胶原水解物及其用途
胶原水解物及其用途
【专利摘要】本发明涉及胶原水解物及其用于治疗和/或预防脂肪团的用途。
【专利说明】胶原水解物及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及胶原水解物及其用于治疗和/或预防脂肪团的用途。
【背景技术】
[0002]脂肪团涉及皮肤性质的不合需要的改变且在外观上明显地在皮肤表面中形成凹陷。受影响的几乎仅为女性，不过随着年龄增加，涉及多至80%至98%的女性。脂肪团最主要在具有显著皮下脂肪组织的区域中，即在臀部、屁股、腹部、大腿和上臂上出现。
[0003]根据最近的研究，认为脂肪团的成因是真皮和皮下结缔组织中的特定改变，特别是由连接网状真皮到位于皮下脂肪组织下的肌肉的胶原纤维形成的隔膜的收缩。这总体上引起皮肤的弹性降低。
[0004]对于脂肪团的已知治疗特别是包括物理方法，例如淋巴引流、超声波或真空，不过这些通常并没有产生成功或至少没有产生持久的成功。局部使用化妆品例如乳膏或软膏也没有能够对脂肪团实现任何病原性治疗，因为在该现象中并不直接牵涉表皮的上皮层。
[0005]已知通过口服胶原水解物，可以在人类皮肤的健康方面实现有利的效果(参见V.Zague:“A new view concerning the effects of collagen hydrolysate intake on skinproperties (关于所摄入胶原水解物对皮肤性质的作用的新观点)”，在Arch.Dermatol.Res.2008(9)479中)。由于合适低分子量胶原肽的吸收能力和皮肤的良好灌注，所以口服 的胶原水解物的积聚在皮肤中以特别大的程度发生，浓度在摄取之后的约12至24小时的时间内处于最大值(参见，M.Watanabe-Kamiyama 等！“Absorption and effectiveness oforally administered low molecularweight collagen hydrolysate in rats (在大鼠中经口施用的低分子量胶原水解物的吸收和有效性)”，在J.Agric.Food Chem.2010 (58) 835中)。
【发明内容】
[0006]在此背景下，本发明提出病原性治疗和/或预防脂肪团的新方法，所述方法包括使用胶原水解物。
[0007]因此，本发明的一方面涉及作为用于治疗和/或预防脂肪团的活性成分的胶原水解物。
[0008]在临床试验中也已经显示，在施用胶原水解物之后，皮肤的弹性适度增加。该作用在超过50岁的女性中特别显著。较大的皮肤弹性使得脂肪团的严重性降低。
[0009]另外，多种体外研究已经显示，通过胶原水解物刺激真皮结缔组织的细胞外基质蛋白的合成。通过皮肤细胞(皮肤成纤维细胞)形成的这些蛋白质包括胶原(特别是I型)、弹性蛋白和蛋白多糖(例如，双糖链蛋白多糖、多官能蛋白聚糖和核心蛋白聚糖)。这些蛋白质以足够量合成，决定着皮肤的细胞外基质的形成和再生，这又是对真皮性质例如弹性、回弹性和水分调控至关重要的决定性因素。
[0010]在本发明的上下文中使用的胶原水解物有利地具有相对较低的分子量。优选至少90重量％的所述胶原水解物具有小于3，500Da的分子量，更优选至少45重量％具有小于l，500Da的分子量。已经发现可以用这种分子量特别低的组分实现更显著的效果。可以例如借助于凝胶渗透色谱法，使用由确定的胶原片段制成的校准用标准，非常精确且可重现地测定所述胶原水解物的分子量分布，其受相关极限值的影响。
[0011]根据本发明使用的胶原水解物的平均分子量(质量平均摩尔质量Mw)通常在约
I,700Da至约2，300Da范围内。
[0012]在本发明的一个优选的实施方式中，所述胶原水解物包含至少四种具有600Da至1，200Da的分子量的特征性肽。胶原水解物含有具有不同链长或分子量的肽，这些肽在所述胶原的蛋白质链分解时出现，其中取决于所述水解物的生产条件，这些肽的分子量分布可能显著不同。已经惊奇地发现具有上述性质的胶原水解物在合成基质蛋白质方面具有特别有利的作用，即比不含所述特征性肽的胶原水解物显示出明显更好的结果。
[0013]特别是借助于MALDI质谱，可以确定所述胶原水解物的特征性肽的存在，其中所述特征性肽在质谱上表现为峰。优选地，用借助于MALDI测定的质谱发现的分子量分布中，所述至少四种特征性肽具有与其周围强度相比较至少两倍、更优选至少四倍的强度。
[0014]在本发明的一个优选的实施方式中，所述胶原水解物包含620Da至690Da的肽、790Da至860Da的肽、980Da至1，050Da的肽和1，175Da至1，245Da的肽。所述胶原水解物还可以具有1，500Da至3，500Da的特征性肽。
