一种从北五味子中提取三萜类物质的方法
专利名称：一种从北五味子中提取三萜类物质的方法
技术领域：
本发明涉及一种从北五味子中提取三萜类物质的方法，具体的是涉及一种利用组
织破碎、纤维素酶和超声萃取前处理物料，并利用超临界流体萃取技术结合高速逆流色谱 技术分离提取出北五味子三萜类物质，为北五味子三萜类物质的分离纯化提供一种有效的 方法。
背景技术：
五味子属隶属于五味子科，约27种，在我国除新疆、青海、海南外各省区都有分 布，其中约19种可供药用，药用价值最大的是五味子(习称"北五味子")，其次是华中五味 子(习称"南五味子")。其中北五味子药用价值极高，具有抗病毒、抗肿瘤、提高人体免疫 力等功效。它包含多种功效成分，其中主要是木脂素、多糖和三萜类化合物。而目前国内外 对五味子研究多集中在南五味子，功能性成分研究业集中在木脂素类和多糖类物质上，而 关于北五味子三萜类物质提取报道较少，多数报道集中在结构鉴定和功能性方面。
目前北五味子三萜提取方法，多集中在乙醇或者丙酮溶液回流提取法，此法操作 过程繁杂，物料受热温度高，三萜类物质损失严重，提取率较低。现在，三萜类物质的分离与 纯化通常采用柱色谱法，样品在固定相的吸附导致回收率很低。
发明内容
本发明的目的是利用组织破碎、纤维素酶和超声萃取前处理物料，并利用超临界 流体萃取技术结合高速逆流色谱技术分离提取出北五味子三萜类物质，提取率比常规溶剂 提取法提高10-15%，而且操作过程简单，能耗低，无污染，回收率高，避免萃取物在高温下 热裂解，保护生理活性物质的活性。
本发明提供的技术方案是 以北五味子藤茎为主要原料，先将原料切成lcm-2cm长度后放入高速组织匀浆捣 碎机中，在12000rpm条件下保持15min后，按照液料比为13mL/lg的比例加入浓度80 %的 氯仿溶液后，再加入按照北五味子藤茎原料重量比为0. 5 %的纤维素酶，在超声功率600W、 4(TC条件下，酶解20min后，再在75t:恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末备用；
取过筛后粉末200-300g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46t:、分离温度 55t:开始萃取加压，调节C02流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂 泵，按照液料比为0. 8mL/lg比例、浓度为85%乙酸乙酯和液料比为0. 2mL/lg、浓度为80% 乙醇组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压 回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用； 称取真空干燥后粉末，加入按照液料比为10mL/lg、浓度为80%正丙醇，液料比为 8mL/lg、浓度为75%乙酸乙酯，液料比为6mL/lg、浓度为90%氯仿，液料比为10mL/lg纯净 水组成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相和下相，分别脱气后备 用；
取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，转速为850r/min，流量为3. 5mL/ min，检测波长为254nm，时间为135_180min，收集流出液，进行浓縮、干燥，制得北五味子三 萜粉末。 本发明利用组织破碎、纤维素酶和超声萃取前处理物料，并利用超临界流体萃取
技术结合高速逆流色谱技术分离提取出北五味子三萜类物质，其优点是1、提取率较常规 溶剂提取法明显提高；2、操作过程简单，能耗低，对生产环境无污染；3、回收率高，避免了 萃取物在高温下热裂解，保护生理活性物质的活性；4工艺技术简单，成本低廉，易于工业 化生产。
具体实施方式
实施例l 北五味子藤茎1000g，先将原料切成lcm长度后放入高速组织匀浆捣碎机在 12000rpm条件下保持15min后，按照液料比[溶剂体积(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加入 浓度80 %氯仿溶液13000mL后，再加入原料重量比为0. 5 %纤维素酶5g (酶活力为40000U/ g，食品级)，在超声功率600W，4(TC条件下，酶解20min后，再在75。C恒温干燥18h，粉碎过 60目筛为粉末备用。 取过筛后粉末200g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46t:、分离器温度55t: 开始萃取加压，调节(A流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵， 按照液料比[溶剂体积(mL)/过筛后粉末重量(g)]为0.8mL : lg、浓度为85%乙酸乙酯 160mL和液料比为0. 2mL : lg、浓度为80%乙醇40mL组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带 剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用。
