具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物及其制备方法和应用的制作方法

xiaoxiao2020-6-23  215

专利名称:具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域
本发明涉及的一种具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物,具体讲是一种乳酸菌的 发酵液体体系组合物,及其制备方法和应用。
背景技术
黄芪是传统中医药学中一味重要药材,始载于东汉《神农本草经》。目前我国药典 中规定药用的黄芪为豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根。早有《本草纲目》、《日华子本 草》等论述概括出黄芪具有补气升阳、益气固表、生津止渴、托毒生肌和利水消肿等功效。乳酸菌是一种存在于人类体内的益生菌,是发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽 孢、革兰氏染色阳性细菌的总称,目前至少可分为18个属,共有200多种,绝大部分都是人 体内必不可少且具有重要生理功能的菌群,广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生 物学家所证实,肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系。由于乳酸菌能够帮助消 化,有助人体肠脏的健康,因此常被视为健康食品,制作成酸奶和/或进一步添加在许多食 品中。

发明内容
本发明将在上述基础上,以“生物转化理论”为指导,通过黄芪-乳酸菌液体发酵 体系而提供一种能具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物及其制备方法和应用。本发明具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物,为由乳酸菌在黄芪水提取液中发酵 后所成的发酵液体混合物,其中以生药黄芪重量计的黄芪水提取液的黄芪提取物浓度为0.05 2g/ml,乳酸菌的接种量为 1. OXlO4 1. 0X 108cfu/ml。进一步的试验显示,本发明上述组合物的优选方式,是所说的黄芪水提取液的黄 芪提取物浓度为0. 2 0. 4g/ml,和/或所说乳酸菌的接种量为1. OX 106cfu/ml。本发明上述的具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物的制备方法,是在上述以 生药黄芪重量计的黄芪提取物浓度为0. 05 2g/ml的黄芪水提取液中,按1. OX IO4 1.OX 108cfu/ml的量接种乳酸菌后,于30°C 40°C和0 200rpm的条件下培养1 5天, 即可以得到所说的发酵液体混合物。所说的该黄芪水提取液,可以为采用目前各种水浸提和/或煎煮的常用方法由黄 芪药材制备得到的水提取物的液体。实验显示,其中理想的一种方式,是将常用的黄芪生药 用5 10倍重量的水于100°C煎煮30 60分钟后过滤,滤渣以同样方式再煎煮提取2次, 合并各次的水提取滤液,浓缩至所说的以生药黄芪重量计的黄芪提取物浓度为0. 05 2g/ ml,优选为0. 2 0. 4g/ml的提取液。上述制备方法中,所说的乳酸菌的接种量为1.0\106(^11/!111,并且以在371和 50rpm条件下培养2天的结果为最佳。上述制备方法中所说的用于在黄芪水提取液中接种的乳酸菌菌种,可以选择使用 目前由各种常用方式培养得到的菌种,如用于制造泡菜、酸奶的乳酸菌种等。其中一种优选的菌种来源和培养方式,可以为将来自固体培养基培养的乳酸菌接种入液体培养基,在 37°C和50rpm条件下培养1天后所获得乳酸菌菌种。所说的该液体培养基含有乳酸菌常规 发酵的碳源、氮源和微量元素/无机盐成分,其中碳源成分为培养基总重量的0. 5 10%, 氮源成分为0. 5 3 %,微量元素/无机盐成分为0. 01 1 %,其余为水,按常规经115 121°C灭菌15 30min即可;所说固体培养基由所说的液体培养基IOOOml和琼脂10 20g 组成,按同样方式作常规灭菌处理。其中所说的碳源和/或氮源,都可以选择目前通用培养 基中的常用成分,如葡萄糖、蔗糖、淀粉等,和/或如牛肉膏、酵母膏等成分。