新鱼腥草素钠注射剂及其制备方法
专利名称：新鱼腥草素钠注射剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及新鱼腥草素钠静脉注射剂及其制备方法。
背景技术：
用化学方法合成的新鱼腥草素钠(Neo-Houttuyninum)，化学名称为十二酰乙醛亚硫酸氢钠，与天然鱼腥草素(Houttuyninum)中的有效成分鱼腥草素钠，化学名称为癸酰乙醛同系列的亚硫酸氢钠加成物，两者的药理作用和疗效基本相似。目前用新鱼腥草素钠制成的制剂有新鱼腥草素钠注射液，现收载于《广东省药品标准》(1987版下册)第1177-1178页，该品种为抗菌消炎药。为三白草科植物蕺菜(Houttuynia sulfite)全草挥发油中一种醛类成分的化学合成物。对肺炎双球菌，伤寒杆菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌及孢子丝菌等有明显抑制作用。可提高机体免疫力，增强白细胞的吞噬功能，提高血清备解素水平，提高机体非特异性免疫力。用于附件炎、盆腔炎、慢性宫颈炎等妇科各种炎症。并用于上呼吸道感染、慢性支气管炎、肺炎等，使用时肌内注射。由于该药在肌内注射时出现疼痛，患者在使用时产生恐惧心理；同时原料由于纯度不高(生产工艺及检验方法缺陷造成)，该药在贮存期易析出；且肌内注射的疗效不及静脉滴注，影响了该药的使用及疗效。吐温-80作为表面活性剂用于注射液中有提高药物溶解性的作用，肌注中常用，静脉中慎用或少用，因有降压或轻微溶血。中国专利(申请号02135030.2)描述了一种新鱼腥草素钠静脉注射剂，其在配方中使用了吐温-80，使用量为0.7％-3％。吐温-80使用量大必将引起严重的副作用，我们通过实验发现，使用一种安全的助溶剂，或通过使用环糊精或其衍生物对新鱼腥草素钠进行包合，都可增加新鱼腥草素钠的溶解性，可使吐温-80的使用量大大减少，甚至不使用吐温-80，而且，还可使溶液的稳定性得到提高，增加用药安全。
发明内容
本发明提供一种新的新鱼腥草素钠注射剂及其制备方法。
本发明还提供增加新鱼腥草素钠溶解度的方法，本发明的注射剂含有有效量的新鱼腥草素钠，助溶剂，可注射用溶剂或等渗溶液，必要时还可加入赋型剂和PH调节剂。
本发明的注射剂，所述的助溶剂包括至少一种表面活性剂，醇类助溶物质，环糊精或其衍生物，蓖麻油类物质，卵磷脂，泊洛沙母。这些助溶剂可单独使用，也可结合使用。醇类助溶物质也可作为注射用溶剂使用。
为实现本发明，可采用不同的解决方案。
本发明第一种优选的解决方案是使用环糊精或其衍生物对新鱼腥草素钠进行包合，以使新鱼腥草素钠易溶。如使用β-环糊精或羟丙基-β-环糊精。优选的是使用羟丙基-β-环糊精(Hydroxypropyl-beta-Cyclodextrin；简称HP-β-CD或HPB)，它是β-环糊精(β-CD)中葡萄糖残基的2-，3-和6-位羟基中的氢原子被羟丙基取代变成羟丙氧基。HP-β-CD对许多化合物具有优良的包络作用，提高被包络物质的溶解性和稳定性，而且它还具有水溶性高和提高被包络药物在生物体内的释放速度及生物利用度。另外HP-β-CD又是一种收集到的安全性资料最广泛，而没有不利副作用的一种药物辅料。
本发明的注射剂，新鱼腥草素钠和环糊精或其衍生物形成包合物，其中新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶1～1∶100。优选的新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶5～1∶30。上述包合物可做为制成注射液、粉针或输液的原料。所说的注射剂可以是“1-20ml小容量注射液”、“冻干粉针”、“无菌粉针”、“新鱼腥草素葡萄糖输液、氯化钠输液、木糖醇输液”、“静脉乳剂”“注射液”，所说的“冻干粉针”是在新鱼腥草素钠环糊精或其衍生物形成包合物的溶液中加入适当支持剂(赋型剂)，如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇等，通过冷冻干燥而得。所说的“无菌粉针”是在新鱼腥草素钠环糊精或其衍生物形成包合物的溶液中加入适当支持剂(赋型剂)，如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇等，通过“冷冻干燥”或“喷雾干燥”得到的粉末进行无菌分装而得。
本发明还提供上述注射剂的制备方法，对于上述使用环糊精或其衍生物作为助溶剂进行包合的本发明注射剂的制备，包括以下步骤a)将β-环糊精或其衍生物置于注射用水中，搅拌溶解后，再加入新鱼腥草素钠，
b)室温搅拌或研磨，得新鱼腥草素钠环糊精或其衍生物包合物的溶液，c)所得溶液需要时可加入甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇作为赋型剂并使之溶解，d)将步骤b或步骤c得到的溶液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得新鱼腥草素钠，糊精或其衍生物包合物注射粉，e)分装。
本发明的第二种优选的解决方案是使用复合助溶剂，所述复合助溶剂是两种或两种以上的助溶剂结合使用，这些助溶剂包括表面活性剂，醇类助溶物质，环糊精或其衍生物，蓖麻油类物质，卵磷脂，泊洛沙母，复合助溶剂优选的结合是甘油和聚氧乙烯蓖麻油，吐温-80和甘油等。
特别优选的两种或两种以上的助溶剂是，其中一种为表面活性剂，另一种为醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母。所述表面活性剂可以是吐温类物质如吐温-80，醇类助溶物质为乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，蓖麻油类物质为聚氧乙烯蓖麻油。
对于特别优选的使用两种或两种以上助溶剂的本发明注射剂，每1000毫升注射液中含有新鱼腥草素钠20mg-2000mg，表面活性剂0.5mg-6g，助溶剂10mg-5000mg，余量为可注射用溶剂或等渗溶液。
对于特别优选的使用两种或两种以上的助溶剂的本发明注射剂的制备，可以包括以下步骤a.取新鱼腥草素钠20mg-2000mg，表面活性剂0.5mg-6g，助溶剂10mg-5000mg，用注射用水或等渗溶液溶解；b.调节pH到5.0-6.2，c.过滤后加入注射用水或等渗溶液至1000毫升，d.再经过精滤后灌装，e.灭菌。
上述等渗溶液可以是氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、果糖、转化糖、麦芽糖、木糖醇、山梨醇或右旋糖苷等渗溶液。
本发明的第三种优选的解决方案是使用醇类物质作为注射用溶剂，如使用乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600等，必要时可另行加入适量的其他类型的助溶剂，和一种酸性物质，制成的注射剂含有新鱼腥草素钠，醇类物质，其他助溶剂，酸性物质。酸性物质用于调节溶液的PH值，可以是有机酸和无机酸，优选的是盐酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、酒石酸、磷酸、硝酸、硫酸、醇类物质优选的是乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇。该注射剂为一种浓缩剂，使用的醇类物质起溶剂作用，可增加溶解性，醇类物质可以是纯的如100％的，也可以是95％或90％的，但不少于50％该注射剂使用时将其加入输液中混匀输给病人。该注射剂优选的配方为每剂中含有新鱼腥草素钠1-2g，醇类物质1-20g，其他助溶剂0.1-10g，酸性物质0.0001-10g。优选的配方为新鱼腥草素钠2g，醇类物质10g，其他助溶剂1g，酸性物质0.0001g。特别优选的配方为新鱼腥草素钠2g，乙醇或丙二醇或甘油或甘露醇10g，其他助溶剂1g，酸性物质0.0001g。
本发明的新鱼腥草素钠注射剂对卡他球菌、流感杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌等有明显抑制作用。临床实践证明本品对于上呼吸道感染、支气管炎、肺炎、慢性气管炎、慢性宫颈炎、百日咳等均有较好的疗效，对急性结膜炎、尿路感染等也有一定疗效。另外，上述方法制备的新鱼腥草注射剂还能增强机体免疫功能，增加白细胞吞噬能力，具有镇痛、止咳、止血，促进组织再生，扩张毛细血管、增加血流量等方面的作用。本品的最大优点是增加了新鱼腥草素的溶解度，减少使其在肌肉注射时的局部疼痛，消除了患者在使用时所产生的恐惧心理。使临床大剂量用药成为可能，也解决了该药在贮存期析出问题，提高了该药的使用及疗效，同时降低了毒性，提高了稳定性。
以下通过实验数据说明本发明的有益效果1、加入复合助溶剂的新鱼腥草素钠注射剂的试验数据注射剂的制备取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约400ml，煮沸，加入含有1000mg新鱼腥草素钠，100g甘油，100mg聚氧乙烯蓖麻油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装。
一、毒性试验取体重为17～20g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
二、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
三、过敏性试验[摘要]《中华人民共和国药典》(2000版，二部)规定方法进行新鱼腥草素钠注射剂过敏试验。试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠无致敏作用。试验目的观察新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠有无致敏作用，为临床安全使用提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶阳性对照物5％卵白蛋白生理盐水溶液，取新鲜蛋清临用时在无菌条件下用生理盐水配成5％浓度动物豚鼠，体重262～292g，雌雄兼用。
致敏用腹腔注射，0.5ml/只；激发用静脉注射，1ml/只。
取豚鼠18只，分为阴性对照(生理盐水)组，受试物组及阳性对照(5％白蛋白生理盐水)组，每组6只。各组动物间日腹腔注射相应药液0.5ml/只，连续3次。分别在第一次注射后14日及21日每组各取3只豚鼠静脉注射相应药液1ml/只(推进速度为30秒)。
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定观察给药后15分钟内豚鼠有无竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、抽搐、痉挛、虚脱、休克或死亡等过敏反应。并按下表反应症状进行判定结果。豚鼠过敏反应级数豚鼠过敏反应级数反应级数 反应症状
0 无明显反应1 只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2 有几次咳嗽，有抓鼻、颤抖或竖毛3多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等4 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克或死亡[结果]豚鼠于第一次给药后14天及21天静脉注射新鱼腥草素钠注射剂1ml/只，均未出现竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕、咳嗽等现象，也未出现抽搐、虚脱或死亡等，反应级数均为0。
