一种治疗肿瘤的组合物的制作方法
专利名称：一种治疗肿瘤的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及药品，特别是治疗肿瘤的组合物药品。
背景技术：
沙棘为胡颓子科沙棘属植物。沙棘总黄酮是从沙棘中提取出来的黄酮类化合物，黄酮类化合物存在于沙棘的各个部位当中。可采用水或水-醇法从沙棘中提取沙棘总黄酮，另外超临界法也可用于从沙棘中提取沙棘总黄酮。以往的研究表明沙棘总黄酮具有遏制粥样动脉硬化、降低血液胆固醇的作用。沙棘总黄酮还具有增加心脏的收缩和舒张功能，有明显的抗心肌缺血和抗心率失常作用。
中药苦参是豆科植物苦参的根，苦参中含有的生物碱具有一定抗肿瘤作用和抗病毒作用等药理作用。
发明内容
鉴于上述，本发明的目的在于提供一种治疗肿瘤的新的组合物。
本发明的一种治疗肿瘤的组合物，包含有治疗有效剂量的沙棘总黄酮和苦参碱。
上述的沙棘总黄酮是从沙棘属植物中提取出的黄酮总体。上述的沙棘总黄酮为按本领域技术人员所熟知的提取方法，如水醇法，从各种沙棘中提取出来的所有黄酮类化合物的总体混合物。沙棘总黄酮中主要有异鼠李素，槲皮素、异鼠李素-3-O-鼠李半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-鼠李葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-半乳糖甙、异鼠李素-7-O-鼠李糖甙、槲皮素-3-O-半乳糖甙、槲皮素-3-O-葡萄糖甙、槲皮素-7-O-鼠李糖甙等。
上述的苦参碱是苦参总生物碱、苦参碱单体、氧化苦参碱单体或氧化苦参碱单体与苦参碱单体的混合物。上述的苦参总生物碱是指从各种苦参中按本领域技术人员所熟知的提取方法，从各种苦参中提取出来的所有生物碱类化合物的总体混合物。苦参总生物碱主要有苦参碱、氧化苦参碱、羟基苦参碱、去氢苦参碱、巴普叶碱、安那吉碱等。
本组合物中上述的沙棘总黄酮和苦参碱按重量份计量的含量是沙棘总黄酮1～10，苦参碱1～10。较好是沙棘总黄酮1～3，苦参碱1～3。最好是沙棘总黄酮3，苦参碱1。
本发明的组合物适用于治疗肿瘤，特别是适用于治疗宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌等肿瘤。
本发明的组合物治疗肿瘤的机理如下1、诱导肿瘤细胞凋亡和分化施以本组合物后的肿瘤细胞的形态和生长曲线测定，以及流式细胞仪检测的结果来看。本组合物可以诱导肿瘤细胞的凋亡和分化，从而产生治疗肿瘤的作用。
2、抑制肿瘤细胞的增殖通过3H-TdR(3H标记的脱氧胸腺嘧啶核苷酸)掺入实验及流式细胞仪检测的结果，本组合物可以抑制DNA的合成并且可以抑制肿瘤细胞的增殖。经本组合物处理的肿瘤细胞被阻止于细胞周期中的G0/G1(细胞周期中的间期0期和1期)期，进入分裂期的肿瘤细胞比例下降。
3、影响肿瘤细胞基因的表达肿瘤细胞的基因表达在被施用本组合物前后有明显的变化。通过流式细胞仪的检测，施用本组合物后，肿瘤细胞的Bcl-2、c-myc和c-ha-ras的表达明显降低，同时P-53、Bax的表达上升。c-myc和c-ha-ras的表达过量与肿瘤形成有密切关系，而bcl-2是抑制肿瘤细胞凋亡的基因。p53基因可促进肿瘤细胞凋亡；bax基因的表达上升也可以促进肿瘤细胞的凋亡。bcl-2、c-myc和c-ha-ras三个基因在本组合物处理过的肿瘤细胞中表达降低，同时p53、bax的表达上升说明了本组合物可使肿瘤细胞产生分化凋亡。
本发明的组合物中的沙棘总黄酮和苦参碱共同使用可以通过以上三种机理来达到治疗肿瘤的作用。而且，沙棘总黄酮和苦参碱共同使用可以产生协同作用，与仅单独使用沙棘总黄酮或仅单独使用苦参碱相比，在相同的剂量下可以更有效的治疗肿瘤。
为了方便治疗使用，可以使用本领域技术人员已知的方法，将本组合物制成适合使用的剂型。比如将本组合物溶于适当溶剂如生理盐水制备成静脉输注液；或将本组合物制成粉末添加适当赋形剂制备成口服剂型，如胶囊、片剂等。
为了更好地理解本发明，下面用药效实验和动物体内抗肿瘤实验来说明本组合物对肿瘤的治疗作用。
一、本组合物对肿瘤治疗的药效实验。以下的本组合物中按重量份计量的含量是沙棘总黄酮3，苦参碱1。
(一)本组合物对人宫颈癌细胞(Hela细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理Hela细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理Hela细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑)测定Hela细胞对照组与治疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计数集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在沙棘总黄酮作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR(3H标记的脱氧胸腺嘧啶核苷酸)掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5μCi/ml(μCi微居))，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm(每分钟脉冲数)值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
注G0/G1细胞周期中的间期0期和1期。
S细胞周期中的DNA合成期。
G2+MG2是细胞周期中的间期2期，M是细胞周期中的分裂期。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的G0/G1期的比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示本组合物降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被本组合物作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论Hela细胞(人宫颈癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加。说明本组合物使Hela细胞分化凋亡，并且降低Hela细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗宫颈癌的作用。
