一类活性寡糖及其衍生物的制备的制作方法
专利名称：一类活性寡糖及其衍生物的制备的制作方法
技术领域：
本发明是关于有生物活性的，特别是涉及有增强免疫力，抗肿瘤，抗病毒活性，能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备。
根据目前所知，增强动物免疫能力的，大多为多糖，如香菇多糖、灵芝多糖等由实用菌中提取的多糖，或中草药中提取的多糖。已研究清楚的、有明确免疫活性的寡糖并不多，如1，3-α连接的甘露寡糖、1，3-β连接的葡萄寡糖等。香菇多糖是有明确抗肿瘤活性、提高人体免疫力的多糖，它不是直接去攻击肿瘤细胞，而是通过激活人体的免疫系统从而杀死肿瘤细胞，它在起作用时首先与哪个受体结合，至今仍未搞清。最先发现香菇多糖抗肿瘤活性的日本科学家认为，香菇多糖的三重螺旋结构是保持它活性的必要结构，并举例说未经处理的分子量为百万的香菇多糖，与经过酸水解的分子量为1.4万的小香菇多糖都具有三重螺旋结构，因此具有类似的活性[[Carbohydr.Res.1993，245，81-96.Nature 1969，222，687]。但我们认为其生物活性是由其一级结构，即组成多糖的寡糖(见下图)结构单元决定的，这一点在我们已经申请的专利(中国专利申请号99126224.7，00100376.3)中得到证明。 本发明的目的在于在我们过去发明的活性寡糖[中国专利申请号97125788.4，98103241.1，98103242.7]的基础上，制备一类新的具有更高生物活性的寡糖及其衍生物。
本发明是关于有生物活性的，特别是涉及有增强免疫力，抗肿瘤，抗病毒活性，能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备，其具有下述式[1]，[2]，[3]，[4]，[5]，[6]和[7] 式[2]与[6]中R为烷基或不同链长的聚乙二醇片段，即(CH2)n或(CH2CH2O)n，n最好是2-14的整数。式[4]，[5]，[6]和[7]中R1为糖基，R2为羟基，烷基，芳基，氨基或多肽。R1为任何单糖或双糖，其与六糖为任何连接方式。
下面结合实施例对本发明进行详细地说明。
实施例1·三糖供体9的制备(1)双糖3的制备 苯甲酰基葡萄糖三氯乙酰亚胺酯1(5.6克，7.56毫摩尔)溶于40毫升二氯甲烷中，得溶液A，1，25，6-二-O-异丙叉基葡萄糖2(2.8克，10.77.毫摩尔)溶于20毫升二氯甲烷中，得溶液B，将B与A混合得溶液C，向C中加入三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTF，0.08毫摩尔)，在室温反应二小时后，薄层色谱分析表明反应完成。将反应液以100毫升二氯甲烷稀释，用0.5％的HCl/CH3OH溶液稀释并搅拌1小时，选择性地水解掉5，6-O-异丙叉基，三乙胺中和，减压蒸掉溶剂，用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/2)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到双糖4(5.43克)，产率90％。
(2)三糖5的制备 苯甲酰基葡萄糖三氯乙酰亚胺酯1(3.7克，5.01毫摩尔)溶于30毫升二氯甲烷中，得溶液A，双糖4(4.0克，5.01毫摩尔)溶于30毫升二氯甲烷，得溶液B，将B与A混合得溶液C，在冰盐浴冷却下，向C中加入TMSOTF 0.05毫摩尔，然后自然恢复至室温，在室温反应3小时后，薄层色谱分析表明反应完成。将反应液以三乙胺中和，用水洗涤，弃去水相，有机相在真空下抽干，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖7(5.86克)，产率85％。
(3)三糖7的制备 三糖5(6.0克，4.36毫摩尔)溶于50毫升80％乙酸水溶液中，在60℃搅拌下水解，用薄层色谱分析检测反应，反应完成后。将反应液在减压下蒸干，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖6(5.24克)产率90％，将6按常规方法用乙酸酐/吡啶定量乙酰化，得到全酰化的三糖7。
(4)三糖供体9的制备 三糖7(5.5克，3.76毫克分子)溶于30毫升二甲基甲酰胺中，加入NH4HCO33克，反应在室温下进行，并用薄层色谱分析检测反应，反应完成后，减压蒸干溶剂，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖8(4.8克)，产率90％，将8(6克，4.2毫克分子)溶于40毫升二氯甲烷中，加入三氯乙睛3毫升，碳酸钾3克，室温下搅23小时，薄层分析表明反应完成，用常规方法进行后处理，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖供体9(6.01克)，产率91％。
