琼脂糖在制备治疗前列腺增生病药剂中的应用的制作方法
专利名称：琼脂糖在制备治疗前列腺增生病药剂中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及琼脂糖在酶消融治疗前列腺增生中的用途，尤其是作为酶混合物的控释剂的用途。
背景技术：
琼脂糖主要用于邮电子工业学、细胞工业学、细菌学、化工学、生化学、免疫化学等方面，其主要是在电子泳动法中作为载体，分离蛋白质、核酸等。
良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia，BPH)是老年男性的常见多发疾病。在我国60岁以上的人口在1亿以上，其中约30～50％的患者需要接受治疗，这样前列腺增生的患者就相当之多。
前列腺增生的危害在于增生前列腺体对尿道的压迫引起下尿路梗阻症状以及一系列继发损害，并严重影响患者的生活质量。
目前的治疗方式1.口服药物治疗由于前列腺增生症的发生机制仍不是十分明确，现有的药物治疗不是十分有效。
2.手术治疗经尿道前列腺切除术(Transurethral Resection of Prostate，TURP)是目前国际上推荐的治疗前列腺增生的金标准。局限性①需要相关的特殊器械和手术技巧，推广还不可能十分普遍。②手术费用较高，对大多数患者而言经济上依然难以接受。③要求患者能够耐受麻醉，由于约77％的老年BPH患者还合并有其他的一些老年疾患，对耐受手术具有较高的风险。④TURP也存在一些相关的并发症(如出血、感染、TUR综合征、尿道狭窄和尿失禁、逆行射精、勃起功能障碍等)。据文献统计，这些并发症的发生率为18％，死亡率为0.2％。⑤从BPH患者的需求调查分析显示，绝大多数BPH患者的初衷并不期望手术治疗，而希望能够得到更微创、更安全的治疗。因而寻求更微创的治疗手段是十分必要的。
3.微创治疗近十年来，BPH的微创治疗发展发展很快，大多数为以热消融为基础，如经尿道微波热疗(TUMT)、经尿道针刺射频消融(TUNA)、间质激光凝固(ILC)以及超声聚焦(HIFU)等等，近期疗效介于药物治疗与TURP之间，远期效果仍远远比不上TURP。前列腺内无水乙醇注射的临床试验在国外正如火如荼，其效果还有待验证。
4.酶消融治疗良性前列腺增生关于酶消融治疗前列腺增生的研究较少，国外已申请专利保护为United States Patent 5，116，615。其配方为5000U/ml胶原酶、3000U/ml透明质酸酶和1％(v/v)Triton-100溶于0.05M的20mMCa离子的枸橼酸盐溶液中，其使用方法为直接腺体内注射。目前其配方和方法以及相关文献报道的效果仅仅只能够引起前列腺组织学上的变化，不能使前列腺体积明显缩小，因此，治疗效果不是很理想。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种酶消融治疗良性前列腺增生中酶混合物的控释剂，琼脂糖在制备治疗良性前列腺增生病药剂中的应用，使前列腺组织发生凝固性坏死，消除了前列腺组织中活性细胞产生的酶抑制物。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施由酶混合物和酶的控释剂相配合，酶混合物为5000-10000U/m1胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，酶的控释剂为热琼脂糖1％-2％的D-Hank’s溶液，调整pH值为7.0，温度控制在70-100℃。酶的联合作用要优于单一酶的作用，因此配方以胶原酶和胰蛋白酶为基础，透明质酸酶和弹性蛋白酶起辅助作用，其中弹性蛋白酶主要用于以纤维结缔组织和平滑肌等基质增生为主的前列腺。考虑到Ca2+离子对胰蛋白酶的作用存在影响，用D-Hank’s液对其它酶的作用影响不大，因此采用D-Hank’s液作溶剂。