(二)本组合物对人舌鳞癌细胞(Tca-8113细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理Tca-8113细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理Tca-8113细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定Tca-8113细胞对照组与治疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在本组合物作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5gCi/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的G0/G1期比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示本组合物降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被本组合物作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论Tea-8113细胞(人舌鳞癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加。说明本组合物使Tea-8113细胞分化凋亡，并且降低Tca-8113细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗舌鳞癌的作用。
(三)本组合物对人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理SMMC-7721细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理SMMC-7721细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定SMMC-7721细胞对照组与治疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计数集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在本组合物作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5μCi/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的G0/G1期比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示本组合物降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被本组合物作用后的肿瘤细胞基因表达改变，分化程度升高。
6、结论SMMC-7721细胞(人肝癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、3H-TdR掺入减少、基因表达率改变。说明本组合物使SMMC-7721细胞分化程度上升，并且降低SMMC-7721细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗肝癌的作用。
(四)本组合物对人肺腺癌细胞(YTMLC-90细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理YTMLC-90细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理YTMLC-90细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定YTMLC-90细胞对照组与冶疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在本组合物作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5gCi/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
被本组合物作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论YTMLC-90细胞(人肺腺癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、基因表达率改变、凋亡率增加。说明本组合物使YTMLC-90细胞分化凋亡，达到治疗肺腺癌的作用。
二、本组合物对肿瘤治疗的动物体内抗肿瘤实验。以下的本组合物中按重量份计量的含量是沙棘总黄酮3，苦参碱1。
体重18～22克小鼠，雌雄各半。每组动物20只，各组只数与性别比例相同。小鼠肝癌H22细胞稀释成1×107/ml，每只鼠皮下注射瘤细胞液0.2ml。次日将小鼠分为两组。空白对照组皮下注射等体积的生理盐水，实验组皮下注射20mg/kg的本组合物。给药5天后，处死小鼠，称量小鼠体重及瘤重。结果见下表。
实验证明，本组合物具有抑制动物体内肿瘤生长的作用。
综上所述从以上实验结果，说明本组合物可以使肿瘤细胞的形态改变、基因表达率改变分化程度上升，还可以使肿瘤细胞的凋亡率增加，并且降低肿瘤细胞的生长增殖速度。因此，可以得出本发明具有如下的优点。
一、本发明对沙棘总黄酮和苦参碱开拓了新的应用领域，用作制备治疗肿瘤的药物。
二、本发明的药物治疗肿瘤效果好，对多种肿瘤细胞都有效。在治疗肿瘤时的副作用很小，治疗剂量的本组合物对正常细胞形态功能没有影响。而且沙棘总黄酮和苦参碱可以产生协同作用，两者合用比单独使用相同的剂量沙棘总黄酮更有效的治疗肿瘤，也比单独使用相同的剂量苦参碱更有效的治疗肿瘤。
三、沙棘总黄酮和苦参碱原料来源广泛，价格低廉，本组合物可制成静脉输注剂、口服剂等多种剂型，口服剂型可以是片剂、胶囊等。
下面，再用实施例对本发明作进一步说明。本发明可以用以下实施例来予以说明，但并不仅限于以下实施例。
具体实施例方式
实施例1.
