表鬼臼毒素的(多)氨基烷基氨基乙酰胺衍生物，它们的制备方法和它们在治疗中作为抗...的制作方法
专利名称：表鬼臼毒素的(多)氨基烷基氨基乙酰胺衍生物，它们的制备方法和它们在治疗中作为抗 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及在4-位置由任选经取代的(多)氨基烷基氨基乙酰胺链取代的新型鬼臼毒素(podophyllotoxin)衍生物，它们的制备方法和它们作为药物，特别地作为抗癌药的用途。
背景技术：
本发明的化合物为鬼臼毒素的衍生物，鬼臼毒素是已知用于癌症治疗的天然木脂素(lignan)。其它合成衍生物，如依托泊苷和替尼泊苷，目前用作化学治疗剂，特别是用于治疗小细胞肺癌治疗。这些不同化合物通过抑制拓扑异构酶II的催化活性而起作用。
在鬼臼毒素骨架β位置上的乙酰胺取代代表了精胺或亚精胺乙酰胺或更常见的(多)氨基-烷基乙酰胺单元。
4′-脱甲基表鬼臼毒素衍生物是己知的拓扑异构酶II抑制剂。它们的细胞毒素和抗肿瘤活性特别地采用依托泊苷，TOP 53(Drugs of theFuture，1996，21，1136)，GL 331(Medicinal Research Reviews，1997，17，367)和NK 611(Cancer Chemother.Pharmacol.，1996，38，217和541)进行说明。已经报道了含有在鬼臼毒素的4β-位置直接键合了苄基胺类型氨基链的化合物(J.Med.Chem.，1991，34，3346)。专利申请FR 2 810321公开了用于治疗癌症的鬼臼毒素氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯衍生物。也已经公开了在4β-位置上为酰胺的化合物(US 6 566 393；ActaPharmacetica Sinica(YaoxueXuebao)，1993，28，422；ActaChem.Scand.，1993，47，1190)。
专利EP 0 876 374公开了鬼臼毒素的脱甲基化以获得4′-脱甲基表鬼臼毒素的方法，这是制备依托泊苷和替尼泊苷的合成中间体。
国际申请WO 03/082876公开了具有抗癌活性的4β-1′-[{2″-取代苯甲酰基}苯胺]鬼臼毒素类似物。
对更有效治疗的需要促进了对具有不同作用机理的新颖分子的寻找，这种分子要靶向目前治疗效果不好或不能治疗的肿瘤类型，并且没有抗药性的问题。这些新型产物的获得也使共同治疗方案成为可能，这种方案针对某些肿瘤更为有效。
本发明的新型化合物可以解决这些问题。
发明内容
本发明涉及通式(I)的化合物，或它们与无机或有机酸形成的药学可接受的盐，特别是它们的加成盐， 其中■R1和R2彼此独立地表示氢原子或甲基；■R3和A一起形成C3-C8环或R3表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，A表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基、苄基或通式(II)的基团 其中a为2-5，R4和B一起形成C3-C8环，或R4表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，R3和R4可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，和B表示选自如下的基团-氢原子、-C1-C4烷基、-苄基，或-通式(III)的基团 其中b和c可彼此独立地为2-5，R5到R7彼此独立地表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基和苄基，R4和R5和/或R5和R6和/或R6和R7可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接；-或通式(IV)的基团 其中c可以为2-5，R8和R9每个彼此独立地表示氢原子或C1-C5烷基，R4和R8可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，或R8和R9一起形成C3-C8环。
在本发明的上下文中，C3-C8环有利地是可包括一个或多个杂原子，特别是氧的脂族环。
根据本发明的有利替代形式，在通式(I)中，R3到R9彼此独立地表示氢原子或C1-C4烷基，有利地为氢原子或甲基。
在本发明的上下文中特别有利的化合物是其中R3表示氢原子或甲基，A表示氢原子、甲基或通式(II)的基团，该通式(II)中R4表示氢原子、甲基或乙基，B表示选自如下的基团-氢原子，-甲基，-乙基，或
-通式(III)的基团，其中R5，R6和R7表示氢原子、C1-C4烷基或苄基-通式(IV)的基团，其中R8和R9相同，表示氢原子或甲基。
本发明的优选化合物选自如下化合物和它们与无机或有机酸形成的加成盐2-(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(2-(吗啉-4-基)乙基氨基)乙酰胺2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌啶-1-基)乙酰胺2-苄基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺2-(4-苄基哌嗪-1-基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-乙基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(丙基氨基)乙酰胺
2-丁基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-oxo-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5aS，6，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺
2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]丙基氨基).N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，′7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a；9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺。
更特别地，本发明的优选化合物选自2-[(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺
2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5，二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺和它们与无机或有机酸形成的加成盐。
本发明的化合物的异构体为本发明的一部分。
药学可接受的酸非限定性地包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸和氨基磺酸。
本发明的化合物通过与侧链碱性氮形成无机或有机盐而具有溶于水的特性。这一点在给药、配制、分配、药代动力学和生物利用度方面具有非常显著的优点。
本发明的另一个主题是本发明的化合物的制备方法，该方法包括如下连续步骤a)从通式(VIII)的鬼臼毒素开始
b)如果需要，由通式(V)化合物的脱甲基化来制备 其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义；然后c)通式(V)或(VIII)的化合物与氯乙腈在酸性介质中进行反应，然后，如果需要，进行脱甲基化反应，以提供通式(VI)的化合物
其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义；然后d)在包括极性非质子溶剂的溶剂混合物中，在路易斯碱存在下使通式(VI)的化合物与通式(VII)的化合物进行反应 其中R3和A如在通式(I)的化合物中所定义，基团A中任选存在的胺由适当的保护基团保护，该保护基团有利地选自苄基、苄氧基羰基(Z)或叔丁氧基羰基(Boc)。
鬼臼毒素(天然产物)中的原子的编号通常与本发明上下文中使用的用于给鬼臼毒素衍生物编号的系统不同。因此，在本发明的上下文中，本发明的化合物(合成产物)参照如下通式(I)的化合物给出的系统进行编号 而鬼臼毒素是根据上述通式(VIII)化合物给出的通常使用的系统进行编号。
根据本发明的替代形式，制备通式(V)的化合物可通过在鬼臼毒素上进行脱甲基化反应获得。因此，根据专利FR 2 742 439中公开的方法，在-10℃到40℃温度之间，在三氟乙酸或丙酮和水存在下用甲硫氨酸(或二甲基硫醚)/甲磺酸在鬼臼毒素上进行脱甲基化反应来制备4′-脱甲基表鬼臼毒素(Va)(使用的编号就是用于通式(VIII)的鬼臼毒素的编号) 也可以采用过量试剂和增加反应时间来获得二脱甲基化产物、通式(V)化合物，其中R1＝H和R2＝Me(或R2＝H和R1＝Me)(Vb)(描述于J.Med.Chem.，1986，29，1547)，和三脱甲基化产物、通式(V)的化合物，其中R1＝R2＝H(Vc)，这是一种新型的产物。
在步骤c)中，根据本领域技术人员已知的方法，通式(V)的化合物与氯乙腈在强酸，如甲磺酸或硫酸存在下进行Ritter反应，这种方法与文献Acta Chem.Scand.，1993，47，1190中描述的方法类似，。此反应生成通式(VI)的中间体，其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义。
在步骤c)期间，在通式(V)合物与氯乙腈反应之前，单-，二-和三脱甲基化化合物(通式(Va)，(Vb)和(Vc))可以经苯甲酰氧基羰基对它们的酚官能团进行保护，以防止不需要的副产物的生成。这些保护基团可随后容易地采用常规方式在钯炭存在下由氢解去除。然而，通式(V)化合物与氯乙腈的直接反应可以通过苯酚官能团未经保护的通式(Va)，(Vb)和(Vc)化合物反应来进行。
根据本发明的另一个替代形式，鬼臼毒素(VIII)直接用作原料。
在步骤c)中，单脱甲基化反应在Ritter反应之后进行，以得到通式(VI)的衍生物，其中R1＝R2＝Me(VIa)。相似地，也可通过过量试剂和延长反应时间获得二脱甲基化产物，通式(VI)的化合物，其中R1＝H和R2＝Me(或R2＝H和R1＝Me)(VIb)，和三脱甲基化产物，及通式(VI)的化合物，其中R1＝R2＝H(VIc)。
步骤d)的反应有利地在环境温度，在极性非质子溶剂中，如在乙腈和DMF的混合物中，在碱如三乙胺和碘化钾的存在下进行。碘化钾可使得通式(VI)化合物中存在的氯由碘取代，从而具有更好的反应性。
在通式(VIII)中，作为胺官能团的适当保护基团的例子，要特别提及叔丁氧基羰基(BOC)和苄氧基羰基(Z)。对胺官能团的保护会避免不需要的副产物的合成，其采用的方式是在偶合反应期间仅存在单一反应性部位。
通式(VII)化合物的制备可以根据一系列胺保护性基团的选择性保护来制备，所述保护基团为例如BOC或Z，如在“有机合成中的保护基”(Theodora W.Greene，2nd Ed.，John Wiley和Sons，1991)中所述的那样或在Synthesis，2002，15，2195；Bull.Chein.Soc.Jpn.，1998，71，699；Tet.Lett.，1998，39，439；Tet.Lett.，2001，42，2709；OPPI，1994，26，599；Synthesis，1994，37；J.Org.Chem.，1998，63，9723；Tet.Lett.，1994，35，2057和2061中所述的那样。这些公开文献描述了各种使用了保护基团的胺的制备。本领域技术人员可类似地进行制备。
如果需要，本发明的方法的最后步骤由经适当基团保护的胺官能团的解保护组成。
本发明的化合物具有来自鬼臼毒素自然来源的手性中心。在通式(V)的化合物中，在5-，5a-，8a-和9-位置的氢原子具有如下位置H5α，H5aα，H8aβ，H9β。在通式(VI)的化合物中，不对称碳的构型有利地为如下所述5S，5aS，8aS，9R。
本发明也涉及通式(V)的中间体化合物，其中R1，R2和R3表示氢原子。
本发明的另一个主题是作为药物的本发明通式(I)化合物。
本发明的化合物具有在4-位置经由乙酰胺基团取代的表鬼臼毒素结构，它自身任选地由胺或多元胺取代。
已经报道了了含有接枝到吖啶类型DNA-嵌入单元(J.Org.Chem.，2000，65，5590；J.Med.Chem.，2002，45，5098)或烷基化单元的多元胺链化合物，如苯丁酸氮芥(J.Chem.Soc.Chem.Commun.，1992，298)。
本发明的化合物(定性地和定量地不同于包括依托泊苷的其它已知抗癌化合物)具有作为药物的性能，其以DNA为标靶，并能成功地对其造成损害。
面对DNA的损害，细胞正常的反应是启动运动修复系统，通过这个系统来保证细胞的完整性。使用本发明的化合物，此修复过程会无效，并且细胞会渐进死亡。DNA的此分裂现象由慧星测试中的荧光显示和测量(参见下文)。
本发明的化合物针对几种鼠类模型具有体外细胞毒素性能和体内抗肿瘤性能。
本发明的化合物显示出人意料和令人惊奇的抗肿瘤活性，这是由于它们会使肿瘤显著，甚至完全地消退而不会带来实体形式的瘤因体重损失而引起的副作用。这会在病人体内针对非实体肿瘤和实体肿瘤产生有效活性，所述非实体肿瘤和实体肿瘤为如黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或肝癌、卵巢癌、白血病，特别地淋巴瘤和骨髓瘤、ENT癌和脑癌。
本发明的特定主题是药物组合物，其特征在于它包括通式(I)的至少一种化合物，并包括适用于经由口服或非肠道途径给药的赋形剂。
本发明的药物组合物可以单独或与其它抗癌剂结合给药，所述组合物包括通式(I)的至少一种化合物和适用于经由口服或非肠道给药途径给药的赋形剂。它们可以每日一次或多次进行给药，采用上述给药方式、以可注射形式，或以胶囊的形式，包括硬明胶胶囊，或片剂，以0.5-300mg/m的剂量(由注射途径)，和在1-100mg/m的剂量(由口服途径)进行给药。
最后，本发明涉及本发明通式(I)化合物在制备用于治疗如下非实体肿瘤和实体肿瘤的抗癌药物中的用途，所述非实体肿瘤和实体肿瘤为如黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或肝癌、卵巢癌、白血病，特别地淋巴瘤和骨髓瘤、ENT癌和脑癌。
根据本发明的有利替代形式，所示药物包括a)通式(I)的化合物和b)抗癌药，作为组合产物使用，用于同时、单独或随时间推进给药治疗癌症和/或肿瘤。