为便于本发明上述使用具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物的应用,可以将其作 为有效成分,与药物中可以接受的填充剂、崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂等常用辅助成分 共同组成具有所说功能的药物,也可以将其作为辅助原料或成分之一,与食品或保健品中 可以接受的如米、面、杂粮等主食性淀粉成分,或糖果、糕点、饮料等其它食品的主要原料成 分,或其它形式的相应成分,共同组成具有所说功能的食品或保健品。试验结果表明,本发明上述的组合物,在抗疲劳和提高机体免疫力等方面具有理 想的综合药理作用,无明显毒副作用,且原料来源丰富,提取和制备成相应的药物或食品的 方法并无特殊要求和限制,开创了益生菌和药食两用药材联合产品开发的新途径,具有很 好的开发和应用前景。以下通过实施例的具体实施方式
再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但 不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想 情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包括在本发明 的范围内。
具体实施例方式实施例1本发明组合物的制备一、乳酸菌对黄芪水提液的生长适应性及影响试验(1)按 1. 0X105cfu/ml 接种量将乳酸菌分别接种于 0. 2g/ml、0. 3g/ml、0. 4g/ml、 0. 5g/ml和0. 6g/ml的黄芪水提液(均为以生药黄芪重量计的黄芪提取物浓度,以下同此) 中,于37°C和50rpm条件下培养2 3天,采用平板涂布法检测发酵液中的乳酸菌菌落数。 结果如表1所示。表1结果显示,当黄芪水提液的浓度为0. 2 0. 4g/ml时,乳酸菌的长势较佳且基 本一致;当黄芪水提液的浓度大于0. 4g/ml以后,乳酸菌的生长受到抑制。因此黄芪水提液 的适宜浓度为0. 4g/ml。由表1结果还可以看出,当培养时间为M 48小时,乳酸菌的生长处于对数生长 期,生长速度快;当培养时间为48 72小时,乳酸菌的生长进入衰亡期,发酵液中的活菌数 降低。因此,确定本发明中乳酸菌的发酵时间为48小时。表1黄芪水提液浓度和发酵时间对乳酸菌培养的影响4黄芪水提液浓度 _菌落数(cfu/ml)_(g/ml) 24 h48 h72 h0.27.9xl093.0x10"9.0χ1010 0.37.8x10"2.9χ1θ"8.8χ10100.47.8χ1092.8Χ10118.8χ10100.56.7x10s1.3χ1θ'°5.4χ1090.69.2χ1025.4χ1031.9^103(2)按1.0 X ΙΟ4、1.0 X IO5和1. O X 106cfu/ml接种量将乳酸菌分别接种于0. 4g/ ml的黄芪水提液中,于37°C和50rpm条件下培养2天,采用平板涂布法检测发酵液中的乳 酸菌菌落数。结果如表2所示由表2结果可以看出,发酵液中的活菌数随着接种量的增加而增加,因此,确定本 发明中的接种量为1.0X106cfu/mL·表2接种量对乳酸菌培养的影响接种量(cfli/ml)_48 h的菌落数(cfu/ml)Ι.ΟχΙΟ43.0xl010,,,Ι.ΟχΙΟ52.8χ10πΙ.ΟχΙΟ69.1x10"实施例2本发明组合物的药效学、功能学试验及毒性试验以上述由黄芪水提液浓度为0. 4g/ml和乳酸菌接种量为1. OX 106cfu/ml,在37°C 和50rpm条件下培养2天得到的混合物即乳酸菌_黄芪发酵液为试验样品,进行下述的药 效学和功能学试验。—、本发明乳酸菌-黄芪发酵液组合物对小鼠负重游泳的影响试验动物KM种小鼠80只,体重20 士 2g。试验方法将小鼠随机分为正常组(蒸馏水O.anl/lOg)、黄芪组(黄芪水提液 10g/kg,即每天每kg体重小鼠灌胃的黄芪水提液中相当与生药黄芪的含量为10g,以下各 项试验的含义同此)、本发明乳酸菌-黄芪发酵液组(10g/kg,即每天每kg体重小鼠灌胃的 乳酸菌-黄芪发酵液中黄芪的含量为log,乳酸菌的菌落数为2. 3X1013cfu/ml,以下各项试 验的含义同此)、乳酸菌/黄芪混合组(将乳酸菌菌液与黄芪水提液混合,10g/kg,即每天每 kg体重小鼠灌胃的混合液中黄芪的含量为10g,乳酸菌的菌落数为2. 