本发明的一种治疗肿瘤的组合药物的各实施例如表一。按表一称取本组合物中的各组份用量，加入1000ml生理盐水，30℃水浴加热，使各组份完全溶解于生理盐水中。溶液消毒过滤后灌装，制成本组合物静脉输注液。使用时按为5mg/kg/天的剂量静脉输注。
表一
实施例2本发明的一种治疗肿瘤的组合药物的各实施例如表二。按表二称取本组合物中的各组份用量，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个沙棘总黄酮和苦参碱组合物胶囊，每个含沙棘总黄酮和苦参碱组合物50mg。
表二
实施例3本发明的一种治疗肿瘤的组合药物的各实施例如表三。按表三称取本组合物中的各组份用量，与干燥淀粉按等量递加法混合，过筛混合均匀。然后与糊精混合均匀。加入适量乙醇，通过16目筛制粒，50℃干燥。干粒过16目筛，加入硬脂酸镁，混匀后压片。压制成1000片，每片含沙棘总黄酮和苦参碱组合物50mg。
表三
权利要求
1.一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于包含沙棘总黄酮和苦参碱。
2.根据权利要求1中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于所说的沙棘总黄酮是从沙棘属植物中提取出的黄酮总体。
3.根据权利要求1中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于所说的苦参碱是苦参总生物碱、苦参碱单体、氧化苦参碱单体或氧化苦参碱单体与苦参碱单体的混合物中的一种。
4.根据权利要求1、2或3中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于按重量份计量的含量沙棘总黄酮1～10，苦参碱1～10。
5.根据权利要求1、2或3中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于按重量份计量的含量沙棘总黄酮1～3，苦参碱1～3。
6.根据权利要求1、2或3中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于按重量份计量的含量沙棘总黄酮3，苦参碱1。
7.根据权利要求1、2或3所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
8.根据权利要求4所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
9.根据权利要求5所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
10.根据权利要求6所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
全文摘要
本发明的一种治疗肿瘤的组合物，涉及药品，特别是治疗肿瘤的组合物药品。本组合物包含沙棘总黄酮和苦参碱。沙棘总黄酮是从沙棘属植物中提取出的黄酮总体。苦参碱是苦参总生物碱、苦参碱单体、氧化苦参碱单体或氧化苦参碱单体与苦参碱单体的混合物中的一种。按重量份计量的含量为沙棘总黄酮1～10，苦参碱1～10。本组合物可以是静脉输注剂或口服剂等剂型。本组合物适用于治疗肿瘤，特别是适用于治疗宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌等肿瘤。治疗副作用小，效果好。沙棘总黄酮和苦参碱原料价格便宜，来源广泛。
文档编号A61K31/7048GK1589805SQ0313566
公开日2005年3月9日 申请日期2003年8月25日 优先权日2003年8月25日
发明者王正荣, 王跃锜 申请人:王正荣
技术领域：
本发明涉及药品，特别是治疗肿瘤的组合物药品。
背景技术：
沙棘为胡颓子科沙棘属植物。沙棘总黄酮是从沙棘中提取出来的黄酮类化合物，黄酮类化合物存在于沙棘的各个部位当中。可采用水或水-醇法从沙棘中提取沙棘总黄酮，另外超临界法也可用于从沙棘中提取沙棘总黄酮。以往的研究表明沙棘总黄酮具有遏制粥样动脉硬化、降低血液胆固醇的作用。沙棘总黄酮还具有增加心脏的收缩和舒张功能，有明显的抗心肌缺血和抗心率失常作用。
中药苦参是豆科植物苦参的根，苦参中含有的生物碱具有一定抗肿瘤作用和抗病毒作用等药理作用。
发明内容
鉴于上述，本发明的目的在于提供一种治疗肿瘤的新的组合物。
本发明的一种治疗肿瘤的组合物，包含有治疗有效剂量的沙棘总黄酮和苦参碱。
上述的沙棘总黄酮是从沙棘属植物中提取出的黄酮总体。上述的沙棘总黄酮为按本领域技术人员所熟知的提取方法，如水醇法，从各种沙棘中提取出来的所有黄酮类化合物的总体混合物。沙棘总黄酮中主要有异鼠李素，槲皮素、异鼠李素-3-O-鼠李半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-鼠李葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-半乳糖甙、异鼠李素-7-O-鼠李糖甙、槲皮素-3-O-半乳糖甙、槲皮素-3-O-葡萄糖甙、槲皮素-7-O-鼠李糖甙等。
上述的苦参碱是苦参总生物碱、苦参碱单体、氧化苦参碱单体或氧化苦参碱单体与苦参碱单体的混合物。上述的苦参总生物碱是指从各种苦参中按本领域技术人员所熟知的提取方法，从各种苦参中提取出来的所有生物碱类化合物的总体混合物。苦参总生物碱主要有苦参碱、氧化苦参碱、羟基苦参碱、去氢苦参碱、巴普叶碱、安那吉碱等。
