翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用的制作方法
专利名称：翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用的制作方法
翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用技术领域
本发明属中药制药领域，涉及翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
翼首草为藏医常用药材，广泛应用于藏药制剂，如十二味翼首散、洁白丸、二十五 味甘子丸、二十五味驴血丸、二十六味余甘子丸、九味青鹏散、石榴普安散、清肺止咳丸等。 藏医认为翼首草性寒、味苦、有小毒，具有清热解毒、祛风湿、止痛的作用，可用于治疗瘟毒、 痹证、痢疾、关节炎等症。目前，有关翼首草研究与应用的报道较少，与其相关的文献有
文献[1]一种药物组合物及其制备方法和用途，专利号200310104142. 4 ；
文献[2] :Two triterpenoid saponins from Pteroccephalus bretschneidri. Phytochemistry, 1993, 32 (6) :1539;
文 献[3] :Triterpenoid saponins from Pteroccephalus hookeri. Phytochemistry,1993, 32(6) :1535;
文献W]匙叶翼首花的化学成分.天然产物研究与开发，1999，12 (1) :35-37 ；
文献[5]匙叶翼首花的化学成分·云南植物研究，1995，17(1) =108-110 ；
文献W]藏药翼首草化学成分的研究，成都中医药大学学报，2002年25卷3期；
文献[7]翼首草的抗炎作用与急毒实验研究，北京中医药大学学报，2004年27卷 2期
文献[8]藏药翼首草抗类风湿性关节炎作用与机理研究，成都中医药大学硕士 学位论文，2002年
上述文献1中公开了一种药物组合物的制备，其中君药翼首草仅仅涉及了乙醇加 热回流提取的简单处理，文献2-5涉及到基于实验室条件下，通过化学方法和波谱分析共 得到16种三萜皂苷类成分，文献6中张艺等首次从翼首草中分离得到rivularicin，文献7 中涉及到翼首草总皂苷抗炎镇痛的药效学研究。文献8中涉及到翼首草抗类风湿性关节炎 (RA)作用与机理的探讨。综上所述，目前尚未见对于翼首草总皂苷有效部位的提取纯化研 究及其在抗肿瘤方面的药效学研究报道。发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供翼首草总皂苷有效部位提取物，同时，提供上 述有效部位提取物的制备方法及其应用。
本发明以翼首草总皂苷的含量为指标，提供了总皂苷含量高、质量可控、稳定、药 效显著的翼首草总皂苷提取物。本发明所述的翼首草总皂苷有效部位提取物，其主要成分 为齐墩果烷型五环三萜皂苷，其总皂苷的含量在50-90%。通过下述方法和步骤制得
(1)提取
翼首草根粉碎后，用50% -95%含水乙醇加热回流提取，将提取液浓缩备用；
(2)纯化
将上述所得的浓缩液进行大孔树脂吸附，用水淋洗除去杂质，再用40% -95% C1-C5的低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至稠浸膏后真空干燥或除去低级醇后喷雾干燥，得提取 物。
具体而言，本发明通过下述步骤制备翼首草总皂苷有效部位提取物
将粉碎后的翼首草根用50% -95%含水乙醇热提3次，每次溶媒用量约为生药量 的5-12倍，每次提取时间1- ；提取液浓缩后进行大孔树脂吸附，本发明中，所述的大孔树 脂为聚苯乙烯型多孔性吸附树脂，优选AB-8、X-5、HPD-100型大孔树脂等，用水淋洗除去杂 质，再用40% -95% C1-C5的低级醇洗脱，本发明中，采用的低级醇为甲醇、乙醇、或丙醇等 C1-C5醇类，将洗脱液浓缩至稠浸膏后真空干燥或除去低级醇后喷雾干燥，得本发明的翼首 草总皂苷有效部位提取物，经含量测定，其总皂苷含量为50-90%。
本发明中，对上述所得翼首草总皂苷有效部位提取物进行含量测定
以齐墩果酸为对照品，采用比色法测定翼首草提取物中总皂苷的含量。结果显示， 所述翼首草提取物中其主要成分为齐墩果烷型五环三萜皂苷，总皂苷的含量在50-90%，达 到有效部位的要求。
为进一步说明本发明提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，对所制得的提取物 进行了体外抑制人肿瘤细胞增殖实验，本发明中，优选人消化系统肿瘤细胞SMMC-7721， SGC-7901，BGC-823，GAS进行增殖实验。试验结果表明，本发明提取物在体外能显著抑制人 胃癌(SGC-7901、BGC-823、GAS)、肝癌(SMMC-7721)等人消化系统肿瘤细胞的增殖。
本发明的制备方法其提纯工艺经济、简便、适用于工业化大生产，所得提取物具有 显著的抑制肿瘤细胞增殖的作用，可应用于抗肿瘤药物的制备。
具体实施方式
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是 对本发明的限定。
实施例1
