抗疱疹病毒药物组合物及其应用的制作方法
专利名称：抗疱疹病毒药物组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物组合物领域，更具体地说是涉及一种抗EB病毒药物组合物及其应用。
背景技术：
EB病毒是一种普遍存在于人类的疱疹病毒，属DNA肿瘤类。EB病毒是由Epstein(爱泼斯坦)与其助手Barr(巴尔)发现，国际上把这种人类疱疹病毒命名为EB病毒。EB病毒与鼻咽癌等癌症和肿瘤的关系非常密切，血清EB病毒抗体滴度升高已成为鼻咽癌筛查的主要指标。从EB病毒追踪和捕捉鼻咽癌，是早期发现鼻咽癌的有效途径之一。据世界卫生组织粗估，80％的鼻咽癌病人发生在中国。有资料表明，中国南方居民EB病毒VCA/IgA阳性率为5.9-6.25％，北方居民为5.78％，按此推算中国人口有EB病毒VCA/IgA阳性的居民约7000万人，至今国内外尚无抑制EB病毒的药物用于临床。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能提高免疫功能，抑制EB病毒和肿瘤生长，增强放、化疗效果，减轻放、化疗毒副反应的抗EB病毒的药物组合物。
本发明的目的还在于提供该药物组合物在制备治疗EB病毒抗体阳性药物中的应用。
本发明的目的还在于提供该药物组合物在制备治疗鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌药物中的应用。
本发明的抗EB病毒药物组合物，含有以下重量份数的组分斑蝥 0.005-1份黄芪 5-89份优选方案为斑蝥 0.01-0.5份黄芪 10-60份本发明的抗EB病毒药物组合物，还可以含有如下重量份数的组分党参2-86份败酱草 2-86份女贞子 2-86份优选方案为党参10-60份败酱草 10-60份女贞子 10-60份本发明的抗EB病毒药物组合物，还可以再含有如下重量份数的组分夏枯草 2-86份山豆根 2-60份优选方案为夏枯草 10-60份山豆根 5-40份本发明的抗EB病毒药物组合物可采用常规的制备工艺，制备成不同的药物剂型供患者使用，如制成口服液、胶囊、粉剂等。
本发明的药物组合物的急性毒性、长期毒性均表明安全有效，对Raji细胞EB病毒EA抗原的表达有强烈的抑制作用；对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有强烈的抑制作用；对正丁酸激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达也有强烈的抑制作用；对EB病毒转化脐血B淋巴细胞有抑制作用；对小鼠肉瘤S180、小鼠U14宫颈癌有一定抑制作用，对人鼻咽癌细胞株CNE2的生长有抑制作用；对机体抗肿瘤免疫有较好的促进作用；对放、化疗有一定的增效、减毒作用。
本发明的药物组合物可用于制备治疗EB病毒抗体阳性、鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌药物。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不以任何形式限制本发明。
实施例1称取斑蝥3g，黄芪5000g，党参5000g，败酱草5000g，女贞子5000g，夏枯草4000g，山豆根3000g，按如下工艺生产口服液将斑蝥用足量碱液提取后，滤过、滤液浓缩成A液，将黄芪、党参、山豆根用水提取后，滤过，浓缩，65％乙醇沉淀，回收乙醇，离心，浓缩为相对密度为1.2的溶液B液；将败酱草、女贞子、夏枯草用50％乙醇提取后，离心、浓缩至相对密度为1.2的溶液，静置，滤过为C液；合并BC两液，静置、滤过后与A液合并，灌装，灭菌，得口服液，每毫升含生药材1.63g。
用法口服，一次20ml，一日3次，饭后服用，服前摇匀，一个月1疗程。
实施例2毒理测试取实施例1所得的口服液进行常规毒理测试小白鼠的急性毒性试验得出半致死量LD50为236.80g/kg；大白鼠长期毒性试验表明，本发明的口服液以110.0g生药/kg.55.0g生药/kg和27.5g生药/kg连续给药6个月中，除中、高剂量组(55.0g生药/kg、110.0g生药/kg)血小板(PLT)计数较空白对照组高(p＜0.05、p＜0.01)外，大鼠的行为体征、外观形态、血液学及血液生化学检测、系统尸解、脏器指数、病理组织学检查均未发现异常改变；停药2周恢复后，各剂量组上述各项检测亦未见异常改变，无延迟性不良影响，提示本发明的口服液以110.0g生药/kg，相当于成人每日口服量的67.5倍条件下，对大鼠的一般状态、血液学、血液生化学、系统尸解、主要脏器重量指数及组织病理学检查均无不良影响和改变，停药后亦未发现有延迟性毒性，可以认为本发明长期连续使用毒性甚低，推测临床用药的安全性较好，对大鼠经口给药的无毒剂量为110.0g生药/kg；Beagle狗长期毒性试验表明本发明对狗的无毒反应的剂量为8.49g/kg。