3X1013cfu/ml,以下 各项试验的含义同此),每组各20只,雌雄各半。各组每日按剂量灌胃给药,每日1次,连续 30日。末次给药30min后,将小鼠尾根部负荷5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳(水 深不少于30cm,水温25°C 士 1°C ),记录小鼠自游泳开始至死亡的时间,即小鼠负重游泳时 间,结果以X 士 S表示,组间行t检验。试验结果如表3所示经单因素方差分析表明,乳酸菌-黄芪发酵液组小鼠的负重 游泳时间与正常组相比有显著增加(P < 0. 05),而黄芪组、混合组的小鼠负重游泳时间与 正常组相比没有明显差异(P>0.05)。说明经过乳酸菌的生物转化以后,乳酸菌-黄芪发 酵液具有延长小鼠负重游泳时间、缓解体力疲劳的功能。表3乳酸菌-黄芪发酵液对小鼠负重游泳的影响权利要求
1.具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物,为由乳酸菌在黄芪水提取液中发酵后所成的 发酵液体混合物,其中以生药黄芪重量计的黄芪水提取液的黄芪提取物浓度为0. 05 2g/ ml,乳酸菌的接种量为 1.0X 104 - 1.0X 108cfu/ml。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征是所说黄芪水提取液的黄芪提取物浓度为0.2 ~ 0. 4g/ml。
3.如权利要求1所述的组合物,其特征是所说乳酸菌的接种量为1.OX 106CfU/ml。
4.制备权利要求1所说的具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物的方法,其特征是在 以生药黄芪重量计的黄芪提取物浓度为0. 05 2g/ml的黄芪水提取液中,按1. OXlO4 1.OX 108cfu/ml的量接种乳酸菌后,于30°C 40°C和0 200rpm的条件下培养1 5天, 得到所说的发酵液体混合物。
5.如权利要求4所述的制备方法,其特征是所说的黄芪水提取液为将黄芪生药用5 10倍重量的水于100°C煎煮30 60分钟后过滤,滤渣以同样方式再煎煮提取2次,合并各 次的水提取滤液,浓缩至所说的以生药黄芪重量计的黄芪提取物浓度为0. 05 2g/ml的提 取液。
6.如权利要求4所述的制备方法,其特征是所说的用于在黄芪水提取液中接种的乳酸 菌菌种,为将来自固体培养基培养的乳酸菌接种入液体培养基,在37°C和50rpm条件下培 养1天后所获得乳酸菌菌种,所说的液体培养基含有乳酸菌常规发酵的碳源、氮源和微量 元素/无机盐成分,其中碳源成分为培养基总重量的0. 5 10%,氮源成分为0. 5 3%, 微量元素/无机盐成分为0.01 1%,其余为水;所说固体培养基由所说的液体培养基 IOOOml和琼脂10 20g组成。
7.如权利要求4至6之一所述的制备方法,其特征是所说的黄芪水提取液以含生药黄 芪重量计的黄芪提取物的浓度为0. 2 0. 4g/ml。
8.如权利要求4至6之一所述的制备方法,其特征是所说的乳酸菌的接种量为 1. OX 106cfu/ml,在 37°C禾口 50rpm 条件下培养 2 天。
9.权利要求1至3所说具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物的应用,其特征是与药物 中可以接受的辅助成分共同组成具有所说功能的药物。
10.权利要求1至3所说具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物的应用,其特征是与食品 或保健品中可以接受的其它成分共同组成具有所说功能的食品或保健品。
全文摘要
具有抗疲劳和提高免疫功能的组合物及其制备方法和应用。该组合物为由乳酸菌在黄芪水提取液中发酵后所成的发酵液体混合物,其中以生药黄芪重量计的黄芪水提取液的黄芪提取物浓度为0.05~2g/ml,乳酸菌的接种量为1.0×104~1.0×108cfu/ml。该组合物可以制成为具有所说功能的食品、保健品或药物使用。
文档编号A61P39/00GK102048803SQ20091021613
公开日2011年5月11日 申请日期2009年11月3日 优先权日2009年11月3日
发明者余梦瑶, 江南, 王曦, 罗霞, 许晓燕, 魏巍 申请人:四川省中医药科学院

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