银杏叶提取物及其制备方法
专利名称：银杏叶提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种银杏叶提取物及其制备方法。特别涉及一种在所希望的药物有效成分方面具有提高的含量的银杏叶提取物，还涉及仅使用水或醇作为提取剂的方法。
银杏树(Ginkgo biloba L.)叶片的提取物和由其制备的药用制剂是广泛的药用研究对象，并在药品和化妆品领域中得以应用。在药品领域中的应用，银杏叶提取物首先用于治疗末梢动脉血流障碍和血管障碍，用于治疗脑器官相关性障碍，如记忆力障碍和注意力障碍、头痛和耳鸣。
研究表明，银杏叶含有超过70种不同成分，如黄酮糖苷、槲皮素、异鼠李素、山奈酚、银杏黄素、异银杏黄素、银杏苦内酯A、B、C和J、白果内酯和其他更多成分。银杏叶提取物的药用效果主要归结于银杏黄酮糖苷、银杏苦内酯和白果内酯。
所述的单独成分显示与银杏叶或叶片的提取物相似的药用效果，但是，其有效性比叶片或其提取物要小。这也许是由于这些成分显示出协同作用。还可以预料的是，叶片中各别有效的成分尚没有确定。
除了所希望的药用有效成分，银杏叶还含有不希望的成分，它们可能引起严重的过敏反应。因此，已经有报道关于与银杏叶或银杏果接触之后的过敏反应(见W.F.Sowers等人，Arch.Dermatol.，卷91(1965)，452)。引起这些过敏反应的物质被确定为烷基酚化合物，如银杏酚酸和银杏酚、前花青素以及它们的间苯二酚衍生物(见J.Gellermann等人，Phytochemistry，卷15(1976)，1959)。
为了达到所希望的药用效果，显然可以直接应用银杏叶。但是，这样做的缺点是会引入不希望的过敏成分。此外，银杏叶成分的含量变化很大，因此不具有目的性配制的药品用途。
为解决此问题，已经提出了应用具有相对恒定有效成分量的银杏叶提取物。现有技术中存在很多合适的提取方法的方案，以及具有确定有效成分量的提取物制备方案。
DE2117429中提出了银杏叶提取物的制备方法，用含水丙酮提取银杏叶，用四氯化碳、丁酮和乙酮提取所得提取物，并用所得溶液与氢氧化铅进行沉淀反应。通过进一步的方法步骤，最终得到提取物。
EP0431535公开了一种方法，在此方法中，用含水丙酮、含水烷醇或无水甲醇提取干燥的银杏叶，在进一步的方法步骤中，使用其他有机溶剂如甲乙酮。
国际专利申请WO00/01397中记载了一种提取方法，在该方法中，用醇-水溶剂或酮-水溶剂提取银杏叶，所得提取物随即进行超滤。
现有技术中所述的提取方法全部都有缺点，它们用环境难以负荷的或生理上难以接受的有机溶剂进行操作，这一方面会污染最终所得的提取物，此外，在环境政策、安全政策和非最后的经济性的方面，这种应用是有缺陷的。现有技术提出的用重金属化合物作为沉淀反应剂也是有缺点的，因为所得提取物会被重金属污染。
另外，前述方法的缺点还有，得到的提取物，其所希望成分的含量相对较低。EP0431535如此报道称，提取物具有最高30重量％的黄酮糖苷、最高4.5重量％银杏苦内酯和最高4重量％白果内酯，其中不希望的烷基酚化合物含量低于10ppm。物质特征符合专题论著“银杏干提取”的要求，该论文由前联邦德国联邦卫生部的E委员会做出。
在国际专利申请WO2004/014405中述及了一种银杏叶提取物，其含有5.5-8％的银杏苦内酯A、B、C和J，40-60％的黄酮糖苷以及5-7％白果内酯。以此方法得到的提取物在烷基酚化合物与前花青素的含量方面同样很少。
本发明的任务是，提供一种银杏叶提取物的制备方法，而不需要应用环境难以承受的或生理难以接受的有机溶剂。
本发明的另一个任务是，提供一种银杏叶提取物，其不会因为有机溶剂和/或重金属而受到污染。
