新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
专利名称：新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用，属于医药技术领域。
背景技术：
恶性肿瘤是严重危害人类生命的疾病，其死亡率仅次于心脑血管疾病，且发生率 有逐年上升的趋势。现在肿瘤治疗已有外科手术、放射疗法和药物治疗三类方法，其中药物 疗法在肿瘤治疗或综合治疗、延长肿瘤患者生命和提高他们的生活质量方面均具有肯定、 积极和不可替代的作用。抗肿瘤药物己能治愈或控制不少肿瘤类型，但总体尚未达到令人 满意的阶段。因此研究开发具有有效抗肿瘤活性的药物具有重要的意义。
新曲霉酸最早被发现存在于真菌Aspergillus sclerotiorum的培养滤 液 (Micetich， R. G. ;MacDonald， ，J. C. Met.abolites of Aspergillus sclerot.iorum 他ber. J. Chem. Soc. 1964年，1507-1510页)。MacDonald等发现它对Staphylococcus aureus, Escherichia coli， Candida albicans禾卩Bacillussubtilis具有很强的J卬 菌活 性(MacDonald, J. C. ;Micetich， R. G. ;Haskins， R. H. Antibiotic activityof neoaspergillic acid. Can. J. Microbiol. 1964年，第10巻，90_92页)。Micetich 等的生源合成研究表明，它的生源合成前体是亮氨酸(Micetich ， R. G. ;MacDonald， J.C.Biosynthesis ofnecmspergillie and neohydroxyaspergi1 lie acids. J. Biol. Chem. 1965年，第240巻，1692-1695页)。Masaki等完成了其化学全合成工作(Masaki， M. ;Chigira， Y. ;Sugiyama， M. ;et. al. Synthesis ofneoaspergillic acid. Tetrahedron Lett. 1965年，第6巻，4837-4840页；Masaki， M. ;Chigira， Y. ;0hta， M. Total synthesis of racemic aspergillic acid and neoaspergillic acid. J. Org. Chem.丄966年,第31巻， 4143-4146页)。但新曲霉酸的肿瘤抑制活性未见报道。 我们通过混合培养2株Aspergillus sp.真菌，从混合培养液分离获得了新曲霉 酸[朱峰，等.榄钱两株附生真菌混合培养次级代谢产物研究.中山大学学报(自然科学 版).2009年，第48巻第6期，5-8页]。与上述报道不同的是，本发明发现新曲霉酸对人的 多种癌细胞均有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
发明内容
本发明的目的在于提供具有抑制人肿瘤细胞生长活性的新曲霉酸在制备抗肿瘤 药物中的应用。 本发明为了达到上述目的而采用的技术解决方案如下
本发明所述新曲霉酸是一种羟氨酸，其结构式为
OH 。 本发明所述新曲霉酸可以通过微生物单独培养或混合培养制备，也可以通过化学 合成方法制得。 本发明的试验证明，新曲霉酸能抑制人癌细胞株的生长，在以人肺癌细胞株 SPC-A-1、人肝癌细胞株P)EL-7402、人胃癌细胞株SGC-7901和人白血病细胞株K562为耙细 胞的MTT还原法检测抗肿瘤活性试验中，新曲霉酸的半数致死量IC5。分别为22. 19、24. 90、 8. 24和7. 99 u g/ml。表明新曲霉酸可用于制备抗肿瘤药物。
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
具体实施例方式1.新曲霉酸的制备 本发明所述新曲霉酸是根据文献[朱峰，等.榄钱两株附生真菌混合培养次级代 谢产物研究.中山大学学报(自然科学版).2()()9年，第48巻第6期，5-8页]所述制备方 法制备。即以GYP为培养基混合培养2株Aspergillus sp.真菌，培养液减压浓縮后用乙 酸乙酯提取，粗提物经硅胶柱层析，石油醚_乙酸乙酯梯度洗脱，得到新曲霉酸。
2. MTT还原法检测新曲霉酸抗肿瘤活性试验