特别地，抗癌剂选自铂衍生物、紫杉类、长春药属和5-FU。
在本发明的上下文中，所述药物也用于治疗对常规治疗有抗药性的肿瘤。
如下实施例用于说明本发明，但不是限制性的。在如下实施例的质子NMR谱中，用于指定质子的编号是通式(VIII)的鬼臼毒素中所使用和显示的编号。相反，用于指定合成的产物的编号是通式(1)的化合物所使用和确定的编号。
实施例实施例1化合物的制备*5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮；和*9-羟基-5-(3，4，5-三羟基苯基)-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮将10g(24mmol)鬼臼毒素溶于60ml三氟乙酸中。连续加入5.4ml(72mmol)二甲基硫醚和47ml(72mmol)甲磺酸。搅拌保持9小时，再次加入5.4ml(72mmol)二甲基硫醚并保持搅拌9小时。将介质快速送到冰上(600ml)和采用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。将有机相用水，然后采用NaHCO3溶液洗涤到中性。在通过硫酸钠干燥后，过滤和蒸发之后，获得6.3g脱甲基化粗产物。在二氧化硅上进行快速色谱(洗脱CH2Cl2/丙酮9/1)可以分离得到550mg 5-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-cl][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，即通式(Va)所示的4′-脱甲基表鬼臼毒素。1.10g 5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮(分析结果C20H18O8·0.15H2O；计算值C％61.74，H％4.74；发现值C％61.67，H％4.68)，然后也分离得到1.9g9-羟基-5-(3，4，5-三羟基苯基)-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮。后一化合物具有如下特征的质子NMR光谱1HNMR(d6-DMSO)δ8.65(m，2H)，7.95(m，1H)，6.71(S，1H，H5)，6.47(S，1H，H8)，5.98(d，2H，J＝2Hz，OCH2O)，5.93(s，2H，H2′，H6′)，4.68(d，1H，J＝3.2Hz，H4)，4.34(t，1H，J＝8Hz，H11a)，4.29(d，1H，J＝5.2Hz，H1)，4.16(dd，1H，J＝8Hz，J′＝10Hz，H11b)，3.17(dd，1H，J＝5.2H和J′＝14Hz，H2)，2.76(m，1H，H3)。
实施例2制备碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3-甲氧基苯基酯在4.3ml(30mmol)三乙胺存在下，在CH2Cl2和THF1/1混合物中，将2.65ml(18.5mmol)氯甲酸苄酯在0℃在氮气环境中在搅拌情况下加入到根据实施例1获得的2.4g(6.2mmol)5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮中。反应持续1小时，然后将介质倾到入水中，并将有机相由沉降分离，通过硫酸钠干燥，然后蒸发。将获得的二碳酸酯化合物用异丙醚结晶(3.1g，收率76％)。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5)Rf＝0.6；1H NMR(d6-DMSO)δ7.36(m，10H，Ar)，5.22(s，2H，苄基CH2)，5.17(s，2H，苄基CH2)。
实施例3制备碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)苯基酯通过与实施例2中相同的反应，但是使用5-(3，4，5-三羟基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮代替5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，以96％的收率获得三碳酸酯衍生物。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5)Rf＝0.5；1H NMR(d6-DMSO)δ7.38(m，10H，Ar)，7.31(m，5H，Ar)，5.21(s，4H，苄基CH2)，5.17(s，2H，苄基CH2)。
实施例4制备2-氯-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物可以采用两种不同的方式获得。
a)将30g通式(Va)的4′-脱甲基表鬼臼毒素加入47.4ml氯乙腈中，然后在搅拌下加入3滴浓硫酸。搅拌在环境温度下持续3小时。然后在搅拌下加入300ml异丙醇。将获得的沉淀物滤出，并采用200ml异丙醇洗涤。将沉淀物采用水清洗到中性pH和采用乙基醚清洗。在真空下干燥之后，获得34.2g(收率96％)白色固体。熔点240℃；1HNMR(d6-DMSO)δ8.65(d，1H，J＝7Hz，NH)，8.26(s，1H，4′-OH)，6.78(s，1H，H5)，6.54(S，1H，H8)，6.24(s，2H，H2′，H6′)，5.99(d，2H，J＝11.3Hz，OCH2O)，5.17(dd，1H，J＝4.56和7Hz，H4)，4.51(d，1H，J＝5.2Hz，H1)，4.29(t，1H，J＝8Hz，H11a)，4.10(s，2H，CH2Cl)，3.78(dd，1H，J＝8Hz和10Hz，H11b)，3.63(s，6H，2X OCH3)，3.15(dd，1H，J＝5.2Hz和J＝14Hz，H2)，3.97(m，1H，H3)。
b)将0.2ml浓硫酸在环境温度下加入到搅拌下的在2ml氯乙腈中悬浮液中的1g鬼臼毒素中。溶液变均匀。搅拌在环境温度下保持2h，然后将反应介质倾到在冰上，并采用乙酸乙酯萃取。在由沉降分离，通过硫酸钠干燥并过滤之后，获得840mg淡褐色晶体，对应于2-氯-N-[9-(3，4，5-三甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺。熔点＝145℃。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5，Rf＝0.5)；1H NMR(d6-DMSO)δ4.1(s，2H，CH2Cl)。
将此化合物根据实施例1的条件脱甲基化以提供与以上实施例4a)中相同的化合物，在经常规色谱之后的收率为20％。
实施例5制备2-氯-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺根据与实施例4a)相同的步骤来制备，但采用根据实施例1获得的5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，在SiO2上经快速色谱之后(洗脱CH2Cl2/MeOH 98/2)以收率28％获得米褐色固体。MS-ESI(m/z)462.1(MH+)，479.1(MNH4+)。
实施例6制备碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-3-甲氧基苯基酯根据与实施例4a)相同的过程来制备，但使用实施例2中获得的碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3-甲氧基苯基酯，以83％的收率分离获得白色泡沫状的碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-3-甲氧基苯基酯。TLCSiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5，Rf＝0.63)；1H NMR(d6-DMSO)δ4.11(s，2H，CH2Cl)。
实施例7制备2-氯-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺根据与实施例4a)相同的过程但采用实施例1中获得的5-(3，4，5-三羟基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，在SiO2上的快速色谱之后(洗脱CH2Cl2/MeOH95/5)以收率20％分离得到米色泡沫。MS-ESI(m/z)448.0(MH+)，465.0(MNH4+)。
实施例8制备碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]苯基酯根据与实施例4a)相同的过程但使用实施例3中获得的碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)苯基酯，分离得到碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]苯基酯。
制备最终化合物实施例9制备2-(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺向1g(2.1mmol)实施例4的化合物在30ml乙腈和3ml DMF的溶液中加入0.75ml(5.2mmol)三乙胺，然后加入一刮刀尖量的碘化钾KI。接着将0.6ml(5.2mmol)N，N-二甲基-1，2-乙二胺在10ml乙腈中的溶液在搅拌下在环境温度加入上述反应液中。搅拌保持2天，然后蒸发反应介质，将残余物采用水(100ml)溶解并采用CH2Cl2萃取(3次25ml)；在经沉降分离之后，将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和蒸发。将残余物由在Chromagel 60AC二氧化硅(35-70目)上进行快速色谱纯化(洗脱剂CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/9/1)。获得400mg白色泡沫状物质(收率36％)。通过加入由盐酸饱和的丙醇溶液从丙酮中沉淀出二盐酸盐。熔点＝230℃；1H NMR基础(d6-DMSO)δ8.26(m，1H，OH)，8.20(d，1H，J＝8.3Hz，NH酰胺)，6.76(s，1H，H5)，6.53(S，1H，H8)，6.24(s，2H，H2′-6′)，5.99(d，J＝11.56Hz，OCH2O)，5.20(dd，1H，J＝8.3和4.7Hz，H4)，4.51(d，1H，J＝5.2Hz，H1)，4.28(t，1H，J＝8Hz，H11a)，3.73(dd，1H，J＝10.8Hz和8Hz，H11b)，3.63(s，6H，2XOMe)，3.37(m，1H，NH)，3.19(s，2H，CH2CO)，2.94(m，1H，H1)，2.50(m，4H，2XCH2)，2.08(s，6H，2XCH3)；MS-ESI(m/z)528.2(MH+)。
如下化合物由相同的反应获得但采用相对应的原料实施例10制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(2-吗啉-4-基)乙基氨基)乙酰胺此化合物由实施例4的化合物和2-(吗啉-4-基)乙胺制备。
二盐酸盐熔点＝212℃；MS-ESI(m/z)570.2(MH+)。
实施例11制备2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋南并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N，N，N-三甲基-1，2-乙烷二酰胺制备。
二盐酸盐M.p.＝238℃实施例12制备2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和二甲基胺制备。
盐酸盐M.p.(℃)＞260℃；分析结果C25H28N2O8·HCl；计算值C％57.64，H％5.61，N％5.38；发现值C％57.47，H％5.47，N％5.26。
实施例13制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌啶-1-基)乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和哌啶制备。
盐酸盐熔点＝269-270℃；分析结果C28H32N2O8·HCl；计算值C％59.95，H％5.93，N％4.99；发现值C％59.57，H％6.25，N％4.96。
实施例14制备2-苄基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和苄基胺制备。
盐酸盐熔点＝225℃实施例15制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和哌嗪制备。
二盐酸盐熔点＝237-8℃实施例16制备2-(4-苄基哌嗪-1-基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N-苄基哌嗪制备。
二盐酸盐熔点＝205℃实施例17制备2-乙基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和乙胺制备。
实施例18制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(丙基氨基)乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和丙胺制备。
实施例19制备2-丁基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和丁基胺制备。
实施例20制备2-(2-二乙基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N，N-二乙基-1，2-乙二胺制备。
实施例21制备2-(2-二乙基氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N，N-二乙基-1，3-丙烷二胺制备。
实施例22制备2-氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物经2个步骤从实施例4中获得的化合物制得。在第1步骤中，将实施例4的化合物根据实施例9的方法进行处理，但是采用苄基胺代替N，N-二甲基-1，2-乙二胺。获得对应的苄基氨基中间体，即实施例14的化合物(TLC SiO2CH2Cl2/MeOH 95/5Rf＝0.34)。在第2步骤中，将此中间体脱苄基将830mg此中间体在剧烈搅拌下放入到带有100mg 10％钯炭的MeOH(30ml)和THF(20ml)混合物中，并保持氢气气氛8h。将催化剂随后滤出并蒸发滤液。在二氧化硅柱上洗脱(CH2Cl2/MeOH/NH4OH-90/9/1)得到从AcOEt结晶的300mg脱苄基化化合物(收率43％)。盐酸盐在丙酮中由异丙醇HCl溶液的加入而形成。
