一种治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药及制备方法
专利名称：一种治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药及制备方法
技术领域：
本发明涉及治疗妇科雌激素生长依赖性疾病疾病复方中药及制备方法，特别是涉及治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药及制备方法。
背景技术：
子宫肌瘤和子宫内膜异位症的发生和发展需要机体维持相当程度的雌激素水平，是一种雌激素生长依赖性疾病，只发生在育龄期妇女。绝经后，雌激素水平明显下降，上述疾病不再发展，逐渐消退。因此，使用抑制雌激素生物效应的药物有助于抑制这两种疾病的发展。
中药葛根含有葛根异黄酮，具有与雌激素类似的母核结构，可以和雌激素受体结合，但是它产生的雌激素生物效应很微弱，只有17羟β雌二醇生物效应的1/1000至1/10000。因此，根据体内雌激素水平的高低，葛根异黄酮在发挥生物效应时，可以表现为类雌激素活性，也可以表现为抗雌激素活性。对于雌激素水平高的育龄期妇女，葛根异黄酮表现为抗雌激素活性，降低体内分泌雌激素的生物效应。
桂枝茯苓丸来源于《金匾要略》，由桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮和桃仁各等份构成，具有活血化淤、抗炎、抗肿瘤的效果。根据该中药复方制成的中成药桂枝茯苓胶囊，近年用于治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症，取得一定疗效。
近年来使用抗孕激素药物米非司酮治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症也显示出一定疗效，提示孕激素与这两种疾病有关。近年来还证明子宫内膜异位症是一种自身免疫性疾病。莪术属于破血消瘕类中药，具有调节免疫、抗肿瘤和抗孕激素的作用。
发明人通过实验证明，桂枝茯苓丸和莪术均有抑制子宫肌瘤和异位子宫内膜细胞生长的作用，而且，在桂枝茯苓丸的基础上加味莪术，可以增加这种抑制作用。进一步研究发现，在使用从葛根提取的葛根异黄酮或大豆提取的大豆异黄酮造成的低雌激素生物效应的环境中，这种抑制作用更明显增加，并且诱导了子宫肌瘤细胞和异位子宫内膜细胞的凋亡。
所以，在使用具有抑制雌激素生物效应的中药破坏子宫肌瘤和子宫内膜异位症的生长环境的基础上，配合促使它们凋亡的中药，就可以使这两种疾病的病理组织细胞逐渐凋亡、消散，从而达到治疗目的。
发明人进行的实验证明，联合使用抑制雌激素生物效应的中药和活血化淤、破血消瘕、调节免疫、抗肿瘤、诱导细胞凋亡的中药，对子宫肌瘤和子宫内膜异位症的疗效，高于单用任何一类中药的疗效。因为乳腺小叶增生等乳腺良性包块也属于雌激素生长依赖性疾病，所以发明人推论，本发明的复方中药对乳腺良性包块也有较好的疗效。
发明内容
本发明公开的复方中药的配方为抑制雌激素生物效应的中药(或中药提取的抗雌激素生物效应的异黄酮)与诱导细胞凋亡的中药的复方，具有破血消瘕、活血化淤、抗炎镇痛、调节免疫、抗肿瘤、抑制雌激素生物效应、诱导细胞凋亡的作用，用于治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症，达到协同治疗、提高疗效的目的。
根据发明人的实验，得出对子宫肌瘤和子宫内膜异位症有效的复方中药由下述中药组成葛根、茯苓、桂枝、芍药、牡丹皮、桃仁、莪术。
在该复方中药的配方中，葛根可以用大豆替换，具体的实施方法是在使用茯苓、桂枝、芍药、牡丹皮、桃仁、莪术的中药制剂中加入与葛根的有效成分葛根异黄酮等效的大豆异黄酮。同样的原理和方法，也可以使用其它的等效的异黄酮(例如红花苜宿异黄酮)。