2. l材料 MTT[3-(4， 5_dimethylt.hiazol_2_yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide].、 0. Olmol/L的磷酸盐缓冲液(PBS) 、二甲基亚砜(DMS0) 、 RPMI-1640培养基、新生小牛血清 (NBS)、青霉素、链霉素。 新曲霉酸用固S()溶解后，用PBS分别稀释至1()()、5()、10、5、1和() 1 u g/mL。 2. 2 细胞株选用人肺癌细胞株SPC-A-l、人肝癌细胞株BEL-7402、人胃癌细胞株SGC-7901和 人白血病细胞株K562。各细胞株分别在含10% (v/v)热灭活的NBS以及100U/ml青霉素、 100U/ml链霉素的RPMH640培养液中，置37。C的5% C02培养箱饱和湿度下培养。
2.3肿瘤抑制活性检测 [,]MTT法用于考查细胞生长状态。 取对数生长期的SPC-A-1、 BEL-7402、 SGC-7901和K562癌细胞，接种于96孔培养 板，使每孔细胞密度为1 X 105 4X 105Cells/孔。 表1新曲霉酸对不同肿瘤细胞的]:C5。值
试验细胞肺癌SPC-A-1肝癌BEL-7402胃癌SGC-7则白血病K562
IC50 (一ml)22.1924.908.247.99
试验结果表明，新曲霉酸具有较强的癌细胞毒性，可用于制备抗肿瘤药物。
权利要求
新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用。
2. 根据权利要求l，所述新曲霉酸是 一种羟氨酸，其结构式为<formula>formula see original document page 2</formula>
全文摘要
本发明属于医药技术领域。本发明公开了新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用。新曲霉酸可通过微生物发酵制备或通过化学合成得到。经试验表明，新曲霉酸对人的多种癌细胞均有良好的抑制活性。因此，可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号A61K31/4965GK101697972SQ20091019395
公开日2010年4月28日 申请日期2009年11月16日 优先权日2009年11月16日
发明者朱峰 申请人:朱峰
技术领域：
本发明涉及新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用，属于医药技术领域。
背景技术：
恶性肿瘤是严重危害人类生命的疾病，其死亡率仅次于心脑血管疾病，且发生率 有逐年上升的趋势。现在肿瘤治疗已有外科手术、放射疗法和药物治疗三类方法，其中药物 疗法在肿瘤治疗或综合治疗、延长肿瘤患者生命和提高他们的生活质量方面均具有肯定、 积极和不可替代的作用。抗肿瘤药物己能治愈或控制不少肿瘤类型，但总体尚未达到令人 满意的阶段。因此研究开发具有有效抗肿瘤活性的药物具有重要的意义。
新曲霉酸最早被发现存在于真菌Aspergillus sclerotiorum的培养滤 液 (Micetich， R. G. ;MacDonald， ，J. C. Met.abolites of Aspergillus sclerot.iorum 他ber. J. Chem. Soc. 1964年，1507-1510页)。MacDonald等发现它对Staphylococcus aureus, Escherichia coli， Candida albicans禾卩Bacillussubtilis具有很强的J卬 菌活 性(MacDonald, J. C. ;Micetich， R. G. ;Haskins， R. H. Antibiotic activityof neoaspergillic acid. Can. J. Microbiol. 1964年，第10巻，90_92页)。Micetich 等的生源合成研究表明，它的生源合成前体是亮氨酸(Micetich ， R. G. ;MacDonald， J.C.Biosynthesis ofnecmspergillie and neohydroxyaspergi1 lie acids. J. Biol. Chem. 1965年，第240巻，1692-1695页)。Masaki等完成了其化学全合成工作(Masaki， M. ;Chigira， Y. ;Sugiyama， M. ;et. al. Synthesis ofneoaspergillic acid. Tetrahedron Lett. 1965年，第6巻，4837-4840页；Masaki， M. ;Chigira， Y. ;0hta， M. Total synthesis of racemic aspergillic acid and neoaspergillic acid. J. Org. Chem.