用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂及其制造方法
专利名称：用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂及其制造方法
技术领域：
本发明涉及一种药品，特别涉及一种用于治疗骨质疏松症的药物及其制造方法。
背景技术：
骨质疏松症(OP)是一种随着人口年龄增大而出现的常见疾病，伴有骨脆性增高，易并发骨折。随着社会人口老龄化的来临，骨质疏松症以及骨质疏松性骨折发病率在逐渐增加，因此骨质疏松症对人类的健康构成严重威胁。
目前，骨质疏松症的治疗尚无根治之法；公认有效的雌激素替代疗法由于其导致生殖系统患肿瘤的风险增加，使得其临床应用受到限制；治疗骨质疏松症的西药疗程长、价格贵，且随着疗程的延长，副作用也逐渐明显；而较易被人们接受的某些中成药疗效不稳定，用药个体差异较大。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，而提出一种疗效稳定、副作用少且价格便宜的治疗骨质疏松症的健骨中药制剂及其制造方法。
与现有技术相比，本发明的中药以益气补肾为依据，讲究阴阳双补，采用续断以补肝肾，使该药不致太过滋腻；药效专而力宏，丸剂作用温和而效力持久，为补益和剂，适合长期服用；且所用药为常见药品，价格便宜。
本发明的目的可以通过采取以下技术措施来达到一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，所述制剂含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3-45％、鹿角胶3-45％和人参10-60％。
一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂的制造方法，分别将龟板胶、鹿角胶以适量水加热融化，除去药液中赋形剂后浓缩；并包括如下步骤a.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次煎煮时间为2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时后进行离心过滤；b.在步骤a得到的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时后离心过滤；c.将步骤a和步骤b得到的滤液混合，浓缩除去乙醇；
d.在步骤c得到的混合液体中加入龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，再浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
具体实施例方式
一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，所述制剂含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3-45％、鹿角胶3-45％和人参10-60％。
上述制剂含有龟板胶20％、鹿角胶20％和人参60％。
为得到较好的治疗效果，所述制剂的辅助组分还含有枸杞，该制剂中各组分含量为龟板胶3-15％、鹿角胶3-15％、人参10-60％和枸杞20-60％。
所述制剂的较好配比是龟板胶9％、鹿角胶9％、人参27％和枸杞55％。
为得到更好的治疗效果，所述制剂的辅助组分还含有川续断和淮山药，该制剂中各组分含量为龟板胶2-10％、鹿角胶2-10％、人参10-20％、枸杞20-30％、川续断20-30％和淮山药20-30％。
本发明药物的最佳配比是龟板胶4.5％、鹿角胶4.5％、人参13％、枸杞26％、川续断26％和淮山药26％。
本发明健骨中药制剂的制造方法包括如下所述的步骤a.分别将龟板胶、鹿角胶以适量水加热融化，除去药液中赋形剂后浓缩备用；b.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次煎煮时间为2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时后进行离心过滤；c.在步骤b得到的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时后离心过滤；d.将步骤b和步骤c得到的滤液混合，浓缩除去乙醇；e.在步骤d得到的混合液体中加入步骤a得到的龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
在上述制造方法中，步骤a也可以在步骤d之后进行。
所述辅助组分还含有枸杞。
所述辅助组还含有川续断和淮山药。
在一些应用例中，本发明采用如下配方各味药的重量配比是龟板胶250克、鹿角胶250克、人参750克、枸杞1500克、川续断1500克及淮山药1500克。
将具有上述重量配比的中药应用于临床，有关临床治疗效果详述如下。
一.骨骼成分与形态结构的改善通过对去势小鼠和去势大鼠模型(OVX)的研究，本发明健骨中药制剂可使骨灰重、钙含量和骨密度等指标达到与假手术组相当的水平，其对OVX模型骨量丢失的治疗作用与17β雌二醇、Premarin和Raloxifene等相当，且与给药剂量正相关。对于骨形态结构的研究，使用OVX骨质疏松模型的骨脱钙切片与骨不脱钙切片进行观察，并做骨形态计量学分析，如表1-4所示。
表1胫骨上段松质骨形态计量学静态参数结果，其中，％Tb.Ar代表骨小梁面积百分数，Tb.Th代表骨小梁厚度，Tb.N代表骨小梁数量，Tb.Sp代表骨小梁分离度。
表1胫骨上段松质骨形态计量学静态参数结果组别％Tb.Ar(％) Tb.Th Mcm Tb.N(#/mm) Tb.SpmcmSham Mean 27.6561.06 4.19181.0711SD±3.27 ±4.78 ±0.53 ±34.64OVX Mean 12.3855.58 1.73546.1610SD±3.16 ±6.90 ±0.42 ±141.63％-Sham -55.23**-8.97 -58.71**201.63**Herb Mean 18.0760.82 2.46376.6911SD±2.20 ±4.77 ±0.32 ±124.22％-Sham -34.65**-0.39 -41.29**108.04**％-OVX45.96**9.4342.20**-31.03**Premarin Mean 17.7861.64 2.23408.4510SD±3.12 ±6.19 ±0.44 ±158.82％-Sham -35.70**0.95-46.78**125.58**％-OVX43.62**10.09 28.90*-25.21％-Herb -1.601.35-9.35 8.43注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化，*P＜0.05；**P＜0.01。