按1与2偶联的条件，使3-O-烯丙基-2，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-葡萄糖三氯乙酰亚胺酯10(5克，7.38毫克分子)与1，25，6异丙叉基葡萄糖2(2.13克8.20毫克分子)偶联，反应完成后，将反应液以100毫升二氯甲烷稀释，用0.5％的HCl/CH3OH溶液稀释并搅拌1小时，选择性地水解掉5，6-O-异丙叉基，三乙胺中和，减压蒸掉溶剂，用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到双糖12(4.89克)，产率90％。按1与2偶联的条件，再使1与双糖受体12偶联，得到三糖13(5.67克，65％)，将13溶于100毫升干燥的甲醇溶液中，加入氯化钯0.5克，在室温、搅拌下反应，并以薄层分析检测，当检测表明烯丙基已被选择性移除时，过滤，减压下蒸干溶剂，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到三糖14(4.94克)，产率90％。
3.六糖18的制备 将三糖供体9(3克，1.92毫克分子)与三糖受体14(2.44克，1.92毫克分子)溶于40毫升二氯甲烷中，在冰盐浴冷却下加入TMSOTf(0.02毫摩尔)，然后自然恢复至室温，在氮气保护，室温、搅拌下进行反应，用薄层分析检测，反应完成后，用常规方法后处理，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到六糖15(4.11克)，产率80％。将15(3.5克，1.31毫摩尔)溶于40毫升80％乙酸水溶液中，在60℃搅拌下水解，用薄层色谱分析检测反应，反应完成后。将反应液在减压下蒸干，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，将其按常规方法用乙酸酐/吡啶定量乙酰化，得到全酰化的六糖17(3.25克)。产率90％。将17(2克，0.72毫克分子)溶于40毫升甲醇中，用氨饱和，室温过夜，用薄层分析检测反应，反应完成后，减压蒸干溶剂，用二氯甲烷洗涤，弃掉洗涤液，得到粉末装产物18(681毫克)，产率95％。4.四糖受体22的制备 R’＝Ac-R”＝Me(β)按三糖5转化为三糖供体9的条件，将三糖13转化为三糖供体19，然后按1与2偶联的条件，使19(3.25克，2.16毫克分子)与单糖受体20(0.80克，2.50毫克分子)偶联，得到4糖21(2.50克，产率70％)。5.七糖24的制备按13到14的过程制备四糖受体22。按9和14偶联制备六糖18的方法，由9(2.35克，1.50毫克分子)和22(2.40克，1.45毫克分子)偶联，得到七糖23(3.10克，产率70％)。脱保护基得到七糖24。 6.六糖的二聚体十二糖的制备 按三糖5转化为三糖供体9的条件，将六糖17转化为六糖供体25，然后按1与2偶联的条件，使25(3.25克，2.16毫克分子)与乙二醇受体(0.05克，0.75毫克分子)偶联，得到六糖的二聚体十二糖(1 50克，产率40％)。脱保护基得十二糖26。7.六糖的三聚体十八糖的制备按三糖5转化为三糖供体9的条件，将六糖17转化为六糖供体25，然后按1与2偶联的条件，使25(6.5克，4.32毫克分子)与甘油三醇受体(0.23克，0.67毫克分子)偶联，得到六糖的三聚体十八糖(1.40克，产率32％)。脱保护基得十八糖27。
权利要求
1.本发明是关于有生物活性的，特别是涉及有增强免疫力，抗肿瘤，抗病毒活性，能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备，其具有下述式[1]，[2]，[3]，[4]，[5]，[6]和[7] 式[2]与[6]中R为烷基或不同链长的聚乙二醇片段，即(CH2)n或(CH2CH2O)n，n最好为2-14的整数。式[4]，[5]，[6]和[7]中R1为糖基，R2为羟基，烷基，芳基，氨基或多肽。R1为任何单糖双糖或寡糖，其与六糖为任何连接方式。
全文摘要
本发明是关于有生物活性的,特别是涉及有增强免疫力,抗肿瘤,抗病毒活性,能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备。
文档编号A61P31/12GK1341666SQ0012430
公开日2002年3月27日 申请日期2000年9月4日 优先权日2000年9月4日