本发明的另外一个任务是，提供一种银杏叶提取物，其具有较高含量的所希望成分，即黄酮糖苷、银杏苦内酯和/或白果内酯，同时，其具有极少量的令人担忧的毒性过敏成分。
本发明的任务由独立权利要求的技术方案解决。
从属权利要求限定了本发明所述方法和提取物优选的实施方案。
在以本发明为基础的实验范畴内，令人惊讶地发现，具有论文级别物质性能的银杏叶提取物可以用该方法制备，在该方法中，仅用水作为溶剂。这种方法主要包括以下步骤1.用一种碱性水溶液，优选用饱和石灰水处理银杏叶，优选生态种植的叶片。经过将银杏叶浸渍在碱性水溶液中的处理步骤，首先去除了叶片的表面污渍，并破坏其蜡质层。其中叶片被再水合，也即，叶片细胞吸水并泡涨。优选将叶片在pH值为约8.5的水中浸渍约4小时的时间。接着，倒出用于处理的水，并用水清洗留下来的叶片。
2.由步骤1所得叶片用水提取，可以是普通自来水，但是优选去矿物质水或者蒸馏水。所使用的水量为约5-20倍的叶片干重，优选为5-15倍，最优选为8-10倍。提取可以在室温或在介于40和70℃的稍提高的温度下完成，优选较低温度，目的在于防止水解。
可以借助常规方法完成提取，如通过简单浸渍、渗萃、超声提取或通过机械搅拌。根据所选择的提取方法，在0.5-5小时的时间中完成提取。
3.然后，将所得提取物在应用常规技术和材料的条件下过滤，用以除去大颗粒。可以使用过滤纸或滤网(Filtergewebe)、硅藻土或其类似物。过滤可以在常压、高压或负压下完成。
然后，将已过滤的提取物用多个常规超滤膜进行超滤。优选将提取物首先经过具有平均孔径约10000道尔顿的膜，之后，经过孔径约6000道尔顿的膜，然后经过孔径约2000道尔顿的膜。可以使用商购的由聚酰胺、聚丙烯或其他常规材料制成的过滤器。
由于超滤，用粗膜首先分离较大分子，如蜡质成分、蛋白质、鞣酸或多糖，用细膜分离较小分子，如蛋白质、淀粉或寡糖。
4.然后，将超滤后所得提取物进行反向渗透，可以使用普通的半通过膜和反向渗透装置。例如可以使用醋酸纤维素酯膜，在4.5MPa压力下完成反向渗透，该压力可以适应各次的要求。经过反向渗透，分离了重金属和较小的糖分子。
5.然后，将超滤之后所得提取物提供给色谱吸收柱。该吸收柱用吸收介质充满，其能够吸收过敏物质，如银杏酚酸，而不会与所希望的提取物成分起反应。特别是大孔吸收树脂或活性炭用作固定相。事实证明，在基于本发明的研究范畴中，用银杏果壳制备的碳(由炭化的银杏果壳制成的活性炭)也可以用作合适的吸收材料。特别优选的树脂是商品名为GARA1和GARA2的商购树脂，来自于Firma WoxunBioengineering Ltd.，上海，中国或三菱SP700。
用前述方法获得的提取物可以通过常规方法干燥，例如任选地减压条件下进行蒸馏或者冻干。所得提取物具有的物质特征，其符合前联邦德国联邦卫生部的E委员会所制订的专题论著“银杏叶干燥提取”的要求。其典型地含有24-27重量％黄酮糖苷，3.5-4重量％银杏苦内酯和2.4-2.6重量％白果内酯，低于10ppm，甚至低于2ppm的烷基酚化合物和低于10重量％的前花青素。提取物的重金属铅的含量低于0.12mg/kg，镉的含量低于0.1mg/kg以及汞的含量低于0.08mg/kg。借助前述方法所得干燥提取物的水溶性为高于1.2g/100ml水。
根据本发明表明，实施进一步的方法步骤，能使得黄酮糖苷、银杏苦内酯和白果内酯在提取物中的含量进一步明显提高。
根据上述步骤5所得含水提取物还可以被引入色谱柱，该色谱柱含有作为固定相的吸收树脂，优选基于横向交联的聚苯乙烯，优选三菱公司的商标为Diaion和Sepabeads的市售树脂，特别优选三菱公司的Diaion HP20市售树脂。用水洗涤承载树脂，接着用醇-水溶液冲洗，最后洗脱含有所希望成分的提取物，从而可以得到具有多种物质特征的提取物。可以逐渐提高醇的浓度进行多次醇-水溶液的冲洗，醇浓度优选介于10和25％之间。