本组合物中上述的沙棘总黄酮和苦参碱按重量份计量的含量是沙棘总黄酮1～10，苦参碱1～10。较好是沙棘总黄酮1～3，苦参碱1～3。最好是沙棘总黄酮3，苦参碱1。
本发明的组合物适用于治疗肿瘤，特别是适用于治疗宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌等肿瘤。
本发明的组合物治疗肿瘤的机理如下1、诱导肿瘤细胞凋亡和分化施以本组合物后的肿瘤细胞的形态和生长曲线测定，以及流式细胞仪检测的结果来看。本组合物可以诱导肿瘤细胞的凋亡和分化，从而产生治疗肿瘤的作用。
2、抑制肿瘤细胞的增殖通过3H-TdR(3H标记的脱氧胸腺嘧啶核苷酸)掺入实验及流式细胞仪检测的结果，本组合物可以抑制DNA的合成并且可以抑制肿瘤细胞的增殖。经本组合物处理的肿瘤细胞被阻止于细胞周期中的G0/G1(细胞周期中的间期0期和1期)期，进入分裂期的肿瘤细胞比例下降。
3、影响肿瘤细胞基因的表达肿瘤细胞的基因表达在被施用本组合物前后有明显的变化。通过流式细胞仪的检测，施用本组合物后，肿瘤细胞的Bcl-2、c-myc和c-ha-ras的表达明显降低，同时P-53、Bax的表达上升。c-myc和c-ha-ras的表达过量与肿瘤形成有密切关系，而bcl-2是抑制肿瘤细胞凋亡的基因。p53基因可促进肿瘤细胞凋亡；bax基因的表达上升也可以促进肿瘤细胞的凋亡。bcl-2、c-myc和c-ha-ras三个基因在本组合物处理过的肿瘤细胞中表达降低，同时p53、bax的表达上升说明了本组合物可使肿瘤细胞产生分化凋亡。
本发明的组合物中的沙棘总黄酮和苦参碱共同使用可以通过以上三种机理来达到治疗肿瘤的作用。而且，沙棘总黄酮和苦参碱共同使用可以产生协同作用，与仅单独使用沙棘总黄酮或仅单独使用苦参碱相比，在相同的剂量下可以更有效的治疗肿瘤。
为了方便治疗使用，可以使用本领域技术人员已知的方法，将本组合物制成适合使用的剂型。比如将本组合物溶于适当溶剂如生理盐水制备成静脉输注液；或将本组合物制成粉末添加适当赋形剂制备成口服剂型，如胶囊、片剂等。
为了更好地理解本发明，下面用药效实验和动物体内抗肿瘤实验来说明本组合物对肿瘤的治疗作用。
一、本组合物对肿瘤治疗的药效实验。以下的本组合物中按重量份计量的含量是沙棘总黄酮3，苦参碱1。
(一)本组合物对人宫颈癌细胞(Hela细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理Hela细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理Hela细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑)测定Hela细胞对照组与治疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计数集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在沙棘总黄酮作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR(3H标记的脱氧胸腺嘧啶核苷酸)掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5μCi/ml(μCi微居))，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm(每分钟脉冲数)值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
注G0/G1细胞周期中的间期0期和1期。
S细胞周期中的DNA合成期。
G2+MG2是细胞周期中的间期2期，M是细胞周期中的分裂期。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的G0/G1期的比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示本组合物降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被本组合物作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论Hela细胞(人宫颈癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加。说明本组合物使Hela细胞分化凋亡，并且降低Hela细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗宫颈癌的作用。
(二)本组合物对人舌鳞癌细胞(Tca-8113细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理Tca-8113细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理Tca-8113细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定Tca-8113细胞对照组与治疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在本组合物作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5gCi/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的G0/G1期比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示本组合物降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被本组合物作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论Tea-8113细胞(人舌鳞癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加。说明本组合物使Tea-8113细胞分化凋亡，并且降低Tca-8113细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗舌鳞癌的作用。