在该复方中药中，这些中药的用量比例按重量的份数计算，葛根可为5-30份、茯苓可为2-20份、桂枝可为2-20份、赤芍可为2-20份、牡丹皮可为2-20份、桃仁2-20份、莪术2-20份。而较适宜的用量比例，葛根可为10-20份、茯苓可为5-15份、桂枝可为5-15份、赤芍可为5-15份、牡丹皮可为5-15份、桃仁5-15份、莪术5-15份。而最适宜的用量比例，葛根15份、茯苓10份、桂枝10份、赤芍10份、牡丹皮10份、桃仁10份、莪术10份。
将上述中药按用量比例称取，粉碎成粗粉。将桂枝、桃仁和莪术粗粉混合，置于中间有不锈钢网的提取罐内，加入6倍量的水，浸泡过夜，罐外安装冷凝器，其后接挥发油接收器，该接收器通过底部的不锈钢管与提取罐形成回流系统(TNG-100型多功能提取浓缩装置，成都永泰制药机械厂)。加热至沸点，在约0.4kg压力下回流8小时，收集油层即得，收率0.5％。然后在该提取罐中加入其它中药粗粉与残渣混合，补加水和乙醇，使成十倍于药材量的60％乙醇水溶液，在70℃温度下动态提取60分钟，重复提取，共三次。将三次提取液合并，减压浓缩，真空干燥，粉碎成棕色粉末，收率15.6％。
根据药物制剂的制备原则，以及临床使用原则，将该复方中药的两类提取物混合，加入一定比例的药用辅料，可以制成临床使用的胶囊、包衣片剂、颗粒剂等口服制剂。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明进行更进一步的说明。
实施例1葛根提取物、桂枝茯苓丸复方提取物、莪术提取物以及这三种提取物的再复方对培养中人子宫肌瘤细胞生长的影响1、材料(1)试剂DMETM培养液(Gibco Brl)、胶原酶I型(Sigma Co.)、胎牛血清(FBS)、青霉素、链霉素(Life Technologies Co.)、溴化四唑蓝(MTT)(Fluka ChemieAG.)、DMSO(Amers Co.)(2)器材CO2培养箱(Shimatsu Co.)，酶标仪(Sorin Co.)，流式细胞仪(EPICSl型，Coulter Co.)2、方法手术取得的子宫肌瘤组织，用PBS洗净，剪碎，置含800u/ml胶原酶的DMEM培养液中在37℃下孵育4h，其间吹打4次。消化结束后在1000RPM下离心5min，收集肌瘤细胞，用含1％抗生素的DMEM培养液洗涤3次，锥虫蓝染色计数活细胞，以2×105细胞/ml的密度接种于24孔板，用含10％FBS(V/V)的DMEM在CO2培养120h，细胞长至50％以上密度时，分别加入5种药物提取物如下(1)桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁复方提取物溶液(简称A液，后同)50μl。每1ml从5g生药材中按常规方法提取浓缩。
(2)莪术提取物溶液(简称B液，后同)50μl。每1ml从1g生药材中按常规方法提取浓缩。
(3)葛根提取物溶液(简称C液，后同)50μl。每1ml从1g生药材中按常规方法提取浓缩。
(4)A+B液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术复方提取物溶液。每1ml从6g生药材中按常规方法提取浓缩。
(5)A+B+C液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术、葛根复方提取物溶液。每1ml从7.5g生药材中按常规方法提取浓缩。
(6)3％(w/v)大豆异黄酮溶液(简称D液，后同)，50μl。
(7)A+B+D液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术复方提取物溶液。每1ml从6g生药材按常规方法提取浓缩，并加入大豆异黄酮使其浓度达到3％(w/v)。
对照加50μl生理盐水，继续培养24小时，拍照后进行MTT检测。
3、结果(1)MTT检测每孔加MTT(5mg/ml)100μl培养4h，弃培液后每孔加DMSO 1ml振荡5min，于490nm波长读数。结果见表1。
表1 MTT法细胞染色OD值
