专利名称:一种药物组合物及其在心脑血管疾病方面的应用的制作方法
技术领域:
本发明涉及由丹参素和红花黄色素组成的药物组合物,还涉及该药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。
背景技术:
随着人口老龄化进程的加速以及生活方式的改变,心脑血管病已成为一个全球性的健康问题,冠心病、卒中的死亡率在世界范围分别居第1、3位。新型有效的防治心脑血管病药物的开发已刻不容缓。
沈翠鹃报道红花黄色素能抑制ADP诱导的血小板聚集、抑制血栓形成并促进已形成血栓的溶解
沈翠鹃.红花的研究.山西医药杂志,1979;(1)46-50。胡书群等研究认为其保护机制与Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶II(Ca2+/CaM PK II)有关
胡书群,张光毅.红花黄色素对脑缺血Ca2+/CaM PK II活性的抑制作用.徐州医学院学报,1999;19(5)348-51。朴永哲等报导红花黄色素能缓解大鼠心肌缺血,改善大鼠心肌能量代谢
朴永哲,金鸣,臧宝霞,等.红花黄色素缓解大鼠心肌缺血作用的研究.心肺血管病杂志,2002,21(4)225~8。
王南、蔡海江报导丹参素具有抑制细胞氧化修饰脂蛋白的作用,其抗氧化能力与丹参的量成正相关
王南,蔡海江.丹参素对牛主动脉平滑肌细胞氧化修饰LDL的抑制作用(J).南京医科大学学报,1994,14(4)529.;此外,顾杨洪,张彩英等认为丹参素还能抑制内源性胆固醇合成,保护血管屏障,防止动脉粥样硬化形成
顾杨洪,张彩英,黄桂秋.丹参和丹参素对牛内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响(J).上海第二医科大学学报,1990,10(3)208.。
本发明人通过大量的实验研究,提供了由丹参素和红花黄色素组成的药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用,该药物组合物在用于心脑血管疾病时具有协同作用。
发明内容
本发明提供了由红花黄色素和丹参素组成的药物组合物,其重量比为1∶9~9∶1。其优选重量比为1∶4~4∶1,丹参素还可以以金属盐的形式存在,优选为钠盐。
本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。
本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防脑损伤、脑中风的药物中的应用。
本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防心肌缺血的、冠心病、心绞痛或心肌梗死的药物中的应用。
本发明提供的药物组合物可以根据制剂需要,加入相应辅料,以片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂、霜剂、软膏、喷雾剂、口嚼剂或贴剂形式存在,优选为冻干粉针。本发明提供的各种剂型均可以采用药学常规方法制备而成。
本发明提供的药物组合物,其活性成分的含量为50-200mg。
本发明提供的药物组合物在用于心脑血管疾病时,其使用剂量范围是50mg-200mg。
本发明所述的红花黄色素可以采用文献方法制备而得,如采用文献
余红,徐礼燊.红花中总黄酮含量的库仑滴定法测定(J).分析化学,1997,25(3)371.方法制备,优选采用水渗漉提取方法,用弱极性大孔吸附树脂柱层析后再用聚酰胺柱或葡聚糖凝胶,获得红花黄色素。本发明所述的丹参素是从丹参中提取分离获得,优选采用水提取方法,与大孔吸附树脂柱层析法精致,获得丹参素。
本发明人进行了下列试验来证实由丹参素和红花黄色素组成的药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的作用,具有协同作用。
具体实施例方式制备例1红花黄色素、丹参素的制备取红花药材10kg,25倍量水渗漉,过滤,浓缩后,用弱极性大孔吸附树脂吸附(提取液与树脂的体积比1∶1),用去离子水洗脱3个柱体积去除杂质后,然后用30%乙醇洗脱3个柱体积,收集洗脱液,浓缩后用聚酰胺吸附,先用水洗至无色,然后用偏碱性的95%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥得到红花黄色素。
取丹参生药粉碎,加12倍量0.5%的NaOH煎煮两次,每次1.5小时,过滤,合并滤液,用弱碱性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1),用去离子水洗脱3-5柱体积,再用0.4%的NaOH洗脱2个柱体积,收集洗脱液,调节pH值为2-5,用弱极性或非极性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1),用去离子水洗脱1-2个柱体积后再洗5个柱体积,收集洗脱液,浓缩,结晶,得丹参素钠纯度为91.3%。
