药物组合物的制作方法
专利名称：药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及2，4-二氯苯甲醇(或2，4-DCBA)和戊基间甲酚(或AMC)制剂在治疗或预防严重急性呼吸综合征(SARS)病毒感染中的用途。
严重急性呼吸综合征(SARS)是由新的冠状病毒引起的病毒性呼吸道疾病，该新的冠状病毒命名为SARS相关的冠状病毒(SARS-CoV)。2003年首先在中国报道了SARS，随后疾病传播至北美、南美、欧洲和亚洲超过二十二个国家。在2003年SARS爆发的过程中，全世界超过8,000人感染了SARS疾病；这些中，近800人死亡。尤其是，在超过60岁的年龄组中，死亡率超过60％。尽管2003年的SARS爆发得到了控制，但疾病可能再次出现。实际上，在2004年1月，中国报道了又一例SARS病例。
通常，SRAS始于体温高于38℃的高烧。其他症状包括干咳，体疼，呼吸短促和全身不舒服。通常，大部分患者还产生了肺炎。
SARS的主要传播途径是接近的人与人接触。认为病毒最容易通过感染的人员咳嗽或打喷嚏时产生的呼吸道飞沫传递。这种呼吸道飞沫可以通过空气传播并沉积于近距离人员的嘴巴、鼻子或眼睛粘膜上。当人接触污染了感染飞沫的表面然后接触他或她的嘴巴、鼻子或眼睛时，病毒也得到了传播。
合适地，通常通过将已经感染病毒的那些人群分开并将已经暴露于病毒且可能已经感染但没有发病的人群隔离来控制SARS的传播。因此，存在对SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)的病毒感染的预防性治疗和治疗性治疗的需要。
化合物2，4-二氯苯甲醇作为抗防腐剂是已知的，即，作为抗细菌和抗真菌剂，参见，例如，Martindale“The Extra Pharmacopoeia”，第28版，第561页，The Pharmaceutical Press(1982)。戊基间甲酚或6-戊基-间-甲酚作为用于漱口水或锭剂中的消毒剂也是已知的，结合2，4-二氯苯甲醇来治疗口腔感染，参见，例如，Martindale“The ExtraPharmacopoeia”，第28版，第549页，The Pharmaceutical Press(1982)。The Concise Oxford Dictionary(Oxford University Press，Oxford(1982))中将防腐剂定义为对抗脓毒病产生的试剂，尤其是通过防止细菌的生长。在Black’s Medical Dictionary(A & C Black，London(1990))中将脓毒病定义为体内微生物生长产物的中毒，且伴随的一般症状是那些炎症。之前没有表明2，4-二氯苯甲醇或戊基间甲酚能证明对抗SARS相关冠状病毒的活性。
出乎意料地，目前已经发现2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的制剂呈现了对抗SARS相关冠状病毒尤其是表型Urbani SARS相关冠状病毒的杀病毒活性。
根据第一方面，本发明提供了含有2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚的药物组合物，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)尤其是Urbani SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。优选，该药物组合物对于治疗SARS相关冠状病毒尤其是Urbani SARS相关冠状病毒引起的病毒感染是有效的。
合适地，该药物组合物适于通过任何合适的途径给药于患者的粘膜，例如，通过鼻子、眼睛、阴道、直肠或口服途径。可以通过药学领域中已知的任何方法来制得这种组合物，例如将活性成分和载体或赋形剂在无菌条件下混合。优选，该药物组合物适于鼻、眼睛或口服给药，尤其是口服给药。
合适地，药物组合物是液体形式(即，溶液，悬浮液，乳浊液，糖浆，凝胶)或可咀嚼的或可吮吸的固体剂型。对于溶液、糖浆和凝胶的制备，合适的赋形剂包括水、多元醇和糖，尤其是液体葡萄糖和/或液体蔗糖。对于悬浮液的制备，合适的赋形剂包括悬浮油(例如，植物油)。合适的乳浊液包括水包油型或油包水型乳浊液。对于可吮吸固体剂型例如锭剂的制备，可以将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚混合成熔化的锭剂基料(例如，糖和液体蔗糖加上赋形剂的混合物或非糖基料如异麦芽糖酮醇(isomalt)加上任选的赋形剂)，并将混合物拉成圆柱状物质，从其形成锭剂。或者，可咀嚼或可吮吸固体剂型可以是可咀嚼或可吮吸的片剂、胶囊、软锭剂或胶体例如口香糖的形式，其可以通过本领域技术人员公知的技术制得。
本发明高度优选的药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型的形式，如锭剂或可咀嚼或可吮吸片剂，速溶片剂(MeltletTM)胶囊或如在此所述的软锭剂。合适地，使这种剂型适于将治疗有效量的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚释放于需要患者的口腔表面。尤其优选的固体剂型是锭剂的形式，其通过将加热的锭剂糖基料(例如，蔗糖和液体葡萄糖)或加热的锭剂糖醇基料(即，麦芽糖醇糖浆(lycasin)，异麦芽糖酮醇和/或山梨糖醇)、2，4-二氯苯甲醇、戊基间甲酚和其他赋形剂冷却来形成固体锭剂来制得。
优选，该组合物是口服剂型的形式，使得当剂型给药于患者的口腔时，剂型将治疗有效量的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚释放至口腔表面，尤其是喉咙的粘膜。优选，药物组合物是基于糖的(例如，蔗糖和/或葡萄糖)，尤其是基于蔗糖的，或基于糖醇的(例如，异麦芽糖酮醇，麦芽糖醇糖浆或山梨糖醇)溶液、悬浮液、乳液、糖浆、凝胶或可吮吸或可咀嚼的固体剂型。
当药物组合物是液体的形式时(即，溶液，悬浮液，乳浊液，糖浆或凝胶)，可以将液体形式的组合物直接给药至口腔。或者，这种溶液、悬浮液、乳浊液、糖胶或凝胶可以用适于在口腔中崩解的原料(即，羟丙基甲基纤维素膜或明胶膜)封装，使得形成单独的剂量单位。方便地，给药这种剂型后，溶液、悬浮液、乳浊液、糖浆或凝胶的活性成分在封装材料溶解或破裂后释放于口腔中。
合适地，当药物组合物是液体形式时，药物组合物优选是溶液、糖浆或悬浮液的形式。合适地，当药物是溶液形式时，可以将组合物包装于配有喷雾机械装置的分散容器中，该喷雾装置能够将组合物作为细喷雾喷至口腔中，尤其是喷至喉咙的粘膜表面上。
合适地，当药物组合物是液体形式时，例如，溶液、悬浮液、凝胶或糖浆，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为高于或等于10μg/ml，更优选高于或等于0.1mg/ml，最优选高于或等于1mg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，例如溶液、悬浮液、凝胶或糖浆，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为低于或等于10mg/ml，更优选低于或等于7mg/ml，最优选低于或等于5mg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，优选戊基间甲酚的存在量为高于或等于10μg/ml，优选高于或等于50μg/ml，最优选高于或等于100μg/ml，优选高于或等于400μg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，优选戊基间甲酚的存在量为低于或等于5mg/ml，优选低于或等于2.0mg/ml，最优选低于或等于1mg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，药物组合物的总体积高于或等于2ml，优选高于或等于3ml，最优选高于或等于5ml。合适地，当药物组合物是液体形式时，药物组合物的总体积低于或等于10ml，优选低于或等于8ml，更优选低于或等于7ml。