[0015]优选地，所述胶原水解物具有12重量％或更高的羟基脯氨酸含量。通过脯氨酸的后转译羟基化形成的氨 基酸羟基脯氨酸仅出现在胶原中，使得在所述胶原水解物中高比例的羟基脯氨酸为广泛缺乏的其它结缔组织蛋白(例如，弹性蛋白和蛋白多糖)提供了度量，取决于生产方法，这些结缔组织蛋白的片段也可以以特定量包含在胶原水解物中。
[0016]有利的是，通过明胶的酶促水解生产所述胶原水解物。明胶包括变性的胶原，且借助于本领域普通技术人员已知的多种方法从多种动物物种的结缔组织或骨骼获得。在本发明的上下文中，作为胶原水解物用原料使用的明胶优选从特别是猪或牛的哺乳动物的皮肤中提取，不过也并不排除使用来自家禽的明胶。猪明胶、特别是猪皮明胶特别优选地作为原料。
[0017]通常借助于内切蛋白酶实施所述明胶的酶促水解且在本发明的情况下优选按次序使用多种内切蛋白酶(即，至少两种不同的内切蛋白酶)，由此相应地影响所得胶原水解物的氨基酸分布，且增加所述水解物的积极作用。
[0018]根据本发明的一个优选的实施方式，通过至少两种具有不同特异性的内切蛋白酶的连续作用生成所述胶原水解物，所述至少两种内切蛋白酶特别是至少两种不同的金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶，即在特定氨基酸之前或之后分解胶原分子的氨基酸序列的蛋白酶。有利地，所述金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶是如下的酶，该酶来自微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉和蜂蜜曲霉。
[0019]借助于选择合适的内切蛋白酶，不仅可以获得所述胶原水解物的特征性分子量分布，而且可以影响在所述水解物中获得的肽末端处的氨基酸的类型。在这方面，优选例如所述胶原水解物的至少50%的N-端氨基酸为疏水氨基酸，特别是丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
[0020]根据本发明的一个优选的实施方式，所述胶原水解物被提供成肠道施用，特别是口服形式。与局部施用的情况相比，在口服时，经血液循环实现所述胶原水解物向作用部位，即特别是皮肤成纤维细胞的更有效的传输。另外，该施用形式通常对于使用者明显更容易。
[0021]因为胶原水解物从在食品法规下批准的原料中提取，所以其可以在本发明的上下文中优选作为营养增补剂使用，以治疗和/或预防脂肪团。这样的营养增补剂可被确定为“营养品”或“口服美妆品”。
[0022]可以以几乎任何形式提供所述营养增补剂，所述形式例如为片剂、胶囊、糖衣丸、锭剂、药袋或凝胶或溶液(例如，在单安瓿中或在饮料中)。
[0023]可选地，所述胶原水解物可以包含在食品或高档食品项中，例如包含在糖果中或在用于制作饮料的速溶粉中。所述水解物因此可以在没有另外施力的情况下在正常营养的情况下(作为“功能性食品”)被使用者消耗。在这方面，特别有利的是所述胶原水解物基本没有味道。
[0024]有利的是,提供约1.5g至5g、优选约2g至3g、更优选约2.3g至2.7g的所述胶原水解物的每日摄入量。已经发现，通过口服该量的水解物，能够实现显著的效果，不能通过增加该日剂量而大幅增强该效果。
[0025]在根据本发明使用时，所述胶原水解物可以与对健康且特别是对皮肤健康具有有利作用的其它活性成分、尤其与具有抗氧化作用的活性成分组合。这样的活性成分优选选自维生素，特别是维生素C和E，矿物，ω-3脂肪酸，ω-6脂肪酸，ω-9脂肪酸，生物素，叶黄素，番茄红素，咖啡因，葡糖胺，软骨素，透明质酸，叶酸，氨基酸，泛醌-10，超氧化物歧化酶和得自蔷薇果、防臭木或绿茶的植物提取物。
[0026]在本发明的一个优选的实施方式中，所述胶原水解物的服用被提供成治疗和/或预防特别是超过50岁的女性且通常是绝经后期女性的脂肪团。在通常受脂肪团严重影响的该年龄组中，如由如下所述的临床试验所显示的，效果特别显著。
[0027]本发明还涉及治疗和/或预防患者的脂肪团的方法，所述方法包括特别是以口服形式施用胶原水解物至患者。
[0028]已经关于根据本发明的用途，特别是在所述胶原水解物的性质和施用剂量方面，描述了所述方法的优选实施方式。
