其中步骤(5)中所用的脂肪族的酯类选自于乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯，乙酸乙酯为最佳。
6.如权利要求1所述的方法，其中步骤(6)树脂范围为硅胶、聚酰胺、离子交换树脂、大孔吸附树脂，大孔吸附树脂为最佳。
7.如权利要求1所述的方法，其中步骤(7)的重结晶选自于95％的甲醇、乙醇或丙酮，乙醇为最佳。
8.按照权利要求1-7的方法得高含量红车轴草提取物。
9.按照权利要求8所述的提取物，它含有10-85％(重量)的总异黄酮。
10.权利要求8或9的提取物在制备补充雌激素，防治更年期综合症、骨质疏松症的药物的应用。
全文摘要
本发明涉及红车轴草的提取物及其制剂，它可以通过这样的方法制得，该方法包括下列步骤用甲醇或乙醇提取红车轴草全草；过滤该提取液并浓缩；将浓缩液离心取渣；将药渣用石油醚或正己烷脱脂干燥；用乙酸乙酯萃取浓缩后，析晶得到提取物a；将萃取后渣用50－90％的醇提取、回收醇，得浓缩液；将所得析晶后母液及浓缩液调pH值＝8－10以内，过聚苯乙烯骨架大孔吸附树脂分离，得提取物b，将提取物a和b合并，用醇再精制，得高含量提取物。本发明提供了一种应用淫羊藿、维生素B
文档编号A61K31/7048GK1439367SQ0311884
公开日2003年9月3日 申请日期2003年3月27日 优先权日2003年3月27日
发明者李崇明, 熊富良, 黄志军, 瞿丽, 曾庆恢, 徐绍新, 许沛虎 申请人:武汉健民中药工程有限责任公司
技术领域：
本发明属于红车轴草的提取物及其制剂，其中红车轴草的提取物可以通过离心、乙酸乙酯萃取得析晶，母液及余渣进一步醇提，通过调PH值，上大孔吸附树脂得到进一步的精制分离，而得到红车轴草总异黄酮提取物。
背景技术：
红车轴草又名红三叶、红菽草、红花苜蓿、红花车子、三叶草、金花菜等。红车轴草全草含多种黄酮类成分化合物鹰咀豆芽素B(即芝柄花素(formononetin)和A(biochaninA)、染料木素(genistein)、大豆素(daidzein)、红车轴草素、三叶紫檀甙、柳穿鱼甙，全草中尚含有a和β-胡萝卜素、维生素D、E、糖类及淀粉，目前还发现含有三种黄酮醇类化合物。
实际上，人们早在40年以前研究者就发现澳大利亚某些牧场中的绵羊生殖力强，研究者发现这是因为牧场中含有特殊的三叶草植物，其中富含芝柄花素即鹰咀豆芽素B，它是少数几种含4种异黄酮(植物雌激素)的植物之一。异黄酮类雌激素主要包括染料木素异黄酮和大豆苷元。染料木素异黄酮由其前体鹰咀豆芽素A转化而来，代谢为无雌激素活性的对乙基酚，大豆苷原的前体为芒柄花素、大豆苷，代谢为雌马酚和氧-去甲基安哥拉紫檀素(0-DMA)。植物中的异黄酮大多为结合形式的糖苷，在肠道菌作用下，去掉糖苷为有生物活性非结合形式的糖苷配基，经过不同的活化代谢途径，产生不同的代谢产物，吸收后经过肠肝循环。大部分在肝脏和葡萄糖醛酸结合，少部分以硫酸盐、硫酸葡萄苷酸的形式排出。
现代研究证实，红车轴草总异黄酮有以下作用(1)类似女性雌激素作用及抗激素的作用；
(2)抑制与癌相关酶活性的作用，特别是酪蛋酸激酶；(3)在癌细胞增殖的促进阶段具有抑制血管增生作用；(4)消除活性氧，从而具有抗氧化作用；(5)调节细胞周期；(6)此外染料木素异黄酮具有抑制一些与DNA切断有酶活性的作用。
总之，红车轴草异黄酮通过不同的配制起到一定的预防癌症效果，特别是弱雌激素作用。雌激素不足时可起到类雌激素效果，而雌激素过剩时，又起到抗雌激素作用，即双向调节作用。对于预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、改善骨质疏松和改善妇女更年期症状等有一定的作用，并且越来越广泛地应用于临床。
发明内容
目前市售的红车轴草提取物含量大多10％左右，现在已经发现稳定的，特别是具有活性的红车轴草总异酮提取物，它含有对药理活性起作用的主要化合物，具体是鹰咀豆芽素A和B、染料木素、大豆素、大豆苷等，它可以通过这样的方法制得，该方法包括下列步骤(1)用甲醇或乙醇提取红车轴草全草；(2)过滤该提取液并浓缩；(3)将浓缩液离心取渣；(4)将药渣用油性溶剂脱脂干燥；(5)用脂肪族的酯类萃取浓缩后，析晶得到提取物a；(6)将步骤(5)中不溶于酯类的药渣用50-90％的醇提取，并将提取液浓缩；(7)将步骤(5)中析晶后的母液及步骤(6)中浓缩液调PH值＝8-10以内，过聚苯乙烯大孔吸附树脂分离，得提取物b；
(8)将所得提取物a和b合并，用醇再精制。
具体实施例方式
优选实现本发明的方法是用甲醇或乙醇进行第一次提取(步骤(1))药材与溶剂的重体积比在1∶2到1∶20的范围内，优选为1∶2到1∶10的范围内，温度在室温到溶剂的回流范围内，优选在50-80℃。
用于步骤(4)所得药渣为离心所得或自然沉降所得。
用于步骤(4)所述脱脂溶剂为200#溶剂汽油、石油醚、正已烷之间优选，正已烷为最佳。