熔点＝236℃；MS-APCI(m/z)457.1(MH+)。
实施例23制备2-(2-氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物经2个步骤从实施例4中获得的化合物制得。在第1步骤中，将实施例4的化合物根据实施例9的方法进行处理，但采用苄基2-氨基乙基氨基甲酸酯(Synthesis，2002，15，2195，Bull.Chein.Soc.Jpn.，1998，71，699)代替N，N-二甲基-1，2-乙二胺。获得含有N-苄氧基羰基保护基团的中间体，它的盐酸盐在丙酮中在异丙醇HCl溶液存在下形成。熔点＝178℃。MS-APCI(m/z)634.3(MH+)。在第2步骤中，如在实施例22中那样用钯炭和氢气处理此中间体。以89％的收率得到二盐酸盐。熔点＝236℃。分析结果C25H29N3O8.2HCl；计算值C％52.46，H％5.46，N％7.34；发现值C％52.78，H％5.46，N％7.14。
实施例24制备2-(3-氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺这个具有N-苄氧基羰基保护基团的中间体由与实施例22相同的反应过程来制备，但使用相对应的原料；中间体的盐酸盐在丙酮和乙基醚中在异丙醇HCl溶液存在下形成。熔点＝132℃。MS-APCI(m/z)648.1(MH+)。根据实施例22中相同方法进行脱苄基化得到二盐酸盐。熔点＝219℃。MS-APCI(m/z)514.3(MH+)。
实施例25制备2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺这个具有N-苄氧基羰基保护基团的中间体由实施例22中相同的反应过程获得，但使用根据Tet.Lett.，2001，42，2709获得的苄基4-氨基丁基氨基甲酸酯，中间体在基础状态下从乙基醚中结晶。熔点＝95-96℃.MS-APCI(m/z)662.4(MH+)。随后脱苄基化得到二盐酸盐。熔点＝201℃。MS-ESI(m/z)528.2(MH+)。形成带有3个H2O的水合形式。熔点＝223℃.分析结果C27H33N3O8·2HCl；计算值C％54.01，H％5.87，N％7.00；found C％53.64，H％5.63，N％6.85。
实施例26制备2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)-丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三甲氧基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物由与实施例22相同的过程获得，但采用实施例4b)中获得的中间体2-氯-N-[9-(3，4，5-三甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺和采用形式为无色油状的苄基{(4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基)}(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)Rf＝0.46；MS-ESI(m/z)1058.5(M+)。根据实施例20中相同过程进行脱苄基化得到四盐酸盐。熔点＝209℃。MS-ESI(m/z)656.3(MH+)。
实施例27制备2-{3-[4-(3-氨基丙基-氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法从根据实施例4获得的化合物与苄基{4-[(3-氨基丙基)-苄氧基羰基氨基]基}(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)获得。获得对应的苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)(4-{苄氧基羰基-[3-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}-氨基)丙基]氨基}丁基)氨基甲酸酯中间体(TLC SiO2CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)；Rf＝0.27。在第2步骤中，随后进行脱苄基化以提供四盐酸盐。熔点＝267℃。MS-ESI(m/z)642.2(MH+)。分析结果C33H47N5O8·4HCl；计算值C％50.32，H％6.53，N％8.89；发现值C％50.264，H％6.57，N％8.66。
实施例28制备2-{3-[4-(3-氨基丙基-氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5aS，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例5中获得的化合物，2-氯-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺，与苄基{4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基}-(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)获得。得到苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)(4-{苄氧基羰基-[3-({[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)丙基]氨基}丁基)氨基甲酸酯中间体。TLCSiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)；Rf＝0.15。在第2步骤中，在采用氮气净化之后，加入20mg 10％的钯炭到90mg此中间体在10mlMeOH的溶液中。净化采用由氢气膨胀的气球进行，并在反应介质上保持氢气气氛1小时，同时伴有剧烈搅拌。在采用氮气净化之后，将0.1ml异丙醇HCl溶液(3.6N)加入到介质中，将催化剂滤出并采用MeOH清洗，然后蒸发滤液到干燥。将残余物溶于在20ml乙基醚中，将所得盐酸盐沉淀物过滤和然后干燥。获得20mg晶体(收率30％)。
实施例29制备2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)-丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例7中获得的化合物，2-氯-N-[9-(3，4，5-三羟基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺，与苄基{4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基}(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)获得。制得苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)(4-{苄氧基羰基-[3-({[(8-氧代-9(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d]间二氧杂环戊烯-5-基-氨基甲酰基)甲基}氨基)丙基]氨基}丁基)氨基甲酸酯中间体。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)；Rf＝0.15.在第2步骤中，将此中间体根据实施例28的方法氢解。然后通过在乙基醚中沉淀获得四盐酸盐。熔点＝115℃；MS-ESI(m/z)613.3(MH+)。
实施例30制备2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(3，4-二羟基-5甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺具有N-苄氧基羰基保护基团的该中间体由与实施例25中相同的反应步骤获得，但使用实施例5中获得的中间体代替实施例4中获得的中间体；TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/9/1)；Rf＝0.26。根据与实施例28的第二步骤相同的工艺进行脱苄基化提供乳膏粉末形式的二盐酸盐。熔点＝94℃。此相同化合物也由碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-1-六氢呋喃并[3，，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-3-甲氧基苯基酯的反应获得，它自身在实施例6中制备，根据实施例25的过程，也使用苄基4-氨基丁基氨基甲酸酯，随后进行氢解而获得。
实施例31制备2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与苄基{4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基}氨基甲酸酯(Synthesis，1994，37)获得。获得对应的苄基(4-{苄氧基羰基-[3-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)内基]氨基}]基)氨基甲酸酯中间体。在第2步骤中，根据与实施例22中相同工艺进行脱苄基化得到三盐酸盐。熔点＝255℃；MS-ESI(m/z)585.2(MH+)。
实施例32制备2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与苄基{3-(4-氨基丁基)苄氧基羰基氨基]丙基}氨基甲酸酯获得(J.Org.Chem.，1998，63，9723)制得。获得对应的苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)-[4-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)丁基]氨基甲酸酯中间体。在第2步骤中，根据与实施例22中相同的工艺进行苄基化从而得到三盐酸盐。熔点＝199℃；MS-ESI(mlz)585.2(M+)；分析结果C30H40N4O8·3HCl；计算值C％51.92，H％6.24，N％8.07；发现值C％52.30，H％6.27，N％7.88。
实施例33制备2-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d ][1，3间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与苄基(3-氨基丙基)(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1994，35，2057和2061)获得。获得对应的苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)-[3-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)丙基]氨基甲酸酯中间体。在第2步骤中，根据实施例22中相同工艺进行脱苄基化从而得到三盐酸盐。MS-ESI(mlz)571.2(M+)。
实施例34制备2-{3-[3-(3-氨基丙基-氨基)丙基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与采用与实施例27类似方式制备的苄基(3-氨基丙基){3-[苄氧基羰基(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基]丙基}氨基甲酸酯获得。在第2步骤中，根据实施例22中相同工艺进行脱苄基化以提供2-{3-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺四盐酸盐。MS-ESI(m/z)628.1(M+)。
实施例35制备2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与采用与该方法类似的方式制备的(4-氨基丁基){4-[苄氧基羰基(4-苄氧基羰基氨基丁基)氨基]丁基}氨基甲酸苄基酯获得(Synthesis，1994，37)。在第2步骤中，在色谱纯化之后，根据与实施例22中相同的工艺进行脱苄基化从而制得2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺四盐酸盐。熔点＝263℃；MS-ESI(m/z)670.6(M+)。
实施例36制备2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与采用与该方法类似的方式制备的(4-氨基丁基)(4-苄氧基羰基氨基丁基)氨基甲酸苄基酯获得(Synthesis，1994，37)。在第2步骤中，在色谱纯化之后，根据与实施例22中相同的工艺进行脱苄基化以提供2-[4-(4-氨基丁基氨基)-丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺三盐酸盐。熔点＝225℃；MS-ESI(m/z)600.2(M+)。
实施例37制备2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与5-(苄氧基羰基氨基)戊基胺获得。在第2步骤中，在色谱纯化之后，根据与实施例22中相同的工艺进行脱苄基化以提供2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-二羟基-3，5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺二盐酸盐。熔点＝215℃；MS-ESI(m/z)543.1(M+)。