[0029]本发明还涉及胶原水解物用于治疗和/或预防如下伸展疤痕的用途，该伸展疤痕处于特别是在孕妇中出现的所谓的妊娠伸展疤痕(妊娠纹)的形式。这些条纹的成因是由皮肤的严重拉伸引起的皮下结缔组织中的细小撕裂。类似于脂肪团，所述撕裂的出现也可以通过在施用胶原水解物的情况下增加皮肤弹性来抵消。
[0030]本发明的又一方面涉及胶原水解物用于治疗和/或预防由于由褥疮溃疡引起的压力产生的皮肤局部损伤、例如出现褥疮的用途。这涉及经受外部压力的皮肤，其不利作用可以通过增加皮肤的弹性来减少。【专利附图】
【附图说明】
[0031]现在将基于以下实施例并参考附图更详细地描述本发明的这种优点和其它优点，附图显示:
[0032]图1A至IC:关于对I型胶原、双糖链蛋白多糖或多功能蛋白聚糖的合成的刺激的图示；
[0033]图2Α和图2Β:关于在无毛小鼠中皮肤水分增加的图示；
[0034]图3:关于对CE蛋白的合成的刺激的图示；[0035]图4A至4C:多种胶原水解物的MALDI质谱；及
[0036]图5A和图5B:关于对I型胶原、核心蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖的合成的刺激的图示。
【具体实施方式】
[0037]实施例:
[0038]1.胶原水解物的生成和性质
[0039]为了生成用于本发明用途的胶原水解物，将浓度为20重量％至40重量％的猪皮明胶(A型,200g至250g Bloom)(干燥材料)的水溶液用作原料。通过微生物来源的两种不同的内切蛋白酶在50°C至60°C下连续作用120分钟至180分钟来酶促水解该明胶，其中使用来自枯草芽孢杆菌或来自解淀粉芽孢杆菌的内切蛋白酶作为第一酶，且使用来自地衣芽孢杆菌的内切蛋白酶作为第二酶。随后，使所述酶热失活且将溶液喷雾干燥。
[0040]可以借助于凝胶渗透色谱法使用以下参数测定所得胶原水解物的分子量分布:
[0041]静止相:TSK2000SWXL (Tosoh Bioscience GmbH(日本东曹股份有限公司))
[0042]流动相:0.4mol/l 磷酸二氢钠，ρΗ5.3
[0043]流速:0.5ml/ 分钟
[0044]校准用标准:确定的胶原-1型片段(弗赖伯格，FILK)
[0045]检测:UV检测器 Knauer K-2501，在 214nm 下
[0046]该测定产生该胶原水解物(在下文中称作低分子水解物)的分子量分布，如在下表1中所陈述的。出于比较目的，在表1中，还显示用相同方法测定的市售胶原水解物的分子量分布(在下文中称作闻分子水解物):
[0047]表1
[0048]
【权利要求】
1.胶原水解物，其作为用于治疗和/或预防脂肪团的活性成分。
2.根据权利要求1所述的胶原水解物，至少90重量％的所述胶原水解物具有小于3，500Da的分子量，优选至少45重量％的所述胶原水解物具有小于1，500Da的分子量。
3.根据权利要求1或2所述的胶原水解物，所述胶原水解物包含至少四种具有600Da至1，200Da的分子量的特征性肽。
4.根据权利要求3所述的胶原水解物，其中在借助于MALDI质谱发现的分子量分布中，所述至少四种特征性肽具有与其周围强度相比至少两倍、优选至少四倍的强度。
5.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，所述胶原水解物包含620Da至690Da 的肽、790Da 至 860Da 的肽、980Da 至 I, 050Da 的肽和 I, 175Da 至 I, 245Da 的肽。
6.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，所述胶原水解物还包含具有I, 500Da至3，500Da的分子量的特征性肽。
7.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，所述胶原水解物具有12重量％或更高的羟基脯氨酸含量。
8.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中通过明胶的酶促水解生产所述胶原水解物。
9.根据权利要 求8所述的胶原水解物，所述明胶为猪明胶，特别是猪皮明胶。
10.根据权利要求8或9所述的胶原水解物，其中经由具有不同特异性的至少两种内切蛋白酶、特别是至少两种不同金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶的连续作用生成所述胶原水解物。
11.根据权利要求10所述的胶原水解物，其中所述金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶选自如下的酶，该酶来自微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉和蜂蜜曲霉。