阴性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射生理盐水也未出现过敏症状，反应级数均为0。
阳性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射5％卵白蛋白生理盐水溶液后，均出现抽搐、呼吸困难、站立不稳、跌倒等症状，6只豚鼠中5只分别在给药后3分16秒～5分17秒内死亡，反应级数为3-4，结果见下表。
表1过敏性反应试验结果
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定，新鱼腥草素钠注射剂试验结果为阴性。
四、溶血性试验[摘要]新鱼腥草素钠注射剂0.1～0.5ml在小时内对家兔红细胞未产生溶血和凝集作用。为临床安全用药提供试验依据。
观察新鱼腥草素钠注射剂对家兔红细胞有无溶血和凝集作用。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阳性对照物0.9％氯化钠注射液动物新西兰兔1只，雄性，体重2.8kg。
(1)取供试家兔1只，心脏穿刺采血10ml，放入盛有无菌玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白，使成胶纤血液，置刻度离心管中加入适量的生理盐水摇匀，以3000转/分离心，每次10分钟，弃去上清液，反复洗涤3～4次，至离心后上清液无色为止，将所得红细胞用生理盐水酿配成2％的红细胞混悬液，供试验用。
(2)取试管7支，按表1配比加入供试药量、2％的红细胞混悬液、生理盐水和蒸馏水，轻轻混匀后，于37℃水浴中放置0.5小时，然后分别加入不同量的供试品(第6管加生理盐水，第7管加蒸馏水)，摇匀后，置37℃水浴，分别观察各管在15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时有无溶血及红细胞凝集现象。结果见2。
溶液呈透明红后，即表示溶血，如溶液中出现振摇不散或镜下检查有不能用生理盐水冲散的聚集红细胞时，表示有红细胞凝聚作用。一般以0.3ml供试药(第3管)在3小时内不产生溶血及凝聚作用者认为可供注射用。
表1溶血试验加样表
表2新鱼腥草素钠溶血试验结果
注溶血用“+”表示，不溶血用“-”表示[结论]试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂在观察时间内无溶血及红细胞凝集现象产生，说明新鱼腥草素钠注射剂溶血试验结果为阴性。
五、血管刺激性试验[摘要]新西兰兔左耳缘静脉滴注新鱼腥草素钠注射剂10ml/kg，每天1次，连续3天，滴注期间及给药后，肉眼观察未见耳缘静脉红、肿、热等局部刺激反应，病理组织学检查与对照组比较，未见明显的形态改变。
观察新鱼腥草素钠注射剂对新西兰兔静脉血管刺激作用，为临床安全用药提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶，动物新西兰兔6只，体重2.6-2.9kg，雌雄兼用[方法]新西兰兔6只，按体重随机分为新鱼腥草素钠注射剂给药组及0.9％氯化钠注射液对照组，每组3只。将动物固定于兔箱内，左侧耳缘静脉滴注相应药液，滴注量均为10ml/kg，推注速度1ml/分钟，每日1次，连续3天。滴注期间及滴注后，注射观察滴注部位有无红肿、充血、出血和坏死等刺激作用。在未次给药24小时后，将动物处死，剪下左侧耳自进针部位近心端距进针部位1cm入处取材，进行病理组织学检查。
肉眼观察本品制剂兔耳部位未出现明显的红肿、充血、坏死等刺激反应，与滴注0.9％氯化钠注射液组的兔耳无明显差异。
病理学检查0.9％氯化钠注射液对照组送检标本为兔耳组织。皮肤组织结构正常，表皮无增厚，皮下组织未见充血、水肿等形态学改变。耳缘静脉未见扩张，血管内皮细胞也未见增多及排列紊乱等改变，血管壁无增厚，管腔病理学改变。
本品给药组镜检兔耳病理形态学同对照组，管壁未见附壁血栓，无组织变性或坏死等显著性刺激，无明显病理形态学改变。
新鱼腥草素钠注射剂静脉滴注无明显血管刺激作用。
2、加入吐温-80和甘油助溶剂的新鱼腥草素钠试验数据处方1 新鱼腥草素钠2000mg吐温-80 5g甘油50mg注射用水加至1000ml取注射用水(或葡萄糖等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，50mg甘油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装。
1、毒性试验取体重为17～21g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
2、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
3、静脉注射血管刺激性试验取新西兰兔12只，雌雄各半，体重2.1～2.5kg，分2组，每组6只，兔耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂(1mg/ml)3ml/kg，注射速度为每分钟2.0ml。另一组给以等量生理盐水，每天一次，连续给药5天，于末次给药24小时后处死动物，剪断耳并放置于10％甲醛溶液中固定标本，然后在兔耳缘静脉的不同的部位的5个断面(从注射部位开始向心端每隔0.5cm作一切片)切片进行组织学检查。兔耳缘静脉组织切片观察结果表明用药组兔耳缘静脉的组织变化与对照组相似，各兔耳缘静脉血管壁完整，未见内皮损伤，未见内皮损伤、周围组织水肿等病理变化，静脉血管结构正常，未见血管有明显的变性，坏死等严重刺激反应。
4、过敏反应取豚鼠18只，体重280～350g，雌雄各半。分为三组，每组6只，新鱼腥草素钠相应的溶液0.5ml，共3次，将上述各组动物再平均分为两组，一组于首次给药后的第14天，分别耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂和生理盐水2ml/只，卵白蛋白液(1000mg/kg)进行攻击，并进行观察。如过敏反应级数分豚鼠过敏反应级数评分标准如下过敏反应症状与级别划分对照表反应级别 过敏反应症状+++ 过敏性休克死亡++咳嗽并们有呼吸困难或痉亦抽搐等+ 连续咳嗽数次以上，并伴有抓鼻子或颤抖、竖毛等± 只有轻微抓鼻子、颤抖、竖毛等0无任何明显反应结果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，新鱼腥草素钠注射剂组和生理盐水对照组，过敏反应级数在±以下，阳性对照卵白蛋白的平均过敏反应级数均在+++，表明新鱼腥草素钠注射剂不会引起豚鼠过敏反应。
5、溶血试验取健康家兔一只，从心脏取血10ml，至洁净干燥的小烧杯中，用竹签搅拌除去纤维蛋白原，加生理盐水10ml，离心弃上清液，再加10ml生理盐水，轻轻摇匀，离心，弃上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止；量取血球2ml加生理盐水稀释成2％的混悬液供测试用。
取试管14支，编号排列于试管架上，按下表加入各组溶液，第11、12管不如供试样品溶液，作为空白对照第13、14管仍不加供试溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照，将各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温3小时，取出后按以下标准记录结果。结果如表1所示。
结果判断 现象全溶血 溶液澄明红色，管底无细胞残留部分溶血 溶液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留无溶血 红细胞全部下沉，上层液体无色澄明聚集 虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分散表1新鱼腥草素钠注射剂溶血试验考察结果
注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不发生凝集新鱼腥草素钠静脉注射剂的浓度为1mg/ml从表中结果可见，新鱼腥草素钠注射剂在3小时内未引起溶血，为生理等张溶液，提示静脉给药后不会导致溶血。
处方2取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2g新鱼腥草素钠，5g吐温-80，400g聚乙二醇200的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装。
一、毒性试验取体重为17～20g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
二、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
三、过敏性试验[摘要]《中华人民共和国药典》(2000版，二部)规定方法进行新鱼腥草素钠注射剂过敏试验。试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠无致敏作用。
试验目的观察新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠有无致敏作用，为临床安全使用提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶阳性对照物5％卵白蛋白生理盐水溶液，取新鲜蛋清临用时在无菌条件下用生理盐水配成5％浓度动物豚鼠，体重262～292g，雌雄兼用。
致敏用腹腔注射，0.5ml/只；激发用静脉注射，1ml/只。
取豚鼠18只，分为阴性对照(生理盐水)组，受试物组及阳性对照(5％白蛋白生理盐水)组，每组6只。各组动物间日腹腔注射相应药液0.5ml/只，连续3次。分别在第一次注射后14日及21日每组各取3只豚鼠静脉注射相应药液1ml/只(推进速度为30秒)。
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定观察给药后15分钟内豚鼠有无竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、抽搐、痉挛、虚脱、休克或死亡等过敏反应。并按下表反应症状进行判定结果。
豚鼠过敏反应级数豚鼠过敏反应级数反应级数 反应症状0无明显反应1只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2有几次咳嗽，有抓鼻、颤抖或竖毛3 多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等4痉挛、抽搐、大小便失禁、休克或死亡[结果]豚鼠于第一次给药后14天及21天静脉注射新鱼腥草素钠注射剂1ml/只，均未出现竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕、咳嗽等现象，也未出现抽搐、虚脱或死亡等，反应级数均为0。
阴性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射生理盐水也未出现过敏症状，反应级数均为0。
阳性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射5％卵白蛋白生理盐水溶液后，均出现抽搐、呼吸困难、站立不稳、跌倒等症状，6只豚鼠在给药后2分16秒～5分17秒内死亡，反应级数为4，结果见下表。
表1新鱼腥草素钠注射剂过敏性反应试验结果