称取粉碎后的翼首草根60g，用80 %乙醇浸渍1 后热提3次，每次溶媒用量 5-12倍，每次提取时间为60min，合并3次提取液，浓缩至60ml，用25%乙醇稀释至120ml， 以1. 5BV/h的流速通过50mlAB-8型大孔树脂，依次用200ml水洗脱除去杂质，再用200ml 60 %乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠浸膏，真空干燥4h，得本发明的翼首草总皂苷有效部 位提取物，重2. 98g，总皂苷含量80 %。
实施例2
称取粉碎后的翼首草根60g，用70%乙醇浸渍12h后热提3次，每次溶媒用量5_12 倍，每次提取时间为90min，合并3次提取液，浓缩至60ml，用25%乙醇稀释至120ml，以 4BV/h的流速通过50mlX-5型大孔树脂，依次用250ml水洗脱除去杂质，再用250ml 70%乙 醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠浸膏，真空干燥4h，得本发明的翼首草总皂苷有效部位提取 物，重2. 65g，总皂苷含量65%。
实施例3
称取粉碎后的翼首草根60g，用80%乙醇浸渍1 后热提3次，每次溶媒用量5_12倍，每次提取时间为120min，合并3次提取液，浓缩至60ml，用25%乙醇稀释至120ml， 以0. 75BV/h的流速通过50ml HPD-100型大孔树脂，依次用300ml水洗脱除去杂质，再用 250ml80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠浸膏，真空干燥4h，得本发明的翼首草总皂苷有 效部位提取物，重2. 8g，总皂苷含量60%。
实施例4
体外抑制人肿瘤细胞SMMC-7721，SGC-7901，BGC-823，GAS增殖实验，将融合为 单层生长的肿瘤细胞，用0. 25%胰蛋白酶消化，计数并调整细胞浓度为5Xl(McellS/mL， 接种于96孔板，90 μ L/well,同时设阴性对照、阳性对照和空白对照组(只加培养液，不 加细胞和药物)，置于37°C、5% C02培养箱中培养24h后，实验组分别加入6种浓度的受 试样品(0. 3-100 μ g/ml)，使用液10 μ L，阳性对照组加入3种浓度的5-氟尿嘧啶(5_Fu) (1-100 μ g/ml)使用液10 μ L，阴性对照和空白对照组均加入10 μ L PBS,继续培养。分别 于4 后，每孔加入10 μ L的ΜΤΤ，继续置培养箱中培养，4h后终止培养，吸去孔内培养上清 液，每孔加入150 μ L的DMS0，微量振荡仪震荡lOmin，用酶标检测仪检测并记录490nm处OD 值。
抑制细胞率=(阴性对照OD值-用药组OD值)/阴性对照OD值X 100 %。
用SPSS13. O统计软件计算各样品的IC50值，结果显示，本发明提取物对肿瘤细胞 增殖有明显的抑制作用。
表1是本发明提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。
表 权利要求
1.翼首草总皂苷有效部位提取物，其特征在于，所述的提取物其主要成分为齐墩果烷 型五环三萜皂苷，其总皂苷的含量为50-90%。
2.权利要求1的翼首草总皂苷有效部位提取物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤(1)提取翼首草根粉碎后，用50% -95%含水乙醇加热回流提取，将提取液浓缩备用；(2)纯化将步骤(1)所得浓缩液进行大孔树脂吸附，用水淋洗除去杂质，再用40% -95% C1-C5 的低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至稠浸膏后真空干燥或除去低级醇后喷雾干燥，得提取物。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤( 的大孔树脂为聚苯乙烯型多 孔性吸附树脂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂选自AB-8、X-5或 HPD-100型大孔树脂。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤O)的低级醇选自甲醇、乙醇或丙醇。
6.权利要求1的翼首草总皂苷有效部位提取物在制备抗肿瘤药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述的肿瘤是人消化系统肿瘤。
全文摘要
本发明属中药制药领域，涉及翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用。本发明以翼首草总皂苷的含量为指标，提供了总皂苷含量高、质量可控、稳定、药效显著的翼首草总皂苷提取物。本发明的翼首草总皂苷有效部位提取物，其主要成分为齐墩果烷型五环三萜皂苷，总皂苷含量50％-90％。本发明的制备方法提纯工艺经济、简便、适用于工业化大生产。所得的提取物具有显著的抑制肿瘤细胞增殖的作用，可应用于抗肿瘤药物的制备。
文档编号A61K36/185GK102028722SQ200910196870