制备例2红花黄色素、丹参素的制备取红花药材10kg,采用文献
余红,徐礼燊.红花中总黄酮含量的库仑滴定法测定(J).分析化学,1997,25(3)371.提取纯化,浓缩、干燥得到红花黄色素。
取丹参生药粉碎,加12倍量0.5%的NaOH煎煮两次,每次1.5小时,过滤,合并滤液,用弱碱性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1),用去离子水洗脱3-5柱体积,再用0.4%的NaOH洗脱2个柱体积,收集洗脱液,调节pH值为2-5,用弱极性或非极性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1),用去离子水洗脱1-2个柱体积后再洗5个柱体积,收集洗脱液,浓缩,加入适量HCl调pH至酸性,结晶,得丹参素纯度为91.5%。
制备例3制备由红花黄色素和丹参素组成的冻干粉针在洁净条件下,取红花黄色素90g、丹参素10g,溶于1000ml注射用水,加入100g甘露醇,搅拌溶解,超滤,得到无热源的澄清液,按冻干粉针工艺冻干,制成含红花黄色素90mg、丹参素10mg的冻干粉针。
制备例4制备由红花黄色素和丹参素组成的冻干粉针在洁净条件下,取红花黄色素10g、丹参素90g,溶于1000ml注射用水,搅拌溶解,超滤,得到无热源的澄清液,按冻干粉针工艺冻干,制成含红花黄色素10mg、丹参素90mg的冻干粉针。
制备例5制备由红花黄色素和丹参素组成的冻干粉针在洁净条件下,取红花黄色素20g、丹参素80g,溶于1000ml注射用水,加入100g低分子右旋糖苷,搅拌溶解,超滤,得到无热源的澄清液,按冻干粉针工艺冻干,制成含红花黄色素20mg、丹参素80mg的冻干粉针。
制备例6制备由红花黄色素和丹参素组成的冻干粉针在洁净条件下,取红花黄色素80g、丹参素20g,溶于1000ml注射用水,加入100g低分子右旋糖苷,搅拌溶解,超滤,得到无热源的澄清液,按冻干粉针工艺冻干,制成含红花黄色素80mg、丹参素20mg的冻干粉针。
制备例7制备由红花黄色素和丹参素组成的冻干粉针在洁净条件下,取红花黄色素25g、丹参素75g,溶于1000ml注射用水,搅拌溶解,超滤,得到无热源的澄清液,按冻干粉针工艺冻干,制成含红花黄色素25mg、丹参素75mg的冻干粉针。
试验例1不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响红花黄色素、丹参素,按制备例2制备,组合物根据需要按比例配制。
红四氮唑美国Sigma公司产品,临用前用生理盐水配成4%溶液。
实验动物普通级SD大鼠,雄性,体重280g-350g,山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号鲁动质字200106005号。
(2)方法与结果动物随机分为假手术组(生理盐水),模型对照组(生理盐水),组合物A
红花黄色素(10mg/kg)+丹参素(0mg/kg),组合物B
红花黄色素(9mg/kg)+丹参素(1mg/kg),组合物C
红花黄色素(8mg/kg)+丹参素(2mg/kg),组合物D
红花黄色素(5mg/kg)+丹参素(5mg/kg),组合物E
红花黄色素(2mg/kg)+丹参素(8mg/kg),组合物F
红花黄色素(1mg/kg)+丹参素(9mg/kg),组合物G
红花黄色素(0mg/kg)+丹参素(10mg/kg)每组10只。禁食12小时后,水合氯醛(350mg/kg,i.p.)麻醉,分离右侧颈总动脉,夹闭颈内、颈总动脉,颈外动脉近心端及远心端结扎,中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线,将栓线(选用直径0.24mm尼龙线,长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内,遇轻微阻力时停止,插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口,并打开颈总动脉动脉夹,消毒缝合伤口,造成右侧大脑中动脉缺血模型;假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃~25℃进行)。术后各组动物静脉注射相应药物。24小时后按文献