(2)流式细胞仪测定采用和MTT法同样的细胞培养法，用碘化丙啶(PI)一步荧光插入法进行细胞核DNA染色，用200目尼龙网过滤后上机检测。结果见表2。
表2培养细胞的流式细胞仪测定
结果发现，MTT法试验时，A+B+C液组OD值最低，A+B+D液组OD值与之接近，提示这两组活细胞最少，A+B+C液和A+B+D液对培养中的子宫肌瘤细胞的生长的抑制作用比A+B液的大，提示C液或D液造成的低雌激素生物效应环境增加了A+B液对培养中的子宫肌瘤细胞的生长的抑制。流式细胞仪测定法试验时，A+B+C液组的凋亡指数最高，SPF值下降最明显。其中，A+B+C液组的凋亡指数与对照组、A液组和A+B液组比较，均显著增加(p＜0.05)。
实施例2葛根提取物、桂枝茯苓丸复方提取物、莪术提取物以及这三种提取物的再复方对大鼠子宫内膜异位症模型的异位子宫内膜的生长的影响1、材料雌性未交配SD大鼠，220-250g，合格证号医动字24101101(由四川省医科院实验动物研究所提供)。
药物提取物同实施例1。
2、方法子宫内膜异位症动物模型的建立采用阴道涂片检查的方法，选择动情周期未4-5天、连续有两个正常动情周期的大鼠，在动情期手术。3％的戊巴比妥钠(1.5ml/kg)腹腔内注射麻醉，常规消毒后开腹，将右侧子宫中上段长2cm的两端结扎，从子宫血管袢的对侧切开浆膜和基层，向两侧分离达子宫血管袢后切除，将剩下的裸子宫内膜穿过腹肌固定于皮下和腹肌之间。分两层关腹。清洁环境饲养。
50只动物模型，分5组，每组10只，分别是模型对照组、A液组、A+B液组、A+B+C液组，分别每日灌胃生理盐水2ml/kg、A液2ml/kg、A+B液2ml/kg、A+B+C液各2ml/kg。给药21天后处死动物，比较异位子宫内膜的外观和病理检查(HE染色，光镜)结果。
3、结果结果见表3。A+B+C液对异位子宫内膜的生长有明显抑制作用，疗效优于A液或A+B液。本实验结果提示在使用抑制雌激素生物效应的C液的基础上，A+B液抑制异位子宫内膜生长的疗效明显提高。
表3不同给药组异位子宫内膜的外观和病理检查结果
实施例3本发明的复方中药胶囊剂的制备1、配方本发明的复方中药挥发油提取物 1g本发明的复方中药乙醇水溶液提取物 312g预胶化淀粉 73g50％乙醇 适量微粉硅胶 4g羧甲基淀粉钠 10g制成 1000粒2、制备方法称取配方量本发明的复方中药乙醇水溶液提取物，预胶化淀粉充分混匀，加入50％乙醇制软材，用20目筛网过筛制粒；在60-70℃干燥。将干颗粒与配方量的微粉硅胶和羧甲基淀粉钠混合，用20目筛网整粒；将配方量的本发明的复方中药的挥发油提取物用适量无水乙醇溶解后，喷入干燥颗粒中搅拌混匀；充填胶囊，每颗胶囊内容物为0.4g；成品检验合格后包装即得。
实施例4本发明的复方中药包衣片的制备1、配方本发明的复方中药挥发油提取物1g本发明的复方中药乙醇水溶液提取物312g预胶化淀粉 75g3％羟丙甲纤维素水溶液 适量硬脂酸镁2g羧甲基淀粉钠10g制成1000片2、包衣液配方(1000ml)聚丙烯酸树脂IV 25g聚乙二醇600010g
蓖麻油 10ml聚山梨醇酯-80 10ml色素 适量无水乙醇加至 1000ml3、制备方法称取配方量本发明的复方中药乙醇水溶液提取物，预胶化淀粉充分混匀，加入3％羟丙甲纤维素水溶液制软材，用14目筛网过筛制粒；在60-70℃下干燥；将干颗粒与配方量的硬脂酸镁和羧甲基淀粉钠混合，用14目筛网整粒；将配方量的本发明的复方中药的挥发油提取物用适量无水乙醇溶解后，喷入干燥颗粒中搅拌混匀；压片；包衣；成品检验合格后包装即得。
实施例5本发明的复方中药颗粒剂的制备1、配方本发明的复方中药挥发油提取物1g本发明的复方中药乙醇水溶液提取物312g蔗糖粉 4687g制成1000袋2、制备方法称取配方量本发明的复方中药乙醇水溶液提取物、蔗糖粉，混匀，加入适量水制软材，用12目筛网过筛制粒；60-70℃干燥，12目筛整粒。在颗粒中喷洒挥发油乙醇液，混合均匀，待乙醇挥发后分装入袋。