合适地，当药物组合物是溶液或悬浮液形式时，液相的主要成分包括水。优选，这种溶液和悬浮液包括高于或等于2ml，优选高于或等于3ml，最优选高于或等于5ml的水。优选，这种溶液和悬浮液包括低于或等于10ml，优选低于或等于8ml，最优选低于或等于7ml的水。
合适地，当药物组合物是糖浆的形式时，液相的主要成分包括液体糖。通过在此所用的术语“液体糖”，我们的意思是溶解于合适溶剂中的糖，优选溶剂包括水。最优选的液体糖包括液体葡萄糖，含有葡萄糖的水溶液(例如，65至90重量％的葡萄糖)，和液体蔗糖，含有蔗糖的水溶液(例如，55至80重量％的蔗糖)。合适地，糖浆包括高于或等于2ml，优选高于或等于3ml，最优选高于或等于5ml的液体糖。优选，糖浆包括低于或等于10ml，优选低于或等于8ml，最优选低于或等于7ml的液体糖。
合适地，当药物组合物是液体形式时，液相(即，对于悬浮液和溶液为水，和对于糖浆为液体糖)存在量为高于或等于90重量％，更优选高于或等于95重量％，基于药物组合物的总重。
优选，药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型，特别是锭剂或可咀嚼或可吮吸片剂、胶囊或软锭剂。如在此所用的术语“锭剂”意思是其中通过将含有活性成分的基于糖(例如，蔗糖和/或葡萄糖)或基于糖醇的(例如，山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆)融化物质冷却来形成产品的所有剂型。优选的可咀嚼固体剂型是通过将加热的含有糖，尤其是蔗糖和/或葡萄糖的锭剂基料，2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚以及任选地其他赋形剂冷却来形成固体锭剂而制得的锭剂，例如酸度调节剂，遮光剂，稳定剂，缓冲剂，调味剂，甜味剂，色素和防腐剂。可以通过如The Boots Company PLC的欧洲专利No.0862424B(PCT/EP96/05208)中所公开的本领域技术人员已知的标准技术来形成锭剂。
例如，通过将锭剂基料(例如，蔗糖和液体葡萄糖的混合物或麦芽糖醇糖浆和/或异麦芽糖酮醇和/或山梨糖醇的含水混合物)在真空下除去过量的水，然后将剩余的成分(例如，2，4-二氯苯甲醇，戊基间甲酚和其他任选赋形剂)混入混合物中来形成锭剂。然后将得到的混合物拉成连续的柱状物质，从其形成单个的锭剂。然后将锭剂冷却，接受目视检查，并包装于合适的包装中(即，泡状包装)。患者通过将压力施加至薄膜来压迫锭剂破碎并通过薄膜封口来取出锭剂。通常患者吮吸锭剂来释放2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚。
可以通过用于制备可咀嚼糖果产品或口香糖的方法来制备可咀嚼固体剂型。例如，可以从已经加入了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚，并任选地添加了发泡剂，湿润剂，润滑剂，调味剂和色素的糖基料(例如，蔗糖和液体葡萄糖)和糖醇基料(例如，麦芽糖醇糖浆，异麦芽糖酮醇和山梨糖醇)的挤压混合物来制得可咀嚼固体剂型(参见，Pharmaceutical Dosage FormsTablets，Volume 1，第2版，H ALieberman，L Lachman和J B Schwartz编辑，1989年出版)。
可以从压实的粉末或颗粒或糊状物通过本领域技术人员公知的技术来制得可咀嚼或可吮吸的片剂。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为高于或等于0.2mg，更优选高于或等于0.5mg，甚至更优选高于或等于1.0mg，最优选高于或等于1.5mg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为低于或等于5mg，更优选低于或等于3mg，甚至更优选低于或等于2mg，最优选低于或等于1.75mg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选戊基间甲酚的存在量为高于或等于50μg，更优选高于或等于100μg，甚至更优选高于或等于250μg，最优选高于或等于500μg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选戊基间甲酚的存在量为低于或等于1500μg，更优选低于或等于1000μg，甚至更优选低于或等于800μg，最优选低于或等于700μg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选药物组合物的总重高于或等于1g，更优选高于或等于1.5g，最优选高于或等于2g。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选组合物的总重低于或等于4g，更优选低于或等于3.5g，最优选低于或等于3g。
本领域技术人员将认识到可吮吸或可咀嚼固体剂型除2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚以外的剩余物基本上(即，高于或等于90重量％，更优选高于或等于95重量％，甚至更优选高于或等于97重量％，最优选高于或等于98重量％，尤其是约99重量％的糖基料)由糖基料构成，尤其是蔗糖和/或葡萄糖，或糖醇基料，尤其是山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆，如在此所述的。优选将在此所述的糖基料和糖醇基料酸化。合适地，当药物组合物包括酸性糖基料或酸性糖醇基料时，这种酸性基料全部优选各自以糖基料和糖醇基料的相同优选量存在。
本发明特别优选的实施方案中，提供了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的StrepsilsTM样制剂，用于治疗或防止SARS相关冠状病毒的病毒性感染。
优选，戊基间甲酚的存在量高于或等于0.01重量％，更优选高于或等于0.02重量％，最优选高于或等于0.025重量％，基于药物组合物的总重。
优选，戊基间甲酚的存在量低于或等于0.5重量％，更优选低于或等于0.1重量％，最优选低于或等于0.05重量％，基于药物组合物的总重。
优选，2，4-二氯苯甲醇的存在量为高于或等于0.02重量％，更优选高于或等于0.04重量％，最优选高于或等于0.05重量％，基于药物组合物的总重。
优选，2，4-二氯苯甲醇的存在量为低于或等于1重量％，更优选低于或等于0.2重量％，最优选低于或等于0.1重量％，基于药物组合物的总重。
优选，药物组合物中戊基间甲酚对2，4-二氯苯甲醇的重量比为1∶20，更优选1∶10，更优选1∶5，最优选1∶2。
将认识到任何形式(即，液体或固体)的药物组合物可以包括上述优选重量％的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚和/或优选重量比的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚。