本发明的化合物的药理学结果体外和体内测试1)体外活性a)细胞毒性测试所用测试为对A549人类系细胞(非小细胞肺癌)生长的抑制将A 549肿瘤细胞接种在置于RPMI 1640培养基(没有酚磺酞(Seromed))中的96-池板上，向其中加入5％胎牛血清(100μl/池，1.25×104细胞/ml)。在37℃在含有5％CO2的孵育器中孵育24小时之后，将培养基用包括测试化合物的培养基代替，其后将池板另外孵育48小时。如制造商(Packard，Rungis，法国)推荐的那样，通过使用细胞溶解、荧光素酶和在ATP-Lite-MTM试剂盒中存在的荧光素溶液来测量在ATP释放进入培养基之后的荧光来评价细胞的存活。每个试验条件至少测试三次，作为六个相同的复制件。表达为IC50(M)的结果收集于表I中，该结果显示了化合物的细胞毒性。
b)检测细胞中DNA断裂的测试使用慧星测试(comets test)。在每种测试化合物各自用10μM孵育1小时之后，检测在A549细胞中DNA的断裂。依托泊苷和长春瑞滨分别用作正和负对照物。使用慧星测试揭示断裂(Br.J.Cancer，2000，83，1740)。对于每种化合物，分析二十五个细胞，并使用Komet软件计算(Kinetic Imaging，UK)平均尾素(TM)。结果采用依托泊苷的TM表达，取为统一，并在表I中收集。从而显示了本发明的产物对诱导DNA断裂的优点，它优于依托泊苷。
表I体外活性
2)体内活性本发明的化合物具有溶于水的性质，这使得可以采用浸剂、注射或口服途径给药。它们以它们的水溶性盐酸盐形式提供，它们的溶解度数值收集于表II中。
P388试验肿瘤模型。使用的模型是P388鼠白血病(Tumor Models inCafzcen Research.，Teicher，B.A.ed.，Humana Press Inc.，Totowa，NJ.，pp.23-40，2002)，它是通过连续腹膜内移植而保持在DBA/2小鼠中(DBA/2JIco，Charles River)，如在现有技术文献中所述的那样(经典的体内癌症模型用于试验治疗的小鼠模型的三个实施例。CurrentProtocols in Pharmacology Unit 5.245.24.1-5.24.16，2001)。
试验是根据已经在现有技术文献中描述的方案进行(CancerChemother.Pharmacol.，1998，41，437-447)。这包括在第零天由静脉内方式以每只小鼠106个P388白血病细胞将这些细胞植入到C2DF1杂种鼠中(CD2F1/Cr1BR，Charles River，St Aubin-les-Elbeuf，法国)。在随机将动物分配装入治疗和对照笼中之后，将要评价的化合物在第1天，在肿瘤移植之后的第一天以单一腹膜内注射给药。随后将动物每天监测，每周称重两次并记录任何临床反应。存活率是抗肿瘤活性评价的参数。存活率的增加由T/C存活率比例(％)定义，对应于(治疗组的存活率中值/对照组的存活率中值)×100。对于每个给药剂量都要计算T/C存活率比例，所获得的更大数值表示所达到的存活率的最大增加(最大活性)，它由最优存活率比例定义。在表II中说明结果，其中显示了最优T/C存活率数值。结果显示实施例9，12，25和27的化合物会使携带P388白血病的动物的存活率显著增加，这由129-157％的最优T/C存活率比例数值反映，这说明采用这些化合物对动物进行治疗可使得动物的存活率延长29-57％。具体地，根据NCI标准(National Cancer Institute)，如果T/C存活率数值至少大于120％，则认为其是显著的(Semin.Oncol.，1981，8，349-361)。
根据NCI标准，与化合物最优活性相关的动物体重的相对损失远小于毒性阈值(Ann.Oncol.，1994，5，415-422)。
B16试验肿瘤模型。使用的模型是B16黑素瘤(Tumor Models inCancer Research.，Teicher，B.A.ed.，Humana Press Inc.，Totowa，NJ.，pp.23-40，2002)，它通过连续皮下移植而保持在C57BL/6鼠中(C57BL/6NCrlBR，Charles River，St Aubin-les-Elbeuf，France)，如上所述(经典的体内癌症模型用于试验治疗的鼠模型的三个实施例。CurrentProtocols in Pharmacology Unit 5.245.24.1-5.24.16，2001)。
试验根据以上述的方案进行。将B16肿瘤组织研磨并使用Dounce均化器在0.9％无菌氯化钠溶液中均化，然后将C57BL/6鼠采用0.5ml此1g/ml制剂在第零天皮下接种入胁腹。在随机将动物分配装入治疗和对照笼中之后，将要评价的化合物在肿瘤移植之后的第3，5，7和10天经腹膜内给药。随后将动物每天监测，每周称重两次和记录任何临床反应。在试验期间每周测量肿瘤尺寸三次。计算肿瘤体积，化合物对肿瘤尺寸的活性由T/C体积比例(％)定义，对应于(治疗组的肿瘤体积中值/对照组的肿瘤体积中值)×100。在表II中说明结果，其中显示了最优T/C体积数值。结果尤其显示实施例25和27的化合物导致会肿瘤生长的显著减缓，它分别由25％和7％的最优T/C体积数值反映。具体地，根据NCI标准(National Cancer Institute)，如果T/C体积数值至少小于42％，则认为其是显著的(Cancer Res.，1991，51，4845-4852)。
表II.体内抗肿瘤活性
MX-1试验肿瘤模型。使用的模型是人乳腺癌模型(DevelopmentalTherapeutics Program，Division of Cancer Treatment，National CancerInstitute，体内癌症模型1976-1982.NIH Publication No.84 2635，Washington DCUnited States Government Printing Office，1984)，它通过连续皮下移植而保持在Swiss裸小鼠中(IcoSwiss-nu/nu，Iffa Credo，L′Arbresle，法国)，如上所述(经典的体内癌症模型用于试验治疗的鼠模型的三个实施例。Current Protocols in Pharmacology Unit 5.245.24.1-5.24.16，2001)。
试验根据以上已经所述的方案进行(Cancer Chemother.Pharmacol.，1998，41，437-447)。在第零天，将MX-1肿瘤的片段皮下移植入Swiss裸小鼠的胁腹。在将它们随机分配进入治疗和对照笼中之后，将要评价的化合物在肿瘤移植之后的第7，9，11，14，16和18天经腹膜内给药。随后将动物每天监测，每周称重两次和记录任何临床反应。在试验期间每周测量肿瘤尺寸三次。计算肿瘤体积，化合物对肿瘤尺寸的活性由T/C体积比例(％)定义，对应于(治疗组的肿瘤体积中值/对照组的肿瘤体积中值)×100。在表II中收集结果。实施例25的化合物对于10mg/kg的治疗显示51％的T/C体积比例(％)，实施例27的化合物对于2.5mg/kg的治疗显示0％的T/C体积比例(％)，从而说明肿瘤的完全根除。
权利要求
1.一种通式(I)的化合物；或它们与无机或有机酸形成的药学可接受的盐，特别是它们的加成盐， 其中·R1和R2彼此独立地表示氢原子或甲基；·R3和A一起形成C3-C8环或R3表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，A表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基、苄基或通式(II)的基团 其中a为2-5，R4和B一起形成C3-C8环，或R4表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，R3和R4可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，和B表示选自如下的基团-氢原子、-C1-C4烷基、-苄基，或-通式(III)的基团 其中b和c可彼此独立地为2-5，R5到R7彼此独立地表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，R4和R5和/或R5和R6和/或R6和R7可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接；-或通式(IV)的基团 其中c可以为2-5，R8和R9每个彼此独立地表示氢原子或C1-C5烷基，R4和R8可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，或R8和R9一起形成C3-C8环。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于R3到R9彼此独立地表示氢原子或C1-C4烷基，有利地为氢原子或甲基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于R3表示氢原子或甲基，A表示氢原子、甲基或通式(II)的基团，其中R4表示氢原子、甲基或乙基，B表示选自如下的基团-氢原子，-甲基，-乙基，-通式(III)的基团，其中R5，R6和R7表示氢原子、C1-C4烷基或苄基，或-通式(IV)的基团，其中R8和R9相同，表示氢原子或甲基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于它们选自如下化合物和它们与无机或有机酸形成的加成盐2-(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(2-(吗啉-4-基)乙基氨基)乙酰胺2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌啶-1-基)乙酰胺2-苄基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺2-(4-苄基哌嗪-1-基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-乙基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(丙基氨基)乙酰胺2-丁基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-o xo-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-氨基乙基氨基)N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5aS，6，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]丙基氨基).N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a；9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺。
5.根据前述权利要求任意一项所述的化合物的制备方法，其特征在于它包括如下连续步骤a)从通式(VIII)的鬼臼毒素开始 b)如果需要，由通式(V)化合物的脱甲基化来制备 其中R1和R2如在通式(I)化合物中所定义；然后c)通式(V)或(VIII)的化合物与氯乙腈在酸性介质中进行反应，然后，如果需要，进行脱甲基化反应，以提供通式(VI)的化合物 其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义；然后d)在包括极性非质子溶剂的溶剂混合物中，在路易斯碱存在下，通式(VI)的化合物与通式(VII)的化合物进行反应 其中R3和A如在通式(I)化合物中所定义，基团A中任选存在的胺由适当的保护基团保护。
6.根据权利要求5所示的方法，其特征在于当反应在环境温度下进行时，用于步骤d)的极性非质子溶剂是乙腈和二甲基甲酰胺(DMF)。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于用于步骤d)的碱是三乙胺。
8.根据权利要求5所示的通式(V)的中间体化合物，其中R1，R2和R3表示氢原子。
9.根据权利要求1-4任意一项所述的通式(I)的化合物作为药物。
10.一种药物组合物，其特征在于它包括根据权利要求1-4任意一项所述的通式(I)的至少一种化合物，和适用于经由口服或非肠道途径给药的赋形剂。
11.根据权利要求1-4任意一项所述的通式(I)化合物在制备用于如下非实体肿瘤和实体肿瘤抗癌治疗的药物中的用途，所述非实体肿瘤和实体肿瘤如黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或肝癌、卵巢癌、白血病，特别地淋巴瘤和骨髓瘤、ENT癌和脑癌。
12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述药物包括a)通式(I)的化合物和b)抗癌药，作为组合产物使用，用于同时、单独或随时间推进治疗癌症和/或肿瘤。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于所述抗癌药物选自铂衍生物、紫杉类、长春药属或5-FU。
14.根据权利要求12或13所述的用途，其特征在于所述药物用于治疗对常规治疗耐药的肿瘤。
全文摘要
本发明涉及在4－位置由取代的(多)氨基烷基氨基乙酰胺链取代的新型鬼臼毒素衍生物，涉及它们的制备方法和它们作为抗癌药物的用途。
文档编号A61P35/00GK1946727SQ200580012303
公开日2007年4月11日 申请日期2005年4月14日 优先权日2004年4月16日
发明者T·因贝特, Y·古明斯基, J-M·巴雷特, A·克鲁琴斯基 申请人:皮埃尔法布雷医药公司
技术领域：
本发明涉及在4-位置由任选经取代的(多)氨基烷基氨基乙酰胺链取代的新型鬼臼毒素(podophyllotoxin)衍生物，它们的制备方法和它们作为药物，特别地作为抗癌药的用途。
背景技术：
本发明的化合物为鬼臼毒素的衍生物，鬼臼毒素是已知用于癌症治疗的天然木脂素(lignan)。其它合成衍生物，如依托泊苷和替尼泊苷，目前用作化学治疗剂，特别是用于治疗小细胞肺癌治疗。这些不同化合物通过抑制拓扑异构酶II的催化活性而起作用。
在鬼臼毒素骨架β位置上的乙酰胺取代代表了精胺或亚精胺乙酰胺或更常见的(多)氨基-烷基乙酰胺单元。