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定，新鱼腥草素钠注射剂试验结果为阴性。
四、溶血性试验[摘要]新鱼腥草素钠注射剂0.1～0.5ml在小时内对家兔红细胞未产生溶血和凝集作用。为临床安全用药提供试验依据。
观察新鱼腥草素钠注射剂对家兔红细胞有无溶血和凝集作用。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阳性对照物0.9％氯化钠注射液动物新西兰兔1只，雄性，体重2.5kg。
(1)取供试家兔1只，心脏穿刺采血10ml，放入盛有无菌玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白，使成胶纤血液，置刻度离心管中加入适量的生理盐水摇匀，以3000转/分离心，每次10分钟，弃去上清液，反复洗涤3～4次，至离心后上清液无色为止，将所得红细胞用生理盐水酿配成2％的红细胞混悬液，供试验用。
(2)取试管7支，按表1配比加入供试药量、2％的红细胞混悬液、生理盐水和蒸馏水，轻轻混匀后，于37℃水浴中放置0.5小时，然后分别加入不同量的供试品(第6管加生理盐水，第7管加蒸馏水)，摇匀后，置37℃水浴，分别观察各管在15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时有无溶血及红细胞凝集现象。结果见2。
溶液呈透明红后，即表示溶血，如溶液中出现振摇不散或镜下检查有不能用生理盐水冲散的聚集红细胞时，表示有红细胞凝聚作用。一般以0.3ml供试药(第3管)在3小时内不产生溶血及凝聚作用者认为可供注射用。
表1新鱼腥草素钠溶血试验加样表
表2新鱼腥草素钠溶血试验结果
注溶血用“+”表示，不溶血用“-”表示[结论]试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂在观察时间内无溶血及红细胞凝集现象产生，说明新鱼腥草素钠注射剂溶血试验结果为阴性。
五、血管刺激性试验[摘要]新西兰兔左耳缘静脉滴注新鱼腥草素钠注射剂10ml/kg，每天1次，连续3天，滴注期间及给药后，肉眼观察未见耳缘静脉红、肿、热等局部刺激反应，病理组织学检查与对照组比较，未见明显的形态改变。
观察新鱼腥草素钠注射剂对新西兰兔静脉血管刺激作用，为临床安全用药提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶，动物新西兰兔6只，体重2.5-2.9kg，雌雄兼用[方法]新西兰兔6只，按体重随机分为新鱼腥草素钠注射剂给药组及0.9％氯化钠注射液对照组，每组3只。将动物固定于兔箱内，左侧耳缘静脉滴注相应药液，滴注量均为10ml/kg，推注速度1ml/分钟，每日1次，连续3天。滴注期间及滴注后，注射观察滴注部位有无红肿、充血、出血和坏死等刺激作用。在未次给药24小时后，将动物处死，剪下左侧耳自进针部位近心端距进针部位1cm入处取材，进行病理组织学检查。
肉眼观察本品制剂兔耳部位未出现明显的红肿、充血、坏死等刺激反应，与滴注0.9％氯化钠注射液组的兔耳无明显差异。
病理学检查0.9％氯化钠注射液对照组送检标本为兔耳组织。皮肤组织结构正常，表皮无增厚，皮下组织未见充血、水肿等形态学改变。耳缘静脉未见扩张，血管内皮细胞也未见增多及排列紊乱等改变，血管壁无增厚，管腔病理学改变。
本品给药组镜检兔耳病理形态学同对照组，管壁未见附壁血栓，无组织变性或坏死等显著性刺激，无明显病理形态学改变。
新鱼腥草素钠注射剂静脉滴注无明显血管刺激作用。
3、制成新鱼腥草素钠和β-环糊精包合物注射剂的实验数据处方 羟丙基β-环糊精 15g新鱼腥草素钠 1g甘露醇 5g称取羟丙基β-环糊精15g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟后，加入5g甘露醇，搅拌溶解后，加注射用水至250ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支1ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(每支4mg)。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶15)。
上述制备的新鱼腥草素注射剂进行如下安全试验1、毒性试验取体重为17～20g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
2、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
3、静脉注射血管刺激性试验取新西兰兔12只，雌雄各半，体重2.0～2.5kg，分2组，每组6只，兔耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂(1mg/ml)3ml/kg，注射速度为每分钟2.0ml。另一组给以等量生理盐水，每天一次，连续给药5天，于末次给药24小时后处死动物，剪断耳并放置于10％甲醛溶液中固定标本，然后在兔耳缘静脉的不同的部位的5个断面(从注射部位开始向心端每隔0.5cm作一切片)切片进行组织学检查。兔耳缘静脉组织切片观察结果表明用药组兔耳缘静脉的组织变化与对照组相似，各兔耳缘静脉血管壁完整，未见内皮损伤，未见内皮损伤、周围组织水肿等病理变化，静脉血管结构正常，未见血管有明显的变性，坏死等严重刺激反应。
4、过敏反应取豚鼠18只，体重280～350g，雌雄各半。分为三组，每组6只，新鱼腥草素钠相应的溶液0.5ml，共3次，将上述各组动物再平均分为两组，一组于首次给药后的第14天，分别耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂和生理盐水2ml/只，卵白蛋白液(1000mg/kg)进行攻击，并进行观察。如过敏反应级数分豚鼠过敏反应级数评分标准如下过敏反应症状与级别划分对照表反应级别 过敏反应症状+++ 过敏性休克死亡++ 咳嗽并们有呼吸困难或痉亦抽搐等+连续咳嗽数次以上，并伴有抓鼻子或颤抖、竖毛等± 只有轻微抓鼻子、颤抖、竖毛等
0 无任何明显反应结果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，新鱼腥草素钠注射剂组和生理盐水对照组，过敏反应级数在±以下，阳性对照卵白蛋白的平均过敏反应级数均在+++，表明新鱼腥草素钠注射剂不会引起豚鼠过敏反应。
5、溶血试验取健康家兔一只，从心脏取血10ml，至洁净干燥的小烧杯中，用竹签搅拌除去纤维蛋白原，加生理盐水10ml，离心弃上清液，再加10ml生理盐水，轻轻摇匀，离心，弃上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止；量取血球2ml加生理盐水稀释成2％的混悬液供测试用。
取试管14支，编号排列于试管架上，按下表加入各组溶液，第11、12管不如供试样品溶液，作为空白对照第13、14管仍不加供试溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照，将各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温3小时，取出后按以下标准记录结果。结果如表1所示。
结果判断现象全溶血溶液澄明红色，管底无细胞残留部分溶血 溶液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留无溶血 红细胞全部下沉，上层液体无色澄明聚集 虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分散表1新鱼腥草素钠注射剂溶血试验考察结果
注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不发生凝集新鱼腥草素钠静脉注射剂的浓度为1mg/ml
从表中结果可见，新鱼腥草素钠注射剂在3小时内未引起溶血，为生理等张溶液，提示静脉给药后不会导致溶血。
以下通过实施例进一步说明本发明。
具体实施例方式实施例1处方新鱼腥草素钠2000mg吐温-80 5g甘油50mg注射用水加至1000ml取注射用水(或葡萄糖等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，50mg甘油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例2处方新鱼腥草素钠 80mg吐温-80 0.1g甘油 50mg注射用水加至 1000ml取注射用水(或葡萄糖等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，0.1g吐温-80，50mg甘油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例3
称取羟丙基β-环糊精6g，置于6ml蒸馏水中，搅拌溶解。另取0.3g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌或研磨30分钟，得新鱼腥草素钠溶液。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶20)。将此溶液进行浓缩至5ml，得60mg/ml的新鱼腥草素钠溶液。
实施例4称取羟丙基β-环糊精10g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟，过滤，所得溶液，经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥后，得白色粉末，即新鱼腥草素钠羟丙基β-环糊精包合物。该包合物的红外光谱既不同于新鱼腥草素钠、羟丙基β-环糊精，也不同于新鱼腥草素钠与羟丙基β-环糊精混合物。(药物与羟丙基β-环糊精重量比为1∶10)。此包合物易溶于水中，用此作原料，可制成注射液，粉针或输液。
实施例5处方羟丙基β-环糊精3g新鱼腥草素钠 1g称取羟丙基β-环糊精3g，置于20ml注射用水中，搅拌溶解，另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌20分钟，得一澄清溶液(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶30)。
实施例6处方羟丙基β-环糊精15g新鱼腥草素钠 1g甘露醇 5g称取羟丙基β-环糊精15g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟后，加入5g甘露醇，搅拌溶解后，加注射用水至250ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支1ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(每支4mg)。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶15)。
实施例7处方羟丙基β-环糊精30g新鱼腥草素钠 1g乳糖 10g称取羟丙基β-环糊精30g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟后，加入10g乳糖，搅拌溶解后，加注射用水至250ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支5ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(5每支20mg).