称取真空干燥后粉末10g，加入按照液料比[溶剂体积(mL)/真空干燥后粉末重 量(g)]为10mL : lg、浓度为80X正丙醇100mL，液料比为8mL : lg浓度为75X乙酸乙酯 80mL，液料比为6mL : lg、浓度为90%氯仿60mL，液料比为10mL : lg纯净水100mL组成的 复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相(固定相)和下相(流动相)， 分别脱气后备用，取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，选择转速850r/min、流量 3. 5mL/min、检测波长为254nm、收集时间135_180min，对流出液进行浓縮、干燥，制得北五
味子三萜粉末。
实施例2 北五味子藤茎1000g，先将原料切成1. 5cm长度后放入高速组织匀浆捣碎机在 12000rpm条件下保持15min后，按照液料比[溶剂体积(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加 入浓度80 %氯仿溶液13000mL后，再加入北五味子藤茎原料重量比为0. 5 %纤维素酶5g，在 超声功率600W、4(TC条件下，酶解20min后，再在75。C恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末 备用。 取过筛后粉末250g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46°C 、分离器温度55°C 开始萃取加压，调节(A流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵， 按照液料比[溶剂体积(mL)/过筛后粉末重量(g)]为0.8mL : lg、浓度为85%乙酸乙酯 200mL和液料比为0. 2mL : lg、浓度为80%乙醇50mL组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带 剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用。
称取真空干燥后粉末10g，加入按照液料比[溶剂体积(mL)/真空干燥后粉末重 量(g)]为10mL : lg、浓度为80X正丙醇100mL，液料比为8mL : lg、浓度为75%乙酸乙酯 80mL，液料比为6mL : lg、浓度为90%氯仿60mL，液料比为10mL : lg纯净水(市场上提供 的纯净水)100mL组成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相(固定 相)和下相(流动相)，分别脱气后备用，取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，选 择转速为850r/min、流量为3. 5mL/min、检测波长为254nm，收集时间135-180min，对流出液
进行浓縮、干燥，制得北五味子三萜粉末。
实施例3 北五味子藤茎1000g，先将原料切成2cm长度后放入高速组织匀浆捣碎机在 12000rpm条件下保持15min后，按照液料比[溶剂体积(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加 入浓度80 %氯仿溶液13000mL后，再加入北五味子藤茎原料重量比为0. 5 %纤维素酶5g，在 超声功率600W、4(TC条件下，酶解20min后，再在75。C恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末 备用。 取过筛后粉末300g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46°C 、分离温度55°C开 始萃取加压，调节C(V流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵，按照 液料比[溶剂体积(mL)/过筛后粉末重量(g)]为0.8mL : lg、浓度为85%乙酸乙酯240mL 和液料比为0. 2mL : lg、浓度为80%乙醇60mL组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带剂釜， 萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用。
称取真空干燥后粉末10g，加入按照液料比[溶剂体积(mL)/真空干燥后粉末重 量(g)]为10mL : lg、浓度为80%正丙醇100mL，液料比为8mL : lg、浓度为75X乙酸乙 酯80mL，液料比为6mL : lg、浓度为90%氯仿60mL，液料比为10mL : lg纯净水100mL组 成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相(固定相)和下相(流动 相)，分别脱气后备用，取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，选择转速850r/min， 流量3. 5mL/min，检测波长为254nm，收集时间135-180min，对流出液进行浓縮、干燥，制得 北五味子三萜粉末。