实施例3对EB病毒转化能力的抑制作用方法1.单个核细胞的分离按常规用淋巴细胞分离液脐带血单个核细胞。
2.EB病毒的制备将含有EB病毒的B95-8猴淋巴母细胞接种在含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，置5％CO237℃孵箱中培养48h，使细胞增倍。然后，置33℃孵箱中培养14天，使B95-8绒猴淋巴母细胞缓慢增殖，使EB病毒大量扩增。离心取上清，再用0.45μM滤膜过滤，收集滤液(内含EB病毒)，分装成小管，贮藏在-70℃冰箱备用。
3.对细胞无毒浓度的测定用台盼蓝拒染法测定受试药物对B淋巴细胞的无毒浓度。
4.药物抑制B淋巴细胞转化的试验方案(1)药物预处理EB病毒1小时，再与B淋巴细胞共同孵育2小时，离心去上清(含药物和残存病毒)后，加入含有0.1μg/ml CSA和20％FBS的RPMI1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，设10个复孔。未用药预处理的EB病毒组为空白对照。
(2)取实施例1的口服液与EB病毒一起与B淋巴细胞同时孵育2小时，离心去上清(含药物和残存病毒)后，加入含有0.1％CSA和20％FBS的RPMI1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，设10个复孔。未用药处理组为空白对照。
将上述装有经药物和EB病毒处理的B淋巴细胞的96孔板放入5％CO237℃培养，每周换液2次，3-4周后置于倒置显微镜下计算每组的细胞转化团数。标准为大于等于25个细胞/1转化团，计算10个复孔的平均转化团数。按下列公式计算转化抑制率(％)。 5.结果见表1和表2表1药物预处理对EB病毒转化力的影响组别 药物浓度(mg/ml)00.625 1.25 2.50 5.00 10.00平均转化团数 127.490.1 63.8 44.2 40.5 24.0转化抑制率(％) -- 29.3 49.9 65.3 68.2 81.2方差分析F＝10.42，p＜0.01表2药物和EB病毒与B淋巴细胞同时孵育对EB病毒转化力的影响批号与组别 药物浓度(mg/ml)0 0.625 1.25 2.50 5.00 10.00一、平均转化团数127.4 90.1 63.8 44.2 40.5 24.0转化抑制率(％) --29.3 49.9 65.3 68.2 81.2二、平均转化团数135.6 108.7 99.5 83.8 74.7 52.0转化抑制率(％) --29.1 35.1 45.5 51.3 66.1方差分析p＜0.01结果显示，EB病毒能使脐血B淋巴细胞转化为淋巴母细胞，而本发明药物对EB病毒转化脐血B淋巴细胞有抑制作用。
实施例4体外MTT法测定对人鼻咽癌细胞CNE2生长抑制作用，结果见表3表3对人鼻咽癌细胞CNE2的细胞毒作用组别药物浓度(mg/ml)3.6 4.86.3 8.4 11.3 15.0 20.0IR(％)12.621.8± 40.1±58.7±79.9± 85.3±88.8±±4.7 12.2 14.7 16.0 7.0 6.0 4.0IR(％)为生长抑制率 实施例5 对EB病毒VCA/IgA OD阳性患者的疗效EB病毒VCA/IgA OD阳性患者70例，其中治疗组、对照组各35例。
治疗组服用实施例1的口服液，每日口服3次，每次20毫升，30天为一个疗程。
对照组服用安慰剂，安慰剂对EB病毒无疗效，颜色、味感、外包装与实施例1的口服液相似，每日口服3次，每次20毫升，30天为一个疗程。
按双盲法给药。
结果治疗组患者33例降低或转阴，有效率94.3％。对照组7例降低或转阴，有效率20％。治疗组治疗前VCA/IgA OD为0.696±0.101(α±s)，治疗后为0.136±0.029(α±s)，治疗前后有显著差异(P＜0.01)，对照组无显著意义。
结论本发明药物能使EB病毒VCA/IgA OD阳性患者降低或转阴，增强免疫功能，具有抑制EB病毒作用。
实施例6 对鼻咽癌患者的疗效鼻咽癌患者60例，病理为鼻咽低分化鳞癌。放疗+药物组、放疗组各30例。放疗+药物组放疗开始，同时服用实施例1的口服液，一日3次，每次20毫升。放疗组单纯放疗。