实施例8处方羟丙基β-环糊精 50g新鱼腥草素钠3g低分子右旋糖苷 15g称取羟丙基β-环糊精50g，置于200ml注射用水中，搅拌溶解后，加入15g低分子右旋糖苷加热溶解后，加入0.5g活性炭搅拌15分钟，过滤除炭，所得溶液中加入3g新鱼腥草素钠，搅拌溶解后，加注射用水至300ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支1ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(每支10mg)。此粉针加入灭菌注射用水溶解后，进行无菌、热原、溶血等项检查均合格。
实施例9处方羟丙基β-环糊精 20g新鱼腥草素钠0.4g甘露醇 4.6g称取羟丙基β-环糊精20g，置于200ml注射用水中，搅拌溶解，另取0.4g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，50℃水浴中搅拌15分钟后，加入4.6g甘露醇(或乳糖、或旋糖苷)，搅拌溶解后，加注射用水至300ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液进行喷雾干燥，得新鱼腥草素钠粉，每克喷雾干燥粉中含新鱼腥草素钠16mg(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶50)。此粉末加水后，能立即溶解成为澄清透明溶液。
实施例10处方羟丙基β-环糊精100g新鱼腥草素钠 4g称取羟丙基β-环糊精100g与新鱼腥草素钠4g，同置于800ml80℃注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至1000ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于安瓿中，每支1ml，110℃灭菌30分钟，得新鱼腥草素钠注射液。此注射液进行无菌、热原、溶血等项检查均合格。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶25)。
实施例11处方羟丙基β-环糊精 8g注射用葡萄糖 500g新鱼腥草素钠 0.4g称取羟丙基β-环糊精8g与注射用葡萄糖500g，置于1000ml80℃注射用水中，溶解后加入2g活性炭，搅拌20分钟后过滤除炭，所得溶液中加入新鱼腥草素钠0.4g，搅拌溶解，加注射用水至10000ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于250ml输液瓶中，115℃灭菌30分钟，得新鱼腥草素钠葡萄糖注射液(即输液，每支含新鱼腥草素钠10mg)。此注射液进行无菌、热原、溶血等项检查均合格。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶20)。
实施例12取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，100ml乙醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例13取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约200ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，100ml丙二醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例14取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有1000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，100ml三甘醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例15取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有500mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，1，3丁二醇的混合液100mg，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例16取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有1500mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，80ml特戊醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例17取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，10ml苯甲醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例18取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，1g吐温-80，10mg聚乙二醇200的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例19取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，2g吐温-80，200mg聚乙二醇300的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例20取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有1000mg新鱼腥草素钠，3g吐温-80，200mg聚乙二醇400的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例21取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有500mg新鱼腥草素钠，4g吐温-80，400mg聚乙二醇600的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例22取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约400ml，煮沸，加入含有800mg新鱼腥草素钠，100g甘油，100mg聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例23取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约400ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，440g甘油，250mg聚氧乙烯蓖麻油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例24取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，500mg卵磷脂的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例25取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，5ml泊洛沙母的溶液混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例26取6g吐温-80、1g甘油，加入到注射用水300ml中搅拌，加入甘露醇40g、新鱼腥草素钠1g加热搅拌使溶解，调节pH为4.5～6.5，加0.1％的针用活性炭，混匀，加热至60℃保温20min，趁热滤过脱碳，。滤液加注射用水稀释至所需量，测定pH及含量合格后，再用0.22um的滤膜精滤，灌装于西林瓶中，每瓶约4.0ml，冷冻干燥即可。
实施例27取6g吐温-80、1g甘油，加入到注射用水300ml中搅拌，加入乳糖50g、新鱼腥草素钠1g加热搅拌使溶解，调节pH为4.5～6.5，加0.1％的针用活性炭，混匀，加热至60℃保温20min，趁热滤过脱碳，。滤液加注射用水稀释至400ml，测定pH及含量合格后，再用0.22um的滤膜精滤，灌装于西林瓶中，每瓶约4.0ml，冷冻干燥即可。
权利要求
1.一种新鱼腥草素钠注射剂，其特征在于，含有有效量的新鱼腥草素钠，助溶剂，可注射用溶剂或等渗溶液，必要时还可加入赋型剂和PH调节剂。
2.权利要求1的注射剂，其特征在于，助溶剂包括至少一种表面活性剂，醇类助溶物质，环糊精或其衍生物，蓖麻油类物质，卵磷脂，泊洛沙母。
3.权利要求2的注射剂，其特征在于，新鱼腥草素钠和环糊精或其衍生物形成包合物，其中新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶1～1∶100。
4.权利要求3的注射剂，其特征在于，新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶5～1∶30。
5.权利要求2的注射剂，其特征在于，所述助溶剂为两种或两种以上的物质，其中一种为表面活性剂，另一种为醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母。
6.权利要求5的注射剂，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-80，醇类助溶物质选自乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，蓖麻油类物质为聚氧乙烯蓖麻油。
7.权利要求6的注射剂，其特征在于，每1000毫升注射液中含有新鱼腥草素钠20mg-2000mg，吐温-80 0.5mg-6g，醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母10mg-5000mg，余量为可注射用溶剂或等渗溶液。
8.权利要求1的注射剂，其特征在于，使用醇类物质作为注射用溶剂，醇类物质选自乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，必要时可另行加入适量的其他类型的助溶剂，和适量的酸性PH调节剂。
9.权利要求7的注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤a.取新鱼腥草素钠20mg-2000mg，吐温-80 0.1g-6g，醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母10mg-5000mg，用注射用水或等渗溶液溶解，b.用有机酸或无机酸调节pH到5.0-6.2，c.过滤后加入注射用水或等渗溶液至1000毫升，d.再经过精滤后灌装，e.灭菌。
10.权利要求4的注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤a.将环糊精衍生物羟丙基-β-环糊精置于注射用水中，搅拌溶解后，再加入新鱼腥草素钠，b.室温搅拌或研磨，得新鱼腥草素钠溶液，c.所得溶液需要时可加入甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇作为赋型剂并使之溶解，d.将步骤b或步骤c得到的溶液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得新鱼腥草素钠羟丙基-β-环糊精包合物，，e.分装。