本发明提出的酶消融治疗良性前列腺增生的酶混合物的控释剂的使用方法是首先将琼脂糖加入到D-Hank’s液中，加热煮沸，配制成1-2％的热琼脂糖溶液。注入琼脂糖剂量的计算公式为0.52×(左右径×上下径×前后径-(左右径-(4-8mm))×(上下径-(4～8mm))×(前后径-(4-8mm))。将适量热琼脂糖溶液迅速注入到前列腺体内，从尿道粘膜上可见前列腺体微微发白。然后持续膀胱冲洗，等待60分钟左右，以避免高温造成酶的失活，同时琼脂成为半固体状，可以对注入的酶溶液产生控释作用，琼脂糖注射后在B超下不产生强回声。此时通过直肠指诊，判断腺体内温度基本降至体温，注入混合酶溶液，在B超监视下，见注射后产生的强光团达到预期的范围即可。
由于上述解决方案中采用了热琼脂糖溶液作为酶的控释剂，不仅在预定的范围内形成空腔，使增生的前列腺组织溶解，吸收；从组织学上能够使前列腺组织变得疏松，类似一种海绵样，腺体组织会变软，对尿道的压迫也会减轻；而且能使前列腺体积明显缩小，优于目前所有的微创治疗；对尿道和周围组织无损伤，治疗后无明显并发症，要优于TURP。此外，预计在临床上治疗1例患者所需的成本在1000-2000元左右，因此在临床上具有经济、安全、简便、微创、有效的优点。
本发明与现有技术相比，具有以下优点①可以局部产生足够时间的热消融作用，使前列腺组织发生凝固性坏死，并消除前列腺组织中活性细胞产生的酶抑制物；②使腺体内血管变性凝固，阻断血流，防止注射到腺体内酶的流失，防止血流中酶抑制物对酶作用的影响，防止前列腺注射过程中血肿的形成；③琼脂糖的凝固点刚好为37℃，正常体温下可在腺管内凝固，直接阻塞酶的流失，局限酶的作用范围；④由于琼脂糖可用于蛋白质电泳，因此，注射的酶可在琼脂糖中进行一定的扩散，琼脂糖可作为酶的载体达到缓释的效果。⑤琼脂糖对人体无害。
具体实施例方式
实施例1未用琼脂糖溶液作为控释剂，混合酶体外消融效果实验体外实验1将10份2g人TURP术后的前列腺标本分别浸泡于1ml混合酶溶液中，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，24h后，所有的前列腺标本组织完全溶解。
体外实验2将2ml混合酶溶液注射到2例离体的人前列腺体内，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，24h后，前列腺塌陷，失去正常形态。
以上实验均采用空白对照，排除组织自溶的可能。实施例2未用琼脂糖溶液作为控释剂，混合酶体内消融效果实验将2ml混合酶溶液直接注入到狗的增生前列腺内，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，注射过程中可见前列腺体迅速充血变红。24h后观察，前列腺外观无明显变化。剖开腺体注射部位，仅仅可见直径很小的浅坑。组织病理学检查，可见小部分前列腺组织出现组织被消化的现象。
对原因的分析造成体内直接注射混合酶溶液效果不理想的主要原因在于酶在体内的流失，同时体内所产生的酶抑制物也抑制酶的消化作用实施例3使用琼脂糖溶液作为控释剂，酶消融治疗良性前列腺增生体内消融效果实验7只杂交实验犬，按30mg/kg体重的剂量，静脉推注1％的戊巴比妥钠，动物麻醉后，行下腹部直切口，逐层切开，显露膀胱，在膀胱上切一小口，将温敏电极置入到前列腺部尿道，用于测量注射过程中尿道表面温度的变化。将膀胱颈上提，并游离前列腺周围组织，充分显露前列腺，用游标卡尺测量前列腺三个径线，计算前列腺体积，平均前列腺大小34.2ml(27-117ml)。直视下用5号皮试针头直接穿刺前列腺体两侧叶，在混合酶溶液注射前注入热琼脂糖(70℃以上)，平均4.6ml(4-8ml)。注射过程中可见前列腺腺体变白，注射后无明显出血。测温仪记录尿道内测温，注射过程中瞬间最高温度为45℃，随即迅速下降，说明对尿道不会产生损伤。等待60分钟左右，腺体内测温下降至体温。再注入混合酶溶液，平均5.4ml(4-10ml)，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中。