例如在第一步中可以用10％的醇，在第二步可以用20％的醇洗涤，以使其他不希望的成分分离。用于冲洗的醇水溶液含有至多25％，优选10-20％的小分子醇，如异丙醇、甲醇和乙醇，其中特别优选乙醇。倒掉冲洗之后所得溶液，使用水-醇溶液用于随后的提取物洗脱，其含有至少75％前述醇，优选为乙醇。根据所选条件，获得具有下列物质特征的提取物黄酮糖苷 8.0-52重量％银杏苦内酯A、B、C、J 2.8-41重量％白果内酯 2.6-39重量％前花青素 1-20重量％烷基酚低于2.0ppm鞣酸 低于5重量％所有重量均以所得干燥提取物重量计。
在本发明的方法的应用下，由此可以得到所希望的成分(黄酮糖苷、银杏苦内酯和白果内酯)含量明显高过已知提取物的银杏叶提取物，所不希望的过敏物质含量升高不明显，并且符合专题论著的标准。
以下实施例进一步阐明了本发明。
实施例1常温下，50kg干燥银杏叶浸渍在pH值为9.5的饱和石灰水中，直到叶片吸水到饱和。倒出石灰水并将其舍弃。然后，用纯水洗涤保留下来的叶片并将其磨碎。之后，将其与450kg去离子水混和，并用超声提取1.5小时。在超声处理过程中水温逐渐升高，并保持在45至最高48℃。
提取结束后，粗粒状残留物通过过滤器分离。然后，所得提取物经过孔径10000道尔顿的聚丙烯超滤膜，随后经过孔径6000道尔顿的超滤膜，最后经过孔径2000道尔顿的超滤膜。通过使用醋酸纤维素酯膜，将最终所得提取物反向渗透。在4.5MPa时，盐透过率为至少95重量％，水透过率为90-120l/m2。
所得提取物经过直径30cm、高1.2m的色谱柱，其中填充炭化的银杏果壳。在该色谱分离在常温常压下完成。
应用上述反向渗透膜，洗提液被浓缩至质量小于8kg，最后喷洒干燥，以获得1.4kg提取物。
所得提取物借助HPLC进行分析。总黄酮量为26.7重量％，银杏苦内酯A、B和C的量为3.54重量％，白果内酯的量为2.58重量％，银杏酚酸1(a和b)的量为0.39或3.37ppm，银杏酚酸2的量低于0.3ppm，重金属铅的量低于0.12mg/kg，镉的量低于0.1mg/kg，汞的量低于0.08mg/kg(重量百分数以所得干燥提取物总量计)。
实施例21kg干燥银杏叶放入8kg以CaO饱和的水中(每升水约120g CaO)，并在室温下保持半小时。之后，倒出水，并用去离子水洗涤潮湿的叶片。然后，每100g叶片加入一升水，将配制液在超声液中处理约45分钟(约20-24kHz)。然后，将所得含水提取物分离并保存。以100g叶片一升水的比例再添加水之后，重新进行超声处理，所得含水提取物与紧接得到的提取物合并。
合并的提取物以15000U/min离心，并将固体物质和油成分从提取物分离。
所得提取物用Millipore Labscale TTF Pellicon XL超滤系统过滤，其使用了孔径为10000道尔顿、8000道尔顿和5000道尔顿的超滤膜。随后，使用孔径为3000道尔顿和1000道尔顿的膜过滤。所得过滤物用醋酸纤维素酯膜进行反向渗透。4.5MPa时，盐透过率为至少95重量％，水透过率为90-120l/m2。
将所得提取物通过一个装填树脂Gara 1的色谱柱，用以去除银杏酚酸。每100ml提取物使用5g树脂。在常压下完成色谱分离。
前述步骤之后，将所得液体通过色谱柱，用以去除前花青素，该色谱柱装填树脂Diaion HP2MGL。每100ml提取物使用5g树脂。在常温常压下完成色谱分离。
将所得液体提供给装有树脂三菱Diaion HP20的色谱柱，每100ml液体使用2g树脂。一旦色谱柱分离出某种茶色成分，停止该过程。之后，用纯水并接着用10％含水乙醇溶液洗涤该柱。倒去洗涤溶液。然后，用75％乙醇-水溶液洗脱色谱柱，获取所得液体。所得液体在低温下干燥，以得到所希望的提取物。