胫骨中段皮质骨形态计量学静态参数结果见表2，其中，T.Ar表示骨组织总面积，Mr.Ar表示骨髓腔总面积，Ct.Ar表示皮质骨面积，％Ct.Ar表示皮质骨百分率。
表2胫骨中段皮质骨形态计量学静态参数结果组别 T.Armm2Mr.Armm2Ct.Armm2％Ct.Ar％Sham Mean0.291 0.054 0.237 82.5311 SD ±0.029 ±0.007 ±0.027±2.46OVXMean0.320 0.061 0.257 79.87
10 SD±0.028 ±0.006 ±0.026±1.90％-Sham 9.9*12.96*8.44 -3.22Herb Mean 0.3020.0530.249 82.7811 SD±0.030 ±0.009 ±0.032±2.09％-Sham 3.78 -1.855.06 0.30％-0VX-5.63-13.11*-3.11 3.64Premarin Mean 0.3120.0560.256 82.1010 SD±0.028 ±0.011 ±0.031 ±2.33％-Sham 7.22 3.70 8.02 -0.52％-OVX-2.50-8.20-0.39 2.79％-Herb -3.315.66 2.81 -0.82注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化*P＜0.05；**P＜0.01。
胫骨上段松质骨形态计量学动态参数结果见表3，其中，％L.Pm表示骨小梁荧光周长百分数，MAR表示矿化沉积率，BFR表示骨形成率(BFR/BS与BFR/BV反映骨形成率的不同方面)，Oc.N表示破骨细胞数量，Oc.N/Tb.Pm表示每毫米破骨细胞数。
表3胫骨上段松质骨形态计量学动态参数结果％L.Pm MAR BFR/BSBFR/BV Oc.No OC.N/Tb.Pm组别(％) mcm/d mcm/d*100 ％/year #/mm2#/mmSham Mean 6.07 0.74 5.45 45.8 3.04 0.2111 SD±1.32 ±0.09±1.36 ±10.48 ±0.53±0.03OVX Mean 8.94 0.82 8.13 63.01 6.67 0.5110 SD±2.02 ±0.13±1.98 ±15.38 ±1.29±0.09％-Sham 47.28**10.81 49.17**37.58**119.41**142.86**Herb Mean 6.57 0.8 6.05 52.62 3.41 0.1811 SD±2.07 ±0.06±1.88 ±25.98 ±1.10±0.04％-Sham 8.24 8.11 11.01 14.89 12.17 -14.29％-OVX-26.51*-2.44 -25.58*-16.49-48.88**-64.71**Premarin Mean 6.83 0.76 5.93 50.81 4.23 0.1910 SD±2.80 ±0.06±1.91 ±18.93 ±1.15±0.05％-Sham 12.522.70 8.81 10.94 39.14**-9.52％-OVX-23.60 -7.32 -27.06*-19.36-36.58**-62.75**％-Herb 3.96 -5.00 -1.98 -3.44 24.05 5.56注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化*P＜0.05；**P＜0.01。
胫骨中段皮质骨形态计量学动态参数结果见表4，其中，外膜面的骨形态计量学动态参数％P-L.Pm表示标记周长百分数，P-MAR表示骨矿化沉积率，P-BFR/BS表示骨形成率。内膜面的骨形态计量学动态参数％E-L.Pm表示标记周长百分数，E-MAR表示骨矿化沉积率，E-BFR/BS表示骨形成率，％Er.Pm表示骨吸收周长百分数。
表4胫骨中段皮质骨形态计量学动态参数结果Perloslum外膜面 Endosleum内膜面组别P-BFR/B％P-L.Pm P-MAR ％E-L.PmE-MAR E-BFR/BS ％Er.PmSSham Mean56.8 0.9661.86 24.10.096 1.49 2.2711 SD ±14.39 ±0.21 ±18.43 ±4.77 ±0.024 ±0.41 ±0.63OVX Mean75.42 1.3582.81 36.31 0.192.61 4.8610 SD ±16.72 ±0.33 ±20.37 ±7.38 ±0.031 ±0.69 ±1.13％-Sham 32.78*40.63**33.87*50.66**97.92**75.17**114.10**Herb Mean64.3 1.1 75.54 28.28 0.149 1.84 2.5911 SD ±15.46 ±0.35 ±17.60±6.50 ±0.028 ±0.53 ±0.87％-Sham 13.20 14.58 22.11 17.34 55.21**23.49 14.10％-OVX -14.74-18.52 -8.78 -22.12*-21.58**-29.50*-46.71**Premarin Mean73.04 1.3 80.07 32.25 0.177 2.23 2.9810 SD ±18.38 ±0.41 ±21.13±7.09 ±0.041 ±0.58 ±0.80％-Sham 28.59*35.42*29.44*33.82**84.38**49.66**31.28*％-OVX -3.16-3.70 -3.31 -11.18 -6.84 -14.56 -38.68**％-Herb 13.5918.18 6.00 14.04 18.79 21.20 15.06注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化*P＜0.05；**P＜0.01。