24小时后，取2只实验犬，再次在麻醉下打开下腹部切口，剖开前列腺一侧叶，腺体内出现相当于注入酶溶液体积的空腔，并可见液化坏死组织流出。其余5只犬均通过经直肠B超证实。1至2周后，取另2只实验犬在麻醉下，再次剖开前列腺，可见空腔内液化坏死物质被吸收。B超监控(每周1次)实验犬前列腺空腔变化，可见空腔在1至5个月逐渐缩小，甚至消失，伴前列腺体积明显缩小，每只实验犬在B超观察空腔基本消失时作为实验结束的判断指标，用过量戊巴比妥钠处死动物，取出前列腺，测量体积为原来的1/2-1/4，腺体大小平均18.2ml(9.7-48.7ml)。1只实验犬进行再次注射(4ml琼脂糖+4ml混合酶溶液)，证明可进一步缩小前列腺体积。实验过程中，通过对照组(2只实验犬，前列腺体积分别为12.5ml和39.4ml，只分别注入热琼脂糖溶液4ml和8ml，注射后24小时，只可见前列腺稍水肿，无空腔形成；注射后1月体积无明显变化)排除这种效果为热消融所产生的。同时，尿道和前列腺包膜完整，未发现任何相关的并发症。
权利要求
1.琼脂糖在制备治疗良性前列腺增生病药剂中的应用。
2.按照权利要求1所述的琼脂糖，其特征在于琼脂糖为1-2％的D-Hank’s溶液。
全文摘要
本发明公开了一种脂糖在制备治疗前列腺增生病药剂中的应用。该琼脂糖是1－2％的琼脂糖溶液组成。该控释剂解决了酶消融治疗前列腺增生作用的有效性和可控性的问题。使前列腺组织发生凝固性坏死，消除了前列腺组织中活性细胞产生的酶抑制物，使腺体内血管变性凝固，阻断血流，防止注射到腺体内酶的流失，防止血流中酶抑制物对酶作用的影响，防止前列腺注射过程中血肿的形成，对人体无害。
文档编号A61K38/43GK1453038SQ0311888
公开日2003年11月5日 申请日期2003年4月3日 优先权日2003年4月3日
发明者张茨 申请人:武汉大学
技术领域：
本发明涉及琼脂糖在酶消融治疗前列腺增生中的用途，尤其是作为酶混合物的控释剂的用途。
背景技术：
琼脂糖主要用于邮电子工业学、细胞工业学、细菌学、化工学、生化学、免疫化学等方面，其主要是在电子泳动法中作为载体，分离蛋白质、核酸等。
良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia，BPH)是老年男性的常见多发疾病。在我国60岁以上的人口在1亿以上，其中约30～50％的患者需要接受治疗，这样前列腺增生的患者就相当之多。
前列腺增生的危害在于增生前列腺体对尿道的压迫引起下尿路梗阻症状以及一系列继发损害，并严重影响患者的生活质量。
目前的治疗方式1.口服药物治疗由于前列腺增生症的发生机制仍不是十分明确，现有的药物治疗不是十分有效。
2.手术治疗经尿道前列腺切除术(Transurethral Resection of Prostate，TURP)是目前国际上推荐的治疗前列腺增生的金标准。局限性①需要相关的特殊器械和手术技巧，推广还不可能十分普遍。②手术费用较高，对大多数患者而言经济上依然难以接受。③要求患者能够耐受麻醉，由于约77％的老年BPH患者还合并有其他的一些老年疾患，对耐受手术具有较高的风险。④TURP也存在一些相关的并发症(如出血、感染、TUR综合征、尿道狭窄和尿失禁、逆行射精、勃起功能障碍等)。据文献统计，这些并发症的发生率为18％，死亡率为0.2％。⑤从BPH患者的需求调查分析显示，绝大多数BPH患者的初衷并不期望手术治疗，而希望能够得到更微创、更安全的治疗。因而寻求更微创的治疗手段是十分必要的。
3.微创治疗近十年来，BPH的微创治疗发展发展很快，大多数为以热消融为基础，如经尿道微波热疗(TUMT)、经尿道针刺射频消融(TUNA)、间质激光凝固(ILC)以及超声聚焦(HIFU)等等，近期疗效介于药物治疗与TURP之间，远期效果仍远远比不上TURP。前列腺内无水乙醇注射的临床试验在国外正如火如荼，其效果还有待验证。