公开日2011年4月27日 申请日期2009年9月30日 优先权日2009年9月30日
发明者尹胜利, 崔文霞, 朱国福, 雷旭东 申请人:上海中医药大学
翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用技术领域
本发明属中药制药领域，涉及翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
翼首草为藏医常用药材，广泛应用于藏药制剂，如十二味翼首散、洁白丸、二十五 味甘子丸、二十五味驴血丸、二十六味余甘子丸、九味青鹏散、石榴普安散、清肺止咳丸等。 藏医认为翼首草性寒、味苦、有小毒，具有清热解毒、祛风湿、止痛的作用，可用于治疗瘟毒、 痹证、痢疾、关节炎等症。目前，有关翼首草研究与应用的报道较少，与其相关的文献有
文献[1]一种药物组合物及其制备方法和用途，专利号200310104142. 4 ；
文献[2] :Two triterpenoid saponins from Pteroccephalus bretschneidri. Phytochemistry, 1993, 32 (6) :1539;
文 献[3] :Triterpenoid saponins from Pteroccephalus hookeri. Phytochemistry,1993, 32(6) :1535;
文献W]匙叶翼首花的化学成分.天然产物研究与开发，1999，12 (1) :35-37 ；
文献[5]匙叶翼首花的化学成分·云南植物研究，1995，17(1) =108-110 ；
文献W]藏药翼首草化学成分的研究，成都中医药大学学报，2002年25卷3期；
文献[7]翼首草的抗炎作用与急毒实验研究，北京中医药大学学报，2004年27卷 2期
文献[8]藏药翼首草抗类风湿性关节炎作用与机理研究，成都中医药大学硕士 学位论文，2002年
上述文献1中公开了一种药物组合物的制备，其中君药翼首草仅仅涉及了乙醇加 热回流提取的简单处理，文献2-5涉及到基于实验室条件下，通过化学方法和波谱分析共 得到16种三萜皂苷类成分，文献6中张艺等首次从翼首草中分离得到rivularicin，文献7 中涉及到翼首草总皂苷抗炎镇痛的药效学研究。文献8中涉及到翼首草抗类风湿性关节炎 (RA)作用与机理的探讨。综上所述，目前尚未见对于翼首草总皂苷有效部位的提取纯化研 究及其在抗肿瘤方面的药效学研究报道。发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供翼首草总皂苷有效部位提取物，同时，提供上 述有效部位提取物的制备方法及其应用。
本发明以翼首草总皂苷的含量为指标，提供了总皂苷含量高、质量可控、稳定、药 效显著的翼首草总皂苷提取物。本发明所述的翼首草总皂苷有效部位提取物，其主要成分 为齐墩果烷型五环三萜皂苷，其总皂苷的含量在50-90%。通过下述方法和步骤制得
(1)提取
翼首草根粉碎后，用50% -95%含水乙醇加热回流提取，将提取液浓缩备用；
(2)纯化
将上述所得的浓缩液进行大孔树脂吸附，用水淋洗除去杂质，再用40% -95% C1-C5的低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至稠浸膏后真空干燥或除去低级醇后喷雾干燥，得提取 物。
具体而言，本发明通过下述步骤制备翼首草总皂苷有效部位提取物
将粉碎后的翼首草根用50% -95%含水乙醇热提3次，每次溶媒用量约为生药量 的5-12倍，每次提取时间1- ；提取液浓缩后进行大孔树脂吸附，本发明中，所述的大孔树 脂为聚苯乙烯型多孔性吸附树脂，优选AB-8、X-5、HPD-100型大孔树脂等，用水淋洗除去杂 质，再用40% -95% C1-C5的低级醇洗脱，本发明中，采用的低级醇为甲醇、乙醇、或丙醇等 C1-C5醇类，将洗脱液浓缩至稠浸膏后真空干燥或除去低级醇后喷雾干燥，得本发明的翼首 草总皂苷有效部位提取物，经含量测定，其总皂苷含量为50-90%。
本发明中，对上述所得翼首草总皂苷有效部位提取物进行含量测定
以齐墩果酸为对照品，采用比色法测定翼首草提取物中总皂苷的含量。结果显示， 所述翼首草提取物中其主要成分为齐墩果烷型五环三萜皂苷，总皂苷的含量在50-90%，达 到有效部位的要求。
为进一步说明本发明提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，对所制得的提取物 进行了体外抑制人肿瘤细胞增殖实验，本发明中，优选人消化系统肿瘤细胞SMMC-7721， SGC-7901，BGC-823，GAS进行增殖实验。试验结果表明，本发明提取物在体外能显著抑制人 胃癌(SGC-7901、BGC-823、GAS)、肝癌(SMMC-7721)等人消化系统肿瘤细胞的增殖。
本发明的制备方法其提纯工艺经济、简便、适用于工业化大生产，所得提取物具有 显著的抑制肿瘤细胞增殖的作用，可应用于抗肿瘤药物的制备。
具体实施方式
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是 对本发明的限定。
实施例1