用于步骤(5)的脂肪族的酯类为乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯之间优选，乙酸乙酯为最佳。
所述脱脂溶剂比例为1∶2到1∶10范围之内优选，最佳为1∶4。
所述酯类溶剂用体积比1∶2到1∶10范围内优选，最佳为1∶10。最好用新的等份溶剂重复进行提取，一般至少3次，所得提取液将其浓缩至相对密度为1.02-1.15，充分静置而实现本步骤所得总异黄酮含量为30-60％之间。
进行步骤(6)的提取是为了充分将其渣里面的总异黄酮充分提取完全，所用的甲醇或乙醇浓度优选为5-95％之间，最佳为50-80％之间。
进行步骤(7)是将步骤(5)所得母液及步骤(6)所得浓缩液合并，再精制除杂，由于红车轴草活性物质不溶于水，故须将其调PH值＝8-10，以让其充分溶解，PH值优选范围为PH值＝8-11之间，最佳为PH值＝9。
实现此步骤所选用树脂范围为硅胶、聚酰胺、离子交换树脂、大孔吸附树脂，优选为大孔树脂为最佳。
实现步骤(8)是为了所得提取物含量进一步提高，所选用溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮，以乙醇为最佳。
影响本提取精制工艺的因素有原料的质量及加工过程中的实际操作情况、原料中总异黄酮的含量应不低于0.6％，这种含量的较大差异取决于收集该植物的时间及处理干燥的方式和该生药材中茎所占的比例。
与总提取物相比，在各种用来防治更年期综合症、骨质疏松药理模型中该提取物出人意料地具有高活性，并且不需要进一步的特殊处理，随着时间的推移活性是稳定的。
本发明提供了一种应用淫羊藿、维生素B1、B6及含维生素为组合与红车轴草配伍，在中医理论指导下，补肾、补充植物雌激素，使其得到充分发挥，从而能更好地预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和防治骨质疏松、更年期综合症。
下面以实施例说明该发明的应用，但不应理解为对本发明的限制。
红车轴草提取物与其他药物成分的组成配比如下红车轴草提取物30g淫羊藿提取物60g微晶纤维素120g淀粉105g将以上成分混匀，压片，制得的片剂主要用于补充雌激素，预防乳腺癌。
上述配比中红车轴草提取物按照发明内容的制备方法制备，其中含红车轴草总异黄酮50-70％，淫羊藿提取物为自己制备或购买，其中所含的淫羊藿总黄酮为50-60％，微晶纤维素和淀粉为本领域专业人员所熟知的制药辅料，主要用作填充剂和崩解剂。
权利要求
1.制备红车轴草提取物的方法，它包括(1)用甲醇或乙醇提取红车轴草全草；(2)过滤该提取液并浓缩；(3)将浓缩液离心取渣；(4)将药渣用油性溶剂脱脂干燥；(5)用脂肪族的酯类萃取浓缩后，析晶得到提取物a；(6)将步骤(5)中析晶后的母液调PH值＝8-10以内，过树脂分离，得提取物b；(7)将所得提取物a和b合并，用醇再精制。
2.如权利要求1所述的方法，其中步骤(5)中不溶于酯类的渣用50-90％的醇提取，回收醇得到浓缩液，该浓缩液与步骤(5)析晶后的母液混合。
3.如权利要求1所述的方法，用甲醇或乙醇进行步骤(1)的提取。
4.如权利要求1所述的方法，其中用200#溶剂汽油、石油醚或正已烷进行步骤(4)的脱脂，正已烷为最佳。
5.如权利要求1中所述的方法，其中步骤(5)中所用的脂肪族的酯类选自于乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯，乙酸乙酯为最佳。
6.如权利要求1所述的方法，其中步骤(6)树脂范围为硅胶、聚酰胺、离子交换树脂、大孔吸附树脂，大孔吸附树脂为最佳。
7.如权利要求1所述的方法，其中步骤(7)的重结晶选自于95％的甲醇、乙醇或丙酮，乙醇为最佳。
8.按照权利要求1-7的方法得高含量红车轴草提取物。
9.按照权利要求8所述的提取物，它含有10-85％(重量)的总异黄酮。
10.权利要求8或9的提取物在制备补充雌激素，防治更年期综合症、骨质疏松症的药物的应用。
全文摘要
本发明涉及红车轴草的提取物及其制剂，它可以通过这样的方法制得，该方法包括下列步骤用甲醇或乙醇提取红车轴草全草；过滤该提取液并浓缩；将浓缩液离心取渣；将药渣用石油醚或正己烷脱脂干燥；用乙酸乙酯萃取浓缩后，析晶得到提取物a；将萃取后渣用50－90％的醇提取、回收醇，得浓缩液；将所得析晶后母液及浓缩液调pH值＝8－10以内，过聚苯乙烯骨架大孔吸附树脂分离，得提取物b，将提取物a和b合并，用醇再精制，得高含量提取物。本发明提供了一种应用淫羊藿、维生素B
文档编号A61K31/7048GK1439367SQ0311884
公开日2003年9月3日 申请日期2003年3月27日 优先权日2003年3月27日
发明者李崇明, 熊富良, 黄志军, 瞿丽, 曾庆恢, 徐绍新, 许沛虎 申请人:武汉健民中药工程有限责任公司
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