4.酶消融治疗良性前列腺增生关于酶消融治疗前列腺增生的研究较少，国外已申请专利保护为United States Patent 5，116，615。其配方为5000U/ml胶原酶、3000U/ml透明质酸酶和1％(v/v)Triton-100溶于0.05M的20mMCa离子的枸橼酸盐溶液中，其使用方法为直接腺体内注射。目前其配方和方法以及相关文献报道的效果仅仅只能够引起前列腺组织学上的变化，不能使前列腺体积明显缩小，因此，治疗效果不是很理想。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种酶消融治疗良性前列腺增生中酶混合物的控释剂，琼脂糖在制备治疗良性前列腺增生病药剂中的应用，使前列腺组织发生凝固性坏死，消除了前列腺组织中活性细胞产生的酶抑制物。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施由酶混合物和酶的控释剂相配合，酶混合物为5000-10000U/m1胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，酶的控释剂为热琼脂糖1％-2％的D-Hank’s溶液，调整pH值为7.0，温度控制在70-100℃。酶的联合作用要优于单一酶的作用，因此配方以胶原酶和胰蛋白酶为基础，透明质酸酶和弹性蛋白酶起辅助作用，其中弹性蛋白酶主要用于以纤维结缔组织和平滑肌等基质增生为主的前列腺。考虑到Ca2+离子对胰蛋白酶的作用存在影响，用D-Hank’s液对其它酶的作用影响不大，因此采用D-Hank’s液作溶剂。
本发明提出的酶消融治疗良性前列腺增生的酶混合物的控释剂的使用方法是首先将琼脂糖加入到D-Hank’s液中，加热煮沸，配制成1-2％的热琼脂糖溶液。注入琼脂糖剂量的计算公式为0.52×(左右径×上下径×前后径-(左右径-(4-8mm))×(上下径-(4～8mm))×(前后径-(4-8mm))。将适量热琼脂糖溶液迅速注入到前列腺体内，从尿道粘膜上可见前列腺体微微发白。然后持续膀胱冲洗，等待60分钟左右，以避免高温造成酶的失活，同时琼脂成为半固体状，可以对注入的酶溶液产生控释作用，琼脂糖注射后在B超下不产生强回声。此时通过直肠指诊，判断腺体内温度基本降至体温，注入混合酶溶液，在B超监视下，见注射后产生的强光团达到预期的范围即可。
由于上述解决方案中采用了热琼脂糖溶液作为酶的控释剂，不仅在预定的范围内形成空腔，使增生的前列腺组织溶解，吸收；从组织学上能够使前列腺组织变得疏松，类似一种海绵样，腺体组织会变软，对尿道的压迫也会减轻；而且能使前列腺体积明显缩小，优于目前所有的微创治疗；对尿道和周围组织无损伤，治疗后无明显并发症，要优于TURP。此外，预计在临床上治疗1例患者所需的成本在1000-2000元左右，因此在临床上具有经济、安全、简便、微创、有效的优点。
本发明与现有技术相比，具有以下优点①可以局部产生足够时间的热消融作用，使前列腺组织发生凝固性坏死，并消除前列腺组织中活性细胞产生的酶抑制物；②使腺体内血管变性凝固，阻断血流，防止注射到腺体内酶的流失，防止血流中酶抑制物对酶作用的影响，防止前列腺注射过程中血肿的形成；③琼脂糖的凝固点刚好为37℃，正常体温下可在腺管内凝固，直接阻塞酶的流失，局限酶的作用范围；④由于琼脂糖可用于蛋白质电泳，因此，注射的酶可在琼脂糖中进行一定的扩散，琼脂糖可作为酶的载体达到缓释的效果。⑤琼脂糖对人体无害。
具体实施例方式
实施例1未用琼脂糖溶液作为控释剂，混合酶体外消融效果实验体外实验1将10份2g人TURP术后的前列腺标本分别浸泡于1ml混合酶溶液中，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，24h后，所有的前列腺标本组织完全溶解。
体外实验2将2ml混合酶溶液注射到2例离体的人前列腺体内，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，24h后，前列腺塌陷，失去正常形态。