12.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物的至少50%的N-端氨基酸为疏水氨基酸，特别是丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
13.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物被提供成肠道使用、特别是口服。
14.根据权利要求13所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物为营养增补剂且特别是以片剂、胶囊、糖衣丸、锭剂、药袋、凝胶或溶液的形式存在。
15.根据权利要求13或14所述的胶原水解物，其中提供约1.5g至5g、优选约2g至3g、更优选约2.3g至2.7g的所述胶原水解物的每日摄入量。
16.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物与一种或多种另外的活性成分相组合，所述活性成分选自维生素、矿物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸、ω-9脂肪酸、生物素、叶黄素、番茄红素、咖啡因、葡糖胺、软骨素、透明质酸、叶酸、氨基酸、泛醌-10、超氧化物歧化酶和来自蔷薇果、防臭木或绿茶的植物提取物。
17.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物被提供成施用至超过50岁的女性，特别是绝经后期的女性。
18.胶原水解物，其作为用于治疗和/或预防伸展疤痕、特别是怀孕有关的伸展疤痕的活性成分。
【文档编号】A61K38/39GK104010697SQ201280058817
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2012年11月21日 优先权日:2011年11月29日
【发明者】汉斯-乌尔里希·弗雷希, 斯特芬·奥瑟尔, 斯特凡·豪斯曼斯 申请人:格利达股份公司
【专利摘要】本发明涉及胶原水解物及其用于治疗和/或预防脂肪团的用途。
【专利说明】胶原水解物及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及胶原水解物及其用于治疗和/或预防脂肪团的用途。
【背景技术】
[0002]脂肪团涉及皮肤性质的不合需要的改变且在外观上明显地在皮肤表面中形成凹陷。受影响的几乎仅为女性，不过随着年龄增加，涉及多至80%至98%的女性。脂肪团最主要在具有显著皮下脂肪组织的区域中，即在臀部、屁股、腹部、大腿和上臂上出现。
[0003]根据最近的研究，认为脂肪团的成因是真皮和皮下结缔组织中的特定改变，特别是由连接网状真皮到位于皮下脂肪组织下的肌肉的胶原纤维形成的隔膜的收缩。这总体上引起皮肤的弹性降低。
[0004]对于脂肪团的已知治疗特别是包括物理方法，例如淋巴引流、超声波或真空，不过这些通常并没有产生成功或至少没有产生持久的成功。局部使用化妆品例如乳膏或软膏也没有能够对脂肪团实现任何病原性治疗，因为在该现象中并不直接牵涉表皮的上皮层。
[0005]已知通过口服胶原水解物，可以在人类皮肤的健康方面实现有利的效果(参见V.Zague:“A new view concerning the effects of collagen hydrolysate intake on skinproperties (关于所摄入胶原水解物对皮肤性质的作用的新观点)”，在Arch.Dermatol.Res.2008(9)479中)。由于合适低分子量胶原肽的吸收能力和皮肤的良好灌注，所以口服 的胶原水解物的积聚在皮肤中以特别大的程度发生，浓度在摄取之后的约12至24小时的时间内处于最大值(参见，M.Watanabe-Kamiyama 等！“Absorption and effectiveness oforally administered low molecularweight collagen hydrolysate in rats (在大鼠中经口施用的低分子量胶原水解物的吸收和有效性)”，在J.Agric.Food Chem.2010 (58) 835中)。
【发明内容】
[0006]在此背景下，本发明提出病原性治疗和/或预防脂肪团的新方法，所述方法包括使用胶原水解物。