(三)本组合物对人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理SMMC-7721细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理SMMC-7721细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定SMMC-7721细胞对照组与治疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计数集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在本组合物作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5μCi/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的G0/G1期比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示本组合物降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被本组合物作用后的肿瘤细胞基因表达改变，分化程度升高。
6、结论SMMC-7721细胞(人肝癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、3H-TdR掺入减少、基因表达率改变。说明本组合物使SMMC-7721细胞分化程度上升，并且降低SMMC-7721细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗肝癌的作用。
(四)本组合物对人肺腺癌细胞(YTMLC-90细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml本组合物的细胞培养液来处理YTMLC-90细胞，阴性对照组为采用不含本组合物的培养液处理YTMLC-90细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定YTMLC-90细胞对照组与冶疗组的生长情况。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在本组合物作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为0.5gCi/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经本组合物处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经本组合物作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
被本组合物作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论YTMLC-90细胞(人肺腺癌细胞)在经本组合物处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、基因表达率改变、凋亡率增加。说明本组合物使YTMLC-90细胞分化凋亡，达到治疗肺腺癌的作用。
二、本组合物对肿瘤治疗的动物体内抗肿瘤实验。以下的本组合物中按重量份计量的含量是沙棘总黄酮3，苦参碱1。
体重18～22克小鼠，雌雄各半。每组动物20只，各组只数与性别比例相同。小鼠肝癌H22细胞稀释成1×107/ml，每只鼠皮下注射瘤细胞液0.2ml。次日将小鼠分为两组。空白对照组皮下注射等体积的生理盐水，实验组皮下注射20mg/kg的本组合物。给药5天后，处死小鼠，称量小鼠体重及瘤重。结果见下表。
实验证明，本组合物具有抑制动物体内肿瘤生长的作用。
综上所述从以上实验结果，说明本组合物可以使肿瘤细胞的形态改变、基因表达率改变分化程度上升，还可以使肿瘤细胞的凋亡率增加，并且降低肿瘤细胞的生长增殖速度。因此，可以得出本发明具有如下的优点。
一、本发明对沙棘总黄酮和苦参碱开拓了新的应用领域，用作制备治疗肿瘤的药物。
二、本发明的药物治疗肿瘤效果好，对多种肿瘤细胞都有效。在治疗肿瘤时的副作用很小，治疗剂量的本组合物对正常细胞形态功能没有影响。而且沙棘总黄酮和苦参碱可以产生协同作用，两者合用比单独使用相同的剂量沙棘总黄酮更有效的治疗肿瘤，也比单独使用相同的剂量苦参碱更有效的治疗肿瘤。
三、沙棘总黄酮和苦参碱原料来源广泛，价格低廉，本组合物可制成静脉输注剂、口服剂等多种剂型，口服剂型可以是片剂、胶囊等。
下面，再用实施例对本发明作进一步说明。本发明可以用以下实施例来予以说明，但并不仅限于以下实施例。
具体实施例方式
实施例1.
