恩替卡韦注射剂的制作方法

专利名称：：恩替卡韦注射剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种恩替卡韦的注射剂及其制备方法，具体的说，是一种由活性形式的恩替卡韦制成的供注入体内的灭菌溶液、乳状液或混悬液，以及供临用前配成的溶液或混悬液的无菌粉末或浓溶液。
背景技术：
：恩替卡韦(Entecavir)是一种鸟嘌呤核苷类似物，化学名为2_氨基_9_(1S，3R，4S)-4-羟基-3-羟甲基-2-亚甲基环戊基-l，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮，分子结构式如下分子式C12H15N503，分子量277.3，通常含有一个结晶水，其一水合物分子式C12H15N503.H20，分子量295.3。美国专利US5，206，244公开了恩替卡韦和其在治疗乙型肝炎的用途。国际公布W098/09964和W02004、052310分别公开了两种改进的恩替卡韦的合成方法。美国专利申请US-2001-0033864-A1和PCT专利申请WO01/64421A1公开了含有低剂量恩替卡韦的制剂组合物。乙型肝炎病毒(h印atitisBvirus,HBV)感染是一个全球性的健康问题，HBV慢性感染可引起慢性乙型肝炎(chronich印atitisB，CHB)，肝硬化(livercirrhosis，LC)，和原发性肝细胞癌(h印atocellulorcarcinoma,HCC)等相关疾病。恩替卡韦是由美国施贵宝公司在20世纪90年代研制开发的一种2'-戊环脱氧鸟嘌呤核苷类似物，其最初目的是用来治疗单纯疱疹病毒感染的，后来发现其具有很强的抗HBV能力而毒性相对很低。恩替卡韦具有很强的抗HBV作用，对HBV、DNA复制的起始、逆转病和DNA正链合成等3个阶段均起抑制作用，恩替卡韦的作用靶点是HBV的DNA聚合酶和反转病酶，通过抑制这些酶，从而抑制前基因RNA逆转病复制HBV的DNA负链，进而抑制正链的合成，从而阻断HBV的DNA链的延伸和装配。恩替卡韦是一种高效的抗病毒剂，临床研究已经显示了对乙肝病毒良好的抑制作用，由于恩替卡韦乙肝病毒的活性非常高，非常低的剂量就可以达到期望的治疗效果。目前国内外上市的恩替卡韦的药物制剂均为口服剂型，如片剂和口服液，进食会导致对恩替卡韦吸收的延迟，进而导致吸收障碍和生物利用度下降，因此此类口服剂型应空腹服用，至少在餐前或餐后两个小时服用才能达到较好的药物吸收。
发明内容本发明的目的在于提供一种恩替卡韦注射剂，包括灭菌溶液以及供临用前配成溶液的冻干粉针剂或浓溶液。采用的技术方案是恩替卡韦注射剂，包括小容量注射剂、大容量灭菌注射剂和冻干无菌粉针剂，其特征在于该药是由单剂量活性恩替卡韦0.1-2.5mg加附加剂制备成；附加剂包括注射用溶媒，pH调节剂0-10%、抗氧剂0-10%、增溶剂060%、等张调节剂0-20%、填充剂0.120%、填充支架剂0.120%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。所述的小容量注射液，是由活性恩替卡韦加附加剂制备成，其中活性恩替卡韦溶液浓度为0.005-2.5mg/ml，附加剂中pH调节剂010%、抗氧剂010%、增溶剂060%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。所述的大容量灭菌注射液是由活性恩替卡韦加附加剂制备而成，其中活性恩替卡韦溶液浓度为0.005-0.5mg/ml、pH调节剂约010%、抗氧剂010%、等张调节剂约0%20%、增溶剂060%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。所述的冻干无菌粉针剂是由活性思替卡韦加附加剂制备成溶液，分装，冷冻干燥而成，分装前溶液中主药活性恩替卡韦浓度为0.005-2.5mg/ml、pH调节剂约010%、填充剂O.1_20%、填充支架剂0.1%20%、抗氧剂010%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。恩替卡韦注射剂的制备方法是1、本发明注射剂制备工艺为取活性恩替卡韦溶液浓度为0.0052.5mg/ml，加pH调节剂010%、抗氧剂010%、增溶剂约060%及注射用溶媒，加热、搅拌、脱炭、精滤、灌装，高温灭菌，制成灭菌小容量注射液。