以上实验均采用空白对照，排除组织自溶的可能。实施例2未用琼脂糖溶液作为控释剂，混合酶体内消融效果实验将2ml混合酶溶液直接注入到狗的增生前列腺内，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，注射过程中可见前列腺体迅速充血变红。24h后观察，前列腺外观无明显变化。剖开腺体注射部位，仅仅可见直径很小的浅坑。组织病理学检查，可见小部分前列腺组织出现组织被消化的现象。
对原因的分析造成体内直接注射混合酶溶液效果不理想的主要原因在于酶在体内的流失，同时体内所产生的酶抑制物也抑制酶的消化作用实施例3使用琼脂糖溶液作为控释剂，酶消融治疗良性前列腺增生体内消融效果实验7只杂交实验犬，按30mg/kg体重的剂量，静脉推注1％的戊巴比妥钠，动物麻醉后，行下腹部直切口，逐层切开，显露膀胱，在膀胱上切一小口，将温敏电极置入到前列腺部尿道，用于测量注射过程中尿道表面温度的变化。将膀胱颈上提，并游离前列腺周围组织，充分显露前列腺，用游标卡尺测量前列腺三个径线，计算前列腺体积，平均前列腺大小34.2ml(27-117ml)。直视下用5号皮试针头直接穿刺前列腺体两侧叶，在混合酶溶液注射前注入热琼脂糖(70℃以上)，平均4.6ml(4-8ml)。注射过程中可见前列腺腺体变白，注射后无明显出血。测温仪记录尿道内测温，注射过程中瞬间最高温度为45℃，随即迅速下降，说明对尿道不会产生损伤。等待60分钟左右，腺体内测温下降至体温。再注入混合酶溶液，平均5.4ml(4-10ml)，酶混合物为5000-10000U/ml胶原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明质酸酶和100-800U/ml弹性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中。24小时后，取2只实验犬，再次在麻醉下打开下腹部切口，剖开前列腺一侧叶，腺体内出现相当于注入酶溶液体积的空腔，并可见液化坏死组织流出。其余5只犬均通过经直肠B超证实。1至2周后，取另2只实验犬在麻醉下，再次剖开前列腺，可见空腔内液化坏死物质被吸收。B超监控(每周1次)实验犬前列腺空腔变化，可见空腔在1至5个月逐渐缩小，甚至消失，伴前列腺体积明显缩小，每只实验犬在B超观察空腔基本消失时作为实验结束的判断指标，用过量戊巴比妥钠处死动物，取出前列腺，测量体积为原来的1/2-1/4，腺体大小平均18.2ml(9.7-48.7ml)。1只实验犬进行再次注射(4ml琼脂糖+4ml混合酶溶液)，证明可进一步缩小前列腺体积。实验过程中，通过对照组(2只实验犬，前列腺体积分别为12.5ml和39.4ml，只分别注入热琼脂糖溶液4ml和8ml，注射后24小时，只可见前列腺稍水肿，无空腔形成；注射后1月体积无明显变化)排除这种效果为热消融所产生的。同时，尿道和前列腺包膜完整，未发现任何相关的并发症。
权利要求
1.琼脂糖在制备治疗良性前列腺增生病药剂中的应用。
2.按照权利要求1所述的琼脂糖，其特征在于琼脂糖为1-2％的D-Hank’s溶液。
全文摘要
本发明公开了一种脂糖在制备治疗前列腺增生病药剂中的应用。该琼脂糖是1－2％的琼脂糖溶液组成。该控释剂解决了酶消融治疗前列腺增生作用的有效性和可控性的问题。使前列腺组织发生凝固性坏死，消除了前列腺组织中活性细胞产生的酶抑制物，使腺体内血管变性凝固，阻断血流，防止注射到腺体内酶的流失，防止血流中酶抑制物对酶作用的影响，防止前列腺注射过程中血肿的形成，对人体无害。
文档编号A61K38/43GK1453038SQ0311888
公开日2003年11月5日 申请日期2003年4月3日 优先权日2003年4月3日
发明者张茨 申请人:武汉大学
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