出乎预料地，另外已经发现了当存在于酸性环境中时，本发明的药物组合物呈现了提高的对抗SARS相关冠状病毒的杀病毒活性。合适地，根据本发明的优选方面，药物组合物是酸性形式(即，酸化的)。更优选，药物组合物包括酸性形式的可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)，尤其是包括酸性糖基料(即，蔗糖和/或葡萄糖)或酸性糖醇基料(即，山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆)，更特别地是酸性糖基料，最特别是酸性蔗糖和/或葡萄糖基料的锭剂。
优选，药物组合物具有低于或等于6.8，更优选低于或等于6.5，最优选低于或等于6.0的pH。优选，本发明的药物组合物具有高于或等于5.0，更优选高于或等于5.5的pH。合适地，当药物组合物包括单独的酸时，优选组合物具有低于或等于5.0，更优选低于或等于4.5，最优选低于或等于4.0的pH。合适地，当药物组合物包括单独的酸时，优选组合物具有高于或等于2.0的pH，更优选高于或等于2.5。将认识到当药物组合物是固体剂型时，可以通过将组合物溶解和/或分散于蒸馏水中，优选5ml的蒸馏水中，来测量药物组合物的pH。所得到的药物组合物的含水分散体和/或溶液优选具有上述限定的pH。最优选，药物组合物包括酸性基料(即，酸性糖基料或酸性糖醇基料)，特别是酸性糖基料，尤其是酸性蔗糖基料。
因此，根据第二个方面，本发明提供了酸性糖(尤其是蔗糖和/或葡萄糖)或酸性糖醇基料(尤其是麦芽糖醇糖浆，异麦芽糖酮醇和/或山梨糖醇)，特别是酸性糖基料，尤其是酸性蔗糖和葡萄糖基料中含有2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的药物组合物，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
优选，当组合物包括酸性糖基料或酸性糖醇基料时，酸性基料是药物组合物的主要成分。优选，糖或糖醇的存在量为高于或等于90重量％，更优选高于或等于95重量％，最优选高于或等于98重量％，基于药物组合物的总重。
通过将单独的酸包含于本发明的药物组合物中来形成酸性基料。合适的酸是有机酸，特别是柠檬酸，苹果酸，马来酸，富马酸，琥珀酸，己二酸和/或酒石酸。优选，酸的存在量为高于或等于0.1重量％，更优选高于或等于0.2重量％，最优选高于或等于0.5重量％，基于药物组合物的总重。优选，酸的存在量为低于或等于2重量％，更优选低于或等于1.6重量％，最优选低于或等于1.4重量％，基于药物组合物的总重。
还考虑了药物组合物可以包括抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、溶质、悬浮剂和增稠剂。可以使用的赋形剂例如包括水，醇，多元醇，甘油和植物油。
药物组合物可以含有防腐剂，溶解剂，稳定剂，润湿剂，乳化剂，甜味剂，色素，添味剂，盐(本发明的物质自身可以以药物学上可接受盐的形式来提供)，缓冲剂，涂层剂或抗氧化剂。除了本发明的物质以外，它们还可以含有治疗性的活性剂。
根据待治疗个体的年龄和情况等，本发明物质的剂量可以在很宽的范围内改变，且医师将最终决定使用的合适剂量。
可吮吸或可咀嚼固体剂型形式的典型药物组合物实质上包括成分重量％(a)酸 0.2至1.6(b)2，4-二氯苯甲醇 0.02至0.10(c)戊基间甲酚 0.01至0.05(d)赋形剂(调味剂，色素，0.1至1.5防腐剂等)(e)糖或糖醇基料 组合物的余量，通常高于或等于97重量％(f)水 高达4重量％，优选1至3重量％。
其中组分(a)-(f)的总和高于或等于组合物的98重量％，更优选高于或等于99重量％，最优选基本上100重量％。
可吮吸或可咀嚼固体剂型形式的高度优选药物组合物包括0.01至0.05重量％的戊基间甲酚；0.02至0.10重量％的2，4-二氯苯甲醇；和0至1.4重量％的有机酸，优选0.8％至1.4重量％的有机酸；
高于95重量％的糖，尤其是蔗糖和/或葡萄糖。
可替换的可吮吸或可咀嚼固体剂型形式的高度优选组合物包括0.01至0.05重量％的戊基间甲酚；0.02至0.10重量％的2，4-二氯苯甲醇；和0至1.4重量％的有机酸，优选0.8％至1.4重量％的有机酸；高于95重量％的糖醇，尤其是山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆。
合适地，因为这种制剂作为StrepsilsTM口腔锭剂来对抗细菌感染使用已经有二十年了或更长时间，推测混合物对患者的粘膜细胞具有很少的有害影响。然而方便地，混合物可以用于治疗或防止由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
根据第三方面，本发明提供了药物制造中的如在此所限定的药物组合物，该药物用于治疗或防止由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
根据第四方面，本发明提供了预防或治疗由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的方法，包括将如在此所限定的药物组合物给药于需要的患者。尽管，本领域技术人员将认识到这种使用药物组合物的治疗方法包括将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚同时给药于患者，也可能将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚顺次给药于患者。
因此，根据第五方面，本发明提供了药品，如各部分的试剂盒，包括2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚，用于顺序治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。优选，本发明提供了药品，包括2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚作为如在此所述的合并药物组合物。
根据第六方面，本发明提供了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚，尤其是如在此所述的药物组合物的用途，用于预防、抑制或杀灭SARS相关的冠状病毒。
根据第七方面，本发明提供了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚在制造用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的药物中的用途。
为了避免疑义，本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七方面的特征及其优选的特征认为是本发明相互方面的优选特征。
现在通过以下的非限制性实施例来描述本发明
材料和方法(a)正对照样品制得以下包括已知能破坏病毒包膜的表面活性剂(Triton X100)的正对照样品。
正对照1(PC1)人造唾液(二次蒸馏水中0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，和0.1％胃粘蛋白，将pH调节至6.0至6.5)加0.1％的Triton X100。
(b)负对照样品制得以下没有包括破坏病毒包膜活性剂的负对照样品。