2、本发明注射剂制备工艺为取活性恩替卡韦溶液浓度为0.005-2.5mg/ml，pH调节剂010%、抗氧剂010%、等张调节剂约020%、增溶剂060%、注射用溶媒，加热、搅拌、脱炭、精滤、灌装，高温灭菌，制成灭菌大容量注射液。3、本发明注射剂制备工艺为取活性恩替卡韦溶液浓度为0.005-2.5mg/ml，pH调节剂约010%、填充剂0.1_20%、填充支架剂0.1%20%、抗氧剂010%、注射用溶媒，滤过，分装，冷冻干燥制成供注射用的冻干无菌粉针剂。所述的"活性恩替卡韦"包括恩替卡韦及其溶剂化物、水合物、单晶型、多晶型、混晶型、非晶型；还包括恩替卡韦的可药用盐，指保留母体化合物的生物有效性和特性的、具有与恩替卡韦等效的药理作用的、药学上可接受的药用酸加成盐，例如包括恩替卡韦的盐酸盐、甲磺酸盐、草酸盐、乙酸盐、乳酸盐、葡萄糖酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐，及其上述盐的溶剂化物、水合物、单晶型、多晶型、混晶型、非晶型的恩替卡韦衍生物生物盐类物质，等等。以上所述的都是恩替卡韦作为活性成分的存在形式。用作本发明注射剂的溶媒可以为注射用水和非水溶媒，非水溶媒可分为油性溶媒和水溶性非水溶媒，油性溶媒包括注射用植物油、油酸乙酯、三醋酸甘油酯、醋酸乙酯、碳酸乙酯、乳酸乙酯、乙酸丙酸丁酯、苯甲酸苄酯、肉豆蔻异丙醇酯等。水溶性非水溶媒包括醇5类，例如乙醇、甘油、丙二醇、l，3-丁二醇，聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇1600、苯丙醇等；酰胺类，例如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、正-(|3-羟乙基)乳酰胺、N，N-二乙基乳酰胺、N，N-二乙基-2-吡啶酰胺等；二氧戊环类，例如甲醛縮甘油、4-羟甲基-1，3-二氧戊环、5-羟基-1，3-二氧戊环、2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇等及亚砜类等。用作本发明注射剂的附加剂有抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、增溶助溶剂、微生物生长抑制剂、pH调节剂、等张调节剂、止痛剂、填充支架剂等。本发明中注射剂的抗氧剂包括亚硫酸盐类抗氧剂，如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、连二亚硫酸钠等；硫代化合物，如硫甘油、硫脲、2-巯基乙醇、二巯基丙醇、1-硫代山梨醇等；多元酚类，如对苯二酚、对氨基苯酚、8_羟基喹啉等；氨其酸类，如L-半胱氨酸盐酸盐、L-蛋氨酸、L-赖氨酸、L-氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸、L-谷胱甘肽等；其他类，如乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠盐、琥珀酸、枸橼酸、氢醌、苹果酸、抗坏血酸、抗坏血酸钠、肌醇、a-生育酚、a-醋酸生育酚、木糖醇、0-木糖中的一种或几种等。本发明注射剂中的金属络合剂包括乙二胺四乙酸二钠、枸橼酸、酒石酸等二羧酸化合物。本发明注射剂中的惰性气体包括氮、氩、氖、氪及二氧化碳等气体；絮凝剂包括苯甲醇、苯乙醇等。本发明注射剂中的微生物生长抑制剂包括新洁尔灭0.01%、氯苄乙胺0.01%、苯甲醇1.0%、三氯叔丁醇0.5%、氯甲酚0.1%至0.25%、甲酚0.3%、尼泊金甲酯0.18%、尼泊金丙酯0.02%、苯酚0.5%、硝酸或醋酸苯汞0.02%、硫柳汞0.01%、苯乙醇0.25%至0.5%等。本发明注射剂中的pH调节剂包括无机酸和有机酸，其中无机酸有硫酸、盐酸、磷酸以及磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液等根据专业知识可知的其他无机酸；有机酸包括醋酸、乳酸、甲磺酸、枸椽酸、马来酸、以及根据专业知识可知的其他有机酸。本发明注射剂中的pH调节剂还可以包括各类无机碱和有机碱，其中无机碱包括氢氧化钠、氢氧化钾以及根据专业知识可知的其他无机碱，有机碱包括三乙醇胺以及根据专业知识可知的其他有机碱，优选氢氧化钠。本发明注射剂中的等张调节剂，包括5%葡萄糖溶液和0.9%氯化钠溶液。