刘小光,徐理纳,一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型,药学学报,1995,30662所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况,如双前肢对称伸向地面,计为0分,如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分,肘屈曲计为2分,肩内旋计为3分,既有腕屈曲和/或肘屈曲,又有肩内旋者,计为4分。(B)将动物置于平地面上,分别推双肩向对侧移动,检查阻力。如双侧阻力对等且有力,计为0分,如向手术对侧推动时阻力下降者,根据下降程度不同分为轻、中、重三度,分别计为1,2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上,观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1,2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者,计为1分。根据标准评分,满分为11分,分数越高,表示动物行为障碍越严重。
行为评分后处死大鼠,取脑,去掉嗅球、小脑和低位脑干,冠状切成5片,脑片用红四氮唑(TTC)染色,正常组织经染色后呈红色,梗塞组织呈白色,染色后照相,用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。
数据用x±SD表示,以组间F检验进行统计学处理。
结果如表1所示,缺血24小时后,模型组大鼠表现出明显的行为障碍,大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区,达到全脑的25%左右。不同配比的药物组合物(10mg/kg)对大鼠脑缺血均具有显著的保护作用(P<0.05或P<0.01)。剂量相等的条件下(10mg/kg),以红花黄色素和丹参素为主要活性成分的药物组合物抗脑缺血作用明显优于单用同剂量红花黄色素或丹参素(P<0.05),提示组合物中红花黄色素和丹参素具有协同作用。
表1 不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响
与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01。
与组合物A组比较#P<0.05与组合物G组比较△P<0.05试验例2不同剂量药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响(1)材料红花黄色素、丹参素按制备例1制备,组合物按比例配制。
红四氮唑美国Sigma公司产品,临用前用生理盐水配成4%溶液。
实验动物普通级SD大鼠,雄性,体重280g-350g,山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号鲁动质字200106005号。
(2)方法与结果动物随机分为假手术组(生理盐水),模型对照组(生理盐水),尼莫地平组(Nim,1.0mg/kg),组合物A组
红花黄色素(2.5mg/kg)+丹参素(2.5mg/kg),组合物B组
红花黄色素(5mg/kg)+丹参素(5mg/kg),组合物C组
红花黄色素(10mg/kg)+丹参素(10mg/kg),每组10只。禁食12小时后,按实验例1所示方法制作大鼠局部脑缺血模型并进行神经行为评分、脑片染色。
数据用x±SD表示,以组间F检验进行统计学处理。
结果如表2所示,不同剂量的药物组合物均在一定程度上改善了大鼠行为障碍、减少缺血面积。
表2 不同剂量药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响
与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
试验例3不同配比药物组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响(1)材料红花黄色素、丹参素按制备例2制备,组合物按比例配制。
氯化硝基四氮唑蓝(N-BT),由军事医学科学院药材供应站提供。
实验动物普通级Wistar大鼠,雄性,体重280g-350g,山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号鲁动质字200106005号。
(2)方法与结果动物随机分为假手术组(生理盐水),模型对照组(生理盐水),组合物A
红花黄色素(10mg/kg)+丹参素(0mg/kg),组合物B
红花黄色素(9mg/kg)+丹参素(1mg/kg),组合物C
红花黄色素(8mg/kg)+丹参素(2mg/kg),组合物D
红花黄色素(5mg/kg)+丹参素(5mg/kg),组合物E
红花黄色素(2mg/kg)+丹参素(8mg/kg),组合物F
红花黄色素(1mg/kg)+丹参素(9mg/kg),组合物G