权利要求
一种从北五味子中提取三萜类物质的方法，其特征是以北五味子藤茎为主要原料，先将原料切成1cm-2cm长度后放入高速组织匀浆捣碎机中，在12000rpm条件下保持15min后，按照液料比为13mL/1g的比例加入浓度80％的氯仿溶液后，再加入按照北五味子藤茎原料重量比为0.5％的纤维素酶，在超声功率600W、40℃条件下，酶解20min后，再在75℃恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末备用；取过筛后粉末200-300g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46℃、分离温度55℃开始萃取加压，调节CO2流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵，按照液料比为0.8mL/1g比例、浓度为85％乙酸乙酯和液料比为0.2mL/1g、浓度为80％乙醇组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用；称取真空干燥后粉末，加入按照液料比为10mL/1g、浓度为80％正丙醇，液料比为8mL/1g、浓度为75％乙酸乙酯，液料比为6mL/1g、浓度为90％氯仿，液料比为10mL/1g纯净水组成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相和下相，分别脱气后备用；取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，转速为850r/min，流量为3.5mL/min，检测波长为254nm，时间为135-180min，收集流出液，进行浓缩、干燥，制得北五味子三萜粉末。
全文摘要
本发明涉及一种从北五味子中提取三萜类物质的方法。该法以北五味子藤茎为主要原料，先通过组织破碎、纤维素酶和超声萃取的方法将要萃取的物质从原料中分离出来，然后利用超临界萃取技术，通过选用不同的复合夹带剂和操作工艺参数，结合高速逆流色谱技术分离提取出北五味子三萜类物质，为北五味子三萜类物质的分离纯化提供一种有效的方法。该方法提取出的北五味子三萜类物质，提取率高，而且操作过程简单，能耗低，无污染，回收率高，避免了萃取物在高温下热裂解，保护生理活性物质的活性等优点。
文档编号A61K135/00GK101708215SQ200910220188
公开日2010年5月19日 申请日期2009年11月27日 优先权日2009年11月27日
发明者孟宪军, 张琦, 李斌 申请人:沈阳农业大学
技术领域：
本发明涉及一种从北五味子中提取三萜类物质的方法，具体的是涉及一种利用组
织破碎、纤维素酶和超声萃取前处理物料，并利用超临界流体萃取技术结合高速逆流色谱 技术分离提取出北五味子三萜类物质，为北五味子三萜类物质的分离纯化提供一种有效的 方法。
背景技术：
五味子属隶属于五味子科，约27种，在我国除新疆、青海、海南外各省区都有分 布，其中约19种可供药用，药用价值最大的是五味子(习称"北五味子")，其次是华中五味 子(习称"南五味子")。其中北五味子药用价值极高，具有抗病毒、抗肿瘤、提高人体免疫 力等功效。它包含多种功效成分，其中主要是木脂素、多糖和三萜类化合物。而目前国内外 对五味子研究多集中在南五味子，功能性成分研究业集中在木脂素类和多糖类物质上，而 关于北五味子三萜类物质提取报道较少，多数报道集中在结构鉴定和功能性方面。
目前北五味子三萜提取方法，多集中在乙醇或者丙酮溶液回流提取法，此法操作 过程繁杂，物料受热温度高，三萜类物质损失严重，提取率较低。现在，三萜类物质的分离与 纯化通常采用柱色谱法，样品在固定相的吸附导致回收率很低。
发明内容
本发明的目的是利用组织破碎、纤维素酶和超声萃取前处理物料，并利用超临界 流体萃取技术结合高速逆流色谱技术分离提取出北五味子三萜类物质，提取率比常规溶剂 提取法提高10-15%，而且操作过程简单，能耗低，无污染，回收率高，避免萃取物在高温下 热裂解，保护生理活性物质的活性。
本发明提供的技术方案是 以北五味子藤茎为主要原料，先将原料切成lcm-2cm长度后放入高速组织匀浆捣 碎机中，在12000rpm条件下保持15min后，按照液料比为13mL/lg的比例加入浓度80 %的 氯仿溶液后，再加入按照北五味子藤茎原料重量比为0. 5 %的纤维素酶，在超声功率600W、 4(TC条件下，酶解20min后，再在75t:恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末备用；