结果放疗4000rad时，放疗+药物组25例的癌灶明显消退，15例全消退；放疗组18例癌灶明显消退，8例全消退。
结论本发明药物对鼻咽癌部癌灶有显著消退作用，具有祛邪、扶正固本、增效减毒作用。
权利要求
1.一种抗EB病毒药物组合物，其特征在于含有以下重量份数的组分斑蝥 0.005-1份黄芪 5-89份。
2.根据权利要求1所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于各组分的重量份数为斑蝥 0.01-0.5份黄芪 10-60份。
3.根据权利要求1或2所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分党参2-86份败酱草 2-86份女贞子 2-86份。
4.根据权利要求1或2所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分党参10-60份败酱草 10-60份女贞子 10-60份。
5.根据权利要求3所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分夏枯草 2-86份山豆根 2-60份。
6.根据权利要求4所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分夏枯草 10-60份山豆根 5-40份。
7.权利要求1至6所述的抗EB病毒药物组合物在制备治疗EB病毒抗体阳性药物中的应用。
8.权利要求1至6所述的抗EB病毒药物组合物在制备治疗鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种抗疱疹病毒药物组合物，该药物组合物主要包括斑蝥、黄芪组成，还可以辅以党参、败酱草、女贞子、夏枯草、山豆根，该药物组合物具有提高免疫功能，抑制疱疹病毒和肿瘤生长，增强放、化疗效果，减轻放、化疗毒副反应等作用，可用于治疗疱疹病毒抗体阳性、鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌等。
文档编号A61P35/00GK1480178SQ0312670
公开日2004年3月10日 申请日期2003年5月29日 优先权日2003年5月29日
发明者李华忠 申请人:广东省一七七医院
技术领域：
本发明属于药物组合物领域，更具体地说是涉及一种抗EB病毒药物组合物及其应用。
背景技术：
EB病毒是一种普遍存在于人类的疱疹病毒，属DNA肿瘤类。EB病毒是由Epstein(爱泼斯坦)与其助手Barr(巴尔)发现，国际上把这种人类疱疹病毒命名为EB病毒。EB病毒与鼻咽癌等癌症和肿瘤的关系非常密切，血清EB病毒抗体滴度升高已成为鼻咽癌筛查的主要指标。从EB病毒追踪和捕捉鼻咽癌，是早期发现鼻咽癌的有效途径之一。据世界卫生组织粗估，80％的鼻咽癌病人发生在中国。有资料表明，中国南方居民EB病毒VCA/IgA阳性率为5.9-6.25％，北方居民为5.78％，按此推算中国人口有EB病毒VCA/IgA阳性的居民约7000万人，至今国内外尚无抑制EB病毒的药物用于临床。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能提高免疫功能，抑制EB病毒和肿瘤生长，增强放、化疗效果，减轻放、化疗毒副反应的抗EB病毒的药物组合物。
本发明的目的还在于提供该药物组合物在制备治疗EB病毒抗体阳性药物中的应用。
本发明的目的还在于提供该药物组合物在制备治疗鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌药物中的应用。
本发明的抗EB病毒药物组合物，含有以下重量份数的组分斑蝥 0.005-1份黄芪 5-89份优选方案为斑蝥 0.01-0.5份黄芪 10-60份本发明的抗EB病毒药物组合物，还可以含有如下重量份数的组分党参2-86份败酱草 2-86份女贞子 2-86份优选方案为党参10-60份败酱草 10-60份女贞子 10-60份本发明的抗EB病毒药物组合物，还可以再含有如下重量份数的组分夏枯草 2-86份山豆根 2-60份优选方案为夏枯草 10-60份山豆根 5-40份本发明的抗EB病毒药物组合物可采用常规的制备工艺，制备成不同的药物剂型供患者使用，如制成口服液、胶囊、粉剂等。