全文摘要
本发明涉及新鱼腥草素钠静脉注射剂及其制备方法，该注射剂含有有效量的新鱼腥草素钠，助溶剂，可注射用溶剂或等渗溶液，必要时还可加入赋型剂和pH调节剂。
文档编号A61P11/00GK1602852SQ0313494
公开日2005年4月6日 申请日期2003年9月30日 优先权日2003年9月30日
发明者杨青波, 赵晟, 郭恒丰, 李广军, 付仁芳, 姚勇敢, 霍志强, 李丽娟, 张晓波, 聂红梅, 朱丽华 申请人:北京阜康仁生物制药科技有限公司
技术领域：
本发明涉及新鱼腥草素钠静脉注射剂及其制备方法。
背景技术：
用化学方法合成的新鱼腥草素钠(Neo-Houttuyninum)，化学名称为十二酰乙醛亚硫酸氢钠，与天然鱼腥草素(Houttuyninum)中的有效成分鱼腥草素钠，化学名称为癸酰乙醛同系列的亚硫酸氢钠加成物，两者的药理作用和疗效基本相似。目前用新鱼腥草素钠制成的制剂有新鱼腥草素钠注射液，现收载于《广东省药品标准》(1987版下册)第1177-1178页，该品种为抗菌消炎药。为三白草科植物蕺菜(Houttuynia sulfite)全草挥发油中一种醛类成分的化学合成物。对肺炎双球菌，伤寒杆菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌及孢子丝菌等有明显抑制作用。可提高机体免疫力，增强白细胞的吞噬功能，提高血清备解素水平，提高机体非特异性免疫力。用于附件炎、盆腔炎、慢性宫颈炎等妇科各种炎症。并用于上呼吸道感染、慢性支气管炎、肺炎等，使用时肌内注射。由于该药在肌内注射时出现疼痛，患者在使用时产生恐惧心理；同时原料由于纯度不高(生产工艺及检验方法缺陷造成)，该药在贮存期易析出；且肌内注射的疗效不及静脉滴注，影响了该药的使用及疗效。吐温-80作为表面活性剂用于注射液中有提高药物溶解性的作用，肌注中常用，静脉中慎用或少用，因有降压或轻微溶血。中国专利(申请号02135030.2)描述了一种新鱼腥草素钠静脉注射剂，其在配方中使用了吐温-80，使用量为0.7％-3％。吐温-80使用量大必将引起严重的副作用，我们通过实验发现，使用一种安全的助溶剂，或通过使用环糊精或其衍生物对新鱼腥草素钠进行包合，都可增加新鱼腥草素钠的溶解性，可使吐温-80的使用量大大减少，甚至不使用吐温-80，而且，还可使溶液的稳定性得到提高，增加用药安全。
发明内容
本发明提供一种新的新鱼腥草素钠注射剂及其制备方法。
本发明还提供增加新鱼腥草素钠溶解度的方法，本发明的注射剂含有有效量的新鱼腥草素钠，助溶剂，可注射用溶剂或等渗溶液，必要时还可加入赋型剂和PH调节剂。
本发明的注射剂，所述的助溶剂包括至少一种表面活性剂，醇类助溶物质，环糊精或其衍生物，蓖麻油类物质，卵磷脂，泊洛沙母。这些助溶剂可单独使用，也可结合使用。醇类助溶物质也可作为注射用溶剂使用。
为实现本发明，可采用不同的解决方案。
本发明第一种优选的解决方案是使用环糊精或其衍生物对新鱼腥草素钠进行包合，以使新鱼腥草素钠易溶。如使用β-环糊精或羟丙基-β-环糊精。优选的是使用羟丙基-β-环糊精(Hydroxypropyl-beta-Cyclodextrin；简称HP-β-CD或HPB)，它是β-环糊精(β-CD)中葡萄糖残基的2-，3-和6-位羟基中的氢原子被羟丙基取代变成羟丙氧基。HP-β-CD对许多化合物具有优良的包络作用，提高被包络物质的溶解性和稳定性，而且它还具有水溶性高和提高被包络药物在生物体内的释放速度及生物利用度。另外HP-β-CD又是一种收集到的安全性资料最广泛，而没有不利副作用的一种药物辅料。
本发明的注射剂，新鱼腥草素钠和环糊精或其衍生物形成包合物，其中新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶1～1∶100。优选的新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶5～1∶30。上述包合物可做为制成注射液、粉针或输液的原料。所说的注射剂可以是“1-20ml小容量注射液”、“冻干粉针”、“无菌粉针”、“新鱼腥草素葡萄糖输液、氯化钠输液、木糖醇输液”、“静脉乳剂”“注射液”，所说的“冻干粉针”是在新鱼腥草素钠环糊精或其衍生物形成包合物的溶液中加入适当支持剂(赋型剂)，如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇等，通过冷冻干燥而得。所说的“无菌粉针”是在新鱼腥草素钠环糊精或其衍生物形成包合物的溶液中加入适当支持剂(赋型剂)，如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇等，通过“冷冻干燥”或“喷雾干燥”得到的粉末进行无菌分装而得。
本发明还提供上述注射剂的制备方法，对于上述使用环糊精或其衍生物作为助溶剂进行包合的本发明注射剂的制备，包括以下步骤a)将β-环糊精或其衍生物置于注射用水中，搅拌溶解后，再加入新鱼腥草素钠，
b)室温搅拌或研磨，得新鱼腥草素钠环糊精或其衍生物包合物的溶液，c)所得溶液需要时可加入甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇作为赋型剂并使之溶解，d)将步骤b或步骤c得到的溶液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得新鱼腥草素钠，糊精或其衍生物包合物注射粉，e)分装。
本发明的第二种优选的解决方案是使用复合助溶剂，所述复合助溶剂是两种或两种以上的助溶剂结合使用，这些助溶剂包括表面活性剂，醇类助溶物质，环糊精或其衍生物，蓖麻油类物质，卵磷脂，泊洛沙母，复合助溶剂优选的结合是甘油和聚氧乙烯蓖麻油，吐温-80和甘油等。
特别优选的两种或两种以上的助溶剂是，其中一种为表面活性剂，另一种为醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母。所述表面活性剂可以是吐温类物质如吐温-80，醇类助溶物质为乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，蓖麻油类物质为聚氧乙烯蓖麻油。
对于特别优选的使用两种或两种以上助溶剂的本发明注射剂，每1000毫升注射液中含有新鱼腥草素钠20mg-2000mg，表面活性剂0.5mg-6g，助溶剂10mg-5000mg，余量为可注射用溶剂或等渗溶液。
对于特别优选的使用两种或两种以上的助溶剂的本发明注射剂的制备，可以包括以下步骤a.取新鱼腥草素钠20mg-2000mg，表面活性剂0.5mg-6g，助溶剂10mg-5000mg，用注射用水或等渗溶液溶解；b.调节pH到5.0-6.2，c.过滤后加入注射用水或等渗溶液至1000毫升，d.再经过精滤后灌装，e.灭菌。
上述等渗溶液可以是氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、果糖、转化糖、麦芽糖、木糖醇、山梨醇或右旋糖苷等渗溶液。
本发明的第三种优选的解决方案是使用醇类物质作为注射用溶剂，如使用乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600等，必要时可另行加入适量的其他类型的助溶剂，和一种酸性物质，制成的注射剂含有新鱼腥草素钠，醇类物质，其他助溶剂，酸性物质。酸性物质用于调节溶液的PH值，可以是有机酸和无机酸，优选的是盐酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、酒石酸、磷酸、硝酸、硫酸、醇类物质优选的是乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇。该注射剂为一种浓缩剂，使用的醇类物质起溶剂作用，可增加溶解性，醇类物质可以是纯的如100％的，也可以是95％或90％的，但不少于50％该注射剂使用时将其加入输液中混匀输给病人。该注射剂优选的配方为每剂中含有新鱼腥草素钠1-2g，醇类物质1-20g，其他助溶剂0.1-10g，酸性物质0.0001-10g。优选的配方为新鱼腥草素钠2g，醇类物质10g，其他助溶剂1g，酸性物质0.0001g。特别优选的配方为新鱼腥草素钠2g，乙醇或丙二醇或甘油或甘露醇10g，其他助溶剂1g，酸性物质0.0001g。
本发明的新鱼腥草素钠注射剂对卡他球菌、流感杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌等有明显抑制作用。临床实践证明本品对于上呼吸道感染、支气管炎、肺炎、慢性气管炎、慢性宫颈炎、百日咳等均有较好的疗效，对急性结膜炎、尿路感染等也有一定疗效。另外，上述方法制备的新鱼腥草注射剂还能增强机体免疫功能，增加白细胞吞噬能力，具有镇痛、止咳、止血，促进组织再生，扩张毛细血管、增加血流量等方面的作用。本品的最大优点是增加了新鱼腥草素的溶解度，减少使其在肌肉注射时的局部疼痛，消除了患者在使用时所产生的恐惧心理。使临床大剂量用药成为可能，也解决了该药在贮存期析出问题，提高了该药的使用及疗效，同时降低了毒性，提高了稳定性。
以下通过实验数据说明本发明的有益效果1、加入复合助溶剂的新鱼腥草素钠注射剂的试验数据注射剂的制备取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约400ml，煮沸，加入含有1000mg新鱼腥草素钠，100g甘油，100mg聚氧乙烯蓖麻油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装。
一、毒性试验取体重为17～20g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
二、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
三、过敏性试验[摘要]《中华人民共和国药典》(2000版，二部)规定方法进行新鱼腥草素钠注射剂过敏试验。试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠无致敏作用。试验目的观察新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠有无致敏作用，为临床安全使用提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶阳性对照物5％卵白蛋白生理盐水溶液，取新鲜蛋清临用时在无菌条件下用生理盐水配成5％浓度动物豚鼠，体重262～292g，雌雄兼用。
致敏用腹腔注射，0.5ml/只；激发用静脉注射，1ml/只。
取豚鼠18只，分为阴性对照(生理盐水)组，受试物组及阳性对照(5％白蛋白生理盐水)组，每组6只。各组动物间日腹腔注射相应药液0.5ml/只，连续3次。分别在第一次注射后14日及21日每组各取3只豚鼠静脉注射相应药液1ml/只(推进速度为30秒)。
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定观察给药后15分钟内豚鼠有无竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、抽搐、痉挛、虚脱、休克或死亡等过敏反应。并按下表反应症状进行判定结果。豚鼠过敏反应级数豚鼠过敏反应级数反应级数 反应症状