取过筛后粉末200-300g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46t:、分离温度 55t:开始萃取加压，调节C02流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂 泵，按照液料比为0. 8mL/lg比例、浓度为85%乙酸乙酯和液料比为0. 2mL/lg、浓度为80% 乙醇组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压 回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用； 称取真空干燥后粉末，加入按照液料比为10mL/lg、浓度为80%正丙醇，液料比为 8mL/lg、浓度为75%乙酸乙酯，液料比为6mL/lg、浓度为90%氯仿，液料比为10mL/lg纯净 水组成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相和下相，分别脱气后备 用；
取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，转速为850r/min，流量为3. 5mL/ min，检测波长为254nm，时间为135_180min，收集流出液，进行浓縮、干燥，制得北五味子三 萜粉末。 本发明利用组织破碎、纤维素酶和超声萃取前处理物料，并利用超临界流体萃取
技术结合高速逆流色谱技术分离提取出北五味子三萜类物质，其优点是1、提取率较常规 溶剂提取法明显提高；2、操作过程简单，能耗低，对生产环境无污染；3、回收率高，避免了 萃取物在高温下热裂解，保护生理活性物质的活性；4工艺技术简单，成本低廉，易于工业 化生产。
具体实施方式
实施例l 北五味子藤茎1000g，先将原料切成lcm长度后放入高速组织匀浆捣碎机在 12000rpm条件下保持15min后，按照液料比[溶剂体积(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加入 浓度80 %氯仿溶液13000mL后，再加入原料重量比为0. 5 %纤维素酶5g (酶活力为40000U/ g，食品级)，在超声功率600W，4(TC条件下，酶解20min后，再在75。C恒温干燥18h，粉碎过 60目筛为粉末备用。 取过筛后粉末200g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46t:、分离器温度55t: 开始萃取加压，调节(A流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵， 按照液料比[溶剂体积(mL)/过筛后粉末重量(g)]为0.8mL : lg、浓度为85%乙酸乙酯 160mL和液料比为0. 2mL : lg、浓度为80%乙醇40mL组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带 剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用。
称取真空干燥后粉末10g，加入按照液料比[溶剂体积(mL)/真空干燥后粉末重 量(g)]为10mL : lg、浓度为80X正丙醇100mL，液料比为8mL : lg浓度为75X乙酸乙酯 80mL，液料比为6mL : lg、浓度为90%氯仿60mL，液料比为10mL : lg纯净水100mL组成的 复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相(固定相)和下相(流动相)， 分别脱气后备用，取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，选择转速850r/min、流量 3. 5mL/min、检测波长为254nm、收集时间135_180min，对流出液进行浓縮、干燥，制得北五
味子三萜粉末。
实施例2 北五味子藤茎1000g，先将原料切成1. 5cm长度后放入高速组织匀浆捣碎机在 12000rpm条件下保持15min后，按照液料比[溶剂体积(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加 入浓度80 %氯仿溶液13000mL后，再加入北五味子藤茎原料重量比为0. 5 %纤维素酶5g，在 超声功率600W、4(TC条件下，酶解20min后，再在75。C恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末 备用。 取过筛后粉末250g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46°C 、分离器温度55°C 开始萃取加压，调节(A流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵， 按照液料比[溶剂体积(mL)/过筛后粉末重量(g)]为0.8mL : lg、浓度为85%乙酸乙酯 200mL和液料比为0. 2mL : lg、浓度为80%乙醇50mL组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带 剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用。