本发明注射剂中的填充剂或填充支架剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、磷酸二氢钠、氯化钠、磷酸氢二钠、半胱氨酸、水解明胶、甘氨酸、山梨醇、乳糖酸钙、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种的混合物。本发明注射剂中的止痛剂包括苯甲醇1%、三氯叔丁醇0.25%至0.5%，盐酸普鲁卡因0.5%至2%，利多卡因0.5%至1.0%，乌拉坦6.25%等。本发明结果表明，本发明注射剂质量稳定，质量标准可控。其检测指标及方法如下有关物质检测有关物质主要是生产过程中带入的起始原料、中间体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。其含量反应药物纯度。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；以乙腈-水为流动相，检测波长为254nm，柱温为室温。测定法将供试品配成供试品溶液及对照溶液。精密量取对照溶液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取上述两种溶液注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积的和与最大单个杂质峰面积，与对照溶液主成分峰面积比较。参照化学药物杂质研究指导原则及《中国药典2005年版二部中同类品种的质量标准，将本品的限度定为总杂质量不得过2.0%，单个杂质量不得过0.5%。含量测定参照《中国药典2005年版二部中同类品种的质量标准，采用高效液相色谱法测定样品含量。恩替卡韦应为标示量的90.0110.0%。检测结果见表格表1:恩替卡韦实施例样品检测结果表实施例总杂有关物质单杂——含量(％)10.920.26101.8%21.120.31100.130.980.2699.740.980.2699.751.050.2999.960.950.34100.2本发明的恩替卡韦包括有注射剂、无菌粉针剂，对乙肝病毒有良好的抑制作用，稳定性好。具体实施例方式实施例一恩替卡韦5mg亚硫酸氢钠0.2g注射用水加至1000mL实施例二恩替卡0.lg丙二醇2mL亚硫酸氢钠0.2g注射用水加至1000mL实施例三恩替卡韦1.0g丙二酉享10mL亚硫酸氢钠注射用水实施例四恩替卡韦丙二醇亚硫酸氢钠注射用水0.加至lOOOmL2.20ml0.加至lOOOmL上述恩替卡韦注射液制备工艺将恩替卡韦加入至608(TC水中，搅拌，加入助溶剂，使恩替卡韦全部溶解，冷却至4050°C;调节pH4.09.0，加入活性炭，搅拌15min，静置过滤，加入抗氧剂，再加入注射用水至全量，搅拌均匀，精滤至合格；灌封，高压灭菌即得恩替卡韦注射剂。实施例五恩替卡韦1.0g丙二醇10ml甘露醇100g注射用水加至1000mL上述恩替卡韦冻干粉针剂制备方法将恩替卡韦加入至608(TC水中，加入丙二醇，搅拌，使恩替卡韦全部溶解，加入甘露醇，搅拌，冷却至4050°C;加入活性炭，搅拌15min，趁热滤过，加入抗氧剂，调节pH4.09.0，精滤，分装，冷冻干燥，即得注射用恩替卡韦。实施例六恩替卡韦2.5g丙二醇20ml氯化钠9g葡萄糖45g注射用水加至1000mL上述恩替卡韦大容量注射液制备方法将恩替卡韦加入至60二醇，搅拌，使恩替卡韦全部溶解，加入氯化钠、葡萄糖，搅拌，冷却至408(TC水中，加入丙50°C;加入活性炭，搅拌15min，趁热滤过，加入抗氧剂，调节pH4.09.0，精滤，分装，即得恩替卡韦大容量注射液。恩替卡韦注射剂溶液稳定性试验根据中国药典2005版二部附录"药物稳定性试验指导原则"中有关内容，分别对实例1、实例5及实例6三批自制恩替卡韦注射剂进行了稳定性考察，以外观性状、含量、有关物质等项目为考察指标，对恩替卡韦注射液进行6个月加速考察及12个月长期试验，结果见下表表2:恩替卡韦注射液加速试验结果(实例1)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>0符合规定0.98/0.2199.83符合规定U5/0.3599.30806036符合规定1.07/0.31100.09符合规定1.01/0.2899.112符合规定1.05/0.2699.6表4:注射用恩替卡韦加速试验结果(实例5)批号时间(月)外观性状总杂质量