4′-脱甲基表鬼臼毒素衍生物是己知的拓扑异构酶II抑制剂。它们的细胞毒素和抗肿瘤活性特别地采用依托泊苷，TOP 53(Drugs of theFuture，1996，21，1136)，GL 331(Medicinal Research Reviews，1997，17，367)和NK 611(Cancer Chemother.Pharmacol.，1996，38，217和541)进行说明。已经报道了含有在鬼臼毒素的4β-位置直接键合了苄基胺类型氨基链的化合物(J.Med.Chem.，1991，34，3346)。专利申请FR 2 810321公开了用于治疗癌症的鬼臼毒素氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯衍生物。也已经公开了在4β-位置上为酰胺的化合物(US 6 566 393；ActaPharmacetica Sinica(YaoxueXuebao)，1993，28，422；ActaChem.Scand.，1993，47，1190)。
专利EP 0 876 374公开了鬼臼毒素的脱甲基化以获得4′-脱甲基表鬼臼毒素的方法，这是制备依托泊苷和替尼泊苷的合成中间体。
国际申请WO 03/082876公开了具有抗癌活性的4β-1′-[{2″-取代苯甲酰基}苯胺]鬼臼毒素类似物。
对更有效治疗的需要促进了对具有不同作用机理的新颖分子的寻找，这种分子要靶向目前治疗效果不好或不能治疗的肿瘤类型，并且没有抗药性的问题。这些新型产物的获得也使共同治疗方案成为可能，这种方案针对某些肿瘤更为有效。
本发明的新型化合物可以解决这些问题。
发明内容
本发明涉及通式(I)的化合物，或它们与无机或有机酸形成的药学可接受的盐，特别是它们的加成盐， 其中■R1和R2彼此独立地表示氢原子或甲基；■R3和A一起形成C3-C8环或R3表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，A表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基、苄基或通式(II)的基团 其中a为2-5，R4和B一起形成C3-C8环，或R4表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，R3和R4可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，和B表示选自如下的基团-氢原子、-C1-C4烷基、-苄基，或-通式(III)的基团 其中b和c可彼此独立地为2-5，R5到R7彼此独立地表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基和苄基，R4和R5和/或R5和R6和/或R6和R7可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接；-或通式(IV)的基团 其中c可以为2-5，R8和R9每个彼此独立地表示氢原子或C1-C5烷基，R4和R8可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，或R8和R9一起形成C3-C8环。
在本发明的上下文中，C3-C8环有利地是可包括一个或多个杂原子，特别是氧的脂族环。
根据本发明的有利替代形式，在通式(I)中，R3到R9彼此独立地表示氢原子或C1-C4烷基，有利地为氢原子或甲基。
在本发明的上下文中特别有利的化合物是其中R3表示氢原子或甲基，A表示氢原子、甲基或通式(II)的基团，该通式(II)中R4表示氢原子、甲基或乙基，B表示选自如下的基团-氢原子，-甲基，-乙基，或
-通式(III)的基团，其中R5，R6和R7表示氢原子、C1-C4烷基或苄基-通式(IV)的基团，其中R8和R9相同，表示氢原子或甲基。
本发明的优选化合物选自如下化合物和它们与无机或有机酸形成的加成盐2-(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(2-(吗啉-4-基)乙基氨基)乙酰胺2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌啶-1-基)乙酰胺2-苄基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺2-(4-苄基哌嗪-1-基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-乙基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(丙基氨基)乙酰胺
2-丁基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-oxo-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5aS，6，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺
2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]丙基氨基).N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，′7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a；9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺。
更特别地，本发明的优选化合物选自2-[(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺
2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5，二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺和它们与无机或有机酸形成的加成盐。
本发明的化合物的异构体为本发明的一部分。
药学可接受的酸非限定性地包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸和氨基磺酸。
本发明的化合物通过与侧链碱性氮形成无机或有机盐而具有溶于水的特性。这一点在给药、配制、分配、药代动力学和生物利用度方面具有非常显著的优点。
本发明的另一个主题是本发明的化合物的制备方法，该方法包括如下连续步骤a)从通式(VIII)的鬼臼毒素开始
b)如果需要，由通式(V)化合物的脱甲基化来制备 其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义；然后c)通式(V)或(VIII)的化合物与氯乙腈在酸性介质中进行反应，然后，如果需要，进行脱甲基化反应，以提供通式(VI)的化合物
其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义；然后d)在包括极性非质子溶剂的溶剂混合物中，在路易斯碱存在下使通式(VI)的化合物与通式(VII)的化合物进行反应 其中R3和A如在通式(I)的化合物中所定义，基团A中任选存在的胺由适当的保护基团保护，该保护基团有利地选自苄基、苄氧基羰基(Z)或叔丁氧基羰基(Boc)。
鬼臼毒素(天然产物)中的原子的编号通常与本发明上下文中使用的用于给鬼臼毒素衍生物编号的系统不同。因此，在本发明的上下文中，本发明的化合物(合成产物)参照如下通式(I)的化合物给出的系统进行编号 而鬼臼毒素是根据上述通式(VIII)化合物给出的通常使用的系统进行编号。
根据本发明的替代形式，制备通式(V)的化合物可通过在鬼臼毒素上进行脱甲基化反应获得。因此，根据专利FR 2 742 439中公开的方法，在-10℃到40℃温度之间，在三氟乙酸或丙酮和水存在下用甲硫氨酸(或二甲基硫醚)/甲磺酸在鬼臼毒素上进行脱甲基化反应来制备4′-脱甲基表鬼臼毒素(Va)(使用的编号就是用于通式(VIII)的鬼臼毒素的编号) 也可以采用过量试剂和增加反应时间来获得二脱甲基化产物、通式(V)化合物，其中R1＝H和R2＝Me(或R2＝H和R1＝Me)(Vb)(描述于J.Med.Chem.，1986，29，1547)，和三脱甲基化产物、通式(V)的化合物，其中R1＝R2＝H(Vc)，这是一种新型的产物。
在步骤c)中，根据本领域技术人员已知的方法，通式(V)的化合物与氯乙腈在强酸，如甲磺酸或硫酸存在下进行Ritter反应，这种方法与文献Acta Chem.Scand.，1993，47，1190中描述的方法类似，。此反应生成通式(VI)的中间体，其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义。
在步骤c)期间，在通式(V)合物与氯乙腈反应之前，单-，二-和三脱甲基化化合物(通式(Va)，(Vb)和(Vc))可以经苯甲酰氧基羰基对它们的酚官能团进行保护，以防止不需要的副产物的生成。这些保护基团可随后容易地采用常规方式在钯炭存在下由氢解去除。然而，通式(V)化合物与氯乙腈的直接反应可以通过苯酚官能团未经保护的通式(Va)，(Vb)和(Vc)化合物反应来进行。
根据本发明的另一个替代形式，鬼臼毒素(VIII)直接用作原料。
在步骤c)中，单脱甲基化反应在Ritter反应之后进行，以得到通式(VI)的衍生物，其中R1＝R2＝Me(VIa)。相似地，也可通过过量试剂和延长反应时间获得二脱甲基化产物，通式(VI)的化合物，其中R1＝H和R2＝Me(或R2＝H和R1＝Me)(VIb)，和三脱甲基化产物，及通式(VI)的化合物，其中R1＝R2＝H(VIc)。
步骤d)的反应有利地在环境温度，在极性非质子溶剂中，如在乙腈和DMF的混合物中，在碱如三乙胺和碘化钾的存在下进行。碘化钾可使得通式(VI)化合物中存在的氯由碘取代，从而具有更好的反应性。
在通式(VIII)中，作为胺官能团的适当保护基团的例子，要特别提及叔丁氧基羰基(BOC)和苄氧基羰基(Z)。对胺官能团的保护会避免不需要的副产物的合成，其采用的方式是在偶合反应期间仅存在单一反应性部位。
通式(VII)化合物的制备可以根据一系列胺保护性基团的选择性保护来制备，所述保护基团为例如BOC或Z，如在“有机合成中的保护基”(Theodora W.Greene，2nd Ed.，John Wiley和Sons，1991)中所述的那样或在Synthesis，2002，15，2195；Bull.Chein.Soc.Jpn.，1998，71，699；Tet.Lett.，1998，39，439；Tet.Lett.，2001，42，2709；OPPI，1994，26，599；Synthesis，1994，37；J.Org.Chem.，1998，63，9723；Tet.Lett.，1994，35，2057和2061中所述的那样。这些公开文献描述了各种使用了保护基团的胺的制备。本领域技术人员可类似地进行制备。
如果需要，本发明的方法的最后步骤由经适当基团保护的胺官能团的解保护组成。
本发明的化合物具有来自鬼臼毒素自然来源的手性中心。在通式(V)的化合物中，在5-，5a-，8a-和9-位置的氢原子具有如下位置H5α，H5aα，H8aβ，H9β。在通式(VI)的化合物中，不对称碳的构型有利地为如下所述5S，5aS，8aS，9R。
本发明也涉及通式(V)的中间体化合物，其中R1，R2和R3表示氢原子。
本发明的另一个主题是作为药物的本发明通式(I)化合物。
本发明的化合物具有在4-位置经由乙酰胺基团取代的表鬼臼毒素结构，它自身任选地由胺或多元胺取代。
已经报道了了含有接枝到吖啶类型DNA-嵌入单元(J.Org.Chem.，2000，65，5590；J.Med.Chem.，2002，45，5098)或烷基化单元的多元胺链化合物，如苯丁酸氮芥(J.Chem.Soc.Chem.Commun.，1992，298)。
本发明的化合物(定性地和定量地不同于包括依托泊苷的其它已知抗癌化合物)具有作为药物的性能，其以DNA为标靶，并能成功地对其造成损害。
面对DNA的损害，细胞正常的反应是启动运动修复系统，通过这个系统来保证细胞的完整性。使用本发明的化合物，此修复过程会无效，并且细胞会渐进死亡。DNA的此分裂现象由慧星测试中的荧光显示和测量(参见下文)。
本发明的化合物针对几种鼠类模型具有体外细胞毒素性能和体内抗肿瘤性能。
本发明的化合物显示出人意料和令人惊奇的抗肿瘤活性，这是由于它们会使肿瘤显著，甚至完全地消退而不会带来实体形式的瘤因体重损失而引起的副作用。这会在病人体内针对非实体肿瘤和实体肿瘤产生有效活性，所述非实体肿瘤和实体肿瘤为如黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或肝癌、卵巢癌、白血病，特别地淋巴瘤和骨髓瘤、ENT癌和脑癌。
本发明的特定主题是药物组合物，其特征在于它包括通式(I)的至少一种化合物，并包括适用于经由口服或非肠道途径给药的赋形剂。
本发明的药物组合物可以单独或与其它抗癌剂结合给药，所述组合物包括通式(I)的至少一种化合物和适用于经由口服或非肠道给药途径给药的赋形剂。它们可以每日一次或多次进行给药，采用上述给药方式、以可注射形式，或以胶囊的形式，包括硬明胶胶囊，或片剂，以0.5-300mg/m的剂量(由注射途径)，和在1-100mg/m的剂量(由口服途径)进行给药。
最后，本发明涉及本发明通式(I)化合物在制备用于治疗如下非实体肿瘤和实体肿瘤的抗癌药物中的用途，所述非实体肿瘤和实体肿瘤为如黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或肝癌、卵巢癌、白血病，特别地淋巴瘤和骨髓瘤、ENT癌和脑癌。
根据本发明的有利替代形式，所示药物包括a)通式(I)的化合物和b)抗癌药，作为组合产物使用，用于同时、单独或随时间推进给药治疗癌症和/或肿瘤。
特别地，抗癌剂选自铂衍生物、紫杉类、长春药属和5-FU。
在本发明的上下文中，所述药物也用于治疗对常规治疗有抗药性的肿瘤。
如下实施例用于说明本发明，但不是限制性的。在如下实施例的质子NMR谱中，用于指定质子的编号是通式(VIII)的鬼臼毒素中所使用和显示的编号。相反，用于指定合成的产物的编号是通式(1)的化合物所使用和确定的编号。