随着用于洗涤色谱柱的乙醇-水溶液浓度变化，提取物具有以下物质特征a)提取物组成黄酮糖苷 39重量％银杏苦内酯A、B、C和J 2.9重量％白果内酯 2.78重量％前花青素 10.5重量％烷基酚 ＜0.7ppm鞣酸 ＜5重量％b)提取物组成黄酮糖苷 35重量％银杏苦内酯A、B、C和J 6.67重量％白果内酯 6.49重量％前花青素 14重量％烷基酚 ＜0.70ppm鞣酸 ＜5重量％c)提取物组成黄酮糖苷 31重量％银杏苦内酯A、B、C和J 10重量％白果内酯 9重量％前花青素 11重量％烷基酚 ＜0.70ppm鞣酸 ＜5重量％d)提取物组成黄酮糖苷 18重量％银杏苦内酯A、B、C和J 21.23重量％
白果内酯 20.17重量％前花青素 14重量％烷基酚＜0.70ppm鞣酸 ＜5重量％e)提取物组成黄酮糖苷 49重量％银杏苦内酯A、B、C和J 3重量％白果内酯 2.7重量％前花青素 ＜2重量％烷基酚＜3ppm鞣酸 ＜1重量％f)提取物组成黄酮糖苷 51.5重量％银杏苦内酯A、B、C和J 2.8重量％白果内酯 2.6重量％前花青素 ＜2重量％烷基酚＜3ppm鞣酸 ＜1重量％(所有的重量％均以干燥提取物重量计)实施例表明，使用本发明的方法，可以从银杏叶得到干燥的提取物，其所希望成分的含量显著提高，同时，所不希望的过敏成分含量很低。
本发明的提取物能够制备具有高有效物质含量的药用和化妆品用组合物。其本身即可毫无问题地加工成常规药用组合物，优选为片剂、注射液和口头给药的溶液。
实施例3应用实施例1和2的提取物，制备用于口头给药的下列组成的溶液
银杏叶提取物 3.0g乙醇 50.0g用于注射目的的水 加至100ml实施例4应用实施例1和2的提取物，制备下列组成的片剂银杏叶提取物 30.00mg微晶纤维素 100.00mg乳糖 60.00mg胶状二氧化硅 20.00mg硬脂酸镁 3.00mgHPMC 10.00mg滑石 0.5mg
权利要求
1.银杏叶提取物，其含有大于8重量％的银杏苦内酯A、B、C和J(总量)和/或大于7重量％的白果内酯。
2.根据权利要求1的提取物，其含有小于10ppm的烷基酚化合物和小于20重量％的前花青素。
3.根据权利要求1或2的提取物，其含有-大于30重量％至最多60重量％的黄酮糖苷，-大于8重量％至最多40重量％的银杏苦内酯A、B、C和J(总量)，-大于7.0至最多35重量％的白果内酯，-小于10ppm的烷基酚化合物，以及-小于20重量％的前花青素。
4.制备银杏叶提取物的方法，包括以下步骤-用pH值大于约8.5的水处理银杏叶，直至叶片用水饱和；-用水提取所得叶片；-过滤所得提取物；-用大孔吸收树脂或活性炭将所得提取物进行色谱清洗，以及-用吸收树脂将前一步骤所得提取物进行色谱清洗。
5.根据权利要求4的方法，其特征在于，用饱和石灰水进行提取。
6.根据权利要求4或5的方法，其特征在于，过滤步骤包括超滤。
7.根据权利要求6的方法，其特征在于，用孔径10000道尔顿、6000道尔顿和2000道尔顿的膜进行超滤。
8.根据权利要求4-7之一的方法，其特征在于，最后的色谱清洗包括用至多25％的醇-水溶液进行冲洗，用至少75％的醇-水溶液进行提取物的洗脱。
9.根据权利要求8的方法，其特征在于，乙醇用作所述醇。
10.含有权利要求1-8之一所述银杏叶提取物的药剂。
全文摘要
本发明涉及一种银杏叶提取物及其制备方法。本发明特别涉及一种具有在希望的药用有效活性成分上有较高含量的银杏叶提取物，还涉及用水作为提取剂的方法。
文档编号A61K127/00GK1946413SQ200580012761
公开日2007年4月11日 申请日期2005年4月29日 优先权日2004年4月29日
发明者付元辉 申请人:格泰克有限公司