发明者宁君, 孔繁祚 申请人:中国科学院生态环境研究中心
技术领域：
本发明是关于有生物活性的，特别是涉及有增强免疫力，抗肿瘤，抗病毒活性，能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备。
根据目前所知，增强动物免疫能力的，大多为多糖，如香菇多糖、灵芝多糖等由实用菌中提取的多糖，或中草药中提取的多糖。已研究清楚的、有明确免疫活性的寡糖并不多，如1，3-α连接的甘露寡糖、1，3-β连接的葡萄寡糖等。香菇多糖是有明确抗肿瘤活性、提高人体免疫力的多糖，它不是直接去攻击肿瘤细胞，而是通过激活人体的免疫系统从而杀死肿瘤细胞，它在起作用时首先与哪个受体结合，至今仍未搞清。最先发现香菇多糖抗肿瘤活性的日本科学家认为，香菇多糖的三重螺旋结构是保持它活性的必要结构，并举例说未经处理的分子量为百万的香菇多糖，与经过酸水解的分子量为1.4万的小香菇多糖都具有三重螺旋结构，因此具有类似的活性[[Carbohydr.Res.1993，245，81-96.Nature 1969，222，687]。但我们认为其生物活性是由其一级结构，即组成多糖的寡糖(见下图)结构单元决定的，这一点在我们已经申请的专利(中国专利申请号99126224.7，00100376.3)中得到证明。 本发明的目的在于在我们过去发明的活性寡糖[中国专利申请号97125788.4，98103241.1，98103242.7]的基础上，制备一类新的具有更高生物活性的寡糖及其衍生物。
本发明是关于有生物活性的，特别是涉及有增强免疫力，抗肿瘤，抗病毒活性，能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备，其具有下述式[1]，[2]，[3]，[4]，[5]，[6]和[7] 式[2]与[6]中R为烷基或不同链长的聚乙二醇片段，即(CH2)n或(CH2CH2O)n，n最好是2-14的整数。式[4]，[5]，[6]和[7]中R1为糖基，R2为羟基，烷基，芳基，氨基或多肽。R1为任何单糖或双糖，其与六糖为任何连接方式。
下面结合实施例对本发明进行详细地说明。
实施例1·三糖供体9的制备(1)双糖3的制备 苯甲酰基葡萄糖三氯乙酰亚胺酯1(5.6克，7.56毫摩尔)溶于40毫升二氯甲烷中，得溶液A，1，25，6-二-O-异丙叉基葡萄糖2(2.8克，10.77.毫摩尔)溶于20毫升二氯甲烷中，得溶液B，将B与A混合得溶液C，向C中加入三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTF，0.08毫摩尔)，在室温反应二小时后，薄层色谱分析表明反应完成。将反应液以100毫升二氯甲烷稀释，用0.5％的HCl/CH3OH溶液稀释并搅拌1小时，选择性地水解掉5，6-O-异丙叉基，三乙胺中和，减压蒸掉溶剂，用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/2)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到双糖4(5.43克)，产率90％。
(2)三糖5的制备 苯甲酰基葡萄糖三氯乙酰亚胺酯1(3.7克，5.01毫摩尔)溶于30毫升二氯甲烷中，得溶液A，双糖4(4.0克，5.01毫摩尔)溶于30毫升二氯甲烷，得溶液B，将B与A混合得溶液C，在冰盐浴冷却下，向C中加入TMSOTF 0.05毫摩尔，然后自然恢复至室温，在室温反应3小时后，薄层色谱分析表明反应完成。将反应液以三乙胺中和，用水洗涤，弃去水相，有机相在真空下抽干，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖7(5.86克)，产率85％。
(3)三糖7的制备 三糖5(6.0克，4.36毫摩尔)溶于50毫升80％乙酸水溶液中，在60℃搅拌下水解，用薄层色谱分析检测反应，反应完成后。将反应液在减压下蒸干，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖6(5.24克)产率90％，将6按常规方法用乙酸酐/吡啶定量乙酰化，得到全酰化的三糖7。
(4)三糖供体9的制备 三糖7(5.5克，3.76毫克分子)溶于30毫升二甲基甲酰胺中，加入NH4HCO33克，反应在室温下进行，并用薄层色谱分析检测反应，反应完成后，减压蒸干溶剂，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖8(4.8克)，产率90％，将8(6克，4.2毫克分子)溶于40毫升二氯甲烷中，加入三氯乙睛3毫升，碳酸钾3克，室温下搅23小时，薄层分析表明反应完成，用常规方法进行后处理，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖供体9(6.01克)，产率91％。