[0007]因此，本发明的一方面涉及作为用于治疗和/或预防脂肪团的活性成分的胶原水解物。
[0008]在临床试验中也已经显示，在施用胶原水解物之后，皮肤的弹性适度增加。该作用在超过50岁的女性中特别显著。较大的皮肤弹性使得脂肪团的严重性降低。
[0009]另外，多种体外研究已经显示，通过胶原水解物刺激真皮结缔组织的细胞外基质蛋白的合成。通过皮肤细胞(皮肤成纤维细胞)形成的这些蛋白质包括胶原(特别是I型)、弹性蛋白和蛋白多糖(例如，双糖链蛋白多糖、多官能蛋白聚糖和核心蛋白聚糖)。这些蛋白质以足够量合成，决定着皮肤的细胞外基质的形成和再生，这又是对真皮性质例如弹性、回弹性和水分调控至关重要的决定性因素。
[0010]在本发明的上下文中使用的胶原水解物有利地具有相对较低的分子量。优选至少90重量％的所述胶原水解物具有小于3，500Da的分子量，更优选至少45重量％具有小于l，500Da的分子量。已经发现可以用这种分子量特别低的组分实现更显著的效果。可以例如借助于凝胶渗透色谱法，使用由确定的胶原片段制成的校准用标准，非常精确且可重现地测定所述胶原水解物的分子量分布，其受相关极限值的影响。
[0011]根据本发明使用的胶原水解物的平均分子量(质量平均摩尔质量Mw)通常在约
I,700Da至约2，300Da范围内。
[0012]在本发明的一个优选的实施方式中，所述胶原水解物包含至少四种具有600Da至1，200Da的分子量的特征性肽。胶原水解物含有具有不同链长或分子量的肽，这些肽在所述胶原的蛋白质链分解时出现，其中取决于所述水解物的生产条件，这些肽的分子量分布可能显著不同。已经惊奇地发现具有上述性质的胶原水解物在合成基质蛋白质方面具有特别有利的作用，即比不含所述特征性肽的胶原水解物显示出明显更好的结果。
[0013]特别是借助于MALDI质谱，可以确定所述胶原水解物的特征性肽的存在，其中所述特征性肽在质谱上表现为峰。优选地，用借助于MALDI测定的质谱发现的分子量分布中，所述至少四种特征性肽具有与其周围强度相比较至少两倍、更优选至少四倍的强度。
[0014]在本发明的一个优选的实施方式中，所述胶原水解物包含620Da至690Da的肽、790Da至860Da的肽、980Da至1，050Da的肽和1，175Da至1，245Da的肽。所述胶原水解物还可以具有1，500Da至3，500Da的特征性肽。
[0015]优选地，所述胶原水解物具有12重量％或更高的羟基脯氨酸含量。通过脯氨酸的后转译羟基化形成的氨 基酸羟基脯氨酸仅出现在胶原中，使得在所述胶原水解物中高比例的羟基脯氨酸为广泛缺乏的其它结缔组织蛋白(例如，弹性蛋白和蛋白多糖)提供了度量，取决于生产方法，这些结缔组织蛋白的片段也可以以特定量包含在胶原水解物中。
[0016]有利的是，通过明胶的酶促水解生产所述胶原水解物。明胶包括变性的胶原，且借助于本领域普通技术人员已知的多种方法从多种动物物种的结缔组织或骨骼获得。在本发明的上下文中，作为胶原水解物用原料使用的明胶优选从特别是猪或牛的哺乳动物的皮肤中提取，不过也并不排除使用来自家禽的明胶。猪明胶、特别是猪皮明胶特别优选地作为原料。
[0017]通常借助于内切蛋白酶实施所述明胶的酶促水解且在本发明的情况下优选按次序使用多种内切蛋白酶(即，至少两种不同的内切蛋白酶)，由此相应地影响所得胶原水解物的氨基酸分布，且增加所述水解物的积极作用。
[0018]根据本发明的一个优选的实施方式，通过至少两种具有不同特异性的内切蛋白酶的连续作用生成所述胶原水解物，所述至少两种内切蛋白酶特别是至少两种不同的金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶，即在特定氨基酸之前或之后分解胶原分子的氨基酸序列的蛋白酶。有利地，所述金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶是如下的酶，该酶来自微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉和蜂蜜曲霉。
[0019]借助于选择合适的内切蛋白酶，不仅可以获得所述胶原水解物的特征性分子量分布，而且可以影响在所述水解物中获得的肽末端处的氨基酸的类型。在这方面，优选例如所述胶原水解物的至少50%的N-端氨基酸为疏水氨基酸，特别是丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