0 无明显反应1 只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2 有几次咳嗽，有抓鼻、颤抖或竖毛3多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等4 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克或死亡[结果]豚鼠于第一次给药后14天及21天静脉注射新鱼腥草素钠注射剂1ml/只，均未出现竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕、咳嗽等现象，也未出现抽搐、虚脱或死亡等，反应级数均为0。
阴性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射生理盐水也未出现过敏症状，反应级数均为0。
阳性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射5％卵白蛋白生理盐水溶液后，均出现抽搐、呼吸困难、站立不稳、跌倒等症状，6只豚鼠中5只分别在给药后3分16秒～5分17秒内死亡，反应级数为3-4，结果见下表。
表1过敏性反应试验结果
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定，新鱼腥草素钠注射剂试验结果为阴性。
四、溶血性试验[摘要]新鱼腥草素钠注射剂0.1～0.5ml在小时内对家兔红细胞未产生溶血和凝集作用。为临床安全用药提供试验依据。
观察新鱼腥草素钠注射剂对家兔红细胞有无溶血和凝集作用。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阳性对照物0.9％氯化钠注射液动物新西兰兔1只，雄性，体重2.8kg。
(1)取供试家兔1只，心脏穿刺采血10ml，放入盛有无菌玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白，使成胶纤血液，置刻度离心管中加入适量的生理盐水摇匀，以3000转/分离心，每次10分钟，弃去上清液，反复洗涤3～4次，至离心后上清液无色为止，将所得红细胞用生理盐水酿配成2％的红细胞混悬液，供试验用。
(2)取试管7支，按表1配比加入供试药量、2％的红细胞混悬液、生理盐水和蒸馏水，轻轻混匀后，于37℃水浴中放置0.5小时，然后分别加入不同量的供试品(第6管加生理盐水，第7管加蒸馏水)，摇匀后，置37℃水浴，分别观察各管在15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时有无溶血及红细胞凝集现象。结果见2。
溶液呈透明红后，即表示溶血，如溶液中出现振摇不散或镜下检查有不能用生理盐水冲散的聚集红细胞时，表示有红细胞凝聚作用。一般以0.3ml供试药(第3管)在3小时内不产生溶血及凝聚作用者认为可供注射用。
表1溶血试验加样表
表2新鱼腥草素钠溶血试验结果
注溶血用“+”表示，不溶血用“-”表示[结论]试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂在观察时间内无溶血及红细胞凝集现象产生，说明新鱼腥草素钠注射剂溶血试验结果为阴性。
五、血管刺激性试验[摘要]新西兰兔左耳缘静脉滴注新鱼腥草素钠注射剂10ml/kg，每天1次，连续3天，滴注期间及给药后，肉眼观察未见耳缘静脉红、肿、热等局部刺激反应，病理组织学检查与对照组比较，未见明显的形态改变。
观察新鱼腥草素钠注射剂对新西兰兔静脉血管刺激作用，为临床安全用药提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶，动物新西兰兔6只，体重2.6-2.9kg，雌雄兼用[方法]新西兰兔6只，按体重随机分为新鱼腥草素钠注射剂给药组及0.9％氯化钠注射液对照组，每组3只。将动物固定于兔箱内，左侧耳缘静脉滴注相应药液，滴注量均为10ml/kg，推注速度1ml/分钟，每日1次，连续3天。滴注期间及滴注后，注射观察滴注部位有无红肿、充血、出血和坏死等刺激作用。在未次给药24小时后，将动物处死，剪下左侧耳自进针部位近心端距进针部位1cm入处取材，进行病理组织学检查。
肉眼观察本品制剂兔耳部位未出现明显的红肿、充血、坏死等刺激反应，与滴注0.9％氯化钠注射液组的兔耳无明显差异。
病理学检查0.9％氯化钠注射液对照组送检标本为兔耳组织。皮肤组织结构正常，表皮无增厚，皮下组织未见充血、水肿等形态学改变。耳缘静脉未见扩张，血管内皮细胞也未见增多及排列紊乱等改变，血管壁无增厚，管腔病理学改变。
本品给药组镜检兔耳病理形态学同对照组，管壁未见附壁血栓，无组织变性或坏死等显著性刺激，无明显病理形态学改变。
新鱼腥草素钠注射剂静脉滴注无明显血管刺激作用。
2、加入吐温-80和甘油助溶剂的新鱼腥草素钠试验数据处方1 新鱼腥草素钠2000mg吐温-80 5g甘油50mg注射用水加至1000ml取注射用水(或葡萄糖等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，50mg甘油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装。
1、毒性试验取体重为17～21g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
2、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
3、静脉注射血管刺激性试验取新西兰兔12只，雌雄各半，体重2.1～2.5kg，分2组，每组6只，兔耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂(1mg/ml)3ml/kg，注射速度为每分钟2.0ml。另一组给以等量生理盐水，每天一次，连续给药5天，于末次给药24小时后处死动物，剪断耳并放置于10％甲醛溶液中固定标本，然后在兔耳缘静脉的不同的部位的5个断面(从注射部位开始向心端每隔0.5cm作一切片)切片进行组织学检查。兔耳缘静脉组织切片观察结果表明用药组兔耳缘静脉的组织变化与对照组相似，各兔耳缘静脉血管壁完整，未见内皮损伤，未见内皮损伤、周围组织水肿等病理变化，静脉血管结构正常，未见血管有明显的变性，坏死等严重刺激反应。
4、过敏反应取豚鼠18只，体重280～350g，雌雄各半。分为三组，每组6只，新鱼腥草素钠相应的溶液0.5ml，共3次，将上述各组动物再平均分为两组，一组于首次给药后的第14天，分别耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂和生理盐水2ml/只，卵白蛋白液(1000mg/kg)进行攻击，并进行观察。如过敏反应级数分豚鼠过敏反应级数评分标准如下过敏反应症状与级别划分对照表反应级别 过敏反应症状+++ 过敏性休克死亡++咳嗽并们有呼吸困难或痉亦抽搐等+ 连续咳嗽数次以上，并伴有抓鼻子或颤抖、竖毛等± 只有轻微抓鼻子、颤抖、竖毛等0无任何明显反应结果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，新鱼腥草素钠注射剂组和生理盐水对照组，过敏反应级数在±以下，阳性对照卵白蛋白的平均过敏反应级数均在+++，表明新鱼腥草素钠注射剂不会引起豚鼠过敏反应。
5、溶血试验取健康家兔一只，从心脏取血10ml，至洁净干燥的小烧杯中，用竹签搅拌除去纤维蛋白原，加生理盐水10ml，离心弃上清液，再加10ml生理盐水，轻轻摇匀，离心，弃上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止；量取血球2ml加生理盐水稀释成2％的混悬液供测试用。
取试管14支，编号排列于试管架上，按下表加入各组溶液，第11、12管不如供试样品溶液，作为空白对照第13、14管仍不加供试溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照，将各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温3小时，取出后按以下标准记录结果。结果如表1所示。
结果判断 现象全溶血 溶液澄明红色，管底无细胞残留部分溶血 溶液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留无溶血 红细胞全部下沉，上层液体无色澄明聚集 虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分散表1新鱼腥草素钠注射剂溶血试验考察结果
注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不发生凝集新鱼腥草素钠静脉注射剂的浓度为1mg/ml从表中结果可见，新鱼腥草素钠注射剂在3小时内未引起溶血，为生理等张溶液，提示静脉给药后不会导致溶血。
处方2取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2g新鱼腥草素钠，5g吐温-80，400g聚乙二醇200的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装。
一、毒性试验取体重为17～20g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
二、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
三、过敏性试验[摘要]《中华人民共和国药典》(2000版，二部)规定方法进行新鱼腥草素钠注射剂过敏试验。试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠无致敏作用。
试验目的观察新鱼腥草素钠注射剂对豚鼠有无致敏作用，为临床安全使用提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶阳性对照物5％卵白蛋白生理盐水溶液，取新鲜蛋清临用时在无菌条件下用生理盐水配成5％浓度动物豚鼠，体重262～292g，雌雄兼用。
致敏用腹腔注射，0.5ml/只；激发用静脉注射，1ml/只。
取豚鼠18只，分为阴性对照(生理盐水)组，受试物组及阳性对照(5％白蛋白生理盐水)组，每组6只。各组动物间日腹腔注射相应药液0.5ml/只，连续3次。分别在第一次注射后14日及21日每组各取3只豚鼠静脉注射相应药液1ml/只(推进速度为30秒)。
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定观察给药后15分钟内豚鼠有无竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、抽搐、痉挛、虚脱、休克或死亡等过敏反应。并按下表反应症状进行判定结果。
豚鼠过敏反应级数豚鼠过敏反应级数反应级数 反应症状0无明显反应1只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2有几次咳嗽，有抓鼻、颤抖或竖毛3 多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等4痉挛、抽搐、大小便失禁、休克或死亡[结果]豚鼠于第一次给药后14天及21天静脉注射新鱼腥草素钠注射剂1ml/只，均未出现竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕、咳嗽等现象，也未出现抽搐、虚脱或死亡等，反应级数均为0。
阴性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射生理盐水也未出现过敏症状，反应级数均为0。
阳性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射5％卵白蛋白生理盐水溶液后，均出现抽搐、呼吸困难、站立不稳、跌倒等症状，6只豚鼠在给药后2分16秒～5分17秒内死亡，反应级数为4，结果见下表。