/单个杂质量含量0符合规定0.99/0.3199.61符合规定1.12/0.3699.30806012符合规定1.09/0.34跳l3符合规定U5/0.3099.76符合规定1.13/0.2999.40符合规定1.03/0.3599.91符合规定0.96/0.3799.60806022符合规定0.99/0.29跳l3符合规定1.15/0.3699.66符合规定0.98/0.2599.708060301236符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定0.99/0.221.15/0.331.08/0.240.99/0.201.05/0:25100.0100,2100.499.8跳l表5:注射用恩替卡韦长期加速试验结果(实例5)批号时间(月)外观性状总杂质量/单个杂质量含量10<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表6:恩替卡韦大容Jl:注射液加速试验结果(实例6)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>3符合规定0.99/0.2598.66符合规定0.98/0.2199.7表7:恩替卡韦大容lt注射液长期试验结果(实例6)批号时间(月)外观性状总杂质量/单个杂质量含量0符合规定0.95/0.34100.23符合规定1.14/0.3599,10歸16符合规定U3/0.34纖29符合规定1.15/0.36100..712符合规定U3/0.3799.60符合规定0.98/0.3099.73符合规定0.96/0.3298.90806026符合规定1.12/0.2898.99符合规定1.15/0.3299.512符合规定0.98/0.2999,90符合规定0.99/0.2699.83符合规定Ul/0.3098.60806036符合规定1.05/0.33脆.O9符合规定1.02/0.2999.512符合规定1.06/0.2999.61权利要求恩替卡韦注射剂，包括小容量注射液、大容量灭菌注射液、冻干无菌粉针剂，其特征在于该药是由单剂量活性恩替卡韦0.1-2.5mg加附加剂制备成；附加剂包括注射用溶媒，pH调节剂0-10％、抗氧剂0-10％、增溶剂0-60％、等张调节剂0-20％、填充剂0.1-20％、填充支架剂0.1-20％，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。2.根据权利要求1所述的恩替卡韦注射剂，其特征在于所述的小容量注射液，是由活性恩替卡韦加附加剂制备成，其中活性恩替卡韦溶液浓度为0.005-2.5mg/ml，附加剂中pH调节剂010%、抗氧剂010%、增溶剂060%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。3.根据权利要求1所述的恩替卡韦注射剂，其特征在于所述的大容量灭菌注射液是由活性恩替卡韦加附加剂制备而成，其中活性恩替卡韦溶液浓度为0.005-0.5mg/ml、pH调节剂约010%、抗氧剂010%、等张调节剂约0%20%、增溶剂060%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。4.根据权利要求1所述的恩替卡韦注射剂，其特征在于所述的冻干无菌粉针剂是由活性恩替卡韦加附加剂制备成溶液，分装，冷冻干燥而成，分装前溶液中主药活性恩替卡韦浓度为0.005-2.5mg/ml、pH调节剂约010%、填充剂0.1_20%、填充支架剂0.1%20%、抗氧剂010%，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。5.