技术领域：
本发明涉及一种银杏叶提取物及其制备方法。特别涉及一种在所希望的药物有效成分方面具有提高的含量的银杏叶提取物，还涉及仅使用水或醇作为提取剂的方法。
银杏树(Ginkgo biloba L.)叶片的提取物和由其制备的药用制剂是广泛的药用研究对象，并在药品和化妆品领域中得以应用。在药品领域中的应用，银杏叶提取物首先用于治疗末梢动脉血流障碍和血管障碍，用于治疗脑器官相关性障碍，如记忆力障碍和注意力障碍、头痛和耳鸣。
研究表明，银杏叶含有超过70种不同成分，如黄酮糖苷、槲皮素、异鼠李素、山奈酚、银杏黄素、异银杏黄素、银杏苦内酯A、B、C和J、白果内酯和其他更多成分。银杏叶提取物的药用效果主要归结于银杏黄酮糖苷、银杏苦内酯和白果内酯。
所述的单独成分显示与银杏叶或叶片的提取物相似的药用效果，但是，其有效性比叶片或其提取物要小。这也许是由于这些成分显示出协同作用。还可以预料的是，叶片中各别有效的成分尚没有确定。
除了所希望的药用有效成分，银杏叶还含有不希望的成分，它们可能引起严重的过敏反应。因此，已经有报道关于与银杏叶或银杏果接触之后的过敏反应(见W.F.Sowers等人，Arch.Dermatol.，卷91(1965)，452)。引起这些过敏反应的物质被确定为烷基酚化合物，如银杏酚酸和银杏酚、前花青素以及它们的间苯二酚衍生物(见J.Gellermann等人，Phytochemistry，卷15(1976)，1959)。
为了达到所希望的药用效果，显然可以直接应用银杏叶。但是，这样做的缺点是会引入不希望的过敏成分。此外，银杏叶成分的含量变化很大，因此不具有目的性配制的药品用途。
为解决此问题，已经提出了应用具有相对恒定有效成分量的银杏叶提取物。现有技术中存在很多合适的提取方法的方案，以及具有确定有效成分量的提取物制备方案。
DE2117429中提出了银杏叶提取物的制备方法，用含水丙酮提取银杏叶，用四氯化碳、丁酮和乙酮提取所得提取物，并用所得溶液与氢氧化铅进行沉淀反应。通过进一步的方法步骤，最终得到提取物。
EP0431535公开了一种方法，在此方法中，用含水丙酮、含水烷醇或无水甲醇提取干燥的银杏叶，在进一步的方法步骤中，使用其他有机溶剂如甲乙酮。
国际专利申请WO00/01397中记载了一种提取方法，在该方法中，用醇-水溶剂或酮-水溶剂提取银杏叶，所得提取物随即进行超滤。
现有技术中所述的提取方法全部都有缺点，它们用环境难以负荷的或生理上难以接受的有机溶剂进行操作，这一方面会污染最终所得的提取物，此外，在环境政策、安全政策和非最后的经济性的方面，这种应用是有缺陷的。现有技术提出的用重金属化合物作为沉淀反应剂也是有缺点的，因为所得提取物会被重金属污染。
另外，前述方法的缺点还有，得到的提取物，其所希望成分的含量相对较低。EP0431535如此报道称，提取物具有最高30重量％的黄酮糖苷、最高4.5重量％银杏苦内酯和最高4重量％白果内酯，其中不希望的烷基酚化合物含量低于10ppm。物质特征符合专题论著“银杏干提取”的要求，该论文由前联邦德国联邦卫生部的E委员会做出。
在国际专利申请WO2004/014405中述及了一种银杏叶提取物，其含有5.5-8％的银杏苦内酯A、B、C和J，40-60％的黄酮糖苷以及5-7％白果内酯。以此方法得到的提取物在烷基酚化合物与前花青素的含量方面同样很少。
本发明的任务是，提供一种银杏叶提取物的制备方法，而不需要应用环境难以承受的或生理难以接受的有机溶剂。
本发明的另一个任务是，提供一种银杏叶提取物，其不会因为有机溶剂和/或重金属而受到污染。
本发明的另外一个任务是，提供一种银杏叶提取物，其具有较高含量的所希望成分，即黄酮糖苷、银杏苦内酯和/或白果内酯，同时，其具有极少量的令人担忧的毒性过敏成分。