结果表明本健骨中药制剂明显改善动物模型的骨显微形态，使骨组织出现骨小梁增多，厚度增宽，间隙变窄，连接增多和排列更规则等力学结构好转的迹象，且与本健骨中药制剂剂量正相关。尤其研究显示本健骨中药制剂对骨显微形态结构的改善明显优于雌激素组，且这种优势不但体现在骨小梁的数量和厚度上，更重要的是反应在骨小梁的结构上，中药组较雌激素组具有更多的横向连接和较小的骨小梁间隙。且健骨中药制剂与Premarin都能抑制骨吸收与骨形成，降低骨高转换率，总体上抑制骨吸收大于骨形成，可以阻止去卵巢大鼠骨量的进一步丢失和骨结构的进一步退化，获得骨量增加、骨结构改善的疗效。实验还可以看出健骨中药制剂对骨量的改善与Premarin相当、对骨结构的改善优于Premarin、对成骨细胞数目的影响较对其活性的影响更为明显及在骨吸收和骨形成两方面对骨高转换状态的抑制效果较Premarin好。
二.骨骼生物力学功能的改善以OVX小鼠为骨质疏松模型进行研究，结果显示本发明健骨中药制剂、Raloxifene和17β雌二醇都可显著改善骨骼生物力学性能。但中药组在弹性载荷、弹性桡度、最大载荷等方面表现突出。本健骨中药制剂可使OVX小鼠模型的弹性载荷明显提高，甚至超过假手术组，同时在弹性桡度方面，中药组的改善是最好的。以OVX大鼠为模型进行研究，也显示类似结果。且本健骨中药制剂对生物力学指标的改善与其剂量正相关。各组大鼠的生物力学试验测定结果如表5及表6所示。
表5各组大鼠股骨中段三点弯曲试验测定结果比较Group Number 包埋点直径(mm) 最大弯曲力(N) 弯曲应力(Mpa)Sham 113.17±0.06 113.68±11.79 136.29±11.61OVX 103.21±0.07 90.27±8.00**105.17±14.46**Herb 113.15±0.07 104.73±11.17ΔΔ128.07±12.81ΔΔPremarin 103.16±0.09 107.63±10.82ΔΔ130.09±11.61ΔΔ注与Sham组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与OVX相比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表6各组大鼠股骨远端剪切试验测定结果比较Group Number 包埋点直径(mm) 最大剪切力(N) 剪切应力(Mpa)Sham 11 3.51±0.14 74.20±8.99 7.69±0.68OVX 10 3.60±0.17 58.96±9.40**5.78±0.80**Herb 11 3.52±0.26 68.57±6.93Δ7.08±0.69ΔΔPremarin 10 3.59±0.25 69.59±8.10Δ6.94±0.94*ΔΔ续表Group Number 弹性载荷(N) 弹性桡度(mm)弹性应力(Mpa)Sham 11 57.03±4.32 0.363±0.0615.91±0.39OVX 10 44.39±7.44**0.290±0.052**4.35±0.61**Herb 11 58.55±4.62ΔΔ0.379±0.066ΔΔ6.05±0.42ΔΔPremarin 10 53.34±6.77ΔΔ0.320±0.060ΔΔ☆5.32±0.56*ΔΔ☆☆注与Sham组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与OVX相比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与Herb组相比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。
通过表5和表6得出，健骨中药制剂对大鼠骨骼生物力学性能的改善与Premarin相当。与Premarin相比，对去卵巢大鼠股骨皮质骨整体生物力学性能有明显改善作用，特别是材料力学指标(弯曲应力)的改善较结构力学指标(最大弯曲力)更为明显，体现出在松质骨的有机成分和骨小梁结构方面可能有突出作用，而且Herb组在弹性桡度和弹性应力的改善方面优于Premarin组。
三.安全性及副反应考察经过长期临床检验，已进行过急性毒性实验，且通过观察药物对体重和子宫重量的影响以评价其副反应。研究发现健骨中药制剂组和Raloxifene组的体重增加较17β雌二醇组与空白对照组小。健骨中药制剂组和Raloxifene对OVX小鼠模型子宫重量增加程度很小，而17β雌二醇则对小鼠子宫有显著增生作用。在OVX大鼠模型上也观察到类似变化(请参阅表7)。
表7各组大鼠实验后子宫重量比较(单位克)组别数量 治疗后8周Sham 110.284±0.015OVX 100.121±0.017**Herb 110.164±0.019**ΔΔPremarin 100.204±0.023**ΔΔ☆☆注与Sham组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与OVX相比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与Herb组相比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。
实验结果表明，健骨中药制剂和Premarin都能在一定程度上纠正由雌激素水平下降引起的体重增加，且刺激子宫增生的作用很小，提示了该药物长期使用的安全性。
四.血清生化指标的观察在OVX小鼠模型中，本健骨中药制剂、Raloxifene和17β雌二醇均可降低血清碱性磷酸酶(ALP)水平，但以健骨中药制剂组作用最强，而血清钙、磷水平在各组中无明显差异。在OVX大鼠模型中，健骨中药制剂和Premarin均可在一定程度上降低血清ALP、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和骨钙素(BGP)水平，其效果与健骨中药制剂剂量正相关；健骨中药制剂组血清中胰岛素样生长因子I(IGP-I)水平显著高于空白对照组和Premarin组，而血清钙、磷水平在各组间无明显差异。另外，本健骨中药制剂可降低OVX模型血清总胆固醇(TC)、低密度蛋白(LDL)，且效果与Premarin相当，但其不会升高血清甘油三酯(TG)和高密度蛋白(HDL)。