负对照1(NC1)人造唾液(二次蒸馏水中0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，和0.1％胃粘蛋白，将pH调节至6.0至6.5)。
以10-2的最终稀释度将Urbani SARS病毒稀释于Dulbecco的最小必需培养基(DMEM)中。
(c)测试组合物(TC)将从The Boots Company PLC获得的Strepsil来源的喉片(Strepsils Original Throat Lozenge)的商业片剂，其在蔗糖基料(酸性)中含有1.2mg的2，4-二氯苯甲醇和0.6mg的戊基间甲酚，溶解于5ml的人造唾液中(二次蒸馏水中0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，和0.1％胃粘蛋白)，以便将混合物的pH调节至6.0至6.5。
细胞培养将C1008细胞(Vero 76的克隆)用于杀病毒测试，并将细胞在补充10％热灭活的(56℃，30分钟)胎牛血清(FCS)，2mM L-谷氨酰胺，100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基(从SigmaChemical Company，UK获得)中培养。
实施例1体外活性将40μl Urbani SARS相关冠状病毒(初始滴定度为105TCID50/ml)各自加入360μl如上所示的测试组合物(TC)，负对照样品(NC1)和正对照样品(PC1)中。将所有溶液彻底混合，并在37℃和22.9℃培养30秒钟，1分钟，2分钟和8分钟。混合后，Urbani SARS相关冠状病毒的最终滴定度对于在22.9℃进行的测试为103.5TCID50/ml，对于在37℃进行的测试为103TCID50/ml。通过加入3.6ml培养基(DMEM)的稀释效果来终止病毒与测试组合物或对照样品之间的反应。在这些特定的时间点，通过96孔平板以十倍稀释度对C1088细胞培养物滴定病毒/化合物混合物(110μl)，并将平板在37℃培养5至6天。使用Karber方法对测定的病毒滴定度进行结果分析并列于以下的表1和2中。
表1下表显示了在37℃进行的杀病毒测试中测试组合物(PC1)和对照组合物的病毒滴定度的对数降低。
病毒滴定度～103TCID50/ml*没有病毒复苏。然而，使用Karber计算方法(考虑初始1/10的稀释)，获得0.5TCID50/ml的滴定度。
表2下表显示了在22.9℃进行的杀病毒测试中测试组合物和对照组合物的病毒滴定度的对数降低。
病毒滴定度～103TCID50/ml*没有病毒复苏。然而，使用Karber计算方法(考虑初始1/10的稀释)，获得0.5TCID50/ml的滴定度。
建立了使用Urbani SARS病毒，测试组合物(TC)，PC1和NC1的细胞毒性测试，在杀病毒测试过程中这些组合物对C1008细胞没有毒性。表1和表2的结果表明酸性蔗糖溶液中的2，4-二氯苯甲醇和0.6mg戊基间甲酚混合物能非常显著地降低Urbani SARS相关冠状病毒感染性的能力。合适地，通过进行双份的致细胞病变观察(CPE)来支持这些结果，对每份样品使用电子显微镜检查，详述于以下的表3，4和5中。
表3用Strepsils来源的喉片(TC)在37℃杀病毒测试中的CPE观察
*指的是残留病毒的稀释度表4只用唾液(NC)在37℃杀病毒测试中的CPE观察
*指的是残留病毒的稀释度表5用唾液和Triton X100(PC)在37℃杀病毒测试中的CPE观察
*指的是残留病毒的稀释度以上表3至5中的符号具有以下的意思+＝观察到两个孔中对致细胞病变是阳性的-＝观察到两个孔中对致细胞病变是阴性的+/-＝在一个孔中观察到对致细胞病变是阳性的，在另一个孔中观察到对致细胞病变是阴性的合适地，表3和4种详述的结果证明了与单独的唾液相比较，包括2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的酸性蔗糖基料提供了提高的阴性致细胞病变观察，因此表明了提高的对抗Urbani SARS相关冠状病毒的杀病毒活性。
实施例2至9如表4中所列出的制得以下基于糖的锭剂。最终锭剂的组分以毫克表示。
表4-基于糖的锭剂
将蔗糖和液体葡萄糖(80重量％葡萄糖和20重量％水，从Cerestar，United Kingdom获得)的混合物加热至140℃，并使用真空来降低混合物的含水量。将赋形剂加入密封容器中。将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚以及酸(需要时)混合，并将混合物加入剩余的组分中。将所得到的混合物冷却并形成连续的圆柱状物质，从其形成单个的锭剂。
实施例10至17根据实施例2制得以下如表7中详述的基于糖醇的锭剂，除了用合适的糖醇替代糖基料，并加入约20％的水。在真空下将所得到的混合物加热至145至170℃来减少混合物的含水量，并如实施例2中所述的将其他组分混入。
表7
实施例18至23通过将表8中详述的组分混合大约15分钟并将所得到的混合物在压片机中压实来形成以下的可吮吸或可咀嚼的片剂。
表8
实施例24至27通过将各自的组分在室温下混合15分钟来制得以下的溶液，糖浆和悬浮液。
权利要求
1.一种药物组合物，包含2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
2.如权利要求1中所要求的药物组合物，其中SARS相关病毒包括Urbani SARS相关冠状病毒。
3.如权利要求1或2中所要求的药物组合物，其中该组合物适于鼻、眼睛或口服给药，尤其适于口服给药。
4.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型的形式。
5.如权利要求4中所要求的药物组合物，其中该组合物是锭剂的形式。
6.如权利要求1至3任一项中所要求的药物组合物，其中该药物组合物是液体的形式。
7.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中戊基间甲酚对2，4-二氯苯甲醇的重量比为1∶5至1∶1。
8.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物是酸化的。
9.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物包括酸化的糖基料，尤其是酸化的蔗糖和/或葡萄糖基料。
10.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物包括酸化的糖醇基料。
11.2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚在制造用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的药物中的用途。
12.治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的方法，包括将有效量的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚给药于需要的患者。
13.一种药品，包括2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚，其被连续使用用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
全文摘要
含有2，4－二氯苯甲醇以及戊基间甲酚的药物组合物，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