实施例实施例1化合物的制备*5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮；和*9-羟基-5-(3，4，5-三羟基苯基)-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮将10g(24mmol)鬼臼毒素溶于60ml三氟乙酸中。连续加入5.4ml(72mmol)二甲基硫醚和47ml(72mmol)甲磺酸。搅拌保持9小时，再次加入5.4ml(72mmol)二甲基硫醚并保持搅拌9小时。将介质快速送到冰上(600ml)和采用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。将有机相用水，然后采用NaHCO3溶液洗涤到中性。在通过硫酸钠干燥后，过滤和蒸发之后，获得6.3g脱甲基化粗产物。在二氧化硅上进行快速色谱(洗脱CH2Cl2/丙酮9/1)可以分离得到550mg 5-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-cl][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，即通式(Va)所示的4′-脱甲基表鬼臼毒素。1.10g 5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮(分析结果C20H18O8·0.15H2O；计算值C％61.74，H％4.74；发现值C％61.67，H％4.68)，然后也分离得到1.9g9-羟基-5-(3，4，5-三羟基苯基)-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮。后一化合物具有如下特征的质子NMR光谱1HNMR(d6-DMSO)δ8.65(m，2H)，7.95(m，1H)，6.71(S，1H，H5)，6.47(S，1H，H8)，5.98(d，2H，J＝2Hz，OCH2O)，5.93(s，2H，H2′，H6′)，4.68(d，1H，J＝3.2Hz，H4)，4.34(t，1H，J＝8Hz，H11a)，4.29(d，1H，J＝5.2Hz，H1)，4.16(dd，1H，J＝8Hz，J′＝10Hz，H11b)，3.17(dd，1H，J＝5.2H和J′＝14Hz，H2)，2.76(m，1H，H3)。
实施例2制备碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3-甲氧基苯基酯在4.3ml(30mmol)三乙胺存在下，在CH2Cl2和THF1/1混合物中，将2.65ml(18.5mmol)氯甲酸苄酯在0℃在氮气环境中在搅拌情况下加入到根据实施例1获得的2.4g(6.2mmol)5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮中。反应持续1小时，然后将介质倾到入水中，并将有机相由沉降分离，通过硫酸钠干燥，然后蒸发。将获得的二碳酸酯化合物用异丙醚结晶(3.1g，收率76％)。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5)Rf＝0.6；1H NMR(d6-DMSO)δ7.36(m，10H，Ar)，5.22(s，2H，苄基CH2)，5.17(s，2H，苄基CH2)。
实施例3制备碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)苯基酯通过与实施例2中相同的反应，但是使用5-(3，4，5-三羟基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮代替5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，以96％的收率获得三碳酸酯衍生物。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5)Rf＝0.5；1H NMR(d6-DMSO)δ7.38(m，10H，Ar)，7.31(m，5H，Ar)，5.21(s，4H，苄基CH2)，5.17(s，2H，苄基CH2)。
实施例4制备2-氯-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物可以采用两种不同的方式获得。
a)将30g通式(Va)的4′-脱甲基表鬼臼毒素加入47.4ml氯乙腈中，然后在搅拌下加入3滴浓硫酸。搅拌在环境温度下持续3小时。然后在搅拌下加入300ml异丙醇。将获得的沉淀物滤出，并采用200ml异丙醇洗涤。将沉淀物采用水清洗到中性pH和采用乙基醚清洗。在真空下干燥之后，获得34.2g(收率96％)白色固体。熔点240℃；1HNMR(d6-DMSO)δ8.65(d，1H，J＝7Hz，NH)，8.26(s，1H，4′-OH)，6.78(s，1H，H5)，6.54(S，1H，H8)，6.24(s，2H，H2′，H6′)，5.99(d，2H，J＝11.3Hz，OCH2O)，5.17(dd，1H，J＝4.56和7Hz，H4)，4.51(d，1H，J＝5.2Hz，H1)，4.29(t，1H，J＝8Hz，H11a)，4.10(s，2H，CH2Cl)，3.78(dd，1H，J＝8Hz和10Hz，H11b)，3.63(s，6H，2X OCH3)，3.15(dd，1H，J＝5.2Hz和J＝14Hz，H2)，3.97(m，1H，H3)。
b)将0.2ml浓硫酸在环境温度下加入到搅拌下的在2ml氯乙腈中悬浮液中的1g鬼臼毒素中。溶液变均匀。搅拌在环境温度下保持2h，然后将反应介质倾到在冰上，并采用乙酸乙酯萃取。在由沉降分离，通过硫酸钠干燥并过滤之后，获得840mg淡褐色晶体，对应于2-氯-N-[9-(3，4，5-三甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺。熔点＝145℃。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5，Rf＝0.5)；1H NMR(d6-DMSO)δ4.1(s，2H，CH2Cl)。
将此化合物根据实施例1的条件脱甲基化以提供与以上实施例4a)中相同的化合物，在经常规色谱之后的收率为20％。
实施例5制备2-氯-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺根据与实施例4a)相同的步骤来制备，但采用根据实施例1获得的5-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，在SiO2上经快速色谱之后(洗脱CH2Cl2/MeOH 98/2)以收率28％获得米褐色固体。MS-ESI(m/z)462.1(MH+)，479.1(MNH4+)。
实施例6制备碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-3-甲氧基苯基酯根据与实施例4a)相同的过程来制备，但使用实施例2中获得的碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3-甲氧基苯基酯，以83％的收率分离获得白色泡沫状的碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-3-甲氧基苯基酯。TLCSiO2(CH2Cl2/MeOH 95/5，Rf＝0.63)；1H NMR(d6-DMSO)δ4.11(s，2H，CH2Cl)。
实施例7制备2-氯-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺根据与实施例4a)相同的过程但采用实施例1中获得的5-(3，4，5-三羟基苯基)-9-羟基-5，8，8a，9-四氢-5aH-呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-6-酮，在SiO2上的快速色谱之后(洗脱CH2Cl2/MeOH95/5)以收率20％分离得到米色泡沫。MS-ESI(m/z)448.0(MH+)，465.0(MNH4+)。
实施例8制备碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]苯基酯根据与实施例4a)相同的过程但使用实施例3中获得的碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-(9-羟基-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)苯基酯，分离得到碳酸苄基酯2，3-双(苄氧基羰氧基)-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]苯基酯。
制备最终化合物实施例9制备2-(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺向1g(2.1mmol)实施例4的化合物在30ml乙腈和3ml DMF的溶液中加入0.75ml(5.2mmol)三乙胺，然后加入一刮刀尖量的碘化钾KI。接着将0.6ml(5.2mmol)N，N-二甲基-1，2-乙二胺在10ml乙腈中的溶液在搅拌下在环境温度加入上述反应液中。搅拌保持2天，然后蒸发反应介质，将残余物采用水(100ml)溶解并采用CH2Cl2萃取(3次25ml)；在经沉降分离之后，将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和蒸发。将残余物由在Chromagel 60AC二氧化硅(35-70目)上进行快速色谱纯化(洗脱剂CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/9/1)。获得400mg白色泡沫状物质(收率36％)。通过加入由盐酸饱和的丙醇溶液从丙酮中沉淀出二盐酸盐。熔点＝230℃；1H NMR基础(d6-DMSO)δ8.26(m，1H，OH)，8.20(d，1H，J＝8.3Hz，NH酰胺)，6.76(s，1H，H5)，6.53(S，1H，H8)，6.24(s，2H，H2′-6′)，5.99(d，J＝11.56Hz，OCH2O)，5.20(dd，1H，J＝8.3和4.7Hz，H4)，4.51(d，1H，J＝5.2Hz，H1)，4.28(t，1H，J＝8Hz，H11a)，3.73(dd，1H，J＝10.8Hz和8Hz，H11b)，3.63(s，6H，2XOMe)，3.37(m，1H，NH)，3.19(s，2H，CH2CO)，2.94(m，1H，H1)，2.50(m，4H，2XCH2)，2.08(s，6H，2XCH3)；MS-ESI(m/z)528.2(MH+)。
如下化合物由相同的反应获得但采用相对应的原料实施例10制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(2-吗啉-4-基)乙基氨基)乙酰胺此化合物由实施例4的化合物和2-(吗啉-4-基)乙胺制备。
二盐酸盐熔点＝212℃；MS-ESI(m/z)570.2(MH+)。
实施例11制备2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋南并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N，N，N-三甲基-1，2-乙烷二酰胺制备。
二盐酸盐M.p.＝238℃实施例12制备2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和二甲基胺制备。
盐酸盐M.p.(℃)＞260℃；分析结果C25H28N2O8·HCl；计算值C％57.64，H％5.61，N％5.38；发现值C％57.47，H％5.47，N％5.26。
实施例13制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌啶-1-基)乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和哌啶制备。
盐酸盐熔点＝269-270℃；分析结果C28H32N2O8·HCl；计算值C％59.95，H％5.93，N％4.99；发现值C％59.57，H％6.25，N％4.96。
实施例14制备2-苄基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和苄基胺制备。
盐酸盐熔点＝225℃实施例15制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和哌嗪制备。
二盐酸盐熔点＝237-8℃实施例16制备2-(4-苄基哌嗪-1-基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N-苄基哌嗪制备。
二盐酸盐熔点＝205℃实施例17制备2-乙基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和乙胺制备。
实施例18制备N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(丙基氨基)乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和丙胺制备。
实施例19制备2-丁基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和丁基胺制备。
实施例20制备2-(2-二乙基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N，N-二乙基-1，2-乙二胺制备。
实施例21制备2-(2-二乙基氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物从实施例4的化合物和N，N-二乙基-1，3-丙烷二胺制备。
实施例22制备2-氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物经2个步骤从实施例4中获得的化合物制得。在第1步骤中，将实施例4的化合物根据实施例9的方法进行处理，但是采用苄基胺代替N，N-二甲基-1，2-乙二胺。获得对应的苄基氨基中间体，即实施例14的化合物(TLC SiO2CH2Cl2/MeOH 95/5Rf＝0.34)。在第2步骤中，将此中间体脱苄基将830mg此中间体在剧烈搅拌下放入到带有100mg 10％钯炭的MeOH(30ml)和THF(20ml)混合物中，并保持氢气气氛8h。将催化剂随后滤出并蒸发滤液。在二氧化硅柱上洗脱(CH2Cl2/MeOH/NH4OH-90/9/1)得到从AcOEt结晶的300mg脱苄基化化合物(收率43％)。盐酸盐在丙酮中由异丙醇HCl溶液的加入而形成。
熔点＝236℃；MS-APCI(m/z)457.1(MH+)。
实施例23制备2-(2-氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物经2个步骤从实施例4中获得的化合物制得。在第1步骤中，将实施例4的化合物根据实施例9的方法进行处理，但采用苄基2-氨基乙基氨基甲酸酯(Synthesis，2002，15，2195，Bull.Chein.Soc.Jpn.，1998，71，699)代替N，N-二甲基-1，2-乙二胺。获得含有N-苄氧基羰基保护基团的中间体，它的盐酸盐在丙酮中在异丙醇HCl溶液存在下形成。熔点＝178℃。MS-APCI(m/z)634.3(MH+)。在第2步骤中，如在实施例22中那样用钯炭和氢气处理此中间体。以89％的收率得到二盐酸盐。熔点＝236℃。分析结果C25H29N3O8.2HCl；计算值C％52.46，H％5.46，N％7.34；发现值C％52.78，H％5.46，N％7.14。