按1与2偶联的条件，使3-O-烯丙基-2，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-葡萄糖三氯乙酰亚胺酯10(5克，7.38毫克分子)与1，25，6异丙叉基葡萄糖2(2.13克8.20毫克分子)偶联，反应完成后，将反应液以100毫升二氯甲烷稀释，用0.5％的HCl/CH3OH溶液稀释并搅拌1小时，选择性地水解掉5，6-O-异丙叉基，三乙胺中和，减压蒸掉溶剂，用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到双糖12(4.89克)，产率90％。按1与2偶联的条件，再使1与双糖受体12偶联，得到三糖13(5.67克，65％)，将13溶于100毫升干燥的甲醇溶液中，加入氯化钯0.5克，在室温、搅拌下反应，并以薄层分析检测，当检测表明烯丙基已被选择性移除时，过滤，减压下蒸干溶剂，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到三糖14(4.94克)，产率90％。
3.六糖18的制备 将三糖供体9(3克，1.92毫克分子)与三糖受体14(2.44克，1.92毫克分子)溶于40毫升二氯甲烷中，在冰盐浴冷却下加入TMSOTf(0.02毫摩尔)，然后自然恢复至室温，在氮气保护，室温、搅拌下进行反应，用薄层分析检测，反应完成后，用常规方法后处理，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到六糖15(4.11克)，产率80％。将15(3.5克，1.31毫摩尔)溶于40毫升80％乙酸水溶液中，在60℃搅拌下水解，用薄层色谱分析检测反应，反应完成后。将反应液在减压下蒸干，粗产物用硅胶柱层析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)作为淋洗液淋洗，收集相应组分，将其按常规方法用乙酸酐/吡啶定量乙酰化，得到全酰化的六糖17(3.25克)。产率90％。将17(2克，0.72毫克分子)溶于40毫升甲醇中，用氨饱和，室温过夜，用薄层分析检测反应，反应完成后，减压蒸干溶剂，用二氯甲烷洗涤，弃掉洗涤液，得到粉末装产物18(681毫克)，产率95％。4.四糖受体22的制备 R’＝Ac-R”＝Me(β)按三糖5转化为三糖供体9的条件，将三糖13转化为三糖供体19，然后按1与2偶联的条件，使19(3.25克，2.16毫克分子)与单糖受体20(0.80克，2.50毫克分子)偶联，得到4糖21(2.50克，产率70％)。5.七糖24的制备按13到14的过程制备四糖受体22。按9和14偶联制备六糖18的方法，由9(2.35克，1.50毫克分子)和22(2.40克，1.45毫克分子)偶联，得到七糖23(3.10克，产率70％)。脱保护基得到七糖24。 6.六糖的二聚体十二糖的制备 按三糖5转化为三糖供体9的条件，将六糖17转化为六糖供体25，然后按1与2偶联的条件，使25(3.25克，2.16毫克分子)与乙二醇受体(0.05克，0.75毫克分子)偶联，得到六糖的二聚体十二糖(1 50克，产率40％)。脱保护基得十二糖26。7.六糖的三聚体十八糖的制备按三糖5转化为三糖供体9的条件，将六糖17转化为六糖供体25，然后按1与2偶联的条件，使25(6.5克，4.32毫克分子)与甘油三醇受体(0.23克，0.67毫克分子)偶联，得到六糖的三聚体十八糖(1.40克，产率32％)。脱保护基得十八糖27。
权利要求
1.本发明是关于有生物活性的，特别是涉及有增强免疫力，抗肿瘤，抗病毒活性，能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备，其具有下述式[1]，[2]，[3]，[4]，[5]，[6]和[7] 式[2]与[6]中R为烷基或不同链长的聚乙二醇片段，即(CH2)n或(CH2CH2O)n，n最好为2-14的整数。式[4]，[5]，[6]和[7]中R1为糖基，R2为羟基，烷基，芳基，氨基或多肽。R1为任何单糖双糖或寡糖，其与六糖为任何连接方式。
全文摘要
本发明是关于有生物活性的,特别是涉及有增强免疫力,抗肿瘤,抗病毒活性,能用作医药的活性寡糖及其衍生物的制备。
文档编号A61P31/12GK1341666SQ0012430
公开日2002年3月27日 申请日期2000年9月4日 优先权日2000年9月4日
发明者宁君, 孔繁祚 申请人:中国科学院生态环境研究中心
最新回复(0)