文档编号A61K31/05GK1909894SQ200580002494
公开日2007年2月7日 申请日期2005年1月11日 优先权日2004年1月14日
发明者I·吉布 申请人:利洁时保健(英国)有限公司
技术领域：
本发明涉及2，4-二氯苯甲醇(或2，4-DCBA)和戊基间甲酚(或AMC)制剂在治疗或预防严重急性呼吸综合征(SARS)病毒感染中的用途。
严重急性呼吸综合征(SARS)是由新的冠状病毒引起的病毒性呼吸道疾病，该新的冠状病毒命名为SARS相关的冠状病毒(SARS-CoV)。2003年首先在中国报道了SARS，随后疾病传播至北美、南美、欧洲和亚洲超过二十二个国家。在2003年SARS爆发的过程中，全世界超过8,000人感染了SARS疾病；这些中，近800人死亡。尤其是，在超过60岁的年龄组中，死亡率超过60％。尽管2003年的SARS爆发得到了控制，但疾病可能再次出现。实际上，在2004年1月，中国报道了又一例SARS病例。
通常，SRAS始于体温高于38℃的高烧。其他症状包括干咳，体疼，呼吸短促和全身不舒服。通常，大部分患者还产生了肺炎。
SARS的主要传播途径是接近的人与人接触。认为病毒最容易通过感染的人员咳嗽或打喷嚏时产生的呼吸道飞沫传递。这种呼吸道飞沫可以通过空气传播并沉积于近距离人员的嘴巴、鼻子或眼睛粘膜上。当人接触污染了感染飞沫的表面然后接触他或她的嘴巴、鼻子或眼睛时，病毒也得到了传播。
合适地，通常通过将已经感染病毒的那些人群分开并将已经暴露于病毒且可能已经感染但没有发病的人群隔离来控制SARS的传播。因此，存在对SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)的病毒感染的预防性治疗和治疗性治疗的需要。
化合物2，4-二氯苯甲醇作为抗防腐剂是已知的，即，作为抗细菌和抗真菌剂，参见，例如，Martindale“The Extra Pharmacopoeia”，第28版，第561页，The Pharmaceutical Press(1982)。戊基间甲酚或6-戊基-间-甲酚作为用于漱口水或锭剂中的消毒剂也是已知的，结合2，4-二氯苯甲醇来治疗口腔感染，参见，例如，Martindale“The ExtraPharmacopoeia”，第28版，第549页，The Pharmaceutical Press(1982)。The Concise Oxford Dictionary(Oxford University Press，Oxford(1982))中将防腐剂定义为对抗脓毒病产生的试剂，尤其是通过防止细菌的生长。在Black’s Medical Dictionary(A & C Black，London(1990))中将脓毒病定义为体内微生物生长产物的中毒，且伴随的一般症状是那些炎症。之前没有表明2，4-二氯苯甲醇或戊基间甲酚能证明对抗SARS相关冠状病毒的活性。
出乎意料地，目前已经发现2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的制剂呈现了对抗SARS相关冠状病毒尤其是表型Urbani SARS相关冠状病毒的杀病毒活性。
根据第一方面，本发明提供了含有2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚的药物组合物，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)尤其是Urbani SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。优选，该药物组合物对于治疗SARS相关冠状病毒尤其是Urbani SARS相关冠状病毒引起的病毒感染是有效的。
合适地，该药物组合物适于通过任何合适的途径给药于患者的粘膜，例如，通过鼻子、眼睛、阴道、直肠或口服途径。可以通过药学领域中已知的任何方法来制得这种组合物，例如将活性成分和载体或赋形剂在无菌条件下混合。优选，该药物组合物适于鼻、眼睛或口服给药，尤其是口服给药。
合适地，药物组合物是液体形式(即，溶液，悬浮液，乳浊液，糖浆，凝胶)或可咀嚼的或可吮吸的固体剂型。对于溶液、糖浆和凝胶的制备，合适的赋形剂包括水、多元醇和糖，尤其是液体葡萄糖和/或液体蔗糖。对于悬浮液的制备，合适的赋形剂包括悬浮油(例如，植物油)。合适的乳浊液包括水包油型或油包水型乳浊液。对于可吮吸固体剂型例如锭剂的制备，可以将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚混合成熔化的锭剂基料(例如，糖和液体蔗糖加上赋形剂的混合物或非糖基料如异麦芽糖酮醇(isomalt)加上任选的赋形剂)，并将混合物拉成圆柱状物质，从其形成锭剂。或者，可咀嚼或可吮吸固体剂型可以是可咀嚼或可吮吸的片剂、胶囊、软锭剂或胶体例如口香糖的形式，其可以通过本领域技术人员公知的技术制得。
本发明高度优选的药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型的形式，如锭剂或可咀嚼或可吮吸片剂，速溶片剂(MeltletTM)胶囊或如在此所述的软锭剂。合适地，使这种剂型适于将治疗有效量的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚释放于需要患者的口腔表面。尤其优选的固体剂型是锭剂的形式，其通过将加热的锭剂糖基料(例如，蔗糖和液体葡萄糖)或加热的锭剂糖醇基料(即，麦芽糖醇糖浆(lycasin)，异麦芽糖酮醇和/或山梨糖醇)、2，4-二氯苯甲醇、戊基间甲酚和其他赋形剂冷却来形成固体锭剂来制得。
优选，该组合物是口服剂型的形式，使得当剂型给药于患者的口腔时，剂型将治疗有效量的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚释放至口腔表面，尤其是喉咙的粘膜。优选，药物组合物是基于糖的(例如，蔗糖和/或葡萄糖)，尤其是基于蔗糖的，或基于糖醇的(例如，异麦芽糖酮醇，麦芽糖醇糖浆或山梨糖醇)溶液、悬浮液、乳液、糖浆、凝胶或可吮吸或可咀嚼的固体剂型。
当药物组合物是液体的形式时(即，溶液，悬浮液，乳浊液，糖浆或凝胶)，可以将液体形式的组合物直接给药至口腔。或者，这种溶液、悬浮液、乳浊液、糖胶或凝胶可以用适于在口腔中崩解的原料(即，羟丙基甲基纤维素膜或明胶膜)封装，使得形成单独的剂量单位。方便地，给药这种剂型后，溶液、悬浮液、乳浊液、糖浆或凝胶的活性成分在封装材料溶解或破裂后释放于口腔中。
合适地，当药物组合物是液体形式时，药物组合物优选是溶液、糖浆或悬浮液的形式。合适地，当药物是溶液形式时，可以将组合物包装于配有喷雾机械装置的分散容器中，该喷雾装置能够将组合物作为细喷雾喷至口腔中，尤其是喷至喉咙的粘膜表面上。
合适地，当药物组合物是液体形式时，例如，溶液、悬浮液、凝胶或糖浆，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为高于或等于10μg/ml，更优选高于或等于0.1mg/ml，最优选高于或等于1mg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，例如溶液、悬浮液、凝胶或糖浆，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为低于或等于10mg/ml，更优选低于或等于7mg/ml，最优选低于或等于5mg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，优选戊基间甲酚的存在量为高于或等于10μg/ml，优选高于或等于50μg/ml，最优选高于或等于100μg/ml，优选高于或等于400μg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，优选戊基间甲酚的存在量为低于或等于5mg/ml，优选低于或等于2.0mg/ml，最优选低于或等于1mg/ml，基于药物组合物的总体积。