实施例24制备2-(3-氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺这个具有N-苄氧基羰基保护基团的中间体由与实施例22相同的反应过程来制备，但使用相对应的原料；中间体的盐酸盐在丙酮和乙基醚中在异丙醇HCl溶液存在下形成。熔点＝132℃。MS-APCI(m/z)648.1(MH+)。根据实施例22中相同方法进行脱苄基化得到二盐酸盐。熔点＝219℃。MS-APCI(m/z)514.3(MH+)。
实施例25制备2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺这个具有N-苄氧基羰基保护基团的中间体由实施例22中相同的反应过程获得，但使用根据Tet.Lett.，2001，42，2709获得的苄基4-氨基丁基氨基甲酸酯，中间体在基础状态下从乙基醚中结晶。熔点＝95-96℃.MS-APCI(m/z)662.4(MH+)。随后脱苄基化得到二盐酸盐。熔点＝201℃。MS-ESI(m/z)528.2(MH+)。形成带有3个H2O的水合形式。熔点＝223℃.分析结果C27H33N3O8·2HCl；计算值C％54.01，H％5.87，N％7.00；found C％53.64，H％5.63，N％6.85。
实施例26制备2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)-丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三甲氧基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物由与实施例22相同的过程获得，但采用实施例4b)中获得的中间体2-氯-N-[9-(3，4，5-三甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺和采用形式为无色油状的苄基{(4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基)}(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)Rf＝0.46；MS-ESI(m/z)1058.5(M+)。根据实施例20中相同过程进行脱苄基化得到四盐酸盐。熔点＝209℃。MS-ESI(m/z)656.3(MH+)。
实施例27制备2-{3-[4-(3-氨基丙基-氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法从根据实施例4获得的化合物与苄基{4-[(3-氨基丙基)-苄氧基羰基氨基]基}(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)获得。获得对应的苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)(4-{苄氧基羰基-[3-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}-氨基)丙基]氨基}丁基)氨基甲酸酯中间体(TLC SiO2CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)；Rf＝0.27。在第2步骤中，随后进行脱苄基化以提供四盐酸盐。熔点＝267℃。MS-ESI(m/z)642.2(MH+)。分析结果C33H47N5O8·4HCl；计算值C％50.32，H％6.53，N％8.89；发现值C％50.264，H％6.57，N％8.66。
实施例28制备2-{3-[4-(3-氨基丙基-氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5aS，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例5中获得的化合物，2-氯-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺，与苄基{4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基}-(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)获得。得到苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)(4-{苄氧基羰基-[3-({[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)丙基]氨基}丁基)氨基甲酸酯中间体。TLCSiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)；Rf＝0.15。在第2步骤中，在采用氮气净化之后，加入20mg 10％的钯炭到90mg此中间体在10mlMeOH的溶液中。净化采用由氢气膨胀的气球进行，并在反应介质上保持氢气气氛1小时，同时伴有剧烈搅拌。在采用氮气净化之后，将0.1ml异丙醇HCl溶液(3.6N)加入到介质中，将催化剂滤出并采用MeOH清洗，然后蒸发滤液到干燥。将残余物溶于在20ml乙基醚中，将所得盐酸盐沉淀物过滤和然后干燥。获得20mg晶体(收率30％)。
实施例29制备2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)-丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例7中获得的化合物，2-氯-N-[9-(3，4，5-三羟基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺，与苄基{4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基}(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1998，39，439)获得。制得苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)(4-{苄氧基羰基-[3-({[(8-氧代-9(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d]间二氧杂环戊烯-5-基-氨基甲酰基)甲基}氨基)丙基]氨基}丁基)氨基甲酸酯中间体。TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 95/4.5/0.5)；Rf＝0.15.在第2步骤中，将此中间体根据实施例28的方法氢解。然后通过在乙基醚中沉淀获得四盐酸盐。熔点＝115℃；MS-ESI(m/z)613.3(MH+)。
实施例30制备2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(3，4-二羟基-5甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺具有N-苄氧基羰基保护基团的该中间体由与实施例25中相同的反应步骤获得，但使用实施例5中获得的中间体代替实施例4中获得的中间体；TLC SiO2(CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/9/1)；Rf＝0.26。根据与实施例28的第二步骤相同的工艺进行脱苄基化提供乳膏粉末形式的二盐酸盐。熔点＝94℃。此相同化合物也由碳酸苄基酯2-苄氧基羰氧基-5-[9-(2-氯乙酰基氨基)-6-氧代-5，5a，6，8，8a，9-1-六氢呋喃并[3，，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-3-甲氧基苯基酯的反应获得，它自身在实施例6中制备，根据实施例25的过程，也使用苄基4-氨基丁基氨基甲酸酯，随后进行氢解而获得。
实施例31制备2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与苄基{4-[(3-氨基丙基)苄氧基羰基氨基]丁基}氨基甲酸酯(Synthesis，1994，37)获得。获得对应的苄基(4-{苄氧基羰基-[3-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)内基]氨基}]基)氨基甲酸酯中间体。在第2步骤中，根据与实施例22中相同工艺进行脱苄基化得到三盐酸盐。熔点＝255℃；MS-ESI(m/z)585.2(MH+)。
实施例32制备2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与苄基{3-(4-氨基丁基)苄氧基羰基氨基]丙基}氨基甲酸酯获得(J.Org.Chem.，1998，63，9723)制得。获得对应的苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)-[4-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)丁基]氨基甲酸酯中间体。在第2步骤中，根据与实施例22中相同的工艺进行苄基化从而得到三盐酸盐。熔点＝199℃；MS-ESI(mlz)585.2(M+)；分析结果C30H40N4O8·3HCl；计算值C％51.92，H％6.24，N％8.07；发现值C％52.30，H％6.27，N％7.88。
实施例33制备2-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d ][1，3间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与苄基(3-氨基丙基)(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基甲酸酯(Tet.Lett.，1994，35，2057和2061)获得。获得对应的苄基(3-苄氧基羰基氨基丙基)-[3-({[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基氨基甲酰基]甲基}氨基)丙基]氨基甲酸酯中间体。在第2步骤中，根据实施例22中相同工艺进行脱苄基化从而得到三盐酸盐。MS-ESI(mlz)571.2(M+)。
实施例34制备2-{3-[3-(3-氨基丙基-氨基)丙基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与采用与实施例27类似方式制备的苄基(3-氨基丙基){3-[苄氧基羰基(3-苄氧基羰基氨基丙基)氨基]丙基}氨基甲酸酯获得。在第2步骤中，根据实施例22中相同工艺进行脱苄基化以提供2-{3-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺四盐酸盐。MS-ESI(m/z)628.1(M+)。
实施例35制备2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与采用与该方法类似的方式制备的(4-氨基丁基){4-[苄氧基羰基(4-苄氧基羰基氨基丁基)氨基]丁基}氨基甲酸苄基酯获得(Synthesis，1994，37)。在第2步骤中，在色谱纯化之后，根据与实施例22中相同的工艺进行脱苄基化从而制得2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺四盐酸盐。熔点＝263℃；MS-ESI(m/z)670.6(M+)。
实施例36制备2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与采用与该方法类似的方式制备的(4-氨基丁基)(4-苄氧基羰基氨基丁基)氨基甲酸苄基酯获得(Synthesis，1994，37)。在第2步骤中，在色谱纯化之后，根据与实施例22中相同的工艺进行脱苄基化以提供2-[4-(4-氨基丁基氨基)-丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺三盐酸盐。熔点＝225℃；MS-ESI(m/z)600.2(M+)。
实施例37制备2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺此化合物在2个步骤中根据实施例22的方法由从实施例4中获得的化合物与5-(苄氧基羰基氨基)戊基胺获得。在第2步骤中，在色谱纯化之后，根据与实施例22中相同的工艺进行脱苄基化以提供2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-二羟基-3，5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺二盐酸盐。熔点＝215℃；MS-ESI(m/z)543.1(M+)。
本发明的化合物的药理学结果体外和体内测试1)体外活性a)细胞毒性测试所用测试为对A549人类系细胞(非小细胞肺癌)生长的抑制将A 549肿瘤细胞接种在置于RPMI 1640培养基(没有酚磺酞(Seromed))中的96-池板上，向其中加入5％胎牛血清(100μl/池，1.25×104细胞/ml)。在37℃在含有5％CO2的孵育器中孵育24小时之后，将培养基用包括测试化合物的培养基代替，其后将池板另外孵育48小时。如制造商(Packard，Rungis，法国)推荐的那样，通过使用细胞溶解、荧光素酶和在ATP-Lite-MTM试剂盒中存在的荧光素溶液来测量在ATP释放进入培养基之后的荧光来评价细胞的存活。每个试验条件至少测试三次，作为六个相同的复制件。表达为IC50(M)的结果收集于表I中，该结果显示了化合物的细胞毒性。
b)检测细胞中DNA断裂的测试使用慧星测试(comets test)。在每种测试化合物各自用10μM孵育1小时之后，检测在A549细胞中DNA的断裂。依托泊苷和长春瑞滨分别用作正和负对照物。使用慧星测试揭示断裂(Br.J.Cancer，2000，83，1740)。对于每种化合物，分析二十五个细胞，并使用Komet软件计算(Kinetic Imaging，UK)平均尾素(TM)。结果采用依托泊苷的TM表达，取为统一，并在表I中收集。从而显示了本发明的产物对诱导DNA断裂的优点，它优于依托泊苷。
表I体外活性
2)体内活性本发明的化合物具有溶于水的性质，这使得可以采用浸剂、注射或口服途径给药。它们以它们的水溶性盐酸盐形式提供，它们的溶解度数值收集于表II中。