[0020]根据本发明的一个优选的实施方式，所述胶原水解物被提供成肠道施用，特别是口服形式。与局部施用的情况相比，在口服时，经血液循环实现所述胶原水解物向作用部位，即特别是皮肤成纤维细胞的更有效的传输。另外，该施用形式通常对于使用者明显更容易。
[0021]因为胶原水解物从在食品法规下批准的原料中提取，所以其可以在本发明的上下文中优选作为营养增补剂使用，以治疗和/或预防脂肪团。这样的营养增补剂可被确定为“营养品”或“口服美妆品”。
[0022]可以以几乎任何形式提供所述营养增补剂，所述形式例如为片剂、胶囊、糖衣丸、锭剂、药袋或凝胶或溶液(例如，在单安瓿中或在饮料中)。
[0023]可选地，所述胶原水解物可以包含在食品或高档食品项中，例如包含在糖果中或在用于制作饮料的速溶粉中。所述水解物因此可以在没有另外施力的情况下在正常营养的情况下(作为“功能性食品”)被使用者消耗。在这方面，特别有利的是所述胶原水解物基本没有味道。
[0024]有利的是,提供约1.5g至5g、优选约2g至3g、更优选约2.3g至2.7g的所述胶原水解物的每日摄入量。已经发现，通过口服该量的水解物，能够实现显著的效果，不能通过增加该日剂量而大幅增强该效果。
[0025]在根据本发明使用时，所述胶原水解物可以与对健康且特别是对皮肤健康具有有利作用的其它活性成分、尤其与具有抗氧化作用的活性成分组合。这样的活性成分优选选自维生素，特别是维生素C和E，矿物，ω-3脂肪酸，ω-6脂肪酸，ω-9脂肪酸，生物素，叶黄素，番茄红素，咖啡因，葡糖胺，软骨素，透明质酸，叶酸，氨基酸，泛醌-10，超氧化物歧化酶和得自蔷薇果、防臭木或绿茶的植物提取物。
[0026]在本发明的一个优选的实施方式中，所述胶原水解物的服用被提供成治疗和/或预防特别是超过50岁的女性且通常是绝经后期女性的脂肪团。在通常受脂肪团严重影响的该年龄组中，如由如下所述的临床试验所显示的，效果特别显著。
[0027]本发明还涉及治疗和/或预防患者的脂肪团的方法，所述方法包括特别是以口服形式施用胶原水解物至患者。
[0028]已经关于根据本发明的用途，特别是在所述胶原水解物的性质和施用剂量方面，描述了所述方法的优选实施方式。
[0029]本发明还涉及胶原水解物用于治疗和/或预防如下伸展疤痕的用途，该伸展疤痕处于特别是在孕妇中出现的所谓的妊娠伸展疤痕(妊娠纹)的形式。这些条纹的成因是由皮肤的严重拉伸引起的皮下结缔组织中的细小撕裂。类似于脂肪团，所述撕裂的出现也可以通过在施用胶原水解物的情况下增加皮肤弹性来抵消。
[0030]本发明的又一方面涉及胶原水解物用于治疗和/或预防由于由褥疮溃疡引起的压力产生的皮肤局部损伤、例如出现褥疮的用途。这涉及经受外部压力的皮肤，其不利作用可以通过增加皮肤的弹性来减少。【专利附图】
【附图说明】
[0031]现在将基于以下实施例并参考附图更详细地描述本发明的这种优点和其它优点，附图显示:
[0032]图1A至IC:关于对I型胶原、双糖链蛋白多糖或多功能蛋白聚糖的合成的刺激的图示；
[0033]图2Α和图2Β:关于在无毛小鼠中皮肤水分增加的图示；
[0034]图3:关于对CE蛋白的合成的刺激的图示；[0035]图4A至4C:多种胶原水解物的MALDI质谱；及
[0036]图5A和图5B:关于对I型胶原、核心蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖的合成的刺激的图示。
【具体实施方式】
[0037]实施例:
[0038]1.胶原水解物的生成和性质
[0039]为了生成用于本发明用途的胶原水解物，将浓度为20重量％至40重量％的猪皮明胶(A型,200g至250g Bloom)(干燥材料)的水溶液用作原料。通过微生物来源的两种不同的内切蛋白酶在50°C至60°C下连续作用120分钟至180分钟来酶促水解该明胶，其中使用来自枯草芽孢杆菌或来自解淀粉芽孢杆菌的内切蛋白酶作为第一酶，且使用来自地衣芽孢杆菌的内切蛋白酶作为第二酶。随后，使所述酶热失活且将溶液喷雾干燥。
[0040]可以借助于凝胶渗透色谱法使用以下参数测定所得胶原水解物的分子量分布:
[0041]静止相:TSK2000SWXL (Tosoh Bioscience GmbH(日本东曹股份有限公司))
[0042]流动相:0.4mol/l 磷酸二氢钠，ρΗ5.3
[0043]流速:0.5ml/ 分钟
[0044]校准用标准:确定的胶原-1型片段(弗赖伯格，FILK)
[0045]检测:UV检测器 Knauer K-2501，在 214nm 下
[0046]该测定产生该胶原水解物(在下文中称作低分子水解物)的分子量分布，如在下表1中所陈述的。出于比较目的，在表1中，还显示用相同方法测定的市售胶原水解物的分子量分布(在下文中称作闻分子水解物):