合适地，当药物组合物是液体形式时，药物组合物的总体积高于或等于2ml，优选高于或等于3ml，最优选高于或等于5ml。合适地，当药物组合物是液体形式时，药物组合物的总体积低于或等于10ml，优选低于或等于8ml，更优选低于或等于7ml。
合适地，当药物组合物是溶液或悬浮液形式时，液相的主要成分包括水。优选，这种溶液和悬浮液包括高于或等于2ml，优选高于或等于3ml，最优选高于或等于5ml的水。优选，这种溶液和悬浮液包括低于或等于10ml，优选低于或等于8ml，最优选低于或等于7ml的水。
合适地，当药物组合物是糖浆的形式时，液相的主要成分包括液体糖。通过在此所用的术语“液体糖”，我们的意思是溶解于合适溶剂中的糖，优选溶剂包括水。最优选的液体糖包括液体葡萄糖，含有葡萄糖的水溶液(例如，65至90重量％的葡萄糖)，和液体蔗糖，含有蔗糖的水溶液(例如，55至80重量％的蔗糖)。合适地，糖浆包括高于或等于2ml，优选高于或等于3ml，最优选高于或等于5ml的液体糖。优选，糖浆包括低于或等于10ml，优选低于或等于8ml，最优选低于或等于7ml的液体糖。
合适地，当药物组合物是液体形式时，液相(即，对于悬浮液和溶液为水，和对于糖浆为液体糖)存在量为高于或等于90重量％，更优选高于或等于95重量％，基于药物组合物的总重。
优选，药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型，特别是锭剂或可咀嚼或可吮吸片剂、胶囊或软锭剂。如在此所用的术语“锭剂”意思是其中通过将含有活性成分的基于糖(例如，蔗糖和/或葡萄糖)或基于糖醇的(例如，山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆)融化物质冷却来形成产品的所有剂型。优选的可咀嚼固体剂型是通过将加热的含有糖，尤其是蔗糖和/或葡萄糖的锭剂基料，2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚以及任选地其他赋形剂冷却来形成固体锭剂而制得的锭剂，例如酸度调节剂，遮光剂，稳定剂，缓冲剂，调味剂，甜味剂，色素和防腐剂。可以通过如The Boots Company PLC的欧洲专利No.0862424B(PCT/EP96/05208)中所公开的本领域技术人员已知的标准技术来形成锭剂。
例如，通过将锭剂基料(例如，蔗糖和液体葡萄糖的混合物或麦芽糖醇糖浆和/或异麦芽糖酮醇和/或山梨糖醇的含水混合物)在真空下除去过量的水，然后将剩余的成分(例如，2，4-二氯苯甲醇，戊基间甲酚和其他任选赋形剂)混入混合物中来形成锭剂。然后将得到的混合物拉成连续的柱状物质，从其形成单个的锭剂。然后将锭剂冷却，接受目视检查，并包装于合适的包装中(即，泡状包装)。患者通过将压力施加至薄膜来压迫锭剂破碎并通过薄膜封口来取出锭剂。通常患者吮吸锭剂来释放2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚。
可以通过用于制备可咀嚼糖果产品或口香糖的方法来制备可咀嚼固体剂型。例如，可以从已经加入了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚，并任选地添加了发泡剂，湿润剂，润滑剂，调味剂和色素的糖基料(例如，蔗糖和液体葡萄糖)和糖醇基料(例如，麦芽糖醇糖浆，异麦芽糖酮醇和山梨糖醇)的挤压混合物来制得可咀嚼固体剂型(参见，Pharmaceutical Dosage FormsTablets，Volume 1，第2版，H ALieberman，L Lachman和J B Schwartz编辑，1989年出版)。
可以从压实的粉末或颗粒或糊状物通过本领域技术人员公知的技术来制得可咀嚼或可吮吸的片剂。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为高于或等于0.2mg，更优选高于或等于0.5mg，甚至更优选高于或等于1.0mg，最优选高于或等于1.5mg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选2，4-二氯苯甲醇的存在量为低于或等于5mg，更优选低于或等于3mg，甚至更优选低于或等于2mg，最优选低于或等于1.75mg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选戊基间甲酚的存在量为高于或等于50μg，更优选高于或等于100μg，甚至更优选高于或等于250μg，最优选高于或等于500μg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选戊基间甲酚的存在量为低于或等于1500μg，更优选低于或等于1000μg，甚至更优选低于或等于800μg，最优选低于或等于700μg，基于药物组合物的总重。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选药物组合物的总重高于或等于1g，更优选高于或等于1.5g，最优选高于或等于2g。
合适地，当药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)时，优选组合物的总重低于或等于4g，更优选低于或等于3.5g，最优选低于或等于3g。
本领域技术人员将认识到可吮吸或可咀嚼固体剂型除2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚以外的剩余物基本上(即，高于或等于90重量％，更优选高于或等于95重量％，甚至更优选高于或等于97重量％，最优选高于或等于98重量％，尤其是约99重量％的糖基料)由糖基料构成，尤其是蔗糖和/或葡萄糖，或糖醇基料，尤其是山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆，如在此所述的。优选将在此所述的糖基料和糖醇基料酸化。合适地，当药物组合物包括酸性糖基料或酸性糖醇基料时，这种酸性基料全部优选各自以糖基料和糖醇基料的相同优选量存在。
本发明特别优选的实施方案中，提供了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的StrepsilsTM样制剂，用于治疗或防止SARS相关冠状病毒的病毒性感染。
优选，戊基间甲酚的存在量高于或等于0.01重量％，更优选高于或等于0.02重量％，最优选高于或等于0.025重量％，基于药物组合物的总重。
优选，戊基间甲酚的存在量低于或等于0.5重量％，更优选低于或等于0.1重量％，最优选低于或等于0.05重量％，基于药物组合物的总重。
优选，2，4-二氯苯甲醇的存在量为高于或等于0.02重量％，更优选高于或等于0.04重量％，最优选高于或等于0.05重量％，基于药物组合物的总重。
优选，2，4-二氯苯甲醇的存在量为低于或等于1重量％，更优选低于或等于0.2重量％，最优选低于或等于0.1重量％，基于药物组合物的总重。
优选，药物组合物中戊基间甲酚对2，4-二氯苯甲醇的重量比为1∶20，更优选1∶10，更优选1∶5，最优选1∶2。