本发明的药物组合物的急性毒性、长期毒性均表明安全有效，对Raji细胞EB病毒EA抗原的表达有强烈的抑制作用；对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有强烈的抑制作用；对正丁酸激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达也有强烈的抑制作用；对EB病毒转化脐血B淋巴细胞有抑制作用；对小鼠肉瘤S180、小鼠U14宫颈癌有一定抑制作用，对人鼻咽癌细胞株CNE2的生长有抑制作用；对机体抗肿瘤免疫有较好的促进作用；对放、化疗有一定的增效、减毒作用。
本发明的药物组合物可用于制备治疗EB病毒抗体阳性、鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌药物。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不以任何形式限制本发明。
实施例1称取斑蝥3g，黄芪5000g，党参5000g，败酱草5000g，女贞子5000g，夏枯草4000g，山豆根3000g，按如下工艺生产口服液将斑蝥用足量碱液提取后，滤过、滤液浓缩成A液，将黄芪、党参、山豆根用水提取后，滤过，浓缩，65％乙醇沉淀，回收乙醇，离心，浓缩为相对密度为1.2的溶液B液；将败酱草、女贞子、夏枯草用50％乙醇提取后，离心、浓缩至相对密度为1.2的溶液，静置，滤过为C液；合并BC两液，静置、滤过后与A液合并，灌装，灭菌，得口服液，每毫升含生药材1.63g。
用法口服，一次20ml，一日3次，饭后服用，服前摇匀，一个月1疗程。
实施例2毒理测试取实施例1所得的口服液进行常规毒理测试小白鼠的急性毒性试验得出半致死量LD50为236.80g/kg；大白鼠长期毒性试验表明，本发明的口服液以110.0g生药/kg.55.0g生药/kg和27.5g生药/kg连续给药6个月中，除中、高剂量组(55.0g生药/kg、110.0g生药/kg)血小板(PLT)计数较空白对照组高(p＜0.05、p＜0.01)外，大鼠的行为体征、外观形态、血液学及血液生化学检测、系统尸解、脏器指数、病理组织学检查均未发现异常改变；停药2周恢复后，各剂量组上述各项检测亦未见异常改变，无延迟性不良影响，提示本发明的口服液以110.0g生药/kg，相当于成人每日口服量的67.5倍条件下，对大鼠的一般状态、血液学、血液生化学、系统尸解、主要脏器重量指数及组织病理学检查均无不良影响和改变，停药后亦未发现有延迟性毒性，可以认为本发明长期连续使用毒性甚低，推测临床用药的安全性较好，对大鼠经口给药的无毒剂量为110.0g生药/kg；Beagle狗长期毒性试验表明本发明对狗的无毒反应的剂量为8.49g/kg。
实施例3对EB病毒转化能力的抑制作用方法1.单个核细胞的分离按常规用淋巴细胞分离液脐带血单个核细胞。
2.EB病毒的制备将含有EB病毒的B95-8猴淋巴母细胞接种在含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，置5％CO237℃孵箱中培养48h，使细胞增倍。然后，置33℃孵箱中培养14天，使B95-8绒猴淋巴母细胞缓慢增殖，使EB病毒大量扩增。离心取上清，再用0.45μM滤膜过滤，收集滤液(内含EB病毒)，分装成小管，贮藏在-70℃冰箱备用。
3.对细胞无毒浓度的测定用台盼蓝拒染法测定受试药物对B淋巴细胞的无毒浓度。
4.药物抑制B淋巴细胞转化的试验方案(1)药物预处理EB病毒1小时，再与B淋巴细胞共同孵育2小时，离心去上清(含药物和残存病毒)后，加入含有0.1μg/ml CSA和20％FBS的RPMI1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，设10个复孔。未用药预处理的EB病毒组为空白对照。
(2)取实施例1的口服液与EB病毒一起与B淋巴细胞同时孵育2小时，离心去上清(含药物和残存病毒)后，加入含有0.1％CSA和20％FBS的RPMI1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，设10个复孔。未用药处理组为空白对照。
将上述装有经药物和EB病毒处理的B淋巴细胞的96孔板放入5％CO237℃培养，每周换液2次，3-4周后置于倒置显微镜下计算每组的细胞转化团数。标准为大于等于25个细胞/1转化团，计算10个复孔的平均转化团数。按下列公式计算转化抑制率(％)。 5.结果见表1和表2表1药物预处理对EB病毒转化力的影响组别 药物浓度(mg/ml)00.625 1.25 2.50 5.00 10.00平均转化团数 127.490.1 63.8 44.2 40.5 24.0转化抑制率(％) -- 29.3 49.9 65.3 68.2 81.2方差分析F＝10.42，p＜0.01表2药物和EB病毒与B淋巴细胞同时孵育对EB病毒转化力的影响批号与组别 药物浓度(mg/ml)0 0.625 1.25 2.50 5.00 10.00一、平均转化团数127.4 90.1 63.8 44.2 40.5 24.0转化抑制率(％) --29.3 49.9 65.3 68.2 81.2二、平均转化团数135.6 108.7 99.5 83.8 74.7 52.0转化抑制率(％) --29.1 35.1 45.5 51.3 66.1方差分析p＜0.01结果显示，EB病毒能使脐血B淋巴细胞转化为淋巴母细胞，而本发明药物对EB病毒转化脐血B淋巴细胞有抑制作用。