实施例6使用本发明的复方中药治疗子宫肌瘤61例子宫肌瘤，年龄均在48岁以上，均存在不同程度的月经量增多，B超检查肌瘤最大径大于等于3cm。治疗前检查肝肾功能和血常规未发现异常。随机分为3组。第1组23例，使用中成药桂枝茯苓胶囊治疗，口服使用，三颗t.i.d.。第2组25例，使用本发明例3的配方和方法制备的胶囊治疗，口服使用，三颗t.i.d.。第3组17例，使用安慰剂(淀粉胶囊)治疗，口服使用，三颗t.i.d.。各组疗程均为4个月。各组患者在治疗期间不使用其它治疗。治疗结束后随访12个月，均未停经。疗效结果见表4。疗效判断标准与治疗前B超检查相比较，同一个肌瘤最大径消退超过50％的病人数量超过病人总数的50％为有效，否则无效。使用t检验比较各组间百分率的差异的显著性。
表4本发明复方中药和其组成中药对子宫肌瘤的疗效
注*表示与安慰剂对照组比较p＜0.05。
表示第2组与第1组比较p＜0.05。
治疗过程中各组病人中均没有发生中、重度肝功能损害和粒细胞＜3000个/μl等毒副反应。
由表4可见，在肌瘤消退、月经量恢复正常，以及停药后月经量再次增多等方面，使用本发明的复方中药的第2组的疗效明显优于安慰剂组，而使用中成药桂枝茯苓胶囊的第1组的疗效，在月经量恢复正常，以及停药后月经量再次增多等方面，与安慰剂组的疗效相比无明显差异，而与第2组的疗效相比有明显差异。因此，使用本发明的复方中药治疗子宫肌瘤的疗效明显优于安慰剂组和中成药桂枝茯苓胶囊组。本临床试验结果表明本发明提出的治疗雌激素依赖性良性疾病的理论和由该理论指导下发明的复方中药对属于这类疾病之一的子宫肌瘤有较好的疗效。
权利要求
1.一种治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药，由葛根、桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术组成。
2.根据权利要求1所述的复方中药，其葛根的有效成分为葛根异黄酮，并且可以用等效剂量大豆异黄酮或红花苜宿异黄酮或其它等效剂量的异黄酮代替。
3.根据权利要求1所述的复方中药，组成该复方的各味中药的用量比例按重量份数计算为葛根可为5-30份、茯苓可为2-20份、桂枝可为2-20份、赤芍可为2-20份、牡丹皮可为2-20份、桃仁2-20份、莪术2-20份。而较适宜的用量比例为葛根可为10-20份、茯苓可为5-15份、桂枝可为5-15份、赤芍可为5-15份、牡丹皮可为5-15份、桃仁5-15份、莪术5-15份。而最适宜的用量比例为葛根15份、茯苓10份、桂枝10份、赤芍10份、牡丹皮10份、桃仁10份、莪术10份。
4.根据权利要求1、3所述的复方中药的制备方法，先将上述中药按用量比例称取，粉碎成粗粉。将桂枝、桃仁和莪术粗粉混合，置于中间有不锈钢网的提取罐内，加入6倍量的水，浸泡过夜，罐外安装冷凝器，其后接挥发油接收器，该接收器通过底部的不锈钢管与提取罐形成回流系统。加热至沸点，在约0.4kg压力下回流8小时，收集油层即得，收率0.5％；然后在该提取罐中加入其它中药粗粉与残渣混合，补加水和乙醇，使成十倍于药材量的60％乙醇水溶液，在70℃温度下动态提取60分钟，重复提取，共三次。将三次提取液合并，减压浓缩，真空干燥，粉碎成棕色粉末，收率15.6％；根据药物制剂的制备原则，以及临床使用原则，将该复方中药的两类提取物混合，加入一定比例的药用辅料，可以制成临床使用的胶囊、包衣片剂和颗粒剂以及其它药物制剂学上和临床使用上可行的剂型。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药及其制备方法；该复方由葛根、桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术组成，制备成适合临床使用的胶囊、包衣片剂、颗粒剂以及其它药物制剂学上和临床使用上可行的剂型。
文档编号A61K31/7042GK1579432SQ0313559
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月15日 优先权日2003年8月15日