五.对骨骼局部调节、效应分子影响的原位研究通过原位杂交在转录水平研究本健骨中药制剂对I型胶原基因和诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)基因表达的影响；通过免疫组化在翻译水平研究本健骨中药制剂对内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS)基因和iNOS基因表达的影响。本健骨中药制剂可强烈促进骨骼局部I型胶原的表达，阳性细胞数明显多于对照各组、且有更多成骨细胞向骨细胞转变，其对I型胶原基因表达促进作用强于Premarin；本健骨中药制剂显著促进骨骼局部eNOS基因的表达，显著抑制骨骼局部iNOS基因的表达，强于Premarin等雌激素，且本健骨中药制剂的以上作用都与剂量正相关。
六.本健骨中药制剂对离体培养成骨细胞的作用研究以本健骨中药制剂的超滤法及离子交换法提取物对成骨细胞株HOSTE-85进行研究。通过MIT法及3H-TdR同位素掺入法观察细胞生长及增殖情况，得出本健骨中药制剂提取物可剂量依赖性地促进HOSTE-85细胞株的增殖；并明显促进ALP、BGP的合成和释放。对细胞因子或氨基胍(AG)作用下功能活动较低下的细胞活性有一定的恢复作用。通过加入AG造成一氧化氮合成酶(NOS)表达过度抑制的低一氧化氮浓度细胞模型；通过TNF-α、IL-1β、IFN-γ等多种细胞因子造成高一氧化氮浓度的细胞模型。加入本健骨中药制剂提取物后，该提取物对NOS表达过度抑制的低一氧化氮浓度有较好的恢复作用，而对高表达量的NOS及其合成的一氧化氮作用不明显。通过免疫组化对Bel-2基因、Bax基因的表达进行研究，发现本健骨中药制剂提取物可促进HOS TE-85细胞Bel-2基因的表达而抑制Bax基因的表达，从而促进成骨细胞的功能活动。通过双标记流式细胞仪侧向散射光双参数总图分析，表明本健骨中药制剂提取物可抑制成骨细胞的凋亡，延长其功能活动时间。本健骨中药制剂含药血清对人成骨细胞原代培养细胞的研究，发现含药血清可促进体外培养成骨细胞的增殖；细胞形态观察表明本健骨中药制剂含药血清可提高细胞S周期比率及细胞增殖指数，减低细胞凋亡比率，以上作用与Premarin相当，并与浓度有一定程度相关。在功能方面，含药血清可提高成骨细胞ALP、BGP的释放和矿化结节的形成。其作用与含药血清浓度正相关。通过对Procollagen IαlmRNA和IGF-ImRNA的定量分析，发现本健骨中药制剂含药血清还能显著促进以上两种基因的表达。其作用与Premarin相当，与浓度正相关。
通过临床观察，该用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂在治疗骨质疏松症上已取得良好的临床效果，改善骨碱性酸酶(BALP)、血清钙素(BGP)和血浆抗酒石酸盐酶(TRAP)等骨代谢指标，减轻疼痛等临床症状，提高患者生存质量。
权利要求
1.一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3-45％、鹿角胶3-45％和人参10-60％。
2.根据权利要求1所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有龟板胶20％、鹿角胶20％和人参60％。
3.根据权利要求1所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂的辅助组分还含有枸杞，该制剂中各组分含量为龟板胶3-15％、鹿角胶3-15％、人参10-60％和枸杞20-60％。
4.根据权利要求3所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有龟板胶9％、鹿角胶9％、人参27％和枸杞55％。
5.根据权利要求4所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂的辅助组分还含有川续断和淮山药，该制剂中各组分含量为龟板胶2-10％、鹿角胶2-10％、人参10-20％、枸杞20-30％、川续断20-30％和淮山药20-30％。
6.根据权利要求5所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有龟板胶4.5％、鹿角胶4.5％、人参13％、枸杞26％、川续断26％和淮山药26％。
7.一种制造如权利要求1所述的健骨中药制剂的方法，其特征在于分别将龟板胶、鹿角胶以适量水加热融化，除去药液中赋形剂后浓缩；并包括如下步骤a.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次煎煮时间为2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时后进行离心过滤；b.在步骤a得到的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时后离心过滤；c.将步骤a和步骤b得到的滤液混合，浓缩除去乙醇；d.在步骤c得到的混合液体中加入龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，再浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
8.根据权利要求7所述的健骨中药制剂的制造方法，其特征在于所述辅助组分还含有枸杞。
9.根据权利要求8所述的健骨中药制剂的制造方法，其特征在于所述辅助组分还含有川续断和淮山药。
全文摘要
一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3－45％、鹿角胶3－45％和人参10－60％。其制造方法是分别将龟板胶、鹿角胶适量水加热融化，除去赋形剂浓缩；并包括如下步骤a.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次时间2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时离心过滤；b.在a的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时离心过滤；c.将a和b的滤液混合，浓缩除乙醇；d.在c的混合液体加龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
文档编号A61K35/56GK1569034SQ0313994
