抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗及制法用途的制作方法
专利名称：抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗及制法用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗及制法。
本发明的目的在于提供一种弧菌毒素疫苗的生产工艺，其特性能完全为作用动物所接受。
2，外毒素的提纯1)，硫酸铵分级盐析离心上清中加入固体硫酸铵至20％的饱和度，置于4℃静置4小时，10000rpm离心30分钟，弃沉淀，再于上清中加固体硫酸铵至60％的饱和度，置于4℃静置4小时，10000rpm离心30分钟，去上清，沉淀溶于浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液中，对相同缓冲液透析过夜，收集即为粗提外毒素1。
2)，DEAE-纤维素离子交换层析粗提外毒素1加入已平衡的DEAE-纤维素柱上(Phamacia产品，2.6cm×30cm)。用浓度为0~1mol/L的NaCl以及浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液梯度洗脱，流速为5ml/cm2/小时，每4ml收集一管，同时测定每管的溶血价。合并蛋白峰洗脱液，用浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液
3)，Sephadex-G100层析粗提外毒素2加入已平衡的Sephadex-G100层析柱中(Phamacia产品，1.6cm×100cm)，用浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液洗脱，流速为6ml/cm2/小时，每4ml收集一管，同时测定每管的溶血价。合并蛋白峰，用PEG100浓缩胶浓缩，然后再对浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液透析过夜，即为纯化外毒素。
3，毒素苗的制备用浓度为0.2％的福尔马林对外毒素进行灭活处理，得到的灭活疫苗为毒素苗。
本发明所提供的抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗，应用于海水养殖动物糊菌病的免疫，可取得较好的效果，利用上述制备的弧菌毒素疫苗经注射或浸泡养殖动物，其保护效果见下表表1 疫苗在网箱养殖真鲷中的试用效果实验时间实验鱼死亡鱼 死亡率存活率地点 组 别(月) (尾) (尾) (％) (％)免疫组 6 400 7217.9 82.1深圳对照组 6 400 198 49.4 50.6免疫组 6 400 389.690.4湛江对照组 6 400 159 39.7 60.3表2 疫苗在网箱养殖石斑鱼中的试用效果实验时间 实验鱼 死亡鱼死亡率 存活率地点组 别(月)(尾) (尾) (％) (％)免疫组 6 400 107 26.8 73.2深圳对照组 6 400 210 52.4 47.6免疫组 6 400 114 28.4 71.6湛江对照组 6 400 198 49.6 50.权利要求
1.一种抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗，其特征在于本疫苗为病原弧菌最小弧菌产生的外毒素经福尔马林灭活后制成，产生菌种为最小弧菌。
2.一种制备权利要求1所述的弧菌毒素疫苗方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)最小弧菌活化后接种普通海水营养培养基后，30℃、200rpm摇床培养18-20小时，培养物经10000rpm离心30分钟，取上清；(2)采用硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析及Sephadex-G100层析方法对上清中的外毒素进行分离纯化；(3)纯化外毒素经福尔马林灭活后制成毒素苗。
3.一种权利要求1所述的抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗的用途，，其特征在于，疫苗适用作多种养殖海水动物提高养殖产量的抗弧菌的免疫剂。
全文摘要
本发明涉及一种抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗的制法及用途。本疫苗为病原弧菌最小弧菌产生的外毒素经福尔马林灭活后制成。最小弧菌活化后接种普通海水营养培养基后，30℃、200rpm摇床培养18－20小时，培养物经10000rpm离心30分钟，取上清，采用硫酸铵沉淀、DEAE－纤维素层析及Sephadex－G100层析等方法对最小弧菌产生的外毒素进行分离纯化。纯化后的外毒素经福尔马林灭活制成毒素苗，这种毒素苗能产生较好的免疫保护性，其免疫保护率可达80％。该疫苗适用于免疫多种养殖海水鱼类，并具有提高养殖产量的效果。
文档编号A61P31/04GK1456354SQ03126710