发明者唐小海 申请人:成都市药友科技发展有限公司
技术领域：
本发明涉及治疗妇科雌激素生长依赖性疾病疾病复方中药及制备方法，特别是涉及治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药及制备方法。
背景技术：
子宫肌瘤和子宫内膜异位症的发生和发展需要机体维持相当程度的雌激素水平，是一种雌激素生长依赖性疾病，只发生在育龄期妇女。绝经后，雌激素水平明显下降，上述疾病不再发展，逐渐消退。因此，使用抑制雌激素生物效应的药物有助于抑制这两种疾病的发展。
中药葛根含有葛根异黄酮，具有与雌激素类似的母核结构，可以和雌激素受体结合，但是它产生的雌激素生物效应很微弱，只有17羟β雌二醇生物效应的1/1000至1/10000。因此，根据体内雌激素水平的高低，葛根异黄酮在发挥生物效应时，可以表现为类雌激素活性，也可以表现为抗雌激素活性。对于雌激素水平高的育龄期妇女，葛根异黄酮表现为抗雌激素活性，降低体内分泌雌激素的生物效应。
桂枝茯苓丸来源于《金匾要略》，由桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮和桃仁各等份构成，具有活血化淤、抗炎、抗肿瘤的效果。根据该中药复方制成的中成药桂枝茯苓胶囊，近年用于治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症，取得一定疗效。
近年来使用抗孕激素药物米非司酮治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症也显示出一定疗效，提示孕激素与这两种疾病有关。近年来还证明子宫内膜异位症是一种自身免疫性疾病。莪术属于破血消瘕类中药，具有调节免疫、抗肿瘤和抗孕激素的作用。
发明人通过实验证明，桂枝茯苓丸和莪术均有抑制子宫肌瘤和异位子宫内膜细胞生长的作用，而且，在桂枝茯苓丸的基础上加味莪术，可以增加这种抑制作用。进一步研究发现，在使用从葛根提取的葛根异黄酮或大豆提取的大豆异黄酮造成的低雌激素生物效应的环境中，这种抑制作用更明显增加，并且诱导了子宫肌瘤细胞和异位子宫内膜细胞的凋亡。
所以，在使用具有抑制雌激素生物效应的中药破坏子宫肌瘤和子宫内膜异位症的生长环境的基础上，配合促使它们凋亡的中药，就可以使这两种疾病的病理组织细胞逐渐凋亡、消散，从而达到治疗目的。
发明人进行的实验证明，联合使用抑制雌激素生物效应的中药和活血化淤、破血消瘕、调节免疫、抗肿瘤、诱导细胞凋亡的中药，对子宫肌瘤和子宫内膜异位症的疗效，高于单用任何一类中药的疗效。因为乳腺小叶增生等乳腺良性包块也属于雌激素生长依赖性疾病，所以发明人推论，本发明的复方中药对乳腺良性包块也有较好的疗效。
发明内容
本发明公开的复方中药的配方为抑制雌激素生物效应的中药(或中药提取的抗雌激素生物效应的异黄酮)与诱导细胞凋亡的中药的复方，具有破血消瘕、活血化淤、抗炎镇痛、调节免疫、抗肿瘤、抑制雌激素生物效应、诱导细胞凋亡的作用，用于治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症，达到协同治疗、提高疗效的目的。
根据发明人的实验，得出对子宫肌瘤和子宫内膜异位症有效的复方中药由下述中药组成葛根、茯苓、桂枝、芍药、牡丹皮、桃仁、莪术。
在该复方中药的配方中，葛根可以用大豆替换，具体的实施方法是在使用茯苓、桂枝、芍药、牡丹皮、桃仁、莪术的中药制剂中加入与葛根的有效成分葛根异黄酮等效的大豆异黄酮。同样的原理和方法，也可以使用其它的等效的异黄酮(例如红花苜宿异黄酮)。
在该复方中药中，这些中药的用量比例按重量的份数计算，葛根可为5-30份、茯苓可为2-20份、桂枝可为2-20份、赤芍可为2-20份、牡丹皮可为2-20份、桃仁2-20份、莪术2-20份。而较适宜的用量比例，葛根可为10-20份、茯苓可为5-15份、桂枝可为5-15份、赤芍可为5-15份、牡丹皮可为5-15份、桃仁5-15份、莪术5-15份。而最适宜的用量比例，葛根15份、茯苓10份、桂枝10份、赤芍10份、牡丹皮10份、桃仁10份、莪术10份。