称取粉碎后的翼首草根60g，用80 %乙醇浸渍1 后热提3次，每次溶媒用量 5-12倍，每次提取时间为60min，合并3次提取液，浓缩至60ml，用25%乙醇稀释至120ml， 以1. 5BV/h的流速通过50mlAB-8型大孔树脂，依次用200ml水洗脱除去杂质，再用200ml 60 %乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠浸膏，真空干燥4h，得本发明的翼首草总皂苷有效部 位提取物，重2. 98g，总皂苷含量80 %。
实施例2
称取粉碎后的翼首草根60g，用70%乙醇浸渍12h后热提3次，每次溶媒用量5_12 倍，每次提取时间为90min，合并3次提取液，浓缩至60ml，用25%乙醇稀释至120ml，以 4BV/h的流速通过50mlX-5型大孔树脂，依次用250ml水洗脱除去杂质，再用250ml 70%乙 醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠浸膏，真空干燥4h，得本发明的翼首草总皂苷有效部位提取 物，重2. 65g，总皂苷含量65%。
实施例3
称取粉碎后的翼首草根60g，用80%乙醇浸渍1 后热提3次，每次溶媒用量5_12倍，每次提取时间为120min，合并3次提取液，浓缩至60ml，用25%乙醇稀释至120ml， 以0. 75BV/h的流速通过50ml HPD-100型大孔树脂，依次用300ml水洗脱除去杂质，再用 250ml80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠浸膏，真空干燥4h，得本发明的翼首草总皂苷有 效部位提取物，重2. 8g，总皂苷含量60%。
实施例4
体外抑制人肿瘤细胞SMMC-7721，SGC-7901，BGC-823，GAS增殖实验，将融合为 单层生长的肿瘤细胞，用0. 25%胰蛋白酶消化，计数并调整细胞浓度为5Xl(McellS/mL， 接种于96孔板，90 μ L/well,同时设阴性对照、阳性对照和空白对照组(只加培养液，不 加细胞和药物)，置于37°C、5% C02培养箱中培养24h后，实验组分别加入6种浓度的受 试样品(0. 3-100 μ g/ml)，使用液10 μ L，阳性对照组加入3种浓度的5-氟尿嘧啶(5_Fu) (1-100 μ g/ml)使用液10 μ L，阴性对照和空白对照组均加入10 μ L PBS,继续培养。分别 于4 后，每孔加入10 μ L的ΜΤΤ，继续置培养箱中培养，4h后终止培养，吸去孔内培养上清 液，每孔加入150 μ L的DMS0，微量振荡仪震荡lOmin，用酶标检测仪检测并记录490nm处OD 值。
抑制细胞率=(阴性对照OD值-用药组OD值)/阴性对照OD值X 100 %。
用SPSS13. O统计软件计算各样品的IC50值，结果显示，本发明提取物对肿瘤细胞 增殖有明显的抑制作用。
表1是本发明提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。
表 权利要求
1.翼首草总皂苷有效部位提取物，其特征在于，所述的提取物其主要成分为齐墩果烷 型五环三萜皂苷，其总皂苷的含量为50-90%。
2.权利要求1的翼首草总皂苷有效部位提取物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤(1)提取翼首草根粉碎后，用50% -95%含水乙醇加热回流提取，将提取液浓缩备用；(2)纯化将步骤(1)所得浓缩液进行大孔树脂吸附，用水淋洗除去杂质，再用40% -95% C1-C5 的低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至稠浸膏后真空干燥或除去低级醇后喷雾干燥，得提取物。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤( 的大孔树脂为聚苯乙烯型多 孔性吸附树脂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂选自AB-8、X-5或 HPD-100型大孔树脂。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤O)的低级醇选自甲醇、乙醇或丙醇。
6.权利要求1的翼首草总皂苷有效部位提取物在制备抗肿瘤药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述的肿瘤是人消化系统肿瘤。
全文摘要
本发明属中药制药领域，涉及翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用。本发明以翼首草总皂苷的含量为指标，提供了总皂苷含量高、质量可控、稳定、药效显著的翼首草总皂苷提取物。本发明的翼首草总皂苷有效部位提取物，其主要成分为齐墩果烷型五环三萜皂苷，总皂苷含量50％-90％。本发明的制备方法提纯工艺经济、简便、适用于工业化大生产。所得的提取物具有显著的抑制肿瘤细胞增殖的作用，可应用于抗肿瘤药物的制备。
文档编号A61K36/185GK102028722SQ200910196870
公开日2011年4月27日 申请日期2009年9月30日 优先权日2009年9月30日
发明者尹胜利, 崔文霞, 朱国福, 雷旭东 申请人:上海中医药大学
最新回复(0)