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月22日 优先权日2003年7月22日
发明者肖劲夫 申请人:肖劲夫
技术领域：
本发明涉及一种药品，特别涉及一种用于治疗骨质疏松症的药物及其制造方法。
背景技术：
骨质疏松症(OP)是一种随着人口年龄增大而出现的常见疾病，伴有骨脆性增高，易并发骨折。随着社会人口老龄化的来临，骨质疏松症以及骨质疏松性骨折发病率在逐渐增加，因此骨质疏松症对人类的健康构成严重威胁。
目前，骨质疏松症的治疗尚无根治之法；公认有效的雌激素替代疗法由于其导致生殖系统患肿瘤的风险增加，使得其临床应用受到限制；治疗骨质疏松症的西药疗程长、价格贵，且随着疗程的延长，副作用也逐渐明显；而较易被人们接受的某些中成药疗效不稳定，用药个体差异较大。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，而提出一种疗效稳定、副作用少且价格便宜的治疗骨质疏松症的健骨中药制剂及其制造方法。
与现有技术相比，本发明的中药以益气补肾为依据，讲究阴阳双补，采用续断以补肝肾，使该药不致太过滋腻；药效专而力宏，丸剂作用温和而效力持久，为补益和剂，适合长期服用；且所用药为常见药品，价格便宜。
本发明的目的可以通过采取以下技术措施来达到一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，所述制剂含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3-45％、鹿角胶3-45％和人参10-60％。
一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂的制造方法，分别将龟板胶、鹿角胶以适量水加热融化，除去药液中赋形剂后浓缩；并包括如下步骤a.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次煎煮时间为2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时后进行离心过滤；b.在步骤a得到的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时后离心过滤；c.将步骤a和步骤b得到的滤液混合，浓缩除去乙醇；
d.在步骤c得到的混合液体中加入龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，再浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
具体实施例方式
一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，所述制剂含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3-45％、鹿角胶3-45％和人参10-60％。
上述制剂含有龟板胶20％、鹿角胶20％和人参60％。
为得到较好的治疗效果，所述制剂的辅助组分还含有枸杞，该制剂中各组分含量为龟板胶3-15％、鹿角胶3-15％、人参10-60％和枸杞20-60％。
所述制剂的较好配比是龟板胶9％、鹿角胶9％、人参27％和枸杞55％。
为得到更好的治疗效果，所述制剂的辅助组分还含有川续断和淮山药，该制剂中各组分含量为龟板胶2-10％、鹿角胶2-10％、人参10-20％、枸杞20-30％、川续断20-30％和淮山药20-30％。
本发明药物的最佳配比是龟板胶4.5％、鹿角胶4.5％、人参13％、枸杞26％、川续断26％和淮山药26％。
本发明健骨中药制剂的制造方法包括如下所述的步骤a.分别将龟板胶、鹿角胶以适量水加热融化，除去药液中赋形剂后浓缩备用；b.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次煎煮时间为2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时后进行离心过滤；c.在步骤b得到的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时后离心过滤；d.将步骤b和步骤c得到的滤液混合，浓缩除去乙醇；e.在步骤d得到的混合液体中加入步骤a得到的龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
在上述制造方法中，步骤a也可以在步骤d之后进行。
所述辅助组分还含有枸杞。
所述辅助组还含有川续断和淮山药。
在一些应用例中，本发明采用如下配方各味药的重量配比是龟板胶250克、鹿角胶250克、人参750克、枸杞1500克、川续断1500克及淮山药1500克。
将具有上述重量配比的中药应用于临床，有关临床治疗效果详述如下。
一.骨骼成分与形态结构的改善通过对去势小鼠和去势大鼠模型(OVX)的研究，本发明健骨中药制剂可使骨灰重、钙含量和骨密度等指标达到与假手术组相当的水平，其对OVX模型骨量丢失的治疗作用与17β雌二醇、Premarin和Raloxifene等相当，且与给药剂量正相关。对于骨形态结构的研究，使用OVX骨质疏松模型的骨脱钙切片与骨不脱钙切片进行观察，并做骨形态计量学分析，如表1-4所示。
表1胫骨上段松质骨形态计量学静态参数结果，其中，％Tb.Ar代表骨小梁面积百分数，Tb.Th代表骨小梁厚度，Tb.N代表骨小梁数量，Tb.Sp代表骨小梁分离度。
表1胫骨上段松质骨形态计量学静态参数结果组别％Tb.Ar(％) Tb.Th Mcm Tb.N(#/mm) Tb.SpmcmSham Mean 27.6561.06 4.19181.0711SD±3.27 ±4.78 ±0.53 ±34.64OVX Mean 12.3855.58 1.73546.1610SD±3.16 ±6.90 ±0.42 ±141.63％-Sham -55.23**-8.97 -58.71**201.63**Herb Mean 18.0760.82 2.46376.6911SD±2.20 ±4.77 ±0.32 ±124.22％-Sham -34.65**-0.39 -41.29**108.04**％-OVX45.96**9.4342.20**-31.03**Premarin Mean 17.7861.64 2.23408.4510SD±3.12 ±6.19 ±0.44 ±158.82％-Sham -35.70**0.95-46.78**125.58**％-OVX43.62**10.09 28.90*-25.21％-Herb -1.601.35-9.35 8.43注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化，*P＜0.05；**P＜0.01。