将上述中药按用量比例称取，粉碎成粗粉。将桂枝、桃仁和莪术粗粉混合，置于中间有不锈钢网的提取罐内，加入6倍量的水，浸泡过夜，罐外安装冷凝器，其后接挥发油接收器，该接收器通过底部的不锈钢管与提取罐形成回流系统(TNG-100型多功能提取浓缩装置，成都永泰制药机械厂)。加热至沸点，在约0.4kg压力下回流8小时，收集油层即得，收率0.5％。然后在该提取罐中加入其它中药粗粉与残渣混合，补加水和乙醇，使成十倍于药材量的60％乙醇水溶液，在70℃温度下动态提取60分钟，重复提取，共三次。将三次提取液合并，减压浓缩，真空干燥，粉碎成棕色粉末，收率15.6％。
根据药物制剂的制备原则，以及临床使用原则，将该复方中药的两类提取物混合，加入一定比例的药用辅料，可以制成临床使用的胶囊、包衣片剂、颗粒剂等口服制剂。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明进行更进一步的说明。
实施例1葛根提取物、桂枝茯苓丸复方提取物、莪术提取物以及这三种提取物的再复方对培养中人子宫肌瘤细胞生长的影响1、材料(1)试剂DMETM培养液(Gibco Brl)、胶原酶I型(Sigma Co.)、胎牛血清(FBS)、青霉素、链霉素(Life Technologies Co.)、溴化四唑蓝(MTT)(Fluka ChemieAG.)、DMSO(Amers Co.)(2)器材CO2培养箱(Shimatsu Co.)，酶标仪(Sorin Co.)，流式细胞仪(EPICSl型，Coulter Co.)2、方法手术取得的子宫肌瘤组织，用PBS洗净，剪碎，置含800u/ml胶原酶的DMEM培养液中在37℃下孵育4h，其间吹打4次。消化结束后在1000RPM下离心5min，收集肌瘤细胞，用含1％抗生素的DMEM培养液洗涤3次，锥虫蓝染色计数活细胞，以2×105细胞/ml的密度接种于24孔板，用含10％FBS(V/V)的DMEM在CO2培养120h，细胞长至50％以上密度时，分别加入5种药物提取物如下(1)桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁复方提取物溶液(简称A液，后同)50μl。每1ml从5g生药材中按常规方法提取浓缩。
(2)莪术提取物溶液(简称B液，后同)50μl。每1ml从1g生药材中按常规方法提取浓缩。
(3)葛根提取物溶液(简称C液，后同)50μl。每1ml从1g生药材中按常规方法提取浓缩。
(4)A+B液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术复方提取物溶液。每1ml从6g生药材中按常规方法提取浓缩。
(5)A+B+C液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术、葛根复方提取物溶液。每1ml从7.5g生药材中按常规方法提取浓缩。
(6)3％(w/v)大豆异黄酮溶液(简称D液，后同)，50μl。
(7)A+B+D液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术复方提取物溶液。每1ml从6g生药材按常规方法提取浓缩，并加入大豆异黄酮使其浓度达到3％(w/v)。
对照加50μl生理盐水，继续培养24小时，拍照后进行MTT检测。
3、结果(1)MTT检测每孔加MTT(5mg/ml)100μl培养4h，弃培液后每孔加DMSO 1ml振荡5min，于490nm波长读数。结果见表1。
表1 MTT法细胞染色OD值
(2)流式细胞仪测定采用和MTT法同样的细胞培养法，用碘化丙啶(PI)一步荧光插入法进行细胞核DNA染色，用200目尼龙网过滤后上机检测。结果见表2。
表2培养细胞的流式细胞仪测定