本发明的任务由独立权利要求的技术方案解决。
从属权利要求限定了本发明所述方法和提取物优选的实施方案。
在以本发明为基础的实验范畴内，令人惊讶地发现，具有论文级别物质性能的银杏叶提取物可以用该方法制备，在该方法中，仅用水作为溶剂。这种方法主要包括以下步骤1.用一种碱性水溶液，优选用饱和石灰水处理银杏叶，优选生态种植的叶片。经过将银杏叶浸渍在碱性水溶液中的处理步骤，首先去除了叶片的表面污渍，并破坏其蜡质层。其中叶片被再水合，也即，叶片细胞吸水并泡涨。优选将叶片在pH值为约8.5的水中浸渍约4小时的时间。接着，倒出用于处理的水，并用水清洗留下来的叶片。
2.由步骤1所得叶片用水提取，可以是普通自来水，但是优选去矿物质水或者蒸馏水。所使用的水量为约5-20倍的叶片干重，优选为5-15倍，最优选为8-10倍。提取可以在室温或在介于40和70℃的稍提高的温度下完成，优选较低温度，目的在于防止水解。
可以借助常规方法完成提取，如通过简单浸渍、渗萃、超声提取或通过机械搅拌。根据所选择的提取方法，在0.5-5小时的时间中完成提取。
3.然后，将所得提取物在应用常规技术和材料的条件下过滤，用以除去大颗粒。可以使用过滤纸或滤网(Filtergewebe)、硅藻土或其类似物。过滤可以在常压、高压或负压下完成。
然后，将已过滤的提取物用多个常规超滤膜进行超滤。优选将提取物首先经过具有平均孔径约10000道尔顿的膜，之后，经过孔径约6000道尔顿的膜，然后经过孔径约2000道尔顿的膜。可以使用商购的由聚酰胺、聚丙烯或其他常规材料制成的过滤器。
由于超滤，用粗膜首先分离较大分子，如蜡质成分、蛋白质、鞣酸或多糖，用细膜分离较小分子，如蛋白质、淀粉或寡糖。
4.然后，将超滤后所得提取物进行反向渗透，可以使用普通的半通过膜和反向渗透装置。例如可以使用醋酸纤维素酯膜，在4.5MPa压力下完成反向渗透，该压力可以适应各次的要求。经过反向渗透，分离了重金属和较小的糖分子。
5.然后，将超滤之后所得提取物提供给色谱吸收柱。该吸收柱用吸收介质充满，其能够吸收过敏物质，如银杏酚酸，而不会与所希望的提取物成分起反应。特别是大孔吸收树脂或活性炭用作固定相。事实证明，在基于本发明的研究范畴中，用银杏果壳制备的碳(由炭化的银杏果壳制成的活性炭)也可以用作合适的吸收材料。特别优选的树脂是商品名为GARA1和GARA2的商购树脂，来自于Firma WoxunBioengineering Ltd.，上海，中国或三菱SP700。
用前述方法获得的提取物可以通过常规方法干燥，例如任选地减压条件下进行蒸馏或者冻干。所得提取物具有的物质特征，其符合前联邦德国联邦卫生部的E委员会所制订的专题论著“银杏叶干燥提取”的要求。其典型地含有24-27重量％黄酮糖苷，3.5-4重量％银杏苦内酯和2.4-2.6重量％白果内酯，低于10ppm，甚至低于2ppm的烷基酚化合物和低于10重量％的前花青素。提取物的重金属铅的含量低于0.12mg/kg，镉的含量低于0.1mg/kg以及汞的含量低于0.08mg/kg。借助前述方法所得干燥提取物的水溶性为高于1.2g/100ml水。
根据本发明表明，实施进一步的方法步骤，能使得黄酮糖苷、银杏苦内酯和白果内酯在提取物中的含量进一步明显提高。
根据上述步骤5所得含水提取物还可以被引入色谱柱，该色谱柱含有作为固定相的吸收树脂，优选基于横向交联的聚苯乙烯，优选三菱公司的商标为Diaion和Sepabeads的市售树脂，特别优选三菱公司的Diaion HP20市售树脂。用水洗涤承载树脂，接着用醇-水溶液冲洗，最后洗脱含有所希望成分的提取物，从而可以得到具有多种物质特征的提取物。可以逐渐提高醇的浓度进行多次醇-水溶液的冲洗，醇浓度优选介于10和25％之间。