表1新鱼腥草素钠注射剂过敏性反应试验结果
根据《中华人民共和国药典》2000版二部规定，新鱼腥草素钠注射剂试验结果为阴性。
四、溶血性试验[摘要]新鱼腥草素钠注射剂0.1～0.5ml在小时内对家兔红细胞未产生溶血和凝集作用。为临床安全用药提供试验依据。
观察新鱼腥草素钠注射剂对家兔红细胞有无溶血和凝集作用。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阳性对照物0.9％氯化钠注射液动物新西兰兔1只，雄性，体重2.5kg。
(1)取供试家兔1只，心脏穿刺采血10ml，放入盛有无菌玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白，使成胶纤血液，置刻度离心管中加入适量的生理盐水摇匀，以3000转/分离心，每次10分钟，弃去上清液，反复洗涤3～4次，至离心后上清液无色为止，将所得红细胞用生理盐水酿配成2％的红细胞混悬液，供试验用。
(2)取试管7支，按表1配比加入供试药量、2％的红细胞混悬液、生理盐水和蒸馏水，轻轻混匀后，于37℃水浴中放置0.5小时，然后分别加入不同量的供试品(第6管加生理盐水，第7管加蒸馏水)，摇匀后，置37℃水浴，分别观察各管在15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时有无溶血及红细胞凝集现象。结果见2。
溶液呈透明红后，即表示溶血，如溶液中出现振摇不散或镜下检查有不能用生理盐水冲散的聚集红细胞时，表示有红细胞凝聚作用。一般以0.3ml供试药(第3管)在3小时内不产生溶血及凝聚作用者认为可供注射用。
表1新鱼腥草素钠溶血试验加样表
表2新鱼腥草素钠溶血试验结果
注溶血用“+”表示，不溶血用“-”表示[结论]试验结果表明，新鱼腥草素钠注射剂在观察时间内无溶血及红细胞凝集现象产生，说明新鱼腥草素钠注射剂溶血试验结果为阴性。
五、血管刺激性试验[摘要]新西兰兔左耳缘静脉滴注新鱼腥草素钠注射剂10ml/kg，每天1次，连续3天，滴注期间及给药后，肉眼观察未见耳缘静脉红、肿、热等局部刺激反应，病理组织学检查与对照组比较，未见明显的形态改变。
观察新鱼腥草素钠注射剂对新西兰兔静脉血管刺激作用，为临床安全用药提供试验依据。
供试药物新鱼腥草素钠注射剂阴性对照物0.9％氯化钠注射液(生理盐水)250ml/瓶，动物新西兰兔6只，体重2.5-2.9kg，雌雄兼用[方法]新西兰兔6只，按体重随机分为新鱼腥草素钠注射剂给药组及0.9％氯化钠注射液对照组，每组3只。将动物固定于兔箱内，左侧耳缘静脉滴注相应药液，滴注量均为10ml/kg，推注速度1ml/分钟，每日1次，连续3天。滴注期间及滴注后，注射观察滴注部位有无红肿、充血、出血和坏死等刺激作用。在未次给药24小时后，将动物处死，剪下左侧耳自进针部位近心端距进针部位1cm入处取材，进行病理组织学检查。
肉眼观察本品制剂兔耳部位未出现明显的红肿、充血、坏死等刺激反应，与滴注0.9％氯化钠注射液组的兔耳无明显差异。
病理学检查0.9％氯化钠注射液对照组送检标本为兔耳组织。皮肤组织结构正常，表皮无增厚，皮下组织未见充血、水肿等形态学改变。耳缘静脉未见扩张，血管内皮细胞也未见增多及排列紊乱等改变，血管壁无增厚，管腔病理学改变。
本品给药组镜检兔耳病理形态学同对照组，管壁未见附壁血栓，无组织变性或坏死等显著性刺激，无明显病理形态学改变。
新鱼腥草素钠注射剂静脉滴注无明显血管刺激作用。
3、制成新鱼腥草素钠和β-环糊精包合物注射剂的实验数据处方 羟丙基β-环糊精 15g新鱼腥草素钠 1g甘露醇 5g称取羟丙基β-环糊精15g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟后，加入5g甘露醇，搅拌溶解后，加注射用水至250ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支1ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(每支4mg)。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶15)。
上述制备的新鱼腥草素注射剂进行如下安全试验1、毒性试验取体重为17～20g健康小鼠，雌雄各半，每组10只，共6组，于小鼠尾静脉注射本品(1mg/ml)0.5ml，在48小时内，未见任何中毒症状与死亡现象。
2、亚急性毒性试验给40大鼠腹腔注射本品，日用量8mg/kg，分2次腹腔注射，连续给药30天。结果对生长发育无不良影响。肝功能、心电图等未见明显异常，心、肝、肾、肺、脾、脑及肠等脏器的病理组织学检查亦未见明显异常。
3、静脉注射血管刺激性试验取新西兰兔12只，雌雄各半，体重2.0～2.5kg，分2组，每组6只，兔耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂(1mg/ml)3ml/kg，注射速度为每分钟2.0ml。另一组给以等量生理盐水，每天一次，连续给药5天，于末次给药24小时后处死动物，剪断耳并放置于10％甲醛溶液中固定标本，然后在兔耳缘静脉的不同的部位的5个断面(从注射部位开始向心端每隔0.5cm作一切片)切片进行组织学检查。兔耳缘静脉组织切片观察结果表明用药组兔耳缘静脉的组织变化与对照组相似，各兔耳缘静脉血管壁完整，未见内皮损伤，未见内皮损伤、周围组织水肿等病理变化，静脉血管结构正常，未见血管有明显的变性，坏死等严重刺激反应。
4、过敏反应取豚鼠18只，体重280～350g，雌雄各半。分为三组，每组6只，新鱼腥草素钠相应的溶液0.5ml，共3次，将上述各组动物再平均分为两组，一组于首次给药后的第14天，分别耳缘静脉注射新鱼腥草素钠注射剂和生理盐水2ml/只，卵白蛋白液(1000mg/kg)进行攻击，并进行观察。如过敏反应级数分豚鼠过敏反应级数评分标准如下过敏反应症状与级别划分对照表反应级别 过敏反应症状+++ 过敏性休克死亡++ 咳嗽并们有呼吸困难或痉亦抽搐等+连续咳嗽数次以上，并伴有抓鼻子或颤抖、竖毛等± 只有轻微抓鼻子、颤抖、竖毛等
0 无任何明显反应结果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，新鱼腥草素钠注射剂组和生理盐水对照组，过敏反应级数在±以下，阳性对照卵白蛋白的平均过敏反应级数均在+++，表明新鱼腥草素钠注射剂不会引起豚鼠过敏反应。
5、溶血试验取健康家兔一只，从心脏取血10ml，至洁净干燥的小烧杯中，用竹签搅拌除去纤维蛋白原，加生理盐水10ml，离心弃上清液，再加10ml生理盐水，轻轻摇匀，离心，弃上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止；量取血球2ml加生理盐水稀释成2％的混悬液供测试用。
取试管14支，编号排列于试管架上，按下表加入各组溶液，第11、12管不如供试样品溶液，作为空白对照第13、14管仍不加供试溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照，将各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温3小时，取出后按以下标准记录结果。结果如表1所示。
结果判断现象全溶血溶液澄明红色，管底无细胞残留部分溶血 溶液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留无溶血 红细胞全部下沉，上层液体无色澄明聚集 虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分散表1新鱼腥草素钠注射剂溶血试验考察结果
注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不发生凝集新鱼腥草素钠静脉注射剂的浓度为1mg/ml
从表中结果可见，新鱼腥草素钠注射剂在3小时内未引起溶血，为生理等张溶液，提示静脉给药后不会导致溶血。
以下通过实施例进一步说明本发明。
具体实施例方式实施例1处方新鱼腥草素钠2000mg吐温-80 5g甘油50mg注射用水加至1000ml取注射用水(或葡萄糖等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，50mg甘油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例2处方新鱼腥草素钠 80mg吐温-80 0.1g甘油 50mg注射用水加至 1000ml取注射用水(或葡萄糖等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，0.1g吐温-80，50mg甘油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例3
称取羟丙基β-环糊精6g，置于6ml蒸馏水中，搅拌溶解。另取0.3g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌或研磨30分钟，得新鱼腥草素钠溶液。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶20)。将此溶液进行浓缩至5ml，得60mg/ml的新鱼腥草素钠溶液。
实施例4称取羟丙基β-环糊精10g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟，过滤，所得溶液，经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥后，得白色粉末，即新鱼腥草素钠羟丙基β-环糊精包合物。该包合物的红外光谱既不同于新鱼腥草素钠、羟丙基β-环糊精，也不同于新鱼腥草素钠与羟丙基β-环糊精混合物。(药物与羟丙基β-环糊精重量比为1∶10)。此包合物易溶于水中，用此作原料，可制成注射液，粉针或输液。
实施例5处方羟丙基β-环糊精3g新鱼腥草素钠 1g称取羟丙基β-环糊精3g，置于20ml注射用水中，搅拌溶解，另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌20分钟，得一澄清溶液(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶30)。
实施例6处方羟丙基β-环糊精15g新鱼腥草素钠 1g甘露醇 5g称取羟丙基β-环糊精15g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟后，加入5g甘露醇，搅拌溶解后，加注射用水至250ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支1ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(每支4mg)。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶15)。
实施例7处方羟丙基β-环糊精30g新鱼腥草素钠 1g乳糖 10g称取羟丙基β-环糊精30g，置于100ml注射用水中，搅拌溶解。另取1g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，室温搅拌30分钟后，加入10g乳糖，搅拌溶解后，加注射用水至250ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支5ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(5每支20mg).