称取真空干燥后粉末10g，加入按照液料比[溶剂体积(mL)/真空干燥后粉末重 量(g)]为10mL : lg、浓度为80X正丙醇100mL，液料比为8mL : lg、浓度为75%乙酸乙酯 80mL，液料比为6mL : lg、浓度为90%氯仿60mL，液料比为10mL : lg纯净水(市场上提供 的纯净水)100mL组成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相(固定 相)和下相(流动相)，分别脱气后备用，取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，选 择转速为850r/min、流量为3. 5mL/min、检测波长为254nm，收集时间135-180min，对流出液
进行浓縮、干燥，制得北五味子三萜粉末。
实施例3 北五味子藤茎1000g，先将原料切成2cm长度后放入高速组织匀浆捣碎机在 12000rpm条件下保持15min后，按照液料比[溶剂体积(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加 入浓度80 %氯仿溶液13000mL后，再加入北五味子藤茎原料重量比为0. 5 %纤维素酶5g，在 超声功率600W、4(TC条件下，酶解20min后，再在75。C恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末 备用。 取过筛后粉末300g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46°C 、分离温度55°C开 始萃取加压，调节C(V流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵，按照 液料比[溶剂体积(mL)/过筛后粉末重量(g)]为0.8mL : lg、浓度为85%乙酸乙酯240mL 和液料比为0. 2mL : lg、浓度为80%乙醇60mL组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带剂釜， 萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用。
称取真空干燥后粉末10g，加入按照液料比[溶剂体积(mL)/真空干燥后粉末重 量(g)]为10mL : lg、浓度为80%正丙醇100mL，液料比为8mL : lg、浓度为75X乙酸乙 酯80mL，液料比为6mL : lg、浓度为90%氯仿60mL，液料比为10mL : lg纯净水100mL组 成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相(固定相)和下相(流动 相)，分别脱气后备用，取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，选择转速850r/min， 流量3. 5mL/min，检测波长为254nm，收集时间135-180min，对流出液进行浓縮、干燥，制得 北五味子三萜粉末。
权利要求
一种从北五味子中提取三萜类物质的方法，其特征是以北五味子藤茎为主要原料，先将原料切成1cm-2cm长度后放入高速组织匀浆捣碎机中，在12000rpm条件下保持15min后，按照液料比为13mL/1g的比例加入浓度80％的氯仿溶液后，再加入按照北五味子藤茎原料重量比为0.5％的纤维素酶，在超声功率600W、40℃条件下，酶解20min后，再在75℃恒温干燥18h，粉碎过60目筛为粉末备用；取过筛后粉末200-300g加入到超临界萃取釜中，设定萃取温度46℃、分离温度55℃开始萃取加压，调节CO2流量恒定在18L/h，萃取釜压力恒定在18MPa后，启动夹带剂泵，按照液料比为0.8mL/1g比例、浓度为85％乙酸乙酯和液料比为0.2mL/1g、浓度为80％乙醇组成的复合夹带剂混匀后，打入夹带剂釜，萃取135min后，收集北五味子萃取液，减压回收溶剂，真空干燥为干燥粉末备用；称取真空干燥后粉末，加入按照液料比为10mL/1g、浓度为80％正丙醇，液料比为8mL/1g、浓度为75％乙酸乙酯，液料比为6mL/1g、浓度为90％氯仿，液料比为10mL/1g纯净水组成的复合溶剂中，在分液漏斗中平衡24h后，使用前分离成上相和下相，分别脱气后备用；取上下相配制成样品溶液，注入高速逆流色谱，转速为850r/min，流量为3.5mL/min，检测波长为254nm，时间为135-180min，收集流出液，进行浓缩、干燥，制得北五味子三萜粉末。
全文摘要
本发明涉及一种从北五味子中提取三萜类物质的方法。该法以北五味子藤茎为主要原料，先通过组织破碎、纤维素酶和超声萃取的方法将要萃取的物质从原料中分离出来，然后利用超临界萃取技术，通过选用不同的复合夹带剂和操作工艺参数，结合高速逆流色谱技术分离提取出北五味子三萜类物质，为北五味子三萜类物质的分离纯化提供一种有效的方法。该方法提取出的北五味子三萜类物质，提取率高，而且操作过程简单，能耗低，无污染，回收率高，避免了萃取物在高温下热裂解，保护生理活性物质的活性等优点。
文档编号A61K135/00GK101708215SQ200910220188
公开日2010年5月19日 申请日期2009年11月27日 优先权日2009年11月27日
发明者孟宪军, 张琦, 李斌 申请人:沈阳农业大学
最新回复(0)