胫骨中段皮质骨形态计量学静态参数结果见表2，其中，T.Ar表示骨组织总面积，Mr.Ar表示骨髓腔总面积，Ct.Ar表示皮质骨面积，％Ct.Ar表示皮质骨百分率。
表2胫骨中段皮质骨形态计量学静态参数结果组别 T.Armm2Mr.Armm2Ct.Armm2％Ct.Ar％Sham Mean0.291 0.054 0.237 82.5311 SD ±0.029 ±0.007 ±0.027±2.46OVXMean0.320 0.061 0.257 79.87
10 SD±0.028 ±0.006 ±0.026±1.90％-Sham 9.9*12.96*8.44 -3.22Herb Mean 0.3020.0530.249 82.7811 SD±0.030 ±0.009 ±0.032±2.09％-Sham 3.78 -1.855.06 0.30％-0VX-5.63-13.11*-3.11 3.64Premarin Mean 0.3120.0560.256 82.1010 SD±0.028 ±0.011 ±0.031 ±2.33％-Sham 7.22 3.70 8.02 -0.52％-OVX-2.50-8.20-0.39 2.79％-Herb -3.315.66 2.81 -0.82注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化*P＜0.05；**P＜0.01。
胫骨上段松质骨形态计量学动态参数结果见表3，其中，％L.Pm表示骨小梁荧光周长百分数，MAR表示矿化沉积率，BFR表示骨形成率(BFR/BS与BFR/BV反映骨形成率的不同方面)，Oc.N表示破骨细胞数量，Oc.N/Tb.Pm表示每毫米破骨细胞数。
表3胫骨上段松质骨形态计量学动态参数结果％L.Pm MAR BFR/BSBFR/BV Oc.No OC.N/Tb.Pm组别(％) mcm/d mcm/d*100 ％/year #/mm2#/mmSham Mean 6.07 0.74 5.45 45.8 3.04 0.2111 SD±1.32 ±0.09±1.36 ±10.48 ±0.53±0.03OVX Mean 8.94 0.82 8.13 63.01 6.67 0.5110 SD±2.02 ±0.13±1.98 ±15.38 ±1.29±0.09％-Sham 47.28**10.81 49.17**37.58**119.41**142.86**Herb Mean 6.57 0.8 6.05 52.62 3.41 0.1811 SD±2.07 ±0.06±1.88 ±25.98 ±1.10±0.04％-Sham 8.24 8.11 11.01 14.89 12.17 -14.29％-OVX-26.51*-2.44 -25.58*-16.49-48.88**-64.71**Premarin Mean 6.83 0.76 5.93 50.81 4.23 0.1910 SD±2.80 ±0.06±1.91 ±18.93 ±1.15±0.05％-Sham 12.522.70 8.81 10.94 39.14**-9.52％-OVX-23.60 -7.32 -27.06*-19.36-36.58**-62.75**％-Herb 3.96 -5.00 -1.98 -3.44 24.05 5.56注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化*P＜0.05；**P＜0.01。
胫骨中段皮质骨形态计量学动态参数结果见表4，其中，外膜面的骨形态计量学动态参数％P-L.Pm表示标记周长百分数，P-MAR表示骨矿化沉积率，P-BFR/BS表示骨形成率。内膜面的骨形态计量学动态参数％E-L.Pm表示标记周长百分数，E-MAR表示骨矿化沉积率，E-BFR/BS表示骨形成率，％Er.Pm表示骨吸收周长百分数。
表4胫骨中段皮质骨形态计量学动态参数结果Perloslum外膜面 Endosleum内膜面组别P-BFR/B％P-L.Pm P-MAR ％E-L.PmE-MAR E-BFR/BS ％Er.PmSSham Mean56.8 0.9661.86 24.10.096 1.49 2.2711 SD ±14.39 ±0.21 ±18.43 ±4.77 ±0.024 ±0.41 ±0.63OVX Mean75.42 1.3582.81 36.31 0.192.61 4.8610 SD ±16.72 ±0.33 ±20.37 ±7.38 ±0.031 ±0.69 ±1.13％-Sham 32.78*40.63**33.87*50.66**97.92**75.17**114.10**Herb Mean64.3 1.1 75.54 28.28 0.149 1.84 2.5911 SD ±15.46 ±0.35 ±17.60±6.50 ±0.028 ±0.53 ±0.87％-Sham 13.20 14.58 22.11 17.34 55.21**23.49 14.10％-OVX -14.74-18.52 -8.78 -22.12*-21.58**-29.50*-46.71**Premarin Mean73.04 1.3 80.07 32.25 0.177 2.23 2.9810 SD ±18.38 ±0.41 ±21.13±7.09 ±0.041 ±0.58 ±0.80％-Sham 28.59*35.42*29.44*33.82**84.38**49.66**31.28*％-OVX -3.16-3.70 -3.31 -11.18 -6.84 -14.56 -38.68**％-Herb 13.5918.18 6.00 14.04 18.79 21.20 15.06注％-Sham与Sham组比较的百分变化；％-OVX与OVX组比较的百分变化；％-Herb与Herb组比较的百分变化*P＜0.05；**P＜0.01。