公开日2003年11月19日 申请日期2003年5月29日 优先权日2003年5月29日
发明者吴后波, 潘金培 申请人:中国科学院南海海洋研究所
技术领域：
本发明涉及一种抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗及制法。
本发明的目的在于提供一种弧菌毒素疫苗的生产工艺，其特性能完全为作用动物所接受。
2，外毒素的提纯1)，硫酸铵分级盐析离心上清中加入固体硫酸铵至20％的饱和度，置于4℃静置4小时，10000rpm离心30分钟，弃沉淀，再于上清中加固体硫酸铵至60％的饱和度，置于4℃静置4小时，10000rpm离心30分钟，去上清，沉淀溶于浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液中，对相同缓冲液透析过夜，收集即为粗提外毒素1。
2)，DEAE-纤维素离子交换层析粗提外毒素1加入已平衡的DEAE-纤维素柱上(Phamacia产品，2.6cm×30cm)。用浓度为0~1mol/L的NaCl以及浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液梯度洗脱，流速为5ml/cm2/小时，每4ml收集一管，同时测定每管的溶血价。合并蛋白峰洗脱液，用浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液
3)，Sephadex-G100层析粗提外毒素2加入已平衡的Sephadex-G100层析柱中(Phamacia产品，1.6cm×100cm)，用浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液洗脱，流速为6ml/cm2/小时，每4ml收集一管，同时测定每管的溶血价。合并蛋白峰，用PEG100浓缩胶浓缩，然后再对浓度为50mmol/L的Tris-Hcl(pH7.8)缓冲液透析过夜，即为纯化外毒素。
3，毒素苗的制备用浓度为0.2％的福尔马林对外毒素进行灭活处理，得到的灭活疫苗为毒素苗。
本发明所提供的抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗，应用于海水养殖动物糊菌病的免疫，可取得较好的效果，利用上述制备的弧菌毒素疫苗经注射或浸泡养殖动物，其保护效果见下表表1 疫苗在网箱养殖真鲷中的试用效果实验时间实验鱼死亡鱼 死亡率存活率地点 组 别(月) (尾) (尾) (％) (％)免疫组 6 400 7217.9 82.1深圳对照组 6 400 198 49.4 50.6免疫组 6 400 389.690.4湛江对照组 6 400 159 39.7 60.3表2 疫苗在网箱养殖石斑鱼中的试用效果实验时间 实验鱼 死亡鱼死亡率 存活率地点组 别(月)(尾) (尾) (％) (％)免疫组 6 400 107 26.8 73.2深圳对照组 6 400 210 52.4 47.6免疫组 6 400 114 28.4 71.6湛江对照组 6 400 198 49.6 50.权利要求
1.一种抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗，其特征在于本疫苗为病原弧菌最小弧菌产生的外毒素经福尔马林灭活后制成，产生菌种为最小弧菌。
2.一种制备权利要求1所述的弧菌毒素疫苗方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)最小弧菌活化后接种普通海水营养培养基后，30℃、200rpm摇床培养18-20小时，培养物经10000rpm离心30分钟，取上清；(2)采用硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析及Sephadex-G100层析方法对上清中的外毒素进行分离纯化；(3)纯化外毒素经福尔马林灭活后制成毒素苗。
3.一种权利要求1所述的抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗的用途，，其特征在于，疫苗适用作多种养殖海水动物提高养殖产量的抗弧菌的免疫剂。
全文摘要
本发明涉及一种抗海水养殖动物弧菌病的毒素疫苗的制法及用途。本疫苗为病原弧菌最小弧菌产生的外毒素经福尔马林灭活后制成。最小弧菌活化后接种普通海水营养培养基后，30℃、200rpm摇床培养18－20小时，培养物经10000rpm离心30分钟，取上清，采用硫酸铵沉淀、DEAE－纤维素层析及Sephadex－G100层析等方法对最小弧菌产生的外毒素进行分离纯化。纯化后的外毒素经福尔马林灭活制成毒素苗，这种毒素苗能产生较好的免疫保护性，其免疫保护率可达80％。该疫苗适用于免疫多种养殖海水鱼类，并具有提高养殖产量的效果。
文档编号A61P31/04GK1456354SQ03126710
公开日2003年11月19日 申请日期2003年5月29日 优先权日2003年5月29日
发明者吴后波, 潘金培 申请人:中国科学院南海海洋研究所
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