P388试验肿瘤模型。使用的模型是P388鼠白血病(Tumor Models inCafzcen Research.，Teicher，B.A.ed.，Humana Press Inc.，Totowa，NJ.，pp.23-40，2002)，它是通过连续腹膜内移植而保持在DBA/2小鼠中(DBA/2JIco，Charles River)，如在现有技术文献中所述的那样(经典的体内癌症模型用于试验治疗的小鼠模型的三个实施例。CurrentProtocols in Pharmacology Unit 5.245.24.1-5.24.16，2001)。
试验是根据已经在现有技术文献中描述的方案进行(CancerChemother.Pharmacol.，1998，41，437-447)。这包括在第零天由静脉内方式以每只小鼠106个P388白血病细胞将这些细胞植入到C2DF1杂种鼠中(CD2F1/Cr1BR，Charles River，St Aubin-les-Elbeuf，法国)。在随机将动物分配装入治疗和对照笼中之后，将要评价的化合物在第1天，在肿瘤移植之后的第一天以单一腹膜内注射给药。随后将动物每天监测，每周称重两次并记录任何临床反应。存活率是抗肿瘤活性评价的参数。存活率的增加由T/C存活率比例(％)定义，对应于(治疗组的存活率中值/对照组的存活率中值)×100。对于每个给药剂量都要计算T/C存活率比例，所获得的更大数值表示所达到的存活率的最大增加(最大活性)，它由最优存活率比例定义。在表II中说明结果，其中显示了最优T/C存活率数值。结果显示实施例9，12，25和27的化合物会使携带P388白血病的动物的存活率显著增加，这由129-157％的最优T/C存活率比例数值反映，这说明采用这些化合物对动物进行治疗可使得动物的存活率延长29-57％。具体地，根据NCI标准(National Cancer Institute)，如果T/C存活率数值至少大于120％，则认为其是显著的(Semin.Oncol.，1981，8，349-361)。
根据NCI标准，与化合物最优活性相关的动物体重的相对损失远小于毒性阈值(Ann.Oncol.，1994，5，415-422)。
B16试验肿瘤模型。使用的模型是B16黑素瘤(Tumor Models inCancer Research.，Teicher，B.A.ed.，Humana Press Inc.，Totowa，NJ.，pp.23-40，2002)，它通过连续皮下移植而保持在C57BL/6鼠中(C57BL/6NCrlBR，Charles River，St Aubin-les-Elbeuf，France)，如上所述(经典的体内癌症模型用于试验治疗的鼠模型的三个实施例。CurrentProtocols in Pharmacology Unit 5.245.24.1-5.24.16，2001)。
试验根据以上述的方案进行。将B16肿瘤组织研磨并使用Dounce均化器在0.9％无菌氯化钠溶液中均化，然后将C57BL/6鼠采用0.5ml此1g/ml制剂在第零天皮下接种入胁腹。在随机将动物分配装入治疗和对照笼中之后，将要评价的化合物在肿瘤移植之后的第3，5，7和10天经腹膜内给药。随后将动物每天监测，每周称重两次和记录任何临床反应。在试验期间每周测量肿瘤尺寸三次。计算肿瘤体积，化合物对肿瘤尺寸的活性由T/C体积比例(％)定义，对应于(治疗组的肿瘤体积中值/对照组的肿瘤体积中值)×100。在表II中说明结果，其中显示了最优T/C体积数值。结果尤其显示实施例25和27的化合物导致会肿瘤生长的显著减缓，它分别由25％和7％的最优T/C体积数值反映。具体地，根据NCI标准(National Cancer Institute)，如果T/C体积数值至少小于42％，则认为其是显著的(Cancer Res.，1991，51，4845-4852)。
表II.体内抗肿瘤活性
MX-1试验肿瘤模型。使用的模型是人乳腺癌模型(DevelopmentalTherapeutics Program，Division of Cancer Treatment，National CancerInstitute，体内癌症模型1976-1982.NIH Publication No.84 2635，Washington DCUnited States Government Printing Office，1984)，它通过连续皮下移植而保持在Swiss裸小鼠中(IcoSwiss-nu/nu，Iffa Credo，L′Arbresle，法国)，如上所述(经典的体内癌症模型用于试验治疗的鼠模型的三个实施例。Current Protocols in Pharmacology Unit 5.245.24.1-5.24.16，2001)。
试验根据以上已经所述的方案进行(Cancer Chemother.Pharmacol.，1998，41，437-447)。在第零天，将MX-1肿瘤的片段皮下移植入Swiss裸小鼠的胁腹。在将它们随机分配进入治疗和对照笼中之后，将要评价的化合物在肿瘤移植之后的第7，9，11，14，16和18天经腹膜内给药。随后将动物每天监测，每周称重两次和记录任何临床反应。在试验期间每周测量肿瘤尺寸三次。计算肿瘤体积，化合物对肿瘤尺寸的活性由T/C体积比例(％)定义，对应于(治疗组的肿瘤体积中值/对照组的肿瘤体积中值)×100。在表II中收集结果。实施例25的化合物对于10mg/kg的治疗显示51％的T/C体积比例(％)，实施例27的化合物对于2.5mg/kg的治疗显示0％的T/C体积比例(％)，从而说明肿瘤的完全根除。
权利要求
1.一种通式(I)的化合物；或它们与无机或有机酸形成的药学可接受的盐，特别是它们的加成盐， 其中·R1和R2彼此独立地表示氢原子或甲基；·R3和A一起形成C3-C8环或R3表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，A表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基、苄基或通式(II)的基团 其中a为2-5，R4和B一起形成C3-C8环，或R4表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，R3和R4可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，和B表示选自如下的基团-氢原子、-C1-C4烷基、-苄基，或-通式(III)的基团 其中b和c可彼此独立地为2-5，R5到R7彼此独立地表示选自如下的基团氢原子、C1-C4烷基或苄基，R4和R5和/或R5和R6和/或R6和R7可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接；-或通式(IV)的基团 其中c可以为2-5，R8和R9每个彼此独立地表示氢原子或C1-C5烷基，R4和R8可以由包括2或3个碳原子的亚烷基链连接，或R8和R9一起形成C3-C8环。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于R3到R9彼此独立地表示氢原子或C1-C4烷基，有利地为氢原子或甲基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于R3表示氢原子或甲基，A表示氢原子、甲基或通式(II)的基团，其中R4表示氢原子、甲基或乙基，B表示选自如下的基团-氢原子，-甲基，-乙基，-通式(III)的基团，其中R5，R6和R7表示氢原子、C1-C4烷基或苄基，或-通式(IV)的基团，其中R8和R9相同，表示氢原子或甲基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于它们选自如下化合物和它们与无机或有机酸形成的加成盐2-(2-二甲基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(2-(吗啉-4-基)乙基氨基)乙酰胺2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-二甲基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌啶-1-基)乙酰胺2-苄基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺2-(4-苄基哌嗪-1-基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-乙基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-(丙基氨基)乙酰胺2-丁基氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-o xo-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基乙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-二乙基氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-氨基-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(2-氨基乙基氨基)N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-氨基丙基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5aS，6，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{3-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]丙基氨基}-N-[8-氧代-9-(3，4，5-三羟基苯基)-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(4-氨基丁基氨基)-N-[9-(3，4-二羟基-5-甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(4-氨基丁基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(3-氨基丙基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(3-[3-(3-氨基丙基氨基)丙基氨基]丙基氨基).N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a；9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-{4-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]丁基氨基}-N-[9-(4-羟基-3，5二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-[4-(4-氨基丁基氨基)丁基氨基]-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺2-(5-氨基戊基氨基)-N-[9-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-8-氧代-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并[3′，4′6，7]萘并[2，3-d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙酰胺。
5.根据前述权利要求任意一项所述的化合物的制备方法，其特征在于它包括如下连续步骤a)从通式(VIII)的鬼臼毒素开始 b)如果需要，由通式(V)化合物的脱甲基化来制备 其中R1和R2如在通式(I)化合物中所定义；然后c)通式(V)或(VIII)的化合物与氯乙腈在酸性介质中进行反应，然后，如果需要，进行脱甲基化反应，以提供通式(VI)的化合物 其中R1和R2如在通式(I)的化合物中所定义；然后d)在包括极性非质子溶剂的溶剂混合物中，在路易斯碱存在下，通式(VI)的化合物与通式(VII)的化合物进行反应 其中R3和A如在通式(I)化合物中所定义，基团A中任选存在的胺由适当的保护基团保护。
6.根据权利要求5所示的方法，其特征在于当反应在环境温度下进行时，用于步骤d)的极性非质子溶剂是乙腈和二甲基甲酰胺(DMF)。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于用于步骤d)的碱是三乙胺。
8.根据权利要求5所示的通式(V)的中间体化合物，其中R1，R2和R3表示氢原子。
9.根据权利要求1-4任意一项所述的通式(I)的化合物作为药物。
10.一种药物组合物，其特征在于它包括根据权利要求1-4任意一项所述的通式(I)的至少一种化合物，和适用于经由口服或非肠道途径给药的赋形剂。
11.根据权利要求1-4任意一项所述的通式(I)化合物在制备用于如下非实体肿瘤和实体肿瘤抗癌治疗的药物中的用途，所述非实体肿瘤和实体肿瘤如黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或肝癌、卵巢癌、白血病，特别地淋巴瘤和骨髓瘤、ENT癌和脑癌。
12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述药物包括a)通式(I)的化合物和b)抗癌药，作为组合产物使用，用于同时、单独或随时间推进治疗癌症和/或肿瘤。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于所述抗癌药物选自铂衍生物、紫杉类、长春药属或5-FU。
14.根据权利要求12或13所述的用途，其特征在于所述药物用于治疗对常规治疗耐药的肿瘤。
全文摘要
本发明涉及在4－位置由取代的(多)氨基烷基氨基乙酰胺链取代的新型鬼臼毒素衍生物，涉及它们的制备方法和它们作为抗癌药物的用途。
文档编号A61P35/00GK1946727SQ200580012303
公开日2007年4月11日 申请日期2005年4月14日 优先权日2004年4月16日
发明者T·因贝特, Y·古明斯基, J-M·巴雷特, A·克鲁琴斯基 申请人:皮埃尔法布雷医药公司
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