结果表明本健骨中药制剂明显改善动物模型的骨显微形态，使骨组织出现骨小梁增多，厚度增宽，间隙变窄，连接增多和排列更规则等力学结构好转的迹象，且与本健骨中药制剂剂量正相关。尤其研究显示本健骨中药制剂对骨显微形态结构的改善明显优于雌激素组，且这种优势不但体现在骨小梁的数量和厚度上，更重要的是反应在骨小梁的结构上，中药组较雌激素组具有更多的横向连接和较小的骨小梁间隙。且健骨中药制剂与Premarin都能抑制骨吸收与骨形成，降低骨高转换率，总体上抑制骨吸收大于骨形成，可以阻止去卵巢大鼠骨量的进一步丢失和骨结构的进一步退化，获得骨量增加、骨结构改善的疗效。实验还可以看出健骨中药制剂对骨量的改善与Premarin相当、对骨结构的改善优于Premarin、对成骨细胞数目的影响较对其活性的影响更为明显及在骨吸收和骨形成两方面对骨高转换状态的抑制效果较Premarin好。
二.骨骼生物力学功能的改善以OVX小鼠为骨质疏松模型进行研究，结果显示本发明健骨中药制剂、Raloxifene和17β雌二醇都可显著改善骨骼生物力学性能。但中药组在弹性载荷、弹性桡度、最大载荷等方面表现突出。本健骨中药制剂可使OVX小鼠模型的弹性载荷明显提高，甚至超过假手术组，同时在弹性桡度方面，中药组的改善是最好的。以OVX大鼠为模型进行研究，也显示类似结果。且本健骨中药制剂对生物力学指标的改善与其剂量正相关。各组大鼠的生物力学试验测定结果如表5及表6所示。
表5各组大鼠股骨中段三点弯曲试验测定结果比较Group Number 包埋点直径(mm) 最大弯曲力(N) 弯曲应力(Mpa)Sham 113.17±0.06 113.68±11.79 136.29±11.61OVX 103.21±0.07 90.27±8.00**105.17±14.46**Herb 113.15±0.07 104.73±11.17ΔΔ128.07±12.81ΔΔPremarin 103.16±0.09 107.63±10.82ΔΔ130.09±11.61ΔΔ注与Sham组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与OVX相比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表6各组大鼠股骨远端剪切试验测定结果比较Group Number 包埋点直径(mm) 最大剪切力(N) 剪切应力(Mpa)Sham 11 3.51±0.14 74.20±8.99 7.69±0.68OVX 10 3.60±0.17 58.96±9.40**5.78±0.80**Herb 11 3.52±0.26 68.57±6.93Δ7.08±0.69ΔΔPremarin 10 3.59±0.25 69.59±8.10Δ6.94±0.94*ΔΔ续表Group Number 弹性载荷(N) 弹性桡度(mm)弹性应力(Mpa)Sham 11 57.03±4.32 0.363±0.0615.91±0.39OVX 10 44.39±7.44**0.290±0.052**4.35±0.61**Herb 11 58.55±4.62ΔΔ0.379±0.066ΔΔ6.05±0.42ΔΔPremarin 10 53.34±6.77ΔΔ0.320±0.060ΔΔ☆5.32±0.56*ΔΔ☆☆注与Sham组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与OVX相比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与Herb组相比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。
通过表5和表6得出，健骨中药制剂对大鼠骨骼生物力学性能的改善与Premarin相当。与Premarin相比，对去卵巢大鼠股骨皮质骨整体生物力学性能有明显改善作用，特别是材料力学指标(弯曲应力)的改善较结构力学指标(最大弯曲力)更为明显，体现出在松质骨的有机成分和骨小梁结构方面可能有突出作用，而且Herb组在弹性桡度和弹性应力的改善方面优于Premarin组。
三.安全性及副反应考察经过长期临床检验，已进行过急性毒性实验，且通过观察药物对体重和子宫重量的影响以评价其副反应。研究发现健骨中药制剂组和Raloxifene组的体重增加较17β雌二醇组与空白对照组小。健骨中药制剂组和Raloxifene对OVX小鼠模型子宫重量增加程度很小，而17β雌二醇则对小鼠子宫有显著增生作用。在OVX大鼠模型上也观察到类似变化(请参阅表7)。
表7各组大鼠实验后子宫重量比较(单位克)组别数量 治疗后8周Sham 110.284±0.015OVX 100.121±0.017**Herb 110.164±0.019**ΔΔPremarin 100.204±0.023**ΔΔ☆☆注与Sham组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与OVX相比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与Herb组相比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。
实验结果表明，健骨中药制剂和Premarin都能在一定程度上纠正由雌激素水平下降引起的体重增加，且刺激子宫增生的作用很小，提示了该药物长期使用的安全性。
四.血清生化指标的观察在OVX小鼠模型中，本健骨中药制剂、Raloxifene和17β雌二醇均可降低血清碱性磷酸酶(ALP)水平，但以健骨中药制剂组作用最强，而血清钙、磷水平在各组中无明显差异。在OVX大鼠模型中，健骨中药制剂和Premarin均可在一定程度上降低血清ALP、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和骨钙素(BGP)水平，其效果与健骨中药制剂剂量正相关；健骨中药制剂组血清中胰岛素样生长因子I(IGP-I)水平显著高于空白对照组和Premarin组，而血清钙、磷水平在各组间无明显差异。另外，本健骨中药制剂可降低OVX模型血清总胆固醇(TC)、低密度蛋白(LDL)，且效果与Premarin相当，但其不会升高血清甘油三酯(TG)和高密度蛋白(HDL)。