实施例4体外MTT法测定对人鼻咽癌细胞CNE2生长抑制作用，结果见表3表3对人鼻咽癌细胞CNE2的细胞毒作用组别药物浓度(mg/ml)3.6 4.86.3 8.4 11.3 15.0 20.0IR(％)12.621.8± 40.1±58.7±79.9± 85.3±88.8±±4.7 12.2 14.7 16.0 7.0 6.0 4.0IR(％)为生长抑制率 实施例5 对EB病毒VCA/IgA OD阳性患者的疗效EB病毒VCA/IgA OD阳性患者70例，其中治疗组、对照组各35例。
治疗组服用实施例1的口服液，每日口服3次，每次20毫升，30天为一个疗程。
对照组服用安慰剂，安慰剂对EB病毒无疗效，颜色、味感、外包装与实施例1的口服液相似，每日口服3次，每次20毫升，30天为一个疗程。
按双盲法给药。
结果治疗组患者33例降低或转阴，有效率94.3％。对照组7例降低或转阴，有效率20％。治疗组治疗前VCA/IgA OD为0.696±0.101(α±s)，治疗后为0.136±0.029(α±s)，治疗前后有显著差异(P＜0.01)，对照组无显著意义。
结论本发明药物能使EB病毒VCA/IgA OD阳性患者降低或转阴，增强免疫功能，具有抑制EB病毒作用。
实施例6 对鼻咽癌患者的疗效鼻咽癌患者60例，病理为鼻咽低分化鳞癌。放疗+药物组、放疗组各30例。放疗+药物组放疗开始，同时服用实施例1的口服液，一日3次，每次20毫升。放疗组单纯放疗。
结果放疗4000rad时，放疗+药物组25例的癌灶明显消退，15例全消退；放疗组18例癌灶明显消退，8例全消退。
结论本发明药物对鼻咽癌部癌灶有显著消退作用，具有祛邪、扶正固本、增效减毒作用。
权利要求
1.一种抗EB病毒药物组合物，其特征在于含有以下重量份数的组分斑蝥 0.005-1份黄芪 5-89份。
2.根据权利要求1所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于各组分的重量份数为斑蝥 0.01-0.5份黄芪 10-60份。
3.根据权利要求1或2所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分党参2-86份败酱草 2-86份女贞子 2-86份。
4.根据权利要求1或2所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分党参10-60份败酱草 10-60份女贞子 10-60份。
5.根据权利要求3所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分夏枯草 2-86份山豆根 2-60份。
6.根据权利要求4所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还含有如下重量份数的组分夏枯草 10-60份山豆根 5-40份。
7.权利要求1至6所述的抗EB病毒药物组合物在制备治疗EB病毒抗体阳性药物中的应用。
8.权利要求1至6所述的抗EB病毒药物组合物在制备治疗鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种抗疱疹病毒药物组合物，该药物组合物主要包括斑蝥、黄芪组成，还可以辅以党参、败酱草、女贞子、夏枯草、山豆根，该药物组合物具有提高免疫功能，抑制疱疹病毒和肿瘤生长，增强放、化疗效果，减轻放、化疗毒副反应等作用，可用于治疗疱疹病毒抗体阳性、鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌等。
文档编号A61P35/00GK1480178SQ0312670
公开日2004年3月10日 申请日期2003年5月29日 优先权日2003年5月29日
发明者李华忠 申请人:广东省一七七医院
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