丄966年,第31巻， 4143-4146页)。但新曲霉酸的肿瘤抑制活性未见报道。 我们通过混合培养2株Aspergillus sp.真菌，从混合培养液分离获得了新曲霉 酸[朱峰，等.榄钱两株附生真菌混合培养次级代谢产物研究.中山大学学报(自然科学 版).2009年，第48巻第6期，5-8页]。与上述报道不同的是，本发明发现新曲霉酸对人的 多种癌细胞均有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
发明内容
本发明的目的在于提供具有抑制人肿瘤细胞生长活性的新曲霉酸在制备抗肿瘤 药物中的应用。 本发明为了达到上述目的而采用的技术解决方案如下
本发明所述新曲霉酸是一种羟氨酸，其结构式为
OH 。 本发明所述新曲霉酸可以通过微生物单独培养或混合培养制备，也可以通过化学 合成方法制得。 本发明的试验证明，新曲霉酸能抑制人癌细胞株的生长，在以人肺癌细胞株 SPC-A-1、人肝癌细胞株P)EL-7402、人胃癌细胞株SGC-7901和人白血病细胞株K562为耙细 胞的MTT还原法检测抗肿瘤活性试验中，新曲霉酸的半数致死量IC5。分别为22. 19、24. 90、 8. 24和7. 99 u g/ml。表明新曲霉酸可用于制备抗肿瘤药物。
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
具体实施例方式1.新曲霉酸的制备 本发明所述新曲霉酸是根据文献[朱峰，等.榄钱两株附生真菌混合培养次级代 谢产物研究.中山大学学报(自然科学版).2()()9年，第48巻第6期，5-8页]所述制备方 法制备。即以GYP为培养基混合培养2株Aspergillus sp.真菌，培养液减压浓縮后用乙 酸乙酯提取，粗提物经硅胶柱层析，石油醚_乙酸乙酯梯度洗脱，得到新曲霉酸。
2. MTT还原法检测新曲霉酸抗肿瘤活性试验
2. l材料 MTT[3-(4， 5_dimethylt.hiazol_2_yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide].、 0. Olmol/L的磷酸盐缓冲液(PBS) 、二甲基亚砜(DMS0) 、 RPMI-1640培养基、新生小牛血清 (NBS)、青霉素、链霉素。 新曲霉酸用固S()溶解后，用PBS分别稀释至1()()、5()、10、5、1和() 1 u g/mL。 2. 2 细胞株选用人肺癌细胞株SPC-A-l、人肝癌细胞株BEL-7402、人胃癌细胞株SGC-7901和 人白血病细胞株K562。各细胞株分别在含10% (v/v)热灭活的NBS以及100U/ml青霉素、 100U/ml链霉素的RPMH640培养液中，置37。C的5% C02培养箱饱和湿度下培养。
2.3肿瘤抑制活性检测 [,]MTT法用于考查细胞生长状态。 取对数生长期的SPC-A-1、 BEL-7402、 SGC-7901和K562癌细胞，接种于96孔培养 板，使每孔细胞密度为1 X 105 4X 105Cells/孔。 表1新曲霉酸对不同肿瘤细胞的]:C5。值
试验细胞肺癌SPC-A-1肝癌BEL-7402胃癌SGC-7则白血病K562
IC50 (一ml)22.1924.908.247.99
试验结果表明，新曲霉酸具有较强的癌细胞毒性，可用于制备抗肿瘤药物。
权利要求
新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用。
2. 根据权利要求l，所述新曲霉酸是 一种羟氨酸，其结构式为<formula>formula see original document page 2</formula>
全文摘要
本发明属于医药技术领域。本发明公开了新曲霉酸在制备抗肿瘤药物中的应用。新曲霉酸可通过微生物发酵制备或通过化学合成得到。经试验表明，新曲霉酸对人的多种癌细胞均有良好的抑制活性。因此，可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号A61K31/4965GK101697972SQ20091019395
公开日2010年4月28日 申请日期2009年11月16日 优先权日2009年11月16日
发明者朱峰 申请人:朱峰
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