将认识到任何形式(即，液体或固体)的药物组合物可以包括上述优选重量％的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚和/或优选重量比的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚。
出乎预料地，另外已经发现了当存在于酸性环境中时，本发明的药物组合物呈现了提高的对抗SARS相关冠状病毒的杀病毒活性。合适地，根据本发明的优选方面，药物组合物是酸性形式(即，酸化的)。更优选，药物组合物包括酸性形式的可吮吸或可咀嚼固体剂型(即，锭剂)，尤其是包括酸性糖基料(即，蔗糖和/或葡萄糖)或酸性糖醇基料(即，山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆)，更特别地是酸性糖基料，最特别是酸性蔗糖和/或葡萄糖基料的锭剂。
优选，药物组合物具有低于或等于6.8，更优选低于或等于6.5，最优选低于或等于6.0的pH。优选，本发明的药物组合物具有高于或等于5.0，更优选高于或等于5.5的pH。合适地，当药物组合物包括单独的酸时，优选组合物具有低于或等于5.0，更优选低于或等于4.5，最优选低于或等于4.0的pH。合适地，当药物组合物包括单独的酸时，优选组合物具有高于或等于2.0的pH，更优选高于或等于2.5。将认识到当药物组合物是固体剂型时，可以通过将组合物溶解和/或分散于蒸馏水中，优选5ml的蒸馏水中，来测量药物组合物的pH。所得到的药物组合物的含水分散体和/或溶液优选具有上述限定的pH。最优选，药物组合物包括酸性基料(即，酸性糖基料或酸性糖醇基料)，特别是酸性糖基料，尤其是酸性蔗糖基料。
因此，根据第二个方面，本发明提供了酸性糖(尤其是蔗糖和/或葡萄糖)或酸性糖醇基料(尤其是麦芽糖醇糖浆，异麦芽糖酮醇和/或山梨糖醇)，特别是酸性糖基料，尤其是酸性蔗糖和葡萄糖基料中含有2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的药物组合物，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
优选，当组合物包括酸性糖基料或酸性糖醇基料时，酸性基料是药物组合物的主要成分。优选，糖或糖醇的存在量为高于或等于90重量％，更优选高于或等于95重量％，最优选高于或等于98重量％，基于药物组合物的总重。
通过将单独的酸包含于本发明的药物组合物中来形成酸性基料。合适的酸是有机酸，特别是柠檬酸，苹果酸，马来酸，富马酸，琥珀酸，己二酸和/或酒石酸。优选，酸的存在量为高于或等于0.1重量％，更优选高于或等于0.2重量％，最优选高于或等于0.5重量％，基于药物组合物的总重。优选，酸的存在量为低于或等于2重量％，更优选低于或等于1.6重量％，最优选低于或等于1.4重量％，基于药物组合物的总重。
还考虑了药物组合物可以包括抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、溶质、悬浮剂和增稠剂。可以使用的赋形剂例如包括水，醇，多元醇，甘油和植物油。
药物组合物可以含有防腐剂，溶解剂，稳定剂，润湿剂，乳化剂，甜味剂，色素，添味剂，盐(本发明的物质自身可以以药物学上可接受盐的形式来提供)，缓冲剂，涂层剂或抗氧化剂。除了本发明的物质以外，它们还可以含有治疗性的活性剂。
根据待治疗个体的年龄和情况等，本发明物质的剂量可以在很宽的范围内改变，且医师将最终决定使用的合适剂量。
可吮吸或可咀嚼固体剂型形式的典型药物组合物实质上包括成分重量％(a)酸 0.2至1.6(b)2，4-二氯苯甲醇 0.02至0.10(c)戊基间甲酚 0.01至0.05(d)赋形剂(调味剂，色素，0.1至1.5防腐剂等)(e)糖或糖醇基料 组合物的余量，通常高于或等于97重量％(f)水 高达4重量％，优选1至3重量％。
其中组分(a)-(f)的总和高于或等于组合物的98重量％，更优选高于或等于99重量％，最优选基本上100重量％。
可吮吸或可咀嚼固体剂型形式的高度优选药物组合物包括0.01至0.05重量％的戊基间甲酚；0.02至0.10重量％的2，4-二氯苯甲醇；和0至1.4重量％的有机酸，优选0.8％至1.4重量％的有机酸；
高于95重量％的糖，尤其是蔗糖和/或葡萄糖。
可替换的可吮吸或可咀嚼固体剂型形式的高度优选组合物包括0.01至0.05重量％的戊基间甲酚；0.02至0.10重量％的2，4-二氯苯甲醇；和0至1.4重量％的有机酸，优选0.8％至1.4重量％的有机酸；高于95重量％的糖醇，尤其是山梨糖醇和/或异麦芽糖酮醇和/或麦芽糖醇糖浆。
合适地，因为这种制剂作为StrepsilsTM口腔锭剂来对抗细菌感染使用已经有二十年了或更长时间，推测混合物对患者的粘膜细胞具有很少的有害影响。然而方便地，混合物可以用于治疗或防止由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
根据第三方面，本发明提供了药物制造中的如在此所限定的药物组合物，该药物用于治疗或防止由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
根据第四方面，本发明提供了预防或治疗由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的方法，包括将如在此所限定的药物组合物给药于需要的患者。尽管，本领域技术人员将认识到这种使用药物组合物的治疗方法包括将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚同时给药于患者，也可能将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚顺次给药于患者。
因此，根据第五方面，本发明提供了药品，如各部分的试剂盒，包括2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚，用于顺序治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。优选，本发明提供了药品，包括2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚作为如在此所述的合并药物组合物。
根据第六方面，本发明提供了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚，尤其是如在此所述的药物组合物的用途，用于预防、抑制或杀灭SARS相关的冠状病毒。
根据第七方面，本发明提供了2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚在制造用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的药物中的用途。
为了避免疑义，本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七方面的特征及其优选的特征认为是本发明相互方面的优选特征。
现在通过以下的非限制性实施例来描述本发明
材料和方法(a)正对照样品制得以下包括已知能破坏病毒包膜的表面活性剂(Triton X100)的正对照样品。
正对照1(PC1)人造唾液(二次蒸馏水中0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，和0.1％胃粘蛋白，将pH调节至6.0至6.5)加0.1％的Triton X100。
(b)负对照样品制得以下没有包括破坏病毒包膜活性剂的负对照样品。
负对照1(NC1)人造唾液(二次蒸馏水中0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，和0.1％胃粘蛋白，将pH调节至6.0至6.5)。