实施例8处方羟丙基β-环糊精 50g新鱼腥草素钠3g低分子右旋糖苷 15g称取羟丙基β-环糊精50g，置于200ml注射用水中，搅拌溶解后，加入15g低分子右旋糖苷加热溶解后，加入0.5g活性炭搅拌15分钟，过滤除炭，所得溶液中加入3g新鱼腥草素钠，搅拌溶解后，加注射用水至300ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于西林瓶中，每支1ml，进行冷冻干燥，得新鱼腥草素钠冻干粉针(每支10mg)。此粉针加入灭菌注射用水溶解后，进行无菌、热原、溶血等项检查均合格。
实施例9处方羟丙基β-环糊精 20g新鱼腥草素钠0.4g甘露醇 4.6g称取羟丙基β-环糊精20g，置于200ml注射用水中，搅拌溶解，另取0.4g新鱼腥草素钠，加入上述羟丙基β-环糊精溶液中，50℃水浴中搅拌15分钟后，加入4.6g甘露醇(或乳糖、或旋糖苷)，搅拌溶解后，加注射用水至300ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液进行喷雾干燥，得新鱼腥草素钠粉，每克喷雾干燥粉中含新鱼腥草素钠16mg(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶50)。此粉末加水后，能立即溶解成为澄清透明溶液。
实施例10处方羟丙基β-环糊精100g新鱼腥草素钠 4g称取羟丙基β-环糊精100g与新鱼腥草素钠4g，同置于800ml80℃注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至1000ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于安瓿中，每支1ml，110℃灭菌30分钟，得新鱼腥草素钠注射液。此注射液进行无菌、热原、溶血等项检查均合格。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶25)。
实施例11处方羟丙基β-环糊精 8g注射用葡萄糖 500g新鱼腥草素钠 0.4g称取羟丙基β-环糊精8g与注射用葡萄糖500g，置于1000ml80℃注射用水中，溶解后加入2g活性炭，搅拌20分钟后过滤除炭，所得溶液中加入新鱼腥草素钠0.4g，搅拌溶解，加注射用水至10000ml，混匀，用0.22um微孔滤膜过滤，所得溶液分装于250ml输液瓶中，115℃灭菌30分钟，得新鱼腥草素钠葡萄糖注射液(即输液，每支含新鱼腥草素钠10mg)。此注射液进行无菌、热原、溶血等项检查均合格。(药物与羟丙基β-环糊精的重量比为1∶20)。
实施例12取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，100ml乙醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例13取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约200ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，100ml丙二醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例14取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有1000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，100ml三甘醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例15取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有500mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，1，3丁二醇的混合液100mg，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例16取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有1500mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，80ml特戊醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例17取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，10ml苯甲醇的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例18取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，1g吐温-80，10mg聚乙二醇200的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例19取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，2g吐温-80，200mg聚乙二醇300的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例20取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有1000mg新鱼腥草素钠，3g吐温-80，200mg聚乙二醇400的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例21取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有500mg新鱼腥草素钠，4g吐温-80，400mg聚乙二醇600的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例22取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约400ml，煮沸，加入含有800mg新鱼腥草素钠，100g甘油，100mg聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例23取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约400ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，440g甘油，250mg聚氧乙烯蓖麻油的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例24取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有2000mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，500mg卵磷脂的混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例25取注射用水(或葡萄糖、氯化钠等其他专利要求等渗溶液)约600ml，煮沸，加入含有80mg新鱼腥草素钠，5g吐温-80，5ml泊洛沙母的溶液混合液，搅拌溶解，加注射用水(或等渗溶液)至900ml，调节pH5.0-6.2，，搅拌溶解，过滤，自容器上添加注射用水(或等渗溶液)至总量，精滤，检验中间产品，灌装(可以为小容量注射液或大容量注射液，规格2ml/支、5ml/支、50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)，100摄氏度，30分钟灭菌，澄明度检查，包装，即得。
实施例26取6g吐温-80、1g甘油，加入到注射用水300ml中搅拌，加入甘露醇40g、新鱼腥草素钠1g加热搅拌使溶解，调节pH为4.5～6.5，加0.1％的针用活性炭，混匀，加热至60℃保温20min，趁热滤过脱碳，。滤液加注射用水稀释至所需量，测定pH及含量合格后，再用0.22um的滤膜精滤，灌装于西林瓶中，每瓶约4.0ml，冷冻干燥即可。
实施例27取6g吐温-80、1g甘油，加入到注射用水300ml中搅拌，加入乳糖50g、新鱼腥草素钠1g加热搅拌使溶解，调节pH为4.5～6.5，加0.1％的针用活性炭，混匀，加热至60℃保温20min，趁热滤过脱碳，。滤液加注射用水稀释至400ml，测定pH及含量合格后，再用0.22um的滤膜精滤，灌装于西林瓶中，每瓶约4.0ml，冷冻干燥即可。
权利要求
1.一种新鱼腥草素钠注射剂，其特征在于，含有有效量的新鱼腥草素钠，助溶剂，可注射用溶剂或等渗溶液，必要时还可加入赋型剂和PH调节剂。
2.权利要求1的注射剂，其特征在于，助溶剂包括至少一种表面活性剂，醇类助溶物质，环糊精或其衍生物，蓖麻油类物质，卵磷脂，泊洛沙母。
3.权利要求2的注射剂，其特征在于，新鱼腥草素钠和环糊精或其衍生物形成包合物，其中新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶1～1∶100。
4.权利要求3的注射剂，其特征在于，新鱼腥草素钠与环糊精或其衍生物的重量比为1∶5～1∶30。
5.权利要求2的注射剂，其特征在于，所述助溶剂为两种或两种以上的物质，其中一种为表面活性剂，另一种为醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母。
6.权利要求5的注射剂，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-80，醇类助溶物质选自乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，蓖麻油类物质为聚氧乙烯蓖麻油。
7.权利要求6的注射剂，其特征在于，每1000毫升注射液中含有新鱼腥草素钠20mg-2000mg，吐温-80 0.5mg-6g，醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母10mg-5000mg，余量为可注射用溶剂或等渗溶液。
8.权利要求1的注射剂，其特征在于，使用醇类物质作为注射用溶剂，醇类物质选自乙醇、丙二醇、甘油、甘露醇、三甘醇、1，3丁二醇、特戊醇、苯甲醇、三甘醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600，必要时可另行加入适量的其他类型的助溶剂，和适量的酸性PH调节剂。
9.权利要求7的注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤a.取新鱼腥草素钠20mg-2000mg，吐温-80 0.1g-6g，醇类助溶物质、蓖麻油类物质、卵磷脂、泊洛沙母10mg-5000mg，用注射用水或等渗溶液溶解，b.用有机酸或无机酸调节pH到5.0-6.2，c.过滤后加入注射用水或等渗溶液至1000毫升，d.再经过精滤后灌装，e.灭菌。
10.权利要求4的注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤a.将环糊精衍生物羟丙基-β-环糊精置于注射用水中，搅拌溶解后，再加入新鱼腥草素钠，b.室温搅拌或研磨，得新鱼腥草素钠溶液，c.所得溶液需要时可加入甘露醇、乳糖、右旋糖苷、山梨醇、蔗糖、氯化钠、木糖醇作为赋型剂并使之溶解，d.将步骤b或步骤c得到的溶液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得新鱼腥草素钠羟丙基-β-环糊精包合物，，e.分装。
全文摘要
本发明涉及新鱼腥草素钠静脉注射剂及其制备方法，该注射剂含有有效量的新鱼腥草素钠，助溶剂，可注射用溶剂或等渗溶液，必要时还可加入赋型剂和pH调节剂。
文档编号A61P11/00GK1602852SQ0313494
公开日2005年4月6日 申请日期2003年9月30日 优先权日2003年9月30日
发明者杨青波, 赵晟, 郭恒丰, 李广军, 付仁芳, 姚勇敢, 霍志强, 李丽娟, 张晓波, 聂红梅, 朱丽华 申请人:北京阜康仁生物制药科技有限公司
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