红花黄色素(0mg/kg)+丹参素(10mg/kg)每组10只。禁食12小时后,ip乌拉坦(1.2g/kg)麻醉,测肢体II导联心电图。剪去左胸前皮毛,碘酒及酒精消毒,沿胸骨左缘1cm处,剪开胸壁肌肉及二条肋骨,迅速打开胸腔,暴露心脏,在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉,立即将心脏放回,排挤出胸腔空气,用止血钳闭合胸腔,造成大鼠急性心肌缺血模型。术后各组动物静脉注射相应药物。记录给药前及给药后1.5h、3h心电图,6h后取出心脏,以冷生理盐水洗净后,-20℃冰箱冷冻过夜。次日,将冷冻的心脏由结扎处至心尖部等厚切成5片,浸入新鲜配制的0.5%NBT磷酸缓冲液(pH 7.4)中。37℃水浴振摇10~15min。用滤纸吸干切片表面的染色液,分离染色部分和未染色部分,称重,记算梗死面积。梗死面积(%)=梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100%。
数据用x+SD表示,以组间F检验进行统计学处理。
结果如表3所示,缺血6小时后,大鼠心肌出现明显的灶状缺血区,达到25%左右。不同配比的药物组合物(10mg/kg)对大鼠心肌缺血均具有显著的保护作用(P<0.05或P<0.01)。组合物C、D、E与组合物A或G比较均有显著性差异(P<0.05),提示组合物中红花黄色素和丹参素具有协同作用。
表3 不同配比药物组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响
与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01。
与组合物A组比较#P<0.05。
与组合物G组比较△P<0.05。
试验例4不同剂量药物组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响(1)材料红花黄色素、丹参素按制备例2制备,组合物按比例配制。
心血丹(复方丹参)注射液贵州神奇制药有限公司。
氯化硝基四氮唑蓝(N-BT),由军事医学科学院药材供应站提供。
实验动物普通级Wistar大鼠,雄性,体重280g-350g,山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号鲁动质字200106005号。
(2)方法与结果动物随机分为假手术组(生理盐水),模型对照组(生理盐水),复方丹参注射液组(DS,10mg/kg),组合物A组
红花黄色素(2.5mg/kg)+丹参素(2.5mg/kg),组合物B组
红花黄色素(5mg/kg)+丹参素(5mg/kg),组合物C组
红花黄色素(10mg/kg)+丹参素(10mg/kg),每组10只。按实验例3所示方法制作大鼠心肌缺血模型并计算心肌缺血百分比。
结果如表4所示,不同剂量的药物组合物均在一定程度上降低由心肌缺血造成的肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积与模型组比较有显著性差异。
表4 红花黄色素、丹参素、组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响
与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
权利要求
1.药物组合物,由红花黄色素和丹参素组成,其重量比为1∶9~9∶1。
2.根据权利要求1所述的组合物,其比例优选为1∶4~4∶1。
3.根据权利要求1或2所述的组合物,丹参素还可以以金属盐的形式存在。
4.根据权利要求3所述的组合物,丹参素盐优选为钠盐。
5.根据权利要求1或2所述的组合物,红花黄色素优选采用水渗漉法提取,然后上大孔吸附树脂、聚酰胺柱或葡聚糖凝胶,洗脱而得。
6.根据权利要求1或2所述的组合物,丹参素优选采用水提后,上大孔树脂层析而得。
7.根据权利要求1或2所述的组合物,其活性成分的含量为50-200mg。
8.权利要求1-7任一所述的组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,该组合物在制备治疗或预防脑损伤、脑中风的药物中的应用。
10.根据权利要求8所述的应用,该组合物在制备治疗或预防冠心病、心绞痛、心肌缺血或心肌梗死的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了由丹参素和红花黄色素组成的药物组合物,本发明还提供了该药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用,具体是提供了该药物组合物在制备治疗或预防脑损伤、心肌缺血的药物中的应用。
文档编号A61P9/10GK1879614SQ200510043780
公开日2006年12月20日 申请日期2005年6月13日 优先权日2005年6月13日
发明者曲桂武, 马福禄, 田京伟, 李桂生 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司