根据权利要求1所述的恩替卡韦注射剂，其特征在于所述的活性恩替卡韦包括恩替卡韦及其溶剂化物、水合物、单晶型、多晶型、混晶型、非晶型；还包括恩替卡韦的可药用盐，指保留母体化合物的生物有效性和特性的具有与恩替卡韦等效的药理作用的药学上可接受的药用酸加成盐，例如包括恩替卡韦的盐酸盐、甲磺酸盐、草酸盐、乙酸盐、乳酸盐、葡萄糖酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐，及其上述盐的溶剂化物、水合物、单晶型、多晶型、混晶型、非晶型的恩替卡韦衍生物生物盐类物质；以上所述的都是恩替卡韦作为活性成分的存在形式；所述的注射剂的溶媒为注射用水或非水溶媒，非水溶媒可分为油性溶媒和水溶性非水溶媒，油性溶媒包括注射用植物油、油酸乙酯、三醋酸甘油酯、醋酸乙酯、碳酸乙酯、乳酸乙酯、乙酸丙酸丁酯、苯甲酸苄酯、肉豆蔻异丙醇酯等；水溶性非水溶媒包括醇类，例如乙醇、甘油、丙二醇、l，3-丁二醇，聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇1600、苯丙醇等；酰胺类，例如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、正-(e-羟乙基)乳酰胺、N，N-二乙基乳酰胺J，N-二乙基-2-吡啶酰胺；二氧戊环类，例如甲醛縮甘油、4-羟甲基-1，3_二氧戊环、5-羟基-1，3-二氧戊环、2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇等及亚砜类；所述的注射剂的附加剂有抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、增溶助溶剂、微生物生长抑制剂、PH调节剂、等张调节剂、止痛剂、填充支架剂；所述的注射剂的抗氧剂包括亚硫酸盐类抗氧剂，如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、连二亚硫酸钠；硫代化合物，如硫甘油、硫脲、2_巯基乙醇、二巯基丙醇、l-硫代山梨醇；多元酚类，如对苯二酚、对氨基苯酚、8-羟基喹啉；氨其酸类，如L-半胱氨酸盐酸盐丄-蛋氨酸丄-赖氨酸丄-氨酸丄-精氨酸丄-亮氨酸丄-异亮氨酸、L-色氨酸、L-谷胱甘肽；其他类，如乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠盐、琥珀酸、枸橼酸、氢醌、苹果酸、抗坏血酸、抗坏血酸钠、肌醇、a-生育酚、a-醋酸生育酚、木糖醇、D-木糖中的一种或几种；所述的注射剂中的金属络合剂包括乙二胺四乙酸二钠、枸橼酸、酒石酸等二羧酸化合物；所述的注射剂中的惰性气体包括氮、氩、氖、氪及二氧化碳气体；絮凝剂包括苯甲醇、苯乙醇；所述的注射剂中的微生物生长抑制剂包括新洁尔灭0.01%、氯苄乙胺0.01%、苯甲醇1.0%、三氯叔丁醇0.5%、氯甲酚0.1%至0.25%、甲酚0.3%、尼泊金甲酯0.18%、尼泊金丙酯0.02%、苯酚0.5%、硝酸或醋酸苯荥0.02%、硫柳荥0.01%、苯乙醇0.25%至0.5%;所述的注射剂中的pH调节剂包括无机酸和有机酸，其中无机酸有硫酸、盐酸、磷酸以及磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液根据专业知识可知的其他无机酸；有机酸包括醋酸、乳酸、甲磺酸、枸椽酸、马来酸、以及根据专业知识可知的其他有机酸；所述的注射剂中的pH调节剂还可以包括各类无机碱和有机碱，其中无机碱包括氢氧化钠、氢氧化钾以及根据专业知识可知的其他无机碱，有机碱包括三乙醇胺以及根据专业知识可知的其他有机碱，优选氢氧化钠；所述的注射剂中的张调节剂，包括5%葡萄糖溶液和0.9%氯化钠溶液；所述的注射剂中的填充剂或填充支架剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、磷酸二氢钠、氯化钠、磷酸氢二钠、半胱氨酸、水解明胶、甘氨酸、山梨醇、乳糖酸钙、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种的混合物；所述的注射剂中的止痛剂包括苯甲醇1%、三氯叔丁醇0.25%至0.5%，盐酸普鲁卡因0.5%至2%，利多卡因0.5%至1.0%，乌拉坦6.25%。全文摘要恩替卡韦注射剂，包括小容量注射液、大容量灭菌注射液、冻干无菌粉针剂，其特征在于该药是由单剂量活性恩替卡韦0.1-2.5mg加附加剂制备成；附加剂包括注射用溶媒，pH调节剂0-10％、抗氧剂0-10％、增溶剂0-60％、等张调节剂0-20％、填充剂0.1-20％、填充支架剂0.1-20％，上述百分比为该药总质量占溶液体积的百分比。本发明的恩替卡韦包括有注射剂、无菌粉针剂，对乙肝病毒有良好的抑制作用，稳定性好。文档编号A61P1/00GK101716137SQ20091022060公开日2010年6月2日申请日期2009年12月10日优先权日2009年12月10日发明者丁百莲,李亚玲,马占芝申请人:沈阳双鼎制药有限公司