结果发现，MTT法试验时，A+B+C液组OD值最低，A+B+D液组OD值与之接近，提示这两组活细胞最少，A+B+C液和A+B+D液对培养中的子宫肌瘤细胞的生长的抑制作用比A+B液的大，提示C液或D液造成的低雌激素生物效应环境增加了A+B液对培养中的子宫肌瘤细胞的生长的抑制。流式细胞仪测定法试验时，A+B+C液组的凋亡指数最高，SPF值下降最明显。其中，A+B+C液组的凋亡指数与对照组、A液组和A+B液组比较，均显著增加(p＜0.05)。
实施例2葛根提取物、桂枝茯苓丸复方提取物、莪术提取物以及这三种提取物的再复方对大鼠子宫内膜异位症模型的异位子宫内膜的生长的影响1、材料雌性未交配SD大鼠，220-250g，合格证号医动字24101101(由四川省医科院实验动物研究所提供)。
药物提取物同实施例1。
2、方法子宫内膜异位症动物模型的建立采用阴道涂片检查的方法，选择动情周期未4-5天、连续有两个正常动情周期的大鼠，在动情期手术。3％的戊巴比妥钠(1.5ml/kg)腹腔内注射麻醉，常规消毒后开腹，将右侧子宫中上段长2cm的两端结扎，从子宫血管袢的对侧切开浆膜和基层，向两侧分离达子宫血管袢后切除，将剩下的裸子宫内膜穿过腹肌固定于皮下和腹肌之间。分两层关腹。清洁环境饲养。
50只动物模型，分5组，每组10只，分别是模型对照组、A液组、A+B液组、A+B+C液组，分别每日灌胃生理盐水2ml/kg、A液2ml/kg、A+B液2ml/kg、A+B+C液各2ml/kg。给药21天后处死动物，比较异位子宫内膜的外观和病理检查(HE染色，光镜)结果。
3、结果结果见表3。A+B+C液对异位子宫内膜的生长有明显抑制作用，疗效优于A液或A+B液。本实验结果提示在使用抑制雌激素生物效应的C液的基础上，A+B液抑制异位子宫内膜生长的疗效明显提高。
表3不同给药组异位子宫内膜的外观和病理检查结果
实施例3本发明的复方中药胶囊剂的制备1、配方本发明的复方中药挥发油提取物 1g本发明的复方中药乙醇水溶液提取物 312g预胶化淀粉 73g50％乙醇 适量微粉硅胶 4g羧甲基淀粉钠 10g制成 1000粒2、制备方法称取配方量本发明的复方中药乙醇水溶液提取物，预胶化淀粉充分混匀，加入50％乙醇制软材，用20目筛网过筛制粒；在60-70℃干燥。将干颗粒与配方量的微粉硅胶和羧甲基淀粉钠混合，用20目筛网整粒；将配方量的本发明的复方中药的挥发油提取物用适量无水乙醇溶解后，喷入干燥颗粒中搅拌混匀；充填胶囊，每颗胶囊内容物为0.4g；成品检验合格后包装即得。
实施例4本发明的复方中药包衣片的制备1、配方本发明的复方中药挥发油提取物1g本发明的复方中药乙醇水溶液提取物312g预胶化淀粉 75g3％羟丙甲纤维素水溶液 适量硬脂酸镁2g羧甲基淀粉钠10g制成1000片2、包衣液配方(1000ml)聚丙烯酸树脂IV 25g聚乙二醇600010g
蓖麻油 10ml聚山梨醇酯-80 10ml色素 适量无水乙醇加至 1000ml3、制备方法称取配方量本发明的复方中药乙醇水溶液提取物，预胶化淀粉充分混匀，加入3％羟丙甲纤维素水溶液制软材，用14目筛网过筛制粒；在60-70℃下干燥；将干颗粒与配方量的硬脂酸镁和羧甲基淀粉钠混合，用14目筛网整粒；将配方量的本发明的复方中药的挥发油提取物用适量无水乙醇溶解后，喷入干燥颗粒中搅拌混匀；压片；包衣；成品检验合格后包装即得。
实施例5本发明的复方中药颗粒剂的制备1、配方本发明的复方中药挥发油提取物1g本发明的复方中药乙醇水溶液提取物312g蔗糖粉 4687g制成1000袋2、制备方法称取配方量本发明的复方中药乙醇水溶液提取物、蔗糖粉，混匀，加入适量水制软材，用12目筛网过筛制粒；60-70℃干燥，12目筛整粒。在颗粒中喷洒挥发油乙醇液，混合均匀，待乙醇挥发后分装入袋。