例如在第一步中可以用10％的醇，在第二步可以用20％的醇洗涤，以使其他不希望的成分分离。用于冲洗的醇水溶液含有至多25％，优选10-20％的小分子醇，如异丙醇、甲醇和乙醇，其中特别优选乙醇。倒掉冲洗之后所得溶液，使用水-醇溶液用于随后的提取物洗脱，其含有至少75％前述醇，优选为乙醇。根据所选条件，获得具有下列物质特征的提取物黄酮糖苷 8.0-52重量％银杏苦内酯A、B、C、J 2.8-41重量％白果内酯 2.6-39重量％前花青素 1-20重量％烷基酚低于2.0ppm鞣酸 低于5重量％所有重量均以所得干燥提取物重量计。
在本发明的方法的应用下，由此可以得到所希望的成分(黄酮糖苷、银杏苦内酯和白果内酯)含量明显高过已知提取物的银杏叶提取物，所不希望的过敏物质含量升高不明显，并且符合专题论著的标准。
以下实施例进一步阐明了本发明。
实施例1常温下，50kg干燥银杏叶浸渍在pH值为9.5的饱和石灰水中，直到叶片吸水到饱和。倒出石灰水并将其舍弃。然后，用纯水洗涤保留下来的叶片并将其磨碎。之后，将其与450kg去离子水混和，并用超声提取1.5小时。在超声处理过程中水温逐渐升高，并保持在45至最高48℃。
提取结束后，粗粒状残留物通过过滤器分离。然后，所得提取物经过孔径10000道尔顿的聚丙烯超滤膜，随后经过孔径6000道尔顿的超滤膜，最后经过孔径2000道尔顿的超滤膜。通过使用醋酸纤维素酯膜，将最终所得提取物反向渗透。在4.5MPa时，盐透过率为至少95重量％，水透过率为90-120l/m2。
所得提取物经过直径30cm、高1.2m的色谱柱，其中填充炭化的银杏果壳。在该色谱分离在常温常压下完成。
应用上述反向渗透膜，洗提液被浓缩至质量小于8kg，最后喷洒干燥，以获得1.4kg提取物。
所得提取物借助HPLC进行分析。总黄酮量为26.7重量％，银杏苦内酯A、B和C的量为3.54重量％，白果内酯的量为2.58重量％，银杏酚酸1(a和b)的量为0.39或3.37ppm，银杏酚酸2的量低于0.3ppm，重金属铅的量低于0.12mg/kg，镉的量低于0.1mg/kg，汞的量低于0.08mg/kg(重量百分数以所得干燥提取物总量计)。
实施例21kg干燥银杏叶放入8kg以CaO饱和的水中(每升水约120g CaO)，并在室温下保持半小时。之后，倒出水，并用去离子水洗涤潮湿的叶片。然后，每100g叶片加入一升水，将配制液在超声液中处理约45分钟(约20-24kHz)。然后，将所得含水提取物分离并保存。以100g叶片一升水的比例再添加水之后，重新进行超声处理，所得含水提取物与紧接得到的提取物合并。
合并的提取物以15000U/min离心，并将固体物质和油成分从提取物分离。
所得提取物用Millipore Labscale TTF Pellicon XL超滤系统过滤，其使用了孔径为10000道尔顿、8000道尔顿和5000道尔顿的超滤膜。随后，使用孔径为3000道尔顿和1000道尔顿的膜过滤。所得过滤物用醋酸纤维素酯膜进行反向渗透。4.5MPa时，盐透过率为至少95重量％，水透过率为90-120l/m2。
将所得提取物通过一个装填树脂Gara 1的色谱柱，用以去除银杏酚酸。每100ml提取物使用5g树脂。在常压下完成色谱分离。
前述步骤之后，将所得液体通过色谱柱，用以去除前花青素，该色谱柱装填树脂Diaion HP2MGL。每100ml提取物使用5g树脂。在常温常压下完成色谱分离。
将所得液体提供给装有树脂三菱Diaion HP20的色谱柱，每100ml液体使用2g树脂。一旦色谱柱分离出某种茶色成分，停止该过程。之后，用纯水并接着用10％含水乙醇溶液洗涤该柱。倒去洗涤溶液。然后，用75％乙醇-水溶液洗脱色谱柱，获取所得液体。所得液体在低温下干燥，以得到所希望的提取物。