本发明的一种治疗肿瘤的组合药物的各实施例如表一。按表一称取本组合物中的各组份用量，加入1000ml生理盐水，30℃水浴加热，使各组份完全溶解于生理盐水中。溶液消毒过滤后灌装，制成本组合物静脉输注液。使用时按为5mg/kg/天的剂量静脉输注。
表一
实施例2本发明的一种治疗肿瘤的组合药物的各实施例如表二。按表二称取本组合物中的各组份用量，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个沙棘总黄酮和苦参碱组合物胶囊，每个含沙棘总黄酮和苦参碱组合物50mg。
表二
实施例3本发明的一种治疗肿瘤的组合药物的各实施例如表三。按表三称取本组合物中的各组份用量，与干燥淀粉按等量递加法混合，过筛混合均匀。然后与糊精混合均匀。加入适量乙醇，通过16目筛制粒，50℃干燥。干粒过16目筛，加入硬脂酸镁，混匀后压片。压制成1000片，每片含沙棘总黄酮和苦参碱组合物50mg。
表三
权利要求
1.一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于包含沙棘总黄酮和苦参碱。
2.根据权利要求1中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于所说的沙棘总黄酮是从沙棘属植物中提取出的黄酮总体。
3.根据权利要求1中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于所说的苦参碱是苦参总生物碱、苦参碱单体、氧化苦参碱单体或氧化苦参碱单体与苦参碱单体的混合物中的一种。
4.根据权利要求1、2或3中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于按重量份计量的含量沙棘总黄酮1～10，苦参碱1～10。
5.根据权利要求1、2或3中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于按重量份计量的含量沙棘总黄酮1～3，苦参碱1～3。
6.根据权利要求1、2或3中所说的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于按重量份计量的含量沙棘总黄酮3，苦参碱1。
7.根据权利要求1、2或3所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
8.根据权利要求4所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
9.根据权利要求5所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
10.根据权利要求6所述的一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于是静脉输注剂或口服剂。
全文摘要
本发明的一种治疗肿瘤的组合物，涉及药品，特别是治疗肿瘤的组合物药品。本组合物包含沙棘总黄酮和苦参碱。沙棘总黄酮是从沙棘属植物中提取出的黄酮总体。苦参碱是苦参总生物碱、苦参碱单体、氧化苦参碱单体或氧化苦参碱单体与苦参碱单体的混合物中的一种。按重量份计量的含量为沙棘总黄酮1～10，苦参碱1～10。本组合物可以是静脉输注剂或口服剂等剂型。本组合物适用于治疗肿瘤，特别是适用于治疗宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌等肿瘤。治疗副作用小，效果好。沙棘总黄酮和苦参碱原料价格便宜，来源广泛。
文档编号A61K31/7048GK1589805SQ0313566
公开日2005年3月9日 申请日期2003年8月25日 优先权日2003年8月25日
发明者王正荣, 王跃锜 申请人:王正荣
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