五.对骨骼局部调节、效应分子影响的原位研究通过原位杂交在转录水平研究本健骨中药制剂对I型胶原基因和诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)基因表达的影响；通过免疫组化在翻译水平研究本健骨中药制剂对内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS)基因和iNOS基因表达的影响。本健骨中药制剂可强烈促进骨骼局部I型胶原的表达，阳性细胞数明显多于对照各组、且有更多成骨细胞向骨细胞转变，其对I型胶原基因表达促进作用强于Premarin；本健骨中药制剂显著促进骨骼局部eNOS基因的表达，显著抑制骨骼局部iNOS基因的表达，强于Premarin等雌激素，且本健骨中药制剂的以上作用都与剂量正相关。
六.本健骨中药制剂对离体培养成骨细胞的作用研究以本健骨中药制剂的超滤法及离子交换法提取物对成骨细胞株HOSTE-85进行研究。通过MIT法及3H-TdR同位素掺入法观察细胞生长及增殖情况，得出本健骨中药制剂提取物可剂量依赖性地促进HOSTE-85细胞株的增殖；并明显促进ALP、BGP的合成和释放。对细胞因子或氨基胍(AG)作用下功能活动较低下的细胞活性有一定的恢复作用。通过加入AG造成一氧化氮合成酶(NOS)表达过度抑制的低一氧化氮浓度细胞模型；通过TNF-α、IL-1β、IFN-γ等多种细胞因子造成高一氧化氮浓度的细胞模型。加入本健骨中药制剂提取物后，该提取物对NOS表达过度抑制的低一氧化氮浓度有较好的恢复作用，而对高表达量的NOS及其合成的一氧化氮作用不明显。通过免疫组化对Bel-2基因、Bax基因的表达进行研究，发现本健骨中药制剂提取物可促进HOS TE-85细胞Bel-2基因的表达而抑制Bax基因的表达，从而促进成骨细胞的功能活动。通过双标记流式细胞仪侧向散射光双参数总图分析，表明本健骨中药制剂提取物可抑制成骨细胞的凋亡，延长其功能活动时间。本健骨中药制剂含药血清对人成骨细胞原代培养细胞的研究，发现含药血清可促进体外培养成骨细胞的增殖；细胞形态观察表明本健骨中药制剂含药血清可提高细胞S周期比率及细胞增殖指数，减低细胞凋亡比率，以上作用与Premarin相当，并与浓度有一定程度相关。在功能方面，含药血清可提高成骨细胞ALP、BGP的释放和矿化结节的形成。其作用与含药血清浓度正相关。通过对Procollagen IαlmRNA和IGF-ImRNA的定量分析，发现本健骨中药制剂含药血清还能显著促进以上两种基因的表达。其作用与Premarin相当，与浓度正相关。
通过临床观察，该用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂在治疗骨质疏松症上已取得良好的临床效果，改善骨碱性酸酶(BALP)、血清钙素(BGP)和血浆抗酒石酸盐酶(TRAP)等骨代谢指标，减轻疼痛等临床症状，提高患者生存质量。
权利要求
1.一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3-45％、鹿角胶3-45％和人参10-60％。
2.根据权利要求1所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有龟板胶20％、鹿角胶20％和人参60％。
3.根据权利要求1所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂的辅助组分还含有枸杞，该制剂中各组分含量为龟板胶3-15％、鹿角胶3-15％、人参10-60％和枸杞20-60％。
4.根据权利要求3所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有龟板胶9％、鹿角胶9％、人参27％和枸杞55％。
5.根据权利要求4所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂的辅助组分还含有川续断和淮山药，该制剂中各组分含量为龟板胶2-10％、鹿角胶2-10％、人参10-20％、枸杞20-30％、川续断20-30％和淮山药20-30％。
6.根据权利要求5所述的健骨中药制剂，其特征在于所述制剂含有龟板胶4.5％、鹿角胶4.5％、人参13％、枸杞26％、川续断26％和淮山药26％。
7.一种制造如权利要求1所述的健骨中药制剂的方法，其特征在于分别将龟板胶、鹿角胶以适量水加热融化，除去药液中赋形剂后浓缩；并包括如下步骤a.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次煎煮时间为2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时后进行离心过滤；b.在步骤a得到的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时后离心过滤；c.将步骤a和步骤b得到的滤液混合，浓缩除去乙醇；d.在步骤c得到的混合液体中加入龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，再浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
8.根据权利要求7所述的健骨中药制剂的制造方法，其特征在于所述辅助组分还含有枸杞。
9.根据权利要求8所述的健骨中药制剂的制造方法，其特征在于所述辅助组分还含有川续断和淮山药。
全文摘要
一种用于治疗骨质疏松症的健骨中药制剂，含有作为主要组分的龟板胶和鹿角胶及作为辅助组分的人参，各组分含量为龟板胶3－45％、鹿角胶3－45％和人参10－60％。其制造方法是分别将龟板胶、鹿角胶适量水加热融化，除去赋形剂浓缩；并包括如下步骤a.分别将辅助组分用水煎煮三次，每次时间2小时，煎煮液过滤后混合，浓缩至相对密度为1.1至1.15时，40摄氏度搅拌条件下加入乙醇，使乙醇含量达40％，冷藏静置48小时离心过滤；b.在a的沉淀物中加入40％乙醇，冷藏静置24小时离心过滤；c.将a和b的滤液混合，浓缩除乙醇；d.在c的混合液体加龟板胶和鹿角胶的浓缩水溶液，浓缩至每毫升含有2克原生药流浸膏。
文档编号A61K35/56GK1569034SQ0313994
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月22日 优先权日2003年7月22日
发明者肖劲夫 申请人:肖劲夫
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