随着用于洗涤色谱柱的乙醇-水溶液浓度变化，提取物具有以下物质特征a)提取物组成黄酮糖苷 39重量％银杏苦内酯A、B、C和J 2.9重量％白果内酯 2.78重量％前花青素 10.5重量％烷基酚 ＜0.7ppm鞣酸 ＜5重量％b)提取物组成黄酮糖苷 35重量％银杏苦内酯A、B、C和J 6.67重量％白果内酯 6.49重量％前花青素 14重量％烷基酚 ＜0.70ppm鞣酸 ＜5重量％c)提取物组成黄酮糖苷 31重量％银杏苦内酯A、B、C和J 10重量％白果内酯 9重量％前花青素 11重量％烷基酚 ＜0.70ppm鞣酸 ＜5重量％d)提取物组成黄酮糖苷 18重量％银杏苦内酯A、B、C和J 21.23重量％
白果内酯 20.17重量％前花青素 14重量％烷基酚＜0.70ppm鞣酸 ＜5重量％e)提取物组成黄酮糖苷 49重量％银杏苦内酯A、B、C和J 3重量％白果内酯 2.7重量％前花青素 ＜2重量％烷基酚＜3ppm鞣酸 ＜1重量％f)提取物组成黄酮糖苷 51.5重量％银杏苦内酯A、B、C和J 2.8重量％白果内酯 2.6重量％前花青素 ＜2重量％烷基酚＜3ppm鞣酸 ＜1重量％(所有的重量％均以干燥提取物重量计)实施例表明，使用本发明的方法，可以从银杏叶得到干燥的提取物，其所希望成分的含量显著提高，同时，所不希望的过敏成分含量很低。
本发明的提取物能够制备具有高有效物质含量的药用和化妆品用组合物。其本身即可毫无问题地加工成常规药用组合物，优选为片剂、注射液和口头给药的溶液。
实施例3应用实施例1和2的提取物，制备用于口头给药的下列组成的溶液
银杏叶提取物 3.0g乙醇 50.0g用于注射目的的水 加至100ml实施例4应用实施例1和2的提取物，制备下列组成的片剂银杏叶提取物 30.00mg微晶纤维素 100.00mg乳糖 60.00mg胶状二氧化硅 20.00mg硬脂酸镁 3.00mgHPMC 10.00mg滑石 0.5mg
权利要求
1.银杏叶提取物，其含有大于8重量％的银杏苦内酯A、B、C和J(总量)和/或大于7重量％的白果内酯。
2.根据权利要求1的提取物，其含有小于10ppm的烷基酚化合物和小于20重量％的前花青素。
3.根据权利要求1或2的提取物，其含有-大于30重量％至最多60重量％的黄酮糖苷，-大于8重量％至最多40重量％的银杏苦内酯A、B、C和J(总量)，-大于7.0至最多35重量％的白果内酯，-小于10ppm的烷基酚化合物，以及-小于20重量％的前花青素。
4.制备银杏叶提取物的方法，包括以下步骤-用pH值大于约8.5的水处理银杏叶，直至叶片用水饱和；-用水提取所得叶片；-过滤所得提取物；-用大孔吸收树脂或活性炭将所得提取物进行色谱清洗，以及-用吸收树脂将前一步骤所得提取物进行色谱清洗。
5.根据权利要求4的方法，其特征在于，用饱和石灰水进行提取。
6.根据权利要求4或5的方法，其特征在于，过滤步骤包括超滤。
7.根据权利要求6的方法，其特征在于，用孔径10000道尔顿、6000道尔顿和2000道尔顿的膜进行超滤。
8.根据权利要求4-7之一的方法，其特征在于，最后的色谱清洗包括用至多25％的醇-水溶液进行冲洗，用至少75％的醇-水溶液进行提取物的洗脱。
9.根据权利要求8的方法，其特征在于，乙醇用作所述醇。
10.含有权利要求1-8之一所述银杏叶提取物的药剂。
全文摘要
本发明涉及一种银杏叶提取物及其制备方法。本发明特别涉及一种具有在希望的药用有效活性成分上有较高含量的银杏叶提取物，还涉及用水作为提取剂的方法。
文档编号A61K127/00GK1946413SQ200580012761
公开日2007年4月11日 申请日期2005年4月29日 优先权日2004年4月29日
发明者付元辉 申请人:格泰克有限公司
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