实施例6使用本发明的复方中药治疗子宫肌瘤61例子宫肌瘤，年龄均在48岁以上，均存在不同程度的月经量增多，B超检查肌瘤最大径大于等于3cm。治疗前检查肝肾功能和血常规未发现异常。随机分为3组。第1组23例，使用中成药桂枝茯苓胶囊治疗，口服使用，三颗t.i.d.。第2组25例，使用本发明例3的配方和方法制备的胶囊治疗，口服使用，三颗t.i.d.。第3组17例，使用安慰剂(淀粉胶囊)治疗，口服使用，三颗t.i.d.。各组疗程均为4个月。各组患者在治疗期间不使用其它治疗。治疗结束后随访12个月，均未停经。疗效结果见表4。疗效判断标准与治疗前B超检查相比较，同一个肌瘤最大径消退超过50％的病人数量超过病人总数的50％为有效，否则无效。使用t检验比较各组间百分率的差异的显著性。
表4本发明复方中药和其组成中药对子宫肌瘤的疗效
注*表示与安慰剂对照组比较p＜0.05。
表示第2组与第1组比较p＜0.05。
治疗过程中各组病人中均没有发生中、重度肝功能损害和粒细胞＜3000个/μl等毒副反应。
由表4可见，在肌瘤消退、月经量恢复正常，以及停药后月经量再次增多等方面，使用本发明的复方中药的第2组的疗效明显优于安慰剂组，而使用中成药桂枝茯苓胶囊的第1组的疗效，在月经量恢复正常，以及停药后月经量再次增多等方面，与安慰剂组的疗效相比无明显差异，而与第2组的疗效相比有明显差异。因此，使用本发明的复方中药治疗子宫肌瘤的疗效明显优于安慰剂组和中成药桂枝茯苓胶囊组。本临床试验结果表明本发明提出的治疗雌激素依赖性良性疾病的理论和由该理论指导下发明的复方中药对属于这类疾病之一的子宫肌瘤有较好的疗效。
权利要求
1.一种治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药，由葛根、桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术组成。
2.根据权利要求1所述的复方中药，其葛根的有效成分为葛根异黄酮，并且可以用等效剂量大豆异黄酮或红花苜宿异黄酮或其它等效剂量的异黄酮代替。
3.根据权利要求1所述的复方中药，组成该复方的各味中药的用量比例按重量份数计算为葛根可为5-30份、茯苓可为2-20份、桂枝可为2-20份、赤芍可为2-20份、牡丹皮可为2-20份、桃仁2-20份、莪术2-20份。而较适宜的用量比例为葛根可为10-20份、茯苓可为5-15份、桂枝可为5-15份、赤芍可为5-15份、牡丹皮可为5-15份、桃仁5-15份、莪术5-15份。而最适宜的用量比例为葛根15份、茯苓10份、桂枝10份、赤芍10份、牡丹皮10份、桃仁10份、莪术10份。
4.根据权利要求1、3所述的复方中药的制备方法，先将上述中药按用量比例称取，粉碎成粗粉。将桂枝、桃仁和莪术粗粉混合，置于中间有不锈钢网的提取罐内，加入6倍量的水，浸泡过夜，罐外安装冷凝器，其后接挥发油接收器，该接收器通过底部的不锈钢管与提取罐形成回流系统。加热至沸点，在约0.4kg压力下回流8小时，收集油层即得，收率0.5％；然后在该提取罐中加入其它中药粗粉与残渣混合，补加水和乙醇，使成十倍于药材量的60％乙醇水溶液，在70℃温度下动态提取60分钟，重复提取，共三次。将三次提取液合并，减压浓缩，真空干燥，粉碎成棕色粉末，收率15.6％；根据药物制剂的制备原则，以及临床使用原则，将该复方中药的两类提取物混合，加入一定比例的药用辅料，可以制成临床使用的胶囊、包衣片剂和颗粒剂以及其它药物制剂学上和临床使用上可行的剂型。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的复方中药及其制备方法；该复方由葛根、桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪术组成，制备成适合临床使用的胶囊、包衣片剂、颗粒剂以及其它药物制剂学上和临床使用上可行的剂型。
文档编号A61K31/7042GK1579432SQ0313559
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月15日 优先权日2003年8月15日
发明者唐小海 申请人:成都市药友科技发展有限公司
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