[0047]表1
[0048]
【权利要求】
1.胶原水解物，其作为用于治疗和/或预防脂肪团的活性成分。
2.根据权利要求1所述的胶原水解物，至少90重量％的所述胶原水解物具有小于3，500Da的分子量，优选至少45重量％的所述胶原水解物具有小于1，500Da的分子量。
3.根据权利要求1或2所述的胶原水解物，所述胶原水解物包含至少四种具有600Da至1，200Da的分子量的特征性肽。
4.根据权利要求3所述的胶原水解物，其中在借助于MALDI质谱发现的分子量分布中，所述至少四种特征性肽具有与其周围强度相比至少两倍、优选至少四倍的强度。
5.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，所述胶原水解物包含620Da至690Da 的肽、790Da 至 860Da 的肽、980Da 至 I, 050Da 的肽和 I, 175Da 至 I, 245Da 的肽。
6.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，所述胶原水解物还包含具有I, 500Da至3，500Da的分子量的特征性肽。
7.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，所述胶原水解物具有12重量％或更高的羟基脯氨酸含量。
8.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中通过明胶的酶促水解生产所述胶原水解物。
9.根据权利要 求8所述的胶原水解物，所述明胶为猪明胶，特别是猪皮明胶。
10.根据权利要求8或9所述的胶原水解物，其中经由具有不同特异性的至少两种内切蛋白酶、特别是至少两种不同金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶的连续作用生成所述胶原水解物。
11.根据权利要求10所述的胶原水解物，其中所述金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶选自如下的酶，该酶来自微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉和蜂蜜曲霉。
12.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物的至少50%的N-端氨基酸为疏水氨基酸，特别是丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
13.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物被提供成肠道使用、特别是口服。
14.根据权利要求13所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物为营养增补剂且特别是以片剂、胶囊、糖衣丸、锭剂、药袋、凝胶或溶液的形式存在。
15.根据权利要求13或14所述的胶原水解物，其中提供约1.5g至5g、优选约2g至3g、更优选约2.3g至2.7g的所述胶原水解物的每日摄入量。
16.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物与一种或多种另外的活性成分相组合，所述活性成分选自维生素、矿物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸、ω-9脂肪酸、生物素、叶黄素、番茄红素、咖啡因、葡糖胺、软骨素、透明质酸、叶酸、氨基酸、泛醌-10、超氧化物歧化酶和来自蔷薇果、防臭木或绿茶的植物提取物。
17.根据前述权利要求中的一项所述的胶原水解物，其中所述胶原水解物被提供成施用至超过50岁的女性，特别是绝经后期的女性。
18.胶原水解物，其作为用于治疗和/或预防伸展疤痕、特别是怀孕有关的伸展疤痕的活性成分。
【文档编号】A61K38/39GK104010697SQ201280058817
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2012年11月21日 优先权日:2011年11月29日
【发明者】汉斯-乌尔里希·弗雷希, 斯特芬·奥瑟尔, 斯特凡·豪斯曼斯 申请人:格利达股份公司
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