以10-2的最终稀释度将Urbani SARS病毒稀释于Dulbecco的最小必需培养基(DMEM)中。
(c)测试组合物(TC)将从The Boots Company PLC获得的Strepsil来源的喉片(Strepsils Original Throat Lozenge)的商业片剂，其在蔗糖基料(酸性)中含有1.2mg的2，4-二氯苯甲醇和0.6mg的戊基间甲酚，溶解于5ml的人造唾液中(二次蒸馏水中0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，和0.1％胃粘蛋白)，以便将混合物的pH调节至6.0至6.5。
细胞培养将C1008细胞(Vero 76的克隆)用于杀病毒测试，并将细胞在补充10％热灭活的(56℃，30分钟)胎牛血清(FCS)，2mM L-谷氨酰胺，100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基(从SigmaChemical Company，UK获得)中培养。
实施例1体外活性将40μl Urbani SARS相关冠状病毒(初始滴定度为105TCID50/ml)各自加入360μl如上所示的测试组合物(TC)，负对照样品(NC1)和正对照样品(PC1)中。将所有溶液彻底混合，并在37℃和22.9℃培养30秒钟，1分钟，2分钟和8分钟。混合后，Urbani SARS相关冠状病毒的最终滴定度对于在22.9℃进行的测试为103.5TCID50/ml，对于在37℃进行的测试为103TCID50/ml。通过加入3.6ml培养基(DMEM)的稀释效果来终止病毒与测试组合物或对照样品之间的反应。在这些特定的时间点，通过96孔平板以十倍稀释度对C1088细胞培养物滴定病毒/化合物混合物(110μl)，并将平板在37℃培养5至6天。使用Karber方法对测定的病毒滴定度进行结果分析并列于以下的表1和2中。
表1下表显示了在37℃进行的杀病毒测试中测试组合物(PC1)和对照组合物的病毒滴定度的对数降低。
病毒滴定度～103TCID50/ml*没有病毒复苏。然而，使用Karber计算方法(考虑初始1/10的稀释)，获得0.5TCID50/ml的滴定度。
表2下表显示了在22.9℃进行的杀病毒测试中测试组合物和对照组合物的病毒滴定度的对数降低。
病毒滴定度～103TCID50/ml*没有病毒复苏。然而，使用Karber计算方法(考虑初始1/10的稀释)，获得0.5TCID50/ml的滴定度。
建立了使用Urbani SARS病毒，测试组合物(TC)，PC1和NC1的细胞毒性测试，在杀病毒测试过程中这些组合物对C1008细胞没有毒性。表1和表2的结果表明酸性蔗糖溶液中的2，4-二氯苯甲醇和0.6mg戊基间甲酚混合物能非常显著地降低Urbani SARS相关冠状病毒感染性的能力。合适地，通过进行双份的致细胞病变观察(CPE)来支持这些结果，对每份样品使用电子显微镜检查，详述于以下的表3，4和5中。
表3用Strepsils来源的喉片(TC)在37℃杀病毒测试中的CPE观察
*指的是残留病毒的稀释度表4只用唾液(NC)在37℃杀病毒测试中的CPE观察
*指的是残留病毒的稀释度表5用唾液和Triton X100(PC)在37℃杀病毒测试中的CPE观察
*指的是残留病毒的稀释度以上表3至5中的符号具有以下的意思+＝观察到两个孔中对致细胞病变是阳性的-＝观察到两个孔中对致细胞病变是阴性的+/-＝在一个孔中观察到对致细胞病变是阳性的，在另一个孔中观察到对致细胞病变是阴性的合适地，表3和4种详述的结果证明了与单独的唾液相比较，包括2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚的酸性蔗糖基料提供了提高的阴性致细胞病变观察，因此表明了提高的对抗Urbani SARS相关冠状病毒的杀病毒活性。
实施例2至9如表4中所列出的制得以下基于糖的锭剂。最终锭剂的组分以毫克表示。
表4-基于糖的锭剂
将蔗糖和液体葡萄糖(80重量％葡萄糖和20重量％水，从Cerestar，United Kingdom获得)的混合物加热至140℃，并使用真空来降低混合物的含水量。将赋形剂加入密封容器中。将2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚以及酸(需要时)混合，并将混合物加入剩余的组分中。将所得到的混合物冷却并形成连续的圆柱状物质，从其形成单个的锭剂。
实施例10至17根据实施例2制得以下如表7中详述的基于糖醇的锭剂，除了用合适的糖醇替代糖基料，并加入约20％的水。在真空下将所得到的混合物加热至145至170℃来减少混合物的含水量，并如实施例2中所述的将其他组分混入。
表7
实施例18至23通过将表8中详述的组分混合大约15分钟并将所得到的混合物在压片机中压实来形成以下的可吮吸或可咀嚼的片剂。
表8
实施例24至27通过将各自的组分在室温下混合15分钟来制得以下的溶液，糖浆和悬浮液。
权利要求
1.一种药物组合物，包含2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
2.如权利要求1中所要求的药物组合物，其中SARS相关病毒包括Urbani SARS相关冠状病毒。
3.如权利要求1或2中所要求的药物组合物，其中该组合物适于鼻、眼睛或口服给药，尤其适于口服给药。
4.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物是可吮吸或可咀嚼固体剂型的形式。
5.如权利要求4中所要求的药物组合物，其中该组合物是锭剂的形式。
6.如权利要求1至3任一项中所要求的药物组合物，其中该药物组合物是液体的形式。
7.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中戊基间甲酚对2，4-二氯苯甲醇的重量比为1∶5至1∶1。
8.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物是酸化的。
9.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物包括酸化的糖基料，尤其是酸化的蔗糖和/或葡萄糖基料。
10.如前述任一项权利要求中所要求的药物组合物，其中该药物组合物包括酸化的糖醇基料。
11.2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚在制造用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的药物中的用途。
12.治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染的方法，包括将有效量的2，4-二氯苯甲醇和戊基间甲酚给药于需要的患者。
13.一种药品，包括2，4-二氯苯甲醇以及戊基间甲酚，其被连续使用用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
全文摘要
含有2，4－二氯苯甲醇以及戊基间甲酚的药物组合物，用于治疗或预防由SARS相关冠状病毒引起的病毒感染。
文档编号A61K31/05GK1909894SQ200580002494
公开日2007年2月7日 申请日期2005年1月11日 优先权日2004年1月14日
发明者I·吉布 申请人:利洁时保健(英国)有限公司
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